Efek Antiteratogenic dari -Karoten dalam

budidaya Embrio Tikus yang diberi

Nikotin.pdf
Page 1
Efek Antiteratogenik dari -Karoten dalam budidaya Embrio Tikus yang Terkena Nikotin
Efek Antiteratogenic dari -Karoten dalam budidaya Embrio Tikus yang Terkena Nikotin .

Abstrak
Setelah asupan maternal, nikotin melintasi dinding plasenta dan menyebabkan gangguan embrio
kronik dan kematian janin. Dalam studi ini, kami menyelidiki apakah -karoten memiliki efek
menguntungkan terhadap nikotin yang diinduksi teratogenesis dalam embrio tikus (embrio 8,5
hari) dibudidayakan selama 48 jam dalam lubang sel batang embrio. Embrio yang diberi nikotin
(1 mM) menunjukan morpologi anomaly yang kronik dan kematian sel apoptosis, maupun
peningkatan TNF-, IL-1 , dan 3 m RNA, dan lipid peroksidasi. Peningkatan dari sitoplasma
superoksida dismutasi (SOD), tubuh mitokondria SOD, glutasi sitosol peroksida (GPX),
fosfolipid hidroperiksida GPX, hipoksia.
Faktor diinduksi 1 , dan Bcl-x m RNA menurun, dan aktivitas SOD berkurang lalu
dibandingkan dengan kontrol kelompok. Sebagaimana -karoten (1 1 0 atau 5 1 0 M)
terdapat dalam budaya embrio tikus yang diberi nikotin, dengan nominal yang signifikan.
Temuan ini menunjukkan bahwa efek -karoten melindungi terhadap nikotin yang diinduksi
teratogenesis dalam emnrio tikus melalui antioksidannya, antiapoptosi, dan aktifitas
antiinflamasi .

1. Pengantar
Merokok dapat meningkatkan risiko yang merugikan selama kehamilan, termasuk gangguan
pertumbuhan janin, tingkat aborsi yang spontan, abrusi premature plasenta, kematian kehamilan,
penurunan berat janin, dan kelainan kematian bayi secara mendadak. Meskipun mekanisme
hubungan paparan kerusakan sel janin dengan merokok belum dipahami dengan jelas, rokok
menginduksi racun yang meningkat oksidasi stres dan inflamasi modulasi.
Studi manusia dan hewan menunjukan bahwa merokok menyebabkan oksidatifativ kerusakan
sel janin/ usia janin,tumbuh keterbelakangan pada janin, produksi yang berlebih Reactive Oxy
gen Spesies. Nikotin, komponen beracun rokok melintasi dinding plasenta dan bekerja
langsung, sehingga terpapar dengan janin. Konsentrasi janin dengan umumnya 15% lebih tinggi
dari ibu.
Ibu yang merokok selama kehamilan mungkin mengubah status gizi yang kurang baik di janin
dan lingkungannya. Baru-baru ini, kami menemukan bahwa resveratrol, polifenol dari anggur
merah, bisa mencegah nikotin yang diinduksi secara teratogenesis dalam kultur embrio tikus.
Mikronutrisi makanan seperti vttam C, vitam E, dan -karoten berkontribusi terhadap
pertahanan antioksidan sel batang. Secara khusus, vitamin A karotenoid -karoten tidak hanya
merupakan sumber yang penting ,tetapi vitamin A juga menunjukkan antioksidan dan anti-
inflamasi.
Sejak awal antoksidan ada pada sel batang imatur embrio dan antioksidan hadir jauh lebih rendah
tingkatnya dibandingkan orang dewasa, sehingga embrio menjadi lebih rentan terhadap ROS
yang diinduksi.
Baru-baru ini, eksogen antioksidan diperkenalkan sebagai diet yang populer. Telah menjadi
keinginan dalam mangidentifikasi antioksidan diet yang memungkinkan untuk mengobati
penyakit atau pencegahan yang disebabkan oleh ROS. Oleh karena itu, percobaan ini bahwa
nikotin yang diinduksi dengan ROS yang mengarah ke embrio dan oxidatif stres fetal akan lebih
efektif dikonsentrasi oleh -karoten dan kerusakan oxidativ bisa dicegah/dilemahkan. Dalam
penelitian ini, kami menyelidiki potensi pertahanan efek -karoten terhadap
nikotin yang diinduksi secara teratogenesis dalam budidaya embrio tikus dengan menggunakan
sel batang embrio.

2. Bahan dan Metode

Efek Antiteratogenik dari -Karoten dalam budidaya Mouse Embrio yang diberi Nikotin

2.1. Hewan Percobaan

Tikus jantan dan betina ICR (usia 8-10 minggu) sebelum dibeli dari peternak (BioGenom ics
Co, Seoul, Republik Korea). Hewan yang sebelumnya tinggal ditempat yang beriklim, yg
dikendalikan dengan suhu temperature 2 1 20 C, rata-rata dari 5 5 1 0%, udara tingkat
fentilasi dari 10 siklus per jam, dan 1 2: 1 2 jam siklus terang: gelap. Hewan yang sebelumnya
sama dengan mouse chow (Sam y ang Ltd, Incheon, Republik Korea) dan tekanan air wad
libitum selama periode percobaan. Satu jantan dan tiga betina yang sebelum ditempatkan di
sebuah kandang untuk melakukan perkawinan. Konfirmasi dan ikuti perkembangan kehamilan
pada paginya (08:00) dengan cara, lihat pada lubang vagina aatau lihat sperma yang terdeteksi di
pada lubang vagina setelah melakukan perkawinan dan sebelum sore (20:00), ini dianggap
sebagai embrio harian (E) 0.5. kehamilannya dikorbankan dan sebelum embrio diperoleh E8.5.
Semua percobaan sebelum diterima oleh Chungbuk
National University Animal Perawatan Committee dan dilaksanakan sesuai dengan Panduan
untuk Perawatan dan Penggunaan Animals (Chungbuk National University Animal Perawatan
Committee, menurut NIH jum lah 86-23).

2.2. Persiapan Tikus Serum

Serum Sprague-Dawley tikus jantan (usia 10-12 minggu) embrio siap untuk dibudidaya yaitu.
Setelah pengumpulan sampel darah, sempel darah segera disentrifugasu selama prinsip
disentrifugasi selama 10 menit pada 3, 000 rpm dan 4 C, untuk menghapus plasma sebagian
kecil dari sel. Supernatan kemudian dipindahkan ke tabung baru dan disentrifugasi selama 1 0
m pada 3, 000 rpm dan 4 C sehingga hapusan serum sel darah diklat. Jelas serum supernatan
tertuang dan menggenang, dan menggenang serum sebagai panas-inactiv diciptakan selama 3 0
m di 5 6 C di air bak. maka itu baik digunakan atau disimpan pada suhu -7 0 C. Serum
diinkubasi pada suhu 37 C dan disaring melalui 0,2 m saringan sebelum digunakan dalam
lubang budidaya embrio tikus.

