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Cultura de microrganismos
preparao dos meios de cultura
O trabalhos feito em culturas puras- culturas que contenham apenas um nico tipo
ou espcie de microrganismos
Estufa a 180C cerca de 1h para esterilizar meios no lquidos, pois na estufa tudo
evapora (calor seco).
16/03/05
Zona de crescimento
Meio lquido - ana ao rubro para esterilizar, arrefece-se a ana nos cantos do tubo e
num bocadinho do lquido, mergulha-se a ana e sobrepe-se sobre o risco.
Meio slido - (bactrias e levedura) ana ao rubro, arrefece-se a ana no meio sem
crescimento, mergulha-se no meio me crescimento e passa-se sobre o risco da caixa.
Colnias isoladas
Colnia isolada - resulta de uma nica clula que ficou imobilizada. Isto acontece s
em meio slido. O crescimento exponencial e visvel a olho nu. Estas colnias
apresentam as caractersticas de cada tipo de clula, uma morfologia para cada tipo de
clula, por exemplo, tem a mesma cor.
Na nossa experincia vai-se observar colnias isoladas de varias cores, umas rosa
outras amarelas, isto diz-nos que as culturas no so puras mas sim mistas.
Colnia - crescimento observvel a olho nu e resulta da multiplicao de uma nica
clula, e s acontece em meio slido.
30/03/05
Tcnicas de assepsia
o tempo foi feito por excesso, ningum est 10 min perto da chama, tb a presena de
correntes de ar alteraram os resultados.
Tcnicas de inoculao
Placas de individualizao
Suspenso inicial
Espera-se que cada clula v dar origem a colnias isoladas e a cada clula isolada
corresponde uma colnia,; na preparao 10^-2 esperamos ter 10vezes menos
colnias que na 10^-3, na 10^-5 esperamos 100 vezes menos que em 10^-3 e assim
consecutivamente. Este mtodo permite-nos quantificar o n. De clulas viveis ou
vivas na preparao.
Biomassa seca - filtrao feita por dois filtros. Estes filtros so standards, pem-se os
dois filtros na estufa, entretanto a gua evapora-se e dps pesa-se os dois filtros e
calcula-se a diferena de biomassa.
15 12 16 20
21 23 21 13
MICROSCOPIA DE EUCARIONTES
Eucariontes:
protozorios:
ciliados
flagelados locomoo
amibides
algas
chlorophyta
Cor dos
euglenophyta
pigmentos
bacillariophyta
dinophyta
20-04-05
Uma hifa pode-se reproduzir assexuadamente ou se encontrar uma hifa de sexo oposto
pode-se reproduzir sexuadamente sendo que primeiro ocorre a PLASMOGAMIA de
duas hifas n formando-se uma hifa dicaritica. Dela forma-se o corpo frutfero onde
se formam os ascos. Nos ascos d-se a cariogamia formando-se o zigoto 2N (meiose).
Os ascoporos (internos) vo germinar aps sarem do asco. Da meiose ocorre mitose
formando-se 8 ascsporos.
Observaes:
fungos filamentosos ascomicetas (ascosporos)
Botryosphaeria quercicula (10x/40x)
levedura ascomiceta
Sacch. cervisiae (40x/100x)
PROCARIONTES
- vescula de poli-b-hidroxibutirato
FORMA:
- esfrica cocos- isolados, pares (diplococos), conj 4, conj 8( stafilococos)
conj cadeias (streptococos)
- bastonete- bacilo- isolados, pares cadeia ou em paliada
- helice- rigidas- espirilos ou vibres
- flexveis- espiroquetas
Preparao
Bacillus magaterium (40x/100x)- ver vescula de poli-b-hidroxibutirato
Staphylococus aureus (40x/100x)
Observar
movimento de tenso- tremem
movimento prprio- andar de um lado para o outro e cambalhotas.
Movimento para um s lado- existncia de uma bolha de ar
-registar o modo de aglomerao.
04-05-05
Observaes a fresco - gota de gua para inocular uma cultura em meio slido, para
suspender o preparado.
Preparao a fresco - podemos observar o movimento, a forma das clulas e a forma
de agregao.
