UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA

METODOLOGIA DE LA INVESTIGACION

OBTENCION DE BIOPLASTICO A PARTIR DE LA SEMILLA DE

AGUACATE, POR MEDIO DEL METODO DE FERMENTACION LACTICA A
ESCALA DE LABORATORIO

PROTOCOLO PRESENTADO POR:

DELVIS JOSE MENDOZA MENDEZ

CRISTHIAN ISMAEL SANCHEZ HERRERA

DOC: Msc. HELIA TALENO OPORTA

Managua, Nicaragua 2016

1
 ndice general Pgina

I. INTRODUCCION.. 3
II. ANTECEDENTES 4
III. JUSTIFICACION.. 5
IV. OBJETIVOS.. 6
4.1 objetivo general...6
4.2 objetivos especficos..6
V. MARCO TEORICO.. 7
5.1 el aguacate...7
5.1.1 caractersticas generales de la semilla del aguacate....7
5.2 los bioplstico...7
5.2.1 caractersticas de los bioplstico...8
5.2.2 clasificacin de los biopolmeros8
5.3 fermentacin lctica.8
VI. HIPOTESIS... 9
VII. MATERIAL Y METODO...... 10
7.1 Extraccin del almidn de la semilla de aguacate10
7.2 fermentacin lctica de la semilla del aguacate..9
7.3 obtencion del cido lctico.10
7.4 combinacin con elementos para generar resinas.11
7.5 obtencion de resinas biodegradables .12
VIII. DISEO EXPERIMENTAL.. 13
IX. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES.... 14
BIBLIOGRAFIA. 15
ANEXOS... 16

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 INTRODUCCION.
El incremento en la generacin de residuos plsticos derivados del petrleo y el
aumento en el precio de este recurso no renovable, demandan nuevas
alternativas de tratamiento para stos desechos slidos, adems de desarrollar
nuevas tecnologas para la sustitucin del uso de plsticos a base petrleo.
Entre estas tecnologas tenemos el desarrollo de Bioplsticos (polmeros
biodegradables), que son obtenidos a base de resinas vegetales, los cuales
contaminan un 85% menos que los plsticos convencionales y por consiguiente
el desarrollo de estos nuevos productos (Bioplsticos), contribuirn a la
disminucin de contaminacin del planeta.
El propsito para la realizacin de esta investigacin consiste en desarrollar un
Bioplastico obtenido a partir de la semilla del aguacate, ya que de este (el
aguacate) solo se aprovecha la pulpa comestible para el consumo humano. Es
por eso que se pretende obtener un Bioplastico, en el cual estn presentes
todas las propiedades fisicoqumicas y termoplsticas similares a las de los
plsticos obtenidos a base de petrleo.
Las ventajas de sustituir el uso de plsticos a base de petrleo por Bioplasticos,
es que una vez desechados se biodegradaran es decir se descompondrn por
medio de organismos biolgicos en menos de un ao y estos pasaran a formar
parte de los suelos a manera de abonos orgnicos disminuyendo de esta
manera la contaminacin del planeta.

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 ANTECEDENTES

En primer lugar se tiene que el consumo mundial anual de los plsticos

sintticos provenientes del petrleo es ms de 200 millones de toneladas, con
un incremento anual de aproximadamente el 5% (Siracusa et al., 2008).

Durante las dos ultimas dcadas en el mbito global, se ha evaluado el proceso

biolgico usando microorganismos como una alternativa al proceso qumico.
Esta alternativa produce efectos similares a las acciones qumicas y se ha
convertido en una idea viable para la obtencin de plsticos biodegradables
como punto de partida se ha estudiado las fermentaciones producidas por
bacterias acido lcticas sobre desechos orgnicos (hall and silva, 1992)

El aguacate es un fruto de suma importancia comercial en los pueblos blancos

de Nicaragua por los beneficios econmicos que propicia a esta regin con
respecto a la alimentacin e igualmente a la elaboracin de productos como
shampoo y cremas a base de este (la prensa, 2007). Aproximadamente el 3%
De la produccin de aguacate es industrializado para su exportacin en forma
de pasta o guacamole. Si la semilla representa aproximadamente el 15% en
peso del fruto (Ramos, 1999), se tiene que de la industrializacin actual
resultan ms de 3,000 t de semilla anualmente, mismas que son desechadas
sin aprovechamiento alguno.

