MINISTRIO DA SADE

SECRETARIA DE ATENO SADE

DEPARTAMENTO DE ATENO ESPECIALIZADA
COORDENAO GERAL DE SANGUE E HEMODERIVADOS

Noes de Imunohematologia

Ana Paula R. Diniz Zanelli HC Ribeiro Preto

David Sebastio L. Nevoa Junior HC MARLIA
Everaldo Jos Schrner HEMOSC
Giovanni de Castro Borges HEMOMINAS
Neila Simara Zanon HEMOSC
Rodrigo Spessotto Morais HC Ribeiro Preto
Srgio Roberto L. Albuquerque - HEMOAM
ANTGENOS

Antgeno:
Os antgenos so substncias que podem ser reconhecidas pelas
clulas T, clulas B ou ambas atravs de receptores
representados por anticorpo ou TCR (receptor de clula T)
particular.
Antgeno completo ou imungeno: capaz de ativar uma
resposta imune.
Antgeno incompleto: no capaz de ativar uma resposta
imune.

Antgenos Eritrocitrios: antgenos de grupos

sangneos sendo A, B e D os principais.
ANTGENOS ERITROCITRIOS
ANTICORPOS

So as substncias produzidas em resposta a um estmulo

imunognico e que so capazes de interagir

especificamente com o eptopo antignico que provocou a

sua sntese.
ANTICORPOS: ESTRUTURA BSICA

Contm 4 cadeias polipeptdicas:

2 cadeias leves (L)

2 cadeias pesadas (H)

Carboidratos

Unio por pontes dissulfdricas

ANTICORPOS: STIO DE LIGAO AO ANTGENO

Stios de ligao ao antgeno Stio de ligao ao antgeno (partopo)

Eptopo Formado pelas pores VL e VH

Determina a especificidade do anticorpo

Dobradia
ANTICORPOS

Imunoglobulina IgM

Representao esquemtica da configurao pentamrica

da imunoglobulina IgM.
RESPOSTA IMUNE

Resposta
Primria: Resulta
na produo de
imunoglobulina
IgM depois de um
perodo de 1 a 2
semanas .
Resposta
Secundria:
exposio resulta
na produo de
IgG num ttulo
elevado em um
curto espao de
tempo (resposta
anamnstica)
TIPOS DE ANTICORPOS

Definies:

Autoanticorpos: anticorpos do soro de indivduos

que reagem com seus prprios antgenos.

Aloanticorpos: anticorpos que reagem com

antgenos da mesma espcie pertencentes a
indivduos geneticamente diferentes.
TIPOS DE ANTICORPOS

Completos ou Aglutinantes: capazes de aglutinar

em soluo salina, so geralmente IgM

Incompletos ou bloqueadores ou no
aglutinantes: fixam-se s hemcias sem
conseguir aglutin-las (promovem
sensibilizao). Costumam ser IgG, porm certos
IgG (anti-A, anti-B) so aglutinantes e certos IgM
no o so (anti-Jka).
GRUPOS SANGUNEOS HUMANOS ANTICORPOS ANTI-
ERITROCITRIOS

Anticorpos naturais (maioria da classe IgM):

Resultam de estmulos inaparentes.

Ex: anti-A; anti-B; anti-A,B

Anticorpos imunes (maioria da classe IgG):

Resultam de estmulos transfusionais ou gestacionais.

Ex: anti-D; anti-K; anti-c; anti-C; anti-Fya; anti-jka

GRUPOS SANGUNEOS HUMANOS ANTICORPOS
COMPORTAMENTO TRMICO

Anticorpos frios (maioria so IgM):

Reagem melhor em temperaturas abaixo de 25 0C.

Ex: anti-A; anti-B; anti-A,B; anti-M

Anticorpos quentes (maioria so IgG):

Reagem melhor em temperaturas prximas a 37 0C.