2.3. Seluruh Budidaya Embrio, Nikotin dan Perlakuan -Karoten

Seluruh budidaya sitem embrio berdasarkan prosedur yang dijelaskan sebelumnya [ 1 0 ]. Hewan
tersebut akan dikorbankan antara pukul 09:00 dan 10:00 melalui dislokasi leher ketika mencapai
Embrio ke 8.5. Hanya embrio dengan 4-8 kadang-kadang digunakan. Setelah hapusan dan
Reichert yang m em brane,
em bry os w engan utuh v isceral y OLK kantung dan ektoplasenta kerucut w sebelum
ditempatkan ly acak ke disegel
botol kultur (tiga em bry os / botol) mengandung 3 m L budaya m edium dan konsentrasi yang
berbeda
(1 1 0 atau 5 1 0 M) dari -karoten (a Sigm, St Louis, MO, USA) dissolv ed di dim ethy l
sulfoksida
(DMSO, Sigm a) dan / atau 1 m M nikotin (1 .8 63 g / m L serum, Sigm a). Konsentrasi nikotin
digunakan
di sini w sebagai determ ined oleh prev ious penelitian [ 5 , 1 1 ]. Konsentrasi akhir DMSO
dalam m edium w
kurang dari 0,1%. Em bry os w sebelum acak terwujud dalam empat kelompok treatm ent: (1)
kontrol, (2) nikotin, (3)
nikotin ditambah 1 1 0 M -karoten, dan (4) nikotin ditambah 5 1 0 M -karoten. Em bry
os w sebelum
diinkubasi pada 3 7 0,5 C dalam botol kultur tertutup (tiga em bry os / botol) dan diputar
pada 2 5 rpm. Itu
botol kultur w sebelum awalnya digas w engan am ixture dari 5% O, 5% CO, dan 90% N ov er 1
7 jam pada periode
laju alir 1 5 0 m L / m masuk Setelah penyerangan dgn gas beracun w Perform ed di sam e
tingkat ov er 7 h (2 0% O, 5%
CO, dan 7 5% N) dan 2 4 h (40% O, 5% CO, dan 5 5% N). Semua em bry os w sebelum dikultur
selama 48 jam menggunakan
w lubang em bry o budaya sy batang (Ikem oto Rika Kogy o, Jepang).
2.4. Scoring Morfologi
Pada akhir periode kultur 48 jam, yang orphology m em bry os w ev aluated menurut
prev iously dijelaskan mencetak sy batang [ 1 2 ]. Hanya v iable em bry os w engan y OLK
kantung sirkulasi dan
detak jantung w sebelum digunakan untuk m orphological mencetak gol. Ent Measurem setiap v
iable em bry ow ere diperoleh untuk
1 7 butir skor standar s, sebagai ela w sebagai y OLK kantung diam eter, gagak n-rum p panjang,
dan panjang kepala. Itu
m fitur orphological yang w sebelum dinilai termasuk em fleksi bry onic, jantung, neural tube
ekor, otak
(Otak depan, m idbrain, dan otak belakang), otic dan optik sy batang s, organ penciuman,
lengkungan branchial,
-7
-7
-7
-7
2
2
2
2
2
2
2
2
2

Page 3
7/13/13
Efek Antiteratogenic dari -Karoten dalam Mouse Embrio budidaya Terkena Nikotin
www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3662118/
3/12
m ketiak, m andible, lim b tunas (forelim b dan b hindlim tunas), y OLK kantung sirkulasi,
allantois, dan
ITES som.
2.5. Lipid Peroksidasi Pengukuran
Peroksidasi lipid w determ ined menggunakan asam thiobarbituric (TBA) seperti yang dijelaskan
oleh Ohkaw a dkk. [ 1 3 ]
w engan m inor m odifications. Lev el m alondialdehy de (MDA), sekunder oleh-produk lipid
peroksidasi, w m spectrophotom easured etrically setelah reaksi w engan TBA. Hasilnya
disajikan
sebagai nm ol / mg protein. Secara singkat, em bry os (1 0-1 6) dalam setiap kelompok w
sebelum hom ogenized dalam dingin 1 0 m M
buffer fosfat dan w sebelum kemudian m lumpur dari atas gunung benar-benar w engan 8,1%
natrium sulfat dodecy l, asam asetat 2 0%,
dan 0,7 5% solusi 2-thiobarbituric-asam. Solusi w dipanaskan selama 3 0 m di 95 C ov en.
Setelah
pendinginan, larut m aterial w sebagai rem ov ed dengan sentrifugasi pada 3 5 00 rpm selama 1 5
m masuk absorbansi
w supernatan sebagai m easured pada 5 3 2 nm w engan eter spectrophotom dan com dikupas ke
disiapkan
1, 1, 3, 3,-tetram etoksi propana standar Curv e. Total kandungan protein dari em bry os w
determ ined menurut ethod m Rendah ry et al. [ 1 4 ] menggunakan Bov album serum ine
sebagai standar.
2.6. SOD Kegiatan Assay
Jumlah SOD activ ity w sebagai uji ed menggunakan SOD Assay kit-WST (Dojindo
Laboratories, Kum am oto, Jepang).
Secara singkat, 5 -8 m ouse em bry os w sebelum hom ogenized, dan konsentrasi protein
supernatan
w sebelum analisi zed oleh Bradford m ethod [ 1 5 ]. Supernatan w sebelum diinkubasi w engan
reagen uji
mengandung xanthine, xantin oksidase, dan aw garam tetrazolium ater-larut, WST-1.
Superoksida
radikal bebas yang dihasilkan dari xanthine oleh xantin oksidase berkurang WST-1 ke-1 WST
diform azan,
w hich menyerap m axim sekutu pada 45 0 nm. SOD dalam em bry os menghambat pengurangan
WST-1, karena
enzy saya cataly zes yang utation dism ion superoksida untuk m olecular oxy gen dan hy Drogen
peroksida. Itu
pengurangan WST-1 w m easured spectrophotom etrically pada 45 0 nm. SOD activ ity w
dihitung sebagai
tingkat penghambatan di w hich 1 U w didefinisikan sebagai penurunan 5 0% dari kontrol v alue
ov er periode
3 0 m di 3 7 C.
2.7. Nile Blue Pewarnaan
Em sel bry onic kematian w seperti yang dideteksi dengan teknik klasik menggunakan Nil biru
pewarnaan untuk observ e apoptosis
inti dan sel-sel mati dalam warna biru. E1 0,5 em bry os w sebelum dibedah ke PBS. Em bry os
w sebelum ditempatkan dalam
1 .5% Nil biru (Sigm a) dalam PBS, diinkubasi pada 3 7 C selama 45 m inutes, dan kemudian
m onitored ev ery 1 5 m
menggunakan m icroscope ringan sampai pewarnaan mencapai yang diinginkan lev el.
Pewarnaan biru pucat (background lev el)
acara s norma al liv e sel dan biru gelap pewarnaan rev eals daerah kematian sel.
2.8. Kuantitatif Real-Time Polymerase Chain Reaction (PCR) Analisis
RNA total w diekstraksi 6-9 berbudaya m ouse em bry os menggunakan Reagen Trizol
(Inv itrogen, Carlsbad, CA, USA). RNA w dimurnikan lebih lanjut menggunakan RNA kit
bersih-up (Macherey -
Nagel, Bethlehem, Amerika Serikat). RNA total (2 g) w seperti yang digunakan untuk cDNA
sy nthesis (itrogen Inv). Real-e tim PCR w
dilakukan dalam 2 0 L reaksi v Olum e menggunakan SYBR Hijau Master Mix (Terapan Biosy
batang s, Foster
City, CA, USA) dan m ouse em bry onic cDNA (1 .6 g) sebagai pelat tem. Reaksi w sebelum
melakukan ed menggunakan
7 5 00 Real-Tim e PCR Sy batang (Terapan Biosy batang s), sesuai dengan instruksi anufacturer
m itu. Gene-
spesifik formal ers w sebelum dirancang oleh TIB Mol-Bio Sy nthesis (Berlin, Kuman apapun).
Ers Prim untuk m ouse
cy toplasm ic superoksida dism utase (SOD1), m anganese SOD (SOD2), cy toplasm ic
glutathione
peroksidase (GPx1), fosfolipid hy droperoxide glutation peroksidase (GPx4), hy poxia diinduksi
Faktor 1 (HIF-1 ), Bcl-x, caspase 3, dan cy tokines (TNF- dan IL-1 ) w sebelum digunakan
( Tabel 1 ) -aktin.
formal ers w sebelum digunakan sebagai standar internal terhadap norma Alize sasaran ekspresi
transkrip. Data dari sembilan
L

