Biotecnologia y OGM

Biotecnologa y OGM
Biotecnologa y OGM
Introduccin
La biotecnologa es la utilizacin de los seres vivos o partes de ellos para obtener o

modificar productos o procesos, bienes o servicios de utilidad industrial o social.
Se divide en biotecnologa tradicional y moderna.
Podemos describir a la biotecnologa tradicional como el conjunto de tcnicas que

emplean organismos vivos (o partes de ellos) para obtener productos tiles, procesos o
servicios. Como por ejemplo:
Productos:
Cultivos resistentes a enfermedades
Fertilizantes y pesticidas biolgicos
Productos de la fermentacin microbiana (por ejemplo, etanol)
Enzimas aplicadas a la alimentacin
Insulina porcina, aislada de pncreas
Servicios:
Tratamiento de efluentes.
Diagnstico y control de calidad mediante tcnicas microbiolgicas e

inmunolgicas clsicas.
Produccin de plantas y conservacin de especies mediante tcnicas de cultivo

y micropropagacin.
Inseminacin artificial
Procesos: Sustitucin y complementacin de procesos qumicos por biolgicos
Catalizadores biolgicos para la industria
Fitorremediacin
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Biotecnologa y OGM
La biotecnologa comenz hace miles de aos cuando el hombre descubri que al fermentar
las uvas se obtena un producto como el vino. Tambin es biotecnologa la fabricacin de
cerveza a partir de la fermentacin de cereales que el hombre empez a elaborar hace 4.000
aos, y la fermentacin de jugo de manzanas para la fabricacin de sidra. En estos procesos
intervienen microorganismos que transforman componentes del jugo de frutas o de cereales
en alcohol. Tambin es biotecnologa la fabricacin de pan mediante el uso de levaduras, la
elaboracin de quesos mediante el agregado de bacterias. El yogurt tambin es un producto
que se obtiene mediante procesos biotecnolgicos desde la antigedad.
Podemos definir a la biotecnologa moderna como:
1) La aplicacin de tcnicas in-vitro de cido nucleico, o
2) La fusin de clulas ms all de la familia taxonmica que superan las barreras

fisiolgicas naturales de la reproduccin o de la recombinacin y que no sean tcnicas
utilizadas en la reproduccin y seleccin tradicional.
En otras palabras, la biotecnologa moderna surge cuando los cientficos comprendieron

cmo ocurren los procesos biolgicos que permiten la fabricacin de productos
biotecnolgicos. Esto permiti desarrollar nuevas tcnicas a fin de modificar o imitar algunos
de esos procesos en un laboratorio y lograr una variedad mucho ms amplia de productos. La
biotecnologa moderna utiliza diferentes tcnicas (como cultivo de tejidos y otras), incluyendo
las tcnicas de ingeniera gentica, para modificar y transferir genes de un organismo a otro,
permitiendo de este modo saltar la barrera de especies y realizar procesos ms direccionados
y precisos.
La biotecnologa moderna hoy se entiende como la que utiliza tcnicas de ADN

recombinante, tambin llamadas de ingeniera gentica o tecnologa de transgnicos, o
tecnologa de ADN recombinante (todos sinnimos), para, por ejemplo:
Produccin de enzimas recombinantes (aditivos alimentarios, frmacos, etc)
Mejoramiento de cultivos por transgnesis y marcadores moleculares
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Insulina humana recombinante y otras protenas teraputicas
Produccin de protenas en la leche de animales transgnicos o en plantas
Produccin de otros productos (polmeros para la sustitucin de plsticos, etc)
Con el advenimiento de la ingeniera gentica, surge el trmino organismo genticamente

modificado (OGM), en referencia a los organismos obtenidos utilizando tcnicas de
ingeniera gentica. Los organismos genticamente modificados, tambin llamados
transgnicos o recombinantes, son aquellos organismos cuyo material gentico ha sido
modificado de una manera que no se produce en la naturaleza, utilizando tcnicas de la
ingeniera gentica. En su genoma, poseen uno a ms genes que originariamente no posean
o si bien estn presentes, no se hallan en el mismo estado que en la naturaleza
(www.monsanto.com).
En el ao 1983 se informaron los primeros experimentos de expresin de un transgen en

clulas vegetales y al ao siguiente se obtuvieron plantas transgnicas pertenecientes a las
especies Nicotiana tabacum y Petunia sp. Desde entonces, la aplicacin de la tecnologa se
ha extendido a alrededor de 120 especies (Daz et al.,2004).
En la legislacin argentina vigente se considera y define como organismo genticamente

modificado a aquel organismo en el que cualquiera de sus genes u otro material gentico ha
sido modificado por medio de las tcnicas siguientes:
La insercin por cualquier mtodo de un virus, del plasma bacteriano u otro sistema
vector de una molcula de cido nucleico, que ha sido producido por cualquier mtodo
fuera de ese virus, plasma bacteriano u otro sistema vector, de manera tal de producir
una combinacin nueva de material gentico el cual es capaz de ser insertado en un
organismo en el que esa combinacin no ocurra naturalmente y dentro del cual ser
material gentico heredable.
La insercin en un organismo, por microinyeccin, macroinyeccin, microencapsulacin u

otros medios directos, de material gentico heredable preparado fuera de ese organismo.
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Donde se involucre el uso de molculas de ADN recombinante en fertilizacin in vitro que

implique la transformacin gentica de una clula eucaritica.
(www.prodiversitas.bioetica.org)
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Tcnicas y herramientas utilizadas por la biotecnologa.
Entre las tcnicas disponibles y que han sido utlizadas tradicionalmente se encuentran:
Hibridacin somtica: se encuentra limitada a especies que tengan buena

capacidad de regeneracin a partir de protoplastos. Se ha aplicado a Trifolium
repens, T. alexandrinum, Medicago sativa, M. coerulea, M. glutinosa, M. falcata,
Stylosanthes sp, Lotus sp dentro de la leguminosas. En gramneas ha sido ms difcil
de lograr pero existen varios ejemplos como Poa pratensis, Lolium perenne, Festuca
arundinacea. Es atractiva como tcnica para transferir caractersticas citoplsmicas
(esterilidad, vigor, aloplasmia).
Rescate de embriones: en el caso de embriones hbridos que de otro modo

abortaran.
Variacin somaclonal: no ha habido grandes logros. Sera una alternativa para

especies apomcticas.
Transformacin: fundamentalmente para solucionar problemas de calidad, sanidad y

resistencia a herbicidas.
Obtencin de doblehaploides: la haploidizacin es un medio para reducir el nivel de

ploida y realizar cruzarmientos entre especies poliploides con especies relacionadas
silvestres (alfalfa, pasto ovillo, festuca) o lograr homocigosis. No ha sido muy exitosa
en especies forrajeras. Es altamente dependiente del genotipo y si bien se han
realizado avances desde los primeros trabajos en que se informaban gran nmero de
plantas albinas o escaso nmero de plantas verdes an no se han logrado exitos
como para utilizarlas de manera eficiente en planes de mejoramiento como se ha
hecho con el trigo por ejemplo.
Propagacin clonal: ha habido intentos de realizar semillas artificiales de alfalfa

aprovechando la capacidad de producir embriones somticos. Tambien se ha logrado
inducir embriognesis somtica en gramneas forrajeras con relativa facilidad. Estos
embriones somticos son blancos apropiados para la transformacin de plantas
(Spangenberg et al., 1998).
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De todas las herramientas citadas, la transformacin gentica es la piedra angular para la

generacin de OGM.
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Transformacin gentica: una herramienta fundamental para generar OGM
Mediante la tcnica de ADN recombinante es factible introducir en organismos vegetales

genes de otro organismo vegetal alejado filogenticamente como de organismos muy alejados
desde el punto de vista evolutivo como bacterias, virus, hongos y animales.
Es una tcnica que aporta variabilidad gentica conocida sin alterar el fondo gentico, lo
cual es de gran importancia ya que la generacin de cultivares es un proceso acumulativo (se
desea incorporar caractersticas favorables nuevas sin perder las mejoras anteriores). El
germoplasma transgnico es posteriormente incorporado al proceso de mejoramiento, lo cual
depender de la especie y del tipo de cultivar a obtener (Daz et al.,2004).
Los elementos bsicos que se requieren en trabajos de transformacin gentica son:
1. Un sistema de cultivo de tejidos que permita regenerar plantas completas y frtiles.
2. Vectores apropiados, que permitan el clonado del gen de inters y/o su transferencia al
tejido blanco de transformacin.
3. Un protocolo de transformacin, es decir, un sistema de transferencia de genes y de

seleccin del material transformado.
4. Herramientas de anlisis para detectar la presencia del transgen y los productos del
mismo en la planta.
Resulta importante destacar, que para lograr una planta transgnica deben ocurrir tres
procesos en la planta:
El transgen debe ser transferido al interior de la clula.
El transgen debe integrarse al ADN celular.
Se debe generar una planta completa a partir de la clula transgnica en la que se

verificaron los dos procesos anteriores.
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Cultivo de tejidos vegetales.
Los mtodos de transformacin ms utilizados actualmente se basan en la obtencin de

clulas transgnicas y posterior recupercin de plantas completas y frtiles a partir de las
mismas a travs del cultivo y seleccin in-vitro. El uso de esta herramienta es debido a la
totipotencialidad celular, en la mayora de las especies se observa una importante influencia
del genotipo en respuesta al cultivo in-vitro. Por ello, cuando se hace uso del cultivo in-vitro
para el mejoramiento gentico, es de suma importancia conocer la respuesta morfogentica
de los distintos genotipos con adaptacin local (Daz et al.,2004).
Construccin del vector.
Para introducir un transgen es necesario que el mismo sea incorporado previamente en un

vector, como por ejemplo un plsmido.
Para ello se digiere el ADN extrado de un organismo con enzimas de restriccin. Los
fragmentos as obtenidos pueden ser ligados enzimticamente a vectores de clonado,
obtenindose as, clones de ADN recombinante.
Un transgen est compuesto por:
Secuencia codificante, que se halla entre los codones de iniciacin y terminacin de

la traduccin.
Secuencias regulatorias, que determinan el tejido, la etapa del desarrollo y el nivel de

expresin del transgen en la planta.
Para optimizar la expresin del transgen es necesario reemplazar las secuencias

regulatorias bacterianas por otras aptas para su expresin en clulas vegetales, siendo la
secuencia de mayor importancia es el promotor. Cabe destacar que la expresin gnica es
controlada por las secuencias regulatorias y no depende de la secuencia codificante.
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Dentro de los promotores, se distinguen:
Constitutivos, que permiten la expresin del gen en toda la planta de manera

contnua. Ejemplos: nos (nopalina sintetasa de Agrobacterium), 35 S (virus del mosaico
del coliflor), Ubi (ubiquitina de maz) y Act 1 (actina de arroz).
Inducibles, que responden a factores ambientales. Ejemplos: subunidad pequea de

Rubisco (inducible por la luz), alcohol deshidrogenasa-1 (inducible por anaerobiosis),
protena de shock trmico (inducible por calor).
Especficos de tejido, que permiten la transcripcin solamente en determinados

rganos y tejidos. Ejemplos: TA 29 (tapete de la antera de tabaco), faseolina
(cotiledones de poroto), TobRB 7 (raz de tabaco), patatina (tubrculo de papa),
glutenina (endosperma de trigo).
Los promotores pueden ser modificados con el fin de aumentar la expresin de los genes
que regulan, pueden truncarse, adicionrseles un intrn o unrseles secuencias de otros
promotores. Al momento de la eleccin, tambin hay que tener en cuenta que hay algunas
plantas, como las monocotiledneas, los promotores son menos activos. Adems es
necesario que el transgen disponga de una regin no traducida en el extremo 3 del mismo,
que incluya la seal de corte y poliadenilacin, necesaria para el correcto procesamiento del
transcripto correspondiente.
El nivel y el patrn de expresin puede estar afectado por la posicin del mismo en el
genoma de la planta transformada. Esto puede deberse a la presencia de otras secuencias
regulatorias cercanas, a la estructura de la cromatina, al patrn de metilacin, etc. La solucin
para evitar los efectos de posicin es dirigir la secuencia de inters a sitios especficos del
genoma vegetal, elegidos por su patrn de expresin adecuado y estable, lo cual se logra
usando sistemas de recombinacin heterloga sitio-especficos o mediante reemplazo gnico
por recombinacin homloga (Daz et al.,2004).
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Mtodos de transformacin.
Los mtodos suelen dividirse en base al medio de transformacin:
Transformacin mediada por Agrobacterium: las especies del gnero Agrobacterium, son
bacterias Gram negativas aerbicas obligadas que viven en el suelo, son capaces de
desarrollar un crecimiento saproftico o parastico. El gnero comprende cuatro especies
fitopatognicas, de las cuales dos estn ampliamente estudiadas: A.tumefaciens y
A.rhizogenes, ambas especies son capaces de infectar una amplia variedad de especies de
dicotiledneas y tienen como blanco de infeccin a las heridas, atacando clulas individuales
y provocando su proliferacin. Otro sistema de clasificacin divide el gnero Agrobacterium
en biovars basados en el crecimiento y en caractersticas metablicas, ya que las
especies de Agrobacterium pueden obtener caractersticas de otras mediante la
adquisicin de ciertos plsmidos (Gelvin, 2003).
A. tumefaciens causa la enfermedad conocida como agalla de la corona, y se evidencia

con la formacin de tumores y A. rhizogenes induce a la proliferacin de races, causando la
enfermedad conocida como raz en cabellera.
La capacidad patognica de las bacterias est asociada a la presencia de megaplsmidos