Ex: anti-D; anti-K; anti-C; anti-E; anti-Fya; anti-jka

GRUPOS SANGUNEOS HUMANOS ANTICORPOS FIXAO DO
COMPLEMENTO

Anticorpos que fixam o complemento:

IgM; IgG3; IgG1; IgG2

Ex: anti-A; anti-B; anti-A,B; anti-Jka

Anticorpos que no fixam o complemento:

IgG4; IgD; IgE

Ex: anti-Lua; anti-Lub; anti-U

TIPOS DE ANTICORPOS

Monoclonais preparados a partir de hibridomas

Policlonais preparados a partir da imunizao de

animais com protenas humanas.
REAO ANTGENO-ANTICORPO CARACTERSTICAS DAS
INTERAES ANTGENO-ANTICORPO

Especificidade:
determinada pela combinao das estruturas reativas do antgeno e do anticorpo.
Reversibilidade:
determinada pela dissociao do complexo antgeno-anticorpo.
Equilbrio:
determinado pela constante de associao K do complexo antgeno-anticorpo.
Exotermia:
as reaes antgeno-anticorpo liberam calor.
Afinidade:
a fora de atrao entre o antgeno e o anticorpo.
Avidez:
a fora de unio entre o antgeno e o anticorpo.
REAO DE AGLUTINAO NUVEM INICA

D m

g = eletro- m = fora inica D = constante

negatividade dieltrica
POTENCIAL ZETA

g
z
D m
g = eletro-negatividade m = fora inica D = constante dieltrica
MECANISMOS DE PRODUO ARTIFICIAL DE AGLUTINAO

- Tratamento das hemcias por enzimas

proteolticas: a tripsina, papana, bromelina e ficina

so enzimas capazes de retirar fragmentos
polipeptdicos da superfcie das hemcias.
MECANISMOS DE PRODUO ARTIFICIAL DE AGLUTINAO

Adio de substncias macromoleculares: as

substncias (albumina, dextran, PVP, PEG) se
polarizam no campo eltrico das hemcias
diminuindo a fora de repulso pela neutralizao e
aumentando a constante dieltrica do meio.
MECANISMOS DE PRODUO ARTIFICIAL DE AGLUTINAO

Alterao da fora inica do meio: o uso da soluo

de LISS, na primeira fase da reao, provoca um
afastamento das hemcias e um aumento da
sensibilidade da reao pelo maior acesso dos
anticorpos. Na segunda fase a retirada do LISS pela
lavagem, reaproxima as hemcias j sensibilizadas.
TESTE DE ANTIGLOBULINA (COOMBS)

DIRETO: demonstra hemcias sensibilizadas in

vivo por anticorpo ou fraes de complemento.

INDIRETO: permite a execuo de pesquisa e

identificao de anticorpos anti-eritrocitrios, teste
de compatibilidade, fenotipagens eritrocitrias.
HEMCIAS CONTROLE DE COOMBS

Devero ser utilizadas sempre que obtiver um

resultado negativo aps a adio do soro de
Coombs

Garante que o processo de lavagem foi adequado e

que a AGH est funcionando adequadamente
GRAUS DE AGLUTINAO

4+ soluo lmpida com um nico agregado de hemcias

ESCORE 12
3+ reao forte, soluo lmpida sem nenhuma hemca
livre e vrios agregados grandes de hemcias ESCORE
10
2+ agregados de tamanho mdio, soluo clara
ESCORE 8
1+ Pequenos agregados, fundo turvo, avermelhado
ESCORE 5
Fraco ou p fraca granulao, fundo turvo, agregados
microscpicos ESCORE 3
Resultado negativo - ESCORE 0
GRAUS DE AGLUTINAO
SISTEMA ABO

Primeiro sistema de grupo sanguneo a ser

descoberto em 1900.

Ainda hoje o principal sistema de grupo sanguneo

Possui anticorpos de ocorrncia natural

So carboidratos adicionados a substncias

precursoras existentes na membrana eritrocitria
ANTGENOS ABH

Antgeno
A
Substncia Antgeno
precursora
H

Antgeno
B
ANTGENOS ABH

Expresso do antgeno H no tecido hematopoitico.