Page 4
7/13/13
Efek Antiteratogenic dari -Karoten dalam Mouse Embrio budidaya Terkena Nikotin
www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3662118/
4/12
independen menjalankan w sebelum analisi zed menggunakan com parativ e Ct m ethod [ 1 6 ].
Tabl e 1
Pri mer urutan yang digunakan dalam penelitian ini.
2.9. Evaluasi statistik
Perbedaan kelompok dalam ekspresi gen, peroksidasi lipid, SOD dan activ ity w sebelum dinilai
v besarbesaran satu-w ay
ANOVA mengikuti ed oleh sm ultiple com uji perbandingan Tukey '. Data morfologi w sebelum
com dikupas dengan menggunakan
Kruskal-Wallis nonparam etric ANOVA dan m ultiple com perbandingan post test Dunn hoc.
Sebuah P <0,05 w
dianggap signifikan. Semua data dinyatakan sebagai m ean SEM. Semua analisi ses w sebelum
dilakukan dengan menggunakan
SPSS untuk Window s p'baru, v ersion 1 0.0 (SPSS Inc, Chicago, IL, USA).
3. Hasil
3.1. Pengaruh -Karoten pada Penangkapan Pembangunan Nikotin-induced dalam Mouse
Embrio
Tumbuh eters param th, termasuk y OLK kantung diam eter dan sirkulasi, ukuran allantois itu,
gagak n-rum p
panjang, panjang kepala, dan jum lah ITES som, dan dev elopm eters param ental, termasuk m
orphology dari
jantung, belakang-, m-id, dan otak depan, otic, optik, dan penciuman sy batang s, branchial bar,
m aksila dan
m proses andibular, forelim b, dan hindlim b, m ouse em bry os terkena nikotin dalam kehadiran
atau
adanya -karoten w sebelum mencetak sesuai dengan skala didirikan [ 1 2 ] ( Tabel 2 dan
Gambar 1 ). Semua
tumbuh th dan dev elopm ental eters param dari nikotin yang diobati kelompok w sebelum er
signifikan rendah daripada
norma al kontrol (P <0,05). Furtherm bijih, total m skor orphological (48,4 0,81) dari em bry
os
terkena nikotin saja w er signifikan rendah dari pada kontrol em bry os (7 5 0,0 0,46, P <0,05).
Bagaimana ev er, w hen -karoten (1 1 0 atau 5 1 0 M) w ditambahkan ke budaya m edium
di hadapan
nikotin (1 m M), em bry os acara ed signifikan im prov em ent dalam semua em bry onic tumbuh
th dan
dev elopm eters param ental (P <0,05 com dikupas nikotin sendiri), w engan pengecualian caudal
skor tabung saraf. Furtherm bijih, total m skor orphological (61 .6 0,5 4 atau 62 .4 0,7 2)
untuk masing-masing
konsentrasi w -karoten secara signifikan lebih tinggi dari skor untuk em bry os diperlakukan w
engan nikotin
saja (P <0,05).
Fi gure 1
Representati vei penyihir mouse embry os mantan diajukan ke ni Coti ne dan -karoten.
Kelompok kontrol normal (a).
Embry os diperlakukan wi th 1 mM ni Coti ne al satu pertunjukan ty pi kal normal i ti es seperti
mantan berpose brai n, dikurangi
forebrai n, jantung yang abnormal, cacat
...
Tabl e 2
Ringkasan morphol Ogi kal perubahan cul tured tikus embry os mantan diajukan kepada 1 mM
ni Coti ne di
ada atau tidak adanya 1 10
atau 5 10
M -karoten (-mobil).
3.2. Pengaruh -Karoten pada Kerusakan oksidatif Nikotin-induced dalam Mouse Embrio
Oxidativ e stres w sebagai analisi Zed dalam w lubang em bry os oleh m easuring MDA lev els (
Gambar 2 ). Mouse
-7
-7
-7
-7