Esfregao - fazem-se para se poderem fazer coloraes diferenciais.
TP n 6
- colocar uma pitada de terra em tubo com gua estril (agitar suavemente). A
gua estril serve para nos dar a certeza que os organismos a isolar so s
provenientes da terra.
- pasteurizao da terra--> pr tratamento da amostra - serve para eliminar
clulas vegetativas de microrganismos que no conseguem sobreviver s
condies da gua a ferver.
- Enriquecimento- enriquecer a amostra favorecendo as condies para que
esta se multiplique, isto , multiplicar os organismos que interessam em
detrimento dos que n interessam .
- O pr tratamento funciona como um pco de enriquecimento , porque para alem
de se favorecer a multiplicao de microrganismos, eliminam-se aqueles que
no interessam, isto , eliminam-se todas as clulas vegetativas que no
endsporos.
10^-1
4,5ml de gua
T.P n 7
18-05-05
Morango
- leveduras na pelcula do morango
- a tentativa foi de criar as condies de pH cido devido aos aucares que esto
nos aucares.
- Isolar ASCOMICETAS
- Fermentaes espontneas - este tipo de leveduras aparecem nos 1 estdios,
convertendo hidratos de carbono em etanol e CO2, mas estas leveduras so
pco resistentes ao etanol, no suportando estas concentraes altas de etanol.
- Especial
Do ponto de vista morfolgico - forma de limo
- reproduo por gemulao bipolar- nos dois plos
da clula
- a clula filha sempre menor que a clula me, logo a
diviso assimtrica.
Do ponto de vista microscpico - descrio do tubo - indcios de bolhas de gs (CO2)
- quanto pelcula, anel, sedimento, fluidez
- presena ou no de funfos filamentosos.
1-06-05
- meio CMA-
salincia volta dos riscos da lmina tem menor ou nenhuma
concentrao de oxignio.
Focar 10x
Focar 40 x
Verificar se existe clulas com ascos e ascosporos (1/2 ascosporos
por asco)
- as colnias tm tamanhos diferentes na placa de isolamento, pois as colnias
mais afastadas como tm mais espaamento, tm mais nutrientes para se
alimentares, o que favorece o crescimento.
Resumo
Procariontes (observao)
morfologia das clulas cocos
- bacilos (bastonete)
- espirilos (hlice flexivel ou rgida)
- filamentosos
cianobactrias actinomicetas
bactrias filamentosas
(ACTINOMICETAS)
clulas diferenciadas
- endsporos- bacilos
- actinomicetas- condios
- heterocistos e acinetas- cianobactrias
- bacteroides- rhizobium
capacidade de diferenciao - no conseguem reverter ao estado inicial - processo
irreversvel - bacteroides e heterocistos.
stafilococos Escherichia
BACILLUS
-pr-tratamento - pasteurizao (ressuspenso em gua a ferver). Os bacilos
produzem ensporos que a forma mais resistente que existe, logo os endosporos
que resistiam pasteurizao.
-projectar o meio de cultura enriquecimento - (aumentar por multiplicao)
LEVEDURAS
- fruto ascomiceta- clulas em forma de limo e gemulao bipolar.
- condies para haver micro fermentao - (passo selectivo, mto
provavelmente o etanol)- meio rico em aucares do fruto.
- Inocular placas
- Ases de fermentao- libertao de CO2 (bolhas) e etanol.
- Observar ao microscpio colnias da placa de isolamento do meio YM a pH
3.5 para ver as clulas (meio no selectivo).
- A observao no foi exclusiva s com leveduras, tambm se encontrarem
algumas bactrias no meio preparado pela professora relativa a uma placa de
morangos sem microfermentao, logo o meio, mesmo sendo cido e
normalmente no propcio ao crescimento de bactrias, foi neste caso bastante
propcio pois elas existiam nele preferencialmente.
- Placa de isolamento meio YM- passo de purificao- obteno de colnias
isoladas (as que apareciam tinham o aspecto proposto) observao ao
microscpio.
- Placa de isolamento MYP- obteno de uma cultura pura
- Placa de CMA- induzir a meiose- observao de ascos com ascosporos
confirmao do gnero Hansios...