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BOVINOS
INTRODUCCION
La ganadera moderna es el resultado del esfuerzo de dos grupos pioneros, el cientfico investigativo,
quien ha desarrollado procesos y tcnicas reproductivas y el comercial, el cual ha adaptado estas
tecnologas a la practica y su aplicabilidad en la industria, hacindolas viables econmicamente.
Los avances logrados en las diferentes investigaciones sobre Biologa Molecular, Fisiologa de los
Factores de Crecimiento, Fisiologa de la Dinmica Folicular, ha permitido una mayor comprensin de la
Fisiologa Reproductiva y un mejor manejo de las Ondas Foliculares durante el ciclo estral, en las
distintas especies.
En este Manual de Biotecnologa Reproductiva en Bovinos se tratarn los principales aspectos de las
Tcnicas de Reproduccin Asistida, si bien no con la profundidad cientfica de cada una de ellas, si desde
un punto de vista prctico, para su implementacin y aplicacin en la ganadera Colombiana, por parte de
los Profesionales. Cada captulo ser revisado y actualizado periodicamente, con el fin de incluir los
avances logrados en cada uno de los temas expuestos.
Cada tcnica desempea por si misma un papel importante y ha sido la base para el avance y desarrollo
de otros procedimientos ms complejos, partiendo de la investigacin y su aplicabilidad en la Industria
Animal y la Medicina Humana.
Algunas han sido aplicadas y difundidas de manera amplia, con resultados satisfactorios. Sin embargo,
otros no lo han sido tanto debido a su complejidad y altos costos de implementacin, por lo que estn an
en el campo de la investigacin.
Todos los programas de Biotecnologa Reproductiva tiene como finalidad el aumento de la produccin y
productividad en cada especie, a travs del mejoramiento gentico, la reduccin del intervalo
generacional, el aumento de la eficiencia reproductiva y la conservacin de las especies en vas de
extincin.
Puesto que el manejo reproductivo del hato est influido por diferentes y variados factores tales como
Raza, Nutricin, Sanidad, Medio Ambiente, cada uno de estos debe analizarse antes de implementar
cualquier programa de Reproduccin Asistida, con el fin de lograr los mejores resultados tanto
productivos como econmicos.
Los nuevos conocimientos adquiridos sobre la dinmica folicular, mediante el empleo de la ecografa y la
utilizacin de hormonas para la manipulacin del ciclo estral, son herramientas que permiten implementar
de forma prctica la utilizacin de estas biotecnologas por parte de los ganaderos.
Fue a partir de los aos 40s poca en donde la IA tuvo su mayor auge debido a la aplicacin del mtodo
rectovaginal de fijacin cervical, la utilizacin de pajillas plsticas selladas para el empaque del
semen (SORENSEN), el empleo de la pistola de inseminacin diseada por CASSOU, la incorporacin
de la yema de huevo y crioprotectores que hicieron posible la congelacin del semen, adems del diseo
de la vagina artificial para la recoleccin de semen (MILOVANOV).
Sin embargo, este aumento en la produccin conllev a una disminucin de la fertilidad del hato,
manifestandose en una mayor incidencia de anestros postparto, demora en la reiniciacin de la actividad
ovrica y ampliacin de los parmetros reproductivos, lo que se refleja en una disminucin de preeces al
ao.
En 1972 con la aparicin de la PGF2 ROWSON et al, propusieron su administracin para sincronizar
celos, debido a su actividad luteoltica. Los resultados obtenidos han sido muy variables, dado que debe
contarse con un buen sistema de identificacin de calores.
Paralelamente al manejo del ciclo estral y con el fin de lograr la reduccin del intervalo
generacional, se logr el primer nacimiento de un ternero por Trasferencia de
Embriones TE, en la Universidad de Wiscounsin 1951 (WILLET). A finales de los aos
60s se logra establecer los protocolos de superovulacin, medios de cultivo,
recuperacin quirrgica y trasplante de embriones (ELSDEN). Estos procedimientos
fueron la base para el establecimiento de la industria de TE en los aos 70s.
Inicialmente la trasferencia se realiz por va quirrgica mediante incisin del flanco del
mismo lado del CL, colocando el embrin en fresco, dentro de la luz en la punta del
cuerno, mediante una pipeta de 20 unida a una jeringa de 1 ml que contena el embrin
en un medio elaborado para el efecto. En 1986 se comenz a utilizar la trasferencia no
quirrgica utilizando una pistola con aperturas laterales, similar al de IA con una mayor
longitud. Los mejores resultados se obtuvieron al trasferir embriones al sincronizar el
celo entre donante y receptora.
Con el fin de reducir el intervalo generacional se logra el nacimiento del primer ternero
producido totalmente por Fertilizacin In Vitro FIV en 1987 (FUKUDA). Posteriormente en
1988 se desarroll la tcnica de Aspiracin Folicular Trasvaginal mediante el empleo
del ecgrafo, la cual se ha convertido en la tcnica de recoleccin de oocitos
provenientes de vacas vivas, denominada as mismo Ovum Pic-Up
OPU (PIETERSE). Recientemente se han llevado a cabo diferentes estudios tendientes a
determinar la programacin y frecuencia de OPU con y sin estimulacin con
FSH. (CHAUBAL - DE ROOVER)
Por ser un proceso poco invasivo, la FIV es la tcnica de reproduccin asistida con
mayor futuro as como de mayor aplicacin en vacas de alta produccin con problemas de fertilidad y
en especies en vas de extincin. A manera de ejemplo, en Canada de una produccin total de de 287
embriones por FIV en 2004 se paso a 4453 en 2012; En Estados Unidos en tres de las principales
compaas que ofrecan este servicio, de una produccin total de 2078 embriones en 2004 se lleg a
40602 de 8689 de OPUs en 2011. Trans Ova genetics una de las empresas productoras de embriones In
Vitro tiene proyectado para 2013 15.000 OPUs con una produccin de 70.000 embriones.
Todos los programas de FIV en Norte Amrica incluyen la estimilacin de las donadoras con FSH y OPU
efectuada cada 14 das, con resultados en Trans Ova Genetic de 18 a 20 oocitos recolectados por OPU,
con un 25% de blastocistos desarrollados. En contraste con el Brazil, en donde la mayora de las
donantes Bos Indicus se caracterizan por un gran recuento de folculos ovaricos, que no reciben FSH y
OPU es efectuada semanalmente. (HASLER)
Paralelamente se han implementado tcnicas de sexaje de semen y embriones. El sexaje de semen est
disponible comercialmente desde principos de 2006 mediante la tcnica de Citometra De Flujo, basada
en las diferencias existentes entre los cromosmas X de la hembra y Y de los machos. Consiste en pasar
el fludo que contiene el semen, previamente teido, por un detector laser de fluorescencia, que
proporciona una longitud de onda correcta de la luz, sin causar dao del DNA. El equipo de sexaje de
semen tiene una precisin de 90% (Clasificador de espermatozoides MoFlo 1 SX(DakotaCytomation, Fort
Cllins,CO), operado a 50 psi). (SEIDEL y GARNER)
Los Laboratorios MINITUB han desarrollado la tecnica SEX-Y que contiene un marcador molecular
especfico, conocido como Bov-Y, el cual reconoce una posicin en el Cromosoma Y bovino. Para
identificar el sexo del embrin se realiza una biopsia. Las clulas extradas son tratadas con el marcador
Bov-Y. Si el embrin corresponde al sexo masculino, el el marcador rodea al ADN del Cromosoma Y,
generando una luminosidad florescente que se puede observar como un punto ntido y claro con el
microscopio de fluorescencia. Si en cambio, se trata de un embrin femenino, est ausente el
Cromosoma Y, no se produce la fijacin del marcador Bov-Y y no se genera la seal
fluorescente (MINITUB)
Gracias al ecgrafo se logr una mayor comprensin de la dinmica folicular y el comportamiento de las
ondas foliculares en bovinos. Debido a que unas de las limitantes para el empleo de la IA en vacas en
pastoreo son la deficiente deteccin de celos, anestro posparto y pubertad tarda, se desarrollaron
protocolos tendientes a obtener la sincronizacin de la ovulacin, tcnica que permite inseminar un mayor
nmero de hembras en un perodo ms definido, sin la necesidad de detectar los animales en celo, la
cual se ha denominado Inseminacin Artificial a Tiempo Fijo IATF.
Figura 2
Ecografa de los miembros anteriores (MA), miembros posteriores (MP), cordn umbilical (CU) y cola (C)
de un feto bovino de 60 das. El tubrculo genital (TG) est localizado entre los miembros posteriores en
el feto macho y caudal a los miembros posteriores adelante de la cola en el feto hembra.
En la yegua ha permitido determinar la movilidad del embrin dentro del tero, mientras es esfrico (6-16
mm), durante los das 10 a 15 de gestacin; de que manera en una gestacin gemelar un embrin
elimina al otro sin que se lesiones as mismo; la aglomeracin de la granulosa del folculo ovulatorio en el
polo opuesto al futuro sitios de ruptura como sntoma de ovulacin inmediata.
La Figura 3 muestra el proceso de reduccin de uno de los embriones de gestacin gemelar con
fijacin en el mismo cuerno uterino. En el da 17 la gruesa pared vascular (lnea amarilla del saco vitelino
del embrin a desaparecer (SV2) es forzado por las contracciones uterinas dentro de la pared vascular
del saco vitelino del embrin a desarrollarse (SV1).
El rea vascular (linea roja) de SV1 est en contacto con el endometrio. En el da 29 la pared vascular del
embrin a desaparecer est bloqueada desde el endometrio.
Otra aplicacin importante de la ecografa es la aspiracin folicular dentro del proceso de Fertilizacin In
Vitro FIV. (Figura 4).
Igualmente estudios realizados con ecografa Dopler a color han mostrado la perfusin
vascular del endometrio luego de que el embrin equino se desplaza entre los cuernos
uterinos y la expansin del alantocrion en cada uno de los cuernos en bovinos. En las
novillas ha permitido observar el incremento y descenso del flujo sanguneo durante el
pulso de PGF2.
En la actualidad
esta labor ha sido asumida por productores de razas puras y Centros
De Reproduccin Asistida, quienes han logrado la adaptacin de nuevas razas
a un medio tropical clido, humedo, hostil como el campo Colombiano.
Se puede observar como la reproduccin Asistida ha ganado aceptacin dentro del gremio Cebuista con
un incremento en la FIV.
Lo anterior nos hace concluir que la Fertilizacin In Vitro ser la tcnica que tiene
ms futuro, dada su baja
invasividad, la mayor vida til reproductiva de las donantes y por lo tanto la de
mayor posibilidad de extraccin de clulas germinales para ser fertilizadas.
Si bien estos datos corresponden a la especie Bos Indicus en Colombia, los por
centajes en las razas Bos Taurus deben ser ms notorios, pues los resultados d
e las diferentes investigaciones confirman que esta especie responde mejor y de
BIBLIOGRAFIA
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MARZO - ABRIL 2013
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TRIBULO H: Impacto Econmico De La Biotecnologa Revista Gentica Bovina N 8. Mayo Junio 2008
Pag 8-9
SANIDAD
La mayor positividad corresponde a IBR con 69%, seguida de la Leptospirosis con 46%
Estas enfermedades se manifiestan por un alto ndice de merte embrionaria o abortos, los cuales pasan
desapercibidos por parte del ganadero. Se da el caso de hembras diagnosticadas cargadas a los 90 das
por palpacin y confirmadas por ecografa, que luego de un tiempo se observa que la gestacin no
progresa o entran en celo y al realizarseles los exmenes de laboratorio correspondientes dan
positivas a una de ellas
Tabla 3. Plan Sanitario recomendado para el control de las diferentes enfermedades que ms inc
idencia tienen en el hato Colombiano.
superiores para que sean los padres o madres de la futura generacin, lo que i
mplica descartar como reproductores aquellos que no cumplan con los parmetro
s establecidos como ptimos, tanto por las Asociaciones respectivas, como por e
l ganadero en su hato.
Esto se ha obviado en parte por la produccin de hembras y
machos puros adaptados a nuestras zonas de clima clido.
Un animal puede tener la mejor gentica pero mal nutrido no la puede trasmitir.
De acuerdo con el Dr Ricardo Sandino Pardo La Raza Entra Por La Boca,
lo cual confirma la estrecha relacin entre estos dos factores.
Despus del parto, las altas demandas de nutrientes requeridos para la sntesis de
grandes volmenes de leche, la limitada capacidad de consumo de alimentos y las
inadecuadas concentraciones de nutrientes; conducen al Balance Energtico Negativo
(BEN). Esta condicin determina una respuesta compensatoria (homeorresis) que
incluye el tejido adiposo, el hgado, los msculos y los huesos. (BATISTA)
La mala Condicin Corporal (CC) al parto tiene un significativo impacto negativo sobre
la probabilidad de concepcin, la tasa de prdida embrionaria y la proporcin de
animales en anestro. Al estar en esta etapa, las vacas deben movilizar grandes
reservas grasas, pero tambin algunas reservas proteicas, aumentando la incidencia de
desrdenes metablicos como fiebre de leche, acidosis, acetonemia, hgado graso y
desplazamiento del abomaso. La fiebre de leche y la acetonemia afectan las
contracciones uterinas, retrasan el parto, aumentan el riesgo de retencin de
membranas fetales (RMF) y por consiguiente desarrollo de endometritis. Las hembras
que llegan gordas y/o sobre-alimentadas al parto, son las que se convierten en vacas
problema cuando se presenta el BEN (RUKKWAMSUK)
En el Grfico 4 observamos que la sobrealimentacin de la vaca lechera antes del
parto retrasa la primera ovulacin espontnea posparto. Lo anterior implica que la alta
CC al parto se considere peor que la CC baja, porque las vacas con alta CC
comen menos despus del parto, tienen menos apetito y movilizan ms fcilmente
energa de las reservas corporales, siendo ms propensas a sufrir grandes cambios en
su CC.
Adems, la CC alta parece ser uno de los factores nutricionales de riesgo que causan
hipocalcemia y deficiencias en vitamina E, Selenio y como consecuencia estos
desrdenes metablicos predisponen a las vacas a patologas ginecolgicas post-parto,
de las cuales la endometritis es la ms importante. Los factores de riesgo para la
endometritis post-parto son hipocalcemia y retencin de placenta. En resumen, las
vacas que son capaces de mantener la misma CC (ya sea baja o alta) tienen mayor
probabilidad de xito reproductivo que las que tienen fluctuaciones en la CC. (SMITH)
Los pastizales renovados y bien mantenidos permiten que el ganado disponga de un alimento
de buena calidad durante cualquier poca del ao.
Es importante tener en cuenta cuales son los pastos regionales adaptados a la zona y el anli
sis de suelo, antes de introducir pastos que son exigentes en agua y a un tipo de suelo en
especial.
No hay que olvidar que el pasto debe manejarse como un cultivo convencional cualquiera.
En perodos de lluvia o de sequa. extremos hace que se pierda el adelanto, tanto en producci
n de leche como en peso corporal, logrados en perodos de niveles pluviomtricos considerados
normales.
Por lo anterior es recomendable implementar un sistema de alimentacin suplementario
como el silvopastoril, los bancos de protena o el
ensilaje, que nos permita suplementar o suministrar un alimento de calidad uniforme durante c
ualquier poca del ao y
mantener un buen estado corporal del animal, en especial si est dentro de un programa de Re
produccin Asistida.
Una hembra cebada con ovarios engrasados presenta anestro y baja fertilidad
CC 4.0
CC 2.5
MEDIO AMBIENTE
La primer respuesta que se produce en el bovino expuesto a altas temperaturas es un aumento del ritmo
respiratorio, seguido de aumento de la temperatura corporal. Al aumentar la frecuencia respiratoria
aumenta la ventilacin de las vas areas, y por tanto, favorece la evaporacin de esas superficies
hmedas, entre las que figuran, lengua, boca y vas nasales. Como consecuencia del enfriamiento de
estas superficies, se enfra la sangre que fluye por las mismas.
Al evaluar el efecto del calor sobre los folculos de mayor tamao en vacas lecheras
lactantes, se observ una disminucin en el desarrollo del folculo dominante de la
primera onda folicular y la prdida de dominancia del mismo, ya que se ha observado
que en vacas con estrs calrico se mantiene el nmero de folculos medianos, durante
el perodo de dominancia de la primera onda folicular, en comparacin con vacas en
termoneutralidad .
Los machos tambin son afectados en su eficiencia reproductiva por el efecto de stress
calrico provocando disminucin de la libido, disminucin de la calidad y
volumen del eyaculado e incrementarse el nmero de
espermatozoides muertos.(COUBROGH)
BIBLIOGRAFIA
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FACTORES QUE AFECTAN LOS RESULTADOS DE LA
REPRODUCCION ASISTIDA
Adems de los Aspectos Generales Que Afectan La Reproduccin, debemos tener en cuenta aquellos
que interfieren o afectan los resultados de las Tcnicas de Reproduccin Asistida. (Tabla 1)
INSTALACIONES Y PERSONAL
Figura 1 Instalaciones y Personal
Para el manejo reproductivo de los animales del hato, se debe contar con instalaciones y construcciones
bsicas y adecuadas, que faciliten la movilidad de los animales y la comodidad de los operadores, para
realizar las labores de rutina de manera segura, rpida, eficiente y confortable, con el menor estrs para
los animales, dentro de las denominadas Buenas Practicas Ganaderas.
