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Microbiologia PRTICA

Prof. Isabel Serveira


(gabinete 203) exteno 11107 isn@fct.unl.pt

Cultura de microrganismos
preparao dos meios de cultura

A- meios slidos (caixa de petri)


1- meios de extractos de leveduras com extracto de malte (YMA)
glucose 1% (p/v); peptona 0.5%; extracto de levedura 0.3%; estrato de malte
0.3%; agar 2%

Para preparar um volume de 700ml temos que medir a quantidade de 70ml de


YM 10x com 630ml de gua. Como a percentagem de agar foi de 2% e segundo uma
regra de trs simples temos de adicionar 14g de agar preparao

2- meio de agar nutritivo


NA: extracto de carne 0.3%; peptona 0.5%; agar 1.5%
(o agar no dissolve a frio, logo vai ficar sempre turvo) NA (difco):2.3% (p/v)

a)- NA7 (pH=6.8)


o volume de meio a preparar de 500ml de gua e 11.5g de NA, faz-se
a dita mistura pipetando-se este preparado e juntando-se coma gua)
b)- NA3 (pH=3)
o volume a preparar tambm de 500ml e a quantidade a pesar de
11.5g, sendo que, como o pH tem tendncia a solidificar o agar, necessrio juntar
mais agar (2.5g) e acert-lo com o do meio com HCl 1M (5.5ml).

B- meios lquidos (tubos de ensaio)


1- meio YM
prepara-se de volume 100ml, sendo que o preparado contm 90 ml de gua com 10ml
da quantidade de YM 10x.

Depois de se efectuarem as solues, procedeu-se colocao das mesmas na


AUTOCLAVE sob as seguintes condies:
- Temp 120 C a uma presso de 1 atm, estas condies vo permitir a
esterilizao dos compostos criando-se um ambiente saturado de gua que
torna estreis todos os microrganismos existentes.

O que se pretende neste trabalho tambm a multiplicao dos microrganismos,


este facto permitido se houver alimento no preparado.
Os meios de cultura so constitudos por soluo aquosa e nutrientes. A
biomassa de uma clula constituda por excelncia pela gua, com cerca de 90% do
total, e por muitos outros elementos, como o hidrognio, oxignio, azoto, enxofre,
calcio... (biomassa seca).
Certos organismos no sintetizam certos componentes, essencialmente
vitaminas, ento necessrio fornece-las.
Tambm convm fornecer uma fonte de energia, por exemplo carbono,
dependendo tambm do metabolismo energtico de cada organismo.
- meio de cultura quimicamente definido isto crias um meio adequado para a
multiplicao dos organismos.
- Meios complexos- quando no se sabe o que uma determinado microrganismo
necessita para a sua multiplicao , fornece-se tudo , como foi o caso da
experincia. Isto feito porque se tem a certeza que os microrganismos se
multiplicam neste meio porque se est a dar cultura tudo em excesso. Para
alem de este mtodo ser utilizado nestes casos, tambm o quando se pretende
que a populao microbiana se multiplique rapidamente.
Nos meios de cultura utilizada apenas gua desmineralizada (gua da torneira
que passa numa coluna de resina) a gua da torneira no utilizada porque contm
inibidores de crescimento microbiana mantendo assim os microrganismos.

Meios de cultura (microrganismos+meio)


- Liquido
- Slido
Os meios slidos so obtidos pelos meios lquidos adicionando apenas agar
(polissacrido que no serve nem de fonte de carbono nem hidrognio para o
microrganismo, no dissolve a frio, s a quente, e quando arrefece solidifica o meio)

O trabalhos feito em culturas puras- culturas que contenham apenas um nico tipo
ou espcie de microrganismos

Depois de se trabalhar o meio, convm-se esterilizar o mesmo. A esterilizao liberta


o meio de todo e qualquer microrganismo, esta esterilizao tem de ser drstica, a
temperatura elevada, porque existem certas estruturas de resistncia, por exemplo,
endosporos, e esporos de fungos filamentosos, que resistem a condies bastante
adversas. A temperatura tem de chegar a 120C e como mtodos tem se se usar o meio
saturado em gua (meio hmido) que se obtm pela AUTOCLAVE (calor humido)

Estufa a 180C cerca de 1h para esterilizar meios no lquidos, pois na estufa tudo
evapora (calor seco).

