CSL Behring

Olivos
PROCEDIMIENTO DE OPERACION ESTANDAR (SOP)

Departamento: CALIDAD SOP N: B001

rea: Control Bioanaltico
Tema: Instrucciones y Control de Uso de Cepas Vlido desde:

I. PROPOSITO
Este procedimiento tiene por objetivo establecer las instrucciones de uso de las cepas en el laboratorio de
Microbiologa.

II. ALCANCE
Comprende la recepcin y disposicin de las cepas as tambin la preparacin y controles de las suspensiones de
los microorganismos.

III. RESPONSABILIDADES
Este procedimiento involucra a los analistas del laboratorio de Control Bioanaltico.

IV. PROCEDIMIENTO
Este procedimiento de operacin tiene en cuenta los siguientes documentos/farmacopeas:
F. Europea
USP
MicroBiologics inc

IV.1. Microorganismos
Los microorganismos EZ-CFU One Step cumplen con lo establecido en el Artculo 5 del Reglamento (CE) n.
1069/2009 ya que han alcanzado el punto final en la cadena de fabricacin, por lo que ya no estn sujetos a los
requisitos del Reglamento (CE) n. 1069/2009. Los productos se consideran productos derivados de acuerdo con el
Artculo 36 del Reglamento (CE) n. 1069/2009 y no presentan un riesgo significativo a la salud pblica o animal
Los microorganismos viables utilizados para la inoculacin son de 4 pasajes o menos, extrados del cultivo original
de referencia. Estos microorganismos son provenientes de la empresa MicroBiologics.

Las cepas presentes en el laboratorio son las siguientes:

Bacillus subtilis ATCC 6633
Clostridium sporogenes ATCC 19404
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Escherichia coli ATCC 8739
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus brasiliensis ATCC 16404
Salmonella sp: Se recomienda la utilizacin de Salmonella enterica spp. enterica serotipo abony NCTC 6017 por no
ser patognica o Salmonella enterica spp. enterica serotipo typhimurium ATCC 14028.

Estos microorganismos son trazables a la Coleccin Americana de Cultivos Tipo (American Type Culture Collection,
ATCC) u otra coleccin autntica de cultivos de referencia.

IV.2. Especificaciones y Rendimiento

Los microorganismos EZ-CFU One Step estn envasados en un kit. Cada kit contiene:
2 frascos con 10 grnulos liofilizados por unidad de una nica cepa de microorganismos
10 frascos de lquido hidratante con 2 ml de lquido hidratante por unidad
Cuando se procesan segn las instrucciones, los microorganismos EZ-CFU One Step proporcionan una
concentracin de provocacin de entre 10 y 100 UFC por cada 0,1 ml en medios no selectivos.
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La documentacin del control de calidad incluye, entre otros documentos, un Certificado de ensayo desprendible en
el que consta:
La identidad de los microorganismos;
La trazabilidad del microorganismo a un cultivo de referencia;
Que la preparacin del microorganismo est a cuatro pasos o menos del cultivo de referencia;
El valor promedio del ensayo para la preparacin de microorganismos.

IV.3. Precauciones de seguridad

Los microorganismos EZ-CFU One Step no contienen ninguna de las sustancias peligrosas enumeradas en la
Directiva 67/548/CEE o en la Directiva 1272/2008/CE.
Estos dispositivos y el crecimiento de estos microorganismos se consideran materiales de riesgo biolgico.
Estos dispositivos contienen microorganismos viables que pueden provocar enfermedades. Se deben emplear
tcnicas apropiadas para evitar la exposicin y el contacto con cualquier cultivo de microorganismos.
El laboratorio de microbiologa deber estar equipado y contar con instalaciones para recibir, procesar, mantener,
almacenar y eliminar materiales de riesgo biolgico.
Solo el personal de laboratorio capacitado debe utilizar estos dispositivos.
Existen organismos y estatutos que regulan la eliminacin de todos los materiales de riesgo biolgico. El personal
del laboratorio deber realizar la eliminacin apropiada de los materiales de riesgo biolgico y cumplir con ella.
Los microorganismos EZ-CFU One Step no estn fabricados con ltex de caucho natural.
El material utilizado (tips, etc.) deber ser descartado en una solucin de hipoclorito de sodio al 1%.
Luego de trabajar con microorganismos se deber sanitizar todas las superficies de trabajo con una solucin de
hipoclorito de sodio al 1% y Etanol al 70%.

