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Rio de Janeiro
Maio de 2006
AVALIAO DO PERFIL DA COMUNIDADE MICROBIANA DE
ECOSSISTEMAS DE MANGUEZAL RECEPTORES DE EFLUENTES DA
ATIVIDADE DE CULTIVO DE CAMARO NO ESTADO DO CEAR, BRASIL
Orientadora
Leda Cristina Santana Mendona-Hagler
Co-orientadora
Regine Helena Silva dos Fernandes Vieira
Aprovada por:
__________________________________________
Presidente, Profa. Leda Cristina Santana Mendona-Hagler
___________________________________
Prof. Dr. Andrew Macrae
___________________________________
Prof. Dr. Carlos Augusto Soares
___________________________________
Prof. Dr. Fabio Vieira de Arajo
___________________________________
Prof. Dr. Fernando Portela Cmara
Rio de Janeiro
Maio de 2006
Sousa, Oscarina Viana de
Avaliao do perfil da comunidade microbiana de ecossistemas de
manguezal receptores de efluentes da atividade de cultivo de camaro no
Estado do Cear (Brasil) / Oscarina Viana de
Sousa Rio de Janeiro: UFRJ/IMPPG, 2006.
xi, 121f.: il.
Orientador: Leda Cristina Santana Mendona-Hagler
Tese (doutorado) UFRJ/IMPPG/ Programa de Ps-graduao em
Microbiologia, 2006.
Referncias Bibliogrficas: f. 86-104
1.ecologia microbiana. 2. carcinicultura. 3. manguezal. 4. efluentes. I.
Mendona-Hagler, Leda Cristina Santana. II. Universidade Federal do Rio de
Janeiro, Instituto de Microbiologia Professor Paulo de Ges. III. Ttulo
Ao meu pai, Oscar Victor (In memoriam)
Agradecimentos
minha famlia (minha me, Telma, Renato, Nonato e meus amados sobrinhos) por ser
o alicerce sobre o qual a minha vida est construda.
minha orientadora Profa. Leda Mendona Hagler, pela confiana, ateno e carinho
sempre presentes durante todo o perodo de doutorado.
Ao Prof. Andrew Macrae, pela sua ateno e carinho. E por ter me dado a oportunidade
de provar os deliciosos Baked beans.
Ao Prof. Allen Hagler (baiano legtimo de Winsconsin) por me colocar a par das
tradies e costumes de sua terra.
A todas as Reginetes pela amizade, dedicao e esprito de grupo. O que torna qualquer
trabalho prazeroso. Meus agradecimentos especiais s amigas: Susy, Cristiane e Gleire,
meu grupo de apoio durante a realizao das coletas.
A todos aqueles que vou levar de volta para Fortaleza dentro do meu corao: Maria do
Carmo, Anderson, Jose Olavo, Patricia, Andrei, Paulinho, Samantha, Zoraidy, Karina,
Paulo Mineiro e Ida. Pessoas com as quais dividi bancada, trabalho, cansao, decepes,
mas tambm (e principalmente!) alegrias, almoos e festas memorveis.
Aos meus irmos cuiabanos, Selma e Fabio que ganhei de presente nesse doutorado.
A todos os amigos que eu deixei em Fortaleza em uma torcida quase organizada.
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LISTA DE FIGURAS E QUADROS
LISTA DE TABELAS
Resumo
Abstract
1 INTRODUO............................................................................................................ 1
2 REVISO BIBLIOGRFICA............................................................................. 3
2.1 Ecossistema Manguezal............................................................................................ 3
2.1.1 Classificao dos manguezais................................................................................ 9
2.2 O Impacto da Carcinicultura sobre o Ecossistema Manguezal................................. 10
2.2.1 Localizao e caractersticas dos manguezais da costa cearense........................... 15
2.3 Diversidade microbiana no ecossistema manguezal................................................. 17
2.3.1 Microrganismos associados com ambiente aqutico.............................................. 17
2.3.2 Comunidades microbianas em sedimento, razes e rizosfera de plantas de
mangue............................................................................................................................ 18
2.4 Biodiversidade dos vbrios........................................................................................ 21
2.5 Ferramentas para avaliao da diversidade microbiana............................................ 23
2.6 Avaliao da similaridade de espcies...................................................................... 27
3 OBJETIVOS................................................................................................................. 28
3.1 Objetivo Geral........................................................................................................... 28
3.2 Objetivos especficos................................................................................................ 28
4. HIPTESES............................................................................................................ 29
5 MATERIAL E MTODOS......................................................................................... 30
5.1 Descrio da rea de estudo...................................................................................... 30
5.1.1 Escolha dos pontos de coleta................................................................................. 30
5.1.2 Determinao de parmetros hidrobiolgicos........................................................ 34
5.1.3 Coleta e processamento das amostras de gua....................................................... 34
5.1.4 Coleta e processamento das amostras de sedimento.............................................. 34
5.1.4.1 Anlise da textura e caractersticas fsico-qumicas dos sedimentos................. 34
5.1.5 Coleta e processamento das amostras de razes..................................................... 35
5.2 Anlise das amostras atravs de tcnicas convencionais de cultivo......................... 36
5.2.1 Colimetria............................................................................................................... 36
5.2.2 Contagem de Bactrias Heterotrficas Totais cultivveis (BHT).......................... 36
5.2.2.1 Isolamento e manuteno de estirpes.................................................................. 36
5.2.2.1.1 Identificao das estirpes.................................................................................. 36
5.2.3 Contagem e isolamento de Vibrio spp.................................................................... 37
5.2.3.1 Isolamento e identificao de estirpes................................................................. 38
5.2.4 Contagem de Fungos e Leveduras Totais............................................................... 39
5.2.5 Anlise estatstica................................................................................................... 39
5.3 Anlise das amostras de gua atravs de tcnicas moleculares................................. 40
5.3.1 Extrao de DNA total .......................................................................................... 40
5.3.1.1 Extrao de DNA total das amostras de gua..................................................... 40
5.3.2 Amplificao dos fragmentos dos genes 16S do DNA total (PCR) das amostras
de gua com iniciadores universais................................................................................. 41
5.3.3 Amplificao dos fragmentos de DNA das amostras de gua com iniciadores
especficos para o gnero Vibrio..................................................................................... 41
5.3.4 Anlise da diversidade microbiana das amostras de gua atravs de Eletroforese
em Gel de Gradiente Desnaturante (DGGE)................................................................... 42
6 RESULTADOS............................................................................................................ 43
