XXI Congreso Latinoamericano y

XV Congreso Ecuatoriano de la Ciencia del Suelo

Todos los Suelos en la Mitad del Mundo

Quito Ecuador, del 24 al 28 de octubre del 2016

Hotel J.W. Marriott

RESUMEN EXTENDIDO
CARACTERIZACIN DE BACTERIAS SIMBITICAS
AISLADAS DE Clitoria brachystegia Benth.
Soto Valenzuela, J.1; Ormeo-Orrillo, E.1 y Ziga-Dvila, D.1*
1Laboratorio de Ecologa Microbiana y Biotecnologa, Universidad Nacional Agraria La Molina,
Departamento de Biologa, Lima-Per.
*Autor de contacto: dzuniga@lamolina.edu.pe

RESUMEN
La leguminosa Clitoria brachystegia Benth., es un arbusto endmico de los bosques
secos de Ecuador y Per, en peligro de extincin.
El objetivo de este trabajo fue relacionar las propiedades fsico-qumicas del suelo
como pH, materia orgnica (M.O.), fsforo (P) y potasio (K), la condicin de plantas
cultivadas o silvestres y su produccin de goma con la diversidad de cepas de las
bacterias simbiticas, conocidas como rizobios, que se asocian con la planta C.
brachystegia. Setenta y un cepas de rizobios fueron obtenidas de ndulos de la raz
de C. brachystegia Benth. Se aislaron y purificaron en medio LMARC, se extrajo su
ADN y posteriormente se determinaron sus perfiles genmicos BOX-PCR; que luego
fueron cotejados y relacionados como criterio inicial para su identificacin,
caracterizacin molecular y bioqumica. Los treinta y dos perfiles genticos y su
ndice de diversidad encontrados, permitiran esclarecer las interacciones biolgicas
de una especie en peligro de extincin.

PALABRAS CLAVE
Clitoria brachystegia; rizobios; perfiles genmicos
INTRODUCCIN
Los bosques tropicales juegan un papel importante en el ciclo del carbono, lo que
representa alrededor de un tercio de productividad mundial primaria (Saugier et al,
2001; Beer et al, 2010). Los bosques secos en general estn ubicados en zonas
relativamente poco pobladas, muchas veces en suelos aptos para cultivos, por tal
razn han sido muy intervenidos y destruidos, en mayor medida que los bosques
hmedos (Janzen, 1988). En Sudamrica la regin tumbesina (135.000 km2)
comparte remanentes de bosque seco tropical entre Ecuador y Per, desde la
provincia de Esmeraldas, norte del Ecuador hasta el departamento de La Libertad en
el noroeste de Per (en reas entre 0 - 2.000 m), con alto nivel de endemismo de su
flora (Aguirre et al., 2006).
La leguminosa Clitoria brachystegia Benth., es un arbusto endmico de bosques y
valles secos de la costa y callejn interandino de Ecuador y Per. Actualmente se
encuentra en peligro de extincin (FAO, 2005). No registra interacciones biolgicas y
la Unin Internacional para la Conservacin de la Naturaleza (UICN, 2012), en su
libro rojo la clasifica en A4c (reduccin del tamao de la poblacin observada,
estimada, inferida, proyectada o sospechada hasta un mximo de 100 aos en el
futuro), y donde las causas de la reduccin pueden no haber cesado o no ser
entendidas y conocidas o pueden no ser reversibles. Cornejo (2015) sita a C.
brachystegia Benth., en la costa de Ecuador, entre 0 a 1400 m., zona de vida
bosque seco tropical hasta montano; en suelos arcillosos, calizos, rocosos y
compactados, bien drenados. Con florescimiento y fructificacin desde junio hasta
noviembre y en febrero. En Per Clitoria sp., ha sido reportada en Lambayeque,
Moyobamba y Bagua; en colecciones realizadas por los herbarios de las
Universidades Nacionales Pedro Ruiz Gallo (Lambayeque) y Agraria La Molina
(Lima).
The Plant List registra al gnero Clitoria con 178 especies de leguminosas
predominantes en el continente americano. Poseen, como otras leguminosas, la
capacidad de fijar nitrgeno mediante simbiosis con bacterias del suelo llamadas
rizobios que residen en el interior de los ndulos en las races de estas plantas.
El objetivo del proyecto es estudiar la diversidad de rizobios y sus interacciones con
C. brachystegia Benth. Se presentan resultados preliminares, estableciendo la
relacin entre el nmero de cepas, perfiles genmicos y pH del suelo con relacin al
ndice de diversidad de los rizobios asociados a C. brachystegia.