de 150 a 200 Kb. A.tumefaciens presenta megaplsmidos Ti o tumor-inducing y
A.rhizogenes presenta megaplsmidos Ri o root-inducing. Se ha demostrado que
durante la patognesis, un fragmento de estos plsmidos llamado T-DNA (por transfer-DNA)
es transferido a la clula vegetal, donde se integra el ADN cromosmico de la planta y cuya
expresin causa proliferacin de clulas de la planta a travs de la sntesis y alteracin de la
respuesta a hormonas vegetales. El T-DNA contiene oncogenes que se expresan
eficientemente en la clula vegetal infectada y producen sntesis de hormonas vegetales, y
genes que provocan la sntesis de opinas (fuente de carbono y nitrgeno para la bacteria).
El T-DNA est delimitado por dos repeticiones directas imperfectas de 25 pares de bases
que lo flanquean, llamadas borde derecho e izquierdo.
Estos bordes son los nicos elementos en cis necesarios para dirigir el procesamiento de
T-DNA. Cualquier fragmento de ADN ubicado entre estos bordes puede ser transferido a la
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clula vegetal. El T-DNA no codifica los productos que median su transferencia, es una
regin relativamente grande (20 Kb) que contiene secuencias regulatorias (promotores y
seales de poliadenilacin) tpicamente eucariticas.
Agrobacterium tumefaciens usa la respuesta de la planta a las heridas (cicatrizacin y

defensa) como quimioactivo y activador del proceso de patognesis. Luego de la adhesin
de la bacteria a la clula vegetal, etapa en la que estn involucrados genes cromosmicos
(chv A, chv B, chv E, cel, psc A y att) se produce el procesado y la transferencia de T-DNA
mediados por los genes vir, que son inducidos por azcares y compuestos fenlicos
(acetosiringona) producidos por las clulas vegetales heridas. La regin de virulencia est
organizada en operones esenciales para la transferencia del T-DNA (vir A, vir B, vir D, vir G)
o que permiten incrementar la eficiencia de transformacin (vir C, vir E).
Los plsmidos Ti sin oncogenes se denominan desarmados, son de gran tamao y

resulta difcil introducir genes en su T-DNA usando las tcnicas habituales de ADN
recombinante. Por esta razn se han desarrollado dos sistemas de vectores para introducir
genes en Agrobacterium: los vectores cointegrados, que deben formar estructuras
cointegradas para replicarse en A.tumefaciens y los vectores binarios que son capaces de
replicarse de forma autnoma en esta bacteria.
En los vectores cointegrados la insercin del ADN que contiene los transgenes dentro
del T-DNA de un plsmido Ti desarmado se logra por recombinacin homloga. Sobre la
base de la capacidad de los genes vir de actuar en trans, movilizando el T-DNA presente en
otro plsmido, se construyen vectores binarios, que contienen un T-DNA no oncognico en
un plsmido pequeo, con un origen de replicacin de amplio espectro de hospedantes
(debido a esa caracterstica se utiliza a Escherichia coli como husped). La introduccin de
este plsmido a una cepa de Agrobacterium que contenga un plsmido denominado helper
de virulencia (con la regin vir intacta y sin T-DNA) la hace apta para la transferencia del T-
DNA a las clulas vegetales.
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La integracin del T-DNA en el ADN cromosmico del vegetal, se produce al azar, por
recombinacin ilegtima, preferencialmente en regiones con actividad transcripcional y con la
participacin de protenas de la bacteria y de la planta.
Este sistema de transformacin permite transferir fragmentos de ADN de hasta 150 Kb.
Para ello se utilizan vectores especiales que tienen caractersticas tanto de cromosomas
artificiales de bacterias (BACs) como de vectores binarios. El uso de estos vectores permite
clonar fragmentos de ADN de gran tamao y posteriormente transferirlos al genoma vegetal
va A.tumefaciens.
Ms de 600 especies vegetales son hospedantes naturales de A.tumefaciens siendo la

mayora dicotiledneas y gimnospermas y menos frecuentemente monocotiledneas.
Mediante protocolos de transformacin especficos, se expandi el rango de especies de
A.tumefaciens a especies no suceptibles naturalmente a este patgeno. Actualmente se lo
utiliza para transformar gramneas y se cuenta con protocolos especficos para arroz, maz,
cebada, trigo y gramneas forrajeras.
La transformacin con Agrobacterium rhizogenes tiene fundamentalmente dos

aplicaciones: la produccin de races con alta tasa de crecimiento capaces de sintetizar
metabolitos secundarios como productos farmacuticos, aditivos alimentarios y cosmticos,
y por otra parte representa una valiosa herramienta para la estimulacin de la rizognesis en
especies recalcitrantes, como algunas leosas.
Transformacin directa o por mtodos fsicos: inicialmente esta tecnologa se desarroll

debido al impedimento inicial de tranformar, mediante Agrobacterium, muchas especies de
monocotiledneas. El transgen es introducido a la clula vegetal mediante transformacin de
protoplastos o bombardeo de micropartculas.
La transformacin de protoplastos se basa en la introduccin y expresin de ADN

forneo en protoplastos. Los protoplastos pueden ser aislados en forma mecnica o por un
proceso enzimtico que digiere la pared, y de estas maneras se obtienen suspensiones
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conteniendo millones de clulas individuales lo que favorece la transformacin de clulas

aisladas.
Los protoplastos pueden ser transformados utilizando polietilenglicol (PEG), eletroporacin,

uso de fibras de carburo de silicio (whiskers), microinyeccin o liposomas. Tanto el PEG
como la electroporacin producen poros en la membrana plasmtica por alteracin de la
polaridad de la misma y por ellos penetra en ADN forneo. En la electroporacin los
protoplastos se someten a un campo electrnico. Ambas tnicas permiten el tratamiento de
un gran nmero de protoplastos al mismo tiempo.
La microinyeccin consiste en la
introduccin de ADN dentro de protoplastos
individuales mediante el uso de capilares
de inyeccin y un micro-manipulador. Si
bien hay que manipular las clulas
individualemte, es posible lograr un alto
grado de integracin del ADN forneo. Es
una tcnica de alta complejidad y est
disponible para una escasa gama de
especies y dentro de ellas particularmente
en genotipos modelo.
El bombardeo de microproyectiles
(mtodo biolstico) es un proceso por el
cual las micropartculas cubiertas de ADN
son aceleradas por un gas comprimido e
introducidas en clulas vegetales.
Actualmente es una de las tcnicas de
mayor difusin.
Inicialmente la fuerza impulsora de las

partculas estaba dada por plvora, pero
luego fue reemplazada por el sistema de helio comprimido, que brinda una mejor regulacin
de la fuerza, distribucin de microproyectiles y mayor reproducibilidad entre bombardeos.
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Se utilizan microproyectiles de oro o tungsteno (qumicamente inertes) cuyos tamaos van

desde 0,5 a 3 mm, que al ser disparados a grandes velocidades pueden atravesar pared y
membranas de la clula vegetal bombardeada, sin causarle daos letales (Klein et al.,
1987).
Para el bombardeo se puede utilizar cualquier tipo de explante vegetal, desde clulas o
protoplastos hasta plntulas completas, pasando por tejidos organizados en embriones y
meristemas. El explante es sometido a un tratamiento osmtico pre y post-bombardeo, que
produce plasmlisis celular, evitando as que el impacto y la penetracin de las partculas
daen las clulas.
Los vectores plasmdicos que se usan en este tipo de procedimiento slo requieren un
origen de replicacin que permita un alto nmero de copias de los mismos en Escherichia
coli, aspecto que facilita en la prctica la preparacin del ADN necesario en grandes
cantidades para la transformacin gentica por este mtodo.
La biolstica presenta algunas limitaciones, algunas especies oponen una resistencia

natural a la penetracin de partculas, ya sea por la presencia de cutculas endurecidas,
paredes celulares lignificadas o superficies vellosas. La principal limitacin contina siendo,
sin embargo, la baja relacin entre el total de clulas sometidas al bombardeo y el nmero
de clulas que logran incorporar de manera permanente la informacin gentica transferida.
A pesar de la desventaja que presenta el bajo nmero de transformantes producido por un
solo episodio de bombardeo, la versatilidad de la aceleracin de partculas para introducir
transgenes ha superado muchas de las barreras asociadas a otros mtodos de
transformacin, como lo son el rango de huspedes de Agrobacterium y la regeneracin en
protoplastos.
Si realizamos una comparacin entre un mtodo de transformacin indirecto (mediante

Agrobacterium) y uno de transformacin directo (biolstica), podremos observar varias
diferencias. Agrobacterium tumefaciens posee un mecanismo natural muy eficiente para
transferir al ncleo celular T-DNA, el cual contiene el transgen, y producir una integracin
aleatoria en regiones cromosmicas con actividad transcripcional. Los patrones de insercin
son ms sencillos que en el mtodo biolstico, de modo tal que el nmero de copias
incorporado es bajo y si existe ms de una copia se suelen distribuir en loci independientes
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(lo que facilita la posterior eliminacin de las copias no deseadas por segregacin). El
mecanismo involucrado hace que se transfiera un segmento de ADN definido: el T-DNA
acompaado por protenas que evitan la accin de endonucleasas. En el mtodo biolstico
es comn que se produzcan inserciones de varias copias del transgen en un mismo sitio del
genoma, con distinto grado de reordenamiento de la secuencia del transgen. Se ha
observado un silenciamiento de transgenes, el cual podra deberse a la presencia de varias
copias de un transgen. En este mtodo, el segmento de ADN que se incorpora al ADN
cromosmico no est definido, es de longitud variable y no est asociado a protenas por lo
cual slo parte del mismo llega al ncleo, disminuyendo la eficiencia de la transformacin. La
construccin de vectores es ms sencilla en el mtodo biolstico.
En ambos mtodos, la integracin del transgen en el genoma se produce al azar. Como

consecuencia de esto, las diferentes plantas transgnicas provenientes de un mismo
experimento, presentan inserciones en distintos sitios del genoma receptor. La expresin
fenotpica de un transgen ser diferente en distintas plantas que contienen el mismo
transgen, para lo cual, se considera a cada una de ella como eventos de transformacin
distintos.
Genes de seleccin e informadores.
Los genes marcadores seleccionables, generalmente de origen bacteriano, cumplen un

rol de relevancia, ya sea para poner a punto un protocolo de transformacin o como
acompaante de genes de inters que se desean introducir. Estos genes otorgan a las
clulas transgnicas que los expresan importantes ventajas, al permitirles crecer en medios
de cultivo que contienen los agentes selectivos correspondientes, como el gen npt II que
otorga resistencia a kanamicina, paromomicina, G418, el gen hph que otorga resistencia a
higromicina, los genes pat o bar con resistencia a phosphinotricina, bialaphos, y el gen CP4
con resistencia a glifosato. En otros casos, la ventaja estar dada por la posibilidad de
utilizar diferencialmente un sustrato, como el gen man A que permite la utilizacin de la
manosa 6 fosfato como fuente de carbono.
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Biotecnologa y OGM
Es necesario tener en cuenta que algunas especies pueden poseer una resistencia natural
a los agentes selectivos, por lo cual es importante evaluar este aspecto cuando se elige el
gen de seleccin a utilizar, como el agente selectivo y las concentraciones del mismo.
Los genes marcadores visualizables o informadores posibilitan la observacin directa de

las clulas que los expresan. Estos genes codifican para protenas que no estn presentes en
las clulas y producen un fenotipo caracterstico de fcil y rpida observacin. As, el gen gus
A proveniente de Escherichia coli codifica para la enzima -glucuronidasa. Esta protena
puede ser detectada cualitativamente por tincin histoqumica, en presencia de un sustrato
especfico, por la produccin de un precipitado azul-ndigo de fcil visualizacin. Este
marcador tambin puede ser detectado cuantitativamente usando tcnicas fluoromtricas.
Como ejemplo de la aplicacin de estos mtodos de deteccin podemos mencionar el estudio
de la expresin de un promotor en una especie vegetal. Para ello se puede construir un vector
con la secuencia codificante de gus A y con una secuencia de terminacin de transcripcin, y
estudiar en plantas transgnicas el patrn de expresin espacio-temporal del promotor (en
qu tipo de clulas y cundo se expresa) por tincin histoqumica y su nivel de expresin por
fluorometra.
Recientemente, el gen de la protena fluorescente verde, gfp green fluorescent protein,

aislado de una medusa, se ha convertido en un gen marcador visualizable in vivo muy
utilizado. Cuando se ilumina con luz ultravioleta o luz azul, tejidos que contienen clulas que
expresan este gen, se observa un brillo verde fluorescente. Al ser ste un ensayo no
destructivo, es decir que permite conservar vivo el material en estudio, representa una
herramienta de utilidad para visualizar diferentes etapas del proceso de transformacin (Daz
et al.,2004).
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Biotecnologa y OGM
Tcnicas de deteccin del transgen y sus productos
Luego de la seleccin in vitro, las plantas regeneradas deben ser analizadas por mtodos
moleculares para identificar aquellas que porten y expresen los transgenes en los niveles
deseados. Para ello se emplean tcnicas como:
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR): con el uso de primers homlogos a la

secuencia del transgen se puede determinar la presencia del mismo. Esta tcnica permite
hacer un screening rpido de las plantas regeneradas, aunque tiene algunas limitaciones, un
resultado positivo indica solamente que en la muestra existe una secuencia que amplifica con
los primers utilizados pero no indica si el transgen se encuentra incorporado al genoma de la
planta. Para maximizar la robustez de esta prueba es necesario utilizar temperaturas de
annealing o apareamiento de primers altas (ms de 60C) y primers relativamente largos
(ms de 20 nucletidos). Una variacin de esta tcnica, PCR en tiempo real, resulta de
utilidad para evaluar el nmero de copias del transgen incorporadas al genoma de la clula
vegetal.
Hibridacin southern o Southern blotting: es una de las herramientas moleculares ms

poderosas para caracterizar las plantas transgnicas. Adems de indicar la presencia o no de
la secuencia de inters, da informacin acerca de la integracin de la misma en el genoma de
la clula husped (nmero de copias integradas y nmero de loci en los cuales se produjo la
integracin).
Un caso hipottico de transformacin mediante Agrobacterium, (aunque es aplicable