6.1 Parmetros fsico-qumicos da gua.......................................................................... 43
6.1.1 Parmetros fsicos e qumicos dos sedimentos....................................................... 44
6.2 Anlises microbiolgicas atravs das tcnicas convencionais de cultivo................. 45
6.2.1 Colimetria das amostras de gua e sedimento........................................................ 45
6.2.2 Contagem de Bactrias Heterotrficas Totais cultivveis (BHT).......................... 47
6.2.2.1 Identificao das estirpes isoladas...................................................................... 50
6.2.3 Contagem de Fungos e Leveduras Totais.............................................................. 56
6.2.4 Estimativa do nmero Vibrio spp.......................................................................... 56
6.2.4.1 Identificao das estirpes de Vibrio..................................................................... 57
6.3 Anlise das amostras de gua atravs de tcnicas moleculares................................ 63
7 DISCUSSO................................................................................................................ 69
8 CONCLUSES............................................................................................................ 86
9 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS..................................................................... 88
LISTA DE FIGURAS E QUADROS
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Tabela 1 Mdia e desvio padro dos valores da temperatura, salinidade e pH
de dois pontos das amostras de gua registrados nas duas expedies de coleta
nas reas de manguezal estudadas......................................................................... 44
Tabela 2 Anlise fsico-qumica e de textura das amostras de sedimento de
quatro reas de manguezal do litoral leste do Estado do Cear............................ 45
Tabela 3 Nmero mais provvel de coliformes fecais nas amostras de gua e
sedimento coletadas em reas de manguezal na regio nordeste (Cear, Brasil /
2003)...................................................................................................................... 46
Tabela 4 Estimativa do nmero de coliformes fecais nas amostras de gua e
sedimento coletadas em reas de manguezal na regio nordeste (Cear, Brasil /
2004)...................................................................................................................... 47
Tabela 5 Mdia e desvio padro do logaritmo do nmero de bactrias (UFC)
em amostras de gua e sedimento coletadas em reas de manguezal na regio
nordeste (Cear, Brasil / 2003).............................................................. 48
Tabela 6 Mdia e desvio padro do logaritmo do nmero de bactrias (UFC)
por grama de amostras de razes das espcies Rhizophora mangle e Avicennia
schaueriana em reas de manguezal na regio nordeste(Cear, Brasil / 2003).... 49
Tabela 7 Mdia e desvio padro do logaritmo do nmero de bactrias (UFC)
nas amostras de gua, sedimento e rizosfera das espcies Rhizophora mangle e
Avicennia schaueriana em reas de manguezal na regio nordeste (Cear,
Brasil / 2004)......................................................................................................... 50
Tabela 8 Nmero de culturas isoladas das amostras ambientais nas quatro
reas de manguezal no litoral do nordeste (Cear, Brasil).................................... 51
Tabela 9 Caracterizao morfolgica das culturas isoladas de amostras
ambientais em quatro reas de manguezal da regio nordeste (Cear, Brasil)..... 52
Tabela 10 Identificao das estirpes isoladas nas amostras de gua de reas
de manguezal no Estado do Cear (Brasil)........................................................... 53
Tabela 11 Identificao das estirpes isoladas nas amostras de sedimento de
reas de manguezal com presena da atividade de carcinicultura (Cear, Brasil) 54
Tabela 12 ndice de diversidade fenotpica das amostras de gua e sedimento
de reas de manguezal no Estado do Cear (Brasil)............................................. 55
Tabela 13 Mdia e desvio padro do logaritmo das contagens padro em
placas do nmero de fungos totais nas amostras de gua, sedimento e rizosfera
das espcies Rhizophora mangle e Avicennia schaueriana em reas de
manguezal na regio nordeste (Cear, Brasil / 2004)........................................... 56
Tabela 14 Estimativa do nmero de Vibrio nas amostras de gua e sedimento
coletados em reas de manguezal (CE, Brasil)..................................................... 57
Tabela 15 Identificao das estirpes de Vbrio isoladas das amostras de gua
e sedimento nos quatro manguezais estudados (CE, Brasil)................................. 58
Tabela 16 ndice de diversidade fenotpica de espcies do gnero Vibrio nas
amostras de gua e sedimento de reas de manguezal no Estado do Cear
(Brasil)................................................................................................................... 59
Tabela 17 Identificao* das espcies de Vbrio isoladas das amostras de
gua e sedimento de trs diferentes pontos (canal de abastecimento, viveiro e
canal de descarga) de uma fazenda de camaro localizada em rea de
manguezal no Rio Jaguaribe (Cear, Brasil)......................................................... 61
Tabela 18 ndice de diversidade fenotpica das amostras de gua e sedimento
em locais dentro de uma fazenda de cultivo de camares no Estado do Cear
(Brasil)................................................................................................................... 61
Tabela 19- Comparao entre o nmero de bandas, nos gis de DGGE, obtidos
com os amplicons das amostras de gua de ambientes de manguezal e de
fazenda de camaro e o nmero de espcies isoladas dessas amostras
ambientais. ........................................................................................................... 68
RESUMO
Orientadoras:
Profa. Dra. Leda Cristina Santana de Mendona-Hagler
Profa. Dra. Regine Helena Silva dos Fernandes Vieira
Brazil has the second largest area of mangroves in the world and the first one in
the Americas. In last decade occurred a substantial reduction of mangrove areas due to
the anthropogenic activities, as shrimp culture. The northeast region of Brazil is
responsible for about 97% of the national production of cultivated shrimp. The rapid
development of shrimp farms in this region has generated a concern about the effect of
continued flux of effluent from cultivation dams in mangrove ecosystems. This study
aimed to supply information about the microbial community profile in mangrove
ecosystems receiving effluent waters of shrimp farms in the Northeast region. A polifasic
approach was used through conventional and molecular techniques of environment
microbiology to evaluate the effect caused by external impacts on the environment. The
data derived from the present work are important to formulate strategies of management
and conservation of areas with potential for aquaculture activity. During this study
samples had been collected in four mangroves in the coastal east of Cear state. Strains
of Chryseomonas luteola and species of Enterobacteriaceae were the most frequently
isolated bacteria. Among Vibrio species had been identified human (V. cholerae and V.
parahaemolyticus) and shrimp (V. harveyii) pathogenic bacteria. Besides organic
compounds originated from shrimp ponds, this ecosystems receives sewage water as
shown by fecal coliform levels observed in all the water samples. Significative
differences were found in the community structure among the evaluated mangrove areas.
