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2005
Marta Ana Carballo / C. M. Cortada / A. B. Gadano
RIESGOS Y BENEFICIOS EN EL CONSUMO DE PLANTAS MEDICINALES
Theoria, ao/vol. 14, nmero 002
Universidad del Bo-Bo
Chilln, Chile
pp. 95-108
Revisin
RESUMEN
En los ltimos aos se ha vuelto a las plantas en busca de nuevos principios activos, ya que desde el comienzo
de la medicina fueron ellas las que proveyeron las estructuras bases para numerosos medicamentos. Entre los
principios activos de origen vegetal ms utilizados en teraputica se pueden citar Chenopodium multifidum L.
(Chenopodiaceae).; Lithraea molleoides Vell. Engl. (Anacardiaceae); Styphnolobium japonicum L Schott.
(Fabaceae); Prosopis alba Gris (Mimosaceae); Schkuhria pinnata (Lam.) (Asteraceae); Solanum sysimbriifolium
Lam. (Solanaceae). En el presente trabajo se propone realizar un relevamiento de las hierbas medicinales, as
como un screening a nivel genotxico mediante el ensayo de Electroforesis de una sola Clula en las plantas
mencionadas. En el screening realizado en este grupo de plantas medicinales argentinas, se determin que
cuatro de ellas, Chenopodium multifidum (paico); Schkuhria pinnata (canchalagua), Solanum sisymbriifolium
(espino colorado) y Lithraea molleoides (Molle de beber), indujeron dao al ADN, induciendo roturas de
cadena simple y doble. De esta forma se verifica la necesidad de regulacin en el consumo masivo e indiscri-
minado de las plantas medicinales.
PALABRAS CLAVES: Plantas medicinales, etnomedicina, genotoxicidad, ensayo del cometa.
ABSTRACT
Herbal medicines have become a popular form of therapy. Patients who self-medicate with herbs for preventive
and therapeutic purposes may assume that these products are safe because they are natural, but some of
their components can cause adverse effects or have the potential to interact with other drugs. Some common
herbs in traditional Argentine medicine are: Chenopodium multifidum L.(Chenopodiaceae); Lithraea molleoides
Vell. Engl. (Anacardiaceae); Styphnolobium japonicum L Schott. (Fabaceae); Prosopis alba Gris (Mimosaceae);
Schkuhria pinnata (Lam.) (Asteraceae); Solanum sysimbriifolium Lam. (Solanaceae).
In this review, we present the data obtained in the evaluation of the potential genotoxic effects of aqueous
extracts by the Single Cell Gel Electrophoresis as a screening test. Our results show that four of the six plants
evaluated induced double and single strand breaks in DNA. The ones that interact with the genetic material
were: Chenopodium multifidum (paico); Schkuhria pinnata (canchalagua), Solanum sisymbriifolium (es-
pino colorado) and Lithraea molleoides (Molle de beber). Indiscriminate consumption of medicinal plants
is not innocuous and their regulation is necessary.
KEYWORDS: Medicinal Herbs; Ethno-medicine: Geno-toxicity; Comet Assay.
Recepcin: 06/05/05. Revisin: 25/08/05. Aprobacin: 20/10/05.
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tes combinaciones poseen efectos estimu- Para ello debe valerse de los denomina-
lantes, calmantes o teraputicos en el hom- dos marcadores biolgicos o biomarcadores
bre (Wills et al., 2000). que indican: exposicin a sustancias txicas
Estos principios son vitaminas, minera- (en los planos molecular o celular), efectos
les, carbohidratos, microelementos y agen- adversos en la salud o susceptibilidad a dis-
tes curativos especficos, que ayudan al cuer- tintos agentes. Estos biomarcadores repre-
po en su lucha contra la infeccin. Las hier- sentan cambios en el organismo, o en la c-
bas se usan mucho para aliviar la enferme- lula, que pueden ser cuantificados en dife-
dad e impedir que sta vuelva. Desintoxican rentes sistemas biolgicos (NRC, 1987;
el organismo y apoyan al sistema inmuno- NCR, 1991; Wogan, 1992). Se considera
lgico, ayudndole a mantener el equilibrio que un marcador de efecto biolgico repre-
(Font y Quer, 1983). senta un evento que puede correlacionarse
Entre los principios vegetales ms usados con el dao a la salud y tiene posibilidad
en teraputica podemos citar: Las hormo- predictiva (NCR, 1991).