tambin a plantas obtenidas por mtodos directos). Si se utiliza como sonda el T-DNA
completo y la digestin del ADN genmico se realiza con enzimas de restriccin que no cortan
dentro del T-DNA, el nmero de bandas del patrn representa el nmero de sitios de
insercin. El tamao de las bandas ser mayor que el T-DNA ya que se estn utilizando
enzimas que cortan por fuera de ste. Plantas transgnicas obtenidas en forma independiente
tendrn patrones de hibridacin diferentes. Por otra parte, si la enzima tiene un sitio de corte
nico dentro del T-DNA, utilizando la sonda antes mencionada, sta dar dos seales de
hibridacin paracada sitio de insercin independiente del T-DNA. La aparicin de un nmero
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Biotecnologa y OGM
impar de bandas indica que en un mismo sitio se insertaron mltiples copias, ocurrieron
rearreglos o se produjo el truncado del T-DNA.
Si se digiere la muestra con una enzima de restriccin que posee un sitio nico de corte
entre el gen marcador y el gen de inters y utilizando como sonda el gen marcador, se
obtendr una sola banda por cada insercin independiente. Si la membrana se hibrida con el
gen de inters aparecer un patrn que tendr el mismo nmero de bandas que el anterior. La
ausencia de una banda es indicativo de la insercin de una copia truncada de uno de los
genes por lo que se pierde el sitio de corte. La aparicin de una banda del tamao del T-DNA
puede indicar la presencia de repeticiones en tandem.
Para estimar el nmero de copias del transgen en un locus transgnico, se deben utilizar
enzimas de restriccin con sitios flanqueantes del transgen y como sonda, el transgen. Se
observar una sola banda del tamao del transgen; sin embargo, la intensidad de la seal
variar entre las distintas plantas analizadas de acuerdo con el nmero de copias del mismo.
Para realizar la comparacin es necesario utilizar simultaneamente estndares conteniendo
un nmero conocido de copias del transgen. Esta determinacin no es del todo precisa ya que
existe mucha variabilidad en los resultados debido a diferencias en la digestin de las
muestras y a la degradacin que sufre el ADN.
En lo que respecta a la cuantificacin, esta tcnica ha sido reemplazada en gran medida, en

los ltimos aos, por la PCR en tiempo real o real time PCR, dado que esta ltima resulta
menos costosa en reactivos y tiempo y requiere menos cantidad de material vegetal para
realizar el anlisis.
Anlisis de ARN: Las tcnicas de RT-PCR (transcripcin reversa seguida de PCR) con la
hidridacin de ARN o Northern blotting pueden resultar valiosas herramientas para
detectar los transcriptos de inters presentes en la muestra. La RT-PCR presenta algunas
ventajas frente al Northern blotting: se requiere poca cantidad de material, posee una alta
sensibilidad y la muestra es de fcil preparacin. Por otra parte, la hibridacin del ARN utiliza
como sonda el transgen, ofrece informacin sobre el tamao del transcripto y permite su
cuantificacin.
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Biotecnologa y OGM
ELISA y Western blotting: aquellas plantas que poseen la secuencia de inters y la

expresan como transcripto, pueden ser analizadas con estas tcnicas inmunolgicas a fin de
determinar la presencia de la protena codificada por el transgen. La actividad de la protena
debe ser medida, sea por ensayos bioqumicos o por bioensayos, a fin de interpretar
correctamente el fenotipo de la planta obtenida. Adems, es conveniente confirmar la
estabilidad meitica de los transgenes estudiando su transmisin sexual a la generacin
siguiente. Finalmente, el comportamiento de los individuos transgnicos se estudia en
laboratorio, invernculo y campo. Para poder realizar los estudios en invernculo y a campo
es necesario contar con la autorizacin de la Comisin Nacional Asesora de Biotecnologa
Agropecuaria (CONABIA) (Daz et al.,2004).
19
Biotecnologa y OGM
Aporte de la transformacin gentica a la variabilidad gentica
La transformacin gentica permite introducir variabilidad gentica novedosa en diferentes

especies vegetales. Podemos considerar que este aporte puede ser realizado de las
siguientes maneras:
La expresin de secuencias codificantes no existentes en la especie, como protenas

insecticidas de origen bacteriano.
La expresin de nuevas formas allicas de genes que se hallaban presentes en el

genoma, como la tolerancia a glifosato en la soja.
La expresin de secuencias codificantes presentes en el genoma pero bajo el control

de nuevas secuencias regulatorias que modifican su nivel o patrn de expresin,
como protenas relacionadas a la patognesis.
La inhibicin de expresin de genes residentes en el genoma (Daz et al.,2004).
Para lograr la inhibicin de la expresin gnica se pueden utilizar diferentes tcnicas.

Todas ellas se basan en un proceso denominado silenciamiento gnico post-transcripcional ,
el cual involucra la degradacin de ARN mensajero producido por un gen determinado.
Cosupresin: consiste en la obtencin de plantas transgnicas que expresan un transgen

homlogo del gen residente que se desea silenciar.
ARN antisentido: involucra la sntesis de molculas de ARN que son complementarias al

ARNm producido por la transcripcin del gen que se quiere silenciar. El transgen consta de
la secuencia codificante del gen cuya expresin se desea alterar, pero con la orientacin
invertida, cuando esta genera se transcribe genera ARN que hibrida con el ARNm formando
una hebra doble que bloquea la traduccin. Como resutado, las clulas transformadas
producirn poco o ningn producto proteico. Mediante esta tcnica se obtuvieron tomates
transgnicos que mantienen su firmeza ms tiempo luego de la cosecha debido a que la
poligalacturonidasa se expresa en un 10% del nivel normal.
20
Biotecnologa y OGM
Interferencia del ARN: es parte de un mecanismo regulatorio natural de la expresin gnica

que es actualmente muy estudiado y es la metodologa ms eficiente, y por ello la ms
utilizada, para silenciar genes en plantas.
La tcnica se basa en la construccin de transgenes cuyo producto final es un ARN. Este

contiene parte de la secuencia transcripta del gen a silenciar en forma de repeticin invertida.
Como consecuencia de esta estructura, cuando este tipo de transgen se transcribe en la
planta se genera un ARN de doble cadena que dispara el mecanismo de degradacin
dependiente de la secuencia antes mencionado (Agrawal et al., 2003).
El uso de una secuencia espaciadora entre las repeticiones confiere a las construcciones
mayor estabilidad durante las manipulaciones en bacterias. Este tipo de construcciones se
denominan ARN hairpin. Adems, se observ que el uso de un intrn como secuencia
espaciadora, produce un silenciamiento ms eficiente en la planta.
Esta metodologa es una herramienta muy valiosa para los proyectos de genmica funcional
para poner en evidencia la funcin de genes clonados mediante su inactivacin. Otra
posibilidad es utilizarla para la obtencin de plantas transgnicas mejoradas mediante la
inactivacin de genes endgenos cuya expresin es indeseada (Kusaba, 2004). Una
interesante aplicacin de inters agronmico de esta tecnologa fue la obtencin de plantas
transgnicas de caf que no contienen cafena.
21
Biotecnologa y OGM
Obtencin de plantas transplastmicas
Las clulas vegetales contienen tres genomas: el nuclear, el plastdico y el mitocondrial. En

los ltimos aos la obtencin de plantas transplastmicas ha recibido notable atencin
(Maliga, 2002). As, el genoma de los plstidos (plastoma) se ha convertido en un blanco
atractivo para la ingeniera gentica ya que esta tecnologa ofrece una serie de ventajas sobre
la transformacin del genoma nuclear:
Se pueden obtener altos niveles de expresin de los transgenes y elevados niveles de

acumulacin de las protenas codificadas por ellos (hasta el 47% de las protenas
solubles totales). Cabe notar que el nivel de acumulacin observado a partir de
transgenes nucleares es generalmente inferior al 1%.
Es posible expresar un transgen opern con varias secuencias codificantes bajo el

control de un mismo promotor.
No se observa efecto de posicin debido a que la integracin del transgen est dirigida
a un sitio particular del plastoma. Esto hace que no sea necesario obtener una gran
poblacin de transformantes, a diferencia de lo que actualmente ocurre con las plantas
transgnicas nucleares.
No se observa silenciamiento de transgenes.
Para las especies que tienen transmisin materna de los plstidos (la mayora). Se
minimiza la dispersin de los transgenes por el polen debido a la ausencia de
transmisin de los plstidos por el mismo.
A pesar de la naturaleza eminentemente procariota del sistema gentico de los

plstidos, se ha demostrado que estas organelas pueden procesar protenas eucariotas
permitiendo su correcto plegamiento y la formacin de puentes disulfuro gracias a la
presencia de protenas chaperonas y sistemas enzimticos endgenos.
Los protocolos existentes para la obtencin de plantas transplastmicas se basan en la

transferencia de genes por el mtodo biolstico, un eficiente proceso de cultivo y seleccin in
vitro, y la utilizacin de vectores con secuencias homlogas al genoma del cloroplasto.
22
Biotecnologa y OGM
A diferencia de lo que ocurre en la transformacin del genoma nuclear, la integracin dirigida

de los transgenes en el plastoma se realiza mediante recombinacin homloga. Para lograr
esto, los vectores contienen los transgenes de inters flanqueados por secuencias con alta
homologa al ADN plastdico. La homologa entre el ADN del vector y del ADN del cloroplasto
determina la potencialidad del plsmido para ser utilizado en la transformacin gentica del
plastoma.
En este contexto, la existencia de secuencias altamente conservadas en el plastoma de

varias especies es explotada para el diseo de vectores universales, potencialmente tiles en
la transformacin de los cloroplastos de numerosas especies. La expresin exclusivamente
plastdica de los transgenes queda asegurada a travs de la utilizacin de promotores
especficos del cloroplasto, cuya transcripcin tiene caractersticas tpicamente procariticas
(Daz et al.,2004).
23
Biotecnologa y OGM
OGM o OVGM o sencillamente trangnicos??
Si bien se los denomina OGM (organismos genticamente modificado), OVGM (organismo

vegetal genticamente modificado ) o ms comnmente transgnicos, es importante recordar
que para la normativa argentina un transgnico es un organismo, ya sea vegetal, animal,
micro-organismo o virus, en el cual se ha introducido informacin gentica precisa y definida
en forma deliberada y dirigida a obtener un determinado fenotipo, siendo aquella introduccin
realizada de tal manera que dicha informacin gentica no podra haber sido adquirida por
ese organismo por la va de mutaciones, recombinaciones u otras formas de transferencia
gentica reconocidas como mecanismos que operan en la naturaleza sin intervencin
humana.
Esta definicin hace referencia al mtodo de obtencin del OGM, con el propsito de
establecer el campo de aplicacin de la norma, excluyendo, por ejemplo, los cruzamientos
tradicionales. Sin embargo, en el anlisis del riesgo de la liberacin de un OGM, la
caracterstica dominante, esto es, aquella que constituye el foco del anlisis de la Comisin,
es el inserto, o sea la porcin de DNA efectivamente presente en el genoma transformado,
cuya naturaleza y consecuencias (geno y fenotpicas) caracterizan al OGM como tal.
Al OGM o conjunto de OGMs con un dado inserto se los denomina colectivamente evento.
Varios OGMs pueden contener el mismo evento, y por lo tanto sus anlisis de riesgo sern
equivalentes. Ocasionalmente, en etapas tempranas del desarrollo de un OGM, se admite que
el evento puede no estar inequvocamente caracterizado, en el sentido de que no se ha
definido el inserto con la debida precisin (por ejemplo, el inserto puede estar en diferentes
posiciones en el genoma del vegetal). En estos casos, el anlisis se enfoca en la construccin
gentica utilizada en la transformacin (Burachik, M.,2004).
Los cultivos transgnicos actuales corresponden a lo que se denomina la primera

generacin que tiene por objetivo el aumento de la productividad de los cultivos, la
reduccin en el uso de agroqumicos, la conservacin de la tierra arable, el agua y la energa,
la reduccin de la contaminacin del ambiente y los beneficios para la salud humana
derivados de estos aspectos.
Se considera que la segunda generacin de cultivos transgnicos tendr ms beneficios

directos para los consumidores. Estos comprenden el mejoramiento de la calidad nutricional
(protenas, aceite, vitaminas y minerales), la eliminacin de alergenos, la fitoremediacin (es
24
Biotecnologa y OGM
decir la recuperacin de ambientes contaminados mediante el uso de plantas) y la utilizacin

de plantas como bioreactores para la expresin de protenas recombinantes con fines tales
como la produccin de vacunas comestibles, anticuerpos y otras protenas de uso teraputico
o industrial. Esta aplicacin se conoce como molecular farming (produccin de molculas en
la granja) y presenta numerosas ventajas para la produccin en gran escala de estas
protenas en particular en lo que respecta a costos, practicidad y seguridad. Sin embargo an
quedan algunos aspectos que limitan su potencial como biorreactores como son la calidad y
homogeneidad del producto final.
En los ltimos 10 aos, se han desarrollado varios sistemas de expresin basados en

plantas y en la actualidad se producen ms de 100 protenas recombinantes en diferentes
especies vegetales, generndose un estrecho vnculo entre la agricultura y muchas ramas de
la industria. Un ejemplo destacable es el arroz dorado, llamado as por la pigmentacin
amarilla que tienen sus granos debido a que acumula altos niveles de provitamina A en el
endosperma.
La tercera generacin de cultivos transgnicos se basar en la informacin producida

por los proyectos genmicos y tendr por objeto aspectos tales como la modificacin de la
arquitectura de la planta, la manipulacin de la floracin, el mejoramiento de la eficiencia
fotosinttica, la manipulacin de la heterosis y la apomixis, etc. (Daz et al.,2004).
Si bien, estas definiciones ayudan a comprender qu es un transgnico y por qu lo es, para

que sea reconocido por los organismos reguladores, no basta hacer una diferencia entre si
estamos frente a un organismo de primera o segunda generacin, se necesita una
clasificacin general de OGM donde se debe proporcionar informacin sobre:
La especie receptora (caractersticas fenotpicas, centros de origen y diversidad,

distribucin geogrfica en Argentina, estabilidad gentica, potencial de transferencia
y/o intercambio de genes con otros organismos, reproduccin, supervivencia,
diseminacin, interacciones con otros organismos, caractersticas patognicas,
txicas, antinutricionales, alergnicas u otras, e historia de modificaciones genticas
previas).
25
Biotecnologa y OGM
La modificacin gentica : mtodo de transformacin empleado, descripcin

detallada del vector (cada elemento gentico componente, su origen, tamao y
funcin; mapa del vector; secuencias nucleotdicas o regiones de la construccin
cuyos productos o funciones no sean conocidas; capacidad para transferir genes, o
para ser movilizados por conjugacin, recombinacin o integracin; regiones del
vector que se incorporan al OGM, es decir que constituyen el inserto).
Caracterizacin del inserto: anlisis molecular de la insercin en el genoma del

