Guia Laboratorio Clinico

UNIVERSIDAD PERUANA LOS ANDES
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL DE OBSTETRICIA
MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

LABORATORIO CLINICO
JAVIER ALIAGA SALGUERO
jaliaga@mail.upla.edu.pe
HUANCAYO PERU
2016
Javier Aliaga Salguero Laboratorio clnico

PRESENTACION
El curso de Laboratorio clnico, corresponde al rea de formacin disciplinar del plan de

estudios del IV ciclo de la Escuela Profesional de Obstetricia de la Facultad de
Ciencias de la Salud de la UPLA.
Se pretende que los estudiantes se encuentren capacitados en la Interpretacin y

Anlisis de pruebas bsicas de laboratorio clnico de hematologa, bioqumica clnica,
inmunologa y microbiologa.
El curso est diseado para que el alumno logre la correlacin terico-prctico y

aborda la metodologa analtica manual y semiautomatizada que permite el estudio de
los distintos elementos formes de la sangre y el sistema hemosttico. A su vez se hace
hincapi en las medidas de bioseguridad y en el manejo de residuos biolgico-
infecciosos, desarrollo de habilidades de ejecucin y de pensamiento, fomentando el
trabajo individual y colectivo.
Finalmente en la evaluacin de los conocimientos adquiridos, se considera la

realizacin de prcticas, participacin, entrega de monografas y examen oral.
EL AUTOR

RECOMENDACIONES
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO CLINICO
La Bioseguridad es el conjunto de normas y procedimientos para obtener una situacin

carente de riesgos o con riesgos limitados.
DECALOGO DE BIOSEGUIRDAD:
1) Prohibido usar el celular, comer, fumar, beber o almacenar comidas o cualquier

objeto de uso personal dentro del laboratorio.
2) Usar ropa protectora de trabajo como mandil, mascarillas, guantes (de ltex) la
misma que debe ser retirada antes de abandonar el laboratorio. Botas y gorra
en casos de exposicin a microorganismos de alta peligrosidad.
3) Cambio inmediato de los guantes en caso de rotura y lavado de manos.
4) No tocarse la boca ni los ojos con las manos enguantadas
5) Manejo adecuados de los objetos corto punzante. Una vez utilizados se deben
almacenar en recipientes rgidos y eliminarse luego de ser descontaminados.
6) No pipetear con la boca. Debe utilizarse los pipeteadores automticos.
7) Descontaminar las superficies de trabajo una vez terminado el trabajo diario. Se

recomienda el uso de hipoclorito de sodio al 10%
8) Manejo adecuado de los desechos desde el lugar de origen y realizar

tratamiento adecuado especialmente de los infecciosos.
9) Los desechos de los fluidos corporales pueden eliminarse por las caeras
habituales una vez que hayan sido descontaminados.
10) Lavarse las manos con abundante agua y jabn luego de haber terminado el
trabajo diario.

PRACTICA N 01
TOMA DE MUESTRA
FUNDAMENTO TERICO
La relativa facilidad con que se obtiene la sangre venosa hace de esta tcnica el principal
mtodo de obtencin de sangre en los laboratorios de anlisis clnicos. A partir de la sangre sin
anticoagulante se obtiene suero, si la sangre contiene anticoagulante, se obtiene plasma. Del
plasma forma parte el fibringeno, sustancia de la que carece el suero.
Objetivos:
1. Conocer la tcnica para la obtencin de muestras de sangre como medio para

mantener la integridad del profesional de salud y la del paciente
2. Adiestramiento adecuado para el manejo de instrumentos necesarios en la toma de

muestras sanguneas
3. Aplicar las precauciones universales de bioseguridad en el laboratorio con respecto al

manejo de lquidos biolgicos y material infeccioso
4. Conocer los usos de los diferentes anticoagulantes empleados en el laboratorio
MATERIALES
- Torniquete
- Algodn
- Alcohol antisptico (isoproplico al 70%)
- Jeringuillas
- Sistema vacutainer: capsula, tubos alvaco, agujas de toma mltiple
- Lancetas
- Tubos capilares heparinizados
- Plastilina
TCNICA DE LA PUNCIN VENOSA
1. Se identifica al paciente comprobando que la solicitud de exmenes corresponda al

mismo
2. Si se solicita una muestra en ayunas, debe comprobarse que efectivamente el paciente

no ha ingerido alimentos
3. Hay que dirigirse al paciente e informarle sobre el procedimiento a que va a ser

sometido. Se debe tranquilizarle, eliminando en lo posible su tensin.
4. Se ha de colocar adecuadamente al paciente, segn ste se encuentre sentado, o en

decbito prono, para tener acceso fcil y cmodo a la fosa antecubital.

5. Hay que preparar todo el material, incluidos los tubos para recogida de la muestra, el
torniquete, los objetos que se emplean para limpiar la piel, las jeringas, cuando sea
necesario, la aguja estril para extraccin de sangre y dispositivo utilizado para fijar la
aguja al tubo de extraccin al vaco.
6. Se solicita al paciente que cierre el puo para que las venas resulten ms palpables.
7. Se selecciona una vena adecuada para la puncin. Se prefieren las venas de la fosa
ante-cubital, en particular la cubital interna y la ceflica. Tambin pueden utilizarse las
venas de la mueca, el tobillo y la mano. Si existiera ya un catter intravenoso en un
brazo, se utilizar el otro para la extraccin de la muestra.
8. Preparar la cpsula insertando la aguja pero dejando un poco flojo la capucha de la
parte externa de la misma para retirarlo al momento de la puncin.
9. Se aplica un torniquete varios centmetros por encima de la zona de puncin

(aproximadamente a cuatro dedos sobre el doblez del brazo). No hay que dejar nunca
el torniquete ms de 1 minuto. En casos excepcionales no debe usarse el torniquete,
por ejemplo cuando en el pedido est el Calcio.
10. Se limpia la zona de la venipuncin con una torunda embebida en solucin en alcohol
antisptico. Se comienza en el punto de la puncin y se prosigue la limpieza hacia fuera
siguiendo un movimiento en espiral. Se deje que la zona se seque y no se toca con
ningn objeto que no haya sido esterilizado previamente.
11. Se fija firmemente la vena tanto por encima como por debajo del lugar de puncin, con
la ayuda de los dedos pulgar y medio, o ndice y pulgar.
12. Se realiza la venipuncin.
a) Se penetra a travs de la piel con la aguja formando un ngulo de aproximadamente

15 con el brazo y con el bisel hacia arriba. Se sigue la direccin de la vena con la
aguja.
b) Se introduce la aguja con suavidad pero con la suficiente rapidez para reducir las
molestias del paciente. No hay que enterrar la aguja.
c) Si se utiliza una jeringa, se tira hacia atrs del mbolo, con tensin lenta y uniforme a
medida que la sangre va fluyendo en su interior. No debe realizarse este movimiento
con excesiva rapidez, ya que podra hemolizarse la sangre o colapsarse la vena.
d) Si se utiliza un tubo al vaco, en cuanto la aguja haya penetrado en la vena, se

dirigir el tubo todo lo posible hacia delante en el dispositivo de sujecin. Al mismo
tiempo se sujeta tenuemente la aguja en su lugar. Una vez que haya llenado el tubo,
se retira, cogindolo por su extremo y tirando suavemente de l.
13. Cuando la sangre comience a fluir, se suelta el torniquete.
14. Una vez que se haya extrado toda la muestra, hay que indicar al paciente que relaje el
puo y que no bombee con la mano.
15. Se coloca suavemente sobre el punto de la puncin una bola de algodn estril. Se
extrae la aguja y a continuacin se ejerce presin sobre la zona.
16. Se venda el brazo. En general es suficiente una tira de esparadrapo sobre la bola de
algodn, para detener la hemorragia.

17. Se mezclan los tubos con el anticoagulante. Si la muestra ha sido extrada con jeringa,
se transferir la sangre a los tubos correspondientes tomando las debidas precauciones
para evitar la hemlisis de las muestras.
18. Se comprobar el estado del paciente; por ejemplo, si se ha mareado y si la hemorragia

est controlada.
19. Se elimina el material contaminado: agujas, jeringas, algodones, etc.
20. Se marcan las etiquetas y se registra la hora en que se extrajeron las muestras.
21. Se envan los tubos de sangre para su anlisis a los correspondientes departamentos
del laboratorio. Si es preciso, se hace constar la hora en la solicitud.
PUNCIN CAPILAR
1. Tener todo el material en perfecto orden: algodn, alcohol, lancetas, tubos capilares y
plastilina.
2. Pedir al paciente que se frote el dedo pulgar hasta que obtenga una buena irrigacin de
la zona de puncin.
3. Desinfectar la zona y secarla con otro algodn libre de alcohol
4. Sacar la lanceta y realizar la puncin de forma rpida y firme.
5. Deshechar la primera gota para evitar contaminacin con restos de alcohol.
6. Colocar el capilar en la zona e ir llenndolo hasta las tres cuartas partes del tubo.
7. Retirarlo de la zona y colocar un algodn con poco alcohol y solicitar al paciente que se
sostenga por unos minutos para que deje de fluir la sangre.
8. El capilar sellarlo con plastilina y colocarlo en el lugar designado para ese paciente.
ANTICOAGULANTES UTILIZADOS CON MS FRECUENCIA
EDTA (tapn lila): Tubo estril con anticoagulante EDTA: sal de cido etileno diamina
tetractico di o tripotasica o di sdica, concentracin: 1,2 a 2,0 mg/ml de sangre (4,1 a
6,8mmol/l de sangre) basado en EDTA anhidro. Para uso en hematologa.
Citrato de sodio (tapn azul 1/9 y tapn negro 1/4): citrato trisdico con 0,100 a 0,136 mol/l
de cido ctrico. Se recomienda 0,105 mol/l para lograr la estandarizacin recomendada por la
WHO para que quede a 3,2%. Se usa para pruebas de coagulacin (TP, TTP, fibringeno),
utilizar l parte de citrato y 9 de sangre entera.
Tapn rojo: Tuvo estril sin anticoagulantes ni aditivos ni geles separadores. Para obtener
suero.
Los tapones de colores con una banda Gris agregada indican que el tubo corresponde a uno
los anteriores y que adems contiene gel separador de suero o plasma
TRABAJO EN CLASE:
Interpretacin de resultados

PRACTICA N 02
HEMOGRAMA
INTRODUCCIN
El Hemograma es el anlisis de una muestra sangunea obtenida por venipuncin que mide en
forma global y en porcentajes las tres series bsicas de la sangre que son: Hemates, leucocitos
y plaquetas evaluando nmero, morfologa, tamao.
Los parmetros a estudiar de un Hemograma completo son: Hemates, Leucocitos,

hemoglobina, hematocrito, VCM, HCM, RDW-CV %, Plaquetas, y el recuento diferencial en 100
clulas en lmina de la serie blanca como tambin la observacin de la serie roja y plaquetaria.
El xito de la calidad del resultado y su correccin clnica depender del cumplimiento de los
protocolos como: En la fase pre-analtica, fase analtica y post-analtica.
OBJETIVOS
Al finalizar la prctica el alumno podr analizar e interpretar los diferentes parmetros del
hemograma completo y correlacionarlo clnicamente.
PROCEDIMIENTO PRCTICO
Obtencin de la muestra de sangre:
La muestra de sangre para este examen se coleccionara en un tubo con anticoagulante (EDTA
K2 K3 y Heparina).
PROTOCOLO DE TRABAJO:
Colocar el tubo en el equipo automatizado.

Tomar una lmina portaobjeto limpia colocar 20 40 ul de la muestra y con otra lmina
biselada realizar la extensin en ngulo de 45
El grosor del extendido vara segn el ngulo de extensin, si es mayor ser ms
gruesa y si es menor, ms delgada lo que interferir en la lectura.
La coloracin ms usada es la coloracin Wright.
Realizar la observacin microscpica, inicindose de menor aumento (40X) y luego con
objetivo de inmersin (100X).

RECUENTO DIFERENCIAL
SERIE BLANCA LEUCOCITOS
Hay cinco tipos principales que se diferencian por el tamao, forma del ncleo y el color
de los grnulos del citoplasma.
La proporcin o porcentaje de cada tipo de leucocitos es importante para el diagnstico
la se denomina: Frmula leucocitaria.
Para trabajar esta frmula se cuentan 100 clulas y se anota el nmero que se ha
encontrado de cada tipo de clulas.
Los valores normales de los distintos leucocitos en su proporcin relativa ser el
resultado porcentual y convertidos a cifras absolutas por mm3 como:
Formula leucocitaria
Porcentual Absoluto
Neutrfilos segmentados 55 - 65 % 1.800 7.500
Neutrfilos cayado 3-5% 150 - 400
Eosinfilos 0,5 - 4 % < 500
Basfilos 0,5 - 1 % < 200
Monocitos 4-8% 100 - 800
Linfocitos 25 - 35 % 1.500 - 4.000
SERIE ROJA ERITROCITOS
En las anemias, los eritrocitos pueden sufrir alteraciones:
Estructurales en Forma ( Poiquilocitosis)

Estructurales en Tamao ( Anisocitosis)
Cromticas: Hipocroma, Hipercroma y policromatoflia).
Inclusiones anormales:
Anillos de Cabot
Hemoparasitos
Punteado basfilo
Observacin de la Lmina: La observacin se debe realizar en la parte final del cuerpo y

comienzos de la cola.
Evaluacin de casos clnicos

PRCTICA N 03
DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA, HEMATOCRITO, VSG,

TIEMPO DE COAGULACION Y SANGRIA
OBJETIVO
El alumno conocer y realizar los mtodos bsicos de la frmula roja para aprender a
calcular los ndices eritrocitarios.
1. DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA
1.1 EL MTODO DE CIANOMETAHEMOGLOBINA.
En la Citometra hemtica una de las determinaciones es la hemoglobina la cual se

expresa en g/dl.
El mtodo de la Cianometahemoglobina es el ms empleado, debido a que es

colorimtrico, es barato y permite medir todas las hemoglobinas presentes en la sangre
(Hb-O2, Hb-CO2, Hb-H a excepcin de la Hb-S).
FUNDAMENTO.
Para convertir la Hb-O2 en Hb-CN se utiliza el Reactivo de Drabkin, el cual contiene

ferricianuro de potasio K3Fe(CN)6 que convierte el Fe++ en Fe+++ convirtindose en
metahemoglobina. Luego el KCN del mismo reactivo se combina para formar la
Cianometahemoglobina, cuyo pico mximo de absorcin es de 540nm con un rango de 530
a 550 nm.
MATERIAL
2 Tubos de ensayo de 13x100 mm por equipo
1 Pipeta de Salh por equipo
2 Pipeta de 5 ml por equipo
1 Micropipeteador o boquilla por equipo.
1 Perilla por equipo.
1 Espectrofotmetro por seccin.
REACTIVOS:
10ml de reactivo de Drabkin por equipo
PROCEDIMIENTO:

Se marcan 2 tubos de ensayo, uno como blanco (B) y otro como problema (P) y se
colocan 5 ml. del Reactivo de Drabkin en cada uno.
Con la pipeta de Shali, se toma 0.02 ml (20l) de sangre limpiando perfectamente la
pipeta por fuera con un segmento de papel desechable humedecido con solucin
salina, se pasan al tubo, lavando la pipeta 2 o 3 veces, por aspiracin y expulsin del
reactivo dentro de la misma.
Se mezcla vigorosamente con cuidado. Dejar reposar la mezcla por 5 minutos.
Pasar a las celdas.
Ajustar el espectrofotmetro a cero de absorbancia con el blanco de reactivo (B) a 540
nm.
Ley de Beer A= a.b.c.
[m] = Abs m [St]
Abs St
[m] = concentracin de la muestra
Abs m = Absorbancia de la muestra
c St = concentracin del estandard
Abs St = Absorbancia del estndar
CURVA DE CALIBRACIN.
La curva de calibracin se realiza de la siguiente manera:
a) Marca 5 tubos de ensayo de 13x100 mm: Blanco (B), 5, 10, 15, 20 g/dl
b) Pipetear con precisin, de la solucin valorada de cianometahemoglobina (St) de

concentracin de 20 g/dl y del Reactivo de Drabkin, en cada uno de los tubos
correspondientes y mezclar bien.
c) Medir la absorbancia de cada dilucin en el espectrofotmetro a 540 nm, contra el blanco (B).
d) Graficar en papel milimtrico, en las ordenadas (Y) las absorbancias y en las abscisas (X) las
concentraciones.
e) Trazar una lnea perpendicular que parta del vrtice (O) y toque el mayor nmero de puntos.
f) Extrapola las absorbancias de las muestras problema.
PRECAUCIONES.
1. Se debe de utilizar guantes para la proteccin del estudiante.
2. El reactivo de Drabkin contiene cianuro, es necesario emplear la perilla auxiliar, prohibido

pipetear con la boca.
3. Es muy importante que las mediciones de las soluciones sean exactas, eso favorecer que
la lnea perpendicular pase por todos los puntos de interseccin.
4. Verificar antes de iniciar, que el espectrofotmetro est prendido, se encuentre ajustado a

CERO de absorbancia en la longitud de onda de 540 nm.