Se tiene que, en abril del 2013 fue presentado en la Facultad de Ingeniera

de la Universidad nacional de Nicaragua, la tesis de estudio de fermentacin
lctica para la recuperacin de quitina a partir de desechos de camarn y
langostino por ezra Marcia, julia malespn como requisito para optar el ttulo de
ingeniero qumico en donde se aborda el proceso de fermentacin lctica.

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 JUSTIFICACION
La realizacin de esta investigacin es de gran importancia, ya que debido al
uso excesivo de plsticos a base de petrleo, ha contribuido a la contaminacin
a gran escala del planeta, ya que la degradacin de estos materiales (plsticos
convencionales) conlleva mucho tiempo en realizarse adems de liberar gases
nocivos a la atmosfera durante el proceso, por lo tanto la investigacin sobre la
obtencin de nuevos materiales biodegradables es de vital importancia para la
preservacin de la tierra.
De obtenerse resultados positivos con la realizacin de la presente
investigacin, brindara muchas soluciones con respecto al uso de los plsticos
a base de petrleo, ya que al sustituir estos por plsticos Biodegradables que
pueden ser usados como materias primas para la elaboracin de otros
productos, los cuales al ser desechados se Biodegradaran disminuyendo as la
contaminacin de la tierra causada en gran manera por el desecho excesivo de
plsticos a la basura donde pasan aos para poder degradarse.
La poblacin en general se ver beneficiada con la implementacin de los
resultados obtenidos de esta investigacin, ya que adems de contribuir a
preservar el planeta mejoraran tambin las condiciones de salud de las
personas las cuales se han visto afectadas en los ltimos aos, debido en gran
manera a la contaminacin que generan los desechos plsticos.

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 OBJETIVOS
Objetivo General.
Obtener Bioplstico a partir de la semilla de aguacate (Persea
Americana), por medio de fermentacin lctica a escala de laboratorio.

Objetivos Especficos.
Caracterizar las propiedades fsico-qumicas de la semilla de aguacate.
Definir cul mtodo de obtencin es el ms apropiado para este
proceso.
Definir que temperatura y tiempo de reaccin son los ms apropiados
para llevarse a cabo la reaccin.
Caracterizar las propiedades del producto obtenido, para su posterior
aplicacin como materia prima para la industria de plsticos.

MARCO TEORICO

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El aguacate (Persea americana)
El fruto del aguacate es una baya con mesocarpio y endocarpio carnosos que
contiene una sola semilla. En nuestro estudio, esta semilla represent del 15.0
al 16.0% del peso en relacin al fruto.

Caractersticas generales de la semilla del aguacate

En el aguacate el pericarpio est formado de tres capas: exocarpio (cscara),

Mesocarpio (pulpa) y endocarpio junto a la cubierta seminal. El endocarpio se
compone de pocas capas de parnquima de clulas aplanadas
tangencialmente que a menudo se adhieren a la testa (Barrientos, 1996).
Las clulas del parnquima, en las semillas, almacenan almidn (grnulos
fundidos o agrietados en cotiledones y en el endospermo), protenas (esferas o
cuerpos pequeos e irregulares), o aceites (elaioplastos o en esferosomas)
(Esau, 1977).

La testa madura consiste de epidermis externa, clulas de taninos y

remanentes del xilema cuyos elementos conductores, las traqueidas, pueden
contener cantidades considerables de clulas ricas en azcares, grasas o
protenas (Esau, 1977). El esclernquima de la testa es abundante con
esclrides (tambin llamadas clulas ptreas) de varios tamaos (Mauseth,
1988), stas clulas son generalmente alargadas (Camefort, 1977), pueden
formar masas continuas en pequeos grupos o solas alrededor de otras
clulas, son de pared gruesa, secundaria y a menudo lignificada. Se distinguen
dos formas principales, las esclrides (varan en forma) y las fibras (que son
generalmente largas).