Esas instalaciones comprenden los corrales, calceta, brete, palpadero, bscula, baadera, sala de
ordeo, salacunas, paritorio, embarcadero.
Igualmente debe contarse con potreros debidamente cercados, comederos, saladeros, y bebederos que
permitan la suplementacin nutricional adecuada y separacin de los lotes de acuerdo a la produccin y
estado reproductivo, facilitando su observacin y manejo (Figura 2)
El personal debe ser instruido de manera clara sobre sus labores, para trabajar en equipo con el fin de
lograr el mejor rendimiento posible de la explotacin. Es importante que todo el personal de la finca est
en capacidad de identificar correctamente una hembra en celo, principal limitante de la Inseminacin
Artificial. Igualmente se debe capacitar o reentrenar al personal encargado de efectuar labores tcnicas,
segn los avances y modificaciones que se vayan presentando en la evolucin de las mismas. (Figura 3)
As mismo se les debe informar sobre los diferentes mecanismos de las distintas tcnicas de
Reproduccin Asistida, de tal manera que se sientan parte de la ejecucin y participen activamente en la
consecucin de los objetivos programados.
Los principales lotes dentro del manejo reproductivo del hato, se refieren a novillas de vientre, vacas en
ordeo, vacas con cra al pie, vacas secas, vacas horras, vacas proximas.
En el Grfico 1 se puede apreciar que no se presenta diferencia significativa en el porcentaje de preez
entre novillas y vacas con cra, mientras si la hay con relacin a vacas secas. (CUTAIA)
Esta diferencia de porcentajes de preez entre vacas secas y vacas con cra y novillas puede deberse
al hecho de que el lote de vacas seca incluye vacas vacas por problemas nutricionales o por ser de baja
fertilidad.
En conclusin se debe tener en cuenta ste parmetro al seleccionar el tipo de protocolo a aplicar al lote
seleccionado para el programa de IA a implementar.
CICLICIDAD
La ciclicidad se determina por la presencia de estructuras ovricas palpables y/o identificables por
ecografa como Cuerpo Lteo o Folculo, as como por el aumento de tamao y tonicidad del tero.
Hay que tener en cuenta que en algunas hembras no se aprecian estas estructuras, pero el tero y en
especial los cuernos se encuentran trgidos, enroscados y con tono, lo que indica funcionalidad ovrica,
puediendose tratar de la presencia de CL intraestromal, por lo que se debe confirma por ecografa. No
olvidar que el tero es el rgano blanco de las hormonas ovricas.
Las hembras anestricas son aquellas que no presentan estructuras palpables o estas son de tamao
pequeo a la palpacin o poco apreciables a la ecografa, adems el tero se encuentra flcido.
Grfico 2.- Las hembras cclicas presentan mayor porcentaje de preez con respecto a las vacas
anestricas. (CUTAIA)
Teniendo en cuenta estos dos factores se sugiere que el profesional efecte una evaluacin y medicin
de las estructuras del tracto reproductivo, en el tipo de hembras con las cuales va a trabajar y obtenga un
rango de aceptabilidad funcional, dada la gran variabilidad de estas debidas a condiciones de raza,
nutricin, condicin corporal y manejo existentes en cada una de las explotaciones que labora.
De igual forma le permitir tener una idea ms clara del protocolo hormonal a emplear en determinado
momento, con el fin de manipular adecuadamente el estro en programas de Reproduccin Asistida.
Luego de su utilizacin se deben limpiar rigurosamente con agua y desinfectados con solucin una
solucin bactericida. Deben mantenerse en sus bolsas plsticas metalizadas con el objeto de evitar su
exposicin a la luz solar y el calor, de tal manera que por evaporacin pierda el contenido de
progesterona y por consiguiente su efectividad posterior.
Las perdidas del dispositivo intravaginal, en especial los reutilizados, hace que los costos sean mayores y
los resultados esperados sean menores
Dentro de los puntos a tener en cuenta en el manejo de los dispositivos intravaginales se recomiendan
los siguientes (Figura 4)
CALIDAD SEMINAL
El semen al ser congelado sufre una serie de procesos que pueden alterar su calidad inicial. Muchas
veces un semen de alta calidad al momento de la congelacin termina siendo de calidad media o baja al
ser descongelado. De aqu la importancia de evaluar el semen luego de su descongelacin.
Sin tener en cuenta la complejidad de los procesos biolgicos que ocurren dentro de la clula
espermtica, la congelacin es un proceso de deshidratacin celular, que comprende la cristalizacin del
agua la cual ocurre entre los -3 y -45C. Una vez se completa la cristalizacin sucede un fenmeno
similar, la recristalizacin, que consiste en el crecimiento de grandes cristales de hielo a expensas de los
pequeos cristales. Este proceso se presenta cuando el descongelado es lento. Aunque el punto de
congelacin celular est por debajo de los -10C, las clulas permanecen sin congelarse hasta los -15C.
Durante la congelacin las clulas comienzan a equilibrarse con el medio debido a la prdida de agua
intracelular. Esta deshidratacin produce una disminucin de la presin intracelular y un incremento en la
concentracin del soluto.
Por lo tanto, la congelacin lenta le permitir a la clula mantenerse en equilibrio con el medio exterior.
Es por eso que a los -10 o -15C la cantidad de agua intracelular es muy poca. Una congelacin muy
rpida no permite ese intercambio y por consiguiente a los -10C la clula posee mucha agua intracelular.
De todas maneras durante la congelacin las clulas pierden agua y hay un aumento de la concentracin
del crioprotector intra y extracelulares.
Las clulas congeladas a temperaturas por debajo de la velocidad crtica son destruidas por una
exposicin prolongada al crioprotector. A medida que se va congelando el agua del crioprotector, el
medio se vuele hiperosmtico con respecto a las clulas y produce su muerte.
Las clulas congeladas a velocidades por encima del valor crtico tienen un perodo de tiempo
insuficiente para el intercambio osmtico y por tal razn no pueden expulsar la totalidad del agua
intracelular, formndose los cristales de hielo dentro de la clula ocasionando su muerte.
Tabla 4.- Mecanismos por los cuales se causa dao celular durante la congelacin del semen
El glicerol adicionado al diluyente del semen al reducir la concentracin de electrolitos en el agua
residual no congelada, dentro y alrededor de la clula, tiene un efecto protector sobre la superficie
celular.
El punto crtico durante la congelacin y la descongelacin est entre los -10 a -50C, por lo tanto es
importante atravesar esta zona rpidamente. Se ha comprobado que la descongelacin rpida tiene
mejores resultados que la lenta.
Para evaluar la calidad seminal se han diseado diferentes protocolos , los cuales contemplan la
motilidad y la morfologa espermtica, junto con otros parmetros como la integridad del acrosoma,
cocentracin, microbiologa, propiedades quimicas y bioquimicas, as como la viabilidad in vitro o in vivo.
La evaluacin de la motilidad y morfologa se lleva a cabo con la ayuda del microscopio o por medio
microfotografa y contadores electrnicos computarizados. La observacin directa es el mtodo ms viejo
y ms utilizado dada su facilidad de diagnostico y su bajo costo. Sin embargo tiene la desventaja de ser
una medicin subjetiva y altamente influenciada por el evaluador, por lo que debe ejecutarse con sumo
cuidado y de manera ordenada, con el fin de evitar errores de evaluacin. Ocasionalmente ha sucedido
que toros campeones del ms alto pedigree producen semen no satisfactorio.
La evaluacin del acrosoma es un factor importante dado que las enzimas que contiene
son vitales para la penetracin de la zona pelcida por parte del espermatozoide, durante el proceso
de fertilizacin.
Para ello se coloca una gota de semen de 2 a 4 mm sobre un portaobjeto e igual cantidad de
glutaraldehido al 0.2% diluido en buffer fosfato salino. El glutaraldehido detiene el movimiento celular y
previene el dao celular. Se agrega una gota de eosina-nigrosina. La extensin se observa al
microscopio de contraste de fase y se cuentan 100 clulas. (BO)
En resumen es imperioso evaluar la calidad del semen con que vamos trabajar antes de la
implementacin de cualquiera de las tcnicas de Reproduccin Asistida, la cual debe ser Muy buena o
Excelente.
Una vez se seleccionen las hembras teniendo en su CC, ciclicidad, tamao y desarrollo del tracto
reproductivo, funcionalidad ovrica etc, se distribuyen los lotes para la aplicacin del protocolo ms
adecuado a sus condiciones reproductivas, con el fin de lograr los mejores resultados. La finalidad de las
tcnicas de Reproduccin Asistida es la de lograr el mayor nmero de animales gestantes por ao y no el
mayor nmero de inseminaciones por hora
FACTORES VARIOS
En la Tabla 7 se resumen los puntos ms relevantes a tener en cuenta para lograr los mejores
resultados en las tcnicas de Reproduccin Asistida.
BIBLIOGRAFIA
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CUTAIA L.- ESTADO DEL ARTE EN IATF: FACTORES QUE AFECTAN SUS RESULTADOS 2003
CUTAIA L.- INSEMINACION ARTIFICIAL A TIEMPO FIJO (IATF): UNA HERRAMIENTA PARA EL
MEJORAMIENTO GENETICO.2006
Para obtener un adecuado manejo del ciclo estral es indispensable controlar el crecimiento folicular, la
regresin del CL y la ovulacin del folculo dominante.
En el Grfico 1 se especifica cual es el papel que desempea cada una de las hormonas en el control de
la dinmica folicular.
Dentro de las diferentes tcnicas de manejo del ciclo estral tenemos la Induccin y Sincronizacin del
celo e Inseminacin A Tiempo Fijo.
Uno de los principales problemas a enfrentar es el anestro postparto y con tal finalidad se han
recomendado varios protocolos tendientes a inducir la reiniciacin de la actividad ovrica, dentro
del espacio de tiempo denominado Perodo de Espera Voluntario -PEV- para que la hembra quede
gestante entre los 60 - 100 das postparto.
Es necesario por consiguiente que la hembra entre en un BEP en el postparto donde gane peso, por lo
que una dieta rica en energa en el preparto permite una mejor CC al parto y por lo tanto al postparto.
Junto con el mejoramiento de la nutricin se han administrado vitaminas y minerales por va parenteral o
en la sal de consumo, as como productos yodados que estimulen por irritacin la actividad ovrica.
Igualmente se han logrado resultados similares con la administracin de Calfosvit, como inductor de celo
en el postparto.
Grfico 3
Otros autores han comparado la administracin de minerales con el masaje ovrico, como inductores de
celo en vacas postparto.(COREA)
Sin embargo, no existe un tratamiento en particular para el anestro postparto que pueda recomendarse
inequivocamente para todos los hatos. Con esta consideracin presente, los tratamientos para el anestro
postparto deben estar dirigidos a aumentar la frecuencia de pulsos de LH y permitir que los folculos
alcancen las etapas finales de maduracin.
Las vacas ceb en pastoreo han mostrado que retornan al celo en un perodo dramticamente ms
temprano que las vacas amamantando a voluntad, cuando se manejan programas de amamantamiento
restringido o destete temporal. De otra parte, se logr disminuir el perodo parto-primer celo en vacas de
primer parto con ternero al pie de 168 a 69 das en aquellas que se manejaron con amamantamiento
una vez al da. (BO)
SINCRONIZACION DE CELOS
Siguiendo un orden cronolgico de los diferentes modelos de control del ciclo estral, CASIDA propuso la
utilizacin de progestgenos con el fin de bloquear la funcin reproductiva y observ que al suspender la
medicacin buena parte de las hembras presentaron sntomas de celo. A raz de haber determinado la
actividad luteoltica de la PGF2, ROWSON 1972 propuso su empleo como agente sincronizador de
celos. En la actualidad se encuentran disponibles en el mercado diferentes preparados a base de estas
hormonas, con el fin de sincronizar celos e inseminar un mayor nmero de hembras en un menor tiempo.
PROGESTAGENOS
Varios estudios demuestran que los progestgenos tienen la capacidad de inducir la cilcicidad en vacas
en anestro, siendo la nutricin y el amamantamiento los factores que ms influyen en el reinicio de la
actividad ovrica, concluyendose que ste ltimo es el de mayor impacto en la inhibicin del eje
hipotlamo-hipfisi-ovario. Por tal razn se han desarrollado protocolos que combinan el empleo de
progestgenos y el destete temporal para lograr un mayor ndice preez en ganado de carne con ternero
al pie.
IMPLANTE AURICULAR
Cerca de un 90% de las hembras entran en celo dentro de los 5 das siguientes a su retiro.
La inseminacin se realiza al celo detectado CD luego del retiro del implante o IATF entre las 50 y 56
horas de su retiro. Se pueden efectuar dos inseminaciones luego del retiro del implante a las 46 y 72
horas, segn el protocolo recomendado por Intervet.
SCENA utiliz el
protocolo CRESTAR adminsitrando Folligon el da de las IATF, junto con Destete Temporal, mediante
enlatado del ternero durante 11 das y lo compar con el protocolo CRESTARsolo, DT solo y vacas
control sin tratamiento alguno.
Todos los tratamientos permanecieron con toro durante 43 das.. Diagnstico de gestacin por ecografa
a los 45 das. Los resultados se muestran en la Tabla 1. Se puede apreciar la influencia del DT en asocio
con el tratamiento CRESTAR.
En otro estudio se concluy que los implantes auriculares nuevos y de segundo uso, generan ndices
similares de presentacin de celos. As mismo, los porcentajes de preez son mayores en vacas
ciclando frente a vacas en anestro.(URIBE)
5.- Aparte la cola del animal a un lado y limpie la vulva con toalla absorbente.
6.- Abra los labios vulvares y deslice el aplicador haca arriba en ngulo.por encima de la pelvis y empuje
hasta sentir un poco de resistencia.
7.- Presione el embolo del aplicador para depositar el dispositivo y luego retire suavemente el aplicador.
8.- Si sobresale mucho el cabo del dispositivo se puede recortar para que solo sobresalga un poco y
evitar que otros animales curiosos lo extraigan.
9.- Para retirar el dispositivo 7 das despus basta con halar el cabo suave pero firmemente.
10.- Lave y desinfecte el dispositivo si lo va a reutilizar y coloquelo en recipiente sellado
El Grfico 5 muestra el protocolo recomendado para sincronizar celos con DIV e Inseminacin
Artificial convencional a Celo Detectado.
El Grfico 7 muestra que los niveles de P4 en vacas ovariectomizadas son similares cuando se aplican
DIV con diferentes dosis de P4. Por lo anterior la aplicacin de uno u otro no influye significativamente en
los resultados de sincronizacin de celos. (AVILES)
En el Grfico 8 se observa que los niveles sanguneos de P4 liberados al aplicar DIB de 0.5 gm, son
similares a los DIB de 1.0 gm. Sin embargo, la aplicacin de DIB de 1.0 gm usados, liberan una
cantidad insuficiente de P4, por lo que no sera recomendable su empleo en vacas en lactancia (CUTAIA)
La Tabla 2 muestra que mediante la utilizacin de DIB nuevos o usados conteniendo 1.0 gm de P4 o
DIB nuevo de 0.5 gm de P4 en programas IATF se obtienen resultados similares de preez. Sin
embargo el DIB de 0.5 usado origina porcentajes menores de preez, por lo que no sera factible su
reutilizacin. (BO)
Tabla 3.
Los S.C. estuvieron dentro de los valores ptimos 1.3 - 1.5. Tampoco hubo diferencia significativa en la
Tasa de Concepcin -T.C-. 50 y 52%.
Estos resultados indican que la decisin de escoger un protocolo u otro, depender del criterio del
profesional y el factor econmico.
PROSTAGLANDINAS
El descubrimiento de las prostaglandinas y su efecto luteoltico en los aos 70, constituy un grave
avance en el conocimiento de la fisiologa y la manipulacin del ciclo estral, en las diferentes especies
animales. Son derivados del cido linoleico y araquidnico, producidas en diferentes rganos, siendo
bajos sus niveles sanguneos debido a su degradacin rpida, especialmente en el pulmn.
Debido a la dificultad de aislar la PGF2 natural en cantidades comerciales, las empresas farmacuticas
consiguieron elaborar PGF2 sinttica de idntica composicin a la natural y anlogos sintticos de
PGF2 con la porcin activa de la hormona ms no del resto de la molcula, siendo su accin ms
potente a menor dosis, dependiendo del anlogo.
Tabla 4
Los estudios realizados permitieron determinar que la PGF2 acta solamente sobre un CL funcional a
partir del da 5 hasta el da 17 del ciclo, momento en el cual el CL entra en regresin natural, por lo que
la administracin de PGs entre el da 17 y el da 5 del ciclo siguiente no tiene efecto alguno sobre la
duracin del ciclo estral. La receptividad del CL a las PGs aumenta a partir del da 6 del ciclo estral.