IV.4. Preparacin de cepas.

a. Preparacin del material

Todos los materiales necesarios para el procedimiento de provocacin y los materiales que se sometern a este
procedimiento deben estar listos para usar inmediatamente despus de realizar la hidratacin.
Luego de hidratar la cepa liofilizada, las inoculaciones del procedimiento de provocacin deben completarse dentro
de las 8 horas. La suspensin restante debe refrigerarse a una temperatura de entre 2 C y 8 C entre cada uso para
evitar que se modifique la concentracin de la suspensin de provocacin. Los productos con nmeros de catlogo
0320Z y 0318Z son excepciones a la estabilidad de 8 horas y se deben usar dentro de los 30 minutos.

b. Hidratacin
Las instrucciones y el lquido hidratante proporcionados en el kit deben utilizarse durante el procedimiento de
hidratacin. El lquido hidratante est formulado para optimizar la hidratacin, la disolucin de la matriz del grnulo y
la suspensin uniforme de los microorganismos liofilizados. Es posible que cualquier otro lquido que pueda utilizarse
para la hidratacin no proporcione estas propiedades esenciales. Solo utilice el lquido de hidratacin que se incluye
en el kit para un organismo especfico. (Nota: el lquido hidratante para usar con Pseudomonas presenta una
formulacin diferente).

b.1. Pasos a seguir para la Hidratacin

1. Retire el frasco con los grnulos liofilizados del almacenamiento refrigerado, que debe encontrarse a una
temperatura de entre 2 C y 8 C. Antes de abrir el frasco, espere aproximadamente 30 minutos para que los
materiales alcancen la temperatura ambiente.

2. Mientras tanto, precaliente el lquido hidratante hasta que alcance una temperatura de entre 34 C y 38 C
(durante, al menos, 30 minutos).
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3. Con una pinza estril, transfiera 2 grnulos al frasco de 2 ml de lquido hidratante. No retire el secante del frasco.
Se deben utilizar dos grnulos para obtener una concentracin de provocacin de entre 10 y 100 CFU por cada
0,1ml en medios no selectivos. Vuelva a tapar el frasco con los grnulos inmediatamente y coloque el material
liofilizado restante nuevamente en un almacenamiento refrigerado a una temperatura de entre 2 C a 8 C.

4. Vuelva a tapar inmediatamente el frasco con el material hidratado y colquelo en una incubadora a una
temperatura de entre 34 C y 38 C durante 30 minutos para asegurar una hidratacin total.

5. Inmediatamente despus de terminar el proceso de incubacin, agite el material hidratado con un agitador vrtex
hasta que los grnulos se disuelvan completamente y la suspensin sea homognea.

6. Con una pipeta estril, transfiera 0,1 ml de la solucin hidratada al material que se someter a la provocacin (la
solucin contiene entre 10 y 100 CFU por cada 0,1 ml). Nota: la suspensin restante puede refrigerarse y utilizarse
dentro de las 8 horas (no es necesario volver a calentarla), excepto los productos con nmeros de catlogo 0320Z y
0318Z, que deben utilizarse dentro de los 30 minutos.

7. Avance con el procedimiento de provocacin segn el protocolo BUE-SOP-B030 - Ensayo de promocin de

crecimiento. Deseche cualquier material hidratado restante segn el protocolo BUE-SOP-B009 - Descontaminacin
del material utilizado en Control Bioanalitico, para la eliminacin de materiales de riesgo biolgico.

IV.5. Observacin tcnica: Valor promedio del ensayo.

El valor promedio del ensayo obtenido en Microbiologics se basa en mtodos estadsticos de eficacia
comprobada. Como parte del procedimiento de control de calidad de Microbiologics, los grnulos de cada lote de los
microorganismos EZ-CFU One Step se hidratan en un amortiguador de fosfato de pH 7,2 o en un amortiguador de
fosfato de pH 7,2 con cloruro de magnesio (MgCl2) (solo para usar con Pseudomonas). Los recuentos de colonias
duplicados se realizan en medios de agar no selectivos y se enumeran mediante un dispositivo automtico de
recuento de colonias. Los resultados pueden ser diferentes de los valores del ensayo obtenidos por Microbiologics
debido al uso de materiales y mtodos diferentes.