Gal GlcNAc R

Precursor tipo II
Transferase H a12

Fuc

Antgeno H
ANTGENOS ABH

Expresso do antgeno A no tecido hematopoitico.

b13
Antgeno A NAcGal
Gal GlcNAc R

Transferase A a12

Fuc

Antgeno H
ANTGENOS ABH

Expresso do antgeno B no tecido hematopoitico.

b13
Antgeno B Gal
Gal GlcNAc R

Transferase B a12

Fuc

Antgeno H
ANTGENOS ABH NAS HEMCIAS

NAcGal
Gal GlcNAc R

Gal GlcNAc R

Antgeno A Fuc
Antgeno H
Fuc
Gal
Gal GlcNAc R

Antgeno B Fuc
FENTIPO BOMBAY

SP2 SP1
hh sese

AA BB AB OO AA BB AB OO
AO BO AO BO

Ausncia de antgenos ABH nos eritrcitos Ausncia de antgenos ABH na saliva

SISTEMA ABO

Prova Direta deteco de antgenos atravs do

uso de de anti-soros conhecidos

Prova Reversa deteco de anticorpos atravs

do uso de hemcias conhecidas
FENTIPOS ABO

Grupos Antgenos eritrocitrios Anticorpos plasmticos

A A Anti-B

B B Anti-A

AB AeB --

O - Anti-A; anti-B; anti-A,B

FENOTIPAGEM ABO

Prova direta Prova reversa

Testar as
Testar as hemcias
hemcias com
com os
os Testar o
Testar o plasma
plasma com
com
anti-soros:
anti-soros: as hemcias:
as hemcias:

Grupos Anti-A Anti-B Anti-A,B A1 B

A
B
AB
O
MTODOS DE TIPAGEM

Gel centrifugao

Microplacas

Tubos
COMPATIBILIDADE ABO PARA HEMCIAS

O AB
B
COMPATIBILIDADE ABO PARA HEMOCOMPONENTES
PLASMTICOS

AB O

B
REAGENTES UTILIZADOS NA FENOTIPAGEM ABO

Anti-soros:
anti-A
anti-B
anti-AB, dispensvel quando anti-A e anti-B
so monoclonais
REAGENTES UTILIZADOS NA FENOTIPAGEM ABO

Hemcias
Hemcia A1
Hemcia B
Hemcias A2 e O(opcionais)
SUBGRUPOS DE A

80% dos indivduos do grupo A so do

subgrupo A1
20% so classificados como A2
Estes 2 subgrupos reagem fortemente com
anti-A
Alguns indivduos A2 desenvolvem anti-A1
Existem outros subgrupos mais raros
SUBGRUPOS DE A

Fentipos Anti-soros Anticorpos Antgenos

Anti-A Anti-B Anti-A,B Anti-H Regulares Irregulare salivares
A1 4+ 0 4+ 0 Anti-B 0s A, H
A2 4+ 0 4+ 4+ Anti-B Anti-A1 A, H
A3 2+ 0 2+ 4+ Anti-B Anti-A1 A, H
Ax 1+ 0 2+ 4+ Anti-B Anti-A1 H
Aend 1+ 0 1+ 4+ Anti-B Anti-A1 H
Am 0 0 0 4+ Anti-B 0 A, H
Ay 0 0 0 4+ Anti-B 0 A, H
Ael 0 0 0 4+ Anti-B Anti-A1 H
SUBGRUPOS DE B

So muito mais raros que os subgrupos de

A e so determinados de maneira similar
aos subgrupos de A
SUBGRUPOS DE B

Fentipos Anti-soros Anticorpos Antgenos

Anti-A Anti-B Anti-A,B Anti-H Regulares Irregulare salivares
B 0 4+ 4+ 2+ Anti-A 0s B, H
B3 0 2+ 2+ 3+ Anti-A 0 B, H
Bx 0 1+ 1+ 3+ Anti-A Anti-B H
Bm 0 0 0 3+ Anti-A 0 B,H
Bel 0 0 0 3+ Anti-A Anti-B H
DISCREPNCIAS ABO

Devem ser resolvidas antes da liberao da

bolsa.