Halaman 5
7/13/13
Efek Antiteratogenic dari -Karoten dalam Mouse Embrio budidaya Terkena Nikotin
www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3662118/
5/12
em bry os terkena 1 m M nikotin saja dipamerkan meningkat secara signifikan peroksidasi lipid
(3 6.63
0,5 7 nm ol / mg) com dikupas dengan kelompok kontrol (9,81 0,48 2 nm ol / mg) (P <0,05).
Bagaimana ev er, em bry os
diperlakukan w engan nikotin ditambah -karoten (1 1 0 atau 5 1 0 M) dipamerkan secara
signifikan mengurangi lipid
peroksidasi lev els (3 2 .3 6 1 .3 4 atau 2 8.01 0.96 nm ol / mg) com dikupas satu-satunya
kelompok nikotin (P <
0,05).
Fi gure 2
Protecti efek ve dari -karoten agai nst sapi i dati kerusakan ve i nduced oleh ni Coti ne di E8.5
tikus embry os
diperlakukan in vitro selama 2 hari s. Li pi d perox i dati pada w ev al uated oleh measuri ng mal
ondi al dehy de (MDA)
concentrati di dalam embry os diperlakukan wi th 1 mM
...
3.3. -Karoten Meningkatkan Kegiatan SOD dalam Mouse Embrio Diobati dengan Nikotin
Tikus em bry os terkena 1 m M nikotin dipamerkan secara signifikan mengurangi SOD activ ity
(0,5 8 0,03
U / mg protein) com dikupas dengan kelompok kontrol (0,68 0,04 U / mg protein) (P <0,05).
Bagaimana ev er, w hen
em bry os w sebelum dirawat w engan 1 1 0 atau 5 1 0 M -karoten dengan adanya nikotin,
SOD
activ ity (0.67 0.02 U / mg atau 0,7 1 0,05 U / mg) w secara signifikan lebih besar dari pada
nikotin hanya
Kelompok ent treatm (P <0,05) ( Gambar 3 ).
Fi gure 3
Superox i de di smutase (SOD) acti vi ty l ev el sin E8.5 tikus embry os mantan diajukan ke ni
Coti ne dan -karoten
selama 2 hari s in vitro. SOD acti vi ty di embry os diperlakukan wi th 1 mM ni Coti ne dengan
atau tanpa kehadiran 1
10
atau 5
...
3.4. -Karoten upregulates Ekspresi Gen Enzim antioksidasi dalam Mouse Embrio Terkena
Nikotin
The cy toplasm ic SOD1 m RNA lev el ( Gambar 4 (a) ) Dalam m ouse em bry os terkena 1 m M
nikotin w 0.66-
kali lipat dari kelompok kontrol (1 kali lipat). Bagaimana ev er, w hen em bry os w sebelum
dirawat w engan 1 1 0 atau 5 1 0 M
-karoten dan 1 m M nikotin, em bry o SOD1 m RNA lev els (0,89 kali lipat atau 0,90 kali lipat
dari kontrol,
resp.) w sebelum signifikan lebih besar daripada Miling nikotin hanya ent treatm (P <0,05).
Fi gure 4
Gene ex pressi pada l ev el s anti sapi i dant enzy mes di E8.5 tikus embry os mantan diajukan ke
ni Coti ne dan -
karoten selama 2 hari s in vitro. Lev el s mRNA untuk cy topl asmi c superox i de di smutase
(SOD1, (a)), mangan
SOD (SOD2, (b)), cy topl asmi c gl utathi satu perox i Dase
...
M itochondrial SOD2 m RNA lev el ( Gambar 4 (b) ) dalam m ouse em bry os terkena 1 m M w
nikotin
0,65 kali lipat dari kelompok kontrol (1 kali lipat). Bagaimana ev er, w hen em bry os w sebelum
dirawat w engan 1 1 0 atau 5
1 0 M -karoten dan 1 m M nikotin, yang SOD2 m RNA lev els (0,88 kali lipat atau 1, 07 kali
lipat dari kontrol
kelompok, resp.) w sebelum signifikan lebih besar daripada Miling ent treatm nikotin saja (P
<0,05).
The cy toplasm ic GPx1 m RNA lev el ( Gambar 4 (c) ) dalam m ouse em bry os terkena 1 m M
nikotin w sebagai 0,65 -
kali lipat dari kelompok kontrol (1 kali lipat) (P <0,05). Bagaimana ev er, w hen em bry os w
sebelum dirawat w engan 5 1 0 M
-karoten dan 1 m M nikotin, yang GPx1 m RNA lev el (0.99 kali lipat dari kelompok kontrol) w
signifikan lebih besar daripada Miling nikotin treatm ent saja (P <0,05).
-7
-7
-7
-7
-7
-7
-7
-7
-7
-7

Page 6
7/13/13
Efek Antiteratogenic dari -Karoten dalam Mouse Embrio budidaya Terkena Nikotin
www.ncbi.nlm.n ih.gov / pmc / artikel / PM C3662118 /
6/12
The fosfolipid hy droperoxide GPx4 m RNA lev el ( Gambar 4 (d) ) Dalam m ouse em bry os
terkena 1 m M
nikotin menurun secara signifikan menjadi 0,7 2 kali lipat dari kelompok kontrol (1 kali lipat) (P
<0,05). Bagaimana ev er,
w hen em bry os w sebelum dirawat w engan 1 1 0 atau 5 1 0 M -karoten dan 1 m M
nikotin, yang GPx4 m RNA
lev els (0,93 kali lipat atau 0,91 kali lipat dari kelompok kontrol, resp.) w sebelum signifikan
lebih besar daripada Miling
nikotin treatm ent saja (P <0,05).
3.5. -Karoten upregulates HIF-1 Ekspresi Gen Embrio Nikotin dengan Pewarnaan
HIF-1 m RNA lev el dalam m ouse em bry os terkena 1 m M nikotin menurun secara
signifikan menjadi 0,66 kali lipat
bahwa dari kelompok kontrol (1 kali lipat) (P <0,05). Bagaimana ev er, w hen em bry os w
sebelum dirawat w engan 1 1 0 atau 5
1 0 M -karoten dan 1 m M nikotin, HIF-1 m RNA lev els (0,82 kali lipat atau 1 .1 4 kali
lipat dari kontrol
kelompok, resp.) w sebelum signifikan lebih besar daripada Miling ent treatm nikotin saja (P
<0,05) ( Gambar 5 ).
Fi gure 5
Hy cacar iai nduci bl e factor-1 ex pressi pada l ev el sin E8.5 tikus embry os mantan diajukan
ke ni Coti ne dan -
karoten selama 2 hari s in vitro. HIF-1 mRNA di embry os mantan diajukan kepada 1 mM ni
Coti ne dalam ketiadaan atau
Kehadiran 1 10
...
3.6. -Karoten downregulates proinflamasi sitokin Ekspresi Gen Embrio Terkena Nikotin
TNF- m RNA lev el ( Gambar 6 (a) ) Dalam m ouse em bry os terkena 1 m M nikotin w 1 .47
kali lipat dari
kelompok kontrol (1 kali lipat) (P <0,05). Bagaimana ev er, w hen em bry os w sebelum dirawat
w engan 1 1 0 atau 5 1 0 M
-karoten dan 1 m M nikotin, TNF- m RNA lev els (0,68 kali lipat atau 0,5 9 kali lipat dari
kelompok kontrol,
resp.) w sebelum er signifikan rendah dibandingkan Miling nikotin hanya ent treatm (P <0,05).
Fi gure 6
Gene ex pressi pada l ev el s proi nfl ammatory cy toki nes di E8.5 tikus embry os mantan
diajukan ke ni Coti ne dan -
karoten selama 2 hari s in vitro. Lev el s TNF- (a) dan IL-1 (b) mRNA di embry os mantan
diajukan kepada 1 mM ni Coti ne
dalam ketiadaan
...
IL-1 m RNA lev el ( Gambar 6 (b) ) dalam m ouse em bry os terkena 1 m M nikotin w 1 .3 1
kali lipat dari
kelompok kontrol (1 kali lipat) (P <0,05). Bagaimana ev er, w hen em bry os w sebelum dirawat
w engan 1 m M nikotin dan 1
1 0 atau 5 1 0 M -karoten, IL-1 m RNA lev el (0,3 2 kali lipat atau 0,2 7 kali lipat dari
kelompok kontrol,
resp.) w er signifikan rendah dibandingkan Miling nikotin hanya ent treatm (P <0,05).
3.7. -Karoten Mengurangi Apoptosis Nicotine-Induced
3.7.1. Bcl-x Gene Expression Pola
The Bcl-x m RNA lev el dalam m ouse em bry os terkena 1 m M nikotin w 0,7 2 kali lipat dari
kontrol
Kelompok v alue (1 kali lipat) (P <0,05). Bagaimana ev er, w hen em bry os w sebelum dirawat
w engan 1 m M nikotin dan 1 1 0
atau 5 1 0 M -karoten, Bcl-x m RNA lev el (1 .09 kali lipat atau 0,94 kali lipat dari
kelompok kontrol, resp.)
w signifikan lebih besar daripada Miling nikotin hanya ent treatm (P <0,05, Gambar 7 (a) ).
Fi gure 7
Gene ex pressi pada l ev el s apoptosi s rel faktor diciptakan di E8.5 tikus embry os mantan
diajukan ke ni Coti ne dan -
karoten selama 2 hari s in vitro. Lev el s Bcl - x (a) dan caspase 3 (b) mRNA di embry os mantan
diajukan kepada 1 mM
-7
-7
-7
-7
-7
-7
-7
-7
-7
L
L
-7
-7
L
L