OVGM (nmero de sitios de integracin, nmero de copias de cada gen,
incorporacin de porciones de genes), origen y funcin de cada elemento insertado
en el OVGM, informacin sobre si el inserto (esto es, alguno de sus elementos)
confiere alguna funcin no requerida para la expresin del fenotipo esperado en el
OVGM, transposiciones y/o rearreglos dentro del inserto presente en la planta (con
respecto a las posiciones que los elementos genticos tenan en el vector) y/ o de/con
porciones del genoma de la planta dentro del inserto y en sus regiones flanqueantes;
informacin detallada de las secuencias del genoma vegetal que flanquean del inserto
y sobre la presencia/ausencia de fragmentos del inserto en regiones del genoma
vegetal fuera del inserto funcional.
Los organismos donantes: caractersticas patognicas (con relacin a las

resultantes de la expresin de los elementos presentes en la construccin utilizada en
la transformacin). Caractersticas perjudiciales para la salud humana o animal (con
la observacin del punto anterior), potencial y/o antecedentes de transferencia natural
(esto es, en hbitats y condiciones naturales) de los elementos que constituyen la
construccin, desde los organismos donantes a otros organismos, su probabilidad o
frecuencia, y fenotipos posibles u observados de los organismos receptores.
Caracterizacin del OVGM propiamente dicho: caractersticas fenotpicas

incorporadas, si alguna caracterstica fenotpica del organismo receptor no GM no se
expresa en el OVGM. Estabilidad gentica, segregacin y transferencia a la progenie.
Anlisis molecular (Southern blot, PCR). Caractersticas de la expresin del nuevo
material gentico. Productos expresados (debe incluir todos los elementos genticos
que se incorporan al OVGM, total o parcialmente), caractersticas de la expresin
(p.ej., constitutiva, tejido-especfica), tejidos del OVGM en que se expresan los genes
26
Biotecnologa y OGM
introducidos y niveles de expresin y su evolucin temporal, en relacin con el ciclo

de la planta. Actividad biolgica de las secuencias expresadas, ARNs transcriptos no
traducidos, sus niveles, funcin y caracterizacin. Anlisis detallado de las
posibilidades de transcripcin, por ejemplo, que comience dentro del inserto y se
extienda hacia el genoma de la planta ignorando seales de terminacin, as como de
transcripcin y traduccin de protenas de fusin o de marcos de lectura nuevos,
generados como consecuencia de la insercin. Tambin, se deben detallar las
tcnicas de deteccin del OVGM en el ambiente: mtodos moleculares y mtodos
biolgicos.
Efectos sobre la salud humana: posibles efectos txicos o alergnicos del OVGM,
sus materiales derivados, sus productos metablicos, los productos resultantes del
procesamiento industrial habitual (incluyendo pero no limitado a alimentos), o los
resultantes de interacciones de estos productos con otros componentes normales de
la dieta humana. Efecto de la modificacin gentica sobre aquellas caractersticas del
organismo no GM que constituyan un peligro o riesgo para la salud (incluyendo, pero
no limitados a, los niveles de antinutrientes).
Interacciones del OVGM con el ambiente: supervivencia en el ambiente, tasa de

germinacin y dormicin, vigor vegetativo (calidad agronmica, susceptibilidad a
patgenos, a insectos, a factores de estrs ambiental), ventajas adaptativas
presentes o potenciales del OVGM frente al organismo no GM, en hbitats y
condiciones naturales, y en condiciones de agroecosistemas para la misma especie y
para otros cultivos geogrficamente compatibles. Los modos y tasas de multiplicacin
y las formas naturales de propagacin. Informacin cuantitativa sobre interacciones:
susceptibilidad a patgenos, plagas e insectos y rendimiento.
Impacto ambiental del OVGM en el agroecosistema: efectos del OVGM sobre la

flora, fauna y poblacin microbiana, con nfasis en las especies benficas. Efectos
derivados de cambios en las prcticas agronmicas (si los hubiera). Conceptos para
el manejo de los efectos mencionados en los puntos anteriores y condiciones
especficas para el manejo de efectos ambientales debidos al OVGM. Estudios
realizados sobre el escape de genes va polen (Burachik, M.,2004).
27
Biotecnologa y OGM
Relacin Agrobacterium tumefaciens Dicotiledneas (De la Riva et al., 1998)
Agrobacterium tumefaciens naturalmente infecta a plantas dicotiledneas, penetrando

mediante lesiones y es el agente causante de una enfermedad denominada agalla de la
corona.
Posee la habilidad de transferir el T-DNA, dentro del ncleo de las clulas infectadas donde
es estabilizado y una vez integrado dentro del genoma se transcribe y causa las agallas.
El T-DNA contiene dos tipos de genes:
Oncogenes, que generan las enzimas necesarias para la sntesis de citocininas y

auxinas y son responsables de la formacin del tumor.
Genes que codifican para la sntesis de opinas, se generan por la condensacin

entre aminocidos y azcares y son excretados hacia las agallas, donde son
consumidos por Agrobacterium. Las opinas constituyen una fuente de carbono y
nitrgeno.
Fuera del T-DNA se encuentran los genes del catabolismo de opinas, los genes que toman
lugar en la transferencia del T-DNA desde la bacteria hasta la clula y los genes involucrados
en la transferencia de plsmidos entre bacterias.
El T-DNA contiene un megaplsmido, denominado Ti que durante la infeccin, un segmento

del mismo es transferido al ncleo celular y es integrado dentro del ADN vegetal. Este
fragmento est flanqueado por repeticiones de 25 pb, que actan como elemento de seal
para el aparato de transferencia (en cis).
El proceso de transferencia es mediado por la accin cooperativa de protenas codificadas

por genes determinados en la regin de virulencia del plsmido Ti (genes vir) y por el
cromosoma bacteriano. La regin de virulencia, de 30 Kb, es un reguln organizado en seis
operones que son esenciales para la transferencia de T-DNA (virA, virB, virD y virG) o que
incrementan la eficiencia de la transferencia (virC y virE).
28
Biotecnologa y OGM
Los diferentes elementos genticamente determinados muestran su rol funcional en la unin

de Agrobacterium en la clula vegetal y la colonizacin bacteriana:
Loci chvA y chvB, involucrados en la sntesis y excrecin del -1,2 glucano.
El chvE requerido para la induccin de los genes vir y quimiotaxis bacteriana.
El locus cel, responsable de la sntesis de fibrillas de celulosa.
El locus pscA (exoC) interviene en la sntesis de glucanos cclicos y del cido

succnoglicano.
El locus att que se halla involucrado con las protenas de la superficie celular.
El proceso de transferencia de genes desde Agrobacterium a las clulas vegetales implica

una serie de pasos:
1. Colonizacin bacteriana.
2. Induccin del sistema bacteriano de virulencia.
3. Generacin del complejo de transferencia del T-DNA.
4. Transferencia del T-DNA.
5. Integracin del T-DNA dentro del genoma vegetal.
1. Colonizacin bacteriana: toma lugar cuando Agrobacterium se une a la superficie celular.

Algunas evidencias sugieren que los polisacridos capsulares juegan un rol especfico durante
la interaccin con el husped. Se ha observado en cepas silvestres, que la unin a la
superficie celular estaba correlacionada positivamente con la produccin de polisacridos
acdicos.
El locus att contiene los genes necesarios para un anclaje exitoso de la bacteria en la clula
vegetal. En el extremo izquierdo del locus att se encuentran los eventos de sealizacin
molecular y en el derecho se halla la informacin para la sntesis de compuestos
fundamentales. El lado izquierdo sugiere que el opern est conformado por nueve marcos de
lectura abiertos (ORF), cuatro de los cuales muestran homologa con los genes relacionados
con las uniones proteicas periplasmticas dependientes del sistema de transporte (ABC). Los
29
Biotecnologa y OGM
transportadores ABC codifican genes que estn involucrados en la secrecin o en la

introduccin en bacterias de algunos activadores generados por los vegetales.
2. Induccin del sistema bacteriano de virulencia: la transferencia del T-DNA est mediado
por los productos codificados por la regin vir del plsmido Ti. Esta regin est compuesta por
al menos seis operones esenciales (virA, virB, virC, virD, virE y virG) y dos no esenciales (virF
y virH). El nmero de genes por opern es variable: virA, virG y virF tienen solamente un gen;
virE, virC y virH poseen dos genes mientras que virD y virB tienen cuatro y once genes
respectivamente.
Los nicos operones constitutivos son virA y virG, los cuales codifican para un sistema de
dos componentes (VirA-VirG) el cual activa la transcripcin de los otros genes vir.
VirA es una protena sensora dimrica transmembrana, que detecta seales moleculares,
mayormente compuestos fenlicos pequeos que son generados por plantas heridas. Las
seales de activacin de VirA incluyen pH cido, compuestos fenlicos (acetosiringona) y
ciertos monosacridos que actan sinrgicamente con los compuestos fenlicos. La protena
VirA puede ser definida estructuralmente en 3 dominios: el periplasmtico o dominio de
entrada y dos dominios transmembrana (TM1 y TM2), los cuales actan como transmisores y
receptores. El dominio periplasmtico es importante para la deteccin de monosacridos.
Junto con el dominio periplasmtico se encuentra TM2 en forma de una hlice anfiptica, con
regiones fuertemente hidroflicas e hidrofbicas. TM2 es un dominio con actividad quinasa y
juega un rol muy importante en la activacin de VirA, por autofosforilacin en un residuo
conservado His-474, en respuesta a las seales moleculares generadas por plantas daadas.
La deteccin de monosacridos por VirA es un importante sistema de amplificacin y

responde a niveles bajos de compuestos fenlicos. La induccin de este sistema es
solamente posible a travs de azcares periplasmticos (glucosa, galactosa) unidos a la
protena ChvE que interacta con VirA.
La protena VirA activa tiene la capacidad de transferir su fosfato a un residuo conservado

de aspartato del DNA citoplasmtico unido a la protena VirG. La funcionalidad de VirG como
un factor de regulacin de la expresin de los genes vir se activa cuando es fosforilado por
VirA. La regin C-terminal es la responsable de la capacidad del ADN para unirse a protenas
30
Biotecnologa y OGM
y la regin N-terminal es el dominio de fosforilacin y muestra homologa con el dominio

receptor de VirA.
La activacin del sistema vir tambin depende de factores externos como la temperatura y el
pH. A temperaturas de 32C, los genes vir no se expresan debido a un cambio conformacional
de ciertas regiones de VirA que induce a la inactivacin. El efecto de la temperatura en VirA
es suprimido por una forma mutante de VirG (VirGC) que activa la expresin constitutiva de los
genes vir. De cualquier manera, este mutante no puede conferir la capacidad de virulencia a
Agrobacterium a 32C ya que muchas de las protenas que participan en la transferencia de T-
DNA son afectadas por las altas temperaturas.
3. Generacin del complejo de transferencia del T-DNA: la activacin de los genes vir
genera la produccin de molculas de T-DNA de cadena simple (single stranded o ss).
Cualquier fragmento de ADN ubicado entre los bordes del T-DNA ser transferido a la clula
vegetal como ADN de cadena simple y ser integrado al genoma eucaritico. Estos son los
nicos elementos que actan en cis en el sistema de transferencia del T-DNA. Las protenas
VirD1 y VirD2 juegan un rol clave en este paso, reconociendo las secuencias borde del T-DNA
y cortando la cadena en cada extremo (actividad endonucleasa). Estos sitios de corte se
asumen como los sitios de iniciacin y de terminacin para la recuperacin de la hebra de T-
DNA. Luego del clivage endonucleotdico, VirD2 permanece unida covalentemente al extremo
5 de la cadena simple del T-DNA, esta asociacin previene el ataque exonucleotdico.
La sntesis de la cadena simple de T-DNA se inicia en el borde derecho, avanza en sentido

5 a 3 y el proceso de terminacin toma lugar cuando el borde izquierdo est mutado o
completamente ausente. El borde izquierdo puede actuar como un sitio de inicio para la
sntesis de T-DNA, pero su eficiencia es muy baja. Esta diferencia puede ser a consecuencia
de la presencia de una secuencia enhancer cercana al borde derecho. Este enhancer se halla
especficamente en la protena VirC1.
4. Transferencia de T-DNA: el vehculo de transferencia hacia la planta es un complejo

protenas/T-DNA de cadena simple (ssT-DNA). El ssT-DNA debe ser translocado al ncleo
celular, atravesando tres membranas plasmticas, la pared celular y espacios celulares.
31
Biotecnologa y OGM
Existen dos modelos que explican esta transferencia, siendo el modelo A el ms aceptado.
Modelo A: el complejo formado por el ssT-DNA/VirD2 es recubierto por 69 KDa de la

protena VierE2 (protena que recubre cadenas simples de ADN). Esta asociacin
cooperativa previene la accin de las nucleasas y extiende la cadena de T-DNA reduciendo
el dimetro del complejo a unos 2 nm, facilitando paso por los canales de membrana. Esta
asociacin no estabiliza el complejo T-DNA dentro de Agrobacterium .
VirE1 es esencial para exportar las protenas VirE2 hacia la clula vegetal; esta protena
puede ser exportada independientemente y la transferencia de VirE2 como parte del
complejo ssT-DNA no es necesaria para el evento de transmisin, siendo posible la
transferencia de T-DNA desnudo a la clula vegetal.
Modelo B: propone la transferencia de ssT-DNA unido covalentemente por el extremo 5 con