Con la aplicacin de estas tcnicas ecogrficas en los aos 90, se hizo claridad sobre la dinmica
folicular y la influencia que sobre la misma tena la PGF2, se lleg a la conclusin que el intervalo entre
su aplicacin hasta la ovulacin dependa del grado de desarrollo del CL y del folculo
dominante (KASTELIC)
Resumiendo: La administracin de una dosis de PGF2 produce la regresin del CL en la mayora de los
das del diestro e induce celo en ms de la mitad de las hembras ciclando. Una inyeccin repetida 11
das ms tarde producir la sincronizacin de los celos del lote tratado, debido a que en ese momento
todas ellas se encontrarn entre los das 6 a 16 del ciclo y las que respondieron a la primera dosis
estarn en el da 7-9. (BO)
Grfico 9
Muestra la presentacin de celos en novillas y vacas despus de dos y una aplicaciones de PGF2,
observndose una gran dispersin de los celos en el tiempo. Esta gran variabilidad en el intervalo entre el
momento de la aplicacin de la PGF2 y la ovulacin es muy amplia, lo que produce bajos ndices de
preez a la IATF.
Grfico 10.-
Este tratamiento est indicado cuando se seleccionan hembras ciclando, con buena CC que permitan
esperar buenos indices de preez a celo detectado, no estando indicado en programas de IATF.
A partir de la aplicacin de la ecografa como ayuda diagnstica en reproduccin, se logr tener un mayor
conocimiento sobre la dinmica folicular, lo cual ha permitido la manipulacin del ciclo estral tendiente a
mejorar el desempeo reproductivo del hato bovino en general. Igualmente y debido a que los principales
factores que influyen en la fertilidad, son la alta produccin de leche, la condicin corporal y la deficiencia
en la deteccin de celos, se han diseado distintos sistemas o protocolos que permitan alcanzar los
mejores ndices en estos parmetros de la produccin ganadera.
Una de las alternativas ms tiles para incrementar la cantidad de vacas inseminadas en un perodo
corto de tiempo, es la utilizacin de protocolos que sinronicen la ovulacin y permitan la inseminacin
sistemtica, sin la necesidad de detectar celo. Adems, el desarrollo de protocolos para vacas en anestro
postpato permite la inseminacin de una poblacin de animales significativamente mayor. (BO)
Actualmente se dispone de dos tipos de protocolos para IATF, los que utilizan la GnRH y PGF2
denominados protocolos Ovsynch y los que emplean dispositivos liberadores de progesterona y
estradiol. (BO)
Los tratamientos que han demostrado mayor efectividad en el control del ciclo estral para la
implementacin de programas de IATF, son los que combinan GnRH con PGs y los que utilizan distintas
combinaciones de estrgenos y progesterona (CUTAIA)
El comienzo de la nueva onda folicular post GnRH fu en promedio de 1.6 das despus de su aplicacin,
no obstante todas las hembras tenan un nuevo folculo dominante a los 7 das.
Grfico 12
Con base en estos resultados se administr PGF2 7 das despus para sincronizar el celo e inseminar a
celo detectado. Este protocolo recibi el nombre "Select-Synch", el cual ha tenido bastante aceptacin
por parte de los ganaderos. Sin embargo este programa no soluciona el problema de la deteccin de
celos.
Grfico 13
Con posterioridad se demostr que el folculo dominante en crecimiento ovulaba de manera ms precisa
aplicando una segunda dosis de GnRH 1.5 a 2.0 das despus de la PGF2. Despus de la segunda
dosis de GnRH se insemina sin deteccin de celos entre las 0 y 24 horas, optimo 16-18, dando lugar a un
nuevo protocolo denominado "OVSYNCH". Si se insemina a las 0 horas, da de la aplicacin de la
segunda dosis de GnRH el protocolo se denomina "COSYNCH". (GEARY)
Diferentes trabajos han demostrado que los protocolos Ovsynch tienen tasas de preez similares a las
que se obtienen en vacas sincronizadas con PGF2 e inseminadas 12 horas despus del celo detectado,
por lo que se utiliza en gran medida para inseminar vacas cclicas de leche (CARAVIELLO)
De otra parte el protocolo Ovsynch no tuvo xito para sincronizar vacas en anestro postparto. Este
protocolo induce la ovulacin en un alto porcentaje de vacas en anestro, pero algunas tienen una fase
ltea posterior ms reducida lo que produce tasas de gestacin ms bajas que las vacas cclicas.
Igualmente las tasas de preez en novillas tratadas con Ovsynch son bajas.
Varios trabajos han determinado que la presencia de P4 es un pre-requisito para la expresin normal del
celo y una fase ltea normal. La sensibilizacin de la P4 es un factor definitivo en la diferenciacin normal
de las clulas de la granulosa y el desarrollo del CL luego de la ovulacin, siendo necesaria para la
reiniciacin de los ciclos en vacas anestricas postparto.
Por lo expuesto anteriormente y con el fin de lograr una mejor respuesta a la IATF se determin utilizar
los DIV en los protocolos Ovsynch y Cosynch en vacas en anestro y novillas, con el fin de inducir la
ciclicidad en estas hembras, dando lugar a los protocolos presentados en el Grfico 14
Igualmente se observa que no hay diferencia en la tasa de preez entre Ovsynch y Cosynch con DIV en
vacas, pero si la hay entre Cosynch y Cosynch con DIV en novillas.(MARTINEZ)
En consecuencia se ha recomendado la inclusin de DIV con progesterona en protocolos Ovsynch -
Cosynch, con el fin de aumentar la fertilidad en vacas de leche lactando en anestro y novillas.
Debido a los resultados obtenidos en diferentes investigaciones, se determin que los estrgenos
inducen la atresia de los folculos existentes al momento de su aplicacin y por consiguiente una nueva
onda folicular. Esta atresia se produce por la supresin de las gonadotropinas circulantes FSH-LH y no
por un efecto local a nivel de ovario. Igualmente se estableci que la administracin de progestgenos y
estrgenos en cualquier momento del ciclo estral, induce el crecimiento sincrnico de una nueva onda
folicular aproximadamente a los 4 das de la aplicacin.
Esto ha dado lugar al desarrollo de nuevos protocolos de sincronizacin de celos, ovulacin e IATF. Los
tratamientos que han demostrado mayor efectividad en el control del ciclo estral en programas de IATF,
son los que combinan GnRH con PGF2 y los que utilizan distintas combinaciones de estrgenos y
progesterona (CUTAIA)
En los paises en donde los estrgenos no estn autorizados como Norteamrica, Europa y Nueva
Zelanda, se utilizan los DIV con progesterona en asociacin con el protocolo Ovsynch para mejorar la
fertilidad de las vacas que todava no han comenzado a ciclar o vacas en anestro anovulatorio, siendo
este el problema ms comn en los sistemas de produccin lechera. En los pases del Mercosur los
protocolos ms empleados son en base a progestgenos y estrgenos.
Grfico 15.- Protocolo para IATF mediante
P4-PGF2-BE
La recomendacin de IATF a las 52-56 horas de la remocin del DIV con P4, se origina en los resultados
en diferentes trabajos, en los cuales se detect un pico de LH a las 12 horas despus de la aplicacin de
1 mg de BE, y a que la ovulacin tena lugar alrededor de las 40 a 48 horas de la administracin (64 y 72
horas despus de la remocin de un CIDR-B o DIB) (BO)
En otro trabajo se administr 1 mg de Cipionato de Estradiol ECP el da del retiro del DIV y la
administracin de PGF2. Puesto que el ECP tiene una va media mayor a la del BE, el pico de LH
preovulatorio se produce a las 24 horas de la aplicacin del ECP. Por tal razn si administramos ECP se
elimina el uso de BE a las 24 horas del retiro del DIV ya que la ovulacin con ECP tiene lugar a las 72
horas, tiempo similar al de la ovulacin con BE. Sin embargo la diferencia del ndice de preez en ambos
tratamientos no fu significativa. La ventaja entonces de utilizar ECP
es la eliminacin de un encierro luego del retiro del DIV. (BO)
El tiempo trascurrido desde el inicio del protocolo y la IATF oscila entre los 9 a 10 das y todas las vacas
deben ser inseminadas en un rango de 4 horas. Este ltimo punto es muy importante ya que se debe
programar la cantidad de animales a tratar en funcin de este tiempo y esto depender
fundamentalmente de las instalaciones disponibles y del personal con que se cuente.
En la Tabla 6 se puede apreciar que los resultados obtenidos estn en un promedio del 50%, con un
rango muy amplio de 28.7% a 75.0%. (CUTAIA)
Tabla 7
El primer factor a tener en cuenta al momento de iniciar un programa de IATF es la CC, siendo la
recomendad de 3.0-3.5, pudiendo ser de 2.5 si est en proceso de ganancia de peso (BEP), esta puede
reforzarse con suplementacin alimenticia rica en carbohidratos como un ensilaje de maiz.
Un segundo factor es el grado de ciclicidad del lote, ya que como se ha demostrado en diferentes
trabajos, no es lo mismo tratar hembras cclicas que hembras en anestro o novillas, siendo los protocolos
que incluyen los DIV con P4, los ms indicados en estos dos ltimos lotes.
Un tercer factor, no menos importante, es el tipo de hembras del lote a tratar, si son Bos Indicus, Bos
Taurus o sus cruces, debido a que el comportamiento de celo es diferente.
Con el fin de mejorar los porcentajes de preez en vacas en anestro, se han desarrollado otras ayudas o
protocolos como administracin de eCG al momento del retiro del DIV. Las vacas en condiciones de
pastoreo presentan una alta incidencia de anestro postparto con presencia de folculos pequeos que,
luego de la administracin de estrgenos a las 24 horas de retirado el DIV, en especial BE, entran en celo
pero no ovulan. Con la administracin de 400 mg de eCG al momento del retiro del DIV se produce un
estmulo gonadotrpico, con lo cual se logra el desarrollo de los folculos, la obtencin de un folculo de
buen tamao, ovulacin y un CL de calidad, consiguiendose con esto un mayor ndice de preez. (BO)
Otro aspecto en este sentido se refiere al empleo del Destete Temporal -DT- por 40 o 72 horas. Este
punto est intimamente relacionado con la CC, puesto que las hembras responden mejor cuando tienen
una buena CC o estn en BEP.
Grfico 16
El papel del DT es similar al de la administracin de eCG al momento del retiro del DIV, aumentando la
pulsatilidad de la LH. Si hay una sincrona de onda luego de utilizar estradiol y colocar un DIV con P4, ya
que el DIV va a aumentar la pulsatilidad de la LH.
En la Tabla 8 se aprecia que la utilizacin del DT y P4 solos mejoran la tasa de preez, sin embargo
cuando se usan combinados, los ndices de preez mejoran ostensiblemente.(MENCHACA)
VITTONE et al encontraron que la tasa de preez solo mejora cuando el DT se realiza al comienzo del
tratamiento hormonal, al utilizar DIV con P4 y DT en vacas de baja CC. De otra
parteVASCONCELOS concluy que el DT solo, mejora el comportamiento del celo, mientras que el DIV
solo beneficia la concepcin. La combinacin de DIV- DT mejora la tasa de preez al mejorar el
comportamiento y la concepcin.
En una investigacin realizada por OSORNO y CASTRO 2010 Tabla 9, en hatos de ganado Brahman
comertcial en Puerto Salgar, Magdalena Medio Colombiano, se determin que la Interrupcin Temporal
del Amamantamiento (ITA), al momento del retiro del DIB, para programas de IATF, por 80 o 56 horas
mejora los ndices de preez, cuando se utiliza el protocolo BE- DIV P4 - PGs y eCG.
En todos los tratamientos en que se utiliz DT, los porcentajes de preez por IATF fueron superiores a los
que se obtuvieron con monta natural o grupo control. No hubo diferencia significativa entre el ITA de 80
o 56 horas. Se recomienda un DT de 72 horas.
Las investigaciones expuestas demuestran que el DT aumenta los ndices de preez al emplearse en
combinacin en los protocolos de IATF. El inconveniente est en el manejo de los animales y la
disponibilidad de reas para su aislamiento y aplicacin de los frmacos.
Grfico 17.-
Una vez realizada la IATF existen varias alternativas de manejo de las vacas tratadas, la ms comn es
el repaso con toro, el cual debe comenzar al da 15 de la IATF y no antes, para evitar confusiones entre
la preez por IATF y la preez por toro.
Las vacas son tratadas con un protocolo BE - DIV - PGF2 - BE e IATF a las 52-56 horas de retirado el
DIV (30 horas despus de la administracin del BE da 8).
A los 15 das de la IATF entran en servicio con toro hasta los 90 das.
Se realiza ecografa a los 30 das de la IATF para diagnstico de preez y ecografa a los 60 y 90 das
para diagnstico de preez por toro.
La Tabla 10 muestra los resultados de los ndices de preez en vacas con cra, vacas secas y novillas
tratadas con IATF y repaso con toro. Se observa un incremento significativo en los ndices de
preez. (CUTAIA)
Grfico 18
Grfico 19
Otra alternativa es la de realizar un programa de resincronizacin de celos, de esta manera, tambin con
el uso de un DIV, es factible reinseminar los animales vacos a la IA, colocando el DIV entre el da 14 -17,
despus de la primera IA, hasta el da 21 -24 y realizar la segunda IA a celo detectado.
Grfico 20
Igualmente se puede resincronizar y reinseminar las hembras vacias a la IATF, las cuales entran en
celo luego de la IATF, administrando BE y un DIV el da 13, retirando el DIV el da 20 e inseminar a celo
detectado junto en un rango que va de 20 a 25 das post IATF. Los resultados esperados con este
tratamiento son de 70 a 75% de preez con las dos inseminaciones para ganado de carne y entre 60 y
70% para ganado de leche. (CUTAIA)
En una investigacin realizada por POOCK et al en vacas Holstein de acuerdo a la fecha de parto, se
trataron con un protocolo "Presynch Ovsynch" (PGF2, 14 das; PGF2, 14 das; GnRH, 7 das; PGF2,
56 horas; GnRH, 16 horas ; IA a Tiempo Fijo), de tal manera que que la primera IATF fu entre los 70 a
76 das postparto, se concluy que la Preez en vacas inseminadas a tiempo fijo el primer servicio o
resincronizadas en programas basados en Ovsynch (P/IA), no se afecta por el empleo de diferentes
productos en base a GnRH. Sin embargo hay otros factores que afectan la P/IA incluyen el nmero de
servicios (menor para el segundo servicio o ms), mes (menor en los meses de verano), SCC (menor en
vacas con SCC mayor) y el porcentaje de protena en la leche (mayor en vacas con mayor porcentaje de
protena).
Como se ha visto existe una gran variedad de protocolos para la implementacin de un programa
de IATF, por lo que la escogencia y aplicacin de uno u otro depende en alto grado del anlisis de los
diferentes factores que afectan e intervienen en el buen desempeo reproductivo de las hembras a
tratar, en especial la Condicin Corporal, Tipo de ganado, Ciclicidad de las hembras, Disposicin de
instalaciones y Personal capacitado.
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SCENA .G. VENTURINI M. DOMINGUEZ G. FADER F. EFICACIA DEL CRESTAR COMBINADO CON
DESTETE TEMPORARIO EN VACAS MEDIA SANGRE CEBU CON POBRE CONDICION CORPORAL.
22/10/2007
INSEMINACION ARTIFICIAL
Es la tcnica mediante la cual se fecunda una hembra utilizando mecanismos que simulan la monta
natural y que consiste en el depsito del semen del macho dentro del tracto genital de la hembra, en un
momento adecuado, que coincide con la ovulacin.
Estas circunstancias pueden deberse a defectos anatmicos como el cuello en S muy frecuente en
ganado cebuino, o inflamaciones del tero no detectables a la palpacin o la ecografa, o simplemente no
quedaron gestantes luego de dos o tres inseminaciones. Lo anterior hace necesario la utilizacin de
"toros repasadores" con el fin de prear este grupo de hembras. El toro repasador debe llenar las
caractersticas fenotpicas propias de la raza y las caractersticas de un buen reproductor, con el fin de
que se conserven las metas de produccin del hato.
Con el fin de obtener los mejores parmetros reproductivos mediante la utilizacin de la IA, adems de
los factores que intervienen en la reproduccin, como Sanidad, Nutricin, Raza y Medio Ambiente y
aquellos que afectan la aplicacin de las Tcnicas de Reproduccin Asistida, deben tenerse en cuenta
algunos puntos que inciden directamente en la aplicacin y ejecucin de esta tcnica. Tabla 1 :
En la Figura 1 se muestra el rango de temperatura a boca de termo con Nitrgeno lquido y la manera de
exponer las canastillas para el retiro de las pajillas.
Algunas veces debemos realizar varias inseminaciones por lo que debemos levantar la canastilla
repetidamente, exponiendo el semen cada vez a temperatura ambiente durante cortos perodos. De otra
parte durante la transferencia del semen entre termos y la manipulacin de las canastillas, el semen se
expone a diferentes temperaturas, lo cual produce daos sobre el mismo.
Pickett et al midi la temperatura del semen durante la manipulacin de las canastillas y observ que
aunque el semen est en contacto con el nitrgeno tiempo suficiente, en cada exposicin a temperatura
ambiente, ste alcanza temperaturas mayores, requiriendo ms de 10 minutos para que recupere
nuevamente los -196C, en especial si el nivel de nitrgeno es bajo.
Grfico 1.- Temperatura del semen dentro de las pajillas sostenidas con pinzas en canastillas metlicas
durante la exposicin a temperatura ambiente 20 +/- 0.6C. Cada curva representa el promedio de 5
rplicas (BERNDSTON).
Las mayores diferencias entre los inseminadores en el manejo del semen se produce durante la
descongelacin. Algunos utilizan llevarlas en el bolsillo o entre la ropa y el cuerpo, para que lleguen a la
temperatura corporal, lo cual se ha comprobado que nunca alcanzan esta temperatura; colocarlas dentro
de la vagina; utilizar agua del grifo; temperaturas y tiempos variables de exposicin, protocolos que son
inadecuados y no logran ndices de fertilidad aceptables.