Page 7
7/13/13
Efek Antiteratogenic dari -Karoten dalam Mouse Embrio budidaya Terkena Nikotin
www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3662118/
7/12
ni Coti ne di ada atau tidaknya
...
3.7.2. Caspase 3 Ekspresi Gen Pola
Caspase 3 m RNA lev el dalam m ouse em bry os terkena 1 m M nikotin w 1 .2 0 kali lipat dari
kontrol
kelompok (1 kali lipat) (P <0,05). Bagaimana ev er, w hen em bry os w sebelum dirawat w
engan nikotin di hadapan 1 1 0
atau 5 1 0 M -karoten, caspase 3 m RNA lev els (0,96 kali lipat atau 0,94 kali lipat dari
kelompok kontrol,
resp.) w sebelum er signifikan rendah dibandingkan Miling nikotin hanya ent treatm (P <0,05,
Gambar 7 (b) ).
3.7.3 -Karoten. Mengurangi Apoptosis Nikotin-induced dalam Mouse Embrio
Untuk determ ine hether w -karoten antagonizes nikotin-induksi apoptosis, biru pewarnaan Nil
Teknik w seperti yang digunakan. Norm al sel w sebelum bernoda biru pucat dalam kontrol em
bry os ( Gambar 8 (a) ). Sebaliknya,
sel apoptosis muncul berwarna biru gelap, terutama di jantung, optik dan penciuman lubang,
otak, otic
tangkai, tengkorak NERV e inti, dan ekor tunas dalam nikotin yang diobati em bry os ( Gambar
8 (b) ). Ent Cotreatm
w engan -karoten menghasilkan am pengurangan arked di els lev apoptosis diinduksi oleh
nikotin (Angka
8 (c) dan 8 (d) ).
Fi gure 8
Representati vei penyihir dari apoptoti c embry os mantan diajukan ke ni Coti ne dan -karoten
oleh Ni le bl ue stai ni ng.
Ni le bl ue stai ni ng w dilakukan untuk observ e apoptoti c nucl ei dan mati cel LSW hi ch stai
ned gelap bl ue.
Kontrol normal embry os (a). Embry os diperlakukan
...
4. Diskusi
Popularitas sm oking selama kehamilan adalah w aktu 1 3% dan 2% 5 di negara-negara e tinggi
incom, dan
meningkat dengan cepat di low - dan m iddle-incom e negara [ 1 7 ]. Meskipun effectiv e sm
oking penghentian
strategi selama kehamilan im portant untuk m kesehatan aternal dan janin, prev ious studi hav e
menyarankan bahwa terapi alternativ e m ay adalah dengan menggunakan Ent treatm antioksidan
alami yang dapat melindungi
melawan nikotin yang diinduksi em bry o toksisitas [ 5 , 1 8 ]. Dalam penelitian ini, kami
memperluas pada konsep ini
tidak hanya untuk dem onstrate efek menguntungkan dari -karoten terhadap usia bendungan
nikotin yang diinduksi, tetapi juga untuk
membedakan m echanism s usia bendungan nikotin lanjut menggunakan em bry o budaya sy
batang.
Dalam ious prev studi, m aternal sm oking mempengaruhi elopm ent dev m setiap organ dan
jaringan janin
termasuk NERV ous, cardiov ascular, dan rangka sy batang s [ 1 9 - 2 4 ]. Nikotin meningkatkan
jantung janin
menilai, mengurangi janin bernapas m ov em Ent, dan berhubungan kekurangan engan w dalam
sel otak jum lah [ 2 5 ].
Dalam studi saat ini, em bry onic tumbuh th, sebagai m easured oleh y OLK kantung diam eter
dan sirkulasi, ukuran
allantois, gagak n-rum panjang p, panjang kepala, dan jum lah ITES som, sebagai ela w sebagai
dev elopm ent dari
jantung, pusat NERV ous sy batang, organ sensorik, branchial bar, m aksila dan proses andibular
m,
dan lim bs w sebelum terhambat dan m fitur orphological dari em bry os w sebelum signifikan
diubah oleh
nikotin ent treatm. Bagaimana ev er, w hen nikotin yang diobati em bry os w sebelum bersamaan
terkena -karoten,
ost m dari m alies orphological anom, termasuk abnorm al jantung dev elopm ent, merusak ed
posterior
-7
-7