VENTAJAS.
1. El mtodo de Cianometahemoglobina posee ciertas ventajas, ya que la mayora de las

formas de hemoglobina que se puedan encontrar en la sangre (a excepcin de Hb S) se
convierten a cianometahemoglobina con la adicin del reactivo de Drabkin.
2. La mxima absorcin de la cianometahemoglobina a 540 nm, permite la utilizacin de

fotmetros con rangos de lectura cortos.
DESVENTAJAS.
1. La nica desventaja es que se trabaja con pequeos volmenes de sangre

(20 l) por lo que aumenta la probabilidad de error.
VALORES DE REFERENCIA.
HOMBRES 15 a 20 g/dl 9.3 a 12.4 mmol/l
MUJERES 12.5 a 16.5 g/dl 7.5 a 10.33 mmol/l
2. MTODO DE WINTROBE PARA SEDIMENTACIN GLOBULAR
Esta sencilla prueba se emplea universalmente como un indicador de la presencia de

enfermedades activas, ya que permite conocer las caractersticas fsicas del ambiente en el
que se encuentran los eritrocitos.
FUNDAMENTO:
Consiste en dejar que la sangre sedimente por la accin de la gravedad formando un

paquete ms o menos compacto separado del plasma, ello depende de varios factores como
son:
a. Factores plasmticos: En donde los niveles elevados en la concentracin de fibringeno

y/o de globulinas originan la disminucin del potencial Z de los eritrocitos, favoreciendo la
formacin del fenmeno de Rouleaux.
b. Factores eritrocitarios: Cuando aumenta tamao de los eritrocitos (macrocitos), se

sedimentan ms rpido que los de tamao normal (normocitos) o los de menor tamao
(microcitos).
c. En los pacientes con anemia se disminuye la relacin eritrocitos/plasma, lo que favorece

el apilamiento de los eritrocitos y el aumento de la VSG.
MATERIAL.
1 Pipeta Pasteur por equipo
1 Tubo de Wintrobe por equipo
1 Soporte para tubos de Wintrobe por seccin
PROCEDIMIENTO.

1. Mezclar bien el tubo que contiene la sangre.
2. Llenar la pipeta Pasteur de sangre, despus introducir la punta hasta el fondo del tubo de
Wintrobe e ir vistiendo lentamente evitando la formacin de burbujas, hasta llegar a la marca
de 0.
3. Colocar el tubo verticalmente en la gradilla (fijarse que este nivelada) durante una hora.
4. Leer la altura de la columna de plasma que aparece en la parte superior, en la escala que va
del 0 al 10 cada raya equivale a un mm y se reporta en mm/hora.
PRECAUCIONES.
a) El tubo de Wintrobe deber llenarse desde el fondo hasta la marca cero, evitando la
formacin de burbujas.
b) Durante el proceso de reposo deber verificarse que se encuentre exactamente vertical, de lo

contrario el valor determinado ser errneo.
c) Verificar que el reposo del tubo de Wintrobe est exento de vibraciones.
d) La sangre debe de estar perfectamente mezclada para evitar un cambio en la relacin,

eritrocitos-plasma.
VENTAJAS.
a) Pequea cantidad de muestra.
b) Es sencillo.
c) Puede calcularse el valor del hematocrito con la misma preparacin despus de haber
determinado la velocidad de sedimentacin globular. (VSG).
DESVENTAJAS.
Se altera fcilmente con movimientos, vibraciones y sangres hemolizadas.
HOMBRES 0 a 7 mm/hr.
MUJERES 0 a 15 mm/hr.
3. DETERMINACION DE HEMATOCRITO.
El hematocrito es un parmetro indispensable para poder calcular los ndices eritrocitarios y se

define como el volumen que representa el paquete globular en el total del volumen sanguneo.
El hematocrito en porcentaje (%) representa aproximadamente tres veces el valor de la

concentracin de hemoglobina y su valor ser siempre fraccionario, es decir menor a uno (en el
sistema internacional de unidades).
Para reportar dicho valor se har como porcentaje o como fraccin celular, para su
determinacin se utiliza el mtodo Wintrobe (macro mtodo) o bien el micro mtodo (en un tubo
capilar) que posee menos errores inherentes.
MICROHEMATOCRITO.
MATERIAL.

2 Capilares por equipo
1 Lector para hematocrito por seccin
1 Micro centrfuga por seccin.
PROCEDIMIENTO.
a) Llenar con sangre capilar o venosa un tubo capilar aproximadamente tres cuartas partes del
total de su longitud.
b) Cierre el extremo del tubo capilar distante de la sangre acercndolo a la flama del mechero y
rotndolo, tambin se puede sellar con plastilina (cercirese de que el cierre de dicho
extremo haya sido completo).
c) Centrifguese en la centrfuga para microhematocrito durante 5 min.
d) Leer en el lector del microhematocrito.
PRECAUCIONES.
a) En ambos mtodos se debe de evitar la hemoconcentracin de la muestra durante la

obtencin. Si el hematocrito excede de 50 % centrifugar nuevamente el capilar o tubo
utilizado Para la determinacin, durante 5 minutos.
b) En el caso del micro mtodo si el sellado es con mechero cudese que la sangre no llegue al
extremo calentado del tubo ni quede al nivel de la flama.
c) En el caso del macro mtodo el tubo de Wintrobe se debe aforar exactamente a cero y no
deben de quedar burbujas de aire entre columna de sangre o en el fondo.
e) se debe de mezclar la sangre perfectamente antes de llenar los tubos de Wintrobe o

capilares.
VENTAJAS Y DESVENTAJAS.
a) El micro mtodo es el ms empleado debido a que requiere menos tiempo de centrifugacin,

y cantidad de muestra, se puede utilizar sangre capilar o venosa en comparacin con el
macro mtodo.
b) Se prefiere el micro mtodo debido a que existen diferentes marcar comerciales de tubos de
Wintrobe para el macro mtodo con lo que se obtienen diferentes resultados del hematocrito.
c) La cantidad de plasma atrapado es mayor en el macro mtodo dando valores ms elevados.
VALOR DE REFERENCIA.
HOMBRES 46 a 56 %
MUJERES 39 a 50 %
4. DETERMINACIN DE TIEMPO DE COAGULACIN
INTRODUCCIN.

El tiempo de coagulacin es un estudio creado en 1939. Nos da un indicio aproximado de la
eficacia global del mecanismo intrnseco de la coagulacin.
La prueba carece de valor para las insuficiencias ligeras de distintos factores, porque basta con
una pequea cantidad de trombina para producir un cogulo fibrina. Todava es menos til para
las anomalas de las ltimas etapas de la coagulacin.
PRINCIPIO Y METODOLOGA
El tiempo de coagulacin mide el intervalo de tiempo necesario para que una muestra de
sangre completa recin obtenida coagule in vitro a 37C y evale en forma general el
mecanismo de coagulacin intrnseco.
Dos son las finalidades ms relevantes de este mtodo:
1. Evaluar la funcin del sistema intrnseco de la coagulacin sangunea.
2. Vigilar la eficiencia de la administracin de heparina.
LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1. Equipo de laboratorio.
3.1.1. Bao Mara a 37C
3.1.2. Cronmetro
3.2. Material de Laboratorio
CANTIDAD DESCRIPCIN
3 Tubos de vidrio de 12X75
1 gradilla
4. PROCEDIMIENTO
4.1 Mtodo de Lee-White
1. Se extrae sangre venosa con una jeringa de 5 ml, y una aguja gruesa (del No.18 19).
La puncin venosa debe ser perfecta, pues la contaminacin con linfa puede modificar
los resultados.
2. Preparar el bao Mara a 37C, colocando una gradilla dentro de l, con 3 tubos de 12
X 75.
3. Se le realiza al paciente una puncin de 3 ml poniendo en marcha el cronmetro en el

momento en que entra la sangre a la jeringa.
4. Terminada la puncin, se deposita 1ml de sangre en cada tuboy se vigilan cada 30 seg.,
inclinndolos suavemente y anotando el tiempo en que coagula cada uno de ellos.
5. Se suman los tres tiempos, y se calcula el promedio, obteniendo as el resultado.

6. Durante el proceso, evitar la agitacin, que podra retardar el tiempo de coagulacin.
4.2 Valores de Referencia: 4-10 minutos
ACTIVIDADES
Evaluar casos clnicos.
5. DETERMINACIN DE TIEMPO DE SANGRIA
INTRODUCCIN
El tiempo de sangrado es una medida de Integridad vascular y plaquetaria. Las plaquetas se

adhieren a la colgena expuesta (subendotelial) y despus entre ellas, para formar un agregado
que obtura la herida. Para la agregacin plaquetaria, tambin es necesario un factor del plasma:
el factor de Von Willebrand.
PRINCIPIO Y METODOLOGA
El tiempo de sangrado se mide determinando el tiempo necesario para que dejen de sangrar los
pequeos vasos subcutneos que han sido lesionados por una Incisin estandarizada. Uno de
los mayores problemas que confronta la medicin del tiempo de sangrado es la
reproducibilidad. Por esta razn se han desarrollado tres generaciones de pruebas, cada una
con aumento en la estandarizacin de la herida en profundidad y longitud.
El mtodo ms antiguo es el de Duke, que consiste en hacer una puncin del lbulo de la oreja
con una lanceta estril. La desventaja de este mtodo es que es muy difcil estandarizar la
profundidad de la incisin. Adems, si el paciente tiene un serio problema hemorrgico, el
sangrado en el tejido celular blando del lbulo de la oreja puede causar un hematoma grande.
El mtodo de Ivy est mejor estandarizado que el de Duke. Se utiliza una lanceta estilete para
producir una incisin en la cara anterior del antebrazo. La navaja tiene un tope que "mita la
profundidad de la Incisin. Adems, como la cara anterior del antebrazo es suficientemente
larga para permitir varias incisiones, pueden hacerse dos tres de ellas y promediar sus
resultados. Adicionalmente, en este mtodo est mejor estandarizada la presin del sistema
vascular, ya que un esfingomanmetro que se coloca en el brazo (40 mmHg), mantiene la
presin venosa dentro de lmites reducidos.
LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Equipo de Laboratorio
Esfingomanmetro
Cronmetro.
3.2. Material de Laboratorio
CANTIDAD DESCRIPCIN
1 Lancetas desechables estriles
1 Tiras de papel filtro
1 Torundas de algodn con alcohol

PROCEDIMIENTO
4.1 Tcnica: Mtodo de Duke
1. Limpiar perfectamente el lbulo de la oreja o la yema de un dedo con una torunda con
alcohol. Dejar secar.
2. Puncionar el sitio elegido con la lanceta, echando a andar al mismo tiempo, el

cronmetro. La puncin debe hacerse en un solo movimiento, introduciendo la lanceta
hasta el fondo y sin hacer movimientos laterales de sta para no rasgar la piel o hacer
ms amplia la puncin.
3. Sin tocar la piel, con una t'ra de papel filtro, secar la gota de sangre que salga por el
sitio de pund6n cada 30 segundos, hasta que ea papel flltro ya no absorba sangre.
4. Anotar el tiempo en que deje de sangrar.
Ventajas: es muy sencillo de realizar.
Desventajas: Las condiciones de la prueba no son constantes, por lo tanto los resultados
son imprecisos.
Mtodo de Duke: 1 a 4 minutos

PRCTICA N 04
DETERMINACIN DE GRUPO SANGUNEO Y FACTOR RH
INTRODUCCIN
Desde que el Patlogo viens, Premio Nobel; Karl Landsteiner (1868- 1943) estableciera que
los hemates sanguneos contienen aglutingenos y glutininas, se pudo determinar los
grupos sanguneos de acuerdo a la presencia o ausencia de antgenos presentes en las
superficies de los hemates y en el suero de la sangre. En base a estas caractersticas se han
determinado dos clasificaciones para describir grupos sanguneos en humanos son ABO y el
factor Rh.
La distribucin porcentual de los diferentes grupos sanguneos y del factor Rh en la poblacin

general, corresponde al grupo sanguneo O con un 47%, seguido por el A 41%, B9% y
AB 3%, en diferentes estudios, cabe aclarar que el estudio fue realizado en poblacin de raza
blanca.
El grupo sanguneo depende del patrn gentico que ha heredado de sus Padres Las
transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reaccin
inmunolgica que puede desembocar en hemlisis, anemia, fallo renal, shock y muerte.
El mtodo que realizaremos a continuacin es determinar qu tipo de sangre tiene una persona;
determinando el antgeno y anticuerpos.
La sangre a menudo se clasifica de acuerdo con el sistema ABO. Este mtodo separa los tipos
de sangre en cuatro categoras:
Tipo A
Tipo B
Tipo AB
Tipo O
OBJETIVOS
Al finalizar la prctica el alumno podr realizar la determinacin del grupo sanguneo

siguiendo un protocolo de prueba de laboratorio.
El alumno podr diferenciar los tipos de sangre segn el Sistema ABO y Rh.
PROCEDIMIENTO PRCTICO
1. OBTENCIN DE LA MUESTRA DE SANGRE:
Puede utilizarse sangre con anticoagulante o sin anticoagulante.
2. PROTOCOLO DE TRABAJO:

Colocar en una lmina portaobjetos tres gotas de sangre de forma
equidistantes.
Dejar caer una gota de reactivo en cada gota de sangre; los reactivos a utilizar
tiene que estar a temperatura ambiente ( 37C ); empezar por el reactivo ANTI-
A; luego el ANTI-B y por ltimo el ANTI-D.
Homogenizar cada gota de sangre con su respectivo reactivo por un periodo de
un minuto.
Observar si hay presencia de aglutinacin o no aglutinacin al momento de
homogenizar la sangre con el reactivo.
Determinar el grupo sanguneo de la muestra de sangre con la cual a trabajado.
Grafique el resultado obtenido del protocolo de trabajo.
Grupo sanguneo A B AB O
Glbulos rojos
En la membrana Antgeno B No antgenos

Antgeno A Antgenos A y B
Anti-A y
En el plasma Anti-B Anti-A No anticuerpos
Anti-B
CUESTIONARIO
1.- Qu es un antgeno y anticuerpo?
2.- Cul es la importancia de la determinacin de los grupos sanguneos y su factor Rh, en una
Transfusin?
3.- Cul es la importancia de la determinacin de los grupos sanguneos y su factor Rh en una

mujer embarazada?