En otro experimento realizado por SENGER et al, se descongelaron pajillas de 0.5 ml a dos
temperaturas (5C y 35C) para luego exponerlas a diferentes temperaraturas de 1C - 20C -37C,
imitando distintas posibilidades de temperaturas ambiente.
Como se puede ver en la Tabla 2 los mejores resultados expresados en motilidad espermtica e
integridad acrosomal fueron con temperatura de 37C y luego mantenidos entre 37C y 20C. Por lo
tanto si no hay una temperatura ambiente baja, no hay peligro de schock trmico, siempre y cuando se
realice rpidamente la IA. Lo anterior corrobora los resultados y recomendaciones del trabajo de BARTH.
Cuando se trabaja a la intemperie con bajas temperaturas, existe la posibilidad de que se produzca
schock trmico por la diferencia de temperaturas entre el descogelamiento y el medio ambiente, por lo
que se recomienda proteger el semen desde el momento de su descongelamiento y su traslado hasta la
vaca a inseminar. (BO).
Cuando es necesario inseminar un grupo grande de animales en un tiempo corto, es recomendable que
un ayudante vaya descongelando las pajillas, segn vaya progresando el proceso, lo que permite mayor
precisin y seguridad en cada inseminacin.
El proceso de transporte espermtico en el tracto reproductor femenino (Tabla 3) se lleva cabo
inicialmente de forma rpida y luego de forma lenta. En la fase rpida los mecanismos fisiolgicos del
tracto femenino trasportan los espermatozoide hasta el oviducto sin la participacin activa de los mismos
y no son fecundantes. Durante la fase lenta los espermatozoides llegan al oviducto 8 horas despus del
servicio y son almacenados por 18 horas en el itsmo, parte inferior del oviducto, para posteriormente
avanzar hasta la unin con la ampolla, sitio en donde se realiza de la fecundacin luego de la
capacitacin espermtica.
Por esta razn solo una poca cantidad de espermatozoides llegan a este sitio ya que en su gran mayora
son fagocitados o eliminados con el moco cervical, debido a movimientos retrgrados del eyaculado.
De otra parte se observ que los inseminadores que decan depositar el semen en el cuerpo del tero, lo
hacan en realidad en el cervix. Tabla 4.
En conclusin se recomienda efectuar el depsito del semen en la porcin anterior del cuerpo del tero.
Figura 2
DETECCION DE CELO
SINTOMAS DE CELO
Figura 3.- El conjunto de hembras del hato conforman un grupo sexualmente activo que interacta entre
si. La hembra en celo se muestra inquieta, se mueve a intervalos cortos, muge, se topetean y frotan la
cabeza entre ellas, olfatean y lamen los genitales de sus compaeras
Figura 4. La pasividad ante la monta es el nico indicador de que la vaca se encuentra en celo. Como
consecuencia de la monta los pelos de la zona del anca se aprecian revueltos en inclusive hay depilacin
del rea. La actividad de monta se estimula cuando el ganado se encuentra en movimiento, encorralado
o comiendo. Se ha comprobado que ms del 85% de las vacas que intetan montar a otras por el frente
estaban en celo, por lo que esta manifestacin puede considerarse como signo secundario confiable de
celo. (FONSECA)
Figura 5.- La edematizacin e hiperemia de la vulva y el cuello se debe a los altos niveles de estrgenos,
que causan un aumento de la irrigacin del tero, enroscamiento y turgidez de los cuernos.
Figura 6.- Sin duda el principal signo fsico de celo es la secrecin vulvar de moco cervical claro y
cristalino, ms evidente en novillas que en vacas.
La duracin del celo depende de la especie y vara de una hembra a otra dentro de la misma especie. La
estimulacin del grupo de hembras por el macho reduce la duracin del estro y el momento de la
ovulacin. El celo es ms corto en animales en pastoreo que en estabulacin, siendo igualmente ms
corto en ganado ceb.
La presentacin de celos en ganado de leche sucede frecuentemente dentro del horario de la Tabla 5
Para lograr el mayor porcentaje de determinacin visual del celo, es necesario revisar los lotes dos o tres
veces al da, con una duracin mnima de una hora, ya que el animal puede mostrar de una a tres montas
por hora, lo que implica que an teniendo un excelente personal detectando celos, es posible que se
pasen parte de ellos por razones fisiolgicas. Grfico 2
De otra pare se debe tener especial dedicacin durante el perodo de observacin, conocer los animales
y las diferencias de comportamiento y dominancia entre ellos. Muchas veces durante la observacin se
confunde al animal que est en celo con otros que estn entrando o saliendo del celo, o simplemente son
animales que no estn en celo, originando un bajo porcentaje de preez, aunque con porcentajes
aparentemente normales de deteccin de celos. (MARTINEZ)
Para tener una idea de esta problemtica hay que considerar que mundialmente se pierden entre el 20%
y 50% de los celos y que el 30% de las vacas son inseminadas a destiempo o cuando no estn en
celo. (BALL)
Figura 7.- La observacin visual directa es el mtodo ms utilizado para detectar celo en la vaca. Una
buena observacin al igual que la disposicin de corrales y calcetas tanto para la observacin del celo,
como para efectuar fcilmente la inseminacin, mejora el porcentaje de preez.
La eficiencia en la deteccin visual de celo vara entre 90% y menos del 50% (ROELOFS)
En la actualidad existe un gran nmero de ayudas para detectar celo en bovinos, algunos ms
sofisticados que otros, dependiendo del tamao del hato y el tipo de explotacin, en los cuales se
emplean sistemas automticos de televisin y computarizacin, conectados a centrales de observacin y
registro. Todos tienen como objetivo mejorar la deteccin de celos. Por lo general se combinan con otras
tcnicas complementarias.
Figura 8.
La desviacin de pene es la tcnica quirrgica ms empleada. La punta del prepucio debe quedar lo
suficientemente alta y estirada, de tal manera que no permita que el macho introduzca el pene.
Igualmente no debe quedar en hamaca pues hace posible que la orina se deposite en la curvatura
inferior, produciendo irritacin del rgano.
Figura 9
Las tintas se aplican en la parte anterior de la raz de la cola. Se aprecia su decoloracin o dispersin de
la mancha al ser montada por otro animal.
Figura 10
Los parches como el "Kamar", se aplican en la raz de la cola, el cual se colorea al ser presionado por
otro animal que monte la hembra en celo. Simple, se puede perder o dar falsos positivos. Efectividad
promedio 80%
Figura 11
El podmetro en hatos lecheros en estabulacin permanente, es tan efectivo como la observacin visual
por 30 a 60 minutos, 1 a 3 veces al da. Menos efectivo que 4 observaciones diarias por 60 minutos o 6
observaciones diarias por 30 minutos. La ombinacin de podometra y observacin son superiores a
cada mtodo utilizado por separado (KASTELICK).
El sistema cerrado de televisin tiene una efectividad de registro de celos del 56 al 94%, siendo menor
que lla deteccin visual directa. La exactitud se aproxima a 50% y es menor que la deteccin
visual (BALL)
Figura 14
El sistema Heat Watch es un detector de celos radiotelemtrico automatizado que mediante un sensor de
presin colocado en el anca, permite registrar la actividad de monta, fecha, identificacin y duracin de la
monta, la cual es trasmitida a una antena repetidora que enva la informacin a un centro de
computacin. Se considera que una vaca est en celo si monta 3 veces en un perodo de 4 horas.
Este sistema ha sido probado en la Universidad de Virginia Tech desde 1994 obtenindose una eficiencia
de deteccin de celo del 94% con un nivel de exactitud del 95% (BO)
Como puede verse existe una gran variedad de mtodos tendientes a detectar celos en bovino, cada uno
tiene sus ventajas y desventajas. Su empleo depende en gran medida del tamao del hato y el tipo de
explotacin, ya sea intensiva o extensiva, leche, carne o doble propsito.
La Tabla 7 presenta los principales errores que se cometen en la deteccin de celos.
Por lo anterior es conveniente combinar uno de los mtodos no electrnicos con la inspeccin visual para
mejores resultados.
MOMENTO DE LA INSEMINACION
La actitud de caminar, en la cual se basa el podmetro, se aumenta cuando la vaca est en celo.
Durante este perodo el animal disminuye el tiempo dedicado a comer y la produccin de leche baja.
Igualmente la hembra monta y se deja montar, topetea otras vacas para finalmente presentar la
inmovilidad a la monta, signo inequvoco de celo.
Los eventos que determinan el momento de la IA son la viabilidad y funcionalidad del esperma
(aproximadamente 24-30 hs) y el ovocito (6-10 hs), junto con el tiempo requerido por el espermatozoide
para ser transportado desde el sitio de depsito hasta el lugar de la fertilizacin (aproximadamente 4-8
hs). Para que ocurra la fertilizacin del vulo es necesario que los espermatozoides se depositen antes
de la ovulacin, para que tengan tiempo de adquirir la capacidad fecundante (capacitacin espermtica)
y esperen al vulo en la parte media del oviducto o mpula. Grafico 3
Las inseminaciones tempranas tienen bajos ndices de fertilizacin y embriones de buena calidad,
mientras que con las inseminaciones tardas se obtienen indices altos de fertilizacin pero embriones de
baja calidad. La fertilidad despus de la primera IA es considerada aceptable cuando el porcentaje de no
retorno al celo despus de 56 das de la IA es > 60%.(SAACKE)
Sin embargo, el problema surge cuando no se puede determinar en forma precisa el momento en que
comenz el celo, por lo que se ha establecido que el momento de la inseminacin en hembras que entran
en celo en la maana se inseminen en la tarde y las que entran en la tarde se inseminen en la maana,
con dos observaciones diarias.
Con el sistema Heat-Watch se determin que la tasa de concepcin fu ptima en 2661 vacas
inseminadas 4-16 hs posteriors al inicio del celo, con un 46-51%, presentndose una reduccin (43%), en
la tasa de concepcin de las vacas inseminadas cerca del inicio del celo (0-4 hs).
(WILTBANK)
El ganado ceb, cuyo comportamiento, manifestacin e intensidad de los sntomas de celo son muy
variables, los resultados de la IA son menores que en el ganado de leche. Teniendo en cuenta que la
duracin del celo en ceb es ms corto, se recomienda servir en el momento en que se observen los
sntomas de celo. En las razas cebuinas el celo tiene una duracin de 5-7 horas, especialmente de
noche. Para el trpico Colombiano se reportan promedios en novillas ceb de 10 horas y 18 horas en
Holstein (GONGORA)
En el Grfico 6 se observa que el ganado ceb presenta los celos con mayor frecuencia en las horas de
la maana (68.7%) que en la tarde (31.25%) (AGUIRRE)
2.- Revise la tarjeta reproductiva del animal y/o la base de datos y constate que se encuentra dentro del
Perodo De Espera Voluntario PVE, igualmente si ha tenido servicios previos y cuantos. Proceda segn el
protocolo establecido.
4.- Examine y observe las caractersticas del flujo vaginal, que sea limpio, transparente y brillante. Si es
turbio o con estras de sangre o grumos de pus no insemine.
Registre la novedad y aplique el tratamiento segn el protocolo recomendado.
Los grumos pueden deberse a residuos de semen de un servicio por toro. No olvidar que al presentarse
metrorragia esta puede deberse a que el celo sucedi dos das antes, la cual es inodora. Es frecuente en
novillas.
5.- Coloque en un sitio adecuado los implementos a utilizar, como fundas, pistola, corta pajillas (tijera),
toallas, termo descongelador, etc.
8.- Levante la canastilla apropiada que contiene las pajillas segn el toro a utilizar
No exponga la canastilla fuera del termo, mantngala a nivel de la boca del mismo.
El tiempo de exposicin de la canastilla no debe sobrepasar los 10 segundos.
10.- Introduzca la pajilla con el extremo sellado hacia abajo, dentro del termo descongelador a 35C-
37C por un perodo de 30 segundos.
11.- Retire la pajilla luego de los 30 segundos. Si hay burbuja de aire sacuda la pajilla para eliminar la
burbuja.
12.- Seque la pajilla con papel absorbente. Una gota de agua puede producir shock osmtico,
ocasionando dao espermtico irreversible.
13.- Corte la punta sellada de la pajilla, lado contrario al tapn blanco, con el corta pajillas o la tijera.
14.- Introduzca el extremo cortado de la pajilla dentro del embolo verde de la funda de la pistola, hasta
que calce mediante un giro y se ajuste de manera adecuada.
Igualmente se puede introducir la pajilla por el extremo del tapn blanco en la punta de la pistola hasta
que toque el tope interno de la misma, para luego colocar la funda y calzar el embolo verde de la funda
en la punta de la pajilla.
15.- Empuje suavemente la pistola con la pajilla dentro de la funda hasta alcanzar la punta y asegrela
segn el tipo de pistola utilizada.
18.- Con la mano en el recto, localice el cuello del tero, colquelo en el cuenco de la mano y fjelo con
los dedos. Llvelo hacia adelante para evitar pliegues en la vagina, lo cual puede dificultar la llegada de
la punta de la pistola a la entrada del cuello.
19.- Con el cuello del tero en el cuenco de la mano, oriente la punta de la pistola hacia abajo y adelante,
buscando la entrada del cuello. El dedo pulgar puede servir de gua al colocarlo en la entrada del cuello,
dirigiendo la punta de la pistola hasta que toque el dedo y dirjala al orificio externo del cuello.
Especialmente en cuellos muy grandes.
Por medio de movimientos suaves gue la pistola a travs del canal cervical, pasando los anillos del
cuello uterino, hasta llegar a la parte ms anterior del cuerpo uterino, punto blanco de depsito del
semen. Una forma de saber que ya estamos en el punto blanco, es sintiendo con con el dedo ndice la
punta de la pistola inmediatamente por delante del cuerpo del tero.
20.- Deposite el semen en el punto blanco mediante presin suave del mbolo de la pistola. Retire
suavemente la pistola y con la mano en el recto efecte un masaje suave de los rganos genitales, con el
fin de favorecer el avance del semen. Algunos profesionales recomiendan masajear el cltoris por unos
segundos con el fin de estimular movimientos peristlticos del tracto genital, facilitando el avance
del semen
21.- Retire la funda de la pistola, verifique la correcta descarga del semen y la identificacin de la pajilla.
Anote el servicio de la inseminacin en el libro de registro correspondiente (fecha, toro, novedades,
comentarios, tratamientos etc). Limpie cuidadosamente la pistola, squela y desinfctela una vez
terminado el proceso.
Este mtodo de Inseminacin Artificial ha sido desarrolado en Mxico por los Drs Marco Antonio Hidalgo
y Malcom Nivem. Consiste en la visualizacin del orificio posterior del cuello uterino a travs de la
utilizacin de un espculo vaginal y una fuente de luz, depositando el semen en la parte anterior del
primer anillo uterino, mediante el empleo de un dispositivo especialmente adecuado para este fin, e
impulsar el contenido de la pajilla por medio de la inyeccin de una solucin isotnica dentro del tero.
Es de anotar que al igual que en el sistema de inseminacin tradicional, este mtodo requiere de un
equipo especialmente diseado para el efecto. Debe realizarse dentro de los parmetros recomendados
para el manejo reproductivo del hato, como sanidad, control de enfermedades, manejo nutricional,
suministro de minerales, condicin corporal, manejo adecuado del semen, identificacin de las vacas,
deteccin de celo, momento ptimo de inseminacin, control de registros. Por lo anterior es importante
instruir y capacitar el personal de la finca en estos aspectos. Igualmente se recomienda evaluar
peridicamente los resultados y ajustar los aspectos de manejo reproductivo segn el caso.
4.- Tenga listo el vaginoscopio con la funda plstica protectora. Es recomendable la aplicacin de gel
lubricante al momento de introducirlo en la vagina
9.- Retire la pajilla del termo de transporte. Constate el nmero del toro programado
Coloque la pajilla en el termo de descongelacin a 35-37C durante 30 segundos. La pajilla puede
permanecer en este termo de 15 a 30 minutos, luego de descongelada.
Si son varios los animales a inseminar dentro de un programa de IATF, es conveniente y recomendable
contar con un auxiliar que vaya descongelando y colocando las jeringas con el potencializador, segn se
vaya adelantando el proceso, adems de armar los dispositivos, lo cual agiliza la operacin de
inseminacin mltiple
10 .- Retire la pajilla del termo descongelador y observe si tiene burbuja de aire, sacudala y squela
cuidadosamente con toalla de papel absorbente.
16.- Es recomendable insertar la manguerita del dispositivo inflable en la jeringa de 20 y probar que
funciona adecuadamente, sin retirarlos de la bolsa.
17.- Inserte la punta de la pipeta con la pajilla, en el extremo del dispositivo de la bomba inflable. Ahora
puede retirar la bolsa.
18.- Inserte el extremo libre de la manguerita del dispositivo de la bomba inflable, en el conector de la
jeringa de 20 ml y ajustelo con un giro.
24.- Infle el baln insuflando el aire en la jeringa de 20 ml, presionando suavemente el mbolo. Esto
evitar el reflujo del potencializador y el semen
25.- Fije el mbolo de la jeringa con el seguro del dispositivo, para evitar que se desinfle el baln y haya
reflujo del lquido al inyectarlo.