El embrin contiene nutrientes de reserva, orgnicos e inorgnicos, localizados

Alrededor del embrin o en sus mismos tejidos; contiene aproximadamente el
50% del aceite de la semilla y antes de germinar presenta una situacin
citolgica que indica inactividad, esto es la presencia de protenas y lpidos de
reserva (Scagel et al, 1987;Esau, 1977).

Bioplstico.
Los biopolmeros son todos aquellos polmeros producidos por la naturaleza
como lo son el almidn y la celulosa. Pueden ser asimilados por varias
especies (biodegradables) y no tienen efecto toxico en el hospedero
(biocompatibles) dndoles una gran ventaja con respecto a los polmeros
Tradicionales (Luengo et al., 2003). De ellos se derivan los bioplsticos que en
ocasiones provienen de la misma materia prima pero al sufrir un procesamiento
distinto se originan bioplstico diferentes.

7
Caractersticas de los bioplstico.
Los biopolmeros tienen propiedades fisicoqumicas y termoplsticas iguales a
las de los polmeros fabricados a partir de petrleo, con la diferencia que una
vez desechados, se biodegraden. De aqu se derivan las grandes ventajas de
sustituir el uso de petrleo y de reemplazar los polmeros actuales por
polmeros biodegradables, lo que disminuira notablemente la contaminacin
del medio ambiente.
Una de las principales caracterstica de los biopolmeros naturales es que
provienen de cuatro fuentes: origen animal (colgeno/gelatina), origen marino
(quitina/quitosan), origen agrcola (lpidos y grasas e hidrocoloides: protenas y
polisacridos) y origen microbiano (cido polilctico (PLA) y
polihidroxialcanoatos (PHA)) (Tharanathan, 2003).

Clasificacin de los biopolmeros.

Actualmente, los polmeros provenientes de recursos naturales se dividen en 3
grandes grupos dependiendo de su origen:

1. Polmeros a partir de biomasa (polisacridos y protenas) como el

almidn, celulosa, casena y gluten.
2. Polmeros a partir de sntesis qumica utilizando monmeros obtenidos
a partir de recursos naturales como Bio-poliester y el cido polilctico
(PLA)
3. Polmeros obtenidos a partir de microorganismos como el PHA y
PHB (Sprajcar et al., 2012)