Em receptores, com necessidade de

transfuso de urgncia dever ser utilizado
hemcias do grupo O

Descartar sempre causas de natureza tcnica

ANTICORPOS ABO

So, geralmente IgM, podendo tambm ser

IgG

A forma imune pode ser produzida por

indivduos expostos a eritrcitos estranhos

Indivduos do grupo O produzem anti-A,B

RAZES PARA REAES SEVERAS

Anticorpos esto sempre presentes

Anticorpos quase sempre esto em alto ttulo

Anticorpos so capazes de se ligar a 37C

Ambos IgG e IgM so capazes de fixar

complemento

Antgenos A e B esto presentes em grandes

quantidades
TRANSFERNCIAS PASSIVA DE ANTICORPOS ABO

Normalmente no tem srias conseqncias

Razes:

Rpida diluio do plasma infundido

Em cada hemcia se ligam poucos anticorpos

Anticorpos so neutralizados por substncias

livres no plasma
SISTEMA Rh

Descoberto em 1939
Aps o ABO, o sistema de maior importncia
clnica e o mais complexo
Principais antgenos: D, C, E, c , e
O antgeno Rh uma lipoprotena e constitui parte
integrante da parede da hemcia
ANTGENO D

O termo Rh positivo e Rh negativo refere

presena ou ausncia do antgeno D

O antgeno D o mais clinicamente significante

FENTIPO D FRACO

Deve ser investigado sempre que o resultado for

negativo em centrifugao imediata

So aqueles antgenos D que reagem menos que 2+

em qualquer uma das fases ou aqueles que reagem
somente em AGH
PROTENA Rh (RhD e RhCE)

Flegel & Wagner, 2002

VARIANTES DO ANTGENO RhD

D parcial
mutaes de ponto missenses no gene RHD
rearranjos gnicos entre RHCE e RHD (alelos
hbridos)

D fraco
mutaes de ponto missenses
Cartron et al, 1998; Wagner et
al,1999
D PARCIAL

Caractersticas:
Expresso de diferentes eptopos no antgeno D.
So definidos por anti-soros monoclonais.
ANTICORPOS Rh

Maioria IgG
So imunes, estimulados por transfuso ou
gravidez
Persistem na circulao por longos perodos
No fixam complemento
Atravessam a placenta
REAGENTES

2 Deve ocorrer a tipagem RhD, observando os

seguintes critrios:
I - o antgeno RhD deve ser determinado colocando-se
as hemcias com antissoro anti-RhD (Anti-D);
II - em paralelo, deve ser sempre efetuado um
controle da tipagem RhD, utilizando-se para isto soro-
controle compatvel com o antissoro utilizado
(monoclonal ou policlonal) e do mesmo fabricante do
anti-D;
REAGENTES

III - se a reao for negativa para a presena do antgeno

RhD, deve ser efetuada a pesquisa do antgeno D -fraco,
considerando que:
a) para a realizao da pesquisa de antgeno D -fraco
recomenda- se ser utilizado no mnimo dois anti-soros
anti-RhD (anti-D) contendo anticorpos da classe IgG
obtidos de linhagens celulares distintas incluindo a fase
da antiglobulina humana;
REAGENTES

d) em doadores de sangue tipados como RhD negativo,

recomenda-se a pesquisa dos antgenos C (maisculo) e
E (maisculo) e os hemocomponentes devem ser
devidamente identificados. A utilizao dos
concentrados de hemcias RhD negativo C ou E positivos
deve obedecer a protocolos escritos especficos da
instituio ou seguir critrios do responsvel tcnico de
cada local; e
e) se a reao com o soro-controle de RhD for positiva, a
tipagem RhD considerada invlida e o
hemocomponente s deve ser rotulado e liberado para
uso aps a resoluo do problema.
MTODOS DE TIPAGEM Rh

CR Anti-
h D

Gel centrifugao Gel centrifugao

Tubos

Microplacas
REAES TRANSFUSIONAIS

Hemlise extravascular
TAD positivo
Febre inexplicada
Elevao da bilirrubina
Reduo da hemoglobina
TESTE DE ANTIGLOBULINA DIRETO (TAD)

Detecta sensibilizao in vivo

Aplicaes:

Investigao de AHAI
Investigao de hemlise induzida por droga
Investigao de Doena Hemoltica Perinatal
Investigao de reao transfusional
TESTE DE ANTIGLOBULINA INDIRETO

Aplicaes

Pesquisa de anticorpos Irregulares

Identificao de Anticorpos Irregulares
Fenotipagem
Pesquisa de D fraco
Teste de Auto-controle
PAI

Anticorpos Irregulares so aloanticorpos que

reagem com antgenos eritrocitrios ,exceto anti-A
e anti-B.