VirD2, pero sin estar recubierto por VirE2. El transporte independiente de VirE2 a la clula
vegetal se presenta como un proceso natural y una vez que el complejo ssT-DNA/VirD2 se
encuentra dentro de la planta recin all es recubierto por VirE2.
El rol del opern virB es la generacin de una estructura de superficie celular para que el
complejo de ssT-DNA/VirD2 pueda trasladarse desde la bacteria hacia la planta. La protena
VirD4 tambin es necesaria para el transporte del ssT-DNA, siendo su funcin el fosforilar el
complejo para lograr su translocacin.
VirB es un tipo de protena que presenta caractersticas hidropticas similares a otras

protenas asociadas a membrana. VirD4 es una protena transmembrana, pero se ubica
predominantemente en el la cara interna de la membrana plasmtica. Ambos sistemas
traslocan el complejo de la bacteria a la clula husped. En adicin, poseen la capacidad de
trasladar ADN entre clulas de diferentes reinos, los que sugiere que el aparato de
transmisin de T-DNA y los sistemas de conjugacin estn relacionados y probablemente
evolucionaron de un ancestro comn.
La mayora de las protenas VirB estn ensambladas como canales que atraviesan ambas
membranas. Excepto para VirB11, poseen mltiples dominios periplasmticos. VirB1 es la
nica protena de este tipo que se halla en el medio extracelular, si bien es posible que otras
protenas VirB sean redistribuidas durante el proceso de biognesis y funcionamiento del
canal de conjugacin transcelular.
32
Biotecnologa y OGM
Ls protenas VirB4 y VirB11 son ATPasas hidroflicas necesarias para la transferencia activa
del ADN. VirB11 presenta una secuencia contnua de residuos hidrofbicos, formando los
dominios periplasmticos. Menos de una tercera parte de VirB11 constituye la fraccin
soluble, encontrndose el resto de la protena asociada a la membrana plasmtica. Estas
caractersticas son atpicas para este tipo de protenas y evidencian la posible co-existencia
de diferentes formas conformacionales in-vivo. VirB4 est asociada estrechamente con la
membrana citoplasmtica, contiene dos dominios extracelulares (protena transmembrana) y
presumiblemente permiten el cambio conformacional mediado por ATP en el canal de
conjugacin. Probablemente las formas funcionales de VirB4 y VirB11 sean homo y
heterodmeros.
La sntesis de VirB4 se encuentra correlacionada con la acumulacin y distribucin de VirB3.

VirB7 podra tener un papel crucial en la conformacin del aparato de transferencia, interacta
con VirB9 formando heterodmeros y probablemente complejos multimricos de mayor orden.
La sntesis de VirB9 y su acumulacin estable depende de la conformacin de

heterodmeros, lo que indica que VirB9 es inestable si est libre y requiera la asociacin con
VirB7. Las subunidades monomricas se mantienen unidas mediantes puentes disulfuro. El
heterodmero VirB7-VirB9 estabilizara a otras protenas durante el ensamblaje de los canales
transmembrana.
Muchos de los pasos iniciales de la biognesis del complejo ssT-DNA han sido
recientemente identificados. Primeramente los monmeros de VirB7 y VirB9 son exportados a
la membrana y procesados. Interactan entre ellos para formar homo y heterodmeros unidos
covalentemente. El heterodnamo VirB7-VirB9 se ubica en la membrana externa, pero no ha
sido elucidado el mecanismo de transporte. El paso siguiente implica la interaccin con otras
protenas Vir para ensamblar el canal de transferencia, con la colaboracin de la
transglicosidasa VirB1.
Es conocido el hecho que casi todas las protenas Vir (VirB2 a VirB11) son esenciales para
la tranferencia del ADN, salvo VirB1 que posee una contribucin menor en este proceso.
Los dos operones vir accesorios, son virF y virH. El opern virF codifica para una protena
que funciona en el complejo de T-DNA dentro de la clula vegetal va el canal de conjugacin
o independientemente si se asume el transporte de VirE2. El rol de VirF parece estar
relacionado con el destino nuclear del complejo ssT-DNA. El opern virH consiste en dos
33
Biotecnologa y OGM
genes que codifican para las protenas VirH1 y VirH2, las cuales no son esenciales pero que
mejoran la eficiencia de transferencia y la detoxificacin de ciertos compuestos generados por
el vegetal que pueden afectar el crecimiento bacterial.
La densa estructura del citoplasma, la cual est compuesta por microtbulos, filamentos de
actina y filamentos intermedios, restringen en gran manera los movimientos brownianos de
difusin que suelen poseer las macromolculas que penetran en l. Usando mtodos de
seguimiento biofsico de partculas y complejos VirE2-ssDNA fluorescentes, se sugiri
recientemente, que seran necesarios motores de dinena para dirigir los movimientos del
complejo T hacia el ncleo. Aunque este modelo fu propuesto inicialmente en base a datos
obtenidos en clulas animales, la organizacin radial de los microtbulos en las clulas
vegetales soporta la idea de los motores de dinena para transportar el compejo T hacia el
poro nuclear, adems del gran tamao (casi 15,7 nm de dimetro) del complejo T maduro el
cual indicara un transporte activo (Tzfira & Citovsky, 2006)
6.Integracin del T-DNA dentro del genoma vegetal: dentro de la clula vegetal, el
complejo de ssT-DNA es dirigido hacia el ncleo celular, pasando por poros de la carioteca.
34
Biotecnologa y OGM
Dos protenas Vir son importantes en este paso: VirD2y VirE2 (tambin VirF, pero con menor
contribucin en el proceso.)
Las seales nucleares de ubicacin (NLS) de VirD2 y VirE2 juegan un rol importante en el
direccionamiento del transporte del ssT-DNA, teniendo VirD2 un NLS funcional.
El complejo ssT-DNA es un complejo nucleoprotenico de gran tamao (ms de 20 Kb),

unido covalentemente por el extremo 5 a una protena VirD2 (una por complejo). Adems, el
complejo est recubierto por un gran nmero de protenas VirE2 (unas 600 por cada 20 Kb de
T-DNA) y cada una de ellas posee dos NLS, los cuales se consideran de importancia para la
importacin contnua del complejo ssT-DNA al ncleo (probablemente mantiene ambos lados
de un poro abiertos simultneamente). La importacin hacia el ncleo es posiblemente
mediada por protenas especficas de unin NLS, que se hallan presentes en el citoplasma de
la clula husped.
El paso final de la trasnferencia del T-DNA es la integracin del mismo en el genoma de la

planta. La integracin ocurre por recombinacin ilegtima. De acuerdo a este modelo, se
necesita aparear unas pocas bases, conocidas como micro-homologas, para el paso de pre-
unin entre la cadena de T-DNA con VirD2 y el ADN vegetal. Estas homologas son muy bajas
y proveen el mnimo de especificidad necesaria para el proceso de recombinacin por
posicionar VirD2 para generar la ligacin. El extremo 3 o secuencias adyacentes del T-DNA
encuentran algunas pequeas homologas con el ADN vegetal resultando en el primer
contacto entre ambos ADN y forman una unin en la cadena 3-5 del husped. El ADN
vegetal es desplazado y subsecuentemente cortado en la posicin 3 de la unin por
endonucleasas y el primer nucletido del extremo 5 se une a los pares de VirD2 con un
nucletido sobre la cadena del husped (5-3).
El extremo 3 libre del T-DNA se desplaza junto con el ADN vegetal, el cual es digerido, ya
sea por exonucleasas 3-5 o por endonucleasas (I-CeuI). En Arabidopsis AtKu80 fue
reconocido como medio para la iniciacin de la unin de secuencias no homlogas en el
proceso de integracin del T-DNA (Tzfira & Citovsky, 2003). Se ha citado tambin la actividad
de otra endonucleasa I-SceI, la cual reconoce sitios de 18 pares de bases (Tzfira et al., 2003)
Entonces, el extremo 5 unido a VirD2 culmina y el extremo 3 (apareado con el ADN de la

planta desde el primer paso del proceso de integracin) se une al final de la cadena del ADN
vegetal. Una vez que se introduce la cadena de T-DNA al ADN vegetal, se produce una
35
Biotecnologa y OGM
torsin seguida por un corte en la cadena opuesta del ADN vegetal. Esta situacin activa el
mecanismo de reparacin de la clula vegetal y la hebra complementaria es sintetizada
usando el inserto de T-DNA como molde.
VirD2 posee un rol muy activo en la integracin precisa de la cadena de T-DNA a los
cromosomas vegetales. La separacin de la protena VirD2 provee de la energa contenida en
el enlace fosfodister entre el residuo Tyr29 y el primer nucletido de la hebra de T-DNA
proveyendo el extremo 5 el cual se liga con el ADN vegetal. Este enlace fosfodister puede
servir como un sustrato electroflico para el HO- 3 de carcter nucleoflico del ADN vegetal
cortado. Cuando mutantes de la protena VirD2 es transferida a la unin de la cadena de T-
DNA, el proceso de integracin toma lugar con la prdida de nucletidos del extremo 5 de
dicha cadena.
Si bien se realiza la integracin del T-DNA al ADN vegetal, puede realizarse mediante
diferentes caminos:
Mecanismo de ligacin simple (unin ilegtima), resultado de la unin sin micro-

homologas o inserciones de ADN de relleno (filler DNA).
A partir de micro-homologas y deleciones de los extremos del T-DNA.
Con ADN de relleno, formado por 51 pares de bases, el cual se halla entre el T-DNA
y el ADN vegetal. Estas secuencias de relleno se generan a partir de secuencias
cortas (idnticas a las halladas en los extremos del T-DNA o en los sitios de
integracin del ADN vegetal).
Estos diferentes mecanismos de insercin se han observado en distintas especies vegetales

(Windels et al., 2003).
36
Biotecnologa y OGM
37
Biotecnologa y OGM
Manipulacin gentica del hospedante para incrementar la eficiencia de transformacin

(Tzfira & Citovsky, 2006)
La bsqueda de factores especficos del hospedante relacionados en la integracin de ADN

forneo, ha provisto de un listado de protenas y genes cuya funcin se hace patente en
diferentes pasos del proceso de transformacin. Este listado incluye a las protenas
involucradas en el contacto inicial entre la clula vegetal y la bacteria, la entrada del complejo
T en el ncleo eucaritico y su transporte intranuclear, el desacople del complejo T dentro del
ncleo y la integracin del T-DNA en el genoma eucaritico. An cuando la funcin molecular
de muchas de estas protenas se desconoce, la sobre-expresin de tres de ellas en vegetales
transgnicos han demostrado una mayor suceptibilidad a la infeccin con Agrobacterium.
La sobre-expresin del gen rat5 en Arabidopsis (un gen que codifica para la histona H2A)
incrementa la suceptibilidad a la infeccin con Agrobacterium, al igual que la sobre-expresin
del gen vip1 (que codifica para la protena VIP1 , esencial para el importe nuclear del T-DNA)
en Nicotiana tabacum y del gen que codifica la protena BTI la cual interacta con una de las
protenas del pilus de Agrobacterium. Con estos ejemplos se demuestra que no slo la sobre-
expresin de protenas del hospedante claves para el importe nuclear, sitios de ataque de
cromatina, desacople del complejo T e integracin del ADN bacteriano; sino tambin durante
la fase inicial del contacto de Agrobacterium con el hospedante, es til para incrementar la
eficiencia de transformacin en plantas modelo.
Naturalmente la aplicacin de factores del hospedante para incrementar la eficiencia de

transformacin en especies recalcitrantes puede ser complicado. Una manera de superar
ciertas barreras tecnolgicas puede llegar a ser la utilizacin de expresin transiente de
factores especficos del hospendante usando medios de entrada independientes de
Agrobacterium, como el mtodo biolstico. Otra posible salida es la utilizacin de
Agrobacterium para la expresin y entrada de protenas del hospedante durante la
transformacin. La habilidad de las clulas de Agrobacterium de transportar varias protenas
Vir, independientemente del T-DNA, a la clula del hospedante y la identificacin de seales
de exportacin relativamente cortas necesarias para este tipo de transporte, sugieren una
tecnologa alternativa, en la cual los factores del hospendante pueden ser fusionados con la
seal de exportacin (expresada en las clulas de Agrobacterium) y entregadas al hospedante
mediante Agrobacterium junto con el T-DNA transformado.
38
Biotecnologa y OGM
Modificaciones generadas mediante transgnesis
Tolerancia a herbicidas (RR): Glycine max, Gossypium sp, Zea mays, Beta vulgaris var.
rapacea, Brassica napus var. oleifera.
Resistencia a insectos (Bt): Lycopersicum sculentum, Nicotiana tabacum, Gossypium

sp, Zea mays.
Resistencia a virus: Solanum tuberosum, Carica papaya.
Resistencia a hongos: Malus domestica resistente a Venturia inaequalis. (Pouppin &