La variabilidad del lquido hidratante, la toma de muestras, las distintas tcnicas de inoculacin y recuento de
colonias, la incubacin y el uso de medios de agar selectivos producir recuentos de colonias que se apartan del
valor promedio del ensayo indicado.

Tiempo de conservacin y estabilidad.

La garanta del producto se limita a las especificaciones y el rendimiento de los microorganismos EZ-CFU One
Step almacenados adecuadamente en el envase original (frasco).

La exposicin al calor, la humedad y el oxgeno pueden perjudicar la estabilidad del valor promedio del ensayo. La
fecha de vencimiento, la reproducibilidad y la estabilidad se basan en el almacenamiento adecuado de los grnulos
liofilizados en el frasco original que contiene material secante.

IV.6. Almacenamiento y vencimiento

Almacene los microorganismos EZ-CFU One Step y el lquido hidratante a una temperatura de entre 2 C y 8 C
en sus frascos originales cerrados. Si se almacenan segn las indicaciones, las preparaciones liofilizadas de
microorganismos conservarn sus especificaciones y su rendimiento hasta el ltimo da del mes de vencimiento
indicado en la etiqueta del dispositivo, dentro de los lmites indicados. Los microorganismos EZ-CFU One Step no
deben utilizarse si:
Se han almacenado inadecuadamente y/o han pasado la fecha de vencimiento.
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Hay signos de exposicin excesiva al calor o a la humedad.

IV.7. Control de Cepa

Proceder segn el protocolo BUE-SOP-B030 - Ensayo de promocin de crecimiento, para verificar y confirmar mediante
un recuento, en medios no selectivos, la obtencin entre 10 a 100 UFC.
Adems, realizar una verificacin de pureza de las cepas por medio de la coloracin de gram procediendo conforme al
protocolo BUE-SOP-B011 - Mtodos de coloracin y preparacin de soluciones colorantes.

IV.8. Condiciones de validez

Los microorganismos debern desarrollarse correctamente en los medios de cultivo y cumplir con el ensayo de
pureza para lo cual se debe verificar que en el control de pureza de microorganismos est presente un solo tipo de
colonia, compatible con la morfologa tipo del microorganismo sembrado.

IV.9. Ilustraciones
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V. DOCUMENTACIN / REGISTROS
Deben documentarse todos los ingresos de cepas nuevas al laboratorio de Control Bioanaltico en la planilla de
control de ingreso de cepa (Anexo I) con la correspondiente informacin y descripcin de la cepa.
El control de cepas debe registrarse en la planilla de Control (Anexo II) y Registro de ensayo de Pureza (Anexo III).

VI. CAPACITACIN
Requiere de entrenamiento especfico.

VII. ANEXOS

I- Planilla de Control de ingreso de cepas.

II- Planilla de Control de cepas y preparacin de inculos
III- Planilla de Registro de ensayo de pureza de microorganismos.
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VIII. HISTORIA

Edicin Fecha Motivo

01 Primera edicin CSL Behring

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Anexo I pg. 1 de 1

CONTROL DE INGRESO DE CEPA

DESCRIPCION DE LA CEPA:

ATCC / NCTC:

PROCEDENCIA:

LOTE:

CANTIDAD DE UNIDADES:

FECHA DE INGRESO:

FECHA DE VENCIMIENTO:

OBSERVACIONES:

ANALISTA: CONTROL:

FECHA: FECHA:
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Anexo II Pg. 1 de 1

Control de Cepas y Preparacin de Inculos

DESCRIPCION DE LA CEPA:

ATCC:

LOTE:

FECHA DE PROCEDENCIA PREPARACION RECUENTO ANALISTA Observaciones

REPIQUE Vial (1 o 2) DE INOCULO (UFC/ ml)
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Anexo III -Pg. 1/1.

Registro de Ensayo de Pureza de Microorganismos

Microorganismo ATCC / NCTC Lote

Medio y N Desarrollo Desarrollo de Resultado:
Coloracin
Fecha de caracterstico otros microorg. Analista Cumple / No
de Gram.
Preparacin SI / NO SI / NO Cumple