So encontrados em 0,3-38% da populao

dependendo do grupo estudado.

A imunizao para antgenos eritrocitrios resultam

de transfuso, gestao, transplante ou injeo de
material imunognico.
PAI

Aloanticorpos antieritrocitrios podem ser

detectados no soro ou no plasma de pacientes
quando colocados em contato com hemcias que
contenham o antgeno.

Uma vez detectados os aloanticorpos devem ser

identificados.

As tcnicas para pesquisa e identificao de

anticorpos so as mesmas.
PESQUISA DE Ac IRREGULARES

Soro Do Paciente

2 ou 3 Hc Fenotipadas

SE + IDENTIFICAO
REAGENTES UTILIZADOS PARA A REALIZAO DO PAI

Conjuntos de 2 ou 3 hemcias do grupo O fenotipadas

para os principais antgenos de grupo sanguineo

As hemcias devem homozigotas para que seja

detectado anticorpos com efeito de dose.
ANTICORPOS CLINICAMENTE SIGNIFICANTES

So anticorpos que reduzem a sobrevida das

hemcias transfundidas ou que podem estar
associados doena hemoltica perinatal.

Alguns anticorpos destroem hemcias

incompatveis dentro de horas ou at minutos,
outros diminuem a sobrevida em alguns dias e
outros, ainda, no causam destruio.
ANTICORPOS DE SIGNIFICNCIA CLNICA

RH
KELL Ac QUE DEVEM
DUFFY SER
RESPEITADOS
KIDD
Ss
IDENTIFICAO DE Ac IRREGULARES

Se o paciente j tiver
sido sensibilizado
previamente, porm, no
apresentar triagem
positiva, o Ac
anteriormente identificado
dever ser respeitado.
CAUSAS D RESULTADOS FALSO-NEGATIVO

Neutralizao do reagente
lavagem inadequada
aumento no volume de soro utilizado
contaminao do reagente AGH

Interrupo no teste
dissociao do IgG ligado
CAUSAS DE RESULTADO FALSO-NEGATIVO

Estocagem Imprpria do reagente

perda de reatividade da AGH por
congelamento ou calor
reagente de hemcias pode perder
antgenos na estocagem
Procedimento imprprio
excesso ou falta de centrifugao
esquecimento de algum reagente
suspenso de hemcias muito pesada
proporo soro/clula incoreta
CAUSAS DE RESULTADO FALSO-NEGATIVO

Complemento

Salina
pH 7.0 a 7.2
temperatura adequada
CAUSAS DE RESULTADO FALSO-POSITIVO

Clulas aglutinadas ante da lavagem

Partculas ou contaminantes
poeira ou sujeira no tubo

Procedimentos inadequados
excesso de centrifugao
centrifugao com PEG
CAUSAS DE RESULTADO FALSO-POSITIVO

TAD

complemento
componentes do complemento podem se
ligar durante a estocagem
complemento pode se ligar em amostras
coletadas na mesma linha de infuso
usada para administrar solues
contendo dextrose.
 MINISTRIO DA SADE
SECRETARIA DE ATENO SADE
DEPARTAMENTO DE ATENO ESPECIALIZADA
COORDENAO GERAL DE SANGUE E HEMODERIVADOS

SAF/Sul, Trecho 02, Ed. Premium, Torre 02, ala B, 2 andar sala 202
Braslia-DF-Brasil
Tel.: (61) 3315-6159

sangue@saude.gov.br

Coordenador Geral de Sangue e Hemoderivados: Guilherme Genovez

Responsvel pela rea Tcnica de Hemoterapia: Helder Melo
rea Tcnica de Hemoterapia: Giselle Barban, Jacqueline Vianna; Jakeline Nunes;
Lydia Frana; Priscila Murador; Reyjane Teixeira e Vnia Melo