PRACTICA N 05
CUANTIFICACIN DE HORMONAS TIROIDEAS Y SEXUALES
OBJETIVO
Que el alumno lleve a cabo la cuantificacin de hormonas tiroideas y sexuales, prenda el manejo y
mantenimiento adecuado del equipo empleado en dichas determinaciones.
INTRODUCCIN
Hormonas Tiroideas.- Las hormonas tiroideas son producidas en el interior de las clulas de los folculos a
partir de protenas, del aminocido tirosina y del elemento halgeno iodo. Las dos hormonas tiroideas
ms importantes son la tiroxina (T4), la cual contiene 4 tomos de iodo, y la triiodotironina (T3), que posee
3 tomos de iodo.
Las hormonas tiroideas son liberadas del coloide y segregadas en la circulacin en respuesta a estmulos
de la glndula tiroidea como consecuencia de la accin de la hormona hipofisaria denominada
tiroideoestimulante (TSH).
Las iodotironinas en circulacin en gran medida estn unidas a la protena, esto es, la globulina unidora
de tiroxina (TBG), prealbmina con capacidad de captar tiroxina (TBPA) y albmina. La T4 muestra una
afinidad mayor por la TBG y TBPA, pero la T3 tambin se une a las protenas. As pues, los cambios en el
nivel de TBG producen cambios en las concentraciones sricas totales de T4 y T3 (en el mismo sentido).
Las funciones fisiolgicas de dichas hormonas incluyen la regulacin de las necesidades de oxgeno,
temperatura y peso corporal. Tambin regulan (en forma directa e indirecta) una variedad de parmetros
del metabolismo de carbohidratos, lpidos y protenas. Las anomalas de la funcin tiroidea incluyen
secrecin excesiva o insuficiente de hormonas tiroideas y aumento de tamao de la tiroides, generalizado
o focal.
Hormonas Sexuales.- En particular, todos los procesos reproductivos son regulados ntimamente por una
serie de complejos sistemas interrelacionados que incluyen el hipotlamo, la hipfisis y las gnadas
masculinas y femeninas. Entre las acciones ms complejas llevadas a cabo por las hormonas se
encuentran los mecanismos que tienen lugar a nivel del sistema reproductor. Contrariamente a la creencia
popular, tanto los hombres como las mujeres segregan las mismas hormonas esteroides sexuales, es
decir, andrgenos, estrgenos y progesterona. La diferencia de la secrecin hormonal sexual entre los
dos sexos no es absoluta, sino ms bien una cuestin de grado. La testosterona representa el principal
esteroide sexual en los hombres, mientras que el estradiol es la principal hormona sexual en la mujer.
Los rganos reproductores femeninos se clasifican como estructuras externas e internas. Los rganos
externos y la vagina desempean funciones en la copulacin, mientras que los rganos internos
localizados en el interior de la pelvis permiten el desarrollo y nacimiento del feto. Los rganos externos
consisten en la vulva, vello pubiano, labios vaginales (mayor y menor), cltoris, vestbulo vaginal y
glndulas mamarias como accesorios del sistema reproductor. Los componentes internos del aparato
reproductor femenino estn representados por los dos ovarios, dos trompas de Falopio, el tero y la
vagina.
Los ovarios se encuentran localizados a cada lado del tero y cumplen la funcin dual de generacin del
vulo y de secrecin de las hormonas esteroides sexuales femeninos, estrgenos y progesterona. Al
nacer, cada mujer posee aproximadamente 400,000 folculos inmaduros de tamao microscpicos en los
ovarios, cada uno de los cuales contiene un vulo inmaduro. El folculo maduro est compuesto por tres
capas de clulas, la teca externa, la teca interna y la capa de clulas de la granulosa. Las clulas de la
teca interna representan la principal fuente de estrgenos.
Las gonadotrofinas hipofisiarias, FSH (Hormona foliculoestimulante) y LH (luteinizante), desempean un

importante papel al influir sobre diferentes funciones a nivel de los rganos sexuales internos masculinos
y femeninos. En la mujer, la FSH induce el crecimiento de los folculos ovricos y estimula la secrecin
folicular de estrgenos, mientras que la LH acta en las fases finales del crecimiento folicular para inducir
Javier J. Aliaga Salguero Laboratorio clnico
la ovulacin (o liberacin del vulo desde el folculo) y acta como estimulante de las clulas del cuerpo
amarillo para inducir la formacin de progesterona. Las hormonas esteroides sexuales en ambos sexos
estimulan en la adolescencia el crecimiento corporal y la unin de las epfisis con las difisis seas.
Adems, estas hormonas inducen la sntesis proteica. Mientras los andrgenos afectan a los msculos
esquelticos, lo que confiere el aspecto muscular a los hombres, los estrgenos actan en mayor grado a
nivel del msculo liso.
Los andrgenos inducen las caractersticas sexuales secundarias tpicas del hombre, mientras que los
estrgenos estimulan las de la mujer, as como el crecimiento y desarrollo de los rganos reproductores
femeninos. La progesterona puede ser considerada como la hormona materna, pues junto con los
estrgenos inducen el desarrollo caracterstico durante el ciclo menstrual.
En esta prctica se realizarn las cuantificaciones de las siguientes hormonas:
Estradiol, FSH, LH, Progesterona, Prolactina y Testosterona.
Material y Mtodo.-
Reactivos:
Equipos para las determinaciones mencionadas por QUIMIOLUMINISCENCIA
Tcnicas (segn protocolo de cada determinacin).
Evaluacin de casis clnicos
Bibliografa:
Kaplan-Pesce: Qumica Clnica, Ed. Panamericana, Buenos Aires Argentina

PRACTICA N 06
PRUEBAS PARA EL DIAGNSTICO DE EMBARAZO
OBJETIVO
Realizar las pruebas de laboratorio para el diagnstico del embarazo, as como para el seguimiento de
una mujer embarazada, previniendo con ello cualquier complicacin de la madre durante la gestacin.
Interpretar los resultados.
INTRODUCCIN
El embarazo se establece de modo definitivo con la implantacin, que es el proceso por el cual el
blastocisto (gran cavidad llena de lquido con una capa superficial de clulas externas y una masa celular
interna), se introduce en el revestimiento interno del tero (endometrio) y establece conexiones con la
circulacin materna. La implantacin y crecimiento del cigoto requiere un medio hormonal adecuado, el
cual se logra por la precisa sincronizacin de las funciones ovricas, embrionarias y endometriales
durante los primeros das del embarazo. Tres o cuatro das despus de la fecundacin el cigoto ejerce un
efecto luteotrfico directo sobre los ovarios mediante la secrecin de la gonadotrofina corinica humana
(hCG) la cual estimula al cuerpo amarillo para que aumente su produccin de progesterona y prolongue
su vida til hasta que la sntesis de progesterona y estrgenos placentarios se halle desarrollada lo
suficiente.
La deteccin de la hCG se ha empleado como una prueba clnica del embarazo desde 1927. La hCG
srica alcanza niveles detectables en 24 hrs. despus de la implantacin y aumenta rpidamente hasta
niveles mximos (70 - 100 UI/ ml) unos das despus de la ltima menstruacin normal. Despus los
niveles disminuyen rpidamente y se estabilizan entre 5 y 10 UI/ml, alrededor de los 120 das despus del
ltimo perodo menstrual.
La medicin de la hCG no solamente se usa para el diagnstico del embarazo, sino tambin para el
tratamiento de mujeres en riesgo de aborto espontneo o para la evaluacin de tumores trofoblsticos.
La gonadotrofina corinica sub-unidad beta (hCG) es producida por el trofoblasto normalmente. Es de

gran utilidad en el diagnstico precoz del embarazo, en su control, en la mola hidatiforme, coriocarcinoma
y embarazo ectpico.
El vulo fecundado alcanza su madurez de implantacin alrededor del 6o. da y empieza su actividad
trofoblstica normal en el 8o. da por lo que pueden dosificarse millonsimas de mg desde el 10o. da de
su implantacin.
En la primera semana de embarazo se encuentran hasta 30 mUI/ml y se van incrementado hasta la 9a.
semana donde alcanza hasta 304,000 mUI/ml. Posteriormente bajan sus unidades hasta el 6o. mes de
embarazo (50,000mUI/ml) y luego ascienden al 9o. mes a 106,200 mUI/ml. Esta concentracin normal,
permite por medio de la cuantificacin de las unidades internacionales apreciar la evolucin del embarazo.
Cifras superiores a 350,000 mUI/ml en el 1er.trimestre o 150,000 mUI/ml despus del 4o. mes hacen
diagnstico en mola hidatiforme. Despus del tratamiento por histerectoma por ejemplo a los 2 meses
debe hacer negatividad total. La dosificacin puede verificarse en orina o suero, aunque el procedimiento
de eleccin es en suero.
Durante el embarazo se debe llevar tambin un control hematolgico, ya que la hemodilucin o sea el
aumento de volumen sanguneo producido por un aumento del volumen plasmtico conduce a anemia
normoctica normocrmica. Y se puede presentar anemia hipocrmica al haber mayor demanda de hierro,
sin la correspondiente compensacin en la dieta principalmente en embarazos y lactancias frecuentes.
En el caso de diagnstico ectpico puede ser de utilidad el dato de Hemoglobina (Hb) y eritrocitos cada 6
hrs (al menos en 3 ocasiones), donde se observar una baja relativamente apreciable en el Hto,
eritrocitos y Hb ya que se presenta un sangrado considerable. En este mismo caso de embarazo ectpico,
se encuentra amilasemia despus de 5 hrs de evolucin, ya que las trompas de Falopio tienen una gran
cantidad de amilasa y la ruptura de la mucosa libera cantidades suficientes para ser detectadas.

Ahora bien, dentro de las pruebas de control prenatal, debe conocerse el grupo sanguneo de la madre y
de ser posible del padre. Esto es sobre todo para tener un concepto evaluativo de la ausencia o presencia
del factor Rh, y prevenir en casos posteriores Enfermedad Hemoltica del Recin Nacido (EHRN).
Por lo anterior en esta prctica, se efectuar la prueba de laboratorio: hCG,.
MATERIAL Y MTODOS
Sesin No.1
Determinacin de -hCG (segn inserto de cada tcnica)
Evaluacin de resultados de laboratorio
Bibliografa:
Albarrn C., Albarrn, L.: Manual Tcnico de Banco de Sangre, Ed.Prensa
Mdica Mexicana, S.A. Mxico
Griffin J.E.: Manual Clnico de Endocrinologa y Metabolismo, Ed.McGraw-Hill, Mxico
PRACTICA N 07
DETERMINACIN DE GLUCOSA Y BILIRRUBINA EN SANGRE
FUNDAMENTO TERICO
La glucosa es la principal fuente de energa de las clulas en el organismo. La glucosa es un

monosacrido con una concentracin postpandrial de 90 mg/dl en la sangre y sirve como una fuente de
energa indispensable para la funcin celular.
El diagnstico de los trastornos del metabolismo de los hidratos de carbono se apoya en parte en la
medicin de la glucosa plasmtica, ya sea en ayuna o tras estimulacin o pruebas de supresin.
Los resultados de la glucosa plasmtica pueden clasificarse como hiperglucmicos (como la diabetes
mellitus) o hipoglucmicos.
OBJETIVOS:
Conocer la tcnica mediante la cual se determina la glucosa en sangre

Diferenciar pacientes con hipo e hiperglicemia
PRINCIPIO DE LA REACCIN:
La prueba utilizada se determina mediante el mtodo enzimtico colorimtrico, basado en la reaccin de

Trinder.
Glucosa + O2 + H2O GOD (glucosa oxidasa) cido glucnico + H 2O2
2H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol POD (peroxidasa) quinoneimina (rojo) + 4H 2O
La glucosa se determina despus de la oxidacin enzimtica en presencia de glucosa oxidasa. El

perxido de hidrgeno formado reacciona bajo la catlisis de peroxidasa con fenol y 4-aminoantipirina
formando un complejo rojo violeta llamado quinoneimina.
Punto final de una reaccin: Las reacciones catalizadas por enzimas son nicas en el sentido de que
presentan aumentos muy grandes de la velocidad en relacin a las reacciones no catalizadas y muestran
una cintica de saturacin, es decir la velocidad de la reaccin alcanza un valor mximo a una
concentracin determinada de sustrato, no dan por resultado aumento de la velocidad de la reaccin. La
medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc.
En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la velocidad mxima (V max). La velocidad
puede determinarse bien midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin de los reactivos.
En el caso de la reaccin de la glucosa catalizada por la enzima glucosa oxidasa y la peroxidasa llega a
su punto final cuando todo el sustrato (glucosa) se ha oxidado, y despus se mide el cambio de color.
ESPECTOFOTMETRO:
La absorbancia y la transmitancia de una sustancia en disolucin se miden con un aparato denominado

espectrofotmetro, el cual consta bsicamente de los siguientes componentes:
FUENTE DE LUZ: Lmpara que emite una mezcla de longitudes de onda.
COLIMADOR: Conjunto de lentes que enfocan la luz convirtindola en un haz de rayos paralelos.
MONOCROMADOR: Dispositivo que selecciona luz de una nica longitud de onda.
DETECTOR FOTOELCTRICO: Transductor de luz en electricidad. La luz provoca el desplazamiento de

electrones en el metal del detector, produciendo una corriente elctrica que es proporcional a la intensidad
de la luz recibida.
REGISTRADOR: Mide la seal del detector, la compara y genera una medida en una escala
determinada.

A)
Esquema
de un
espectrofotmetro de un solo haz

B) Esquema de un espectrofotmetro de doble haz, en el cual se corrigen las variaciones
espectrales de los diferentes elementos pticos que lo componen.
El funcionamiento del espectrofotmetro es el que sigue: la luz de una fuente continua pasa a travs de
un monocromador, que selecciona una banda estrecha de longitudes de onda del haz incidente.
Esta luz monocromtica atraviesa una muestra de espesor b, y se mide la potencia radiante de la luz
que sale. Es necesario calibrar el espectrofotmetro con un blanco antes de medir las absorbancias de la
disolucin problema. Esta celda o cubeta de referencia sirve para compensar los efectos de reflexin,
dispersin o absorcin de luz de la celda con el disolvente.
Cuando emerge poca luz de la muestra (absorbancia alta), la intensidad es difcil de medir. Cuando
emerge mucha luz de la muestra (absorbancia baja), es difcil detectar la diferencia de absorbancia entre
las celdas de muestra y de referencia.
PARTE EXPERIMENTAL
1. Procedimiento:
Ensayo:
Longitud de onda: Hg 546 nm.
Paso de luz: 1 cm
Temperatura: 20-25C
Medicin: frente a un blanco de reactivo. Se requiere un blanco de reactivo por serie
Esquema de pipeteo:
Microdeterminacin
Pipetear en las cubetas Blanco de reactivo STD muestra
STD muestra 5 ul
Reactivo para glucosa 500 ul 500 ul
Mezclar, incubar por 10 minutos de 20-25C 5 minutos a 37C. Medir la absorbancia del STD
y las muestras frente a un blanco de reactivo antes de 60 minutos.
Materiales y reactivos:
Materiales Reactivos
Espectrofotmetro Reactivo para glucosa
Tubos de ensayo Estndar de glucosa (100 mg/dl)

Gradilla Muestras de suero sanguneo ( plasma)
Pipetas automtica
Puntas de plstico para pipetas automt..
Reloj
Cubetas de plstico para espectrofot.
Nota: El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las absorbancias.
1. Clculo de la concentracin de la glucosa
C (mg/dl)= 100 x A muestra
A Estndar
Valores de referencia: 70 100 mg/dl
TRABAJO EN CLASE:
Realizar el anlisis de glucosa en un suero sanguneo y luego reportar los clculos en la carpeta con la
respectiva interpretacin del resultado.
DETERMINACIN DE BILIRRUBINA TOTAL Y DIRECTA
El 80-85% de la bilirrubina se origina de la degradacin de la hemoglobina con un 15-20% que es

derivada del citocromo, mioglobina y catalasas. La bilirrubina no conjugada, la cal se liga a la albmina
del plasma, es producida en el curso de la degradacin en el sistema reticuloendotelial, clulas Kupffer
del hgado, bazo y mdula sea. Los ensayo de bilirrubina son posible para evaluar el grado de
severidadad de los sntomas clnicos de la ictericia as como para evaluar la funcin y el estado del
hgado.
Significado de los resultados anormales

La ictericia es la coloracin amarillenta de la piel y de la esclertica del ojo, que ocurre cuando la
bilirrubina se acumula en la sangre a un nivel mayor a 2.5 mg/dL aproximadamente. La ictericia se
presenta porque los glbulos rojos se estn descomponiendo demasiado rpido para que el hgado los
procese, lo cual podra suceder debido a una enfermedad heptica o a una obstruccin de las vas
biliares.
Si hay una obstruccin de las vas biliares, la bilirrubina directa se acumular, escapar del hgado y
terminar en la sangre. Si los niveles son lo suficientemente altos, una parte de ella aparecer en la orina.
Slo la bilirrubina directa aparece en la orina. El aumento de la bilirrubina directa generalmente significa
que las vas biliares (secrecin heptica) estn obstruidas.
El aumento de la bilirrubina indirecta o bilirrubina total pueden ser un signo de:
Sndrome de Crigler-Najjar
Eritoblastosis fetal
Enfermedad de Gilbert
Cicatrizacin de un hematoma grande (moretn o sangrado bajo la piel)
Anemia hemoltica
Enfermedad hemoltica del recin nacido