The communities profiles present a trend to grouping between environments with shrimp
farms, indicating an influence of pond fluxes. However this effect on the communities
profile is not necessarily a consequence of shrimp farm discharges, since variations in
reference mangrove were noted.
maior de investimentos e isso faz com que cada vez mais reas sejam convertidas em
fazendas de cultivo de camaro.
No Brasil, a regio nordeste (Estados do Cear, Paraba, Piau e Rio Grande do
Norte) concentra cerca de 97% da produo nacional. Esse aumento e rpido
desenvolvimento de fazendas de cultivo de camaro na regio tm gerado uma
preocupao quanto aos efeitos das descargas contnuas dos efluentes gerados pelos
viveiros sobre os ecossistemas de manguezal. A destruio de reas de manguezal, o
descarte de altos nveis de material de origem orgnica nas guas costeiras e o
aparecimento de surtos de doenas so alguns dos efeitos dos distrbios causados pela
atividade de cultivo de camaro. Por outro lado, temos uma relao de interdependncia
entre a produtividade e sustentabilidade do cultivo de camaro e a manuteno da
qualidade e equilbrio do ecossistema manguezal.
Apesar de um considervel volume de pesquisas avaliando a composio
qumica e fsica desses efluentes e dos mananciais receptores ainda existe poucos
estudos, sob o ponto de vista da ecologia microbiana, que avaliem o impacto desses
efluentes e a capacidade de recuperao desses ecossistemas. A qualidade dos efluentes
bsica para a tomada de decises sobre o nmero e tamanho das fazendas de camaro
que podem ser implantadas nos ambientes costeiros sem colocar em risco o ecossistema.
O crescimento continuado dos viveiros de camaro marinho fortemente dependente
das alteraes diretas causadas sobre o ambiental por essa atividade. Devido ausncia
de informao sobre o efeito que a atividade de aquacultura poderia ter em reas
tropicais e subtropicais, tem sido difcil desenvolver regras para o controle da expanso
dessa atividade em reas prximas ao manguezal. Os dados apresentados nesse trabalho
podem ser teis na tentativa de minimizar os riscos ecolgicos e assegurar a viabilidade
dessa atividade por longo prazo.
Reviso Bibliogrfica 3
2 REVISO BIBLIOGRFICA
A B C
Figura 2 Fotos dos manguezais onde foram realizadas as coletas. Da esquerda para a
direita; A: rio Pacoti ; B: rio Pirangi; C: rio Chor; e D: rio Jaguaribe
rea aproximada de
Rios Mangues (ha) %
Timonha/Ubatuba 10.184 44,40
Remdios 431 1,89
Corea 4.620 20,14
Acara 1.907 8,32
Zumbi 1.708 7,45
Aracatia 498 2,17
Munda/Cruxati 1.071 4,67
Cear 500 2,17
Coc 375 1,63
Pacoti 158 0,69
Chor 24 0,10
Pirang 200 0,87
Jaguaribe 1.260 5,50
22.936 100,00
Fonte: Funceme (1989)
Quadro 1 Distribuio das reas de mangues no Estado do Cear
podem ser parcialmente resolvidos pelo plaqueamento das amostras em vrios meios de
cultura com composies diferenciadas (Balestra e Misaghi, 1997)
Nas duas ltimas dcadas, a utilizao de novos mtodos de biologia molecular
baseados essencialmente na extrao e amplificao de cidos nuclicos forneceu uma
alternativa apropriada para os mtodos baseados no cultivo proporcionando uma viso
geral sobre a composio, riqueza e estrutura de comunidades microbianas de ambientes
complexos (Martin-Laurent et al., 2001). Apesar do impacto das pesquisas do gene
rRNA sobre a ecologia microbiana, a informao filogentica fornecida por um nico
gene (por exemplo, rRNA) geralmente insuficiente para inferir a significncia
fisiolgica ou ecolgica dos organismos apenas pela seqncia do rRNA. A ausncia de
alternativas para o cultivo tem limitado em muito a habilidade dos microbiologistas para
caracterizar os microrganismos na natureza. A amplitude e diversidade filogentica de
muitas das linhagens microbianas implica em inovaes evolucionrias, novas
propriedades fenotpicas e papis ecolgicos imprevistos. Novas estratgias para a
caracterizao biolgica mais esclarecedora dos novos taxas microbianos so
urgentemente necessrios para a compreenso dos microrganismos existentes e suas
interaes (Delong e Pace, 2001)
Atualmente, diversas tcnicas moleculares esto disponveis para a deteco de
variabilidade gentica da seqncia de DNA, ou seja, para a deteco de polimorfismo
gentico. Algumas dessas tcnicas usadas para analisar a estrutura e diversidade de
comunidades microbianas so: a eletroforese em gel de gradiente desnaturante
(Denaturating Gradient Gel Eletrophoresis - DGGE), a eletroforese em gel de gradiente
de temperatura (Temperature Gradient Gel Eletrophoresis - TGGE), a conformao de
polimorfismo em fita simples (Single-Strand-Conformation Polimorfism - SSCP), e
anlise dos perfis eletroforticos de fragmentos de restrio (Amplified Ribosomal
DNA Restriction-ARDRA) (Smalla et al., 1993; Rosado et al., 1997; Schwieger e
Tebbe, 1998; Rosado et al., 1999).
As tcnicas de eletroforese do DGGE, TGGE so consideradas mtodos padres
em ecologia microbiana molecular (Muyzer e Smalla, 1998) e juntamente com a SSCP
permitem analisar produtos de reao em cadeia de polimerase (PCR) de acordo com as
seqncias de pares de bases, possibilitando ento determinar a diversidade gentica de
comunidades microbianas naturais e tambm a identificao filogentica dos membros
Reviso Bibliogrfica 25
3 OBJETIVOS
Para a obteno de dados que possam ser usados para responder as hipteses
formuladas, os seguintes objetivos foram traados:
9 Quantificar, isolar e identificar bactrias em amostras de gua, sedimento
e rizosfera das duas espcies vegetais mais abundantes em ecossistemas de manguezal
de quatro rios no Estado do Cear, trs deles (Chor, Pirang e Jaguaribe) com a
presena de fazendas de cultivo de camaro marinho e um (Pacoti) onde essa atividade
no est presente.