Page 8
7/13/13
Efek Antiteratogenic dari -Karoten dalam Mouse Embrio budidaya Terkena Nikotin
www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3662118/
8/12
batang, kemunduran lim bs, dan otak m alform negosiasi w sebelum signifikan im prov ed com
dikupas ke em bry os
diperlakukan w engan nikotin saja. Temuan ini menunjukkan bahwa -karoten dapat effectiv ely
melindungi em bry os
dari nikotin yang disebabkan cacat dalam organogenesis.
Sel m em branes mengandung lev els besar asam lemak tak jenuh poli yang sangat v ulnerable
untuk
peroxidativ e breakdow n [ 2 6 ]. Oxidativ e stres ditandai dengan peningkatan ROS dan im
dipasangkan
pertahanan antioksidan bertindak sebagai im portant m ediator dari defectiv e em bry o dev
elopm ent dan tumbuh th
keterbelakangan [ 9 ]. Bagaimana ev er, baik enzy m ATIC (SOD, GPx, dan katalase) dan
nonenzy m ATIC (GSH / GSSG,
peroxiredoxin, thioredoxin, v Itam di C, dan v Itam di E) antioksidan sy batang s ada untuk com
kelelawar excessiv e
ROS generasi [ 2 7 ]. Nikotin menginduksi oxidativ e stres baik secara in vivo dan in vitro [ 9 ].
Baru-baru ini, kami menemukan
bahwa resv eratrol, poli fenol com pound alami, prev Ent nikotin yang diinduksi teratogenesis
dalam kultur
m ouse em bry os melalui yang ampuh antioxidativ e activ ity [ 5 ]. Dalam studi saat ini, nikotin
meningkat
MDA lev el dan menurunkan SOD activ ity di em bry os. Bagaimana ev er, w hen em bry os w
sebelum
bersamaan diperlakukan w engan nikotin dan -karoten, ini em bry onic oxidativ e respon stres
dan
im dipasangkan antioksidan enzy saya lev els recov Ered untuk kontrol lev els. Antioksidan -
karoten
prov IDE perlindungan penting terhadap oxy gen usia bendungan radikal, karena istilah inates
peroxidativ e rantai
reaksi lipid tak jenuh dalam otak dan jaringan lain [ 2 8 ] Dan effectiv ely SCAV Enges ROS
dalam sel
terkena oxidativ e stres [ 2 9 ]. Oleh karena itu, eksogen -karoten m ay im prov e status SOD
dari
em bry os dan menetralisir kelebihan ROS dihasilkan oleh nikotin.
Sods inactiv makan radikal superoksida dan GPxs mengurangi hy Drogen peroksida untuk HO
dengan mengorbankan
glutathione oksidasi [ 3 0 , 3 1 ]. Selama m ouse em bry ogenesis, antioksidan enzy m es seperti
GPx1,
GPx4, SOD1, dan SOD2 sangat diekspresikan dalam m etabolically activ e jaringan [ 3 2 - 3 5 ].
Pada saat
Penelitian, nikotin secara signifikan menurun SOD1, SOD2, GPx1, dan GPx4 ekspresi gen
dalam kultur
em bry os, tapi ekspresi lev els w sebelum dipulihkan oleh ent cotreatm w engan -karoten. Pada
awal
organogenesis terjadi dalam relativ ely hy poxic env ironm ent, em bry os adalah sensitivitas e ke
oxidativ e stres
[ 9 ]. Null m utations di HIF-1 penyebab jantung, v ascular, dan saraf m alform negosiasi dan
mengakibatkan janin
mematikan pada E1 0,5 [ 3 6 ]. Hy poxia menginduksi oxidativ e stres dan abnorm al
organogenesis dalam m ouse
em bry os oleh dow nregulating HIF-1 dan intraseluler ekspresi gen SOD [ 3 7 ]. Dalam studi
saat ini,
lev els HIF-1 m RNA dalam berbudaya em bry os menurun secara signifikan mengikuti ing
nikotin treatm ent,
tapi w sebelum dipulihkan oleh co-ent treatm w engan -karoten. Hasil ini menunjukkan bahwa
-karoten dapat melindungi
em bry os melawan nikotin yang diinduksi oxidativ e bendungan usia melalui nya antioxidativ e
dan antihy poxic
activ Prioritas.
Rokok sm oke mengubah aw ide berbagai im fungsi unological m dan adv ersely mempengaruhi
hum lisan dan
im m une respon seluler di kedua hum ans dan anim als [ 3 8 ]. ROS m ediate m im ini une reaksi
melalui v arious proinflam m atory cy tokines dan dapat mempengaruhi fungsi oocy te, sperma,
dan
em bry o [ 3 9 ]. Dalam studi saat ini, nikotin secara signifikan meningkatkan ekspresi gen dari
proinflam m atory cy tokines TNF- dan IL-1 dalam kultur em bry os, tapi els lev ini w
sebelum signifikan
dikurangi, untuk lev els rendah er dibanding kontrol lev els, oleh co-ent treatm w engan -
karoten. Hasil ini menunjukkan
bahwa -karoten m ay melindungi em bry os dengan mengurangi im m une respon stim ulated
oleh nikotin
ent treatm.
Sebelumnya ious studi hav e mengkonfirmasi ed bahwa apoptosis bermain s peran portant im
dalam norma al em bry onic
dev elopm ent. Dev elopm ental apoptosis adalah proses aw ell seimbang yang sangat penting
untuk formulir asi
em Bry struktur onic. Bagaimana ev er, gangguan w engan keseimbangan ini menginduksi alities
abnorm m orphological
[ 40 , 41 ]. Dalam studi saat ini, Bcl-x, salah satu protein sev eral antiapoptotic yang m em gota
dari Bcl-
2 fam ily protein, menurun secara signifikan dan caspase 3, am arker untuk sel yang mengalami
apoptosis
[ 42 ], meningkat secara signifikan mengikuti ing nikotin treatm ent dari berbudaya em bry os.
Peningkatan apoptosis w
juga terdeteksi di em bry os terkena nikotin oleh Nil biru pewarnaan. Bagaimana ev er,
perubahan apoptosis
2
L