Hepatitis
Ictericia fisiolgica (normal en los recin nacidos)
Anemia drepanoctica
Reaccin a una transfusin
Anemia perniciosa
El aumento de la bilirrubina directa puede indicar:
Obstruccin de las vas biliares
Cirrosis
Sndrome de Dubin-Johnson (muy raro)
Hepatitis
Colestasis intraheptica (acumulacin de bilis en el hgado) debido a cualquier causa
En presencia del acelerador cafena, la bilirrubina total se acopla con el cido sulfnico para formar un
complejo azobilirrubinado rojo, la intensidad del color es proporcional a la concentracin de la bilirrubina.
La determinacin de la bilirrubina directa es desarrollada sin aditivo de cafena. La adicin de tartrato
alcalino causa una transformacin del complejo rojo de la azobilirrubina a un complejo azul y las lecturas
de las absorvancias son entre 546-578 nm.
Bilirrubina total:
Acido sulfanlico + NaNO2 cido sulfnico diazotizado
Bilirrubina + cido sulfnico diazotizado cafena azobilirrubina (rojo)
Azobilirrubina + tartrato complejo verde
Esquema de pipeteo:
Bilirrubina total
Microdeterminacin
Pipetear en las cubetas Blanco de reactivo Muestra
Reactivo 1 100 ul 100 ul
Reactivo 2 ------ 25 ul
Muestra 100 ul 100 ul
Mezclar, incubar por 10-60 minutos a temperatura ambiente. Aadir:
Mezclar e incubar a temperatura ambiente por 5-30 minutos. Leer la absorbancia de la
muestra contra el blanco
Bilirrubina directa
Pipetear en las cubetas Blanco de reactivo Muestra
Reactivo 2 ------ 25 ul
Solucin NaCl 0.9% 1000 ul 1000 ul
Muestra 100 ul 100 ul
Mezclar, incubar por 5 minutos a temperatura ambiente. Leer la absorbancia de la muestra
contra el blanco
Clculos:
Bilirrubina total: C (mg/dl)= 10.8 x A bilirrubina total

Bilirrubina directa: C (mg/dl)= 13.7 x A bilirrubina directa
Bilirrubina indirecta: BI= Bilirrubina total (BT) - bilirrubina directa (BD)
Espectrofotmetro Reactivos para bilirrubina
Tubos de ensayo Muestras de suero sanguneo ( plasma)
Gradilla
Pipetas automtica
Reloj
Valores de referencia:
Bilirrubina total: hasta 1.0 mg/dl
Bilirrubina directa: hasta 0.25 mg/dl
TRABAJO EN CLASE:
Evaluacin de casos clnicos.
PRACTICA N 08
DETERMINACIN DE COLESTEROL EN SANGRE

FUNDAMENTO TERICO

Los principales lpidos del plasma humano son el colesterol, los steres del colesterol, los triglicridos, los
fosfolpidos y los cidos grasos no esterificados. El colesterol es un importante componente estructural de
las membranas celulares y un precursor para la biosntesis de los cidos biliares y las hormonas
esteroideas.
El riesgo cardiovascular es una funcin continua de la concentracin de colesterol y que los individuos
situados en el lmite superior del margen normal tienen un riesgo mayor que los que estn situados en el
lmite inferior.
OBJETIVOS
Conocer la tcnica mediante la cual se determina el colesterol en sangre
Diferenciar pacientes con hipo e hipercolesteremia
La prueba utilizada para determinar colesterol es mediante el mtodo enzimtico colorimtrico del
siguiente modo:
Principio de la reaccin:
Esteres de colesterol + H2O CHE(colesterol esterasa) colesterol + cidos grasos
Colesterol + O2 CHO (colesterol oxidasa) colesterol- 3-ona + H 2O2
2H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol POD (peroxidasa) Quinoneimina (rojo) + 4 H 2O
El colesterol se determina despus de hidrlisis enzimtica y oxidacin. El indicador es la quinoneimina

(complejo rojo) formada por el perxido de hidrgeno y 4-aminoantipirina en presencia de fenol y
peroxidasa.
PARTE EXPERIMENTAL
1. PROCEDIMIENTO:
Ensayo:
Longitud de onda: Hg 546 nm. Paso de luz: 1 cm. Temperatura: 20-25C
Medicin: frente a un blanco de reactivo. Se requiere un blanco de reactivo por serie
Esquema de pipeteo:
Microdeterminacin
Pipetear en las cubetas Blanco de reactivo STD muestra
STD muestra 5 ul
Reactivo para colesterol 500 ul 500 ul
Mezclar, incubar por 10 minutos de 20-25C 5 minutos a 37C. Medir la absorbancia del STD
y las muestras frente a un blanco de reactivo antes de 60 minutos.
Espectrofotmetro Reactivo para colesterol
Tubos de ensayo Estndar de colesterol (200 mg/dl)
Gradilla Muestras de suero sanguneo (o plasma)
Pipetas automtica
Reloj
Clculo de la concentracin de colesterol
C (mg/dl)= 200 x A muestra
A Estndar
Valores de referencia: hasta 200 mg/dl
TRABAJO EN CLASE:
PRACTICA N 09
DETERMINACIN DE CREATININA Y UREA
INTRODUCCIN

La creatinina es un producto final del metabolismo muscular. Se origina a partir de la creatina por prdida
de una molcula de agua. A su vez, la creatina se produce por hidrlisis del fosfato de creatina, por accin
de la creatin-fosfo-kinasa (CPK), apareciendo como metabolitos de dicha reaccin el fosfato energtico y
la creatina. El radical fosfato puede aportar energa directamente por dicha reaccin o a travs de su
acoplamiento a una molcula de ADP para formar ATP y posterior hidrlisis por accin de ATPasa.
La eliminacin de creatinina en el cuerpo humano tiene lugar casi exclusivamente a travs de la filtracin
glomerular, siendo un importante ndice del funcionalismo renal. A diferencia de la urea, la eliminacin de
creatinina por la orina no viene afectada por la diuresis, al mismo tiempo que para una misma persona es
muy constante su eliminacin diaria con casi independencia de la dieta alimenticia, siendo la masa
muscular el factor condicionante ms directo de su excrecin total
por da. En resumen, podemos decir que la eliminacin de creatinina en un intervalo de 24 horas es un
valor constante, dependiente principalmente de la masa muscular del individuo, y que por otro lado el
clculo del aclaramiento de la creatinina ser un parmetro directo del funcionalismo renal.
OBJETIVOS
Aplicar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de creatinina en una muestra

biolgica.
Establecer los valores de referencia de la creatinina y comparar con el valor de nuestra muestra
problema a analizar.
Definir cules son las principales patologas que se presentan si tenemos valores altos o bajos de
creatinina en una muestra biolgica
FUNDAMENT0 DEL MTODO
La reaccin qumica aplicable para fotometra es la descrita por Jaffe, basada en el color anaranjado que
se produce al reaccionar la creatinina con el picrato alcalino. Hay varias substancias en el suero y orina
que actan como cromgenos inespecficos, lo que es un problema principalmente para el clculo del
aclaramiento. Por este motivo tiene una gran importancia la adecuacin de todas las variables de la
reaccin, muy especialmente el pH, con el fin de obtener la mxima sensibilidad para la creatinina y la
mnima interferencia de cromgenos. Adaptando la reaccin a una medida cintica, se logra una gran
especificidad debido a que la creatinina reacciona con el picrato alcalino con ms rapidez que los
cromgenos (metilguanidina, picramato,), por lo que la medida del incremento de color en un breve
perodo de tiempo inicial de la reaccin valorarn principalmente creatinina, con poca influencia de los
cromgenos inespecficos, por esto es recomendable, de ser posible, la determinacin cintica.
I. CREATININA
PREPARACIN
1. MUESTRA CLNICA
Suero o plasma heparinizado.
La creatinina en suero y plasma tiene una estabilidad de al menos de 24 horas a 2-8C.
Orina .Diluir previamente a 1:50 con agua destilada, multiplicar el resultado por 50.
2. REACTIVOS Y MATERIAL
Material necesario
1 Micropipeta de 1 mL
1 Micropipeta de 200 L.
1 Piseta con agua desionizada o destilada
2 Celdas de plstico de 3 ml

Puntas para micropipeta
Gradilla.
EQUIPO
Fotmetro termostable a 37C con filtro de 490-510 nm.

Centrfuga
CONTENIDO DEL EQUIPO
Reactivo 1 Ac. pcrico 17.5 mmol/L
Reactivo 2 Hidrxido sdico 0.29 mol/L
Estndar Sol. Creatinina 2.0 mg/Dl
PREPARACIN Y ESTABILIDAD
Los reactivos estn listos para su uso.
Son estables a temperatura ambiente hasta la fecha de caducidad indicada en el envase.
Mezcla reactiva:
Mezclar ambos reactivos a partes iguales segn necesidades.
Esta mezcla es estable 10 das a temperatura ambiente.
5. PROCEDIMIENTO
5.1TCNICA
Longitud de onda: . . . . . . . 490 nm (490-510)
Temperatura : . . . . . . . . . . 25/30/37C
Paso de luz : . . . . . . . . . 1 cm paso de luz
Ajuste del cero con blanco de reactivo.
Blanco Estndar Muestra
Estndar 200 L
Muestra 200 L
Reactivo 2.0 mL 2.0 mL 2.0 mL
Mezclar e incubar 5 min a 37C 10 min a temperatura ambiente.
Mezclar y poner en marcha el cronmetro.
Anotar la D.Optica a los 30 segundos (E1) y a los 90 segundos (E2).
Lectura a 492 nm (490-510)
6. RESULTADOS
6.1 Clculos
mg/dL creatinina = . Extincin muestra/ . Extincin estndar x conc. Estndar = conc. muestra
mg/dL x 88.4 = mol/L
II. UREA (MTODO CINTICO "UREASA-GLDH")

INTRODUCCIN
Urea y amonaco
La concentracin sangunea de amoniaco es superior en los infantes que en los adultos, debido a que el
desarrollo de la circulacin heptica se termina despus del nacimiento. La hiperamonemia es una
entidad que se presenta con frecuencia debido a defectos congnitos en el ciclo de la urea. El error innato
del metabolismo ms comn es la deficiencia en ornitina transcarbamilasa. La hiperalimentacin es una
causa mucho ms frecuente de hiperamonemia en infantes. Con frecuencia, se diagnostica el sndrome
de Reye por un amoniaco sanguneo elevado en ausencia de otra causa demostrable.
Los pacientes adultos muestran elevadas concentraciones de amonaco sanguneo en las etapas
terminales de: la cirrosis heptica, la falla heptica y la necrosis del hgado aguda y subaguda. Se
presagia el comienzo de la encefalopata heptica por una elevacin en el amonaco sanguneo. Se ha
demostrado que la medicin en lquido cefalorraqudeo (LCR) de la glutamina, correlaciona bien con el
desarrollo de la encefalopata heptica. Tambin se puede utilizar la medicin de la glutamina en el LCR,
para diferenciar la encefalopata heptica de la sptica. Sin embargo, no es comn la medicin de la
glutamina en el LCR. La excrecin de amonaco urinario se eleva con la acidosis y se disminuye en la
alcalosis, puesto que la formacin de sales de amonio es un mecanismo importante para excretar el
exceso de iones hidrgeno. Daos en los tbulos renales distales, tal como ocurre en la falla renal, la
glomerulonefritis, el hipercorticoidismo y la enfermedad de Addison, conllevan a una excrecin de
amonaco disminuida sin presentar cambios en los niveles sanguneos de amonaco.
Puesto que la urea se sintetiza en el hgado, en la enfermedad heptica sin dao en la funcin renal, se
presenta nitrgeno ureico srico bajo, aunque la relacin urea a creatinina se puede conservar normal. La
elevacin en el nitrgeno ureico srico no implica necesariamente dao renal, puesto que la
deshidratacin puede llevar a concentraciones de nitrgeno ureico tan altas como 600 mg/L. En los
infantes que reciben una frmula alta en protenas pueden tener niveles de nitrgeno ureico de 250 a 300
mg/L. Naturalmente, enfermedades como la glomerulonefritis aguda, la nefritis crnica, el rin
poliqustico y la necrosis renal elevan el nitrgeno ureico.
OBJETIVOS
Aplicar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de urea en una muestra biolgica
Establecer los valores de referencia de la urea y comparar con el valor de nuestra muestra
problema a analizar.
Definir cules son las principales patologas que se presentan si tenemos valores altos o bajos de
urea en una muestra biolgica.
FUNDAMENTO DEL MTODO
La ureasa cataliza la hidrlisis de la urea dando amonio y CO2. El amonio formado se valora mediante
una reaccin enzimtica (GLDH), pasando NADH a NAD+.
La disminucin de la absorbancia frente al tiempo es proporcional a la concentracin de urea.
Ureasa
Urea + H2O +2H+ 2 NH3 + CO2
GLDH
2NH3 + -cetoglutarato + 2NADH H2O + NAD+ + 2L-glutamato
PREPARACIN
1. MUESTRA CLNICA
Suero o plasma heparinizado.

2. MATERIAL Y REACTIVOS
Material necesario
1 Micropipeta de 1 mL
1 Micropipeta de 200 L.
1 Piseta con agua desionizada o destilada
2 Celdas de plstico de 3 ml
Puntas para micropipeta.
Gradilla.
EQUIPO
Fotmetro termostable a 37C con filtro de 340 nm.
Centrfuga
CONTENIDO DEL EQUIPO
Reactivo 1 Tampn TRIS pH 7.8, 80 mmol/L
Reactivo 2 Ureasa 3750 U/L
Vial enzimas GLDH 6000 U/L
NADH 0.32 mmol/L
-cetoglutarato 6 mmol/L
Estndar Sol. Urea 50 mg/dl
PREPARACIN Y ESTABILIDAD
Disolver el contenido del vial enzimas R.2 en el frasco de solucin tampn R.1 El reactivo al uso es
estable un mnimo de 4 semanas a +2+8C 7 das a +15+25C.
5. PROCEDIMIENTO
5.1 TCNICA
Termperatura: 25/30/37C
Longitud de onda: 340 nm. /334 nm
Paso de luz: 1 cm
Lectura: frente a agua destilada
Blanco Estndar Muestra
Estndar 10 L
Muestra 10 L
Reactivo 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL
Pipetear en un tubo:
Muestra o estndar. . . . . . . . . . . . . . . 0.01 mL
Reactivo al uso. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.00 mL
Mezclar y anotar la disminucin de extincin entre los 30 y los 90 segundos ( Extincin)

6. RESULTADOS
6.1. Clculo
Con las diferencias de extincin anotadas, aplicar la siguiente ecuacin:
. Extincin muestra/ . Extincin estndar x conc. estndar = conc. Muestra
Factor de conversin: mg/dL x 0.1665 = mmol/L
6.2. Linealidad
El mtodo es lineal hasta valores de 500 mg/dL (83.25 mmol/L)
Para concentraciones superiores se deber diluir la muestra a 1:2 con solucin salina, multiplicando
el resultado por 2.
6.3 Lmite de Seguridad Biolgica
Suero: de 15 a 45 mg/dL
Orina: de 20 a 35 g/24 horas
NOTAS:
Muestra: Suero, plasma u orina..
La orina diluirla a 1:50 con agua destilada.
No emplear suero o plasma turbio o hemolizados.
TRABAJO EN CLASE:
PRACTICA N 10
DIAGNOSTICO Y SIGNIFICANCIA CLNICA DE PROTEINURIA
INTRODUCCION