9 Estabelecer propores entre as bactrias cultivveis;
9 Caracterizar a comunidade microbiana associada a rizosfera, sedimentos
e gua utilizando metodologias convencionais de cultivo e metodologias moleculares;
9 Determinar os ndices de diversidade e similaridade entre as reas
estudadas;
9 Avaliar o grau de contaminao por esgoto domstico dos manguezais
atravs de anlises fisico-qumica e microbiolgicas desses ambientes
Hipteses 29
4 HIPTESES
O tempo e o volume dos descartes das guas residuais dos viveiros de camaro
apresenta uma correlao positiva com alteraes na diversidade da comunidade
microbiana nas reas de manguezal receptoras dessas descargas.
Material e Mtodos 30
5 MATERIAL E MTODOS
Figura 4 Localizao dos pontos de coleta no rio Pacoti Mangue 1(Cear, Brasil)
Figura 5 Localizao dos pontos de coleta no rio Chor Mangue 2 (Cear, Brasil)
Material e Mtodos 33
Figura 6 Localizao dos pontos de coleta no rio Pirang Mangue 3 (Cear, Brasil)
Figura 7 Localizao dos pontos de coleta no rio Jaguaribe Mangue 4 (Cear, Brasil)
Material e Mtodos 34
Identificao presuntiva
Teste Meio
Colorao de Gram
Produo de citocromo-oxidase
Motilidade Sulfeto-Indol-Motilidade (SIM)
Utilizao de glicose/fermentao de sacarose Agar Trplice Acar Ferro (TSI)
Identificao confirmatria
Decarboxilao de lisina e ornitina / hidrlise de Meio basal
arginina
Halofilismo Caldo triptona com 0, 3, 6, 8 e 10 % de
Cloreto de sdio
Voges-Proskauer Caldo MR-VP
Hidrlise de ONPG
Fermentao de carboidratos Caldo Prpura de Bromocresol
Produo de Indol Sulfeto-Indol-Motilidade (SIM) (Difco)
5.3.2 Amplificao dos fragmentos dos genes 16S do DNA total (PCR) das amostras de
gua com iniciadores universais
Os fragmentos da regio varivel V6 a V8 do gene 16S do rDNA total extrado das
amostras de gua foram amplificados em um termociclador GeneAmp 9700 (Applied
Biosystems), em duas etapas: primeira com o par de iniciadores 1401U (5 CGG TGT
GTA CAA GGC CC- 3) e 984 (5-AAC GCG AAG AAC CTT AC-3). O produto
dessa amplificao foi usado como padro para a segunda etapa utilizando os
iniciadores F984 com grampo de GC (5-CGC CCG GGG CGC GCC CCG GGC GGG
GCG GGG GCA CGG GGG GAA CGC GAA GAA CCT TAC-3) e R1378 (5-CGG
TGT GTA CAA GGC CCG GGA ACG-3). Os iniciadores so especficos para
seqncias universalmente conservadas nos gene 16S rDNA bacteriano. O PCR foi
realizado com a enzima Sttoffel Fragment (Applied Biosystem). Cada mistura de reao
continha: tampo 1X; 2,5 mM de MgCl2; 0,2 mM de DNTPs; 0,2 M de cada
primer; 5% de DMSO; gua Milliq; 2,5 unidades de Taq e 50 ng de DNA. O
Programa de PCR foi desenvolvido em 30 ciclos, com as seguintes etapas: desnaturao
a 94 oC/1min.; anelamento 57oC/1min; extenso a 72oC/75min.
Na etapa de elongao foi usada uma temperatura de 72oC por 30 min. para
prevenir a formao de artefatos de bandas duplicadas na anlise por DGGE (Janse et
al., 2004).
5.3.3 Amplificao dos fragmentos de DNA das amostras de gua com iniciadores
especficos para o gnero Vibrio
Os iniciadores especficos para o gnero Vibrio foram desenhados baseado em
alinhamento de Vibrio publicado e relacionado a seqncias de 16S rRNA. Estes foram
testados in silico com o programa Ribosomal Database Project (RDP) (verso 2.0). O
iniciador senso foi modificado com um grampo GC de 30 pares de base.
O DNA total extrado das amostras de gua foi utilizado como padro para
amplificao dos fragmentos de 16S com iniciadores vibF727 (5-AGG CGG CCC
CCT GGA CAG A-3) e vibR1423 (5-RCT TCT KKT GCA GCC CAC TCC CA-3)
Material e Mtodos 42
6 RESULTADOS
Durante a execuo dessa pesquisa foram realizadas duas expedies para coleta
de material em dois anos consecutivos (2003 e 2004) em quatro reas de manguezal do
litoral leste do Estado do Cear. A primeira expedio gerou 24 amostras de gua, 24 de
sedimento e 31 amostras de rizosfera das espcies Rhizophora mangle e Avicennia
schaueriana encontradas como dominantes nas reas estudadas. Na segunda expedio
as coletas aconteceram em duas das reas de manguezal (Mangue 1 e Mangue 4, rio
Pacoti e Rio Jaguaribe, respectivamente), em cinco pontos distintos, tendo-se coletado
um total de 10 amostras de cada material a ser analisado (gua, sedimento e razes).
Parmetros
Temperatura C Salinidade pH
1. Expedio
P1 P2 P1 P2 P1 P2
*Mangue 1 292,6 27,32,1 1312,1 4,78,0 7,83 0,34 7,570,21
*Mangue 2 28,61,4 29,31,2 0,81,0 0,40,5 7,700,19 7,680,20
*Mangue 3 293,5 293,6 10,48,9 18,71,5 7,320,46 7,360,40
*Mangue 4 31,30,6 30,71,2 27,38,1 149,6 7,930,35 7,760,43
2. Expedio
**Mangue 1 31,22,2 34,60,5 7,820,10
**Mangue 4 26,41,5 3 3,7 7,300,19
* mdia de 3 amostras; **mdia de 5 amostras
Textura pH em Al Ca + Mg Ca Mg P K C
Amostra cmol /c/dm3
mg / dm 3
%
(Expedita) gua
M1P1 Mdia 8,0 nd 14,3 5,3 6,0 21,0 295,0 0,81
M1P2 Arenosa 5,5 nd 9,1 3,0 6,1 25,0 285,0 1,08
M2P1 Mdia 8,4 nd 7,7 3,1 4,6 24,0 345,0 0,28
M2P2 Arenosa 8,6 nd 6,8 1,9 4,9 19,0 250,0 0,24
M3P1 Arenosa 7,7 nd 4,1 2,9 1,2 48,0 61,0 0,09
M4P1 Argilosa 7,3 nd 20,0 8,2 11,8 38,0 780,0 1,00
M4P2 Arenosa 8,1 nd 9,2 1,7 1,5 8,0 120,0 0,07
M1P1: Mangue 1/ Ponto 1; M1P2: Mangue 1/ Ponto 2; M2P1: Mangue 2/ Ponto 1; M2P2: Mangue 2/
Ponto 2; M3P1: Mangue 3/ Ponto 1; M4P1: Mangue 4/ Ponto 1; M4P2: Mangue 4/ Ponto 1
nd: No detectvel
Tambm possvel verificar valores pontuais bem mais elevados nos Mangues 1
(Ponto 1) e Mangue 2 (Ponto 2). importante lembrar que a legislao estabelece
parmetros para os valores mdios de seis (6) amostras coletadas durante o perodo de
um ano, com freqncia bimestral. Como as coletas realizadas no visavam o
monitoramento da contaminao por esgoto domstico, na primeira expedio cada
ponto foi analisado 3 vezes em dois diferentes pontos dentro da rea de mangue e na
segunda etapa as amostras foram coletadas em um mesmo dia, em cinco pontos de cada
estuario. Assim, a utilizao dos parmetros para CF como referncia tem um carter
comparativo e no de classificao.