Filtrao, usada quando as solues so sensveis ao calor, por exemplo as


Termolbeis (um determinado antibitico extremamente sensvel ao calor).

Em meio slido o preparado trabalhado numa caixa d petri. O mais usual


utilizar-se as tcnicas de asspsia- manuteno da esterilidade dos meios de cultura-
possvel com as chamas do bico de busen, que criam correntes de ar quente que
afastam os microrganismos, isto eles n se aproxima das bancadas de trabalho,
evitando assim a contaminao da cultura que se est a trabalhar.

Inoculao esta tcnica trata a manuteno de uma determinada cultura d


microrganismos que deliberadamente so introduzidos num meio de cultura liquida ou
slida para a se multiplicarem, mas smp mantendo o seu carcter estril.
Os parmetros fisiolgicos que influenciam esta tcnica so:
Meio de cultura
PH (ex. Os fungos para se multiplicarem em condies mais propcias
precisam tm um pH mais cido, as bactrias necessitam de um pH mais
neutro)
Temperatura
A presena/ausncia de oxignio

Incubao - tcnica que favorece a multiplicao dos organismos, trata as condies


do meio que foram feitas para ocorrer a experincia (ex foi incubado a X horas, a
presso Y, temp W...). so as condies onde se processam as experincias

16/03/05

Dividiu-se as placas isoladas em 4 quadrados


Deposito d microrganismo

Zona de crescimento
Meio lquido - ana ao rubro para esterilizar, arrefece-se a ana nos cantos do tubo e
num bocadinho do lquido, mergulha-se a ana e sobrepe-se sobre o risco.

Meio slido - (bactrias e levedura) ana ao rubro, arrefece-se a ana no meio sem
crescimento, mergulha-se no meio me crescimento e passa-se sobre o risco da caixa.

Placa de isolamento - o propsito ter colnias isoladas, para isso temos de


decrescer ou diluir o n de organismos que se depositaram sobre o risco. O mtodo
ser depois de levar a ana ao rubro, arrefecendo-a no centro da caixa no agar slido,
descrever dois riscos na placa como ilustra o desenho:

As clulas so arrastadas para a


direita quando a ana toca na zona onde
se depositaram os microrganismos.
Torna-se a levar a ana chama
e faz-se o mesmo procedimento
Torna-se a levar a ana ao rubro
e faz-se mais dois riscos.

Colnias isoladas

Assim fez-se decrescer as clulas de microrganismos, sob a diluio, ao ponto de se


ter clulas individuais imobilizadas pelo agar. Estas clulas vo-se multiplicar e
formar uma colnia isolada, visvel a olho nu.

Colnia isolada - resulta de uma nica clula que ficou imobilizada. Isto acontece s
em meio slido. O crescimento exponencial e visvel a olho nu. Estas colnias
apresentam as caractersticas de cada tipo de clula, uma morfologia para cada tipo de
clula, por exemplo, tem a mesma cor.

Placas de isolamento - objectivo obter colnias isoladas


A obteno destas colnias isoladas vai-nos dar uma cultura pura, s por
colnias isoladas que se obtm culturas puras.

Na nossa experincia vai-se observar colnias isoladas de varias cores, umas rosa
outras amarelas, isto diz-nos que as culturas no so puras mas sim mistas.
Colnia - crescimento observvel a olho nu e resulta da multiplicao de uma nica
clula, e s acontece em meio slido.