Proteinuria es el trmino cuyo significado es la existencia protenas en la orina en una cantidad elevada.
La cantidad de protenas en la orina que determina la proteinuria, una vez sobrepasada, es de 150 mg en
la orina de 24 horas o 0 a 8 mg/dl en el caso de tratarse de una prueba rpida con tira reactiva.
La proteinuria es un dato fundamental en el enfoque diagnstico inicial de una hematuria ya que junto a
esta, permiten determinar la existencia de enfermedades renales.
La protena albmina en la orina, tambin conocida como albuminuria es la proteinuria ms comn. La

albuminuria, es el primer indicio de la existencia de una posible enfermedad de los riones.
Proteinuria: causas
La principal causa de la proteinuria es que el sistema de filtros de los riones resulte daado.
Normalmente, las protenas, debido a que son macromolculas (molculas de gran tamao), no pueden
atravesar este filtro pero al resultar daado, este filtro permite el paso las protenas de la sangre,
ocasionando el incremento de protenas en la sangre. Estos filtros, llamados glomrulos, pueden daarse
por enfermedades que afectan a los riones (glomerulonefritis) o por enfermedades de otros rganos que
afecten a los riones.
Algunos motivos y enfermedades que pueden afectar a los riones y que pueden ser causas de
proteinuria son:
Diabetes: En el caso de la diabetes, pequeas cantidades de albmina en la orina son el primer

sntoma de degradacin renal.
Lupus: Provoca proteinuria de protena albmina o albuminuria.
Intoxicacin con medicamentos: Tambin puede producir degradacin renal con la consecuente
aparicin de protenas en la orina.
Mieloma mltiple: En el caso de esta enfermedad, es la protena de Bence Jones la que se puede
encontrar en la orina.
En algunos casos, la proteinuria puede presentarse en personas sin ninguna de estas enfermedades, de
forma transitoria debido a un periodo febril o a la realizacin de una actividad fsica intensa.
En gente joven se puede presentar un tipo de proteinuria conocida como proteinuria orosttica. Este tipo
de proteinuria consiste en la prdida de protenas por la orina al estar de pie siendo normal si el individuo
se encuentra tendido. Este tipo de proteinuria desaparece al llegar a la edad adulta.
Otras posibles causas de la proteinuria son:
Preeclampsia
Pielonefritis bacteriana
Tumor en la vejiga
Insuficiencia cardaca congestiva (perfusin inadecuada de los riones)
Sndrome de Goodpasture
Envenenamiento por metales pesados
Sndrome nefrtico
Terapia con frmacos nefrotxicos
Enfermedad poliqustica del rin
El tratamiento de la proteinuria corresponde al tratamiento para la afeccin que la provoca ya que la

proteinuria no es una enfermedad en s misma sino la consecuencia de alguna de las enfermedades o
causas anteriores.
Analticas de proteinuria
La cantidad de protena existente en la orina, se determina a partir de un anlisis de orina. Existen dos
formas de realizar esta analtica para determinar la proteinuria en orina:
Usando una tira qumicamente tratada que puesta en contacto con la orina permite conocer la
existencia de un exceso de protenas en la orina.
Una muestra de 24 horas con la que se mide la cantidad de protenas que el paciente expulsa en
la orina.
Proteinuria y embarazo
La aparicin de protenas en la orina durante el embarazo es frecuente y no necesariamente tiene porqu

estar relacionado con ninguna enfermedad. La proteinuria durante el embarazo, est producida por el
estrechamiento de los vasos sanguneos y por los cambios morfolgicos en los riones y aunque la
proteinuria en el embarazo es frecuente, no siempre se produce. Durante el embarazo, la protena que
ms se pierde es la albmina.
En el caso de la proteinuria en el embarazo, se considera excesiva cuando se produce la prdida de ms

de 3 gramos de protenas en la orina de 24 horas o ms de 0,5 microgramos en una nica muestra.
La aparicin de la proteinuria normalmente suele ser posterior al incremento de peso y al iniciarse el

aumento de tensin arterial.
Objetivo:
Cuantificacin de protenas en muestras de orina.
Aparatos, utensilios y medios de medicin
Tubos plasticos de 10 ml graduados de centrifuga.

Tubos para ensayo de 13 x 100 o 15 x 125 mm.
Gradilla para los tubos de ensayos.
Pipetas graduadas de 5 ml o 10 ml.
Pipeta automatica de 500L.
Pipeta automatica de 1000L.
Foto colorimetro o espectrofotometro para leer a una longitud de onda entre 560 y 620 nm
(preferiblemente de 580 nm).
Cubeta de 1 ml de volumen y 1 cm de paso de luz.
Reactivo necesario:
cido sulfosalicilico al 20% (0,786 mol/l)
cido sulfosalicilico al 3% (0,118 mol/l)
Muestra: Orina de 24 h debidamente recogida y almacenada.
Indicacin: A la seis de la maana vaciar la vejiga y recolectar toda la orina en un frasco de boca ancha
hasta la orina incluida a las seis de la maana del siguiente da, durante todo este proceso la muestra
debe permanecer en refrigeracin en caso de no tener persevantes.
MARCHA ANALTICA
1. Se mide volumen urinario con probeta graduada, tras la homogenizacin de la muestra de orina total.
2. Se separa un volumen de aproximadamente 10 a 15 ml de orina en un tubo de ensayo.
3. Esta orina debe ser centrifugada a 1500 rpm durante 10min, tomndose de 3,5 a 5 ml de la orina
centrifugada para la realizacin de protenas cualitativa con sulfosalicilico al 20% como se describe en
la determinacin de cituria.
4. Si se detecta presencia de protenas del orden de trazas o contiene se desarrolla el mtodo de

turbidimtrico que se describe a continuacin,
TECNICA:
Tubos Patrn Muestra
Blanco
Reactivo cido 2 ml 2 ml 2 ml
sulfosalicilico al 3%
Agua destilada 500 ul
Muestra 500 ul
Patrn 500 ul
Mezclar y dejar reposar por 5 minutos a temperatura ambiente, despus leer la muestra y patrn a 620nm
5. El clculo se realizara as:
Calibracin con un punto. Preparar un patrn de 0,5 g/l a partir del calibrador ELICAL 2 haciendo una
dilucin 1/100.
Conc. Muestra = D.O muestra x Conc. Patrn/ D.O patrn.
7. La concentracin obtenida de la muestra se multiplica por los litros de orina recolectada en 24 horas
(VT).
Conc. Final Muestra = D.O muestra x Conc. Patrn/ D.O patrn x VT
Nota: La concentracin del patrn debe ser expresada en g/l para informar los resultados en g/24h.
FASE POST ANALITICA
INFORME DE LOS RESULTADOS
Proteinuria en 24 h
Prueba cualitativa
Informe de acuerdo a la turbiedad:
NO CONTIENE: Si se mantiene transparente
LIGERAS TRAZAS: Si aparece una ligera opalescencia.
TRAZAS: Si la turbiedad es mayor.
CONTIENE: Cuando se forma un precipitado blanco. (Proteinuria de ms de 1 g/L).
Dosificacin: g/24h.
VALORES DE REFERENCIA PROTENA DE 24 HORAS
0,05 0,15 g / 24 horas.
Fuentes de Error:
1. No homogenizar bien las muestras de orina.
2. Nivel de adiestramiento del tcnico.
3. Limpieza de la cristalera.
4. Mala conservacin y recoleccin de la muestra.
5. Errores en los clculos.
6. Error en la medicin del volumen total.
7. Mala calibracin y manejo de equipo.
Evaluar casos clnicos

PRACTICA N 11
ANALISIS E INTERPRETACIN DE LIQUIDO AMNIOTICO
INTRODUCCION
El lquido amnitico es un fluido lquido que rodea y amortigua al embrin y luego al feto en desarrollo
en el interior del saco amnitico. Permite al feto moverse dentro de la pared del tero sin que las paredes
de ste se ajusten demasiado a su cuerpo. Tambin le proporciona sustentacin hidrulica. El lquido
amnitico es producido principalmente por la madre hasta las 17 semanas de gestacin. Es el que hace
posible los movimientos fetales. El saco amnitico crece y comienza a llenarse, principalmente con agua
dos semanas despus de la fertilizacin. Tras 10 semanas despus el lquido contiene protenas,
carbohidratos, lpidos y fosfolpidos, urea y electrolitos, todos los cuales ayudan al desarrollo del feto. En
los ltimos estudios de gestacin la mayor parte del lquido amnitico est compuesto por orina fetal.
La ruptura de aguas se produce cuando el saco amnitico libera su contenido. Cuando esto sucede
durante el parto al final de la gestacin, se le llama "ruptura espontnea de membranas". Si la ruptura
precede al trmino del parto, se le llama "ruptura prematura de membranas". La mayor parte de los
dems lquidos permanecen en el interior del tero hasta que el feto nace.
Patologas
El lquido amnitico alcanza su volumen mximo aproximadamente a las 34 semanas del embarazo,
cuando llega a un promedio de 800 ml. El defecto de lquido amnitico (oligohidramnios) o el exceso
(polihidramnios) puede ser la causa o el indicador de problemas para la madre y el feto. En ambos casos
la mayor parte de los embarazos continan con normalidad y el recin nacido viene al mundo de forma
saludable pero no siempre se da el caso. Los fetos que se han desarrollado en ambientes con poco
lquido amnitico pueden desarrollar contracturas de las extremidades, zopedad (torcimiento) de pies y
manos y tambin el desarrollo de una afeccin peligrosa para la vida llamada hipoplasia pulmonar. Si este
es el caso en un recin nacido, es decir, que sus pulmones son hipoplsicos, lo que significa que estos
rganos estn infradesarrollados y son pequeos, la situacin es potencialmente mortal y el neonato
puede fallecer poco despus del parto. En todas las consultas prenatales el obstetra o gineclogo debera
medir la altura fundal midindolo con cinta mtrica. Es importante que se mida adecuadamente la altura
fundal y que se registre para asegurar que el crecimiento fetal sea correcto y que se incremente el fluido
amnitico. El obstetra o gineclogo debera realizar tambin una ecografa rutinaria. El oligohidramnios se
puede producir por infeccin, disfuncin renal o malformaciones; tambin por intervenciones como la toma
de muestras de vellosidades corinicas y un patrn de ruptura prematura de membrana El
oligohidramnios se puede tratar en ocasiones con reposo en cama, rehidratacin oral e intravenosa,
antibiticos, esteroides y amnioinfusin.
El polihidramnios es un factor de riesgo que predispone al prolapso de cordn umbilical y en ocasiones es

un efecto secundario del embarazo macrosmico. El hidramnios se asocia con la atresia de esfago.
El patrn de ruptura prematura de membranas es un estado en el que el saco amnitico tiene fugas de
lquido antes de la 38 semana de gestacin. Esto puede estar provocado por una infeccin bacteriana o
por un defecto en la estructura del saco amnitico, el tero o el crvix. En algunos casos la fuga puede
cicatrizar espontneamente, pero en la mayor parte de los casos el parto comienza en 48 horas de la
ruptura de membranas. Cuando esto sucede es necesario que la madre reciba tratamiento para evitar la
posible infeccin del neonato.
La embolia de lquido amnitico es una complicacin obsttrica frecuentemente mortal que produce
coagulacin intravascular diseminada.
COLOR DEL LQUIDO AMNITICO.
VALOR CLNICO
Color Situacin asociada
Acrmico a pajizo Normal (lo que no excluye

eritoblastosis)
Amarillo Eritroblastosis
Verdoso (meconio) Hipoxia fetal (excepto durante el

embarazo temprano)

Oscuro a rojo marrn MUERTE FETAL
OBJETIVO
Aplicar e interpretar los resultados del anlisis de lquido amnitico
Definir cules son las principales patologas que se presentan en los anlisis de lquido amnitico.
PROCEDIMIENTO PARA CLASES: Evaluacin de resultados (casos clnicos).
Ojo: Para tomar en cuenta:
Valores normales: el lquido debe ser claro con cromosomas normales y no debe contener bilirubina,
meconio, bacterias o acetilcolinesterasa. Ms de 2 mg/100ml de creatinina. Debe haber presencia de
fosfatidilglicerol. Glucosa menos de 45 mg/100ml.
Factores que pueden alterar los resultados:
Mononucleosis infecciosa de la madre

Cirrosis
Cncer
Teratoma
Tumor de mama
Carcinoma gstrico
Carcinoma pancretico
Tirosinemia hereditaria de la madre
Sangre fetal en el lquido extrado
Materia fecal del feto en el lquido
PROCESAMIENTO DEL LQUIDO AMNITICO
Se obtiene entre 10-20 mL de lquido amnitico. Se observa el color y aspecto del lquido.
CENTRIFUGACIN
Sobrenadante: Anlisis bioqumico del lquido amnitico (conservar en oscuridad 2-8C hasta 24 horas
para bilirrubina en enfermedad hemoltica).
ANLISIS BIOQUMICOS
SCREENING PRENATAL
DEFECTOS DEL TUBO NEURAL (DTN)
La -fetoprotena (-FP) se encuentra ms aumentado en suero materno y lquido amnitico en

fetos con DTN abierto.
Su determinacin (habitualmente en suero materno) y valoracin del riesgo de DTN de la
gestante en base a la desviacin en ms de 2,5 MoM.
Actualmente se realiza este screening a todas las embarazadas alrededor de la 16 semanas
(antes no se detecta bien) para detectar DTN (anencefalia, espina bfida, meningocele).

PROTENAS
La concentracin de protenas como albmina, disminuyen con la edad gestacional. El fibringeno

est ausente en el lquido amnitico.
Tienen una concentracin 20-25 veces menor que en plasma materno.
La mayor parte procede del suero materno, pasando al lquido amnitico por pinocitosis.
Electroforticamente, son semejantes a las maternas.
La -feto protena originada en el hgado fetal, aumenta su concentracin hasta las 14 semanas,
luego disminuye.
Las principales protenas son ceruloplasmina, transferrina, IgG, IgA, IgM. IgG e IgA son de origen
materno, y la ltima por infecciones intratero(IgM rubola o toxoplasma.
COMPUESTOS NITROGENADOS NO PROTEICOS
Las concentraciones de urea, cido rico y creatinina aumentan con la gestacin, especialmente
por el aporte urinario fetal.
La medida de creatinina y la de cido rico tienen valor predictivo para la madurez fetal.
AMINOCIDOS
Su concentracin en lquido amnitico es un 50-75% menor que en plasma materno; disminuyen

con la edad gestacional.
Algunos de ellos, permitiran detectar tempranamente, algunas anomalas del desarrollo fetal.
LPIDOS
Su concentracin en el lquido amnitico vara con la edad gestacional:
Fosfatidilcolina (lecitina): aumenta gradualmente hasta las 34-35 semanas, despus de la cual se
incrementa abruptamente (embarazo a trmino representa el 70-75% de los fosfolpidos del lquido
amnitico).
Fosfatidilinositol: corren paralelos a los de la lecitina hasta las 34-35 semanas, momento en el que
representan el 20-25% de los fosfolpidos. Luego descienden y al llegar a trmino, representan el 15% de
los fosfolpidos.
Fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina y esfingomielina:presentes en concentraciones cercanas en

los comienzos del tercer trimestre. Despus de las 30-32 semanas se mantienen y luego caen, en tanto
que la lecitina continua aumentando.
Fosfatidilglicerol: No aparece en el lquido amnitico hasta las 36 semanas. A partir de este momento,
su concentracin se eleva rpidamente y ocupa el segundo lugar de los fosfolpidos en el lquido
amnitico despus de la lecitina.
ENZIMAS
Se han medido muchas en lquido amnitico, aunque su determinacin es de un valor clnico limitado.
LDH:
Cambia poco durante la gestacin, aunque se observan valores muy aumentados asociados a muerte
fetal.
ACETILCOLINESTERASA:

Es til en el diagnstico de los DTN; con electroforesis con gel separador se distinguen las isoenzimas de
otras; el lquido amnitico de fetos normales contiene una sola Acetilcolinesterasa con migracin lenta;
fetos con DTN tienen otra que migra ms rpido.
AMILASA:
Aumenta con la gestacin y se ha sugerido como medida de la madurez fetal, ya que aumenta
bruscamente despus de las 36 semanas.
CK:
Es ms alta en suero materno que en lquido amnitico, el doble ms o menos. La isoenzima CK-BB es la
principal, aumenta en casos de teratoma fetal y anencefalia
GGT Y 5-NUCLEOTIDASA:
Estn muy elevadas entre las 13-15 semanas, luego caen rpidamente entre 25-27 semanas. El resto del
tiempo ambas estn bajas.
FOSFATASA ALCALINA:
Aumenta con la edad gestacional y de forma patolgica en las preeclampsias
OTROS METABOLITOS
BILIRRUBINA:
La eritroblastosis fetal es una enfermedad hemoltica, consecuencia de una incompatibilidad sangunea

entre la madre y el feto (habitualmente es debido a madre Rh (-) tiene feto Rh (+), IgG madre pasan
barrera placentaria y destruyen hemates fetales causando hemlisis con un aumento de bilirrubina en el
lquido amnitico: hay relacin entre cantidad de bilirrubina y severidad de la enfermedad.
A450< 0,02; <0,025mg/dL
MADUREZ FETAL PULMONAR
Sndrome del Distrs Respiratorio (SDR) tambin llamado enfermedad de la membrana hialina.
Es un problema relativamente frecuente en nios nacidos prematuros, estos tienen una incidencia de
SDR del 10-15% (<37sem o <2500g); y se calcula que globalmente afecta al 1% de todos los nacidos
vivos.
Estos nios requieren oxgeno extra y ventilacin mecnica.
Existe una deficiencia de surfactante pulmonar, que recubre el epitelio alveolar y permite que los
pulmones cambien de volumen por reduccin de la tensin superficial de la pared alveolar en la
expiracin evita el colapso alveolar.
Las situaciones habituales por las que se solicita el test de madurez fetal son:
Para realizar cesrea cuando la edad gestacional es incierta.

