VNTR’s - Variable Number of Tandem Repeats

• Em alguns cromossomos humanos, existem certas

DNA FINGER PRINT regiões em que uma pequena seqüência de DNA é
repetida várias vezes
PROF. ALEXANDRE S. OSÓRIO
• Seqüências hipervariáveis (também chamadas
polimórficas) repetitivas de 1 a 4 pb com distribuição ao
longo do genoma.
• O polimorfismo destas seqüências é resultado de
diferentes rearranjos envolvendo segmentos de DNA de
tamanhos diferentes.
• Herança Mendeliana (os filhos sempre recebem metade
dos alelos de origem materna e metade de origem
paterna).

Número variável de repetições em IMPRESSÕES DIGITAIS DO DNA

seqüência (DNA FINGERPRINTS)
Exemplos de seqüências de VNTR’s: O QUE SIGNIFICA?
• Repetição de 1 base:
GTAAAAAAAAAAAAAAAGGAT Com base no estudo de uma bateria de 12-20 VNTR’s, é possível
obter perfis genéticos praticamente indivíduo-específicos, muito
• Repetição de 2 bases: úteis na investigação de paternidade, identificação de vítimas e
GTCACACACACACACACAGGAT (dinucleotídeo) criminosos.
• •Repetição de 3 bases:
GTCACCACCACCACCACCACGGAT (trinucleotídeo)
TÉCNICAS
• •Repetição de 4 bases:
GTCAGACAGACAGACAGAGGAT (tetranucleotídeo)
• RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism).
• PCR (Polymerase Chain Reaction).

Polimorfismo de Comprimento de As enzimas de restrição

Fragmento de Restrição
1) Coleta de amostras biológicas que podem ser
saliva, sangue, esperma e cabelo com raiz, entre
outros.
Fazem parte de um sistema da célula bacteriana denominado
sistema de modificação-restrição. Este sistema consiste numa
endonuclease de restrição.
Sítios de reconhecimento, modificação e clivagem por
O nome dado a enzima alguns enzimas de restrição

2) Extração e purificação do DNA. refere-se ao organismo de

3) Corte com enzimas de restrição (tesouras onde foi isolado. A primeira Enzima Local de restrição Organismo de origem
moleculares que reconhecem e cortam seqüências
específicas do DNA). letra representa o gênero e
4) Eletroforese: onde, através de uma corrente as outras duas a espécie, Escherichia coli
EcoRI
elétrica, são separados os fragmentos de DNA por seguido de um algarismo
tamanho. romano (ou outra letra) que
A partir daí, é formada uma espécie de código de indica a ordem da Haemophilus influenza
HindIII
barras que é a identificação individual e
intransferível de cada indivíduo. descoberta ou a linhagem
da qual foi isolado. Smal
Serratia marcescens

1
 Enzimas
Uma de restrição
enzima de restrição ou endonuclease de
restrição é um tipo de nuclease que cliva uma
cadeia dupla de DNA sempre que identificar uma
sequência específica de 4 a 8 pares de bases que
seja o local de restrição da enzima (Smith &
Wilcox, 1970).

As seqüências
reconhecidas
apresentam nas
duas cadeias
complementares
seqüências idênticas
mas invertidas –
palíndromo.

PCR – REAÇÃO EM CADEIA DE

POLIMERASE
PCR
• Aquecimento do DNA a ser amplificado a temperatura de 94°C por
1 minuto, o que provoca separação da dupla hélice. Depois, com a
temperatura mais baixa, são empregadas as polimerases, que
atuam em cada uma das cadeias do DNA, complementando os
pares de bases.
• A cada ciclo, a quantidade de DNA-alvo é duplicada, de modo que
em 10 ciclos obtêm-se 1024 vezes mais DNA-alvo; em 20 ciclos,
cerca de 1 milhão de vezes mais DNA-alvo.
• Propicia um aumento na eficiência da análise de material genético
• Polimerases são enzimas que ocorrem nas células e catalisam
reações de polimerização (formação de moléculas de cadeias
longas)
• Pela técnica PCR promove-se a duplicação de trechos do DNA in
vitro.

SLP (single-locus probe)

VISUALIZAÇÃO DO DNA
Uso de sondas: pequenos segmentos de DNA radioativados, cuja
seqüência de bases é conhecida. Acoplam-se às seqüências de
DNA das quais são complementares, ligando-se às mesmas.

SLP: detecta um único segmento

de DNA repetitivo em um único
cromossomo. Seu uso resulta em
um padrão que contém no máximo
duas bandas: uma para cada
segmento de DNA reconhecido em
cada membro do par de
cromossomos homólogos. Para a
obtenção de padrões mais
característicos de cada pessoa, são
necessárias várias sondas. Devido
à sua sensibilidade, são
empregadas nas investigações
criminais.

