3.4.

-Aumento y resolucin

Los trminos aumento y resolucin deben ser bien conocidos por todo usuario del
microscopio. El mecanismo mediante el cual se produce este fenmeno ha sido estudiado por
siglos y se explica mediante leyes de la fsica. Considerar nicamente el aumento no es
suficiente para sacar el mejor partido del microscopio, pues otro factor, la resolucin,
determina lo que se ver.

3.4.1.-Aumento

El poder de aumento de una lente est determinado por el grado de curvatura de su superficie
y la distancia focal. En las lentes convexas mientras mayor sea la curvatura, menor ser la
distancia focal y mayor ser el aumento. Se ha enunciado anteriormente que el microscopio
compuesto aumenta en dos etapas y puesto que una sola lente no es suficiente se deben
colocar varias lentes una detrs de la otra, potenciando de esta manera el poder de aumento.
El primer juego de lentes, cercano al objeto en estudio, se denomina objetivo y el segundo
juego, cercano al ojo del observador se denomina ocular (11). Cada sistema de lentes es capaz
de producir una imagen aumentada cuyo valor se enuncia con la letra x, as que 10x significa
que la imagen est aumentada 10 veces.

Para conocer en el microscopio compuesto el aumento definitivo de una imagen se aplica la

siguiente frmula:

AUMENTO TOTAL:

Aumento del objetivo x Aumento del ocular.

Aunque esta frmula bsica permite obtener el aumento total de una imagen, con las tcnicas
de fotografa clsica o fotografa digital y el uso de software de procesamiento de imgenes es
posible lograr un aumento suplementario. Para obtener el aumento definitivo habra que
considerar los factores de ampliacin que se realizan en la pantalla del computador (para
luego imprimirla) o al copiar la foto a papel mediante la tcnica de fotografa clsica.

El poder de aumento de un sistema ptico tiene sus lmites y el aumentar las imgenes acarrea
prdida de informacin o detalles del objeto estudiado. Esto puede ser resuelto mediante otro
principio: La resolucin.

Con el microscopio compuesto clsico es posible alcanzar un aumento mximo de 1000x. Esta
limitacin ha sido resuelta empleando un haz de electrones en lugar de un rayo de luz visible, y
se abri as una nueva era con la microscopa electrnica aplicada al estudio morfolgico.

3.4.2.-Resolucin

Es la capacidad que tiene un sistema ptico de aislar dos puntos que se encuentran muy
prximos entre s, de manera que se puedan ver individualizados uno del otro (14). La riqueza
de detalles que puede ser observada al microscopio depende de la habilidad de este para
hacer que los puntos del objeto que estn muy cercanos aparezcan en la imagen como puntos
separados. Mientras ms corta sea la distancia entre esos puntos del objeto, ms finos sern
los detalles. La distancia entre esos dos puntos se conoce como Lmite de Resolucin, el cual es
tambin referido como el Poder de Resolucin y puede ser utilizada como un indicador del
rendimiento del microscopio. Esto se puede comparar vagamente con algunos aspectos de la
informtica, el tamao del pixel por ejemplo; mientras ms pequeo sea el tamao, mayor
ser la cantidad de detalles de la imagen digital.

Lmites de Resolucin aproximados de algunos sistemas pticos:

Ojo humano: 0,2 mm.

Microscopio Fotnico: 0,2 m.

Microscopio electrnico: 0,2 nm.

3.4.3.-Factores que determinan el poder de resolucin

Al observar pequeos objetos al microscopio, la luz incidente proveniente de ellos es desviada

de su trayectoria inicial y mientras ms pequeos sean, mayor ser la desviacin. Las lentes del
objetivo deben recolectar como sea posible la mayor cantidad de rayos desviados para formar
una imagen ntida; a ms rayos capturados, mayor resolucin (fig.3-3).

Figura 3-3.-Esquema que muestra un objeto (1) que es atravesado por un haz de rayos
luminosos (2) los cuales son captados por el objetivo (3). Al formarse el cono de luz
proveniente del objeto se determina un ngulo, tambin llamado de apertura, donde a
representa la mitad del mismo. Tomado de Kapitza H G. Microscopy from the very begining
(13).
A partir de las observaciones precedentes, nace la definicin de apertura numrica (AN), cifra a
considerar para determinar el rendimiento de una lente objetivo (13):
AN = n x sen a

Donde a = la mitad del ngulo de apertura del objetivo.

n = el ndice de refraccin del medio que se encuentra entre el objeto y el objetivo.

(Para el aire n = 1 y para el vidrio o aceite n = 1.51)

Otra manera de incrementar la resolucin es creando, del lado de la fuente luminosa, un cono
amplio con un ngulo mayor. Para ello se emplea otro juego de lentes denominado
condensador el cual posee la misma apertura numrica que el objetivo (fig. 3-4).

Figura 3-4.-El objeto (1) es iluminado con un rayo de luz (2) que formar un cono luminoso
frente al objetivo. Se coloc otra lente (4) que recoge y condensa la luz antes que ilumine al
objeto. Tomado de Kapitza H G. Microscopy from the very begining (13)

Para aumentar an ms la resolucin, adems de agregar un condensador, otra posibilidad es

colocar algn lquido entre la lmina cubreobjeto y el objetivo. Se ha obtenido buenos
resultados con ciertos aceites (aceite de cedro) cuyo ndice de refraccin es igual al del vidrio
cubreobjeto, eliminando toda reflexin de los rayos luminosos (fig. 3-5).
.

Figura 3-5.-A la izquierda el espacio entre el cubreobjeto (5) y el objetivo (3) es ocupado por el
aire; a la derecha el espacio es ocupado por un lquido de inmersin (6). Aprciese que el cono
de luz y el ngulo a son mayores con inmersin. Modificado de de Kapitza H G. Microscopy
from the very begining (13).

El poder de resolucin de un microscopio compuesto de campo claro puede ser calculado de

manera razonable mediante la frmula (13):

Donde delta= resolucin expresada en micrmetros.

Lambda = longitud de onda de la luz empleada.

Como la ANobj y la ANcond son iguales, se resume 2AN.

De los anteriores planteamientos se deduce que el poder de resolucin de un sistema ptico,

en trminos generales depende principalmente de:

Apertura numrica del objetivo y condensador: La relacin apertura/resolucin es

directamente proporcional; a mayor apertura, mayor resolucin.

Longitud de onda de la radiacin electromagntica utilizada: La relacin longitud de

onda/resolucin es inversamente proporcional; a menor longitud de onda, mayor resolucin.