nas esteroides (progestgenos, corticosteroi- Los compuestos qumicos pueden interac-
des, estrgenos y agentes anablicos); atro- tuar directa o indirectamente con el ADN,
pina y efedrina y sus derivados semisintti- produciendo cambios que afectan el funcio-
cos; morfina y derivados hipnoanalgsicos; namiento celular y que a largo plazo causan
podofilotoxina y su derivado etopxido; trastornos en la salud, particularmente trans-
vincristina, vinblastina y taxol (anticancer- formaciones malignas. De ah la importan-
genos); derivados flavonoides del Ginkgo cia de detectar en sus etapas iniciales la ac-
biloba (activador cerebral); Ginseng. cin sobre el material gentico mediante
biomarcadores de efecto. Con este fin se uti-
lizan determinaciones tales como las Abe-
3. GENTICA TOXICOLGICA rraciones Cromosmicas (AC) (Preston et
al., 1981; Au et al., 1998), el Intercambio
Generalmente, la actividad farmacolgica de de Cromtides Hermanas (ICH) (Taylor,
las hierbas medicinales se asocia a la toxici- 1958; Wolf et al., 1974; Bender et al., 1974;
dad de las mismas y el efecto txico induci- Painter, 1980; Shafer, 1982), Microncleos
do depende de la dosis consumida. Por esto (Au et al, 1998), Mutaciones Gnicas a nivel
resulta importante estudiar las plantas txi- del locus HPRT (Au et al., 1998; Albertini et
cas como fuente de productos activos. al., 1998), sntesis de ADN no programada y
Una de las formas de evaluacin de toxi- electroforesis de una sola clula (ensayo del
cidad est dada por su efecto sobre el patri- cometa) (Ashby, 1988; Carrano y Natarajan,
monio gentico, nivel de anlisis propio de 1988; Wogan, 1992), entre otros.
la gentica toxicolgica, disciplina cuyos En estudios de genotoxicidad las tcni-
objetivos principales son, entre otros: cas de eleccin deben ser capaces de detec-
tar tanto el dao como la reparacin conse-
Implementar ensayos y mtodos para la cuente al material gentico en clulas indi-
evaluacin del riesgo producido por agen- viduales. Uno de los ensayos que cumple con
tes que se encuentran en el medio ambiente esta premisa es la electroforesis de una sola
y cuya presencia puede alterar la integri- clula o ensayo del cometa.
dad del patrimonio gentico.
Elucidar la relacin entre genotoxicidad e
iniciacin de un proceso neoplsico.
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capa de una solucin de agarosa de bajo Una vez establecido el porcentaje de clulas
punto de fusin al 0,5%. Se incuban las en cada categora, se calcula el ndice de
laminillas hasta solidificacin a 4C duran- Dao (N), por cada individuo, por cada
te 10 minutos y posteriormente se retira el concentracin ensayada.
cubreobjetos.
Una vez finalizada la preparacin de los N= Ncl Cat I + 2xNcl Cat II +
extendidos, se los somete a la accin de una 3xNcel Cat III + 4xNcl Cat IV
solucin de lisis en fro. Posteriormente, se
colocan los preparados en una cuba de Una vez calculado el ndice de dao (N),
electroforesis horizontal, en la cual se incu- se procede al anlisis exploratorio de los da-
ban con buffer de corrida para lograr el tos mediante el test de Varianza (ANOVA)
desenrollamiento de la doble hebra de ADN. de medidas repetidas (Anderson et al., 1994;
La electroforesis se lleva a cabo a temperatu- Graphpad instat) .
ra ambiente durante 20 minutos a 25 volts.
Luego, los preparados son lavados con bu-
ffer de neutralizacin, para eliminar los res- 5. RESULTADOS Y CONCLUSIONES
tos de detergentes y lcalis que pudieran in-
terferir con la coloracin fluorescente. Pos- En el presente trabajo se realiza un releva-
teriormente, se colorean con bromuro de miento sobre las plantas medicinales men-
etidio (todo el procedimiento descripto se cionadas como hierbas de uso frecuente en
lleva a cabo bajo luz amarilla, para evitar el la Repblica Argentina mediante la deter-
dao adicional al ADN que se pueda gene- minacin del ensayo del cometa en linfoci-
rar durante el desarrollo de la metodologa). tos de sangre perifrica, expuestos in vitro a
El anlisis microscpico de los preparados diferentes concentraciones de los extractos
se realiza en un microscopio de epi-fluores- acuosos de los productos naturales de inte-
cencia. El dao a la molcula de ADN se rs .