30/03/05

Tcnicas de assepsia

o Meio lquido fluidez do meio, comparao com o meio estril no inoculado


- microrganismos moveis necessitam de oxignio, formando-se
uma pelcula superfcie do meio, por vezes, a pelcula, desenvolve-se
volta aderindo-se s paredes do tubo, formando-se o chamado - anel.
- se forma ou no sedimento - deposio no fundo do tubo.

o Meio slido - 2 placas NA7 perto da chama


Crescimento ou no a olho nu
- junto da janela

o tempo foi feito por excesso, ningum est 10 min perto da chama, tb a presena de
correntes de ar alteraram os resultados.

Podem-se observar dois tipos de crescimento das colnias:


- fungos filamentosos - crescimento radial e peludos
- colnias do tipo bacteriano - as leveduras do tipo unicelular tm um
crescimento de varias cores formando colnias bastante coloridas.

Tcnicas de inoculao

o Meio slido - nas placas de isolamento, verificar se os microrganismos


crescerem no mesmo meio e o tipo de cultura que se inoculou, se mista
de pura
- se so culturas isoladas
- comparar o crescimento- ou o microrganismo no cresce
- ou crescem de modo lento, isto
as colnias so mais pequenas, multiplicam-se mais devagar.
Mtodos de quantificao microbiana

Inocular um fungo filamentoso - lana ao rubro, arrefece-se na placa YM sem meio de


cultura, tocam no fungo filamentoso e deposita-se no centro da placa YMA

inoculou-se um pedao de fungo do meio slido (junto da janela) para um novo


meio de cultura em YMA, colocou-se no centro da placa de isolamento e esperou-se
et aula seguinte.
inoculou-se o tubo de tampa vermelha (meio estril-inoculado com cultura pura K
marxianus) e tampa azul (meio no estril no inoculado) para um meio YMA.
Verificar os resultados para a prxima aula.

Colnias de fungos e bactrias -descrio:


o Elevao
o Brilho
o Cor
o Consistncia
o Qt margem - regular ou irregular
o Se concava ou convexa

Placas de individualizao

Suspenso inicial

Diluies sucessivas de uma para 10 (diluir as clulas 10 vezes) tendo um vomlume


de 4,5ml e queremos ter 5ml, temos de diluir 0.5ml.

Grupos impares- 10^-1; 10^-2; 10^-3


Transferir 0.5ml do tubo de suspenso inicial para os tubos, antes de
se retirar, deve-se agitar da 10^-1 e transferir-se para 10^-x, isto faz-se chama
porque esto estreis.
Segue-se a preparao das placas de individualizao:
o Pega-se em 2placas de YM e marcam-se
o Leva-se chama
o Inocula-se 0.1ml do lquido e coloca-se no centro da placa

Espera-se que cada clula v dar origem a colnias isoladas e a cada clula isolada
corresponde uma colnia,; na preparao 10^-2 esperamos ter 10vezes menos
colnias que na 10^-3, na 10^-5 esperamos 100 vezes menos que em 10^-3 e assim
consecutivamente. Este mtodo permite-nos quantificar o n. De clulas viveis ou
vivas na preparao.

Quantificao de uma populao microbiana


Mtodo directo - cmara de contagem ou hemocitmetro
os resultados que se obtm tratam a contagem directa da diluio10^-1.
Aqui esto-se a contar clulas viveis e no viveis. Este mtodo directo porque se
olha e conta-se.
Mtodos indirectos - placas de individualizao - contagem de clulas viveis
- medio de turbidez / densidade ptica - quanto mais clulas
existirem em suspenso, mais turvo est o meio, menos luz atravessa o tubo, logo a
transmitncia diminui, consequentemente a absorvncia aumenta.
Contagem de clulas viveis e no viveis.

Biomassa seca - filtrao feita por dois filtros. Estes filtros so standards, pem-se os
dois filtros na estufa, entretanto a gua evapora-se e dps pesa-se os dois filtros e
calcula-se a diferena de biomassa.