MATERIALES Y MTODOS
Las muestras vegetales y suelo se colectaron en los remanentes de bosque seco
tropical de Ecuador, Regin Tumbesina (Figura 1) en poca lluviosa,
correspondientes a 4 lugares diferentes. Tres ubicadas en Guayaquil, provincia del
Guayas (27C, humedad relativa de 80%) y una en Puyango, provincia de Loja
(22.5C, humedad relativa de 79%). Las plantas se identificaron en el Herbario de la
Universidad de Guayaquil (UG, Ecuador), los suelos fueron analizados en el
Laboratorio de agua, suelo, medio ambiente y fertirriego del Departamento de
Recursos Hdricos de la Universidad Nacional Agraria La Molina (UNALM), Per.
Los aislamientos y pruebas de identificacin, caracterizacin y tipificacin molecular
de las bacterias se realizaron en el laboratorio de Ecologa Microbiana y
Biotecnologa (LEMYB), Departamento de Biologa de la UNALM, mediante mtodos
descritos previamente (Ziga, 2012).
Se aislaron y purificaron bacterias a partir de ndulos de C. brachystegia Benth.,
encontrados en los cuatro sitios muestreados. Evaluando su diversidad mediante
perfiles genmicos BOX-PCR (Figura 2D) y su relacin con las caractersticas fsico-
qumicas del suelo (Tabla 1).

RESULTADOS Y DISCUSIN
Las plantas de C. brachystegia analizadas en los tres sitios de Guayaquil, estaban
en floracin y produccin de vainas (Figura 2A), mientras que en Puyango se
encontraron en estado vegetativo. Todas las plantas evaluadas presentaron ndulos
radicales. Del total de plantas, el 65% de los ndulos fueron efectivos por su
coloracin rosada (Figura 2B) mientras que el 35% fueron inefectivos por el color
marrn. Su tamao promedio fue aproximadamente de 3mm. Crecen entre las 48 a
72 horas, y pueden ser mucosas (Figura 2C), ligosas o acuosas. Se diferencian por
el tiempo de crecimiento y produccin de goma que va de poco a abundante.
Se identificaron en total 32 perfiles genmicos de 71 cepas de rizobios aislados y
purificados (Figura 2C) de ndulos de C. brachystegia (Tablas 2 y 3).
La relacin encontrada entre las caractersticas de suelo evidencia que el sitio
Puyango, a pesar de tener un pH cido (4.28) y valores bajos en materia orgnica
(M.O.=0.33%), presenta un ndice intermedio de diversidad (0.58). Sin embargo,
valores medianos en fsforo y potasio encontrados y la condicin silvestre de la
planta podran beneficiar esta diversidad de bacterias simbiontes (Tabla 1 y 2). As
tambin el 93% de las cepas aisladas fueron mucosas y el 7% ligosas y/o acuosas
(Figuras 3).
Los valores acordes con la relacin diversidad de rizobios-caractersticas del suelo,
obtenidos en los dos sitios de la Universidad de Guayaquil (UG1 y UG2) se
consideran como diversidad intermedia (0.48 y 0.50 respectivamente), con altos
porcentajes de materia orgnica, altos valores de fsforo y de mediano a alto en
potasio (Tabla 1 y 2). Del 50 al 54% de cepas de rizobios fueron mucosas y del 50 al
54% fueron ligosas y/o acuosas (Figuras 3).
El sitio Jardn Botnico de Guayaquil, presento el valor ligeramente mediano en
diversidad (0.55), acorde al pH (6.98) muy cercano al neutro, mediano contenido de
M.O. medio en fsforo (12.59 ppm) y bajo en potasio (62.40 ppm). En este lugar el
100% de las cepas de rizobios fueron mucosas (Figuras 3).