2
 VISUALIZAÇÃO DO DNA MLP (multi-locus-probe)
MLP: detecta vários segmentos de
DNA repetitivo localizados em
muitos cromossomos. O padrão
obtido consiste em
aproximadamente 20 a 30 bandas.
Por isso, a probabilidade de duas
pessoas tomadas ao acaso
apresentarem todas as bandas
exatamente com a mesma posição
é extremamente baixa (1:10
trilhões).

3

RESULTADOS DE TESTES
Mary Higgins foi violentada no Central Park em Nova York. Três
suspeitos foram presos. O DNA revelou o verdadeiro agressor.
RESULTADOS DE TESTES
O assassinato de JonBenet Ramsey: um crime sem solução?
Tristeza ou remorso ?
Mais de uma década após o assassinato da
modelo infantil JonBenet Ramsey, o caso ainda
parece inacabado e apoiado apenas em
suposições - mesmo após o professor John Mark
Karr, de 41 anos, ter confessado que estava com
a menor no momento de sua morte, assegurando
que foi um acidente e que estava apaixonado por
ela. JonBenet Ramsey, de 6 anos, foi encontrada
morta a pancadas e estrangulada no porão de
sua casa, em Boulder, no dia 26 de dezembro de
1996, num crime que comoveu a sociedade
americana. A menina era uma das modelos
infantis mais famosas nos Estados Unidos. John
Mark Karr foi preso, um dia depois de começar a
ensinar em uma escola em Bangcoc, Tailândia,
por solicitação dos Estados Unidos.
Após o crime, em 1996, os pais de JonBenet,
John e Patsy Ramsey, viveram sob as suspeitas
levantadas por tablóides sensacionalistas, que
sugeriam que os dois maltratavam e exploravam
a menina com suas aparições em desfiles
infantis. Além disso, John e Patsy eram acusados
de terem ocultado informações cruciais para a
investigação do caso.
RESULTADOS DE TESTES
Em 1987: casal de noivos – Matthew Brock e Kelly Lynn Perry
(também estuprada) – é achado baleado na cabeça (bala de rifle
calibre 30) em Rodman Dam, área de recreação na Flórida.
Principais suspeitos: os adolescentes Randall Scott Jones e Chris
Reesh.
4
 RESULTADOS DE TESTES

Em agosto, Jones foi preso dirigindo a camionete

roubada no Mississippi. Reesh foi preso no dia seguinte em
Palatka, na Flórida.
Como os jovens insistiam em negar a participação no
crime e ainda existiam algumas dúvidas sobre o caso, existia
a necessidade de se conseguir mais provas. Sendo assim, foi
realizado pela primeira vez o DNA fingerprinting para um caso
criminal. A amostra de sêmen encontrada em Kelly foi
comparada com as amostras de sangue dos
supeitos.
Com os resultados do DNA fingerprinting o juri não
hesitou em condenar Jones e Reesh.

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(004) o mapeamento de trechos do DNA, chamado complementar.

1) (UFMS – 2002) Durante o processo de investigação de um assassinato, E
o sangue da vítima, do acusado, e o encontrado na roupa do acusado,
(008) o mapeamento de trechos do DNA, com seqüências de bases
foram analisados. Verificou-se que o sangue encontrado na roupa era nitrogenadas, que não são genes (VNTRs — número variável de repetições em
diferente do sangue do acusado, mas coincidia com o da vítima. Essa
seqüência).
investigação é feita pelo DNA das pessoas e é tão segura quanto a da
impressão digital, pelo menos em gêmeos não monozigóticos. No exame C
do DNA, é(são) feito(s) (016) o mapeamento de trechos do DNA, chamado “screening” genético
(001) o mapeamento de trechos do DNA, chamado recombinante. E
E (032) um código de barra com o(s) tipo(s) de sangue que se deseja
analisar, para verificar qual(is) código(s) coincide(m) ou é(são)
(002) um código de seqüência de proteínas do RNA, que não seja do tipo diferente(s).
barra, e sim do tipo curva. C
E
SOMA : 008+032 = 040

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2) (UFU-2006) O “DNA-fingerprint”, impressão digital do DNA, pode 3) (Unesp-2003) A ilustração apresenta o resultado de um teste de paternidade
ser obtido de uma única célula que possua seu genoma intacto. obtido pelo método do DNA-Fingerprint, ou “impressão digital de DNA”.
A análise desse DNA pode ser utilizada para,EXCETO
a) a identificação de suspeitos de crimes.
b) a determinação de paternidade duvidosa.
c) a pesquisa de material genético de animais extintos.
d) a produção de alimentos transgênicos.

