UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN - TACNA

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL

Experimento N11

ADAPTACIN DE BACTERIAS DEL SUELO A LOS

METALES

ASIGNATURA:
Microbiologa Ambiental

DOCENTE:
Dr. Csar Julio Cceda Quiroz

PRESENTADO POR:
Gmez Cceres, Grecia 2015 178012
Lajo Huayta, Jhasmin 2015 178031
Chambi Ururi, Alexandra 2015 178026

AO Y SEMESTRE:
3er ao, V

TACNA PER
2017
 Experimento N 11

Adaptacin de bacterias del suelo a los metales

11.1. RESUMEN

Objetivo: demostrar la capacidad de una comunidad bacteriana de suelos a

adaptarse a la tensin de metal impuesta.

Enmendar el suelo con Cd.

Un suelo no modificado se incluye como control.
Incubar microcosmos del suelo durante dos semanas.
Diluir y planchar los suelos para determinar las poblaciones resistentes a
los metales y las bacterias heterotrficas totales despus de 0 y 2
semanas.

11.2. TEORA E IMPORTANCIA:

La contaminacin de metales en el ambiente puede surgir de una serie de

actividades, incluyendo la minera y los desechos industriales. Aguas y suelos
nativos naturalmente contienen metales, aunque son generalmente en tales
concentraciones bajas que no son motivo de preocupacin. Metales, incluso
metales biolgicamente esenciales (Ca, Zn, Al) en concentraciones
suficientemente altas, pueden ser naturalmente txicos para los
microorganismos. Los metales pueden alterar las membranas celulares, interferir
con las reacciones enzimticas, desnaturalizar las protenas y desnaturalizar el
ADN. En consecuencia, los microorganismos expuestos a metales se ven
obligados a desarrollar mecanismos de resistencia para funciones celulares. Los
metales tambin pueden disminuir la diversidad microbiana y nmeros
microbianos.

El descubrimiento de la resistencia a los metales microbianos ha llevado a un

mayor inters en la aplicacin de estos mecanismos y el uso de organismos
resistentes en la biorremediacin de sistemas contaminados con metales.
Los mecanismos de resistencia a los metales incluyen el atrapamiento del metal
en la capa de exopolisacrido bacteriana; Bombear el metal fuera del sistema
usando ATP; Y la metilacin, haciendo que el metal sea ms voltil (Maier et al.,
2000). Cabe sealar que los metales no pueden degradarse como compuestos
orgnicos. En su lugar, la toxicidad del metal puede reducirse haciendo que sean
menos biodisponibles o menos solubles.

Los efectos de la exposicin a metales pesados en los microorganismos del

suelo han sido estudiados extensamente durante los ltimos 40 aos.
Normalmente, la respuesta de la comunidad microbiana del suelo a la exposicin
a metales pesados se ha medido examinando el efecto sobre la diversidad, la
actividad o los conteos cultivables. Estudios previos han indicado generalmente
una disminucin en la diversidad general, actividad, y muchas veces conteos
cultivables, en respuesta a la contaminacin del metal (Kelly et al., 1999).

Muchos investigadores han documentado un aumento similar en la resistencia a

los metales en las bacterias del suelo que se aislaron de los suelos
contaminados. Esta evidencia sugiere que durante el cambio en la comunidad
bacteriana, las especies sensibles pueden ser eliminadas, mientras que las
especies tolerantes o resistentes a los metales pueden llegar a ser dominantes,
y tambin que el aumento de la tolerancia puede surgir como resultado de la
exposicin.

11.3. PROCEDIMIENTO

Primer Periodo

11.3.1. Materiales:

Suelo de 2 x 50 g
2 vasos de plstico para la incubacin del suelo
Balanza
Platos de pesaje
Envoltura de plstico
Bandas de goma
Rotulador
 Sonda de diseccin
0,6% de solucin madre de Cd (NO3)2 . 4H2O
9 placas de agar de levadura de peptona (PY)
9 placas de agar de levadura de peptona modificadas con Cd (500 mg Cd
ml-1 de agar)
1 estril de 95 ml de agua en blanco
4 estriles de 9 ml de agua en blanco
Pipetas de 1 ml
Esparcidor de palo de hockey de vidrio
Alcohol etlico para la esterilizacin de la llama
Quemador de gas