8
cido lctico
El cido lctico fue descubierto en 1780 por el qumico sueco Carl Wilhelm
scheele, quien lo aisl de leche agria. Fue reconocido como producto de
fermentacin por blonodeaur en 1847 y tan solo en 1881, littlelon inicia la
fermentacin lctica a escala industrial. Es un compuesto muy verstil utilizado
en la industria qumica, farmacutica, de alimentos y de plsticos (serna Cock
y Rodriguez,2005).
El cido lctico es un dmero, por lo que posee dos ismeros pticos. Uno es el
dextrogino acido D (-) lctico o d-cido lctico y el otro es el levgiro acido L(+)-
lctico o 1-cido lctico la mezcla racemica est constituida por fracciones
equimolares de las formas D(-) y L (+) y se llama d,1-cido lctico
(Wikipedia,2010). A diferencia del ismero D(-) la configuracin L (+) es
metabolizada por el organismo humano. Ambas formas isomericas del cido
lctico pueden ser polimerizadas y se pueden producir polmeros con diferentes
propiedades dependiendo de la composicin (serna Cock y Rodriguez,2005).
Produccin industrial
El cido lctico puede ser obtenido por va qumica o biotecnolgica. La
produccin qumica est basada en la reaccin de acetaldehdo con cido
cianhdrico (HCN) para dar lacto nitrilo, el cual puede ser hidrolizado a cido
lctico. Otro tipo de reaccin se basa en la reaccin a alta presin de
acetaldehdo con monxido de carbono y agua en presencia de cido sulfrico
como catalizador. La sntesis qumica tiene la desventaja que el cido lctico
producido es una mezcla de D y L cido lctico ptimamente inactivo. Por lo
cual el 90 % del cido lctico producido en el mundo es elaborado por va
biotecnolgica (serna Cock y Rodriguez,2005).
La produccin de biotecnologa est basada en la fermentacin de sustratos
ricos en carbohidratos por bacterias u hongos y tiene la ventaja de formar
enantiomeros D(-) o L(+), ptimamente activos. La produccin biotegnologica
depende del tipo de microorganismo utilizado. La inmovilizacin o recirculacin
del microorganismo, el PH, la temperatura, la fuente de carbono, la fuente de
nitrgeno, el modo de fermentacin empleado y la formacin de subproductos.
De las LAB, Lactobacillus delbrucckii es el microorganismo mas utilizado en la
produccin a gran escala de acido lctico, ya que tiene la ventaja de producir
nicamente ismeros L (+), consumir eficientemente glucosa y ser un
microorganismo termfilo con temperatura optima de crecimiento de 41.5 c, lo
que reduce coste de enfriamiento y esterilizacin, as como riesgos de
contaminacin microbiolgica en el fermentador. Este microorganismo crece
bien a un PH entre 5.5 y 6.5 por lo que el acido producido debe ser
continuamente neutralizado.

Los hongos utilizados en la produccin de acido lctico son mohos y levaduras

que pertenecen a los gneros Rhizopus, zymomonas, saccharomyces. Desde

9
finales de los aos 80. Se ha venido estudiando ampliamente rhizopus oryzae
para la produccin biotecnolgica de acido lctico ya que presenta la ventaja
de que no requiere fuente de nitrgeno orgnico para su crecimiento, tiene la
habilidad de producir directamente grandes cantidades de L (+) acido lctico de
almidn y es fcilmente separado del medio de fermentacin en el proceso de
recuperacin y purificacin. Sin embargo la dificultad que presenta la
produccin de acido lctico con moho en su forma fsica ya que el gran tamao
de los micelios o sus agregados pude provocar un aumento en la viscosidad
del medio de fermentacin lo que causa un alto incremento en la demanda de
oxigeno y resistencia a la transferencia de masa en el proceso fermentativo, lo
que a su vez aumenta los tiempos de fermentacin, aumenta los subproductos
formados especialmente etanol y disminuye los rendimientos en conversin.

En la produccin biotecnolgica de acido lctico con bacterias u hongos, se

utilizan como sustratos, sacarosa proveniente de la caa de azcar y de la
remolacha azucarera, pero debido a que el azcar puro es alto costos se han
investigados otros sustratos (desechos agrcolas) para disminuir los costos de
produccin. Sin embargo, la produccin de acido lactico de esta fuente
renovable requiere de los siguientes pasos:
1. Hidrolisis del sustratos hasta azucares fermntales.
2. Fermentacin de azucares acido lcticos.
3. Separacin de biomasa y partculas solidas del medio de fermentacin.
4. Purificacin del acido lctico obtenido.
Usos del acido lctico
El acido lctico es de amplio uso en la industria, debido a sus caractersticas
benficas, se utiliza en la industria alimenticia (bebidas y como conservantes),
en farmacias, medicinas, textileras, en la industria del cuero y para la
produccin de plsticos biodegradables (lederberg, 1992).