26.- Presione firme y rpidamente el mbolo de la jeringa con el diluyente potencializador, para impulsar
dentro del tero el semen contenido en la pajilla
BIBLIOGRAFIA
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TRASFERENCIA DE EMBRIONES
Rowson en la Universidad de Cambridge describi las tcnicas quirrgicas de TE en bovinos con ndices
de preez excelentes, las cuales fueron una herramienta importante en su aplicacin comercial en la
primera mitad de los aos 70s.
Con posterioridad adems de los anteriores, HASLER, ELSDEN, ROW, DROST, MAPLETOFT, entre
otros, implementaron la tcnica no quirrgica tanto para la recoleccin como para la trasferencia de
embriones y difundieron e incrementaron las empresas comerciales de TE, propagndose como industria
a nivel mundial.
Hay que considerar dos aspectos en la TE, el primero se refiere a la parte investigativa, la cual ha
permitido conocer la fisiologa, manejo, clasificacin, preservacin y manipulacin de las clulas
germinales y el embrin como tal. En este campo se pueden emplear oocitos y espermatozoides
procedentes de hembras y reproductores de poco valor gentico ya que su manejo y manipulacin se
realiza de manera experimental, clulas que pueden ser obtenidas de animales de granja o de matadero,
como de animales de laboratorio. Adems la prdida de estas clulas durante los diferentes procesos no
es econmicamente significativa.
En la actualidad los estudios que originalmente fueron planeados para contestar preguntas bsicas de
fisiologa, estn siendo utilizados para mejorar e incrementar el empleo de la Trasferencia de Embriones
en la industria bovina. Las nuevas tcnicas han agregado una gran cantidad de perspectivas acerca de
la utilizacin de la TE con fines investigativos. La produccin de gemelos idnticos, clones, quimeras por
mencionar algunos, seguramente contribuirn al avance de estas ciencias. Como se mencion
anteriormente, las tcnicas de FIV est siendo utilizadas para el estudio de la capacidad fertilizante del
semen y son de inmenso valor en el estudio de la competencia del ovocito y el metabolismo embrionerio.
(MAPLETOFT).
El segundo aspecto, estrechamente relacionado con el primero pero diferente en su objetivo final, tiene
que ver con su aplicacin, adaptacin y manejo desde el punto de vista comercial. En este aspecto las
clulas germinales proceden de animales de alto valor gentico y por consiguiente de un mayor valor
econmico, ya que su finalidad es la obtencin de una descendencia de gran calidad gentica y de
produccin.
A nivel de Centrales de Reproduccin Asistida, estas deben llenar los ms altos estndares de Sanidad
Animal, Calidad Gentica y Seguridad Biolgica, de tal manera que garanticen embriones de ptima
calidad reflejados en cras excelentes.
APLICACIONES DE LA TE
As como la IA permiti la diseminacin del potencial gentico de los machos y la obtencin de toros
valiosos, la TE permite la difusin del material gentico de hembras de alta produccin, muchas de las
cuales pueden ser no solamente del mismo origen, sino hermanas completas. (BETTERIDGE)
La Asociacin Canadiense de Criadores de Animales desarroll un programa para la produccin y
evaluacin de la siguiente generacin de toros donadores para IA. Las vacas donadoras seleccionadas
fuero superovuladas e inseminadas con los mejores toros probados disponibles.La progenie de machos
fue dejada en espera, mientras que las hembras fueron llevadas a produccin. Luego los toros
fueron probados a travs de la historia productiva de sus hermanas, en lugar de la historia productiva de
sus hijas. De esta manera se pudo evaluar genticamente un toro en 3.5 aos, mientras que el estudio de
progenie tradicional tarda 5.5 aos. El recorte del intervalo generacional puede dar lugar a una mayor
ganancia gentica en general. Adems la exportacin y transporte de embriones permite el traslado de
progenies completas en forma de embriones congelados a menor costo. (MAPLETOFT)
Seleccin de la Donadora.
Seleccin de la Receptora.
Superovulacin de la Donadora.
Fertilizacin de la Donadora.
Recoleccin de Embriones.
Evaluacin y Clasificacin de Embriones.
Trasferencia de los Embriones
Criopreservacin de los Embriones.
SELECCION DE LA DONADORA
La seleccin de las donadoras est regida por criterios de productividad, mejoramiento gentico y valor
agregado de las cras, ya que sus costos tienden a reducirse en la medida que aumentan estos
aspectos. (MAPLETOFT)
Los principales criterios a tener en cuenta en la seleccin de la donadora son:
Superioridad Gentica.
Debe conocerse su pedigr, ndices propios de produccin y de su progenie, as como poseer las mejores
caractersticas fenotpicas de la raza o tipo de ganado a producir, cuyas cras deben superiores al
promedio del hato, especialmente comparadas con las hermanas de la hembra, descendientes del mismo
toro. Dentro de este aspecto debe trabajarse con toros probados de alta calidad gentica y
mejorantes. (RUANE)
Capacidad Reproductiva
Este aspecto incluye la historia reproductiva del animal, nmero y facilidad de parto, habilidad materna,
peso de las cras al nacimiento, destete y al ao. La donadora debe encontrarse en su mejor edad
reproductiva, un alto nivel de fertilidad con dos o menos servicios por concepcin y un comportamiento
regular en su ciclicidad durante los ltimos perodos estrales.
Es conveniente saber que comportamiento tiene en su ciclicidad, si es de una, dos o tres ondas
foliculares, en especial si se va a trabajar con embriones frescos o si se realizar mediante induccin y
sincronizacin de la donadora.
Por muchos aos se estableci como norma de seleccin de la donadora que esta deba dejar pasar dos
ciclos estrales entre tratamientos SOV, con lo cual se podran efectuar lavados a intervalos de 60 das o
ms. Sin embargo, HASLER y la central Gentica de Holanda determinaron que es posible SOV las
donadoras a intervalos de 40 das por medio de la aplicacin de implantes auriculares de progesterona,
luego de la administracin de prostaglandinas despus de la recoleccin de los embriones, si tener que
esperar la presentacin de los dos ciclos. estos cambios en los protocolos de SOV aumentaron en un
50% el nmero de embriones recolectados y congelados por unidad de tiempo, con fines de exportacin.
La cantidad de vacas donadoras a trabajar depende de la respuesta que estas presenten a los protocolos
de SOV y la cantidad de receptoras disponibles. Cuando se desea trasferir los embriones en fresco es
recomendable tener por lo menos 10 receptoras por donadora con el fin de contar con el suficiente
nmero de receptoras en celo natural, sincronizadas con el celo de la donadora y que estn en el da de
desarrollo de los embriones recolectados.
El manejo de criterios estrictos de seleccin asegurar la superioridad gentica y un alto nivel de xito, lo
que hace que el procedimiento sea ms econmico.
Es imposible predecir cul ser la produccin de embriones de una donante primeriza en particular. Si
hablamos que hay para el MOET un promedio de 5-6 embriones viables por colecta o lavado, hay que
tener presente que un tercio de esas vacas no responder al tratamiento, un tercio responder por debajo
del promedio y otro tercio lo har por encima del promedio, siendo variable la produccin de embriones
entre donantes y entre colectas. una buena donadora en el primer tratamiento lo seguir siendo en los
posteriores. Esta es la gran pregunta que nos hacen los clientes y como no se deben crear falsas
expectativas en un trabajo, que adems genera mucha ansiedad en todos sus actores, debemos ser
claros de tal manera que todos los involucrados entiendan como ser en la realidad.
SELECCION DE LA RECEPTORA
La hembra receptora en los programas de TE juega un papel importante en los resultados finales, siendo
una limitante en la implantacin de estos programas a nivel de finca seras, ya que hay que contar con un
nmero suficiente de hembras aptas para ser trasferidas. Por tal razn un nmero representativo de
hatos ganaderos han redireccionado su explotacin a la produccin de hembras receptoras, para ser
comercializadas en programas de TE.
Las receptoras deben reunir los requisitos de sanidad similares a las donadoras, as mismo tener el
tamao adecuado para permitir el desarrollo normal del feto correspondiente a la raza del embrin, contar
con un canal de parto ancho y nivelado que tenga facilidades al nacimiento. Igualmente debe contar con
un sistema mamarios acorde que permita una produccin suficiente para sostenimiento adecuado de la
cra resultante.
En el caso de de vacas receptoras, deben haber tenido 1 a 2 partos y estar dentro de un perodo
postparto no menor de 90 das, con involucin uterina completa y no estar a mamatando. (DUICA). La CC
ideal es de 3 o ms, que muestren buena distribucin de la grasa corporal, en la prctica hembras con
360 a 460 Kls. Se recomienda que las novillas tengan una edad de 18 a 24 meses y se encuentren cerca
de los 350 Kls.
Se recomienda la evaluacin del desarrollo y funcionalidad del tracto reproductivo de la receptora al inicio
del programa de TE, mediante palpacin transrectal y examen ecogrfico del mismo. Tabla 1.
Se ha podido determinar que al evaluar las estructuras ovricas por medio de ecografa transrectal se
observa que un folculo preovulatorio de 1.3 cms, da lugar a un CL de 5 mm con niveles plasmticos de
P4 de 1.22 ng/ml, midiendo a los 14 das 6 mm y niveles de P4 de 2.48 ng/ml. Para un folculo de 1.6
cms, el CL en el da 7 mide 6 mm y niveles plasmticos de P4 de 3.05 ng/ml. Con lo anterior se espera
generar unas condiciones uterinas ms favorables para el desarrollo inicial del embrin y la necesidad de
realizar una evaluacin previa a la transferencia a la receptora, con lo cual permite obtener mejores
resultados de la TE. (VASCONCELOS)
Sin embargo, la existencia de un umbral en los niveles de P4 para evitar que se presente muerte
embrionaria es controversial, ya que algunos estudios reportan preeces en receptoras con
concentraciones de P4 <1 ng/ml al momento de la TE. En un estudio realizado por RODRIGUEZ et al, el
promedio de los valores del dimetro del CL fu de 19.6 1.8 con un coeficiente de varianza bajo (9%),
mientras que el promedio de P4 fu de 3.62.6 ng/ml, con un coeficiente de varianza elevado (74%).
Adems, valores bajos al momento de la transferencia podra estar reflejando no solo una funcin ltea
anormal sino tambin deficiencia en la deteccin de celos.
Diferentes trabajos han concluido que el tipo de ganado que mejor se ha comportado como receptoras
son las hembras F1 resultantes del cruce de Raza Ceb con razas europeas, debido a su regularidad en
el ciclo estral, facilidad y mayor intensidad del celo, docilidad de manejo y buena produccin de leche
para el sostenimiento de la cra.
Como mnimo se debe contar con 8 a 10 receptoras por donante cuando se hace TE en fresco. No es
recomendable utilizar receptoras con ms de 2 transferencias negativas (GOMEZ)
La superovulacin SOV tiene como objetivo lograr el mayor nmero de oocitos a ser fecundados, para
producir embriones de alta calidad que puedan ser transferibles y progresen a un proceso gestacional
que finalmente de lugar al nacimiento de una cra normal viable. La gran variabilidad en la respuesta a los
tratamientos SOV, el tiempo requerido y los esfuerzos necesarios para la administracin de las hormonas
empleadas en ellos, as como la prediccin incierta de los resultados, ha hecho que se afecte la difusin
de la TE.
De otra parte, los avances logrados en los ltimos aos no han podido aumentar de manera significativa
el nmero de embriones transferibles por tratamiento SOV. La implementacin de protocolos que
controlan la emergencia de la onda folicular y la ovulacin aplicados en la IATF, han facilitado la SOV de
grupos de donantes, independientemente del perodo del ciclo estral en que se encuentren y la IA, sin la
necesidad de detectar celos. Sin embargo an se presentan inconvenientes que potencialmente pueden
dar lugar a errores y afectar la respuesta superovulatoria o an peor una ausencia total de respuesta.
Estos promedios pueden compararse con los datos aportados por la AETA en los cuales el promedio fue
de 7.0 en ganado de carne con ms de 24.000 donadoras y 6.3 en vacas de leche con ms de 15.000
donadoras en 2011. (MAPLETOFT).
Tipo de Gonadotropina.
En comienzo en el proceso SOV se utilizaron productos cuyo principio activo era la Gonadotropina Srica
de Yegua Preada PMSG, elaborada por medio de la recoleccin de sangre de yeguas con 80 - 120
das, en la actualidad denominada Gonadotropina Corionica equina eCG. Estos preparados produjeron
una gran variabilidad de respuesta SOV y sus ndices de recuperacin estuvieron influenciadas
negativamente por una excesiva reaccin ovulatoria y una menor sensibilidad de respuesta a
tratamientos repetidos.
Esta reaccin se debe a un perodo de persistencia de ms de 10 das en la circulacin general,
producindose una estimulacin ovrica continua, folculos anovulatorios, perfiles endocrinos anormales
y embriones de baja calidad. (MOOR)
FOLIGON . Dosis 1500 a 3000 UI IM. entre los das 8 a 13 del ciclo, seguidos de 3 ml de Prosolvin
48 horas despus.(INTERVET)
Con posterioridad se pudo disponer de productos a base de extractos pituitarios de mayor actividad FSH
que LH, puesto que no se pueden obtener puros de una u otra hormona, al administrarse en inyecciones
mltiples y al comparlos con la administracin de una dosis nica de eCG, se logr obtener un mayor
nmero de embriones buenos. Los extractos piutuitarios se FSH/LH con ajo contenido LH han mejorado
la respuesta SOV en el ganado. (HASLER)
Pureza
Puesto que el perodo de vida biolgica de la FSH es de 5 horas o menos, esta debe administrarse dos
veces al da para la induccin de la SOV. (LOONELY)
Sin embargo estudios recientes han reportado que la produccin de frmacos a base de FSH, mediante
tcnica recombinante, inducen una respuesta SOV sin adicin de LH exogena y que la calidad de los
embriones puede ser superior. (LOONELY)
Adems de estos estudios y otros ms recientes que emplearon FSH recombinante indican que en el
futuro se utilizarn gonadotropinas recombinantes, en la actualidad no se emplean por sus altos
costos (ROGAN)
En un sentido prctico, es lgico suponer que las vacas con dos ondas foliculares tienden a tener ciclos
ms cortos (18-20 das) que las vacas de tres ondas (21-23 das). Por esta razn, la duracin del ciclo
estral anterior de la donadora puede proporcionar una pista sobre cual puede ser el mejor da para iniciar
el tratamiento SOV. (MAPLETOFT)
Moor y col, sugirieron que tanto la tasa de ovulacin como el nmero de embriones viables producidos
son relativamente consistentes dentro de los mismos individuos; los animales que responden poco en un
ensayo lo seguan haciendo en tratamientos subsiguientes, mientras que aquellos animales que
respondieron bien inicialmente, lo continan haciendo de ese modo. Aunque hubo una gran variabilidad
entre vacas, se ha visto que el nmero de folculos >1.7 mm de dimetro en un ovario, se correlaciono
positivamente con la respuesta SOV a los tratamientos con gonadotropinas. Mas recientemente SINGH y
col, demostraron que el nmero de folculos presentes en el momento de la emergencia de la onda
folicular permite predecir la respuesta SOV.
Otro factor relacionado con la donante en si misma, se refiere al estado de desarrollo folicular al momento
de iniciar el tratamiento. Esto tiene mayor importancia cuando en el proceso de TE se utiliza la deteccin
del celo de la donante para iniciar el tratamiento.
La ecografa de los ovarios puede proveer informacin acerca del momento ms apropiado para iniciar
los tratamientos SOV, con el fin de obtener la mxima respuesta de una vaca en particular. Durante la
mitad del desarrollo de una onda folicular, el folculo dominante FD, actuando local o sistemicamente,
induce la atresia de otros folculos en desarrollo. En este sentido se ha demostrado que el inicio de los
tratamientos SOV en presencia de un FD resulta en un 40-50% de disminucin en la respuesta
SOV. (SHAW)
Igualmente se ha determinado que existe una alta correlacin entre el nmero de folculos pequeos al
momento de iniciar el tratamiento y la respuesta SOV. En conjunto, estos datos sugieren que se puede
esperar una disminucin en la respuesta SOV si est presente un FD activo al momento de iniciar los
tratamientos y que la presencia de folculos que estn creciendo activamente en un rango de 3-6 mm de
dimetro (emergencia de la onda folicular) puede estar asociada con una mejor respuesta SOV. A travs
de solo un examen ecogrfico en condiciones de campo es difcil determinar si un folculo grande es o
no funcionalmente dominante y si los folculos pequeos estn creciendo activamente o estn sufriendo
atresia. Sin embargo, la presencia de ms de seis o siete folculos de 3-6 mm de dimetro 8 a 10 das
despus de la ovulacin, en presencia de un folculo grande, provee suficiente evidencia del inicio de una
nueva onda de desarrollo folicular. (SINGH)
Raza
La raza es un factor presente en los tratamientos SOV ya que en varios estudios se ha determinado que
las vacas Holstein requieren de una mayor proporcin de FSH,mientras las vacas Charolaise requieren
una mayor proporcin de LH para una mxima respuesta SOV.