Para anticipar nacimiento en caso de embarazos de alto riesgo (enfermedad hemoltica, Diabetes
mellitus, preeclampsia, parto prematuro)
DETERMINACIN DE CREATININA VERDADERA:
1.5-2.0 mg/dL (132-176.8 mol/L)

PRACTICA N 12
EXAMEN GENERAL DE ORINA (ECO)
INTRODUCCIN

Los anlisis de orina realizados en el laboratorio clnico, puede proporcionar una informacin amplia,
variada y til del rin de un individuo y de las enfermedades sistmicas que pueden afectar este rgano
excretor. Por medio de este anlisis, es posible elucidar tanto desrdenes estructurales (anatmicos)
como desrdenes funcionales (fisiolgicos) del rin y del tracto urinario inferior, sus causas, y su
pronstico. La realizacin cuidadosa del examen de orina, por parte del laboratorio, ayuda al diagnstico
diferencial de numerosas enfermedades del sistema urinario. Usualmente, los datos de laboratorio
obtenidos por medio de este anlisis, se logran sin dolor, dao o tensin para el paciente. Esta es la razn
por la cual, la realizacin e interpretacin correcta del anlisis de orina, por parte del laboratorio
permanecer siempre como una herramienta esencial de la prctica Clnica.
En la actualidad, se practican tres tipos de exmenes de orina: anlisis de orina por tira hmeda,
empleado generalmente por los mdicos en sus consultorios y por los pacientes en sus casas; tamizaje
de anlisis hmedo de la orina, comnmente llamado anlisis bsico o rutinario de orina; y citodiagnstico
de la orina, que es una evaluacin citolgica especializada del sedimento urinario que correlaciona con
los anlisis realizados por medio de la tira reactiva. El anlisis de orina realizado con la tira hmeda es un
ensayo de primera etapa para la deteccin y monitoreo de pacientes con anormalidades qumicas. Los
pacientes diabticos a menudo monitorean permanentemente su propia enfermedad, buscando signos de
glucosuria, proteinuria, e infecciones del tracto urinario, mediante pruebas realizadas en casa.
El anlisis de orina hmedo o rutinario, proporciona, a costos razonables, un tamizaje adecuado para la
deteccin de anormalidades qumicas y morfolgicas presentes en la orina.
Este procedimiento se compone de dos partes:
1) un anlisis macroscpico, en el cual se determinan las caractersticas fisicoqumicas (apariencia,

gravedad especfica y la medicin de los constituyentes qumicos por medio de la tira), y
2) un examen microscpico del sedimento, en campo claro o contraste de fases, para verificar hematuria,
piuria, cilindruria, cristaluria, y otros signos. Por medio de este simple examen de orina, un
uromicroscopista experimentado puede detectar y monitorear muchas entidades que afectan al rin y al
tracto urinario inferior.
Recientemente, el citodiagnstico de la orina ha ganado aceptacin mdica como un anlisis nuevo, ms

sensible en el diagnstico de ciertas patologas renales y del tracto urinario inferior. Como este anlisis
requiere mayor inversin de tiempo debido a la preparacin de coloraciones, debe reservarse para
pacientes sintomticos con enfermedades renales, del tracto urinario inferior, o neoplasias.
OBJETIVOS
Establecer el mtodo adecuado de recoleccin de especmenes de orina para un anlisis

especfico.
Discutir las propiedades fsicas ms importantes de la orina y sus relaciones con la enfermedad.
Identificar los constituyentes qumicos ms importantes de la orina, como cuantificarlos y como
confirmar su presencia.
Describir mtodos adecuados para estandarizacin de los especmenes de orina y de los
hallazgos microscpicos ms comunes.
FUNDAMENTO
El anlisis de orina rutinario, se basa en un procedimiento que se compone de dos partes: 1) un anlisis
macroscpico, en el cual se determinan las caractersticas fisicoqumicas (apariencia, gravedad especfica
y la medicin de los constituyentes qumicos por medio de la tira como protenas, glucosa, cetonas, pH), y
2) un examen microscpico del sedimento, en campo claro o contraste de fases, para verificar hematuria,
piuria, cilindruria, cristaluria, y otros signos.
PREPARACIN
1. MUESTRA CLNICA
El cuidado en la recoleccin de la orina y su entrega rpida en el laboratorio, son cruciales para

obtener una informacin ptima. La orina debe ser colectada en un recipiente limpio, estril, que
tenga un cierre seguro para prevenir posibles derramamientos, evaporacin o contaminacin.
Estos recipientes deben rotularse con el nombre del paciente, fecha y hora de
recoleccin.
Para que los datos del uroanlisis sean precisos, es esencial que la orina sea examinada dentro de
las dos horas siguientes a su recoleccin o preservada de alguna manera, usualmente por
refrigeracin (2 a 8 C). Se pueden usar fijadores o preservativos adecuados, siempre y cuando se
entiendan claramente sus efectos sobre la orina y sobre los ensayos en ella realizados. Si la orina es
recolectada sin preservativos y permanece a temperatura ambiente se empezar a descomponer.
Los preservativos actan impidiendo los cambios qumicos asociados a la descomposicin y
previniendo el crecimiento y metabolismo de los microorganismos. El tolueno, fenol, timol y
preservativos cidos son usados frecuentemente para los anlisis qumicos de la orina. Otras formas
de reservacin incluyen el ajuste del pH y la proteccin de la luz. Para preservar las estructuras
celulares puede emplearse etanol (95%), hay tambin disponibles fijadores comerciales como
Mucolex. Los laboratorios son responsables de la seleccin adecuada del tipo y cantidades de
preservativo de la de orina necesarios para preservar las estructuras celulares.
Para cuantificar diversos aspectos de la funcin renal, frecuentemente se emplean anlisis de orina
recolectada durante un determinado perodo de tiempo.
La orina debe reflejar la excrecin en un intervalo de tiempo medido con precisin. Estos
especmenes no deben incluir la orina que se encuentra en la vejiga antes de la iniciacin de la
recoleccin. En la toma de muestras de orina de 24 horas, se Debe desechar la orina de la primera
miccin de la maana del da en el cual se inicia la recoleccin y recolectar toda la orina producida
durante 24 horas, incluyendo la primera orina de la maana del segundo da.
La primera orina de la maana es usualmente la mejor para el anlisis porque es la orina ms

concentrada.
Las muestras deben estar libres de secreciones vaginales u otra clase de partculas extraas.
Este procedimiento puede modificarse si no es necesario el examen bacteriolgico de la muestra. La

recoleccin del chorro medio sin el lavado previo y sin usar un envase estril, proporciona una
muestra satisfactoria para el examen de rutina.
4.2 REACTIVO
Reactivo (Tincin de Sternheimer-Malbin) comercial
TINCIN DE STERNHEIMER MALBIN
Para sedimento urinario. Facilita la identificacin de las clulas.
Mtodo
Se vuelve a suspender el sedimento en el tubo de centrifuga y se aade una gota del colorante; se
espera tres minutos. Luego se pone una gota sobre un portaobjetos, se cubre y se examina al
microscopio.
Resultados
Hemates: Color rosado
Leucocitos: Prpura oscuro con ncleo rojo oscuro.
Granulaciones: Citoplasmticas violetas.
Clulas brillantes: Son leucocitos neutrfilos incoloros o de color azul claro.
Son caractersticos de polinefritis.
Clulas renales: Ncleo prpura oscuro, con un estrecho citoplasma de color prpura-anaranjado.
Clulas vesicales: Ncleo azul oscuro y citoplasma azul claro.
Clulas epiteliales de descamacin: Ncleo prpura, citoplasma rosado o violeta.
Cilindros hialinos: Rosado o prpura claro.
Cilindros finamente granulosos: Cilindros rosados, con granulaciones de color prpura.
Cilindros grasos: Color rosado, gotas de grasa incoloras.

Cilindros hemticos: Cilindro rosado, hemates incoloros o lila claro.
Cilindros creos: Prpura claro u oscuro.
4.3 EQUIPO
Microscopio ptico.
Centrfuga clnica.
4.4 MATERIAL
Envases desechables para orina.
1 probeta graduada de 50 ml.
4 tubos para centrifuga de 13 x 100mm.
2 tubos de ensayo de 13 x 100mm.
4 portaobjetos.
4 cubreobjetos.
2 pipetas serolgicas graduadas de 10 ml.
2 pipetas Pasteur.
2 bulbos de goma.
Tiras reactivas comerciales.
Colorante de Sternheimer-Malbin.
5.0 PROCEDIMIENTO
EXAMEN FSICO DE LA ORINA
Volumen.
El volumen urinario est influenciado por la ingesta de lquidos; por los solutos excretados,
principalmente, sodio y urea; por la prdida de fluidos en la transpiracin y la respiracin; y por el estado
de los sistemas cardiovascular y renal. Normalmente un adulto excreta de 750 a 2000 mL en 24 horas.
Aunque el volumen de orina de un espcimen recolectado al azar no tiene importancia clnica, el volumen
del espcimen recibido debe ser anotado para efectos de documentacin y estandarizacin.
Olor.
Una orina normal fresca no tiene mal olor. Un olor desagradable, puede indicar que el espcimen es
demasiado viejo para obtener un anlisis preciso. Un olor ftido en un espcimen recolectado desde hace
ms de dos horas (y no preservado o refrigerado) indica que el espcimen es inadecuado. El olor puede
tambin dar seales de ciertas anormalidades de la orina. Un olor parecido al amoniaco, es sugestivo de
presencia de bacterias degradadoras de la urea, un olor a frutas indica la presencia de acetona (cetonas),
un olor dulce es sugestivo de la presencia de glucosa u otros azcares, un olor ftido es sugestivo de pus
o inflamacin. El olor es importante en la deteccin clnica de la enfermedad llamada orina de miel de
maple (un defecto metablico congnito)
Apariencia (color y turbidez).
El color de la orina est determinado, en gran medida, por su grado de concentracin. Las orinas
normales varan ampliamente de colores, desde incoloras hasta amarillo oscuro. La interpretacin del
color es subjetiva y vara segn el laboratorio que la examine. Para que el analista describa
adecuadamente el color de la orina, puede emplear como puntos de referencia una escala estandarizada
de colores, evitando el uso de trminos ambiguos como pajizo o sangriento.

La orina roja es, tal vez, la coloracin de mayor importancia clnica. Este color puede ser producido por
hemoglobina urinaria o mioglobina, eritrocitos intactos, eritrocitos hemolisados, o hemoglobina libre
(hemlisis). En la glomerulonefritis aguda el color caracterstico de la orina es pardo rojizo. Normalmente
una orina fresca es clara. Cuando la orina se deja reposar, se precipitan cristales amorfos, generalmente
uratos, produciendo turbidez. La turbidez de la orina debe ser registrada y explicada mediante la
evaluacin microscpica.
Gravedad especfica.
La gravedad especfica de la orina es una medida parcial de la capacidad del rin para concentrar orina.
Su rango normal es de 1.003 a 1.035 g/mL. Los valores iguales o superiores a 1.020 indican una buena
funcin renal y la excrecin de una cantidad aumentada de solutos disueltos excretados por los riones.
Valores de densidad especfica iguales o superiores a 1.035 indican la presencia de solutos extraos, lo
cual debe ser investigado. Una disminucin de la gravedad especfica se observa en pacientes quienes
usan diurticos.
Las sustancias de alto peso molecular afectan la gravedad especfica en un grado mayor que la producida
por simples cristaloides. Esto es importante cuando la orina contiene molculas grandes como glucosa,
protenas o medios de contraste radiogrficos. Cuando se presentan niveles elevados de glucosuria o
proteinuria, es necesario aplicar factores de correccin para ajustar la gravedad especfica a un valor ms
representativo; se debe restar 0.004 por cada 10 g/l de glucosa y 0.003 por cada 10 g/l de protena.
Valores de 1.040 o superiores estn asociados con la presencia de medios de contraste radiogrficos o
preservativos.
La gravedad especfica se puede medir empleando un hidrmetro y un recipiente apropiado. El uso de los
hidrmetros tiene varias limitaciones:
1. Requieren un volumen grande de orina (10 a 15 mL);

2. Estn calibrados para ser usados a 20 C, si la orina no est a esta temperatura de referencia se
deben aplicar factores de correccin;
3. Los hidrmetros no pueden ser recalibrados. Por estas razones, los laboratorios ya no emplean
estos elementos.
Osmolalidad.
El rin normal es capaz de producir orina con un rango de 50 a 1200 mOs/Kg.
Los rangos de la osmolalidad en orina oscilan desde 1/6 a cuatro veces la osmolalidad del suero normal
(280-290 mOs/Kg). La osmolalidad es medida por un osmmetro.
La osmolaridad est determinada por el nmero de partculas por unidad de masa, mientras la gravedad
especfica es un reflejo de la densidad (tamao o peso) de las partculas en suspensin
Generalmente la gravedad especfica y la osmolaridad son directamente proporcionales de un modo

lineal, aunque hay excepciones importantes. Por ejemplo, si a un paciente se le administran medios de
contraste yodados por pielografa intravenosa, la gravedad especfica puede elevarse hasta 1.070 o
1.080, mientras que la osmolalidad permanecer dentro de los lmites normales.
Las partculas de contraste tienen una masa lo suficientemente grande para elevar la gravedad
especfica, pero hay muy pocas molculas presentes que puedan producir un notable incremento en la
osmolalidad.
EXAMEN QUMICO DE LA ORINA
Anlisis por tira reactiva.
Los anlisis por tira reactiva han permitido a los laboratorios de uroanlisis producir resultados qumicos
semicuantitativos de una manera rpida, exacta y eficiente. En general, los anlisis de orina
adecuadamente realizados por medio de tiras reactivas, son sensibles, especficos y econmicos.
Los anlisis realizados por medio de tiras reactivas deben efectuarse en orinas bien mezcladas y
equilibradas a la temperatura ambiente. Cada parmetro qumico debe ser evaluado en un intervalo de
tiempo especfico, de acuerdo a lo indicado en las instrucciones del fabricante. Deben tomarse del
envase, solamente el nmero de tiras requerido para los anlisis inmediatos y el envase debe taparse
nuevamente asegurando que la tapa quede bien ajustada. Las tiras reactivas deben ser almacenadas en
un lugar fresco (no refrigeradas). El medio ambiente debe estar libre de humedad. Nunca se deben usar
tiras para orina caducadas o expuestas al aire.
Despus de sumergir la tira reactiva en la orina, se debe remover el exceso de orina golpeando la tira
suavemente en el borde del recipiente que contiene el especimen. Se debe comparar individualmente la
reaccin de cada zona reactiva con su correspondiente en la carta de colores, bajo una iluminacin
adecuada. Los resultados positivos de las tiras reactivas pueden requerir confirmaciones por mtodos
qumicos y microscpicos. La informacin proporcionada por los fabricantes debe ser revisada para
identificar fuentes de inhibidores y resultados falsos positivos y negativos.
pH Urinario.
Aunque el mtodo estndar para la medicin del pH emplea electrodos de vidrio, el pH urinario,
usualmente, es medido con indicador de papel, debido al hecho de que pequeos cambios en el pH son
de poca importancia clnica. La mayora de los laboratorios de uroanlisis emplean tiras reactivas multitest
con dos indicadores, rojo de metilo y azul de bromotimol. Estos indicadores proporcionan un rango de pH
de 5.0 a 9.0, el cual se manifiesta por un cambio de color de naranja (cido) a verde y azul (alcalino). El
rango de pH urinario es 4.7 a 7.8. Las muestras de orina extremadamente cidas o alcalinas, usualmente
indican especmenes mal recolectados.
El pH es importante para el manejo clnico de las piedras o cristales.
Protenas.
Las personas sanas pueden tener una excrecin diaria de protenas de 100
mg/da, una fraccin muy pequea del contenido de protenas plasmticas. La mayora de la protena en
la orina es albmina que pasa la membrana glomerular, pero tambin pueden estar presentes protenas
de peso molecular pequeo como las globulinas. Una vez filtradas las protenas son casi completamente
reabsorbidas en el tbulo proximal. La proteinuria, por lo tanto, puede ser el resultado tanto de un
incremento en la filtracin como de una disminucin en la reabsorcin (funcin tubular).
Las tiras reactivas son un procedimiento de tamizaje para la proteinuria. Como la especificidad de las tiras
reactivas est limitada a la deteccin de albmina, es altamente recomendable que el laboratorio procese
simultneamente una prueba por tira reactiva y una prueba de precipitacin por cido para la deteccin de
todos los tipos de protenas. Las tiras reactivas son sensibles al pH y dependen de la presencia de
protenas para la generacin de color. La presencia de la protena en la tira cambia el pH del medio de
contraste impregnado en la zona reactiva, producindose el cambio de color pH 3
Azul de tetrabromofenol Resultados positivos (azul verdoso)
Protena pH 3
Azul de tetrabromofenol Resultados negativos (amarillo)
Sin protena
Un resultado positivo o dbilmente positivo debe ser confirmado por otros mtodos ms especficos como
el cido tricloroactico o el cido sulfosaliclico.
Un resultado dbilmente positivo y uno fuertemente positivo puede indicar la presencia de frmacos o
protenas de Bence Jones.
Azcares.
1. Ensayos enzimticos.
El ensayo de la tira reactiva es un excelente anlisis especfico para glucosa.
Detecta la oxidacin de la glucosa a cido glucnico:
Glucosa oxidasa
Glucosa + Oxgeno del aire ambiental Acido glucnico y perxido de hidrgeno