CORRETA : LETRA D

5
 Com relação às enzimas de restrição, é correto afirmar que
4) (UFMS-2005) As enzimas de restrição, uma das principais ferramentas
empregadas na tecnologia do DNA recombinante, são altamente especializadas,
cortando o DNA apenas em locais específicos (sítios de restrição), identificados (001) sua função natural nas bactérias seria proteger o organismo contra os
por certas seqüências de bases nitrogenadas. Atualmente, são conhecidas muitas
bacteriófagos, inativando o DNA viral antes de duplicar.
dessas enzimas, a maior parte de bactérias, sendo mais comumente utilizadas
aquelas que reconhecem seqüências de 4, 6 ou 8 pares de bases. C
(002) enzimas que reconhecem sítios de restrição compostos por 4 pares de
Enzima Organismo onde a Seqüência de bases e
enzima é posição do corte bases, clivam o DNA em média a cada 1.024 pares de bases.
encontrada
4 pares de HhaI Haemophilus ↓
E – A distância entre os sítios de restrição variam para cada
bases hemolyticus −G−C−G−C− indivíduo e dependem da posição dos palíndromos na
−C−G−C−G−
↑ molécula de DNA.
6 pares de EcoRI Escherichia coli ↓
bases −G−A−A−T−T−C− (004) todas as enzimas de restrição produzem fragmentos de DNA com o
−C−T−T−A−A−G− mesmo tamanho, ou seja, com o mesmo número de pares de bases.
↑
8 pares de NotI Nocardia otitidis ↓ E – Cada enzima de restrição identifica um tipo específico de
bases −G−C−G−G−C−C−G−C−
−C−G−C−C−G−G−C−G− palíndromos na molécula de DNA.
↑

(008) o sítio de reconhecimento dessas enzimas é chamado palíndromo de
DNA, o que significa que ambos os filamentos têm a mesma seqüência de
bases, mas em orientação antiparalela.
C seu pai e/ou em sua mãe.
(016) qualquer molécula de DNA, de vírus ou até de humanos contém sítios-
alvo para as enzimas de restrição puramente ao acaso, e, portanto, pode ser
cortada em fragmentos de tamanho definido.
C
(032) se duas moléculas diferentes de DNA são cortadas com a mesma enzima
de restrição, os fragmentos obtidos não poderão ser utilizados para a formação
de quimeras de DNA, pois apresentam tamanhos diferentes.
5) (PUCRS-2008) Os exames de identificação molecular (DNA) de
pessoas têm sido muito úteis para solucionar casos forenses ou de
investigação de paternidade, já que se baseiam na identificação de marcas
genéticas que, herdadas, devem aparecer simultaneamente no filho e em
No pior acidente aéreo da América Latina, ocorrido com o vôo TAM 3054,
no qual 199 pessoas perderam a vida, equipes de peritos analisaram o DNA
das vítimas fatais, comparando com o DNA de pessoas aparentadas, e
chegam a resultados semelhantes aos apresentados no quadro seguinte:
LETRA : A

SOMA = 001+008+016 = 025

6) (UFOP-2009) Sobre os modernos testes de paternidade, assinale o que for
correto.
a) A probabilidade de erro nos testes de paternidade pelo exame do DNA,
segundo alguns cientistas afirmam, é de cerca de 1 caso em 5 bilhões. Na
prática, portanto, o exame pode ser considerado 100% seguro.
b) O mais moderno e preciso teste para determinar a paternidade é feito a
partir do RNA do indivíduo.
c) Os únicos materiais utilizados para um teste de paternidade são o sangue e o
esperma.
d) A comprovação da paternidade pelo exame do DNA é feita comparando-se
as “impressões genéticas” dos pais e do filho. Caso as faixas de DNA do filho
que equivalem às faixas da mãe forem idênticas às do suposto pai, comprova-
se a paternidade.
7) (Unicamp-2009) Testes de paternidade comparando o DNA presente em
amostras biológicas são cada vez mais comuns e são considerados
praticamente infalíveis, já que apresentam 99,99% de acerto. Nesses testes
podem ser comparados fragmentos do DNA do pai e da mãe com o do filho.
Um teste de DNA foi solicitado por uma mulher que queria confirmar a
paternidade dos filhos. Ela levou ao laboratório amostras de cabelos dela, do
marido, dos dois filhos e de um outro homem que poderia ser o pai. Os
resultados obtidos estão mostrados na figura abaixo.

LETRA : A

6
a) Que resultado a análise mostrou em relação à paternidade do Filho 1? E do BIOLOGIA – PROF. ALEXANDRE S. OSÓRIO
Filho 2? Justifique.

a) O filho 1 é do outro homem porque não há coincidência de bandas do

DNA com as do marido.
O filho 2 é do marido porque as barras são coincidentes.
b) Num teste de paternidade, poderia ser utilizado apenas o DNA
mitocondrial? Por quê?
b) Não, porque o DNA mitocondrial tem apenas origem materna.
8) (PUC-RS 2004) A origem africana do humano moderno vem
sendo proposta com base em evidências genéticas. Uma
genealogia baseada em 182 tipos de DNA mitocondrial aponta para
a existência de um ancestral comum, uma fêmea africana. Os
estudos sobre DNA mitocondrial podem revelar o ancestral materno
de uma pessoa, uma vez que
a) apenas as células femininas possuem mitocôndrias.
b) todas as mitocôndrias, e o DNA que elas têm, procedem do
citoplasma do óvulo.
c) o cromossomo X está no DNA mitocondrial.
d) as mitocôndrias de células masculinas não possuem DNA.
e) as mitocôndrias dos espermatozóides contêm o cromossomo Y.