Los resultados de diferentes trabajos indican que la dosis ideal para vacas Bos Taurus es de 400 mg de
Folltropin , para vacas Bos Indicus es de 260 a 320 mg y para novillas 200 a 260 mg, con resultados
altamente satisfactorios. El ganado Bos Indicus responde exageradamente a dosis altas de FSH,
encontrandose respuestas satisfactorias con dosis de 133 a 200 mg de Folltropin-V y de 200 a 260 mg
en sus cruces (BELACUBA)
En cuanto a las dosis empleadas algunos prefieren dosis uniformes y otros prefieren dosis descendentes
de FSH, siendo la mejor va de administracin la IM, al compararla con la va SC.
Otro factor no menos importante se refiere a la calidad del semen, el momento de la IA y la habilidad del
inseminador. Existen evidencias de la existencia de una relacin positiva entre la calidad del semen, el
ndice de fertilidad y la calidad embrionaria, por parte de Centros Comerciales de Reproduccin Asistida
en programas de TE.
Condicin Corporal CC
En trminos generales se considera que la CC influye en la respuesta SOV, de manera similar a lo que se
presenta en las hembras no tratadas, por lo que se asume que el nivel de energa de la racin influye en
las tasas de ovulacin y fecundacin como en la viabilidad de los embriones. Hanselmann demostr
que las donadoras a nivel de campo tuvieron 2.2 embriones transferibles ms que las estabuladas.
En los aos 70s se utiliz la eCG como hormona superovulatoria, empleando el protocolo descrito en el
Grafico 2. Se inicia en el da de presentacin del celo detectado, Da 0. La dosis de eCG es una sola
administrada en el da 10, seguida de PGF2 el da 12 a IA los das 14 y 15, efectuando el lavado,
recoleccin y transferencia en fresco el da 22.
Sin embargo por su gran variabilidad de respuesta y ante la implementacin de protocolos a base de FSH
se restringi su aplicacin.
Con posterioridad se ha utilizado el protocolo tradicional de SOV Grfico 3, el cual se inicia teniendo
como base la deteccin del celo o Da 0, aplicando la FSH (FOLLTROPIN-V - PLUSET), a partir del
da 10, seguida de la administracin de PGF2 a las 48 horas, por lo que normalmente se presenta celo
a las 36 a 48 horas, efectuando las inseminaciones, con o sin manifestaciones de celo a las 60 y 72
horas, luego de la PGF2. Las vacas que presentan celo antes de lo esperado, no ms de 24 horas, se
les puede suspender la administracin de FSH y se inseminan a las 12 y 24 horas de iniciado el celo. Las
vacas que entran en celo un da despus de lo esperado se insemina pero van a tener un respuesta baja
(1 a 2 CLs) (BELACUBA)
El inicio del tratamiennto SOV en los protocolos convencionales se basa en que la mayora de las vacas
se encuentran en el comienzo de la segunda onda folicular en el da 10, habindose demostrado que la
respuesta SOV es mayor cuando el tratamiento con FSH se inicia en el momento exacto de la
emergencia folicular, en lugar de 1 o 2 das despus. Teniendo en cuenta lo
anterior, los tratamientos convencionales para ser aplicados a un grupo de donantes, presentan varios
inconvenientes:
1.- Se requiere de un sistema de deteccin de celos eficaz, con dedicacin casi exclusiva del personal
encargado y una respuesta del 100% efectiva a la presincronizacin de las donantes, para determinar el
denominado "Celo Base".
2.- Desde el punto de vista prctico, es imposible tener a todas las donantes iniciando una onda folicular
al mismo tiempo y por consiguiente en el mismo da elegido para la administracin de la FSH
3.- El nmero necesario de receptoras sera demasiado grande y dependera del nmero de donabtes,
haciendo an menos prctico el tratar grupos numerosos de donantes, en especial si la TE se efecta
con embriones en fresco.
Los avances obtenidos sobre la dinmica folicular y el manejo del ciclo estral, no han permitido lograr un
mejoramiento en el nmero de embriones transferibles con el tratamiento SOV. Sin embargo, el
desarrollo de protocolos que facilitan el control de la emergencia folicular y la ovulacin han facilitado la
SOV e IATF de las donadoras, sin necesidad de detectar celos. Lo anterior constituye una avance
importante en la aplicacin comercial de la TE por parte de las Centrales de Reproduccin Asistida,
quienes pueden efectuar tratamientos SOV, IATF, TE y TETF de forma masiva. Por otra parte se siguen
presentando algunos inconvenientes que dan lugar a una disminucin en la respuesta a la SOV, o peor
an, una ausencia total de respuesta, los cuales deben ser abocados y solucionados por el profesional.
Con el fin de darle un mejor manejo y tratar un mayor nmero de donadoras, se adaptaron los protocolos
empleados en IATF para la sincronizacin de las ondas folicular y la ovulacin, utilizando GnRH o
Estradioles, junto con progestgenos en implantes auriculares o DIV, adems de PGF2. Lo anterior ha
dado lugar a nuevos protocolos de TE.
Otro mtodo eficaz para sincronizar el desarrollo folicular consiste en la aspiracin de todos los folculos
>5 mm presentes en los ovarios de la donadora, mediante ecografa transvaginal (OPU), con lo que se
produce un aumento significativo de la FSH circulante y el reclutamiento de una nueva onda folicular 1.5
das despus. Se ha empleado la aspiracinsolamente del folculo dominante FD, 2 das antes de
comenzar la SOV, obtenindose una respuesta significativamente mayor que las vacas estimuladas en el
mismo perodo del ciclo, con presencia del FD.
El inconveniente de este mtodo es que hay que dominar la tcnica de aspiracin OPU por parte del
profesional, lo que hace que se adapte ms a Centros de Reproduccin, donde todas las se encuentran
concentradas en un solo lugar, al contrario de la SOV en donadoras a nivel de finca.
Otros trabajos aspiraron los dos folculos ms grandes, sin embargo la diferencia en la respuesta SOV no
ha sido lo suficientemente significativa en relacin con los protocolos SOV convencionales. (BELACUBA)
La posibilidad de elegir la induccin de la emergencia de una nueva onda folicular por medio del
Estradiol, permite iniciar la SOV sin tener en cuenta el estado del ciclo estral, eliminando la necesidad de
detectar celo y esperar 8 a 2 das para administrar el tratamiento con FSH
Como se vio anteriormente el Estradiol suprime la liberacin de FSH e induce la atresia folicular. Cuando
se metaboliza aumenta la FSH y se produce la emergencia de la nueva onda folicular, en promedio a los
4 das despus de su aplicacin. En este momento se inicia la administracin de FSH.
Grfico 4
Por lo tanto, este tratamiento permite el desarrollo de un nmero variable o cohorte de folculos de 3 a 5
mm que crecen al mismo tiempo.
La mayora de los protocolos de sincronizacin de una nueva onda folicular para SOV comprende la
administracin de 2.0 -2.5 mg de BE ms 50 o 100 mg de progesterona IM al momento de insertar un DIV
de P4. Grafico 5.
Las dosis de FSH pueden ser iguales o ser descendentes al igual que el tratamiento convencional para
TE en fresco. La PGF2 se aplica en el da 6 AM-PM. El DIV se retira el da 6 PM. La IA se inicia el da 9
AM-PM y el da 10 AM. La recoleccin de embriones se efecta el da 16. Tabla 13
Un nuevo protocolo que involucra el empleo de un diluyente de liberacin lenta de la FSH. ha aumentado
la eficiencia SOV sin que se incremente al produccin de embriones. El protocolo utiliza 2 aplicaciones de
FSH disuelta en Acido Hialurnico y lo compara con el protocolo convencional de 8 aplicaciones de FSH
disueltas en solucin salina. La produccin de embriones para el protocolo con formulacin de liberacin
lenta fue similar al protocolo tradicional, resaltndose que las hembras necesitan menos manejo, lo cual
reduce las labores y el estrs de las donantes. (TRIBULO)
Grgico 7.
Para evitar la necesidad de observar celos en las donadoras se indujo la sincrona de la ovulacin
mediante el empleo de un protocolo que utiliza un DIV y BE con la administracin de pLH (LUTROPIN)
el DIV. 24 horas despus de retirar el DIV. Los tratamientos SOV se iniciaron 24 horas despus de la
ovulacin y por lo tanto la emergencia de la primera onda folicular. (BO)
Luego de varios experimentos BO et al, adaptaron un protocolo para IATF en donadoras Bos Taurus, sin
la necesidad de detectar celo y sin comprometer las resultados. Grfico 8.
Sin embargo BARUSELLI et al confirmaron que era preferible remover el DIV en la tarde del da 7 (P36),
enseguida de la administracin de pLH o GnRH. As mismo tuvieron xito al realizar una sola dosis de IA
con semen de muy alta calidad 16 horas despus.(BARUSELLI)
Estudios recientes han confirmado que la gran variabilidad individual de respuesta a la SOV est
influenciada por el nmero de folculos presentes en el ovario de la donadora, sin embargo todos los
esfuerzos e investigaciones en este sentido no se han reflejado en un mayor nmero de embriones
suministrados por una donadora. (BO)
La necesidad de inyectar dos veces por da, hace que el tratamiento requiera mxima atencin y resulta a
veces muy difcil de aplicar en algunas explotaciones, reduciendo an ms la posibilidad de su utilizacin
masiva. Adems, cuando el tratamiento es aplicado incorrectamente las vacas no responden, o si se las
trata bruscamente puede causar estrs en algunas donantes, con la consiguiente disminucin de la
respuesta SOV.
Con el fin de reducir el estrs de manejo y la influencia que este tiene sobre la respuesta SOV se
disearon varios experimentos en dode se admiistr una dosis nica de FOLLTROPIN, comparando su
efecto con la administracin de dos dosis mltiples descendentes. Esta dosis nica se diluyo en un
agente de liberacin lenta, SRF de Bioniche Anial Health, siendo la dilucin de mejor respuesta la del
25% y la dosis de SOV de mejor respuesta de 400 mg de FOLLTROPIN-V.
Este protocolo tuvo una respuesta SOV similar a la obtenida con el protocolo convencional de 8 dosis
diarias por 4 das. No hubo efectos adversos del tratamiento sobre crecimiento folicular, el momento de la
ovulacin y la calidad embrionaria, no obstante siendo viscosa la dilucin de SRF empleada, la cual
requiere de cuidados especiales. (BO-TRIBULO 2011)
En el tratamiento 1 el promedio de CLs (15.4 2.5, 18.1 3.4 y 17.2 2.6), el nmero
total de huevos y embriones (12.9 1.4, 15.9 3.5 y 16.2 2.8), y los embriones
transferibles (7.5 2.0, 10.4 2.8 y 8.0 2.1) no hubo diferencias entre los
tratamientos A B y el control.
El siguiente protocolo del Grfico 10, muestra como se puede SOV vacas cada 30 das, sin necesidad de
detectar celos y sin comprometer los resultados.
Este estudio ha demostrado que el control exgeno del inicio de la onda folicular ofrece la ventaja de
poder iniciar los tratamientos SOVs en un momento ptimo para el reclutamiento de folculos,
independientemente del estado del ciclo estral. El protocolo es prctico, facil de seguir por el personal de
la finca y lo ms importante, elimina la necesidad de detectar tanto los celos como la ovulacin y la
consecuente espera de 8 - 12 das para poder iniciar el tratamiento con gonadotropinas.
En la Tabla 15 se encuentra una hoja de calculo en donde al tomar como base la fecha del da de inicio
del protocolo de TE o Da 0, se pueden programar las distintas actividades a realizar, tanto en la
donadora como en la receptora. (VEJARANO)
Grfico 11
Muestra las distintas labores a realizar durante el protocolo completo de TE en fresco y la sincronizacin
que debe haber entre el inicio del tratamiento de la donadora y la receptora, con IATF para que el tero
de la receptora se encuentre en el momento correspondiente a la edad de desarrollo de los embriones a
transferir, por lo que el protocolo en la receptora se inicia 2 das antes del protocolo de la donadora y se
efecta el lavado o recoleccin de embriones en el da 15 del protocolo de TE.
Como vemos hay una gran variedad y multiplicidad de protocolos de SOV para TE, por lo que en la
utilizacin o aplicacin de uno u otro juega un gran papel el criterio y la experiencia del profesional.
RECOLECCION DE EMBRIONES
Luego de su fertilizacin en la ampolla oviductal, los embriones llegan al tero despus del da 5, sin
embargo, ms del 10% puede permanecer en el oviducto al menos hasta el da 8, encontrndose en este
da en la punta del cuerno.
El medio de lavado como el de mantenimiento debe semejarse fsica y qumicamente al medio interno del
tero al momento de su recoleccin. El pH debe mantenerse en 7.5 0.5, co una osmolaridad de 285 a
300 miliosmoles (mMol). Algunos profesionales y Centrales prefieren preparar sus propios medios de
lavado y mantenimiento, de acuerdo a la escuela en donde se especializaron, otros utilizan preparados
comerciales listos para su administracin.
El medio de lavado ms empleado es el Fosfato Buffer Salino -PBS- Dulbecco, adicionado de Suero fetal
Bovino -SFB- inactivado con calor y una solucin adecuada de antibiticos/antimicticos. Igualmente
puede emplearse Albmina Serica Bovina -ASB-. Esta solucin debe prepararse y mantenerse congelada
en pequeas dosis individuales, para facilitar su manejo. El medio derecoleccin contiene de 1 a 2% de
SFB y el de mantenimiento normalmente contiene 10% de SFB, pudiendose almacenar en jeringas de
almacenamiento, las cuales deben tener mbolos plsticos, pues se ha demostrado que los mbolos de
caucho
de las jeringas desechables son txicos para los embriones (MAPLETOFT)
Existe una gran variedad de tcnicas de lavado con porcentajes de xito comparables.
Como requisito previo debe realizarse una anestesia epidural baja, con la administracin de 2 a 3 ml de
lidocana o xiloxaina al 2%.
La inyeccin debe aplicarse lentamente y sin resistencia. A pesar que la relajacin de la cola es
inmediata, la accin sobre el recto y el esfnter del ano requiere aproximadamente 10 minutos. Por otra
parte puede producirse un efecto anestsico incompleto, con una buena anestesia de la cola (flaccidez)
pero insuficiente anestesia de los rganos de internos, causado por lo general por una incorrecta
administracin. En ese caso deber suplementarse o repetirse la dosis.
Es importante destacar que una insuficiente anestesia epidural puede ocasionar el fracaso del lavaje en
animales indciles, en estos casos se recomienda la administracin controlada de tranquilizantes como la
Ketamina o la Xilacina.
En algunos casos es posible la aspiracin de aire dentro del recto, lo que constituye una complicacin
pues este pierde sensibilidad y capacidad de expulsin del aire, para solucionar este inconveniente se
puede hacer retraccin suave del tero al momento de efectuar la evacuacin de la materia fecal.
La tcnica de lavado y recoleccin de embriones consiste en la introduccin del catter, con un estilete
acerado que le da la rigidez necesaria para su paso a travs del crvix, colocndo la punta del mismo en
la parte media de cada cuerno o an ms adentro, con el fin de efectuar el lavado individual de cada uno.
Los puntos de referencia para el avance del catter son el ligamento intercornual, la curvatura uterina y el
extremo anterior del cuerno. Una vez se alcanza la posicin deseada se retira el mandril y se procede a
insuflar el baln con aire o medio. El volumen depende de la edad y tamao del animal, siendo el
operador quien determine finalmente por palpacin la cantidad a administrar.
Si el baln se encuentra en el extremo anterior del cuerno y este no se distiende al inyectar la solucin,
significa que la pared del tero se desgarr o fue perforada con la punta del catter, el medio es
expulsado en la cavidad abdominal, recuperndose solo un volumen reducido teido de sangre.
Existen dos sistemas de lavado o recoleccin de embriones, el de flujo continuo, con un sistema de
circuito cerrado y la recoleccin interrumpida la cual se realiza con jeringa.Cada tcnica tiene sus
ventajas y desventajas, pudindose combinar ambas tcnicas por parte del profesional, segn su criterio
y experiencia.
En el flujo continuo el medio de lavado se introduce
dentro del tero por gravedad.
Otros utilizan un sistema de circuito cerrado de tres vas y jeringas que facilitan la
introduccin de pequeos volmenes de medio.
El medio con los embriones son recolectados en filtros que permiten su separacin a
medida que fluye el medio de lavado, equipos que son desechables. Hay una amplia gama
de filtros que permiten el paso del medio, mientras quedan atrapados los oocitos y embriones dentro del
mismo y se desecha el medio sobrante.
El volumen de medio a inyectar debe ser regulada cuidadosamente por el operador, de manera que se
introduzca la cantidad suficiente para que se produzca dentro del tero la presin de retorno sin que su
exceso provoque dolor. Generalmente se administran 30 a 50 ml, siendo el volumen total de 500 a 700 ml
por cada cuerno, a criterio del profesional. La recuperacin optima del medio no es inferior al 90% del
volumen inyectado, sin embargo se afirma que la mayor parte de embriones y oocitos se obtienen
despus de recuperar 200 ml.
El sistema de jeringa permite la introduccin de una pequea cantidad de medio que produce
un torbellino interno, con lo que se movilizan los embriones, siendo luego extrado
con la misma jeringa de manera alterna y posteriormente pasarlo por los filtros para su
separacin y posterior clasificacin. Una vez terminado el lavado se repite la misma operacin en
el otro cuerno. De acuerdo a la flexibilidad del catter es posible cambiarlo de cuerno sin sacarlo del
tracto genital, para lo cual luego de desinflar el baln, se retira hasta el crvix con el fin de introducir
lentamente el mandril para luego ser dirigido al otro cuerno.
el nmero
Una gua para determinar la cantidad de embriones posibles de recuperar, es la de contar
de CLs presentes en cada ovario, ya que correspondera con el nmero de ovulaciones.