Peroxidasa
Perxido de Hidrgeno + Cromgeno Cromgeno oxidado + H2O
Una clase de tira reactiva emplea o-toluidina como el cromgeno indicador de la reaccin.
2. Reduccin del Cobre
Calor
Iones Cpricos + Glucosa Oxido cuproso + Hidrxido cuproso (o sustancias reductoras)
lcali (rojo) (amarillo)
La tableta Clinitest (Ames Division) brinda la posibilidad de detectar otros azcares. Este es un ensayo
basado en la reduccin del cobre que mide el total de sustancias reductoras presentes en la orina.
Adems de glucosa, el Clinitest puede detectar azcares como galactosa, lactosa y pentosa.
Cetonas.
El trmino cuerpos cetnicos incluye tres componentes qumicos diferentes pero muy relacionados: cido
acetoactico, cido beta hidroxibutrico y acetona.
Los ensayos realizados por medio de tiras reactivas emplean la reaccin de
nitroprusiato de sodio que detecta acetona y cido acetoactico pero no beta hidroxibutrico, el cuerpo
cetnico primario. Es importante saber que el reactivo de nitroprusiato de sodio reacciona principalmente
con el cido acetoactico; la acetona tiene solo un 20% de reactividad comparada con el cido
acetoactico:
pH alcalino
Acido acetoactico + Nitroprusiato de sodio + Glicina Color prpura
La determinacin de cetonas es importante en el monitoreo de la diabetes y de la cetoacidosis y debe

realizarse siempre que se determinen azcares.
Sangre y mioglobina.
Una orina roja indica usualmente la presencia de eritrocitos, hemoglobina o mioglobina. La hematuria, a
menudo, representa una combinacin de eritrocitos intactos (ms de 5 por campo de alto poder),
eritrocitos fragmentados y hemoglobina libre. La hematuria gruesa o macroscpica implica hemorragia o
sangrado fresco, lo que en un medio de orina cida, da como resultado una apariencia de roja a parda,
turbia, o ahumada.
El mtodo empleado por la tira reactiva para determinar hemoglobina o mioglobina se fundamenta en una
actividad semejante a la de las peroxidasas:
Mioglobina o hemoglobina
Perxido de Hidrgeno (H2O2) + Cromgeno Cromgeno oxidado (azul) + H2O
Un ensayo positivo indica la presencia de hematuria, hemoglobinuria o mioglobinuria, siendo necesario un

anlisis microscpico para confirmar la presencia de eritrocitos. La presencia en la orina de agentes
oxidantes como los yoduros y bromuros, puede causar resultados falsos positivos; grandes cantidades de
cido ascrbico (usado en algunos antibiticos) pueden producir resultados falsos positivos en algunas
tiras reactivas.
La mioglobina es una porfirina ferrosa similar a la hemoglobina; se encuentra, comnmente, en la orina en

pacientes con traumas severos que involucran destruccin muscular. Cuando la mioglobina es liberada a
la circulacin, es rpidamente excretada por el rin. Al igual que la hemoglobina, su presencia producir
orinas de apariencia rosada a roja.
Bilirrubina.
Orinas espumosas, de color amarillo a pardo, u oscuras son sugestivas de la presencia de bilirrubina
conjugada. La orina normal no contiene bilirrubina. Los pacientes ictricos con enfermedad hepatocelular
como hepatitis o enfermedad obstructiva como cirrosis biliar pueden tener bilirrubina conjugada en la
orina.
El mtodo empleado por las tiras reactivas para determinar bilirrubina se basa en la reaccin de diazonio.
cido
Bilirrubina glucornido + Sal de diazonio Azobilirrubina (pardo)
Los resultados negativos de orinas sospechosas y los resultados positivos cuestionables provenientes de
orinas coloreadas, deben ser confirmados empleando tabletas de Ictotest (Ames Division, Miles
Laboratories). El Ictotest emplea la misma reaccin de diazoacin que las tiras reactivas. Se pueden
encontrar resultados falsos negativos, en orinas no frescas porque la bilirrubina urinaria puede
hidrolizarse u oxidarse por accin de la luz.
Urobilingeno.
El urobilingeno es un compuesto coloreado, resultado de la reduccin de la bilirrubina por accin de las

bacterias en el intestino. Las orinas normales contienen pequeas cantidades de urobilingeno. El
urobilingeno se encuentra disminuido en nios deficientes en bacterias intestinales; en pacientes
despus de la administracin de antibiticos que reducen la flora intestinal, y en pacientes con
enfermedades obstructivas hepticas. Se encuentra un aumento del urobilingeno en pacientes con
anemias hemolticas (aumento de formacin de bilirrubina) y disfuncin heptica.
El mtodo empleado por las tiras reactivas para la determinacin del urobilingeno vara segn el
fabricante. Algunos emplean la reaccin de Erlich, usando p-dimetilaminobenzaldehdo en una reaccin
simple de color con el profobilingeno. Esta reaccin no es especfica para urobilingeno, pudindose
encontrar resultados falsos positivos con otros compuestos que tambin reaccionan con el reactivo de
Ehrlich. Otros emplean una reaccin especfica para el urobilingeno: el urobilingeno reacciona con un
compuesto de diazonio producindose un color rojo.
Para la determinacin del urobilingeno es necesario un espcimen fresco porque el compuesto es

sensible a la luz. El espcimen preferido para la determinacin cuantitativa del urobilingeno urinario es
una orina recolectada durante las dos primeras horas de la tarde. Este tiempo de recoleccin se debe a
los patrones de excrecin diurna del urobilingeno.
Nitritos.
El ensayo de nitritos es empleado en los laboratorios de uroanlisis para detectar bacteriuria. El mtodo
empleado en las tiras reactivas para determinar nitritos se basa en la reduccin de nitratos a nitritos por la
accin enzimtica de ciertas bacterias presentes en la orina. En un pH cido los nitritos reaccionan con el
cido p-arsanlico formando un compuesto de diazonio, el cual a su vez reacciona con N-(1- naftil)
etilndiamina produciendo un color rojo. El ensayo de nitritos debe ser realizado en especmenes
recolectados en la primera orina de la maana o en una muestra de orina que haya sido recolectada
despus de 4 horas o ms, a partir de la ltima evacuacin de la vejiga, con el fin de permitir que durante
este tiempo los microorganismos metabolicen el nitrato dentro de la vejiga. En orinas pasadas o viejas, el
ensayo de nitritos puede ser positivo como resultado de la contaminacin con bacterias despus de la
miccin. La prueba de nitritos es especfica para organismos gram negativos, sin embargo, se pueden
obtener resultados falsos negativos si estn presentes microorganismos como enterococos,
estreptococos o estafilococos.
Esterasa leucocitaria.
La presencia de leucocitos (piuria) es un indicador de inflamacin clnicamente importante. El mtodo

empleado para la determinacin de leucocitos intactos y lisados en las tiras de orina est basado en la
presencia de esterasas intracelulares. Estas enzimas catalizan la hidrlisis de los steres, liberando
componentes que son luego empleados en una reaccin de color. La intensidad de la reaccin de color es
directamente proporcional a la cantidad de leucocitos presentes en el espcimen. La presencia de
tricomonas y agentes oxidantes pueden producir falsos positivos.
Melanina.
Las orinas normales no contienen melanina. La melanina se encuentra en orinas de pacientes con
melanoma maligno. Los pacientes con esta neoplasia maligna excretan precursores incoloros de
melanina (melangenos), los cuales al ser expuestos al aire se polimerizan formando un pigmento oscuro
de melanina.
Los anlisis para tamizaje emplean cloruro frrico que oxida los melangenos a melanina, la cual vuelve
la orina a un color pardo oscuro.
EXAMEN MICROSCPICO DE ORINA
Una identificacin microscpica precisa del sedimento urinario es importante para el reconocimiento
temprano de infecciones, procesos inflamatorios, y neoplasias que pueden afectar el tracto urinario. Est
en debate s todos los especmenes de orina se deben someterse rutinariamente al anlisis microscpico,
el cual exige mayor inversin de tiempo. En su lugar, la mayora de los trabajadores del laboratorio, estn
de acuerdo en que el examen microscpico de orina solo debe practicarse a pacientes sintomticos,
cuando el mdico lo requiera especficamente y cuando se encuentre un anlisis macroscpico anormal,
es decir, cuando se encuentre hematuria, proteinuria o piuria (resultado de nitratos o esterasa positivos).
Microscopa de campo claro de una orina no teida.
La microscopa de campo claro no coloreada emplea luz reducida para delinear los elementos ms
translcidos de la orina, como, cilindros hialinos, cristales y filamentos de moco.
La identificacin precisa de leucocitos, macrfagos, clulas del epitelio tubular renal, y clulas que
contienen inclusiones virales puede ser muy difcil en preparaciones no coloreadas. Para confirmar los
resultados deben emplearse tcnicas citolgicas y preparaciones teidas.
Procedimiento
La orina debe examinarse mientras est fresca, algunas clulas y cilindros pueden desintegrarse en un
lapso de una a tres horas. La refrigeracin de 2 a 8 C por 48 horas, usualmente previene la
desintegracin de las clulas y entidades patolgicas. Con propsitos de estandarizacin, cada
espcimen de orina debe concentrarse de diez a veinte veces. El examen se realiza de la siguiente
manera:
1. Mezcle bien el espcimen.
2. Ponga un volumen fijo (10, 12, 15 mL) de orina en un tubo de centrfuga graduado.
3. Centrifugue a 1500 rpm o aproximadamente 80 G por 5 minutos.
4. Extraiga el sobrenadante por decantacin cuidadosa o aspiracin hasta un volumen fijo: 1ml y 0.4 mL,
son los ms comunes. Resuspenda el sedimento golpeando suavemente en el fondo del tubo.
5. Ponga una gota el sedimento resuspendido en un rea de una lmina estandarizada.
6. Examine con bajo poder (40x) y luz atenuada. Ajuste el enfoque fino permanentemente mientras se
explora al azar el rea cubierta. Durante la revisin evale el espcimen en busca de clulas
epiteliales transicionales y escamosas, cristales, moco, bacterias, levaduras y artefactos. Elabore el
reporte de acuerdo a los protocolos del laboratorio. La identificacin posterior de cilindros, clulas
epiteliales renales, eritrocitos y leucocitos debe ser refinada empleando el objetivo de alto poder.
7. Examine, al menos, diez campos empleando luz tenue. Asegrese de examinar los bordes porque a
menudo los cilindros se encuentran a lo largo de los bordes del cubre objeto. Los cristales anormales,
cuando estn presentes, deben contarse con el objetivo de bajo poder. Una bacteriuria visible en bajo
poder debe ser reportada, por lo menos, con 2+.
8. Examine, al menos, diez campos con alto poder (40x) y reporte con valores numricos eritrocitos,
leucocitos, y clulas del epitelio tubular renal.
9. Reporte todos los conteos (promedio de 10 campos) y evale cualitativamente de acuerdo a la

terminologa estandarizada.
Eritrocitos.
Una orina normal, examinada con objetivo de alto aumento, no debe contener ms de unos cuantos
eritrocitos. Estas clulas aparecen en la orina despus de lesiones vasculares o trastornos del rin o del
tracto urinario inferior. La presencia de eritrocitos acompaada de cilindros hemticos o eritrocitos
dimrficos es sugestiva de sangrado del parnquima renal o del glomrulo. La deteccin urinaria de
eritrocitos dimrficos, especialmente acantocitos, es un marcador morfolgico importante de sangrado
glomerular o tubular. Su cuantificacin ayuda en el diagnstico y manejo del paciente. Cuando se
examinen orinas de mujeres, es importante evitar la contaminacin con sangre menstrual.
Los eritrocitos miden, aproximadamente, 7 m de dimetro, tienen forma de discos biconcavos los cuales
aparecen de un color amarillo plido cuando se examinan bajo microscopa de campo claro. En
ocasiones, las tiras reactivas pueden detectar hemoglobina en ausencia de eritrocitos en el examen
microscpico. Una posible explicacin de esta discrepancia es la presencia de orinas alcalinas o
hipotnicas, ambas pueden causar lisis de los eritrocitos. En ausencia de estas condiciones, es muy
sugestivo que el pigmento que aparece en la orina (puede ser hemoglobina o mioglobina) se origine por
filtracin desde la sangre.
Leucocitos.
La velocidad de excrecin normal de eritrocitos en la orina es de 1 leucocito por cada 3 campos con
objetivo de alto aumento, 3000 clulas/mL, o ms de 200,000 clulas/hora. Un elevado nmero de
leucocitos (piuria) est asociado a numerosos procesos inflamatorios e infecciosos del tracto urinario. La
mayora de los leucocitos vistos por microscopa de campo claro son neutrfilos segmentados.
La identificacin de linfocitos, clulas plasmticas, y eosinfilos requiere de coloraciones especiales.
Se ha mostrado que una velocidad de excrecin en exceso de 400,000 clulas/hora siempre indica una
infeccin del tracto urinario. Esta velocidad corresponde a ms de 10 neutrfilos por campo de alto poder.
Los pacientes con infecciones activas del tracto urinario superior tienen, frecuentemente, ms de 50
neutrfilos por campo de alto poder o una velocidad de excrecin de leucocitos que excede 2 o an 3
millones/hora.
Clulas del epitelio tubular renal.
En el nefrn estn alineados varios tipos de clulas del epitelio tubular renal y las clulas enfermas o
viejas estn constantemente siendo arrojadas a la orina.
Aunque ellas representan la exfoliacin renal real, la presencia de ms de dos clulas del epitelio tubular
renal por campo de alto aumento indican dao o lesin activa de los tbulos renales.
Hay grandes dificultades en la identificacin precisa de las clulas de los tbulos renales, especialmente,
para diferenciarlas de las clulas mononucleares comnmente encontradas en la orina. Por microscopa
de campo claro, las clulas tubulares renales son poligonales y de tamao ligeramente menor que los
leucocitos.
Cuerpos grasos ovales.
Los cuerpos grasos ovales son clulas del epitelio tubular renal que estn llenas de lpidos absorbidos o
que han sufrido cambios degenerativos celulares. A menudo los cuerpos grasos ovales son asociados con
proteinuria y lipiduria y son caractersticos del sndrome nefrtico y diabetes mellitus.
Clulas epiteliales de transicin.
En la orina normal se pueden encontrar unas pocas clulas de transicin
(uroteliales). Un gran nmero de clulas transicionales puede indicar procesos inflamatorios de la vejiga,
cateterizacin o estados patolgicos malignos. Por microscopa de campo claro, las clulas transicionales
aparecen redondas u ovaladas, miden de 40 a 60 m, y tienen un ncleo localizado centralmente. Los
bordes citoplsmicos de esas clulas aparecen engrosados y rgidos. Cuando los ncleos de las clulas
transicionales llegan a agrandarse o a tornarse irregulares, se recomienda emplear tcnicas citolgicas
con el fin de detectar enfermedades malignas del sistema urinario.
Clulas epiteliales escamosas.
Las clulas epiteliales escamosas se alinean en la porcin distal del tracto urinario inferior y en el tracto
genital femenino. Las clulas escamosas son las clulas ms grandes encontradas en la orina. Tienen un
citoplasma grande y plano con un ncleo pequeo. Frecuentemente, una o ms hileras de esas clulas
pueden plegarse. La presencia de clulas escamosas en la orina usualmente indica contaminacin
(vaginal, en mujeres y uretral en hombres no circuncidados) o metaplasia escamosa de la vejiga, y
representan el tipo menos importante de clulas epiteliales encontradas en la orina.
Fragmentos de tejidos en la orina.
En la orina, pueden observarse algunos conglomerados o fragmentos de material de apariencia slida.