15 12 16 20

21 23 21 13
MICROSCOPIA DE EUCARIONTES

Eucariontes:

clulas de maiores dimenses


presena de um ncleo que encerra o material gentico delimitado por um
invlucro (membrana);
presena de membranas multidiferenciadas;
multiplicidade de genomas (mitocndrias, cloroplastos...)

Grupos de microrganismos EUCARIONTES

protozorios:
ciliados
flagelados locomoo
amibides

algas
chlorophyta
Cor dos
euglenophyta
pigmentos
bacillariophyta
dinophyta

DNAHIELLA (clorophyta que se move por flagelos e contem um grande cloroplasto)-


armazena grandes quantidades de glycerol para conseguir sobreviver s presses
osmticas, pois as condies ideais para viverem so os meios salobros.

fungos ( filamentosos ou bolores, unicelulares ou leveduras)


quitridomicetas
S/ septos Modo de reproduo
zigomicetas sexuada
ascomicetas
septado
basidiomicetas
deuteromicetas- so aqueles fungos que ainda no se sabe se se reproduzem
sexuadamente ou no, i e, em laboratrio ainda no se conseguiu descobrir as
condies ideais para a sua reproduo.

Existem trs tipos de disposio dos fungos:

Miclio cenoctico (sem septos)


Esporangisporos- os esporos esto encerrados nos sacos
Esporangiforo- hifa que se diferencia por estar sexuada, apresentando o esporngio
na ponta.

Miclio septado (com septos)


Esporos condios- podem ser externos ou estar encerrados em sacos
Conidiforo- hifa que no se apresenta encerrado em saco no topo.

20-04-05

O que caracteriza a reproduo sexuada?

A meiose o que caracteriza a reproduo sexuada. Existem organismos que tm a


fase haploide mais abundante, outros que tm fase diploide mais abundante.
Os fungos podem-se reproduzir assexuadamente formando esporos, e sexuadamente
com a funo e fuso dos ncleos - CARIOGAMIA formando o zigoto (zigosporo).
Este ciclo leva formao de um esporangiforo, dentro dos esporngeos ocorre a
meiose dos esporos. a fase haploide a mais predominante.

Ascomicetas - durante o seu ciclo de reproduo sexuada forma-se o ASCO que


contem dentro MICETAS.
- forma-se uma estrutura que identifica a reproduo sexuada, basidio e
basideoesporo.
- A variabilidade gentica s ocorre se houver fecundao
- Uma levedura a gemular tanto pode gemular em fase haploide (n) como em
fase diploide (2n).
- O ascomiceta patognico para as plantas.
Plasmogamia- fuso de plasmocelo sem fuso dos nucleos (cariogamia) formando-se
um corpo frutfero (visvel a olho nu), miclio dicaritico fase n+n.
Por vezes logo depois da meiose ocorre mitose podendo ser observados vrios
ncleos.

Uma hifa pode-se reproduzir assexuadamente ou se encontrar uma hifa de sexo oposto
pode-se reproduzir sexuadamente sendo que primeiro ocorre a PLASMOGAMIA de
duas hifas n formando-se uma hifa dicaritica. Dela forma-se o corpo frutfero onde
se formam os ascos. Nos ascos d-se a cariogamia formando-se o zigoto 2N (meiose).
Os ascoporos (internos) vo germinar aps sarem do asco. Da meiose ocorre mitose
formando-se 8 ascsporos.

Basiomicetas- (filamentosos)- hifa de dois tipos opostos - ocorre plasmogamia


formando hifas dicariticas que formam estruturas espaciais- o corpo frutfero que
neste caso o cogumelo. Na parte de cima destas estruturas do cogumelo ocorre a
cariogamia, a fecundao da hifa dicaritica (n+n) formando-se um zigoto chamado
neste caso a BASDIA (2n) que englobam no seu saco os BASIDISPOROS-
estruturas externas onde ocorre a meiose. Entretanto os basiosporos germinam
formando hifas geneticamente variadas.