Sin embargo no siempre sucede esto y la razn no se conoce con exactitud, dndose
algunas explicaciones como oocitos no fertilizados, embriones retardados o
degenerados que quedan atrapados en el oviducto o ser reabsorbidos, falta de
experiencia o problemas de lavado an en grupos experimentados.
Una vez se completa el proceso de recoleccin, se efecta el vertimiento del contenido de los filtros en
una caja de Petri, as como una irrigacin y lavado del filtro y el catter para realizar un barrido de los
mismos
EVALUACION DE EMBRIONES
Todas las estructuras encontradas son trasferidas a otra caja para su seleccin individual y conformar un
grupo final para clasificacin.
Cada uno de los embriones es colocado en cajas de seleccin y almacenamiento. Aunque los embriones
son trasferidos luego de su seleccin, es posible conservarlos por algunas horas a temperatura ambiente
en el medio de mantenimiento, el cual es ms enriquecido que el de recoleccin.
ESTRUCTURAS VISIBLES.- En sus estados iniciales las blastomeras son bien definidas, mientras que a
medida que son ms numerosas son menos diferenciables debido a la aglomeracin de las mismas.
REGULARIDAD.- Se aprecian estructuras bien definidas sin deformaciones que indiquen
su degeneracin o muerte.
OPACIDAD.- Los embriones viables poseen refringencia, los degenerados son opacos y en su mayora
son siempre oocitos. La refringencia del embrin es debida a la brillantez de la membrana plasmtica del
embrin.
El embrin ideal debe ser compacto y esfrico. Las blastmeras deben tener tamao, color y apariencia
similares, con un contorno uniforme. La ZP debe ser uniforme, no debe tener fisuras ni estar colapsada y
no presentar detritus celulares en su superficie. El contenido del embrin debe ser fijo. El citoplasma no
debe estar granulado o tener vesculas. El espacio perivitelino, el cual es el espacio existente entre el
embrin y la ZP, debe estar limpio y no contener residuos celulares.
MORULA TEMPRANA.-
Masa de al menos 16 blastmeras individuales difciles de distinguir una de la otra, la cual ocupa la
mayor parte del espacio perivitelino.
MORULA COMPACTA.-
Blastometras agrupadas formando una masa compacta que ocupa el 60 70% del espacio perivitelino.
BLASTOCISTO TEMPRANO.- Las blastmeras organizadas se distienden formando un anillo con una
cavidad o blastocele para ocupar el 60 -70% del espacio perivitelino
BLASTOCISTO.-Dentro de la ZP se observan cambios bien diferenciados de la capa externa del embrin
o Trofoblasto y la Masa Celular Interna, ms oscura y compacta. El blastocele es ms
notorio y el embrin ocupa casi todo el espacio perivitelino.
BLASTOCISTO ECLOSIONADO.-
Los embriones en este estado inician la perdida de la ZP, la cual se rompe y permite la extrusin del
embrin, por lo que se puede observar la salida del mismo por la ruptura dejndolo completamente libre,
siendo evidente la delimitacin del Blastocele y la Masa Celular Interna MCI, o pueden estar colapsados.
Su identificacin puede ser difcil a menos que se re -expandan.
CALIDAD EMBRIONARIA
EXCELENTE.- Embrin esfrico simtrico, con clulas de tamao color y apariencia uniforme, contenido
embrionario fijo y ZP intacta.
BUENO: Presentan pequeas imperfecciones como blastmeras extruidas, de menor tamao, forma
irregular con algunas vesculas.
REGULAR: Los defectos son ms definidos, con blastmeras extruidas, vesculas y clulas degeneradas.
MALO: Las blastmeras extruidas son numerosas as como las clulas degeneradas de diferentes
tamaos, vesculas grandes y numerosas, aunque aparentemente se ve una masa embrionable viable.
Generalmente no son de calidad trasferible.
Los cdigos establecidos por la IETS para clasificar embriones se encuentran entre 1 a 4.
Cdigo 1.- Excelente o bueno. Embriones simtricos y esfricos, con masa embrionaria constituida por
blastmeras de tamao, color y densidad uniforme. Se encuentran en estado correspondiente al de la
edad de recoleccin. Se pueden observar irregularidades menores con al menos el 85% de masa celular
viable e intacta. El material extruido en el espacio perivitelino no mayor del 10%. La ZP debe ser lisa y no
presentar superficies cncavas o planas que puede ocasionar que el embrin se adhiera a las pajillas o
cajas de Petri.
Cdigo 2.- Regular. Alteraciones moderadas en la forma, tamao, color y densidad de la masa
embrionaria y de las clulas individuales. Al menos el 50% de la masa embrionaria debe ser viable e
intacta.
Codigo 3.- Malo. Marcas irregulares en la masa embrionaria, tamao, color y densidad de las clulas. Un
25% de la masa embrionaria viable e intacta.
Estos embriones junto con los oocitos no son viables para trasferencia.
El manual de la Sociedad Internacional de Transferencia de Embriones IETS dice, "Se debe reconocer
que la evaluacin visual de embriones es una evaluacin subjetiva de un sistema biolgico y no es una
ciencia exacta. Existen adems otros factores, como las condiciones medioambientales, la calidad de las
receptoras y la habilidad de los tcnicos, que juegan un papel muy importante en la obtencin de
gestaciones a partir de los embriones transferidos. Se ha reconocido tambin que existen muchos
sistemas diferentes usados para clasificar embriones, siendo unos ms sofisticados que otros. El criterio
para asignar un cdigo de calidad en los formatos estandarizados, fueron simplificados para ser
amigables con el usuario. Generalmente, a menos que se especifique otra cosa, solamente los
embriones clasificados con Cdigo 1 podrn ser utilizados en el comercio internacional". (IETS)
En una misma recoleccin es posible encontrar una considerable variedad de estados de desarrollo
embrionario en un momento determinado. El da 7 despus de l IA pueden encontrarse mrulas y
blastocitos en eclosin. Al mismo tiempo, se pueden encontrar embriones de excelente calidad y
embriones no fertilizados y degenerados. El hecho de encontrar grandes variaciones en la calidad y el
estado de desarrollo embrionario generalmente indica que los embriones con apariencia normal pueden
estar sujetos a estrs alterados y por consiguiente los ndices de preez no son satisfactorios. Los
embriones de excelente y buena calidad, en estados de desarrollo de mrula compacta a blastocito
producen ndices de preez ms altos, an despus de haber sido congelados. Los embriones regulares,
de baja calidad o malos producen ndices de preez bajos despus de congelados, por lo que deben ser
transferidos en fresco. Es recomendable escoger el estado de desarrollo del embrin acorde con la
sincrona de la receptora. Los embriones clasificados como regulares o pobres tienen mayor posibilidad
de sobrevivir si son trasferidos a las receptoras con mejor sincrona.
Una vez seleccionados los embriones a trasferir se deben efectuar varios lavados, con el fin de
eliminar moco o clulas adheridas a la ZP, de tal manera que se aslen en un estado de
limpieza ptimo.
Actualmente la TE se efecta por la tcnica no quirrgica para lo cual se utilizan varios tipos de
catteres, unos con mandril y otros rgidos con adaptadores para la pajilla.
Con la hembra asegurada en el brete, se procede al lavado y desinfeccin del tren posterior y los
genitales externos. Luego se aplica una anestesia epidural baja, con el fin de relajar el cuello y facilitar la
introduccin del catter. Enseguida se arma la pistola con la pajilla del embrin a transferir.
El catter se introduce en la vagina, de la misma manera a como se procede en la IA, hasta llegar a la
parte anterior del cuerno uterino, para dirigirlo posteriormente a la punta del cuerno
ipsilateral al CL, previamente identificado.
Desde la iniciacin del TE se ha hecho nfasis en la necesidad de lograr una sincronizacin entre la
edad cclica del tero de la receptora con la edad de desarrollo del embrin, tanto para su transferencia
en fresco como de embriones congelados.
Con el manejo del ciclo estral, mediante protocolos hormonales para IATF se ha conseguido este
objetivo, sin embargo hay dos tendencias bien definidas.
La segunda consiste en la realizacin de los protocolos para IATF en las receptoras, detectar el celo y
utilizar las que presenten celo en el tiempo anotado anteriormente, o efectuar la transferencia a las
receptoras a Tiempo Fijo sin la necesidad de detectar celos. Por consiguiente el primer aspecto de
seleccin de la receptora a tener en cuenta en la TE, adems de la condicin corporal y la ciclicidad, e
independientemente del mtodo de sincronizacin que se utilice es la sincronizacin y la deteccin de
celos.
En la Tabla 16se presenta los resultados relacionados por el Dr. Gabriel Velez junto con
otros profesionales, que dan una idea y pueden servir de gua a seguir en el ejercicio de
la Reproduccin Asistida.
Las receptoras sincronizadas con PGF2 deben tratarse 12 a 24 horas antes de la donadora, ya que la
PGF2 induce la presentacin del celo 60 a 72 horas de su aplicacin. (KASTELIC)
El xito de los programas de sincronizacin de celos depende del entendimiento de las siguientes reas:
1.- La fisiologa del ciclo estral bovino (descrito anteriormente),
2.- Agentes farmacolgicos y sus efectos sobre el ciclo estral de las vacas.
3.- Factores de manejo del rebao que puedan reducir el anestro e incrementar las tasas de
concepcin. (MAPLETOF)
Un primer factor de seleccin de la receptora es el da de transferencia a la receptora.
Lo anterior ha sido corroborado por otros trabajos (BARUSELLI SPELL) y de hecho, el tamao del CL y
la concentracin de P4 al momento de la TE es una variable considerada determinante para el
establecimiento de la preez. Por esta razn, la medicin del CL es un parmetro de seleccin de las
receptoras.
Al mismo tiempo que se determina el tamao del CL mediante palpacin y ecografa, se determina
el ovario en que se encuentra, ya sea el derecho o el izquierdo, lo cual es importante
para que al momento de realizar la transferencia esta se efecte en el cuerno ipsilateral
al CL del ovario de la receptora.
De otra parte hay que tener en cuenta que al momento de seleccionar las receptoras el da de la
transferencia se presenta una gran variacin en cuanto a su clasificacin como aptas y no
aptas. Segn VELEZ un 25% de las receptoras sincronizadas no se van a poder utilizar en la
transferencia.
y minerales en las receptoras dentro de un
La administracin de complejos vitamnicos
programa de mejoramiento y preparacin del grupo de receptoras previo a su
inclusin en protocolos de TE, aumenta la capacidad y el porcentaje de pegamiento
de embriones.
CONGELACION DE EMBRIONES
La congelacin de embriones es una tcnica que se aplica cuando hay disponibilidad de embriones de
excelente calidad que no son trasferidos en fresco y pueden aprovecharse en procesos posteriores. Su
objeto es la reducir los procesos metablicos del embrin a su mnima expresin y se puedan conservar
el mayor tiempo posible y garantizar que en el momento de su utilizacin luego de la descongelacin
conserven su viabilidad y por lo tanto lleguen a terminar en una gestacin.
La congelacin de las clulas vivas es un proceso fisico - quimico complejo de intercambio de agua entre
la clula y el medio que la rodea, existiendo un ndice de enfriamiento ptimo para cada tipo de clulas, lo
cual depende del tamao de la clula, el radio entre su superficie y su volumen, su permeabilidad al
agua y el coeficiente de temperatura de esa permeabilidad.(PALASZ)
Normalmente, el medio que contiene los embriones se enfra por debajo de su punto de congelacin sin
formar cristales de hielo, fenmeno conocido como sper-enfriamiento. Luego, a una temperatura ms
baja, ocurre la formacin de ncleos de hielo, seguida por un rpido incremento en la temperatura debido
a la liberacin del calor de fusin latente. Para evitar un superenfriamiento muy extenso, se debe inducir
la cristalizacin del hielo en el medio extracelular ms menos a 2C por debajo de su punto de
congelacin (-4 a -7C), por medio de la induccin de la formacin de un cristal de hielo en el medio.
Esto se conoce en ingles como "seeding" o siembra. El agua en las clulas del embrin y entre los
cristales de hielo por fuera del embrin, no se congela a esa temperatura porque los solutos presentes
disminuyen el punto de congelacin. Durante el enfriamiento posterior y el agrandamiento de los cristales
de hielo, la concentracin de solutos se incrementa y el embrin responde osmticamente perdiendo
agua dentro del medio extracelular que no se ha congelado.
Las clulas se daan durante los procesos de congelacin y descongelacin principalmente por los
efectos de la solucin y la formacin de hielo intracelular. Esto ltimo, es especialmente daino cuando
se forman cantidades relativamente abundantes de cristales grandes.
En la actualidad se prefiere utilizar el etilenglicol con crioprotector, ya que no necesita ser removido del
embrin antes de la trasferencia como sucede con el glicerol utilizado en un principio.
Los embriones seleccionados son colocados en el medio de congelacin a base de PBS suplementado
con SFB al 10-20% y 1.0 a 1.5 M de etilenglicol, a temperatura ambiente (20C), dejndolos por 8 a 10
minutos para permitir que el crioprotector se equilibre dentro de las clulas embrionarias. Durante este
perodo de equilibrio se empacan los embriones en pajillas francesas de 0.25 a o.5 ml, las cuales se
sellan.
A partir de 2009 ms del 99% de los embriones de vacas de carne y leche en los Estados Unidos han
sido congelados en Etilen Glicol por la American Embryo Transfer Association (AETA) para una
Trasferencia Directa TD.
Una vez empacadas se colocan inmediatamente en la cmara del congelador a una temperatura de -6 a -
7C, donde se dejan por 5 minutos, en vapores de nitrgeno.
Luego se induce la cristalizacin del hielo en el medio extracelular o seeding mediante la aplicacin de
una pinza hemosttica o un topito de algodn preenfriado en el nitrgeno lquido, tocando la pared
exterior de la pajilla, teniendo cuidado de no tocar la columna del medio que contiene el embrin. Debe
observarse una mancha blanca por debajo del menisco donde se aplic la pinza, lo que confirma que el
proceso de cristalizacin se ha llevado correctamente.
Se recomienda que el proceso de cristalizacin se realice individualmente y no en conjunto de la totalidad
de los embriones a congelar. La tcnica correcta es empacar un embrin, colocarlo en la criocmara e
inmediatamente realizar la cristalizacin de la pajilla en forma individual. Se deben mantener las pajillas
a esta temperatura por 10 minutos ms para permitir que la cristalizacin del medio alcance su
equilibrio. Luego se enfran los embriones a una tasa de 0.3 a 0.8 C/min hasta alcanzar una
temperatura de entre -30 y -40C, y enseguida colocan las pajillas en una cnula plstica para despus
ser depositadas en un gobelet y sumergidas posteriormente en nitrgeno lquido a -196C dentro de un
termo para su almacenamiento. (MAPLETOF)
La descongelacin de los embriones se realiza colocando las pajillas dentro de un recipiente de agua
tibia con temperatura entre 20 Y 35C. Se ha demostrado que se redujo la incidencia de fracturas
en la ZP cuando las pajillas eran descongeladas exponindolas solamente al aire, o
cuando se descongelaban exponindolas primero al aire por 10-15 segundos para
luego llevarlas al bao mara a 35C.
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FERTILIZACION IN VITRO
Este captulo estar dirigido a presentar y analizar los diferentes aspectos relacionados
con la especie bovina, su aplicacin, desarrollo y avances obtenidos a nivel nacional.
En la actualidad existe un gran nmero de Profesionales y Compaas de Reproduccin
Asistida que ofrecen este servicio, algunas de las cuales han sido citadas en el primer
captulo del presente Manual De Biotecnologa Reproductiva En Bovinos
La primera cra en bovinos obtenida por FIV fue un ternero nacido el 9-06-
1981. (BRACKETT)
1.- Logra un mejoramiento gentico del hato ms gil en un menor tiempo, acortando el
perodo generacional, utilizando hembras de alta produccin y
reproductores probados.
2.- Esta tcnica no altera los ciclos reproductivos de la donadora, por lo que no hay
necesidad de aplicar gonadotropinas, evitando efectos secundarios por el empleo de
FSH.
3.- Se logra una mayor cantidad de embriones por donante ya que la aspiracin folicular
puede realizarse a intervalos cortos. Igualmente puede ejecutarse en hembras
gestantes o poco despus del parto.
4.- La FIV est indicada en hembras de alta produccin que no son aptas para un
proceso de TE convencional, por deformaciones anatmicas que impiden la fertilizacin
y/o el lavado de los embriones, como el cuello en S, o que no responden al tratamiento
superovulatorio MOET (Multiovulacin y Transferencia de Embriones). As mismo est
indicada en hembras que han sido eliminadas de la reproduccin por afecciones que no
alteran el funcionamiento ovrico, como metritis, complicaciones post quirrgicas o
lesiones podales, vacas repetidoras (RODRIGUEZ)
2.- Los embriones producidos in vitro son de menor calidad que los obtenidos in vivo,
existiendo entre ellos numerosas diferencias.