11.3.2. Procedimiento

a) Pesar dos muestras de cincuenta gramos (base en peso seco) del suelo
b) A una muestra de suelo aadir Cd como Cd (NO3) 2 para proporcionar
500 mg de Cd g de suelo seco-1 utilizando una solucin madre al 6% de
Cd (NO3) 2 4H2O. Esto requiere la adicin de 1,14% ml de la solucin
madre al suelo.
c) Aadir 0,75 ml de solucin madre de KNO3 al 6% al suelo de control para
normalizar el nitrgeno del suelo.
d) Ajuste el contenido de humedad del suelo del control y las muestras
modificadas en Cd al valor suministrado por su instructor. Tenga en
cuenta el H2O ya aadido en los pasos 2 y 3.
e) Utilizando uno de 95 ml y cuatro de 9 ml de agua en blanco, diluir una
muestra de 10 g de la tierra de control a la dilucin 10-5
f) Cubra ambas muestras con una envoltura de plstico para reducir las
prdidas de humedad, asegrelas con una banda de goma y anote los
pesos. Incubar a 25 C durante dos semanas.
g) Extienda la placa hacia fuera el 10-3, 10- 4 y diluciones de 10- 5 en
triplicado sobre agar PY, utilizando 0,1 ml de inculo para cada dilucin.
Tenga en cuenta que las diluciones finales sern 10-4, 10-5 y 10 6.
Estas placas indicarn el recuento total de placas heterotrficas.
 h) Del mismo modo, aplique el 10-1, 10-2, y diluciones de 10-3 en placas de
agar PY enmendado con Cd (diluciones finales = 10-2, 10-3 y 10-4).
a. Estas placas indicarn el nmero de bacterias resistentes al Cd
inicialmente presentes en el suelo testigo.
i) Incubar todas las placas a 25 C durante una semana, antes de contar.

Segundo Periodo (t = 2 semanas)

11.3.3. Materiales

Suelos de incubacin del primer perodo

Pipetas de 1 ml
Esparcidor de palo de hockey de vidrio
Alcohol etlico para la esterilizacin con llama
18 placas PY
18 placas PY + Cd
2 estriles de 95 ml en blanco
8 vacos estriles de 9 ml

11.3.4. Procedimiento

a) Vuelva a pesar los microcosmos del suelo y ajuste el contenido de

humedad del suelo al valor original. Asegrese de incluir el peso de la
envoltura de plstico y banda de goma como en el primer perodo.
b) Diluir muestras de 10 g de tierra de control de manera similar a la de los
primeros
c) Tambin diluya una muestra de 10 g del suelo modificado con Cd a las
mismas diluciones Es decir, a travs de 10-5. Se extendi la placa de las
diluciones 10-3, 10-4 y 10-5 en placas de PY por triplicado (diluciones
finales = 10-4, 10-5 y 10-6). Extender la placa de las diluciones 10-1, 10-
2 y 10-3 en las placas PY + Cd (diluciones finales = 10-2, 10-3 y 10-4).
d) Incubar todas las placas a 25 C durante una semana antes de contar.
11.4. RECOMENDACIONES

DEBE HACER:

Aada agua a la tierra sin agitar para evitar "empapar" el suelo

Placa de tres diluciones sucesivas para asegurar la obtencin de
nmero contables de colonias
Cambiar las pipetas entre el suelo de control de placas y el suelo
modificado con Cd
Asegurar condiciones aerbicas durante la incubacin del suelo

NO DEBE HACER:

Permita que el suelo se seque durante la incubacin - compruebe el peso

despus de una semana.

11.5. PELIGROS POTENCIALES

DEBE HACER:

Use guantes cuando manipule soluciones de Cd

Tenga cuidado de desechar adecuadamente los materiales contaminados
con metales (Pregunte al instructor).

11.6. PREGUNTAS Y PROBLEMAS

Calcular el nmero de concentraciones de bacterias heterotrficas en los

suelos control y Cd modificados en el tiempo 0 y despus de 2 semanas
de incubacin. Analice los cambios en los nmeros.
Hubo diferencias en la morfologa de las colonias entre aislamientos de
i) control vs Cd de suelo modificado; y ii) aislados obtenidos en el tiempo
0 vs 2 semanas?
En base a este experimento, la comunidad microbiana del suelo "se
adapt" a la presencia de Cd-discute las implicaciones de sus datos?
11.7. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Kelly, J.J., Hggblom, M., and Tate, R.L. III. (1999) Changes in soil microbial
communities over time resulting from one time applications of zinc: a laboratory
microcosm study. Soil Biology and Biochemistry 31, 14551465.

Maier, R.M., Pepper, I.L., and Gerba, C.P. (2000) Environmental Microbiology.
Academic Press, San Diego.