Observaes:
fungos filamentosos ascomicetas (ascosporos)
Botryosphaeria quercicula (10x/40x)

levedura ascomiceta
Sacch. cervisiae (40x/100x)

Nas leveduras- cluas que se reproduzem por gemulao- podemos encontrar 4


nucleos ou menos pk podem abortar.
Nos fungos- observao de ascos podem ser 8 pk ocorre mitose depois da meiose.

fungo filamentoso Basidium (basidiocarpo)

PROCARIONTES

- vescula de poli-b-hidroxibutirato
FORMA:
- esfrica cocos- isolados, pares (diplococos), conj 4, conj 8( stafilococos)
conj cadeias (streptococos)
- bastonete- bacilo- isolados, pares cadeia ou em paliada
- helice- rigidas- espirilos ou vibres
- flexveis- espiroquetas

bactria filamentosa- tem miclio e tem a forma de condeos ou esporos.


Actinomicetas- distinguem-se s pk so de menores dimenses.

Preparao
Bacillus magaterium (40x/100x)- ver vescula de poli-b-hidroxibutirato
Staphylococus aureus (40x/100x)

Observar
movimento de tenso- tremem
movimento prprio- andar de um lado para o outro e cambalhotas.
Movimento para um s lado- existncia de uma bolha de ar
-registar o modo de aglomerao.

Actinomicetas - principais produtores de antibitico, do o cheiro da terra molhada-


GEOSMINA.

04-05-05

Observaes a fresco - gota de gua para inocular uma cultura em meio slido, para
suspender o preparado.
Preparao a fresco - podemos observar o movimento, a forma das clulas e a forma
de agregao.
Esfregao - fazem-se para se poderem fazer coloraes diferenciais.

OBJECTIVO - destrinar pela observao a que grupo pertence um


determinado microrganismo

Nemtodes - estes ficam fixados


Amibas - nuas (movimento lento, emitem pseudpedes)
- testada (tm carapaa)
- cistos (clulas diferenciadas em forma de estrela)
algas

TP n 6

- colocar uma pitada de terra em tubo com gua estril (agitar suavemente). A
gua estril serve para nos dar a certeza que os organismos a isolar so s
provenientes da terra.
- pasteurizao da terra--> pr tratamento da amostra - serve para eliminar
clulas vegetativas de microrganismos que no conseguem sobreviver s
condies da gua a ferver.
- Enriquecimento- enriquecer a amostra favorecendo as condies para que
esta se multiplique, isto , multiplicar os organismos que interessam em
detrimento dos que n interessam .
- O pr tratamento funciona como um pco de enriquecimento , porque para alem
de se favorecer a multiplicao de microrganismos, eliminam-se aqueles que
no interessam, isto , eliminam-se todas as clulas vegetativas que no
endsporos.

10^0- pitada de terra, agitar o tubo e


submeter a 100C a 5 min. Deixar
depois arrefecer e deixar a terra
sedimentar sem nunca ,mais agitar.
Sub-diviso do trabalho - 2 placas de meio NA
- 2 tubos com gua estril

10^-1
4,5ml de gua

0,5 para perfazer os 5ml


pretendidos

- trabalhar chama. Tirar 0,5ml do tubo 10^0 para o tubo 10^-1.


- A pipeta no vai at ao fundo para no trazer terra.
- Agitar o tubo 10^-1 para homogeneizar (suspenso diluida)
Inoculao das placas de meio NA- placas de individualizao
- 0,1ml numa placa previamente marcada, chama e espalhar com a vareta de
vidro.
- Fazer 2 placas, uma com suspenso 10^0, outra com suspenso10^-1
- Incubao uma semana a temperatura ambiente.