Los embriones producidos in vitro son ms oscuros y de menor densidad por su mayor
contenido citoplasmtico de lpidos. Tienen un menor nmero de blastmeras, en
especial a nivel de la masa celular interna, una zona pelcida ms frgil, reduccin del
espacio perivitelino y mayor velocidad de desarrollo. Adems presentan alteraciones
de comunicacin intercelular, con una expresin anormal de las protenas que forman
las uniones Gap, un mayor contenido de triglicridos y menor de otros lpidos,
alteraciones de la expresin gentica, mayor incidencia de apoptosis.
3.- Existe una mayor divergencia en el desarrollo de los embriones obtenidos in vitro
respecto de los obtenidos in vivo, ya que los segundos dependen del momento de la
ovulacin y la fecundacin, sin embargo, en el modelo in vitro el momento de la
fecundacin es ms preciso y por lo tanto tiene una mayor sincronizacin (PALMA)
4.- Los embriones in vitro tienen menor resistencia a la criopreservacin, siendo uno de
sus principales problemas, ya que la supervivencia despus del congelamiento es
menor que el de los embriones producidos in vivo, lo cual dificulta su conservacin a
largo plazo. Por lo tanto, estos embriones son transferidos preferiblemente en fresco, lo
cual requiere de la sincronizacin de las receptoras con la produccin de
embriones. (COLAZO)
La TEs producida por FIV en 2011 en Sur Amrica fue de 373.836, siendo el Brasil el
pas en donde se logr el mayor nmero de TE-FIV 318.119, representando el 85% del
total. En Colombia se lograron 30.000 TE-FIV, con un crecimiento del 900% en 10
aos. (GOMEZ)
A pesar de las limitaciones de la tcnica, Brasil ha mostrado un fuerte impulso para
reemplazar la TE por OPU / PIV. Esto se debe a una peculiaridad del ganado ceb (Bos
indicus), dado que las vacas suelen tener ms folculos ovricos y ms ovocitos
recuperados por OPU en comparacin con el ganado Bos taurus.(PONTES)
No hay ninguna explicacin aparente para esta diferencia biolgica intrigante. Sin
embargo, la informacin disponible en la mayora de OPU/PIV en Brasil se obtuvo en
Nelore, responsable de aproximadamente el 80% del rebao brasileo (cerca de 200
millones de animales) Las razas cebunas siguen representando la mayora de los
embriones producidos en Brasil, con 94,0% del total. (PONTES).
Segn ASOCEBU durante 2012 se increment el Fertilizaciones In Vitro, para un total de
4367. Para 2012, el incremento de la Transferencia de Embriones fue de un 3.52%
frente a 2011, reportndose 4112 lavados al finalizar el ao, de los cuales 906 fueron
embriones frescos, 3113 In Vitro y 93 congelados. (Revista El Cebu 391 Marzo-Abril
2013)
En la Tabla 2 se pueda apreciar cual ha sido la Evolucin de la TE-FIV en Colombia
de 2.008 a 2.012 en donde se ha logrado un mejoramiento efectivo del 9.6% en el
porcentaje de preez, en 5 aos. (GOMEZ 2013)
RECOLECCION DE OVOCITOS
Los ovarios deben ser obtenidos enseguida del sangrado de los animales,
efectundose un primer lavado con solucin salina, para eliminar la sangre y
adherencias. El transporte puede hacerse en solucin salina o PBS con antibiticos a
temperatura ambiente.
Yang y col. Fueron los primeros en estudiar el tiempo de conservacin de los ovarios a
24-25C. Los autores observaron que el transporte de los ovarios durante 11 horas no
disminuy la vitalidad de los oocitos obtenidos, lo cual constituye un aspecto prctico
importante al permitir el procesamiento de material recolectado a grandes distancias.
Sin embargo las temperaturas ambientales entre 30C y 35C alteran el tiempo de
procesamiento el cual debe hacerse dentro de las 2 horas de su obtencin. Cuando los
ovarios se conservan durante 24 horas a 21C, 18C y 15C los porcentajes de divisin
y de blastocistos no fueron diferentes del grupo a 25C durante 4 horas. La refrigeracin
de los ovarios a 4C durante 12 24 horas no afect la tasa de divisin. (PALMA)
Una vez llegan los ovarios al laboratorio deben procesarse en condiciones aspticas y
bajo una cmara de flujo laminar. Se lavan 3 veces en medio de transporte, se secan
con gasa o papel absorbente estril, se depositan en recipientes trmicos que
contienen solucin salina o PBS con antibiticos (Penicilina G sdica 100 UI/ml + 100
g/ml de Sulfato de Estreptomicina) y se procede a la obtencin de los ovocitos para el
proceso de FIV. (REA)
TECNICA DE DISECCION
La tcnica de diseccin consiste en
efectuar varios cortes en el estroma ovrico y mediante presin del mismo producir la
expulsin de los ovocitos.
Sin retirar la aguja del ovario se busca un nuevo folculo para aspirarlo. Se aspiran
folculos entre 2 a 6 mm de dimetro. Los ovocitos de folculos bovinos con un dimetro
menor se encuentran todava en fase de crecimiento y no han adquirido aun la
capacidad para madurar. De otra parte los ovocitos provenientes de folculos de ms de
10 mm presentan un mayor nmero de ovocitos degenerados.(GONZALEZ)
Los ovocitos aspirados son depositados en un tubo de ensayo, dejndolos en reposo
durante 30 minutos, en incubadora a 39C, 5% de CO2 y 100% de humedad, con el fin
de favorecer la precipitacin del sedimento compuesto por ovocitos, clulas de
descamacin, sangre. Con posterioridad se aspira el sedimento con una pipeta y se
coloca en una caja de Petri con medio TCM 199 temperado, para la correspondiente
seleccin bajo el estereoscopio.
OVARIECTOMIA
El inters por las razas cebunas lecheras se debe a su capacidad de adaptacin para
producir grandes cantidades de leche bajo condiciones de estrs tales como altas
temperaturas, parsitos y pastos pobres. El incremento del mtodo de la PIV
en donantes Gyrholando se ha debido al aumento de la eficiencia del uso de semen
sexado para la fertilizacin in vitro, lo que facilita la produccin de un gran nmero de
hembras para la industria lctea. (XU)
En El Grfico 3 se presenta el comportamiento de OPU en las
diferentes razas bovinas en Colombia.
GOMEZ.
Es notorio y sin explicacin alguna cmo ciertas hembras han producido cientos de
ovocitos en un solo procedimiento OPU, sin ningn tipo de estmulo. SENEDA obtuvo
251 ovocitos por una sola vez, al igual que otros profesionales, lo cual indica la
existencia de una variacin individual en la produccin de ovocitos de donantes Bos
indicus, en donde el Nelore presenta una especial caracterstica solo en la produccin
de embriones in vitro. (RAFAGNIN)
En la Tabla 3 se muestra los resultados obtenidos por el Dr Ramn Gomez, lo cual
corrobora lo expuesto en tal sentido por otros autores.
Hay animales con un buen potencial para la OPU/PIV, debido a que presentaN de
forma natural muy altos promedios de ovocitos y por consiguiente buen nmero de
embriones y preeces. Muchos criadores han identificado hembras cuya progenie es
muy buscada y fcilmente vendible, por lo tanto esas hembras son usadas
exclusivamente para PEIV.
En la Tabla 4 se puede observar el desenvolvimiento de la vaca 118/2 durante los
aos 2008-2012 en un programa de PEIF. (GOMEZ)
Con referencia a la edad, en las hembras prepuberes los ovocitos han demostrado una
gran reduccin de desarrollo al estado de blastocisto debido a la poca influencia de las
gonadotropinas en este perodo, de otra parte las hembras viejas producen ovocitos
con bajo porcentaje de desen arrollo y de baja calidad debido a las pocas capas de las
clulas del cmulo.
Puesto que los ovarios de hembras gestantes mantienen su actividad durante la preez,
es posible la recuperacin de los ovocitos hasta el da 100 de gestacin o hasta el
momento en que el profesional pueda retraer los ovarios sin mayor esfuerzo.
Igualmente est indicada en hembras de alta produccin con problemas reproductivos
no ovricos como alteraciones de tipo anatmico del tracto reproductivo, afecciones
podales y/o hembras repetidoras.
Por lo anterior desde el punto de vista prctico y comercial, las hembras a aspirar deben
ser jvenes, hijas de vacas de alta produccin o hembras adultas con registros
actualizados, en su pico de produccin.
De otra parte hay consenso sobre la Condicin Corporal (CC), en la que las donantes
con baja CC
producen ovocitos con menos capacidad para desarrollarse al estado de blastocis
to, y hay evidencias de que las donantes sometidas a estrs tendran ovocitos
menos competentes.
Existen estudios que sugieren diferentes das del ciclo estral para realizar la OPU (das
3-4, 9-10, 15-16 despus del estro) y a diferentes intervalos de una o dos veces a la
semana.
MERTON et al sugiere que la mejor tasa de recuperacin se presenta cuando el
intervalo entre punciones es de 7 das, al compararlo con protocolos que utilizan
intervalos de 3 o 4 das.
GALLI et al observaron que la OPU realizada dos veces a la semana, produca el mayor
nmero de ovocitos recolectados con la calidad adecuada para la PIV.
La tasa de preez se encuentra alrededor del 50% para los embriones en fresco y cerca
del 40% para embriones congelados, siendo la tasa de nacimientos menor en un 5-10%
que la tasa de preez. Estos resultados varan ampliamente en los diferentes
programas de FIV. (WAGTENDONK-de LEEUW)
La puncin continua, dos veces a la semana, tiene una gran influencia sobre el ciclo
estral, al modificar la funcin endocrina y los mecanismos de crecimiento folicular, lo
que conduce a que se presenten intervalos irregulares o ausencia de estros. Las
punciones en sesiones frecuentes pueden dar lugar a una disfuncin o ausencia del CL
y a una produccin inadecuada de Progesterona. TAKENOUCHI et al sugieren que si la
OPU se limita a los das 0 y 12 del ciclo, la influencia de la dinmica folicular puede
disminuirse o eliminarse. BAGE et al afirman que en protocolo de dos veces a la
semana, limitados a la primera mitad del ciclo estral, en novillas, estas presentan
intervalos estrales normales. (PFEIFER)
Se ha demostrado que la perforacin del fornix vaginal cura rpidamente y solo en
pocas oportunidades se presentan inflamaciones o procesos infecciosos del tracto
genital. Puede desarrollarse en algunos casos hematomas en la regin perivaginal, no
siendo un problema grave para la donante. La puncin de los ovarios puede dar lugar a
fibrosis o adherencias, en especial en vacas sometidas a aspiraciones seriadas en
perodos cortos, igualmente se ha observado mineralizacin del folculo o del
parnquima ovrico, as como engrosamiento del epitelio ovrico, lo cual da lugar a una
disminucin de la actividad ovrica. El riesgo de secuelas consecutivas a la OPU existe
y debe tenerse en cuenta, por lo que el procedimiento debe realizarse de manera
cuidadosa.
TECNICA OPU
Para llevar a cabo la tcnica de aspiracin folicular in vivo se requiere contar con un
equipo de ecografa, un transductor sectorial, una bomba de aspiracin controlable y un
sistema gua de la aguja.
Contrario a las expectativas sobre que el bisel corto sera ms eficiente, ms fcil y
rpido de introducir en el interior del folculo, se ha reportado una mayor recuperacin y
calidad de los ovocitos cuando se utilizaron agujas con bisel largo. La razn sera que el
corte del bisel largo permite una superficie ms amplia de la punta de la aguja lo que
facilita la penetracin dentro del folculo y evita la posibilidad de fuga del contenido
folicular. (SENEDA)
En la pantalla del ecgrafo podemos ubicar y visualizar los folculos, as como apreciar la trayectoria de la
aguja, la aspiracin del contenido folicular, la reduccin del espacio ocupado por folculo y el xito de la
aspiracin
http://www.youtube.com/watch?v=Wm4Khn6MVbc
Luego de completar la aspiracin de los folculos en cada uno de los ovarios, los
ovocitos son depositados en un recipiente con medio de cultivo para con posterioridad
ser seleccionados con el fin de iniciar el proceso de maduracin.
MEDIOS DE CULTIVO
Para que se efecten a nivel de laboratorio las diferentes etapas de desarrollo y
fertilizacin del ovocito, as como el crecimiento del embrin y su capacidad de ser
transferido, es necesario contar con medios de cultivo celular adecuados, cuyos
requerimientos fisiolgicos para el mantenimiento y desarrollo de los embriones son
fundamentales y sus mrgenes de variacin reducidos.
5.- Elementos orgnicos como fuente adicional de protenas. Entre estos tenemos el
pH = El pH debe estar entre 7.2 y 7.4 para cultivo, mientras que para el medio de
fecundacin se recomienda un pH superior 7.6 7.8.
Insolubilidad
SELECCION DE OVOCITOS
El desarrollo in vitro de los ovocitos est ntimamente relacionado con la aptitud que
adquieren durante su etapa folicular previa. El folculo es una estructura ovrica con dos
funciones, produccin de hormonas y de ovocitos aptos para ser fecundados. Las
mismas son llevadas a cabo por los folculos antrales, los cuales poseen una pared
interna de clulas de la granulosa que se apoyan sobre la membrana basal. Esta matriz
extracelular separa las capas epiteliales del mesnquima y afecta la migracin celular,
proliferacin y diferenciacin de las clulas que se apoyan en ella.
Diversos autores han tratado de establecer una relacin entre el aspecto del citoplasma
y la competencia del ovocito para madurar, ser fecundado y soportar el desarrollo
posterior. As, se ha comprobado que los ovocitos que presentan un ooplasma oscuro
muestran una acumulacin de lpidos y un buen potencial para el desarrollo, mientras
que los que presentan un citoplasma plido tienen una baja densidad de orgnulos y
escaso potencial de desarrollo. Por otra parte, cuando el ooplasma es negro, los
ovocitos estn envejecidos y tienen un potencial muy bajo para soportar el desarrollo
(Nagano et al., 2006) (HERRADON)
Grado II (GII) - Cumulus compacto que rodea completamente el ovocito, con menos de
tres capas de clulas. Ooplasma con granulaciones distribuidas heterogneamente, que
pueden estar ms concentradas en el centro y ms claro en la periferia o condensadas
en un solo lugar en donde se ve una mancha oscura.
Grado III (GIII) Oopplasma contrado, con espacio entre la membrana celular y la
zona pelcida, llenando el espacio perivitelino de manera irregular.
En este grupo se encuentran:
Desnudo - No cubiertos por clulas del cmulo o cubiertos en parte por ellas.
Los ovocitos una vez retirados de los ovarios, no estn aptos an para ser fecundados
e iniciar el desarrollo embrionario inicial, por lo que es necesario que sufran una serie
de modificaciones estructurales y bioqumicas en el Ncleo (Maduracin Nuclear)
y en el Citoplasma (Maduracin Citoplasmtica) para poder adquirir la capacidad de
ser fecundados, lo que en conjunto se denomina Maduracin Ovocitaria.
La maduracin del ovocito es la ltima de una serie de etapas que debe atravesar una
clula germinal femenina para adquirir la capacidad de ser fecundada y dar origen a un
nuevo individuo. Durante esta ltima etapa el ovocito sufre profundos cambios a nivel
nuclear y citoplasmticos que son regulados paracrinamente por una compleja
comunicacin bidireccional con las clulas somticas que lo rodean. Esta regulacin
local es coordinada por factores endocrinos que son secretados en forma cclica. Como
resultado de la interaccin entre los diferentes niveles de regulacin, paracrina y
endocrina, solo unos pocos ovocitos son seleccionados para iniciar la etapa de
maduracin a lo largo de la vida frtil, mientras que la mayor parte degeneran en
atresia. Al final de la etapa de maduracin ocurre la ovulacin, y el ovocito es, durante
un corto perodo de tiempo, una clula completamente competente capaz de dar origen
a un nuevo individuo si es fecundada en un momento determinado. (LATTANZI)
Existe una relacin entre el dimetro del folculo y el desarrollo del ovocito y su
capacidad de desarrollo in vitro. As ovocitos procedentes de folculos pequeos (1-2
mm) logran la maduracin nuclear pero son inmaduros citoplasmticamente. De otra
parte ovocitos procedentes de folculos medianos (2-5 mm) o grandes (5-8mm) tienen
un mayor porcentaje de lograr la maduracin nuclear y alcanzar el estado de
blastocisto. La competencia meitica aparece cuando el ovocito alcanza el 80-90% de
su tamao, pero hasta, que no alcanza su tamao mximo no puede completar la
maduracin citoplasmtica.
La tasa de maduracin nuclear aumenta con el dimetro del ovocito, lo que sugiere que
los ovocitos con dimetro inferior a 110 m estn an efectuando la sntesis de ARN y
por consiguiente todava se encuentran en fase de crecimiento y por consiguiente no
han completado la maduracin nuclear y citoplasmtica en el momento de la FIV.
Cuando el dimetro ovocitario supera los 110 m la mayora de los ovocitos se
desarrollan hasta MII. (GONZALEZ)
Tabla 6
Todos estos eventos que tienen lugar normalmente en el animal, deben llevarse a cabo
a nivel de laboratorio durante el proceso de Maduracin IV.
La expansin de las clulas del cumulo y la aparicin de los cuerpos polares son los
sntomas ms significativos de que la maduracin del ovocito sigue un curso normal.