MIKROBIOLOGIJA

Laboratorinis darbas

1. Bakteriofag skaiiavimas

Darbo priemons:

370C inkubatorius
Laminarinis boksas steriliam sjimui
Automatins pipets, sterils antgaliai
Petri lktels su LB terpe
E.coli 24h auginta kultra (suspensija)
T4 bakteriofag suspensija
Mgintuvliai su fiziologiniu tirpalu 4,5ml trio
Mgintuvliai su pusiau skystu agaru (0,4 % agaro, 0.5% NaCl)
450C vandeninis termostatas

Darbo eiga:

1. Suymkite mgintuvlius ir lkteles;

2. Ilydykite agar mgintuvliuose termostate; reiks 5-i mgintuvli.
3. 4-iuose mgintuvliuose su fiziologiniu tirpalu padarykite 10 kartinius
bakteriofag suspensijos skiedimus nuo 10-1 iki 10-4 ;
4. Dirbkite greitai: kiekvien mgintuvl su ilydytu agaru pilkite 300l
bakterij suspensijos, imaiykite sukdami mgintuvl tarp deln ir vl dkite
vonel; neleiskite agarui sustingti.
5. Dirbkite greitai: kiekvien mgintuvl su ilydytu agaru pilkite 100l
atitinkamai praskiestos bakteriofag suspensijos. imaiykite sukdami
mgintuvl tarp deln, nedelsiant ipilkite agar atitinkamai paymt lktel

1
 ir prispaud pirtu prie stalo paviriaus atsargiai pasukite, kad agaras isisklaidyt
paviriuje;
6. Sustingus agarui apverskite lkteles ir inkubuokite 370C 24val.
7. Apirkite lkteles, palyginkite jas su kontroline lktele, suskaiiuokite
matomas fag infekcijos vietas. Paaikinkite skirtumus. Apskaiiuokite fag kiek
1ml pradins fag suspensijos.

1 pav. Petri lktel su LB terpe, kurioje usta E. coli kultra. Matomi skaidrs ploteliai
bakteriofag T4 patekimo vietos.