Nas amostras de sedimento, o nmero de coliformes fecais foi maior que nas
amostras de gua na primeira expedio (Tabelas 3). O Mangue 1 foi o que apresentou
os valores mais elevados e o Mangue 4 foi aquele com os menores valores. O mesmo
perfil de contaminao por coliformes pode ser observado nas amostras de gua, com o
Mangue 1 apresentando valores mais altos.
Mangue 1 Mangue 4
gua Sedimento gua Sedimento
(NMP / 100mL) (NMP / g) (NMP / 100mL) (NMP / g)
Ponto 1 200 <3 1700 23
Ponto 2 <180 <3 200 >1100
Ponto 3 <180 <3 2700 150
Ponto 4 2400000 <3 2700 150
Ponto 5 780 23 2700 150
Valores sombreados: NMP coliformes fecais acima de 2500/100mL (resoluo CONAMA 357)
Mangue 1 Mangue 4
gua Sedimento Rizosfera gua Sedimento Rizosfera
Rm
Ponto 1 7,90 0,07 4,87 0,10 4,75 0,06 4,06 0,04 5,07 0,01 6,76 0,01As
Ponto 2 7,83 0,06 5,48 0,11 6,20 0,08 Rm 4,15 0,02 6,85 0,03 7,24 0,00Rm
Ponto 3 7,54 0,00 4,81 0,22 5,07 0,00 Rm 5,85 0,06 7,19 0,08 4,98 0,05As
Ponto 4 7,65 0,04 4,90 0,02 6,67 0,14Rm 4,44 0,00 5,59 0,11 4,89 0,16As
Ponto 5 7,39 0,00 6,63 0,13 5,81 0,09 Rm 4,2 0,01As 4,34 0,16 6,98 0,00 4,28 0,11Rm
Rm As
Rhizophora mangle; Avicennia schaueriana; * UFC por grama de raiz
Durante a primeira etapa das coletas, em 2003, foram isoladas 168 estirpes
bacterianas a partir dos crescimentos em superfcie das placas de Agar Marine. Na
segunda etapa, em 2004, o nmero de isolados correspondeu a 89 estirpes das diferentes
amostras ambientais analisadas. Essas estirpes foram submetidas a novo isolamento em
placa para garantir a pureza. Durante novo plaqueamento alguns isolados no
apresentaram crescimento aps o tempo de incubao. A caracterizao morfolgica foi
realizada com 92 estirpes da primeira expedio e 69 da segunda.
A Tabela 8 apresenta o nmero de isolados e a amostra ambiental da qual eles se
originaram. Na primeira etapa das coletas as amostras ambientais originadas do Mangue
4 apresentaram um maior nmero de colnias morfologicamente distintas. Na etapa
seguinte, quando as coletas aconteceram nos Mangues 1 e 4 essa maior diversidade
morfolgica colonial foi observada nas placas inoculadas com as amostras do Mangue
1.
Resultados 51
Tabela 8 Nmero de culturas isoladas das amostras ambientais nas quatro reas de
manguezal no litoral do nordeste (Cear, Brasil)
Mangue 1 Mangue 2 Mangue 3 Mangue 4
Amostras
Etapa 1 Etapa 2 Etapa 1 Etapa 1 Etapa 1 Etapa 2
gua 8 19 6 5 12 7
Sedimento 7 9 4 12 6 8
Rizosfera 10 19 5 2 15 9
Total 25 47 15 19 33 24
M1 1,5
M2 1,95
Sedimento
M3 1
M4 1,959
* ndice de Shannon [H = -pi log 2 pi]
Tabela 13 Mdia e desvio padro do logaritmo das contagens padro em placas do nmero
de fungos totais nas amostras de gua, sedimento e rizosfera das espcies Rhizophora mangle
e Avicennia schaueriana em reas de manguezal na regio nordeste (Cear, Brasil / 2004)
Mangue 1 Mangue 4
gua Sedimento Rizosfera gua Sedimento Rizosfera
Rm
Ponto 1 6,290,05 6,230,04 4,380,09 3,710,09 6,380,03 4,360,27Rm
Ponto 2 5,920,00 4,650,02 5,280,06Rm 3,490,02 6,300,11 6,880,01Rm
Ponto 3 5,840,08 4,590,16 4,810,03Rm 3,480,01 4,990,04 5,200,07Rm
Ponto 4 5,680,00 4,840,09 6,180,02Rm 4,570,15 3,770,25 6,000,03Rm
Ponto 5 4,770,10 6,080,00 4,820,03Rm 5,600,08As 4,280,11 3,990,12 5,810,09Rm
Rm
Rhizophora mangle; AsAvicennia schaueriana
amostras de gua variaram de 7,5 x 102 a 1,1 x 105 e nas amostras de sedimento os
valores estimados por grama foram 1,1 x 103 e 1,1 x 107, nos dois pontos. Foram
coletadas amostras dentro de uma fazenda localizada no Mangue 4. Os valores obtidos
por estimativa nas amostras de gua e sedimento foram: 1,5x105 NMP/100mL e 1,1 x
105 NMP/g, 2,4 x 106 NMP/100mL e 4,6 x 106 NMP/100mL e 1,1 x 105 NMP/g para
canal de abastecimento, viveiro e canal de descarga, respectivamente.