Fermentacin lctica
Bacterias acido lcticas
La bacteria acido lctica (BAL) constituye un grupo de bacterias Gram-
positivas unidas por una constelacin de caractersticas morfolgicas,
metablicas, y fisiolgicas. La descripcin general de la bacteria incluida en el
grupo o la bacteria tpica de acido lctica es Gram- positiva. No formadora de
esporas, cocos o batones, catalasa-negativos, carente de los atocromos, de
hbitats anaerbicos, pero aerotolerantes, exigentes, acido tolerante y
fermentativa estrictamente, con acido lctico como el principal producto final
durante fermentacin de hidratos de carbono LAB esta generalmente
asociadas con los hbitats ricos en nutrientes tales como, diversos productos
alimenticos (leche, carnes, bebidas, verduras) por lo que participan en
alimentos y fermentacin de los mismos. Algunos son tambin miembros de la

10
flora normal, de la boca, del intestino, de la mucosa (saludable) y la vagina de
los mamferos. Los lmites del grupo estn sujetos a ciertas controversias, pero
histricamente los gneros lactobacilus, leuco-nostoc, pediococcus y
streptococcus forman el ncleo del grupo revisiones taxonmicas de estos
gneros y la descripcin de nuevos gneros significa que LAB podra, en su
amplia definicin fisiolgica comprender alrededor de 20 gneros.

Fermentacin lctica
La fermentacin lctica es una ruta metablica anaerbica que ocurre en la
matriz citoplasmica de la clula, en la cual se fermenta la glucosa (se oxida
parcialmente) para obtener energa metablica y un producto de desecho que
principalmente es el cido lctico.
El cido lctico es un cido orgnico valorado por su aplicacin en la industria
alimenticia, farmacutica, qumica y su potencial como materia prima para la
produccin de plsticos biodegradables.

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 HIPOTESIS
Al someter a la semilla de aguacate (Persea Americana) al proceso de
fermentacin lctica, es posible obtener un Bioplstico con caractersticas
similares a las de los plsticos convencionales.

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 MATERIAL Y METODOS
Recoleccin de las semillas de aguacate.
Primeramente se recolectara las semillas del aguacate, luego se fragmentara y
se proceder a colocar en una cortadora mecnica de hlices para obtener un
extracto o jugo de la semilla del aguacate.

Se mezclara el jugo con el doble de agua destilada (1:2) y agitndose

fuertemente, se filtrara el extracto con una gasa para obtener un sedimento
color blanco. Para verificar si en efecto se estaba obteniendo almidn se
proceder a colocar gotas de yodo sobre muestras del producto. La aparicin
de algn tipo de coloracin oscura, como resultado de este procedimiento, es
indicativo de la presencia de almidn en la sustancia.

Fermentacin lctica:

La produccin de este biopolmero empieza con el almidn el cual se extrajo de

la semilla del aguacate, luego los microorganismos Pertenecientes a los
gneros Lactobacillus, Carnobacterium, Leuconostoc, Pediococcus,
Streptococcus (Domnguez & Vsquez, 1999) lo transforman en una molcula

13
ms pequea de cido lctico o 2 hidroxi-propinico (monmero), la cual es la
materia prima que se polimeriza formando el PLA (Fig. 1).

Fig. 1. Estructura del cido polilctico

Obtencin de cido lctico (LA).

Consiste en la ruta Biotecnolgica de la fermentacin de carbohidratos con
bacterias y hongos. La obtencin de LA (cido lctico) por va fermentativa
discurre bsicamente a travs de cuatro etapas:

Fermentacin
Hidrlisis del lactato de calcio
Esterificacin y destilacin
Hidrlisis del ster.

Combinacin con elementos para generar resinas.

La plastificacin del almidn que se obtendr y que luego se proceder a

someter al proceso de fermentacin lctica, producir la disrupcin estructural
del cido lctico lo cual resultara en una disminucin de los cristales durante el
proceso de extrusin y la combinacin con elementos plastificantes (glicerina,
sorbitol, xilitol, entre otros) dar como resultado un nuevo tipo de resina, la cual
ser la materia prima para la obtencin del bioplstico.