Figura 1. Ubicacin de los bosques secos tropicales, norte de Ecuador hasta el noroccidente de
Per. , Zona de muestreo.
Segn Aguirre et al. (2006) y Linares et al. (2010) mencionan que en un ecosistema
frgil de bosque seco tropical prevalece una gran diversidad de leguminosas. Por
otro lado, los suelos muestreados presentaron de bajo a mediano contenido de
nutrientes, lo cual puede favorecer la simbiosis planta-rizobios (Mora, 1995).
Adicionalmente, las cepas de rizobios mayoritariamente suelen ser mucosas y
translcidas (Ferrera, 1993; Somasegaran, 1994), lo cual concuerda con lo
encontrado en este trabajo.

Tabla 1. Caracterizacin fsico qumica de los suelos muestreados con presencia de Clitoria
brachystegia Benth.

Tabla 2. Nmero de ndulos, cepas, perfiles genmicos y diversidad por sitio geogrfico .

planta Nmero de Nmero de Nmero de Diversidad a

Zona
ndulos cepas Perfiles nivel de cepa
geogrfica
Genmicos
a
J.B.G. Cultivada 43 9 5 0.55
b
U.G. (1) Cultivada 67 29 14 0.48
U.G. (2) Cultivada 4 2 1 0.50
Puyango Silvestre 79 31 18 0.58
Total 193 71 32*

Jardn Botnico de Guayaquil (a), Universidad de Guayaquil (b), total de perfiles genmicos
diferentes (*)

A B C D

Figura 2. Secuencia Metodolgica. (A) Plantas de C. brachystegia encontrada en los predios de

la Universidad de Guayaquil. (B) Ndulos simbiticos. (C) Cepa pura de rizobio. (D) Perfil BOX-
PCR obtenido.

D
Figura 3. Distribucin de rizobios por su capacidad productora de goma, en los cuatro sitios de
muestreo

Tabla 3. Perfiles BOX-PCR obtenidos de cepas aisladas de ndulos de C. brachystegia Benth.

No. CDIGO DE CEPAS TOTAL PERFIL

AISLADAS* CEPAS GENTICO
AISLADAS (BOX-PCR)
1 1-7-26-27-30-36 6 A
2 2-3-9-25-29-34-35 7 B
3 4-11-54 3 C
4 5-12 2 D
5 6-13-17-84 4 E
6 14-64 3 F
7 18-19 2 G
8 21-22 2 H
9 8 1 I
10 10 1 J
11 15 1 K
12 23 1 L
13 37-38 2 M
14 39-40-42 3 N
15 33 1 O
16 41 1 P
17 43-44-45-47 4 Q
18 58-59 2 R
19 51 1 S
20 56 1 T
21 60 1 U
22 61-68 2 V
23 62-65-67-70-72-75-77 7 W
24 66-69-85 3 X
25 71 1 Y
26 73 1 Z
27 76 1 a
28 78 1 b
29 80-87 2 c
30 81-82 2 d
31 86 1 e
32 88 1 f

*negro, Puyango; rojo, U Guayaquil 1; verde, U. Guayaquil 2; azul, Jardn botnico

CONCLUSIN
Todas las plantas estudiadas presentaron ndulos simbiticos, del total de bacterias
aisladas, se obtuvieron 32 perfiles genmicos. Las cepas de rizobios aisladas de 4
suelos presentaron ndices de diversidad intermedios, adaptados a las
caractersticas de suelos con pH desde cidos hasta ligeramente neutros, inclusive
con bajo porcentaje de materia orgnica, valores medios y muy altos de fosforo,
medios y bajos en potasio, en condiciones de cultivo o silvestre y en su mayora
productoras de goma.

AGRADECIMIENTOS
Parte de este trabajo fue financiado por FONDECYT (Per) a travs del proyecto
238-2015 y del Programa de Becas para Doctorado (PhD) para Docentes de
Universidades y Escuelas Politcnicas SENESCYT (Ecuador), respectivamente.

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