DOENÇAS CAUSADAS POR MUTAÇÕES NO DNA MITOCONDRIAL

DNA mitocondrial DOENÇA SINTOMAS

Mal de Alzheimer Perda progressiva da capacidade cognitiva
• O DNA mitocondrial é Oftalmoplegia progressiva externa Paralisia dos músculos que movimentam o
transmitido através do ovócito (CPEO) globo ocular e miopatia mitocondrial
materno para filhos e filhas. O Diabetes melito Níveis altos de glicose no sangue, o que causa
ovócito é bem suprido de diversas complicações.
mitocôndrias, mas o
Distonia Movimentos anormais devido a rigidez
espermatozóide contém muscular, freqüentemente acompanhada de
poucas e mesmo essas degeneração do gânglio basal do encéfalo.
poucas não persistem nos
Síndrome de Kearns-Sayre CPEO combinada com deterioração da retina,
descendentes. Segundo, não doenças cardíacas, perda da audição,
trocam genes com outros diabetes e falhas renais.
segmentos genômicos (não se
Síndrome de Leigh Perda progressiva das habilidades motoras e
recombinam), sendo verbais; e degeneração do gânglio basal do
transmitidos às gerações encéfalo . É potencialmente letal na infância
seguintes em blocos de genes
Neuropatia óptica hereditária de Leber Cegueira permanente ou temporária
(denominados haplótipos). decorrente de lesões no nervo óptico.
Há, assim, uma história
genealógica imutável.

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9) (UFSC-2002) A revista Época, em 30/07/2001, anunciou em sua capa:

8) (PUC-RS 2004) A origem africana do humano moderno vem
sendo proposta com base em evidências genéticas. Uma
genealogia baseada em 182 tipos de DNA mitocondrial aponta para
a existência de um ancestral comum, uma fêmea africana. Os
estudos sobre DNA mitocondrial podem revelar o ancestral materno
de uma pessoa, uma vez que
a) apenas as células femininas possuem mitocôndrias.
b) todas as mitocôndrias, e o DNA que elas têm, procedem do
citoplasma do óvulo.
c) o cromossomo X está no DNA mitocondrial.
d) as mitocôndrias de células masculinas não possuem DNA.
e) as mitocôndrias dos espermatozóides contêm o cromossomo Y.
CORRETA : LETRA B
O DNA não falha. O título referiu-se a uma reportagem da qual foi
extraído o trecho abaixo:
Depois da pílula anticoncepcional, que transferiu para as mulheres o
controle da fertilidade, da fertilização “in vitro” e da barriga de aluguel,
métodos que permitem a gravidez sem sexo, o teste de DNA surge como
uma das grandes descobertas do mundo ocidental. Para muitos
especialistas [...] a técnica só traz benefícios. Outros acreditam que
reflexos da descoberta vão alterar o universo das relações familiares.
Sobre a utilização dos testes de DNA, e as implicações dessa prática para
os indivíduos e a sociedade em geral, é CORRETO afirmar que:
(001) os testes de DNA podem ser empregados para finalidades de
investigação de paternidade e também para identificação de supostos
criminosos, como em casos de estupros e assassinatos.
C

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(002) o melhor material biológico para um teste de DNA é aquele extraído de (016) o custo do exame de DNA, ainda muito elevado no Brasil, é um dos
núcleos de glóbulos brancos do sangue, mas outros tecidos, como pele e ossos, fatores que dificulta sua utilização em larga escala pelos segmentos
também podem ser utilizados. populacionais menos favorecidos economicamente.
C C
(004) para uma investigação de paternidade, a partir de testes de DNA, coletam-
(032) a criação de bancos de dados, com a identificação genética de criminosos
se amostras biológicas do suposto pai, não sendo necessário obter informações
e suspeitos, em países como a Inglaterra, vem gerando grande polêmica, uma
do(a) filho(a) e de sua mãe.
vez que podem ser entendidos como uma violação da privacidade biológica dos
E indivíduos.
(008) os exames de investigação de paternidade, a partir de testes de DNA, C
oferecem, atualmente, resultados com exatidão total, não restando qualquer
questionamento ou dúvida sobre os diagnósticos apresentados. SOMA : 001+002+008+016+032 = 059
C