Debido a su gran tamao, este material es identificado en la inspeccin inicial de la orina. Es de color
generalmente blanco o bronceado. Es muy importante establecer la identidad de este material para un
diagnstico seguro. Esto implica transferirlo a un fijador apropiado con el fin de preservarlo para una

evaluacin citolgica o histolgica. La necrosis papilar renal o los tumores de la vejiga son las entidades
ms frecuentemente responsables de desprender grandes fragmentos de tejido en la orina.
Espermatozoides.
Los espermatozoides pueden ser fcilmente reconocidos en la orina de un hombre despus de la

eyaculacin o en la orina de una mujer por contaminacin vaginal despus del coito. Su identificacin es
de limitada importancia clnica y la presencia de espermatozoides, generalmente, no es reportada.
Cilindros renales.
Los cilindros renales (urinarios) son estructuras cilndricas que se organizan en el nefrn y su importancia
proviene de su localizacin. Estn formados por uromucoide (mucoprotena de Tamm-Horsfall), que est
siempre presente en la orina, usualmente en suspensin. Este uromucoide es producido por las clulas
del epitelio tubular renal de la seccin ascendente del asa de Henle. Los cilindros se forman como
consecuencia del estancamiento de la orina y de la precipitacin del uromucoide. El incremento en la
concentracin de protenas, sales, y un pH urinario bajo son algunos de los factores que contribuyen a su
formacin. Debido a que la precipitacin de esta protena depende de la concentracin y composicin de
la orina, los cilindros se forman ms fcilmente en la porcin distal del nefrn y en los ductos colectores
del rin, donde la orina es ms concentrada. En pacientes con protena de Bence Jones (mieloma
mltiple), los cilindros pueden formarse en los tbulos convolucionados proximales.
Estas formaciones cilndricas presentes en la orina reflejan las formas (largas o cortas) y dimetros
(delgados y gruesos) de los lmenes de los tbulos renales en donde se formaron. Su nmero y
propiedades cuantificables aportan valiosos indicios sobre la naturaleza de la enfermedad del parnquima
renal.
Microscpicamente, los cilindros se caracterizan por la apariencia de su matriz (hialina, granular, crea),
por los constituyentes celulares (eritrocitos, leucocitos, o clulas del epitelio tubular renal) o por el tipo de
material particulado embebido en la matriz (grnulos finos, gruesos o fibrina).
La identificacin exacta de los cilindros, especialmente de los tipos celulares, es difcil cuando se hace en
preparaciones hmedas no coloreadas visualizadas en microscopios bajo la luz directa o campo claro. Se
necesita un microscopista hbil para evitar las interpretaciones errneas. La visualizacin de los cilindros
mejora con el empleo de microscopios con contraste de fases, de filtros de contraste o coloraciones
especiales.
Grasas.
Las grasas se encuentran en la orina de pacientes quienes han presentado embolismo graso despus de
lesiones severas con aplastamiento seo, degeneracin grasa del rin o sndrome nefrtico. La grasa
aparecer en la superficie de la orina recolectada en la ltima parte de la miccin. En el sedimento
urinario se pueden encontrar clulas epiteliales vacuoladas. La identificacin de las gotas de grasa se
facilita empleando coloraciones especiales para grasa como Oil Red O o Sudn III.
PRACTICA N 13
INTERPRETACION DE ANTIBIOGRAMAS
INTRODUCCIN
La interpretacin del antibiograma se fundamenta en el anlisis de los datos de sensibilidad, la deteccin

de mecanismos de resistencia, la farmacologa del antimicrobiano y los resultados derivados de su
utilizacin clnica. Los parmetros farmacocinticos y farmacodinmicos (PK/PD) varan dependiendo del
rgimen teraputico, la formulacin utilizada y la va de administracin. En un futuro la interpretacin del
antibiograma debe adaptarse a estas consideraciones.
Un ejemplo claro sera la utilizacin de antibiticos por va inhalada para los que se continan utilizando
criterios diseados para la administracin intravenosa.

Los Laboratorios de Microbiologa realizan a diario estudios de sensibilidad a los antimicrobianos de los
microorganismos con relevancia clnica obtenidos a partir de los cultivos microbiolgicos. Para ello utilizan
las tcnicas de difusin con discos o microdilucin; esta ltima incorporada mayoritariamente a los
denominados sistemas automticos. Los valores cuantitativos ofrecidos en el estudio de sensibilidad,
halos de inhibicin, expresados en mm, o concentraciones mnimas inhibitorias (CMI), expresadas en
g/ml, se traducen en categoras clnicas cualitativas (sensible, intermedio o resistente) y se recogen en
los informes que emite el Laboratorio de Microbiologa.
La traduccin de los valores cuantitativos en cualitativos atiende a criterios microbiolgicos,

farmacolgicos y clnicos que se establecen por diferentes comits, entre los que destacan el del National
Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) en los Estados Unidos, el European Committee on
Antibiotic Susceptibility Testing (EUCAST) en el mbito europeo.
Criterio farmacolgico e interpretacin del antibiograma
Durante aos, la interpretacin del antibiograma ha estado guiada por la relacin que existe entre los
valores de CMI y las concentraciones tericas que se alcanzan en el lugar de la infeccin tras la
administracin del antimicrobiano. El valor de la CMI depende esencialmente de la presencia o ausencia
de mecanismos de resistencia en el microorganismo estudiado, mientras que la dosis utilizada, la va de
administracin y la farmacocintica el antimicrobiano definen las concentraciones en el lugar de la
infeccin.
Habitualmente, como valor de referencia se toma la concentracin que se alcanza en el compartimento

plasmtico con una administracin por va intravenosa, ignorando otros compartimentos y otras vas de
administracin. Dado que las categoras clnicas tienden a guiar la eleccin del antimicrobiano y aseguran
una mayor probabilidad de xito teraputico en el caso de interpretarse los valores cuantitativos como
sensible y, por el contrario, de mayor probabilidad de fracaso teraputico cuando se interpretan como
resistente, el planteamiento anterior no responde satisfactoriamente por igual ante infecciones con
localizaciones anatmicas dispares.
Desde los primeros aos de utilizacin de los antimicrobianos se conoce que las concentraciones de
estos frmacos en la orina son muy superiores a las que se alcanzan en sangre, sobre todo cuando se
consideran antimicrobianos con excrecin renal mayoritaria en forma de metabolitos activos o como
frmacos no metabolizados. Este planteamiento presupone el xito teraputico aun cuando la actividad
intrnseca de los antimicrobianos no sea excesiva, como la nitrofurantona, el cido nalidxico, las
sulfamidas o el cotrimoxazol. Por extensin, podra pensarse que en las infecciones urinarias no
complicadas podran utilizarse con seguridad antimicrobianos escasamente afectados por mecanismos de
resistencia de bajo nivel. Como ejemplo tendramos las mutaciones de primer escaln en las
topoisomeras que incrementa ligeramente los valores de CMI de la ciprofloxacina (de menos de 0,01
g/ml a 0,06-1 g/ml) o las enterobacterias con determinadas -lactamasas de espectro extendido que
incrementan discretamente los valores de CMI de las cefalosporinas (de menos de 0,1 g/ml a 0,5-2
g/ml). Este planteamiento reduce la prediccin del xito teraputico a la nica consideracin del valor de
la concentracin por encima del de la CMI. Sin embargo, a pesar de su sencillez, este cociente representa
el inicio de los conceptos que con posterioridad se han agrupado bajo el epgrafe de la farmacocintica-
farmacodinamia o PK/PD y que actualmente guan la utilizacin de numerosos antimicrobianos.
OBJETIVOS
1. Realizar la tcnica de difusin en Agar simple para determinar la susceptibilidad a los antibiticos.
2. Interpretar los resultados del mtodo utilizado.
3. Precisar las indicaciones y limitaciones de la tcnica empleada.
DILUCION EN TUBO
Permite estimar cuantitativamente la susceptibilidad de un antibitico, midiendo la concentracin

inhibitoria mnima (CIM), es decir, la concentracin ms baja que inhibe el crecimiento in vitro
bacteriano.
Consiste en la preparacin de una serie de diluciones del antibitico estudiado en caldo o en medio agar
al cual se inocula luego una suspensin del germen. Luego de una incubacin por 24 horas, se puede
observar la CIM como la dilucin ms alta en la que no existe crecimiento macroscpico bacteriano. Esta
tcnica es costosa por la cantidad de material que se utiliza.
DIFUSION EN AGAR (Segn Kirby- Bauer y col.)
Es un mtodo simple de rutina en Microbiologa mdica, para seleccionar el antibitico o quimioterpicos

ms adecuado en la terapia de las enfermedades infecciosas. Consiste en sembrar la muestra en estudio
sobre toda la superficie de una placa de Agar y colocar luego discos de papel filtro que contienen los
antibiticos y que despus de una incubacin de 24 horas, se observan las zonas de inhibicin alrededor
de cada disco de antibitico. La cantidad de antibitico presente en el disco difiere para los distintos
frmacos.
MATERIALES
Placas de Agar Mller Hilton o Tripticase soya

Tubos con caldo nutritivo
Tubos con Agar semislido
Tubos con cultivo bacteriano
Asas de siembra
Torundas estriles
Discos impregnados con diferentes antibiticos o quimioterpicos sensi- disck).
Pinzas
Mecheros
PROCEDIMIENTO
1. Sumergir la torunda en el caldo bacteriano, escurrir en las paredes del tubo y sembrar uniformemente
sobre la superficie de la placa de Agar.
2. Dejar reposar por 5 minutos a temperatura ambiente.
3. Con la pinza en condiciones estriles, colocar los discos impregnados con los diferentes
antimicrobianos sobre la superficie del Agar. La distancia entre los discos debe ser de 20mm.
4. Incubar a 37C durante 24 horas.
LECTURA
a) Medir en milmetros el dimetro de las zonas de inhibicin del desarrollo bacteriano alrededor de los
discos, incluyendo el dimetro del disco.
b) Comparar con la tabla el dimetro de las zonas de inhibicin obtenidas y determinar si el

microorganismo es Resistente (R), intermedio (I), o sensible (S) a los diferentes antimicrobianos
utilizados.
Un resultado intermedio (I) indica que el aislado es menos susceptible de lo normal, pero puede
responder a dosis altas del antibitico.
La cantidad de antibitico presente en el disco depende de la concentracin y de su capacidad de

difusin en el Agar.
c) Anotar e interpretar los resultados.

Antimicrobiano Cdigo Resistente Sensible Antimicrobiano Cdigo Resistente Sensible
Gram negativo Gram positivo
Amikacina AK-MK 14 17 Ac.nalidixico NA 21 16
Amoxicilina + AM 13 18 Cefepima FEP 14 18
clavulanico
Ampicilina AMP 13 17 Ciprofloxacin CIP 15 21
Cefalotina CFM 14 18 Clindamicina CM-DA 14 17
Cefotaxima CTX 14 23 Cloranfeicol C 12 18
Ceftazidima CAZ 14 20 Eritromicina E 13 18
Ceftriaxona CRO 13 17 Gentamicina GM-GE 12 15
Cefuroxina RBA 14 18 Nitrofurantoina FD 14 17
Ciprofloxacin CIP 15 21 Norfloxacin NOR 12 17
Cloranfenicol C 12 18 Oxacilina AO 10 13
Gentamicina GM-GE 12 15 Penicilina P 19 20
Sulfazotrim SUT 12 18 Rifampicina RIF 16 20
Tetraciclina T 14 19 Sulfazotrim SUT 12 18
Tobramicina NN 12 15 Tetraciclina T 14 19
Vancomicina V 9 12

Guia Laboratorio Clinico

Uploaded by

Document Information

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Guia Laboratorio Clinico

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

UNIVERSIDAD PERUANA LOS ANDES

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

JAVIER ALIAGA SALGUERO

Javier Aliaga Salguero Laboratorio clnico

El curso de Laboratorio clnico, corresponde al rea de formacin disciplinar del plan de

Se pretende que los estudiantes se encuentren capacitados en la Interpretacin y

El curso est diseado para que el alumno logre la correlacin terico-prctico y

Finalmente en la evaluacin de los conocimientos adquiridos, se considera la

Javier Aliaga Salguero Laboratorio clnico

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO CLINICO

La Bioseguridad es el conjunto de normas y procedimientos para obtener una situacin

1) Prohibido usar el celular, comer, fumar, beber o almacenar comidas o cualquier

3) Cambio inmediato de los guantes en caso de rotura y lavado de manos.

4) No tocarse la boca ni los ojos con las manos enguantadas

6) No pipetear con la boca. Debe utilizarse los pipeteadores automticos.

7) Descontaminar las superficies de trabajo una vez terminado el trabajo diario. Se

8) Manejo adecuado de los desechos desde el lugar de origen y realizar

Javier Aliaga Salguero Laboratorio clnico

1. Conocer la tcnica para la obtencin de muestras de sangre como medio para

2. Adiestramiento adecuado para el manejo de instrumentos necesarios en la toma de

3. Aplicar las precauciones universales de bioseguridad en el laboratorio con respecto al

4. Conocer los usos de los diferentes anticoagulantes empleados en el laboratorio

- Alcohol antisptico (isoproplico al 70%)

- Sistema vacutainer: capsula, tubos alvaco, agujas de toma mltiple

- Tubos capilares heparinizados

TCNICA DE LA PUNCIN VENOSA

1. Se identifica al paciente comprobando que la solicitud de exmenes corresponda al

2. Si se solicita una muestra en ayunas, debe comprobarse que efectivamente el paciente

3. Hay que dirigirse al paciente e informarle sobre el procedimiento a que va a ser

4. Se ha de colocar adecuadamente al paciente, segn ste se encuentre sentado, o en

Javier Aliaga Salguero Laboratorio clnico

9. Se aplica un torniquete varios centmetros por encima de la zona de puncin

12. Se realiza la venipuncin.

a) Se penetra a travs de la piel con la aguja formando un ngulo de aproximadamente

d) Si se utiliza un tubo al vaco, en cuanto la aguja haya penetrado en la vena, se

13. Cuando la sangre comience a fluir, se suelta el torniquete.

Javier Aliaga Salguero Laboratorio clnico

18. Se comprobar el estado del paciente; por ejemplo, si se ha mareado y si la hemorragia

19. Se elimina el material contaminado: agujas, jeringas, algodones, etc.

3. Desinfectar la zona y secarla con otro algodn libre de alcohol

4. Sacar la lanceta y realizar la puncin de forma rpida y firme.

5. Deshechar la primera gota para evitar contaminacin con restos de alcohol.

ANTICOAGULANTES UTILIZADOS CON MS FRECUENCIA

Javier Aliaga Salguero Laboratorio clnico

Los parmetros a estudiar de un Hemograma completo son: Hemates, Leucocitos,

Obtencin de la muestra de sangre:

Colocar el tubo en el equipo automatizado.

Javier Aliaga Salguero Laboratorio clnico

SERIE BLANCA LEUCOCITOS

Neutrfilos segmentados 55 - 65 % 1.800 7.500

Neutrfilos cayado 3-5% 150 - 400

Eosinfilos 0,5 - 4 % < 500

Basfilos 0,5 - 1 % < 200

Monocitos 4-8% 100 - 800

Linfocitos 25 - 35 % 1.500 - 4.000

SERIE ROJA ERITROCITOS

En las anemias, los eritrocitos pueden sufrir alteraciones:

Estructurales en Forma ( Poiquilocitosis)

Observacin de la Lmina: La observacin se debe realizar en la parte final del cuerpo y

Evaluacin de casos clnicos

Javier Aliaga Salguero Laboratorio clnico

DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA, HEMATOCRITO, VSG,

1.1 EL MTODO DE CIANOMETAHEMOGLOBINA.