Canal de
25,0 nd
abastecimento 5,18 5,04
Viveiro 6,38 25,0 7,0
Canal de descarga 6,66 5,18 25,0 1,0
* no foi coletado; nd, abaixo da capacidade de deteco do equipamento utilizado
No total foram isoladas 181 estirpes crescidas sobre meio agar TCBS, seletivo
para vbrios. Desse total, foram caracterizadas fenotipicamente 163 atravs de provas
bioqumicas e morfolgicas. Na tabela 14 so apresentados as espcies isoladas e o
nmero de isolados em cada ponto amostrado nas quatro reas de manguezal do litoral
cearense. A riqueza do nmero de espcies das estirpes isoladas a partir das placas de
TCBS mostrada na Tabela 15. O maior nmero de estirpes isoladas e identificadas
Resultados 58
Amostras Ambientes H
M1P1 2,489
M1P2 1,705
M2P1 2,902
gua M2P2 2,656
M3P1 2,059
M4P1 1,842
M4P2 -
M1P1 0,722
M1P2 1,664
M2P1 2,252
Sedimento M2P2 2,419
M3P1 0,811
M4P1 2,252
M4P2 1
* ndice de Shannon [H = -pi log 2 pi]
gua
12
Sedimento
10
N de espcies de Vibrio
8
identificadas
0
Ponto 1 Ponto 2 Ponto 1 Ponto 2 Ponto 1 Ponto 1 Ponto 2
Amostras Ambientes H
CA 0,811
gua VV 2,948
CD 1
CA 1,585
Sedimento
CD 1,842
* ndice de Shannon [H = -pi log 2 pi]; CA: canal de abastecimento; VV: viveiro;
CD: canal de descarga
Resultados 62
Figura 10 Perfis de DGGE dos fragmentos de 16S rDNA obtidos das amostras de
gua de quatro reas de manguezal e de trs pontos dentro de uma fazenda de
carcinicultura (Cear, Brasil). Linhas: CD, canal de descarga; VV, viveiro; CA, canal de
abastecimento; M4, Mangue 4; M3; Mangue 3; M2, Mangue 2; M1, Mangue 1. As
letras a e b indicam as rplicas de uma mesma amostra.
Resultados 65
A partir dos perfis de bandas dos gis de DGGE foram elaborados dendrogramas
para cada um dos perfis. Na Figura 12a esto os ndices de similaridade dos perfis de
16S rDNA entre as amostras de gua dos manguezais e nos pontos dentro da fazenda de
cultivo de camaro. Os perfis dos mangues receptores de efluentes agruparam com
similaridade mnima em torno de 60%.
A Figura 12b diz respeito ao dendrograma mostrando o perfil de similaridade
entre as amostras de gua de diferentes ambientes baseado no perfil de DGGE dos
amplicons obtidos com iniciadores especficos para o gnero Vibrio. Nota-se uma
variao dos perfis de comunidade bacteriana entre as rplicas do ponto 2 no Mangue 4
(M4P2) que ficou em torno de 75%. Nos pontos amostrados dentro da fazenda de
cultivo, os ambientes viveiro (VV) e canal de descarga (CD) apresentaram similaridade
em torno de 48%, enquanto que o efluente do canal de abastecimento (CA) da fazenda,
que capta gua diretamente do rio, mostrou pouca similaridade com esses dois outros
pontos. A amostra CA agrupou com Mangue 4 no ponto 2, que o ponto prximo
fazenda. Existiu uma estabilidade entre as rplicas, a menor similaridade encontrada foi
no Ponto 2 do Mangue 4 (M4-P2) que ficou em torno de 80%. As amostras do Mangue
4 mostraram similaridade abaixo de 50% em relao aos outros manguezais.
A maioria das amostras com maior contato com as guas ocenicas (M2P1,
M3P1 e M4P1) agruparam, juntamente com as amostras VV, com similaridade de 55%.
Entre as rplicas a menor similaridade foi apresentada nas amostras CA, CD e M4-P2.
Resultados 67
Tabela 19- Comparao entre o nmero de bandas, nos gis de DGGE, obtidos com os
amplicons das amostras de gua de ambientes de manguezal e de fazenda de camaro e
o nmero de espcies isoladas dessas amostras ambientais.
Nmero de
Nmero de Bandas no Gel
espcies
(mdia)
Amostras isoladas
iniciadores
16S rDNA Vibrios
Vibrios
CD 19 13 5
VV 19 12 8
CA 7 10 2
M4 P1 12 12 4
M4 P2 24 16 1
M3 P1 17 10 5
M2 P1 8 12 11
M2 P2 18 11 7
M1 P1 23 10 8
M1 P2 17 11 8
CD: canal de descarga; VV: viveiro; CA: canal de abastecimento
Discusso 69
7 DISCUSSO
de gua da rea de mangue com as reas costeiras adjacentes, que est relacionada com
a natureza hidrodinmica do manguezal, exporta as guas do manguezal eutrofizadas e
ricas em nutrientes aumentando a produtividade costeira e dispersando as bactrias
patognicas em reas mais amplas. Tambm parece que a atividade de outros
microrganismos alm de alguns fatores ambientais tal como salinidade e pH, limitam a
abundncia e distribuio de algumas comunidades aliengenas como o caso de
coliformes fecais. Wu (1993) encontrou microrganismos nativos, como actinomicetos,
isolados de floresta de mangue na Tailndia produzindo antibiticos que controlavam a
ocorrncia de bactrias aliengenas como os coliformes fecais, indicando que os
manguezais possuem muitos tipos de microrganismos que podem funcionar como
agentes de limpeza do descartes de esgotos lanados nesses ambientes.
Comparativamente, a presena de CF nas amostras de sedimento foi bem maior
do que na gua do rio. A capacidade de agregao e multiplicao de bactrias do grupo
coliforme em partculas de sedimento j foi anteriormente citado (Anderson et al.,
2005). As caractersticas granulomtricas do sedimento tambm parecem ter influncia
sobre a ocorrncia desse fenmeno.
A multiplicao de estirpes de bactrias fecais indicadoras (coliformes fecais e
enterococos) ambientalmente adaptadas foi apresentada por Jeong et al. (2005) como
uma fonte no pontual de poluio da coluna dgua em uma baa no sudeste da
Califrnia.
Al-Sayed et al. (2005) mostraram uma correlao positiva entre as altas
concentraes de E.coli nas guas e no sedimento em um manguezal de uma regio
subtropical. Os ciclos das mars tambm mostraram influenciar os nveis de E. coli.