Arce-Johnson, 2005)
Modificaciones en la calidad de los productos generados por la planta, como papas con
menor contenido de almidn (para que absorba menos aceite), cereales ms
crocantes o algodn teido desde la planta.
Modificaciones para tornar a plantas en biofbricas, tales como alimentos enriquecidos

con vacunas, anticuerpos, vitaminas, polmeros biodegradables.
Especies herbceas y leosas para fito-remediacin (fito-estabilizacin y fito-

extraccin): Arabidopsis thaliana (algunos mutantes), Nicotiana tabacum, Astragalus
bisulcatus, Brassica juncea, Pteris vittata, Thlaspi caerulescens, Populus sp.
(Krmer, 2005), Liriodendron tulipifera (Pouppin & Arce-Johnson, 2005).
Modificaciones en la anatoma y fisiologa en ciertas especies arbreas: Malus

domestica (reduccin del crecimiento), Persea americana (mayor enraizamiento y
mayor nmero de races embrionales), Citrus sp. (acortamiento de la etapa juvenil,
floracin ms temprana), Populus sp. (incremento en la tasa de crecimiento y en el
dimetro, mayor cantidad de fibras xilemticas, floracin ms temprana), Poncirus
trifoliata (menor tamao) (Pouppin & Arce-Johnson, 2005).
Modificaciones en plantas utilizadas como forrajeras, tales como aumento en la

digestibilidad de la materia seca (modificacin del perfil de ligninas) Stylosanthes
humilis, Medicago sativa, Lolium perenne, Festuca arundinacea; contenidos de
carbohidratos solubles no estructurales (contenido de fructanos) Trifolium repens,
Medicago sativa, Lolium perenne, Festuca arundinacea; contenido de protenas y de
aminocidos esenciales (expresin de protenas resistentes al rumen rumen by-
39
Biotecnologa y OGM
pass) Festuca arundinacea; incrementar la sntesis de taninos (forrajeras libres de

meteorismo) Lotus corniculatus; incremento en la resistencia a enfermedades
fngicas, Oryza sativa resistente a Rhizoctonia solani y a Sclerotium rolfsii (ensayos
in-vitro sobre varias especies de Trifolium han demostrado resistencia a
Phytophthora clandestina, Rhizoctonia solani y Fusarium ssp.); incremento de
resistencia a plagas (Bt e inhibidor de tripsina pancretica bovina en Trifolium
repens). La mayora de estos parmetros estn asociados con vas metablicas o
con la produccin de protenas especficas (Spangenberg, 2004).
Manipulacin en el crecimiento y desarrollo de especies forrajeras, como manipulacin

sobre los alrgenos del polen en Lolium perenne y L.multiflorum; manipulacin de
cambio de fase y floracin (inhiben la produccin de caas florales o retardan la
senescencia) Zea mays, Lolium sp. (Spangenberg, 2004).
Modificaciones en especies ornamentales, ya sean resistencia a herbicidas, insectos

Chrysanthemum sp., enfermedades fngicas y virales Dendranthema sp., Petunia sp.
Cyclamen sp., Rosa sp., Dianthus sp.; mayor vida post-cosecha Dendrathema sp.
Dianthus sp., Pelargonium sp.; modificaciones de la arquitectura de la planta
Pelargonium sp, Begonia sp, Rhododendron sp, Rosa sp.; androesterilidad;
modificacin en los pigmentos de los ptalos Dianthus sp., Rosa sp.,
Chrysanthemum sp., Petunia sp., Gerbera sp., Dendranthema sp., Begonia sp.,
Antirrhinium sp. (Escandn, 2004).
Tolerancia a factores abiticos tales como bajas temperaturas Solanum tuberosum,

Lycopersicum sculentum, Triticum sp.; salinidad Oryza sativa, Zea mays, Sorghum
sp., Nicotiana tabacum, Triticum sp.; sequa Oryza sativa, Triticum sp., Saccharum
officinarum (Puebla & Del Viso, 2004).
40
Biotecnologa y OGM
Transgnicos en Argentina (Diamante & Izquierdo, 2004)
En Argentina, a partir de 1991 comienza a generarse inters por parte del sector privado y
de grupos de investigacin nacionales para la realizacin de ensayos con organismos
genticamente modificados. La Comisin Nacional Asesora de Biotecnologa Agropecuaria
(CONABIA) se crea como una instancia de consulta y apoyo tcnico para asesorar al
Secretario de Agricultura, Ganadera, Pesca y Alimentacin en la formulacin e
implementacin de la regulacin para la introduccin y liberacin al ambiente de materiales
genticamente modificados.
La CONABIA est constituida por representantes de los sectores pblico y privado

involucrados en la Biotecnologa Agropecuaria, siendo este Cuerpo un grupo interdisciplinario
e interinstitucional.
La normativa argentina est basada en las caractersticas y riesgos identificados del

producto biotecnolgico y no en el proceso mediante el cual dicho producto fue originado. En
otras palabras, sta se aplica a los productos genticamente modificados en funcin del uso
propuesto, contemplando slo aquellos aspectos en los procedimientos empleados para su
obtencin que pudieran significar un riesgo para el ambiente, la produccin agropecuaria o la
salud pblica. Estas normas definen las condiciones que deben reunirse para permitir la
liberacin al medio de dichos materiales, las cuales son tenidas en cuenta por la CONABIA al
evaluar cada solicitud presentada.
Por otra parte, las reglamentaciones se encuentran integradas en el sistema regulatorio

general para el sector agropecuario: normativas existentes en Argentina en materia de
proteccin vegetal segn el Decreto-Ley de Defensa Sanitaria de la Produccin Agrcola n
6.704/63 y sus modificaciones, de semillas y creaciones fitogenticas, y de sanidad animal.
La evaluacin de las solicitudes y el posterior monitoreo de las pruebas son responsabilidad

de la Secretara de Agricultura, Ganadera, Pesca y Alimentacin. Las autorizaciones se dan
bajo reserva de la aplicacin de un cierto nmero de medidas de precaucin. La bioseguridad
de las liberaciones est determinada por las caractersticas del organismo y las caractersticas
agroecolgicas del sitio de la liberacin, as como del empleo de condiciones experimentales
adecuadas, incluyendo la idoneidad del responsable de la liberacin al medio.
41
Biotecnologa y OGM
El monitoreo posterior de los ensayos, a cargo del Instituto Nacional de Semillas (INASE) y
el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA) tiene por objeto evaluar
en el sitio el real cumplimiento de lo presentado en las solicitudes y tambin estar preparado
para aplicar medidas que eviten efectos adversos sobre el ambiente (tales como,
diseminacin de malezas). Adems se efectan controles de los lotes, posteriores al momento
de cosecha; ello tiene la finalidad de limitar la posible transferencia de la informacin gentica
contenida en los materiales genticamente modificados a otros organismos.
El nmero de permisos para liberaciones al medio otorgados en el perodo 1991-2001 es de

495.
Fuente : CONABIA
Los cultivos que tuvieron mayor nmero de ensayos autorizados fueron: maz, girasol, soja y
algodn, y en menor proporcin: trigo, papa, alfalfa y otros
. Fuente : CONABIA
42
Biotecnologa y OGM
Las principales caractersticas introducidas son la tolerancia a herbicidas y la resistencia a

insectos.
Fuente : CONABIA
El circuito de aprobacin para la comercializacin de materiales genticamente modificados:

una vez concedida una autorizacin para liberacin al medio puede solicitarse un permiso de
"flexibilizacin" reglamentado por la Resolucin n 131/98 de la SAGPyA. En esta etapa y
dado que de la evaluacin de la informacin presentada no se prevn problemas de
bioseguridad.
Evento de
Especie Caracterstica introducida Solicitante Resolucin
Transformacin
Soja Tolerancia a glifosato "40-3-2" Nidera S. A. SAPyA N 115 (07-3-96)
SAPyA N 458
Maz Resistencia a lepidpteros "176" Ciba-Geigy
(02-8-96)
Tolerancia a glufosinato de SAGPyA N 77
Maz "T25" AgrEvo S. A.
amonio (11-2-98)
Monsanto Argentina SAGPyA N 289
Maz Resistencia a lepidpteros "MON 810"
S.A.I.C. (29-3-98)
Monsanto Argentina SAGPyA N290
Algodn Resistencia a lepidpteros "MON 531"
S.A.I.C. (29-5-98)
Maz Tolerancia a glifosato "GA 21"
S.A.I.C. (8-10-98)
Algodn Tolerancia a glifosato "MON 1445"
S.A.I.C. (11-11-99)
Novartis Argentina SAGPyA N 442 (16-8-
Maz Resistencia a lepidpteros "Bt 11"
S.A. 00)
Tolerancia a glufosinato de "A2704-12" y Hoechst Schering SAGPyA N 47
Soja
amonio "A5547-127" AgrEvo S. A. (7-5-01)
Monsanto Argentina SAGPYA N 361(02-05-
Maz Tolerancia a glifosato "NK603"
S.A.I.C. 03)
43
Biotecnologa y OGM
La concesin de una autorizacin de flexibilizacin significa que en futuras liberaciones al

medio slo se deber presentar informacin referida a la superficie sembrada, fecha de
siembra, localizacin de la liberacin y fecha de cosecha, y la CONABIA nicamente
recomendar la realizacin de inspecciones de la cosecha y la disposicin final del material.
El circuito para la autorizacin de la comercializacin consta de un procedimiento

administrativo en tres etapas:
1. Evaluacin de los riesgos para los agroecosistemas, derivados del cultivo en escala
comercial del material genticamente modificado en consideracin (flexibilizacin), a
cargo de la CONABIA, etapa que lleva como mnimo 2 (dos) aos de evaluacin.
2. Evaluacin del material para uso alimentario, humano y animal , la cual es
competencia del Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria
(SENASA), etapa que se cumple en por lo menos 1 (un) ao.
3. Dictamen sobre la conveniencia de la comercializacin del material genticamente
modificado por su impacto en los mercados, a cargo de la Direccin Nacional de
Mercados Agroalimentarios, de manera tal de evitar potenciales impactos negativos
en las exportaciones argentinas
Evento de
Especie Caracterstica introducida Solicitante Resolucin
Transformacin
Soja Tolerancia a glifosato "40-3-2" Nidera S. A. SAPyA N 167 (25-3-96)
Maz Resistencia a lepidpteros "176" Ciba-Geigy SAPyA N 19 (16-1-98).
SAGPyA N 372
Maz Tolerancia a glufosinato de amonio "T25" AgrEvo S. A.
(23-6-98)
Algodn Resistencia a lepidpteros "MON 531"
S.A.I.C. (16-7-98).
Maz Resistencia a lepidpteros "MON 810"
S.A.I.C. (16-7-98)
Algodn Tolerancia a glifosato "MON 1445"
S.A.I.C. (25-4-01).
SAGPyA N 392
Maz Resistencia a lepidpteros "Bt 11" Novartis Agrosem S.A.
(27-7-01).
Luego se deben cumplir con aquellos requisitos normados por el Instituto Nacional de
Semillas (INASE) para la inscripcin en el Registro Nacional de Cultivares y en el Rgimen de
Fiscalizacin.
44
Biotecnologa y OGM
Los transgnicos, cun peligrosos son?
Si bien, popularmente, los riesgos que se le adjudican a los alimentos transgnicos son
muchos y muy variados (desde problemas de esterilidad, hiperfertilidad, pasando por
trastornos de conducta, alergias y dems) en realidad decid plantear la problemtica en base
a dos problemas: uno es en base a los alergenos presentes en alimentos transgnicos y el
otro es un problema con un enfoque ecolgico, como lo es el flujo gnico y el impacto sobre la
biodiversidad ejercido por cultivos transgnicos. De todos modos, considero que el principal
problema sobre la peligrosidad de los transgnicos es la falta de informacin adecuada hacia
la poblacin, obviamente sin restar importancia a los mencionados en la problemtica.
Alergenos en alimentos (Custers, 2001)
Bsicamente hay 8 grupos de alimentos que engloban el 90% de las alergias, a saber,
manes, leche, huevos, soja, nueces, peces, crustceos y trigo. La mayora de los alergenos
presentes en estos alimentos son glicoprotenas. Los factores que determinan la alergenicidad
de una protena son poco conocidos, pero un factor de importancia es la digestibilidad de la
protena y la resistencia de la misma a tratamientos con cidos y calor. Adems, el proceso de
digestin puede desenmascarar epitopes o formar nuevos (como se ha visto en las protenas
de la leche).
Como cualquier alimento que contiene protenas puede ser la causa potencial de una alergia
en algunos individuos, la introduccin de nuevas protenas o modificacin de los niveles de
una protena existente puede afectar el nivel de alergenicidad.
Debemos recordar que todos los alimentos genticamente modificados disponibles en el

mercado actualmente han superado los test de alergenicidad potencial de sus protenas
modificadas.
En el caso en que nuevos genes sean introducidos, se debe tener en cuenta el organismo
de origen de dichos genes (si es fuente de alergenos o no). En cambio, si se desconoce dato
sobre la alergenicidad, la nueva protena debe ser considerada como potencialmente
alergenica.
Cualquier cambio en la expresin de un gen, la introduccin de nuevos genes o la
eliminacin de algn gen, afectan la composicin de otras protenas y diversos constituyentes
presentes en la planta.
45
Biotecnologa y OGM
Los cambios azarosos en las genes presentes, o en los que flanquean los sitios de insercin
del ADN forneo pueden ser encendidos, apagados, sufrir mutaciones puntuales y as
nuevos eptopes pueden ser expresados en la protena traducida a partir de ellos. Todos estos
cambios pueden afectar la alergenicidad potencial, pero la posibilidad de que esto ocurra es
considerada baja (se debe tener en cuenta que estos cambios tambin se generaban en los
mtodos de mejora tradicional de cultivos).
En adicin, los cambios en la acumulacin de protenas en ciertos compartimientos
celulares, donde se encuentran al resguardo de los cambios producidos durante la digestin,
stas pueden llegar a estar en contacto con el sistema inmune y generar sensibilizacin.
Tambin el sitio de expresin de las protenas en la planta (como en todo el cuerpo del
vegetal o slo en semillas, hojas, races o polen) puede ser de importancia en la
sensibilizacin potencial. El sitio de expresin del gen no slo afecta la posibilidad de
exposicin sino tambin la posibilidad de sensibilizacin ya sea por la ruta oral (en el caso en
que el gen se encuentre expresado en la parte del vegetal que es consumida) o por inhalacin
(si el gen se encuentra expresado en el polen).
La prevalencia de sensibilizaciones y alergias frente a alimentos especficos vara entre
pases, dependiendo de la frecuencia y los niveles con los que este alimento es consumido y
en la edad tpica de la integracin en la dieta. Ejemplos de este fenmeno es el uso de
manes en Estados Unidos y de arroz y soja en Japn.
La cantidad de protena presente en un alimento es considerada como un factor