T.P n 7

- tubo com gua estril.


- Pegar no morango com uma pina (no tocar com as mos)
- Cortar o morango em pequenos pedaos
- Colocar um tubo de ensaio com gua estril
- Os morangos contm um alto teor em aucares o que faz baixar o pH logo
favorece a multiplicao de fungos do morango que preferem o pH cido.

18-05-05

- Observara as colnias macroscpicamente


- contar o n de colnias em cada placa de individualizao que se preparou
- desses organismos quantos so fungos filamentosos (falta de cuidado a
trabalhar em condies de asspsia)
- escolher duas colnias do tipo bacterianao bem isoladas para observara em
microscpio
- observao ao microsc preparao a fresco - gota de gua numa lmina,
chama leva-se a ana ao rubro- arrefece-se e inocular a colnia e ressuspend-
la de seguida, colocando-a na lamina.
- Aps a verificao das colnias de bacilos, fazer uma placa de isolamento
- fazer uma placa de isolamento da levedura. (no tubo de ensaio).

Morango
- leveduras na pelcula do morango
- a tentativa foi de criar as condies de pH cido devido aos aucares que esto
nos aucares.
- Isolar ASCOMICETAS
- Fermentaes espontneas - este tipo de leveduras aparecem nos 1 estdios,
convertendo hidratos de carbono em etanol e CO2, mas estas leveduras so
pco resistentes ao etanol, no suportando estas concentraes altas de etanol.
- Especial
Do ponto de vista morfolgico - forma de limo
- reproduo por gemulao bipolar- nos dois plos
da clula
- a clula filha sempre menor que a clula me, logo a
diviso assimtrica.
Do ponto de vista microscpico - descrio do tubo - indcios de bolhas de gs (CO2)
- quanto pelcula, anel, sedimento, fluidez
- presena ou no de funfos filamentosos.

Ana ao rubro, mergulhar, arrefecer na parede, mergulhar 3 vezes no lquido.

1-06-05

- induzir a meiose - ascos com ascosporos


- meio CMA um meio pobre.
- Meio MYP- obter colnias isoladas para obter culturas puas a partir de uma

Ver clulas do tipo vegetativas a gemulao de modo bipolar


Confirmar se do gnero Ansiospo
Observar glbulos lipidicos

- meio CMA-
salincia volta dos riscos da lmina tem menor ou nenhuma
concentrao de oxignio.
Focar 10x
Focar 40 x
Verificar se existe clulas com ascos e ascosporos (1/2 ascosporos
por asco)
- as colnias tm tamanhos diferentes na placa de isolamento, pois as colnias
mais afastadas como tm mais espaamento, tm mais nutrientes para se
alimentares, o que favorece o crescimento.
Resumo

Preparao a fresco - gota de gua na lmina, colocar a preparao e sobrepor com


uma lamela. Observar ao microscpio. Isto utiliza-se para culturas em meio slido,
porque em meio lquido no necessrio por gua.

Procariontes (observao)
morfologia das clulas cocos
- bacilos (bastonete)
- espirilos (hlice flexivel ou rgida)
- filamentosos

cianobactrias actinomicetas

movimentos (rgo locomotores no se observam a fresco)- flagelos (existentes


nos procariontes; fmbrias (no so para locomoo mas sim para a adeso das
clulas)

vesculas poli-b- hidroxiburato- bacilus


- substncias de reserva

bactrias filamentosas
(ACTINOMICETAS)

heterocistos- sofreram uma alterao morfolgicas, perdem a capacidade que a


clula vegetativa tinha ou ento ganham a que no tem.

clulas diferenciadas
- endsporos- bacilos
- actinomicetas- condios
- heterocistos e acinetas- cianobactrias
- bacteroides- rhizobium
capacidade de diferenciao - no conseguem reverter ao estado inicial - processo
irreversvel - bacteroides e heterocistos.

bactrias com grnulos de enxofre - begiatoa.

colorao - identificar e realar determinadas estruturas


- colorao de endsporos
- utilizao da tcnica do esfregao na lmina com a aplicao de vrios reagentes.