DISEO EXPERIMENTAL
a) Tipo de investigacin.
El presente estudio se ha considerado como una investigacin aplicada del tipo
explicativo, ya que se pretende explicar cmo obtener Bioplstico a partir de la
semilla de aguacate a escala de laboratorio.

b) Factores.
Los factores que intervendrn en esta investigacin son:
Mtodo de obtencin.
Tiempo de reaccin.
Temperatura de reaccin.

c) Niveles.
El factor Mtodo de obtencin contara con 2 niveles, los cuales son:

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 Mtodo de fermentacin lctica, al cual se le asignara el signo + debido
a que posiblemente este sera el mtodo ms apropiado.
Mtodo de fermentacin microbiana, al cual se le asignara el signo ya
que por este mtodo podra ser posible obtener Bioplstico pero no con
el rendimiento esperado.
El factor Tiempo de reaccin contara con 2 niveles, los cuales son:
24 horas, este se presume que es el tiempo ptimo para que la reaccin
se realice completamente por lo tanto se le asignara el valor +.
Menor a 24 horas, podra ser posible que en este tiempo la reaccin se
realice aunque no completamente por lo tanto se le asignara el valor .
El factor Temperatura de reaccin de igual manera contara con 2 niveles:
40C, la cual se presume que ser la temperatura para que la reaccin
se realice correctamente sin deteriorar las propiedades del producto
final, por lo cual se le asigna el valor +.
Menor a 40C, con esta temperatura se podra obtener Bioplstico pero
con ciertas alteraciones al producto final por lo cual se le asignara el
valor .
Estos niveles fueron justificados de acuerdo a las investigaciones realizadas
sobre los posibles resultados obtenidos con esos niveles.

d) Variable respuesta.
La siguiente tabla muestra los valores que tomara la variable respuesta siendo
el valor inferior y + el valor superior.
TIPO DE TIEMPO TEMPERATURA VARIABLE
METODO DE DE LA RXN. RESPUESTA
RXN.
1 - - - -
2 + - - +
3 - + - +
4 + + - -
5 - - + +
6 + - + -
7 - + + -

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 8 + + + +
Tabla 1. Variable Respuesta.

e) MODELO MATEMATICO.
El modelo matemtico se presenta en la siguiente tabla:

TIPO DE METODO TIEMPO DE RXN. TEMPERATURA DE LA RXN.

1 - - -
2 + - -
3 - + -
4 + + -
5 - - +
6 + - +
7 - + +
8 + + +

Lo cual nos da un resultado de 8 experimentos a realizar.

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 CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
N ACTIVIDAD A REALIZAR FECHA DE CUMPLIMIENTO EN SEMANAS
1 2 3 4 5 6 7
1 FASE EXPLORATORIA
2 REDACCION DEL
PROTOCOLO
3 INVESTIGACION
BIBLIOGRAFICA
(ADICIONAL)
4 PRUEBAS O
EVALUACION DE
INSTRUMENTOS
5 OBTENCION DE
INFORMACION
6 PROCESAMIENTO Y/O
ANALISIS DE
RESULTADOS
7 DISCUSION DE LOS
RESULTADOS
8 REDACCION DEL
INFORME FINAL
9 PRESENTACION DEL
TRABAJO

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 BIBLIOGRAFIA

1. Serafn, L.; Lemos, P.C & Reis, MA.M. (2000). Produo de bioplsticos por
culturas microbianas. Biotecnologa Microbiana. 16 21p.

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3. Valero M, Ortegn Y & Uscategui Y (2013) Biopolmeros : avances y

perspectivas. Dyna, 181: 171-180.

4. Acosta H, Villada H, Torres S & Ramrez J(2006) Morfologa superficial de

almidonestermoplsticos agrio de yuca y nativo de papa por microscopa
ptica y microscopa de fuerza atmica. Inf. Tecnol. 17: 63-70.

Online Available: http:// www.argenbio.org

Online Available: http:// www.sostenibilidad. Com

Online Available: http:// www.lecologia.com.

1999. Revista Chapingo Serie Horticultura 5: 123-128

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 ANEXOS

Figura. 1. Semilla de aguacate (cv. Hass). (a) Cubierta seminal, (b) cotiledones, (c)
ejeembrionario. Barra = 1 cm.

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