Page 9
7/13/13
Efek Antiteratogenic dari -Karoten dalam Mouse Embrio budidaya Terkena Nikotin
www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3662118/
9/12
disebabkan oleh nikotin w sebelum diblokir oleh co-ent treatm w engan -karoten. Hasil ini
menunjukkan bahwa -
karoten melindungi em bry os dari nikotin yang diinduksi abnorm al dev elopm ent v
besarbesaran antiapoptotic nya activ ity.
5. Kesimpulan
Nikotin menyebabkan excessiv e ROS dan menyebabkan alies anom janin dan mematikan.
Temuan saat ini
studi menunjukkan bahwa antioxidativ e, anti-hy poxic, antiapoptotic, dan antiproinflam m
fungsi atory
dari -karoten m ay prev ent nikotin yang diinduksi im pairm Ent dari em bry os dan
memfasilitasi norma al em bry onic
dev elopm ent. Meskipun data ini mendukung pothesis hy bahwa -karoten yang diperoleh
dalam diet
effectiv ely melawan efek buruk dari nikotin selama organogenesis janin, sebuah penelitian in
vivo
menggunakan m ouse w Ould diperlukan untuk com pare fungsi -karoten pada nikotin yang
diinduksi
em bry otoxicities di masa depan.
Benturan Kepentingan
Para penulis menyatakan bahwa tidak ada konflik kepentingan.
Pengakuan
Ini w ork w karena didukung oleh Pusat Penelitian Program Prioritas melalui Riset Nasional
Yayasan Korea (NRF), yang didanai oleh Departemen Pendidikan, Sains dan Teknologi (2 01 1 -
003 1 403).
Informasi Pasal
Evid Berdasarkan Pelengkap alternat Med. 2013, 2013: 575.287.
Diterbitkan online 2013 May 8. doi: 10.1155/2013/575287
PMCID: PMC3662118
Chunmei Lin , Jung-Min Yon , ayoung Jung , Jong Geol Lee , Ki Jung Youn , Beom Juni Lee ,
muda Won Yun , dan Sang-Yoon Nam
Fakultas Kedokteran Hewan dan Lembaga Penelitian Kedokteran Hewan, Chungbuk National
University, Cheongju 361-763, Republik Korea
* Sang-Yoon Nam: Email: synam / at / cbu.ac.kr
Akademik Editor: Alfredo Vannacci
Diterima 28 Januari 2013; Diterima April 9, 2013.
Hak Cipta 2013 Chunmei Lin et al.
Ini adalah artikel akses terbuka didistribusikan di bawah Creative Commons Attribution License,
yang memungkinkan penggunaan tak terbatas, distribusi, dan reproduksi dalam
media, asalkan karya asli benar dikutip.
Artikel dari Bukti berbasis Pelengkap dan Pengobatan Alternatif: ECAM tersedia di sini courtesy
of Hindawi Publishing Korporasi
Referensi
1. Lambers DS, Clark KE. Para ibu dan janin efek fisiologis nikotin. Seminar di Perinatologi .
1996; 20 (2): 115 -
126. [ PubMed ]
2. Comhair SAA, Erzurum SC. Tanggapan Antioksidan tooxidant-dimediasi penyakit paru-paru.
Amerika Journal of Physiology .
2002; 283 (2): L246-L255. [ PubMed ]
3. Ornoy A. Embrio stres oksidatif sebagai mekanisme teratogenesis dengan penekanan khusus
pada embryopathy diabetes.
Toksikologi Reproduksi . 2007; 24 (1) :31-41. [ PubMed ]
4. Cogswell ME, Weisberg P, Spong Mengisap rokok C., penggunaan alkohol dan hasil
kehamilan yang merugikan: implikasi untuk
*

Halaman 10
7/13/13
Efek Antiteratogenic dari -Karoten dalam Mouse Embrio budidaya Terkena Nikotin
www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3662118/
10/12
suplementasi mikronutrien. Journal of Nutrition . 2003; 133:1722 S-1731S. [ PubMed ]
5. Lin C, Y pada JM, Jung AY, et al. Resveratrol mencegah nikotin yang diinduksi teratogenesis
pada embrio tikus berbudaya.
Toksikologi Reproduksi . 2012; 34 (3) :340-360. [ PubMed ]
6. Limn-PachecoJ, Gonsebatt ME. Peran antioksidan dan enzim antioksidan yang berhubungan
dengan respon pelindung
diinduksi lingkungan stres oksidatif. Mutasi Penelitian . 2009; 674 (1-2) :137-147. [ PubMed ]
7. Spiegler E, Kim YK, Wassef L, Shete V, QuadroL. Transfer ibu-janin dan metabolisme
vitamin A dan prekursor
beta-karoten dalam jaringan berkembang. Biochimica EtBiophysica Acta . 1821; (1) :88-198. [
PMCfree artikel ] [ PubMed ]
8. Bai SK, Lee SJ, Na HJ, et al. -karoten menghambat ekspresi gen inflamasi pada
lipopolisakarida-dirangsang
makrofag dengan menekan berbasis redoks NF- B aktivasi. Eksperimental dan Kedokteran
Molekuler . 2005; 37 (4) :323-334.
[ PubMed ]
9. Dennery PA. Efek stres oksidatif pada perkembangan embrio. Lahir Cacat Penelitian C 2007;.
81 (3) :155-162.
[ PubMed ]
10. New DA. Whole-embryoculture dan studi embrio mamalia selama organogenesis. ulasan
Biologi dari
Cambridge filosofis Masyarakat . 1978; 53 (1) :81-122. [ PubMed ]
11. JoschkoMA, Dreosti IE, Tulsi RS. Efek teratogenik nikotin pada tikus vitroin: mikroskop
cahaya dan elektron
studi. Neurotoxicology dan Teratology . 1991; 13 (3) :307-316. [ PubMed ]
12. Van Maele-Fabry G, Delhaise F, Picard JJ. Morfogenesis dan kuantifikasi perkembangan
pasca-implantasi
embrio tikus. Toksikologi in Vitro . 1990, 4 (2) :149-156. [ PubMed ]
13. Ohkawa H, Ohishi N, Y agi K. Assay untuk peroksida lipid dalam jaringan hewan melalui
reaksi asam thiobarbituric. Analitik
Biokimia . 1979; 95 (2) :351-358. [ PubMed ]
14. Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. Pengukuran protein dengan reagen Folin
fenol. Journal of
Biological Chemistry . 1951; 193 (1) :265-275. [ PubMed ]
15. Bradford MM. Sebuah metode yang cepat dan sensitif untuk kuantisasi jumlah mikrogram
protein memanfaatkan
prinsip protein pewarna mengikat. Biokimia Analitik . 1976; 72 (1-2) :248-254. [ PubMed ]
16. Livak KJ, Schmittgen TD. Analisis data ekspresi gen relatif menggunakan PCR kuantitatif
real-time dan 2-CT
Metode. Metode . 2001; 25 (4) :402-408. [ PubMed ]
17. Cnattingius S. epidemiologi merokok selama kehamilan: prevalensi merokok, karakteristik
ibu, dan
hasil kehamilan. Nikotin dan Tembakau Penelitian . 2004; 6 (2): S125-S140. [ PubMed ]
18. Coleman T, Cooper S, Thornton JG, et al. Sebuah uji coba secara acak patch terapi pengganti
nikotin dalam kehamilan. The
New England Journal of Medicine . 2012; 366 (9) :808-818. [ PubMed ]
19. Czekaj P, Paasz A, Lebda-Wyborny T, et al. Perubahan morfologi di paru-paru, plasenta,
hati dan ginjal hamil
tikus yang terpapar asap tocigarette. International Archives Kesehatan Kerja dan Lingkungan .
2002; 75 (1): S27-S35.
[ PubMed ]
20. Kallen K. Beberapa malformasi dan ibu merokok. Pediatri dan Perinatal Epidemiology .
2000; 14 (3) :227-233.
[ PubMed ]
21. Penjual MJ, Bnait KS. Pengaruh inhalasi tobaccosmoke pada pengembangan tikus
embryoand janin. Reproduksi
Toksikologi . 1995, 9 (5) :449-459. [ PubMed ]
22. Resende RR, Adhikari A. Kolinergik reseptor jalur yang terlibat dalam apoptosis, proliferasi
sel dan saraf
diferensiasi. your Komunikasi Signaling . 2009; 7 (20) :1-20. [ PMCfree Artikel ] [ PubMed ]

