Professional Documents
Culture Documents
HO OH
OH
HO OH
OH
OCH3
Aceast denumire este atribuit de obicei unui amestec de 85% butil-3-hidroxi-4-anisol
i 15% butil-2-hidroxi-4-anisol (valori aproximative).
BHA se utilizeaz la obinerea cartofilor deshidratai (25 mg/kg produs), uleiuri
vegetale (200 mg/kg produs), margarin (200 mg/kg produs), untur de porc (200 mg/kg
produs), supe concentrate (200 mg/kg produs- raportat la grsime). Din 1987 s-a dovedit
efectul lui cancerigen la animalele de laborator, dar nu s-a putut proba c acest efect se
manifest i la om, astfel nct este i acum menionat pe lista GRAS a US-FDA. Acest
lucru a fost fcut cunoscut opiniei publice, efectul fiind evitarea produselor care conineau
acest component i, mai mult, a dus la scderea de 6 ori a utilizrii BHA n SUA n anii
care au urmat. Produsul este folosit acum pe piaa romneasc i se gsete n margarine,
creme sau maioneze.
Pentru a putea fi determinat, BHA trebuie extras n prealabil din aliment astfel:
grsimea dizolvat n eter de petrol se trateaz cu alcool etilic fie de 72% fie de 50% (la
fel ca la determinarea galatului de propil).
Identificarea calitativ se face cu reactiv Erlich (se amestec 0,5 ml soluie azotit de Na
1% cu soluie 0,5% acid sulfanilic n ap distilat care conine 5% HCl concentrat dup
care soluiile se amestec n proporie de 1 parte azotit la 100 pri acid) astfel: se iau 5 ml
din extractul alcoolic, se adaug 1 ml reactiv Erlich i imediat nc 1 ml soluie NaOH
dup care se agit. Apariia unei coloraii roii-purpurii denot prezena BHA.
Identificarea cantitativ se poate face colorimetric cu 2,6-diclorchinonclorimid,
determinarea bazndu-se pe reacia de culoare care are loc n mediul tamponat cu borax
ntre BHA i 2,6-diclorchinonclorimid.
Reactivi:
Soluie de 2,6-diclorchinonclorimid 0,2% n etanol;
Soluie tampon de tetraborat (pH = 9,8): se amestec 2 volume dintr-o soluie de
carbonat 0,05 M cu un volum de soluie 0,05 M de borax;
Soluie etalon de BHA n etanol 72%
Mod de lucru:
Se prepar un extract alcoolic astfel: 10 g produs se dizolv n 50 ml eter de petrol se
trece apoi n plnie de separare i se extrage de trei ori cu cte 25 ml alcool etilic 72% i
nc o dat cu 60 ml. Extractele alcoolice reunite se aduc la 150-200 ml cu alcool etilic
72%.
Din extractul alcoolic astfel preparat se iau 3 fraciuni n eprubete gradate, se aduce
(dac este cazul) la 12 ml cu alcool 72% dup care se adaug 2 ml reactiv clorimid i 2
ml tampon (amestecnd pentru omogenizare) iar dup 15 minute se adaug 5 ml alcool
butilic N n fiecare eprubet. Se citete absorbia la 620 nm fa de un martor al
reactivilor.
Se prepar o curb etalon n mod identic cu proba folosind cantiti variabile de soluie
etalon ntre 10-100 gama.
Reacia nu este pozitiv n prezena BHT i a galailor, deci are o anumit specificitate
pentru BHA.
Butilhidroxitoluenul (BHT) E 321 are formula C15H24O i structura
CH3 OH CH3
H3C C C CH3
CH3 CH3
CH3
BHT este utilizat la obinerea gumei de mestecat (200 mg/kg produs), emulsii pentru
buturi rcoritoare (100 mg/kg produs), protejarea grsimilor i uleiurilor dar i pentru
impregnarea foliilor de polietilen destinate ambalrii produselor alimentare.
Pentru determinarea BHT mai nti se face identificarea lui cu dianisidin dup care
dac produsul conine antioxidantul menionat se trece la determinarea cantitativ. Reacia
cu dianisidin este destul de specific astfel nct ea permite identificarea BHT n extracte
ce conin ANDG i BHA.
Reactivii necesari sunt:
Soluie de dianisidin (3,3-dimetoxi-benzidin): se dizolv 250 mg substan n
50 ml metanol, se trateaz cu 100 mg crbune activ agitnd 5 minute dup care
se filtreaz; se amestec 40 ml din filtratul clar cu 60 ml HCl 1 N;
Soluia etalon de rezerv conine 50 mg BHT la 100 ml metanol. Aceast soluie
se dilueaz cu metanol 50% v/v pentru a obine o concentraie de 1-5 gama/ml
(soluia de lucru).
Extracia antioxidantului din aliment se face cu metanol 95% deoarece ceilali
antioxidani nu sunt solubili n aceast soluie. Pentru aceasta se procedeaz astfel: n
eprubeta gradat cu dop care conine 10 g ulei sau prob solid (nclzit pentru topire) se
adaug 25 ml metanol 95% agitnd puternic dup care se introduce eprubeta ntr-o baie de
ap la 40-50OC unde se las 15 minute pentru separarea fazelor. Se scoate cu ajutorul unei
pipete stratul superior ntr-un balon cotat de 50 ml i se repet operaia cu ali 20 ml de
metanol care se aduc tot n balonul de 50. Pentru limpezirea extractului alcoolic se adaug
1 g CaCO3, se agit puternic i se filtreaz.
Testul cu dianisidin se execut astfel: se iau 15 ml din extractul alcoolic 72% ntr-o
plnie de separare, se adaug 10 ml ap i 5 ml soluie de dianisidin amestecndu-se, se
adaug 2 ml nitrit de sodiu 0,3% i se las n repaus 5 minute (apare o coloraie portocalie
chiar n absena BHT), dup care se adaug 2 ml cloroform i se agit 30 secunde cnd
stratul cloroformic se coloreaz n trandafiriu ceea ce indic prezena BHT.
Pentru determinarea cantitativ cu dianisidin se procedeaz astfel:
ntr-o plnie de separare nvelit n prealabil n foi de aluminiu (coloraia roie
este sensibil la lumin) se iau 5 ml extract alcoolic;
Se adaug 5 ml ap i 2 ml soluie de dianisidin dup care se astup i se
omogenizeaz cu grij;
Se adaug 0,8 ml nitrit de sodiu 0,3% i se omogenizeaz din nou;
Se las 10 minute, se adaug 4 ml cloroform, se agit puternic 30 secunde
pentru extracia complexului colorat dup care se las s se separe 2-3 minute;
Se introduc 0,8 ml alcool metilic absolut ntr-un cilindru gradat de 5 ml (nvelit
i el n foi de aluminiu), se scurge soluia cloroformic din plnia de separare
pn la 4 ml dup care se amestec bine;
Se msoar intensitatea optic la 520 nm ntr-o cuv cu drum optic de 1 cm ct
mai repede posibil evitnd expunerea la lumin;
Se calculeaz concentraia cu ajutorul curbei etalon nmulind valoarea obinut
cu 2 deoarece doar jumtate din BHT este extras din grsime.