cuantifica midiendo el largo de 100 come- En los resultados obtenidos en el ensayo
tas sucesivos (50 cometas/preparado /con- del cometa se evidenci que cuatro de las
centracin /preparacin /individuo, realizan- seis especies evaluadas indujeron un incre-
do la cuantificacin por duplicado) por mento de roturas en la doble hlice del
medio de un ocular graduado. ADN. Esto sugiere la presencia de sustan-
Es de fundamental importancia la inclu- cias txicas en los extractos acuosos de esas
sin de controles positivos y negativos. Se re- plantas medicinales (Ch. multifidum 1 in-
comienda que el control positivo sea perxi- fusin y cocimiento; L. molleoides; S.
do de hidrgeno 50mM. Dicha sustancia es sysimbriifolium, S. pinnata) (Figuras 1, 2).
altamente oxidante e induce en el ADN ro- Al analizar los resultados obtenidos en la
turas de cadena simple y doble y sitios lcali evaluacin de la infusin de Ch. multifidum,
lbiles. El control negativo debe ser el dilu- se observ una gran heterogeneidad en la
yente utilizado en la preparacin a evaluar. respuesta, dependiendo de cada dador. Si
Los resultados se deben analizar estable- observamos la Figura 1b, vemos que existe
ciendo la categora de dao hallada en cada un efecto positivo, no llegando ste a ser es-
individuo por cada concentracin ensaya- tadsticamente significativo. Estas variacio-
da. Se establecen cuatro categoras de dao, nes interindividuales, como ya fue mencio-
dependiendo del largo total del cometa: bajo nado, estn influenciadas fundamentalmente
(<20 mm); medio (20-40 mm), alto (40-80 por dos mecanismos: la diferente suscepti-
mm) y clulas totalmente daadas (>80mm). bilidad individual y la extremada sensibili-
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a) b)
Figura 1. ndice de dao al ADN en tres dadores expuestos a Chenopodium multifidum L., cuantificado
mediante el ensayo del cometa. a) Cocimiento; b) Infusin.
a) b)
c)
Figura 2. Electroforesis de una sola clula en linfocitos de sangre perifrica de tres dadores expuestos a
a) Lithraea molleoides; b) Schkuhria pinnata; c) Solanum sysimbriifolium.
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a) b)
Figura 3. ndice de dao al ADN en tres dadores cuantificado mediante el ensayo del cometa. a)
Prosopis alba; b) Styphnolobium japonicum.
dad de los linfocitos como sistema de ensayo Aunque las plantas medicinales tienen
(Angelis et al., 1999; Tice y Strauss, 1995). propiedades teraputicas, algunas de ellas
Otros ejemplos de heterogeneidad en la pueden poseer compuestos con propiedades
respuesta se observaron en los resultados ob- no slo mutagnicas, sino tambin carcino-
tenidos con P. alba y S. japonicum, donde se gnicas. Ejemplos de stos son la quercetina
evidencia que el individuo 1 es extremada- y la rutina o algunos constituyentes de espe-
mente sensible frente al agregado de un agen- cies exticas (Hocman, 1989).
te externo (Figura 3). Los ensayos de screening en mutagenici-
La cuantificacin de las roturas de la ca- dad, en una primera instancia, son utiliza-
dena ADN en algunas ocasiones es utilizada dos como ensayos cualitativos sobre poten-
como una medida de genotoxicidad, no slo ciales mutgenos. En una evaluacin muta-
porque ellas per se puedan causar la muerte gnica los resultados positivos pueden ser
celular, sino por que probablemente este tipo utilizados de diferentes maneras. Entre ellas,
de lesiones sean los precursores de las abe- la de mayor aplicacin durante los ltimos
rraciones cromosmicas (Natarajan et al., 20 aos ha sido la de tomarlos como una evi-
1980; Tice y Strauss, 1995). dencia de peso para predecir carcinogenici-
De esta manera la electroforesis de una dad de compuestos. Si bien la identificacin
sola clula resulta ser un buen candidato de carcingenos es importante, la evaluacin
como mtodo de screening para la deteccin de mutagenicidad no es un simple compo-
de dao a la molcula de ADN, sirviendo nente de este proceso, sino que es de funda-
como primera aproximacin, en forma r- mental ayuda en el asesoramiento de riesgo/
pida y sencilla del potencial genotxico de beneficio frente a la exposicin de diversas
una sustancia analizada que debe ser corro- sustancias (Dearfield, 1995).
borada mediante su evaluacin con otros En el presente trabajo se observ una
biomarcadores de efecto genotxico. heterogeneidad sustancial en la distribucin
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