PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATO LICA DEL ECUADOR

ESCUELA DE BIANA LISIS

CARRERA DE MICROBIOLOGIA
MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL

PRCTICA No. 3
AISLAMIENTO DE LEVADURAS

OBJETIVOS:

Aislar e identificar levaduras a partir de diferentes ecosistemas y/o alimentos fermentados

Identificar las levaduras por me todos bioqumicos tradicionales y/o galeras API

INTRODUCCIO N
Las levaduras esta n muy difundidas en la naturaleza. Esta n presentes en frutas, flores, granos, suelo,
aire, el intestino de algunos animales y en algunos insectos.
Las levaduras son micro hongos que se encuentran generalmente en forma de ce lulas u nicas, de
aproximadamente 5 a 10 micras y se reproducen por gemacio n. Algunas levaduras tienen u nicamente
ce lulas individuales y otras pueden tener cadenas cortas, un cierto rango de formas celulares que
incluyen diversos tipos de filamentos.
Cuando la poblacio n esta en crecimiento tiene la caracterstica de la presencia de yemas; la ce lula hija es
inicialmente una pequen a yema que va creciendo hasta alcanzar el taman o semejante al de la madre y
se separa, dejando una cicatriz.
En las levaduras la envoltura celular incluye la membrana citoplasma tica, constituida por lpidos,
protenas y manano, el espacio periplasma tico y la pared celular que contiene protenas y gran cantidad
de glucano y manano.
El hombre ha utilizado las levaduras desde hace mucho tiempo para fermentar zumos de frutas,
producir bebidas alcoho licas, hace pan y otros nutritivos productos alimenticios. Actualmente se las
emplea en otros procesos fermentativos, para sintetizar vitaminas, grasas y protenas a partir de
azu cares sencillos y nitro geno amoniacal y tambie n para el control biolo gico en cultivos y en
poscosecha. Pero las levaduras pueden ser utilizadas tambie n en la produccio n de protena unicelular,
como alimento animal o humano.
Algunas levaduras causan enfermedades al hombre, los animales y las plantas o deterioran alimentos,
textiles y otros materiales.
Se puede aislar levaduras a partir de flores y frutas.
Como sabemos, la identificacio n puede llevarse a cabo solo en un cultivo puro, se observan las
caractersticas morfolo gicas de las colonias en agar, taman o, forma, bordes, la superficie (convexa o
co ncava), brillante o mate, pigmentos, etc.
Se determina el aspecto de los cultivos en medio lquido (caldo YPD), la formacio n de sedimento
pulverulento (que forma una suspensio n homoge nea al agitar el tubo) o grueso; adema s, puede haber
presencia de espuma: gruesa o fina. Otra opcio n es que al finalizar la incubacio n la levadura forma una
especie de velo en la superficie, pudiendo presentar este velo tardo un aspecto fino o formar islotes. La
mayora de las levaduras con metabolismo oxidativo dominante, forman un velo inmediato en el medio
lquido, a veces reducido a un simple anillo, ma s o menos graso, y puede haber una leve fermentacio n.
El ge nero Pichia y algunas especies de Candida presentan un velo espeso, grueso, plegado, mientras que
Candida micoderma es blanquecina y harinosa.
Todo esto se complementa con pruebas bioqumicas como fermentacio n de carbohidratos, asimilacio n
oxidativa de carbohidratos, asimilacio n de nitrato, hidro lisis de u rea, etc.

MATERIALES
PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATO LICA DEL ECUADOR
ESCUELA DE BIANA LISIS
CARRERA DE MICROBIOLOGIA
MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL

Frascos con 50 mL de Tween 80 al 0,1% + Cloranfenicol (50 mg./L)

Cajas con Agar YPD
Asas de drigalsky
Tubos de fermentacio n de carbohidratos
Tubos para asimilacio n de carbohidratos
Tubos con solucio n salina este ril
Tubos con caldo u reaTubos con 5 mL de Agar YDP inclinado
Tubos con caldo YPD
Muestras de flores y frutos o bebidas fermentadas

PROCEDIMIENTO
1. Colocar las muestras en el frasco con Tween 80 al 0,1% y llevar a agitacio n por 90 min.
2. Inocule 100uL de solucio n de la muestra en el centro de una caja Petri con agar extracto de
malta y en una con agar YPD Estre con la ayuda de un asa de Drigalsky
3. Incube a 28-30C por 48 horas o hasta el aparecimiento de colonias.
4. Asle las colonias sospechosas en otra caja de agar YPD.
5. Realice una coloracio n Gram para confirmar la morfologa.
6. Escoja una colonia de levadura (confirmada por Gram) para inocular en tubos de YPD
7. Realice la identificacio n de la levadura utilizando API para levaduras o pruebas bioqumicas
tradicional
8. Prepare una suspensio n de colonias en solucio n salina este ril e inocule los tubos para
asimilacio n y fermentacio n de carbohidratos, caldo YPD y u rea con 200 ul de la suspensio n e
incubar a 28C por 48 horas. Los tubos negativos se pueden dejar hasta 4-6 das antes de
descartarlos.