Essa influncia explicada porque durante a mar alta o sedimento anteriormente
drenado lavado pelas guas do rio. Experimentos em laboratrio confirmaram que
essa bactria fecal capaz de se multiplicar em vrias ordens de magnitude agregada ao
sedimento drenado. Os autores sugeriram a necessidade de utilizao de outras bactrias
como indicadoras de poluio fecal caso seja confirmada, atravs de pesquisas, a
influncia dos perodos de alternncia do contato do solo com a gua e das propriedades
granulomtricas desse solo sobre a capacidade de multiplicao da E. coli em ambientes
que sofrem ao das mars.
Discusso 73
Nota-se que o Mangue 1, utilizado neste estudo como controle negativo para a
existncia de atividade de carcinicultura, apresentou ndice de contaminao por esgoto
domstico significativamente maior que os Mangues 3 e 4. O rio Pacoti uma rea de
preservao permanente mas devido ao fato do seu curso estar dentro da cidade de
Fortaleza, ele acaba sendo o destino final de uma quantidade considervel de esgoto
domstico no tratado. A presena de moradias irregulares e sem infra-estrutura ao
longo do rio explica esses valores elevados de contaminao fecal.
Foi estabelecido por Alongi et al. (1993) que a magnitude de matria orgnica
exportada das reas de mangue para os oceanos pode depender de processos geofsicos.
provvel ento que o tamanho do ecossistema manguezal, a freqncia e durao das
mars, a freqncia de volume de chuvas e o influxo de efluentes tambm influenciem a
diversidade e abundncia das populaes microbianas presentes nessas reas.
A contagem de microrganismos heterotrficos tambm pode indicar o nvel de
degradao do ambiente aqutico, uma vez que esses organismos so freqentemente
associados com matria orgnica (Callisto et al., 2004). difcil estabelecer uma
diversidade microbiana estuarina por causa da dinmica nesses ambientes e a
dificuldade de distinguir populaes estuarinas e aquelas que so carreadas das reas
adjacentes. Vrios estudos descreveram a diversidade microbiana nos esturios e alguns
demonstraram como as comunidades de gua doce e marinha se misturam ao longo dos
gradientes estuarinos. Entretanto, existem poucos trabalhos que forneam evidncias de
uma comunidade bacterioplanctonica estuarina nica (Crump et al., 2004).
Nas contagens de heterotrficos totais nas amostras de sedimento tambm foram
verificados nmeros mais elevados nos manguezais Mangue 1 e Mangue 2.
As contagens de BHT nas amostras do Mangue 4 foram uma ordem de grandeza
maior que as contagens em amostras de gua no Mangue 1. Os nmeros mdios das
contagens de bactrias heterotrficas foram bem prximos entre os quatro manguezais
no primeiro momento das coletas. Um ano depois, os as contagens bacterianas na gua
do Mangue 1 foram maiores que aquelas do Mangue 4.
Acredita-se que vrios fatores biticos e abiticos podem agir conjuntamente
estruturando as comunidades fitoplanctonicas em sucesses sazonais. As alteraes nos
fatores abiticos tal como regime de luz, temperatura e/ou outro distrbio fsico
determinariam os limites dentro dos quais os fatores abiticos (como competio,
Discusso 74
na qumica dos sedimentos ocorreram em locais prximos aos cultivos. Karakassi et al.
(2000) relataram que a alterao na qumica do solo ocorreu em locais prximos s
fazendas de aquacultura. A biomassa microbiana no sedimento nessas reas aumentou
em uma ordem de magnitude.
As comunidades estabelecidas pela CH no constituem um termo definido
taxonomicamente, porm normalmente consistem mais precisamente de uma mistura
heterognea de diferentes taxa bacterianos (Norton e LeChevallier, 2000). A
caracterstica unificante das bactrias em CH sua capacidade geral de crescimento (e
formao de colnias visveis) sobre compostos orgnicos com facilidade varivel para
degradao sob condies especificas de temperatura e tempo de incubao (Szewzyk et
al., 2000).
A contagem de heterotrficos totais nos sedimentos pareceu no sofrer
influncia das caractersticas granulomtricas. O mangue 4, receptor de efluentes de
carcinicultura, apresentou contagens mdias em torno de 1 ciclo logartmico maior do
que o Mangue 1, controle negativo da presena dessa atividade. A posio do ponto de
coleta no manguezal, mais prximo (Ponto 1) ou mais afastado (Ponto 2) do mar, parece
no ter influenciado os resultados das contagens. A comunidade de bactrias
heterotrficas em esturios bastante diversa. Segundo Bano et al. (1997), essa
comunidade rica em energia e bastante ativa se apresentando agregada a partculas e
/ou na forma de vida livre.
A presena de fungos e leveduras totais na coluna dgua, agregadas ao
sedimento e nas rizosferas foi determinada atravs de contagens em placa. O valor
mdio das contagens de fungos no manguezal controle (Mangue 1) foi cerca de duas
ordens de magnitude maior do que nas guas do rio Jaguaribe (Mangue 4). Isso poderia
ser um reflexo da temperatura e salinidade das guas durante as coletas.
As contagens mais altas de fungos no Mangue 1 podem ter uma correlao com
o aporte de esgoto domstico que ficou comprovado pela colimetria dessas guas.
Alguns autores relacionam a presena de CF e espcies especficas de fungos em corpos
dgua. O monitoramento dos nveis de contaminao na gua, geralmente, feito
atravs de indicadores de poluio fecal representado por estimativas do nmero de
bactrias do grupo coliforme (Noble et al., 2004). As bactrias aquticas e fungos
utilizam matria orgnica dissolvida, multiplicam-se rapidamente em condies
Discusso 77
Penaeus monodon (Austin et al., 2003). Gmez-Gil et al. (2004) chamam a ateno para
o fato de que o V. harveyii e V. campbelli so praticamente indistinguveis
fenotipicamente e que estirpes identificadas como V. harveyii na verdade se mostraram
V. campbelli em hibridizao DNA-DNA. Isso coloca a espcie V. campbelli como um
importante patgeno para camares. Foi verificada tambm a presena de espcie do
chamado grupo vbrios luminescentes (V. fisheri) que j foram relacionados a casos
de doenas em peixes e crustceos. As espcies de interesse para a sade humana como
V. cholerae, V. vulnificus e V. parahaemolyticus foram encontradas nas guas e
sedimento nas reas de manguezal estudadas.