Procedimento - coloca-se uma gota de gua, retira-se um pedao de amostra, coloca-


se a amostra na lmina e deixa-se secar para fixar as clulas lmina aplicando-se de
seguida o corante.

colorao de gram + e gram

stafilococos Escherichia

Estes dois organismos reagiram de maneira diferente ao contacto com os reagentes -


CORANTE VIOLETA CRISTAL (tornam todas as clulas do preparado violeta)
LUGOL (permanecia a cor violeta para todos os microrganismos), de seguida deitou-
se ETANOL ( faziam perder a cor s gram sendo que as gram+ permaneciam
violeta, isto porque o iodo forma um complexo com o violeta. O etanol consegue
lavar o exterior das clulas gram fazendo-as perder a cor.), no final deitou-se
SAFRANINA (d cor a quem no a tem, ou melhor ela d a cor rosa a todos os
organismos, contudo com as gram + j tm a cor roxa n vo sofrer alterao).

Gram- a viscosidade aumentava,


levando ao rebentamento das
clulas.
teste do KOH (hidroxido de potssio)

Gram +- mantinham-se intactas.

O que se pode concluir da parede celular na colorao?


- Estafilococus so gram +- na parede constituiu um obstculo descolorao
do etanol, sada destes (retiveram aquele corante).
- Coli- isto no acontece, visto que a constituio da parede diferente.
relativamente ao KOH as clulas que resistiram entrada de KOH foram as
gram+.

Isolamento (BACILOS E LEVEDURAS)


-objectivo - obteno de culturas puras a partir de uma amostra com cultura mista,
isolou-se um organismo em particular
-saber certos conhecimentos prvios- metabolismo, fisiologia...

BACILLUS
-pr-tratamento - pasteurizao (ressuspenso em gua a ferver). Os bacilos
produzem ensporos que a forma mais resistente que existe, logo os endosporos
que resistiam pasteurizao.
-projectar o meio de cultura enriquecimento - (aumentar por multiplicao)

- meio de cultura NA - no um meio selectivo pois um meio rico em nutrientes


igual para todos os organismos, no existem preferncias. um meio de pH neutro e
preferencial para o desenvolvimento de bactrias, sabendo que so bactrias que
temos d isolar, este n se torna de modo algum selectivo.
- condies de incubao - passo selectivo.
- identificao de espcies - a posio do endsporo dentro da clula me
- o inchamento ou no a clula me.
Verificao que eram clulas de Bacilos e no Sporosarcina, porque so em
forma de bastonete e produzem endsporos.
- observao macroscpica - culturas iguais

LEVEDURAS
- fruto ascomiceta- clulas em forma de limo e gemulao bipolar.
- condies para haver micro fermentao - (passo selectivo, mto
provavelmente o etanol)- meio rico em aucares do fruto.
- Inocular placas
- Ases de fermentao- libertao de CO2 (bolhas) e etanol.
- Observar ao microscpio colnias da placa de isolamento do meio YM a pH
3.5 para ver as clulas (meio no selectivo).
- A observao no foi exclusiva s com leveduras, tambm se encontrarem
algumas bactrias no meio preparado pela professora relativa a uma placa de
morangos sem microfermentao, logo o meio, mesmo sendo cido e
normalmente no propcio ao crescimento de bactrias, foi neste caso bastante
propcio pois elas existiam nele preferencialmente.
- Placa de isolamento meio YM- passo de purificao- obteno de colnias
isoladas (as que apareciam tinham o aspecto proposto) observao ao
microscpio.
- Placa de isolamento MYP- obteno de uma cultura pura
- Placa de CMA- induzir a meiose- observao de ascos com ascosporos
confirmao do gnero Hansios...

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