importante en relacin a la alergenicidad. La mayora de las protenas causantes de alergias
presentes en los alimentos se presentan como una fraccin importante en la composicin
del mismo. Se considera que una protena fornea no generar un episodio alrgico si se
encuentra en una concentracin inferior al 1%, aunque algunos alergenos de importacia se
encuentran en dicha concentracin, por lo cual este parmetro no siempre es aplicable.
La cantidad de protena ingerida no debe ser considerada como un factor aislado, sino que
tambin deben considerarse factores como patrones de consumo, frecuencia de consumo y
edad del consumidor.
Alergenos en polen (Taketomi et al., 2006)
La alergia causada por polen se denomina polinosis y es generada por la reaccin cruzada
de anticuerpos de inmunoglobulina E (IgE) con las protenas presentes en polen, de
46
Biotecnologa y OGM
gramneas principalmente. En el caso de transgnicos se debe tener en cuenta en el sitio de

expresin de las nuevas protenas, protenas modificadas y la expresin de las mismas.
Las especies vegetales que causan la polinosis deben ser anemfilas, generar polen en
grandes cantidades y deben estar cercanas a los seres humanos. Estas condiciones se
cumplen con la mayora de los cultivos extensivos de monocotiledneas como maz, trigo,
avena, cebada, centeno y algunos componentes de pasturas como Lolium pratense, Poa
pratensis, Phleum pratense, Dactylis glomerata y Cynodon dactylon.
Los alergenos presentes en el polen son glicoprotenas, los cuales generan una reaccin
con los anticuerpos IgE en cuestin de segundos. Las partculas de alergenos son expelidas
desde el citoplasma del grano de polen por 2 mecanismos:
1. Difunden al estar en contacto directo con la mucosa en un medio isotnico y genera

inmediatamente los sntomas alrgicos en el tejido conjuntivo y la mucosa.
2. En medios hipotnicos (como una gota de lluvia) se hidratan rpidamente y expelen

los materiales alergenos de manera inhalable, induciendo asma.
La liberacin de las partculas alercgenas puede suceder tanto sobre el individuo como en
el medio que lo rodea, pero a diferencia de las alergias causadas por el polvillo atmosfrico,
no se considera adecuado la estimacin de posibilidad de alergias teniendo en cuenta los
niveles de factores ambientales.
Existen 3 factores ambientales que inducen la liberacin de alergenos a partir del polen
hacia la atmsfera:
Alta humedad relativa
Abundantes precipitaciones
Contaminantes (polucin)
Tanto la humedad como las precipitaciones tienden a hidratar los granos de polen y liberar
los alergenos (raramente pueden resultar rotos por shock osmtico). En cuanto a los
contaminantes, se consideran principalmente los generados por quema de combustibles
fsiles como el diesel.
47
Biotecnologa y OGM
Flujo gnico (Squire et al., 1998/99)
La teora del flujo gnico explica de qu manera se unifican las poblaciones, mediante dos
mecanismos. Uno es mediante una fuerza constrictora que acta previniendo la diferenciacin
mediante deriva gnica o adaptacin de una poblacia condiciones locales. El segundo, hace
referencia a un mecanismo creativo que promueve la evolucin colectiva de las poblaciones,
las mutaciones ms propicias que se generan en poblaciones locales deben expandirse a
otras poblaciones a travs del movimiento de las gametas, individuos o grupos de individuos
(Rieseberg & Burke, 2001).
Si consideramos que salvo las plantas transplastmicas o aquellas transgnicas donde la

modificacin no se exprese en polen, la posibilidad de un escape de genes transgnicos de
un cultivo hacia especies no transgnicas est siempre presente y puede considerarse como
polucin gnica.
El movimiento de semillas o genes dentro de ecosistemas fragmentados usualmente

comienzan lento y proceden gradualmente. Slo cuando otorgan una ventaja se evidencian a
nivel poblacional. Los mtodos y tcnicas utilizados para evidenciar este flujo gnico se
agrupan en tres categoras:
1. Los que evidencian que el gen se ha movido de un lugar a otro.
2. Los que miden el efecto de los organismos receptores de los genes en un lugar.
3. Los que otorgan una visin ms amplia de la situacin, a partir de los datos
disponibles por las otras dos categoras.
Para confirmar el flujo gnico es esencial observar la transferencia de material gentico

desde un individuo o grupo de individuos hacia la progenie de otro. Los potenciales donantes
y receptores deben ser tipificados genticamente para buscar caracteres distintivos en sus
ADN. Si el nmero de potenciales donantes es relativamente bajo, se puede rastrear la planta
que gener el polen.
Segn la probabilidad de transferencia, los cultivos pueden clasificarse en tres grupos:

Mnima probabilidad de transferencia a especies silvestres, sea porque stas no
exis ten en el rea o no hay compatibilidad sexual entre el cultivo y su pariente
silvestre.
48
Biotecnologa y OGM
Cultivos con baja probabilidad de transferencia, cuando la compatibilidad sexual

es limitada.
Cultivos con alta probabilidad de transferencia, cuando especies silvestres
sexualmente compatibles crecen en la vecindad del rea sembrada.
Las consecuencias de la transferencia dependen de la capacidad potencial del transgen

para aumentar la aptitud biolgica y conferir ventajas selectivas a la especie silvestre
receptora. De acuerdo con este criterio, tambin se pueden agrupar los genes en diferentes
clases. En la clase I se sitan los transgenes que confieren pequea o ninguna ventaja
adaptativa, como los marcadores de seleccin, genes de androesterilidad o de madurez
retrasada. La clase II, de escasa ventaja adaptativa, comprende genes que pueden conferir
alguna ventaja bajo la adecuada presin de seleccin, como los de tolerancia a herbicidas o
de resistencia a insectos y enfermedades. En la clase III se sitan genes para mejorar el
crecimiento y la supervivencia, que conferiran ventajas adaptativas en cualquier ambiente.
Grupo Cultivo Clase 1 Clase 2 Clase 3

1 Tabaco Bajo contenido de nicotina Tolerancia a herbicidas
Resistencia a
enfermedades
Stress ambiental
Trigo Gluteninas de alto peso Tolerancia a herbicidas

molecular
Calidad de expresin de Resistencia a
genes gus A enfermedades
Protenas de alto
rendimiento
Maz Alto contenido de lisina Tolerancia a herbicidas
Aumento de Acetil CoA Resistencia a

enfermedades
Caracteres agronmicos Resistencia a insectos
Androesterilidad Stress ambiental (sequa)
Composicin de
aminocidos
49
Biotecnologa y OGM
Soja Contenido de aminocidos Tolerancia a herbicidas Alto rendimiento
Alto nitrgeno Resistencia a insectos
Alta lisina
Cualidades alimentarias
Contenido de aceites
Algodn Tolerancia a herbicidas
Resistencia a insectos
2 Papa Tolerancia a herbicidas
Resistencia a
enfermedades
3 Alfalfa Secuencias codificantes de Tolerancia a herbicidas

glucanasa, quitinasa, AP24 y
defensina
Nutracutico: protena virus Resistencia a insectos
fiebre aftosa
Nutracutico: protena VP4
del rotavirus C486
Arroz Tolerancia a herbicidas Aumento de

biomasa
Colza Contenido de fitasa en grano Tolerancia a herbicidas
Frutilla Resistencia a
enfermedades
Girasol Tolerancia a herbicidas Fijacin de N
Resistencia a
enfermedades
Remolacha Tolerancia a herbicidas
Acelga
Tomate Resistencia a
enfermedades
50
Biotecnologa y OGM
En la tabla se indican la clasificacin de las especies transgnicas en Argentina segn la

probabilidad de transferencia del transgen (Grupo 1,2,3) y las consecuencias biolgicas de la
modificacin gentica (Clase 1,2,3). Modificado de Poverene & Ureta, 2004.
Cuando no existen barreras biolgicas al flujo gnico, el escape depende exclusivamente de

factores antrpicos y puede ser prevenido mediante un manejo cuidadoso. La situacin no es
tan simple si se trata de una poblacin silvestre emparentada, ya que depender de las
relaciones genticas con el cultivo, que determinan la probabilidad de hibridacin (Poverene &
Ureta, 2004).
Impacto sobre la biodiversidad (Poverene & Ureta, 2004)
La reduccin de la biodiversidad por causa del uso de cultivos transgnicos es

probablemente la consecuencia ms difcil de visualizar. La erosin o prdida de variabilidad
gentica atribuida al monocultivo o al uso de unas pocas variedades que dominen el mercado
de semillas, no es privativa de los cultivos transgnicos y puede prevenirse mediante una
adecuada planificacin de la agricultura regional.
Por otra parte, algunas especies crecen en ambientes especializados o geogrficamente
limitados como raras especies silvestres o razas locales domesticadas (landraces)
constituyendo reservorios de diversidad gentica de potencial uso en el mejoramiento
gentico.
Cuando crecen en la vecindad de cultivos a gran escala, existe la posibilidad de
cruzamientos naturales y flujo gnico a travs del polen del cultivo hacia la especie local. Esto
puede resultar en una prdida de vigor y fertilidad en los descendientes (depresin por
alogamia) o de identidad gentica por sucesivos ciclos de cruzamiento con el cultivo, de
manera que paulatinamente la especie local se va perdiendo hasta la completa extincin.
El proceso es dependiente de la frecuencia de cruzamiento, la cual a su vez depende de la

cantidad relativa de individuos de cada especie. Nuevamente, el proceso puede evitarse
mediante adecuadas medidas de conservacin y manejo del cultivo.
51
Biotecnologa y OGM
Factores que determinan el escape de transgenes y su impacto ambiental (Poverene &

Ureta, 2004)
La mayor parte de los cultivos actuales est emparentada con una o ms especies silvestres
o malezas, con las que puede hibridar y producir descendientes total o parcialmente frtiles.
Trigo, arroz, avena, sorgo, cebada, maz, soja, girasol, colza, man, poroto, caa de azcar,
remolacha azucarera, algodn, papa, zapallo, frutilla, rbano, zanahoria, vid, trboles y otras
especies cultivadas son objeto de experimentacin biotecnolgica.
El flujo gnico a travs del polen permite la transmisin de caracteres heredables a parientes
silvestres. Si esos caracteres son beneficiosos para la supervivencia o la fertilidad,
aumentarn la aptitud biolgica de las poblaciones recipientes. El intercambio gentico de los
cultivos con sus parientes silvestres es uno de los mecanismos de origen de las malezas
(Keeler,1989; Ellstrand et al.,1999).
Aproximadamente la mitad de los caracteres que determinan invasividad estn controlados
por genes nicos, de modo que existe la posibilidad de que transgenes relacionados con la
aptitud biolgica persistan y modifiquen poblaciones silvestres. Podra resultar que stas se
vuelvan ms abundantes en su hbitat o invadan nuevos hbitat. Tambin podran tener
efectos adicionales sobre poblaciones de insectos o patgenos.
La evaluacin del riesgo de escape de transgenes comprende tres etapas:

1. Investigacin de barreras genticas o geogrficas para el escape del transgen
desde el cultivo hacia las poblaciones silvestres.
2. Investigacin del efecto del transgen sobre la aptitud biolgica de las plantas
silvestres.
3. Investigacin de las consecuencias ecolgicas de la difusin del transgen en la
poblacin silvestre.
Investigacin de barreras genticas o geogrficas para el escape del transgen desde

el cultivo hacia las poblaciones silvestres
Las especies silvestres suelen difundirse desde su centro natural de origen, pero no siempre
estn presentes en la misma rea geogrfica del cultivo. Por ejemplo, la soja (Glycine max) y
su pariente silvestre G.soja conviven naturalmente en China y Corea, donde producen un
hbrido interfrtil, G. gracile, pero no en el resto del mundo. El maz (Zea mays) hibrida con el
52
Biotecnologa y OGM
teosinte (Z.m. ssp. mexicana, Z. diploperennis, Z. luxurians) presente en Mxico, aunque

existe evidencia que muestra que el flujo gnico entre hbridos de maz y teosinte va en la
direccin teosinte-hbrido y no en la direccin opuesta. En la Argentina, estas especies no
conviven con parientes silvestres, mientras que colza, arroz y girasol s lo hacen y pueden
cruzarse con ellos.
El primer paso consiste en el estudio sistemtico de la flora local. An cuando se
encontraran especies silvestres emparentadas, la hibridacin con la especie cultivada
depender de la afinidad gentica que tengan entre ellas, la cual determina desde completa
fertilidad de los hbridos hasta grados variables de esterilidad y an la imposibilidad de
cruzamiento.
Para que la cruza tenga lugar, ambos taxa deben florecer al mismo tiempo y el polen debe
ser capaz de germinar y efectuar la fecundacin. La descendencia suele tener una fertilidad
menor que las especies parentales, pero raramente es por completo estril. La fertilidad
parcial de los hbridos permite la introgresin, la incorporacin estable de genes de una
especie en otra mediante sucesivas retrocruzas de sus descendientes con una o ambas
especies parentales.
Caracteres morfolgicos y fenolgicos intermedios entre la especie cultivada y la silvestre
constituyen un buen diagnstico de hibridacin e introgresin, pero el estudio de marcadores
moleculares resulta invalorable. Este ha demostrado que la mayor parte de los cultivos hibrida
con sus parientes silvestres y que los alelos de las especies domesticadas persisten durante
generaciones en las poblaciones silvestres, an cuando no se adviertan cambios
morfolgicos. Este es el caso del girasol con sus parientes silvestres Helianthus annuus ssp.
annuus y H. petiolaris en Norteamrica. En la Argentina, donde ambas especies silvestres se
han naturalizado, se han encontrado numerosas evidencias de hibridacin e introgresin con
el cultivo en la regin central del pas, tanto por caracteres morfolgicos y fenolgicos como
por marcadores moleculares, constatando adems la fertilidad parcial de los hbridos
mediante estudios del polen y de la produccin de semillas.
En girasol se ha estudiado la transmisin a plantas silvestres de un transgen Bt para
resistencia a lepidpteros y uno de oxalato oxidasa, OxOx que confiere resistencia al hongo
Sclerotinia. En zapallo transgnico (Cucurbita pepo) se estudi la transferencia de la
resistencia a dos virus, ZYMV y WMV2
53
Biotecnologa y OGM
En colza, un aloploide (AACC), la introgresin de tolerancia a herbicidas y androesterilidad