Alm de possuir alguns patgenos importantes para o homem e animais
aquticos, o gnero Vibrio tambm apresenta espcies envolvidas na ciclagem de
nutrientes como o V. harveyii. Vbrios so capazes de quebrar quitina, e algumas
espcies so capazes de degradar hidrocarbonetos aromticos policclicos que so
extremamente txicos para o meio ambiente (Thompson et al., 2004a). O prprio V.
harveyii um importante patgeno de camares cultivados e que j foi responsvel por
srias perdas na produo nas Filipinas e em outros pases do sudeste asitico
(Grslund, 2001).
amplamente reconhecido que a classificao das espcies de Vibrio difcil
como uma conseqncia da grande variabilidade entre as estirpes dependendo das
adaptaes a diferentes condies ambientais (Schintu et al., 1994). Porm a
distribuio dos vbrios halofilicos poderia ser completamente diferente com respeito as
diferentes condies ambientais.
A escala espacial dos efeitos dos efluentes de aquacultura dependente do
nmero de fatores incluindo a rea usada, o grau de intensidade dos cultivos, o nvel de
produo e o perfil do corpo dgua (Kisand e Wikner, 2003). Essa extenso alcanada
pelos efluentes de cultivo nos rios receptores pode foi verificada por Guo e Li (2003)
em um tipo de cultivo em redes chamadas gaiolas em um lago na China. Esses
autores registraram o impacto dos resduos de rao, atravs da eutrofizao dos
sedimentos, at 20 metros fora da rea de cultivo. A reduo gradual no contedo de
nitrognio nos sedimentos e partculas, com o distanciamento das fazendas.
Os mtodos independentes de cultivo so propostos para gerar um perfil mais
preciso da riqueza e diversidade das comunidades bacterianas do que aquele
Discusso 82
mars so alguns fatores que podem afetar a riqueza e diversidade dessa comunidade
microbiana.
Outros estudos encontraram a salinidade, contaminao com metais pesados,
estresse de temperatura, pH influenciando a estrutura e funo de comunidades
procariticas em diversos ambientes. A maioria desses estudos avalia a resistncia
estrutura e ou funcionalidade da comunidade a determinado tipo de alterao ou
contaminao. Poucos consideram a resilincia, isto , o potencial da comunidade em
retornar condio anterior passada a perturbao (Langenhender, 2005).
Tambm deve ser considerado que na interpretao da ecologia e evoluo
microbiana atravs das seqncias de 16S rRNA, a existncia de muitas bactrias que
apresentam mltiplos e heterogneos operons rRNA. A heterogeneidade de seqncias
de 16rRNA dentro de um nico genoma cria um problema significante para a anlise
independente de cultivo da comunidade microbiana uma vez que ela pode levar a uma
sobrestimativa da diversidade bacteriana baseada em alvos do 16S rRNA (Acinas et al.,
2004). O verso dessa moeda o fato de que nem sempre uma banda em um gel de
DGGE representa uma nica espcie. Na interpretao do perfil de bandas que
aparecem no gel de DGGE considera-se que cada banda observada no gel representa
uma espcie de microrganismo. Entretanto, sabe-se que bandas de mais de uma espcie
da comunidade microbiana podem estar escondidas atrs de uma nica banda, e desta
forma subestimar a diversidade microbiana (Heuer et al., 2001).
A avaliao da diversidade de ambientes atravs da utilizao de iniciadores
para genes de grupos especficos dentro da comunidade bacteriana parece ser uma
alternativa vivel e bem mais esclarecedora.
No gel especfico para o grupo vbrios ficou evidente uma diferena entre a
diversidade dos ambientes receptores dos efluentes da carcinicultura. possvel notar
uma tendncia a agrupamento entre as amostras do rio Jaguaribe (Mangue 4) que
apresenta o maior tempo de funcionamento da atividade de carcinicultura. A
similaridade entre essas amostras e a maioria das amostras do manguezal controle
(Mangue 1) ficou abaixo de 45%. Entre os manguezais com atividade de carcinicultura
o ndice de similaridade foi mais alto, em torno de 50%. Esse um ndice considervel
se levarmos em conta todas as variveis afetando esse tipo de ambiente, principalmente
o fluxo de mars.
Discusso 84
Devemos considerar nesse caso a especificidade dos primers e o fato de que uma
grande parte das espcies de Vibrio possui dois cromossomos. A especificidade dos
iniciadores tambm um fator importante a serem considerados na anlise dos perfis
observados nos gis.
possvel tambm que essa tcnica de DGGE no tenha sido capaz de detectar
as alteraes acontecidas na comunidade dos manguezais. Como j foi dito
anteriormente os efluentes de carcinicultura contm uma alta concentrao de NH4+ e
nitrognio orgnico representando um aporte significativo de nutrientes no ambiente do
manguezal. A eutrofizao do ambiente pela recepo das descargas dos viveiros no
representa ento um impacto drstico como seria um derramamento de petrleo.
Como o DGGE detecta principalmente os membros das comunidades
dominantes (Muyzer et al., 1993) possvel que as alteraes nessa comunidade
aconteam em um nvel no detectvel por essa tcnica.
Langenhender (2005) especulou que as alteraes na composio da comunidade
bacteriana sofrendo baixo regime de distrbio ocorreriam no nvel da microdiversidade,
isto , entre os taxas proximamente relacionados que presumivelmente so
funcionalmente equivalentes enquanto que as mudanas filogenticas maiores poderiam
ser visualizadas depois de eventos de impactos mais drsticos. Em oposio a essa
hiptese, Jasper e Overmann (2004) mostraram que taxa bem prximos ou at com
seqncias idnticas de 16S rRNA podem ser funcionalmente diferentes e
necessariamente no pertencerem ao mesmo ecotipo.
importante tambm chamar a ateno para o perfil de diversidade encontrado
nos pontos dentro da fazenda de cultivo. A amostra de gua do canal de descarga foi a
que apresentou os menores percentuais de similaridade com as outras amostras. Apenas
com a amostra do viveiro que a similaridade se mostrou um pouco maior que 50%.
Seguindo o procedimento de descarte de efluentes nas fazendas, esse canal de descarga
utilizado como um ambiente para estabilizao e precipitao de slidos suspensos
dos efluentes que vem do viveiro. A gua residual permanece algum tempo nesse canal
antes de ser lanada no corpo dgua.
Em estudo anterior de Costanzo et al. (2004) avaliando a influncia e
distribuio dos efluentes de viveiros de camaro em uma rea de manguezal no
nordeste da Austrlia, ficou evidente que o ambiente receptor foi influenciado como
Discusso 85
8 CONCLUSES
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