Page 11
7/13/13
Efek Antiteratogenic dari -Karoten dalam Mouse Embrio budidaya Terkena Nikotin
www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3662118/
11/12
23. Slotkin TA. Nikotin atau kokain paparan janin: mana yang lebih buruk? Journal of
Farmakologi dan Eksperimental
Therapeutics . 1998; 285 (3) :931-945. [ PubMed ]
24. Werler MM. Teratogen diperbaharui: merokok dan hasil reproduksi. Teratology . 1997; 55
(6) :382-388. [ PubMed ]
25. Slotkin TA. Otak cedera sel Cryptic disebabkan oleh paparan nikotin janin dikaitkan dengan
peningkatan terus-menerus dari c-fos
ekspresi protoonkogen. Brain Research . 1997; 750 (1-2) :180-188. [ PubMed ]
26. Amini SA, Dunstan RH, Dunkley PR, Murdoch RN. Stres oksidatif dan fetotoxicity
konsumsi alkohol
selama kehamilan. Radikal Bebas Biologi dan Kedokteran . 1996; 21 (3) :357-365. [ PubMed ]
27. ShaoD, Oka S, Brady CD, Haendeler J, Eaton P, Sadoshima J. modifikasi Redoks sel sinyal
dalam kardiovaskular
sistem. Jurnal Kardiologi Molekuler dan Seluler . 2011; 52 (3) :550-558. [ PMCfree Artikel ] [
PubMed ]
28. Mitchell JJ, M Paiva, Heaton MB. Antioksidan vitamin E dan -karoten melindungi
terhadap etanol-induced
neurotoksisitas dalam embrio budaya hipokampus tikus. Alkohol . 1999; 17 (2) :163-168. [
PubMed ]
29. Palozza P. Bisa -karoten mengatur pertumbuhan sel dengan mekanisme redoks? Jawaban
dari sel kultur. Biochimica et
Biophysica Acta . 2005; 1740 (2) :215-221. [ PubMed ]
30. Flohe L, Gunzler WA, Schock HH. Glutation peroksidase:. Selenoenzyme sebuah FEBS
Letters . 1973, 32 (1) :132-134. [ PubMed ]
31. McCord JM, Fridovich I. superoksida dismutase. Fungsi enzimatik untuk erythrocuprein
(hemocuprein) The Journal of
Biological Chemistry . 1969; 244 (22) :6049-6055. [ PubMed ]
32. Y on JM, Baek IJ, Lee SR, et al. Pola ekspresi spatio-temporal sitoplasma Cu / Zn superoxide
dismutase
(SOD1) mRNA selama embriogenesis tikus. Journal of Molecular Histologi . 2008; 39 (1) :95-
103. [ PubMed ]
33. Y on JM, Baek IJ, Lee BJ, Y un YW, Nam SY. Ekspresi dinamis mangan superoksida
dismutase selama tikus
organogenesis embrio. International Journal of Developmental Biology . 2011; 55 (3) :327-334.
[ PubMed ]
34. Baek IJ, Y pada JM, Beom JL, et al. Pola ekspresi sitosol glutation peroksidase (cGPx)
mRNA selama tikus
embriogenesis. Anatomi dan Embriologi . 2005; 209 (4) :315-321. [ PubMed ]
35. Baek IJ, SeoDS, Y pada JM, et al. Ekspresi jaringan dan lokalisasi selular fosfolipid
glutathione hidroperoksida
peroksidase (PHGPx) mRNA pada tikus jantan. Journal of Molecular Histologi . 2007; 38 (3)
:237-244. [ PubMed ]
36. Y oon D, Pastore YD, Divoky V, et al. Faktor-1 hasil kekurangan eritropoiesis disregulasi
hypoxia-inducible
signaling dan homeostasis besi dalam pengembangan tikus. Journal of Biological Chemistry .
2006; 281 (35) :25703-25711.
[ PubMed ]
37. Y on JM, Baek IJ, Lee BJ, Y un YW, Nam SY. Emodin dan [6]-gingerol mengurangi
hipoksia-induced embryotoxicities di
berbudaya tikus seluruh embrio melalui upregulation hypoxia-inducible factor 1 dan
dismutases superoksida intraseluler.
Toksikologi Reproduksi . 2011; 31 (4) :513-518. [ PubMed ]
38. Johnson JD, Houchens DP, Kluwe WM, Craig DK, Fisher GL. Pengaruh tobaccosmoke
utama dan lingkungan pada
sistem kekebalan pada hewan dan manusia: review. Critical Reviews in Toxicology . 1990, 20 (5)
:369-395. [ PubMed ]
39. Jauniaux E, Hempstock J, Greenwold N, Burton GJ. Stres oksidatif trofoblas dalam
kaitannya totemporal dan regional
perbedaan dalam aliran darah plasenta ibu pada kehamilan awal normal dan abnormal. Amerika
Journal of Pathology .
2003; 162 (1) :115-125. [ PMCfree Artikel ] [ PubMed ]
40. Copp AJ. Neurulation di wilayah-normal dan abnormal. Kranial Journal of Anatomi . 2005;
207 (5) :623-635.
[ PMCfree Artikel ] [ PubMed ]
41. Cecconi F, Piacentini M, Fimia GM. Keterlibatan kematian sel dan kelangsungan hidup pada
neural tube defects: peran yang berbeda untuk
apoptosis dan autophagy? Kematian Sel dan Diferensiasi . 2008; 15 (7) :1170-1177. [ PubMed ]

Page 12
7/13/13
Efek Antiteratogenic dari -Karoten dalam Mouse Embrio budidaya Terkena Nikotin
www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3662118/
12/12
42. Semlali A, Chakir J, Goulet JP, Chmielewski W, Rouabhia M. asap rokok Seluruh
mempromosikan gingiva manusia
apoptosis sel epitel dan menghambat proses perbaikan sel. Jurnal Penelitian periodontal . 2011;
46 (5) :533-541. [ PubMed ]