hacia la especie diploide Brassica rapa (AA) sera menos probable si los transgenes que
codifican esos rasgos estuvieran en el genoma C, porque implicara una recombinacin
intergenmica.
Investigacin del efecto del transgen sobre la aptitud biolgica de las plantas
silvestres.
El destino de un alelo en una poblacin depender de su efecto sobre la aptitud biolgica de

los individuos que lo adquieren. Si no tiene efecto alguno en ese ambiente ecolgico, se trata
de un alelo neutro y su destino depender del azar, o sea que su frecuencia en la poblacin
estar sujeta a la deriva gnica y persistir o eventualmente se perder. Si su efecto es
deletreo conducir a una depresin alogmica, con disminucin de la viabilidad y fertilidad de
los hbridos. El efecto nuevamente depender de la magnitud del flujo gnico y cuanto mayor
sea, mayor ser el riesgo de extincin de la poblacin silvestre.
Si el alelo es beneficioso, el flujo gnico acelerar su diseminacin en la poblacin silvestre
y la frecuencia allica aumentar rpidamente, en forma proporcional al movimiento de polen
desde el cultivo a la poblaci silvestre (Ellstrand et al., 1999).
La diseminacin de un transgen en la poblacin silvestre requiere que los hbridos
cultivo/silvestre se reproduzcan en condiciones naturales. Estudios previos de hibridacin
entre cultivos no transgnicos de colza, sorgo, girasol, rbano, poroto y trigo y sus parientes
silvestres han demostrado que no slo lo hacen sino que su aptitud biolgica puede ser
incluso mayor que la de sus progenitores silvestres. En uno de los primeros estudios de
transmisin de un transgen a poblaciones silvestres, se encontr una baja frecuencia de
plantas hbridas de Brassica rapa portadoras de un transgen de colza, considerado neutral y
se concluy que el riesgo de transmisin era bajo.
En tanto, se demostrar que los hbridos entre calabaza transgnica y zapallo silvestre eran
suficientemente vigorosos como para permitir la rpida introgresin de transgenes neutrales y
beneficiosos en las poblaciones silvestres.
En girasol, un transgen beneficioso que confiere resistencia a lepidpteros mediante la
produccin de la protena Bt Cry1Ac, aument considerablemente la fecundidad de las plantas
silvestres recipientes, aunque este efecto vari entre localidades y aos. De acuerdo con
estas observaciones, podra esperarse que el gen Bt aumente la aptitud biolgica de girasoles
silvestres e incremente rpidamente su frecuencia en las poblaciones naturales, debido a que
54
Biotecnologa y OGM
reduce el dao producido por varias especies de insectos herbvoros. Sin embargo, el
transgen OxOx, que confiere resistencia al hongo Sclerotinia, no aument significativamente
la fecundidad de plantas de girasol silvestre, sugiriendo que su diseminacin sera
prcticamente neutral luego de un escape hacia poblaciones naturales .
En Brassica rapa un transgen Bt adquirido por cruzamiento con colza transgnica disminuy
su agresividad como maleza en un 20% comparado con B.rapa no transgnico.
La medicin de la aptitud puede hacerse a travs del porcentaje de germinacin,
supervivencia de plntula, nmero de flores, produccin de semilla, peso de la semilla, etc. y
en cada caso de estudio ser necesario determinar cules parmetros reflejan mejor la
supervivencia y la fertilidad de los individuos.
Los resultados obtenidos deberan indicar la velocidad de diseminacin del transgen y la
probabilidad de que las poblaciones que lo incorporen, adquieran ventajas adaptativas.
En general, las poblaciones silvestres son menos susceptibles a patgenos y plagas que sus
parientes cultivados. Mayor diversidad genotpica, menor densidad de plantas y ausencia de
laboreo son algunas de las causas de esa diferencia. Por ello, un transgen que confiera
resistencia a una plaga o patgeno puede no representar para la especie silvestre una ventaja
tan grande como para el cultivo. Por el contrario, puede representar un costo para la planta
que lo adquiera debido a efectos pleiotrpicos sobre otros caracteres fenotpicos que a su vez
afecten la aptitud.
El beneficio de un transgen asociado a la resistencia a determinada plaga debe ser evaluado
comparando la aptitud biolgica de plantas con el transgen y sin l que hayan sido expuestas
a esa plaga.
El costo de adquirir el transgen debe ser medido comparando la aptitud biolgica de plantas
que lo llevan o no, en ausencia de la plaga. Adems, los caracteres que determinan
supervivencia y fecundidad pueden ser afectados por las condiciones ambientales, por lo que
es necesario estimarlos en distintos ambientes y a lo largo de varias estaciones de
crecimiento. Las diferencias significativas entre plantas silvestres transgnicas y no
transgnicas en cada sitio, entre sitios y entre aos pueden ser probadas para cada carcter
relacionado con la aptitud mediante un anlisis de la varianza.
55
Biotecnologa y OGM
Investigacin de las consecuencias ecolgicas de la difusin del transgen en la

poblacin silvestre.
La teora de la seleccin natural predice que un fenotipo cuya aptitud biolgica sea superior
a la de otros fenotipos de la poblacin, dejar mayor cantidad de descendientes y que si estos
a su vez heredan el genotipo favorecido, su frecuencia aumentar en detrimento de los dems
genotipos. Sin embargo,el impacto ambiental depender no slo de la frecuencia sino del
cambio en las interacciones biticas y abiticas de ese genotipo silvestre en su ambiente. La
prediccin de las consecuencias de un escape de transgenes requiere del estudio de la
alteracin de las interacciones ecolgicas existentes entre las especies.
Un gen de resistencia a insectos o a enfermedades modificar la herbivora o la relacin
husped-patgeno entre la especie silvestre y otras especies de su hbitat, as como un
transgen que favorezca el crecimiento modificar las relaciones de competencia intra e
interespecficas.
Cuanto ms se conozca acerca de la dinmica poblacional de una especie, ms fcilmente
se podr evaluar el impacto ambiental.
En Cucurbita pepo, hbridos entre un cultivar transgnico y plantas silvestres mostraron
amplias variaciones en fecundidad entre aos y localidades, que fueron atribuidas a
condiciones de suelo y clima, densidad de herbvoros, competencia con malezas,
enfermedades y otros factores ambientales
El crecimiento poblacional a travs de la produccin de semilla es uno de los parmetros
ms informativos y es ms probable que sea limitante para especies anuales; por ello,
caracteres que aumenten la produccin o germinacin de semilla tienen un gran efecto
ecolgico. Asimismo, est relacionado con la dispersin, la dinmica del banco de semillas y
la longevidad de las poblaciones. Resultados preliminares en poblaciones experimentales de
girasol silvestre sometidas a flujo gnico de un cultivo transgnico (Bt) indicaron que el
aumento de la produccin de semilla determin mayor nmero de plntulas, mayor
supervivencia hasta la edad reproductiva, mayor nmero de inflorescencias con semilla y
mayor rea total de captulo al ao siguiente.
El incremento en tamao y nmero de las poblaciones silvestres de una especie afectar a
otras especies vegetales del hbitat, cuya frecuencia relativa podra disminuir. El escape de
un transgen Bt de resistencia a insectos a una poblacin silvestre podra tener un impacto
negativo en varias especies de herbvoros, algunas de las cuales pueden ser especialistas,
56
Biotecnologa y OGM
alimentndose con exclusividad de la especie silvestre receptora. Como parte de los estudios
necesarios para la evaluacin del impacto ambiental de eventos Bt, se incluyen estudios del
impacto de estos genes sobre especies no blanco (aquellas que no son las controladas
especficamente por esos genes).
Las toxinas Bt son altamente especficas para determinados tipos de herbvoros
(lepidpteros, colepteros, dpteros) y la disminucin de uno de ellos puede alterar las
relaciones de competencia con los dems. Las relaciones ecolgicas entre herbvoros suelen
implicar un delicado equilibrio demogrfico cuyo colapso podra contribuir a mayores niveles
de infestacin y dao. El uso comercial de cultivos Bt ejerce una presin selectiva que podra
favorecer la seleccin de insectos resistentes a las toxinas, que llevan una mutacin recesiva
de resistencia en condicin homocigota. La descendencia podra heredar los genes de
resistencia y en unos pocos aos, la biotecnologa desarrollada para el control de insectos se
volvera inefectiva.
Para evitar esta situacin se ha ideado la estrategia del cultivo refugio, que consiste en
sembrar una franja de variedad no transgnica junto a la variedad Bt. Los insectos se
reproducen libremente en esa franja, de modo que los raros portadores de resistencia se
mantendrn en una frecuencia relativamente baja en la poblacin total de insectos. La prdida
de la eficacia Bt es actualmente una de las mayores preocupaciones ambientales en relacin
con el uso de biotecnologa agrcola aplicada al control de insectos. Hasta el momento no se
han detectado insectos resistentes en condiciones de produccin a campo de cultivos Bt.
57
Biotecnologa y OGM
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Biotecnologa y OGM

La biotecnologa es la utilizacin de los seres vivos o partes de ellos para obtener o

Se divide en biotecnologa tradicional y moderna.

Podemos describir a la biotecnologa tradicional como el conjunto de tcnicas que

Cultivos resistentes a enfermedades

Fertilizantes y pesticidas biolgicos

Productos de la fermentacin microbiana (por ejemplo, etanol)

Enzimas aplicadas a la alimentacin

Insulina porcina, aislada de pncreas

Diagnstico y control de calidad mediante tcnicas microbiolgicas e

Produccin de plantas y conservacin de especies mediante tcnicas de cultivo

Procesos: Sustitucin y complementacin de procesos qumicos por biolgicos

Catalizadores biolgicos para la industria

Podemos definir a la biotecnologa moderna como:

1) La aplicacin de tcnicas in-vitro de cido nucleico, o

2) La fusin de clulas ms all de la familia taxonmica que superan las barreras

En otras palabras, la biotecnologa moderna surge cuando los cientficos comprendieron

La biotecnologa moderna hoy se entiende como la que utiliza tcnicas de ADN

Produccin de enzimas recombinantes (aditivos alimentarios, frmacos, etc)

Mejoramiento de cultivos por transgnesis y marcadores moleculares

Insulina humana recombinante y otras protenas teraputicas

Produccin de protenas en la leche de animales transgnicos o en plantas

Produccin de otros productos (polmeros para la sustitucin de plsticos, etc)

Con el advenimiento de la ingeniera gentica, surge el trmino organismo genticamente

En el ao 1983 se informaron los primeros experimentos de expresin de un transgen en

En la legislacin argentina vigente se considera y define como organismo genticamente

La insercin en un organismo, por microinyeccin, macroinyeccin, microencapsulacin u

Donde se involucre el uso de molculas de ADN recombinante en fertilizacin in vitro que

Tcnicas y herramientas utilizadas por la biotecnologa.

Hibridacin somtica: se encuentra limitada a especies que tengan buena

Rescate de embriones: en el caso de embriones hbridos que de otro modo

Variacin somaclonal: no ha habido grandes logros. Sera una alternativa para

Transformacin: fundamentalmente para solucionar problemas de calidad, sanidad y

Obtencin de doblehaploides: la haploidizacin es un medio para reducir el nivel de

Propagacin clonal: ha habido intentos de realizar semillas artificiales de alfalfa

De todas las herramientas citadas, la transformacin gentica es la piedra angular para la

Transformacin gentica: una herramienta fundamental para generar OGM

Mediante la tcnica de ADN recombinante es factible introducir en organismos vegetales

Los elementos bsicos que se requieren en trabajos de transformacin gentica son:

1. Un sistema de cultivo de tejidos que permita regenerar plantas completas y frtiles.

3. Un protocolo de transformacin, es decir, un sistema de transferencia de genes y de

El transgen debe ser transferido al interior de la clula.

El transgen debe integrarse al ADN celular.

Se debe generar una planta completa a partir de la clula transgnica en la que se

Cultivo de tejidos vegetales.

Los mtodos de transformacin ms utilizados actualmente se basan en la obtencin de

Construccin del vector.

Para introducir un transgen es necesario que el mismo sea incorporado previamente en un

Un transgen est compuesto por:

Secuencia codificante, que se halla entre los codones de iniciacin y terminacin de

Secuencias regulatorias, que determinan el tejido, la etapa del desarrollo y el nivel de

Para optimizar la expresin del transgen es necesario reemplazar las secuencias

Dentro de los promotores, se distinguen:

Constitutivos, que permiten la expresin del gen en toda la planta de manera

Inducibles, que responden a factores ambientales. Ejemplos: subunidad pequea de

Especficos de tejido, que permiten la transcripcin solamente en determinados

Los mtodos suelen dividirse en base al medio de transformacin:

A. tumefaciens causa la enfermedad conocida como agalla de la corona, y se evidencia

La capacidad patognica de las bacterias est asociada a la presencia de megaplsmidos

Agrobacterium tumefaciens usa la respuesta de la planta a las heridas (cicatrizacin y

Los plsmidos Ti sin oncogenes se denominan desarmados, son de gran tamao y

Ms de 600 especies vegetales son hospedantes naturales de A.tumefaciens siendo la

La transformacin con Agrobacterium rhizogenes tiene fundamentalmente dos

Transformacin directa o por mtodos fsicos: inicialmente esta tecnologa se desarroll