UNIVERSIDADE FEDERAL DE JUIZ DE FOR A

DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA, MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA

Antimicrobianos

Luciana Debortoli de Carvalho

 CONCEITOS BSICOS
Antimicrobianos

naturais sintticos
antibiticos quimioterpicos

Penicillium, Streptomyces,
Cephalosporium, Micromonospora,
Bacillus
Antibiose: relao ecolgica no qual uma
espcie bloqueia o crescimento ou a
reproduo de outra espcie.

Antibitico: substncia produzida por

microrganismos que, em pequenas
quantidades, inibe o crescimento de outros
microrganismos.
 Antimicrobianos: ao biolgica

Bacteriosttico:inibidores de sntese protica por

ligao reversvel aos ribossomos .

Bactericida: inibidores de replicao por ligao

irreversvel a DNA girase.

Bacterioltico: inibidores de formao da parede

celular

clulas viveis clulas totais

 PROPRIEDADES DESEJVEIS PARA UM AGENTE ANTIMICROBIANO

Parede celular
Membrana citoplasmatica
Toxicidade seletiva: destruir o patgeno sem

atacar o hospedeiro. Ribossomos

Cromossomo
Metabolismo de
Bactericida em vez de bacteriosttico: acido flico

Principalmente em hospedeiros imuno-

comprometidos;

No induzir resistncia bacteriana;

Espectro de ao satisfatrio

-Amplo/estreito espectro X terapia emprica;

 PROPRIEDADES DESEJVEIS PARA UM AGENTE ANTIMICROBIANO

No alergnico;

Ativo quando dissolvido nos fluidos corporais ou exudatos;

Solvel e estvel em soluo aquosa;

Atingir o nvel mximo sistmico rapidamente;

Capaz de atingir o stio de infeco.

 Caractersticas gerais das drogas antimicrobianas

Exemplos de diferentes drogas antimicrobianas, classificadas de acordo com o

espectro de ao.
(Adaptado de Madigan et al., Brock Biology of Microorganisms, 2003)
 SINERGISMO x ANTAGONISMO

Sinergismo => ao combinada entre dois agentes antimicrobianos

significativamente superior soma dos efeitos alcanados por cada um dos
frmacos isoladamente.
Antagonismo => ao combinada entre dois agentes antimicrobianos
inferior quela do frmaco quando administrado isoladamente.

Uso de combinaes de antimicrobianos

Tratamento imediato de pacientes em estado crtico, com suspeita de infeco

microbiana grave;
Tratamento de infeces mistas, em particular as que ocorrem aps traumatismo;
Para preveno da resistncia a drogas. Se uma bactria torna-se resistente a uma das
drogas, a outra droga pode ter um efeito letal sobre este micro-organismo.
 Mecanismos de ao de agentes antimicrobianos nas clulas
bacterianas

1 - Interferncia na sntese de parede celular;

2 - Interferncia nas funes da membrana;

3 - Interferncia na sntese protica;

4 - Interferncia no metabolismo de cidos nuclicos;

5 - Interferncia em reaes enzimticas (anlogos estruturais)

 1 - ANTIMICROBIANOS QUE INTERFEREM NA SNTESE DE PAREDE
CELULAR:

Beta-Lactmicos:

- So principalmente bactericidas

- Anel -lactmico

- Principais: penicilinas, cefalosporinas, carbapenmicos, monobactmicos.

- Toxicidade: reao de hipersensibilidade:

- Hipersensibilidade a penicilina: - cefalosporinas e carbapenmicos

- exceo - monobactmicos

- Amplo espectro de ao (infeces estreptoccicas, meningoccicas, sfilis, infeces

dentrias, infeces por bacilos Gram negativos)
 Beta-lactmicos representativos

Penicilinas
Penicilina G e V Penicilina natural
Cloxacilina Penicilina semi-sinttica
Dicloxacilina
Nafcilina (penicilinas estveis resistentes
Oxacilina beta lactamases produzidas por S.
Meticilina aureus)

Amoxicilina (amino) penicilina semi-

Ampicilina sinttica
Carbenicilina (carboxi) penicilina semi-
Ticarcilina sinttica
Mezlocilina (uredo) penicilina semi-
Piperacilina sinttica
 Beta-lactmicos representativos
Cefadroxil Primeira gerao
Cefazolina
Cefalexina
Cefalotina
Cefradina
Cefaclor Segunda gerao
Cefamandol
Cefonicid
Cefprozil
Cefuroxima
Cefotetan
Cefmetazol
Cefalosporinas Cefoxitina
Cefamicina

Cefdinir Terceira gerao

Cefditoren
Cefoperazona
Cefpodoxima
Cefotaxima
Ceftazidima
Ceftibuten
Ceftizoxima
Ceftriaxona

Cefepima Quarta gerao

Cefpiroma
 Beta-lactmicos representativos

Carbapenmicos Ertapenem, Imipenem ,

Meropenem

So ativos contra estreptococos, estafilococos,

enterobactrias, P. aeruginosa, Haemophilus e algumas
bactrias anaerbias.

Particularmente teis no tratamento de infeces por

bactrias resistentes a outros antibiticos. Utilizadas no
tratamento de infeces polimicrobianas.

Monobactmicos: Aztreonam

No posssui atividade contra bactrias Gram positivas e nem

contra micro-organismos anaerbios.

essencialmente no alrgico, podendo ser utilizado em

pacientes com alergia a cefalosporinas e penicilinas.
 1 - ANTIMICROBIANOS QUE INTERFEREM NA SNTESE DE PAREDE
CELULAR:

Glicopepitdeos (Vancomicina e Teicoplanina)

- Bactericida

- Espectro de ao restrito => Gram positivos

- Dificuldade de penetrar a membrana externa de Gram negativos

- Baixa toxicidade ; no absorvida por via oral

-Alternativa para pacientes alrgicos aos -lactmicos e para infeces causadas

por estafilococos resistentes a oxacilina.
 2 - INTERFERNCIA NAS FUNES DA MEMBRANA:

Polimixinas (Colistina, polimixina B)

- Bactericida

- Polipeptdeo derivado do Bacillus polimixa

- Espectro de ao restrito: Gram negativos

- Uso clnico restrito, altamente txicos

- Desestabilizao da membrana e interferncia no equilbrio osmtico celular

3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:

INIBIDORES DA TRANSCRIO

- Ligao e inativao da RNA polimerase dependente de DNA => impede a

transcrio do DNA em RNA.

RIFAMICINA
- amplo espectro de ao (Gram positivos e micobactrias)
 3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:

INIBIDORES DA TRADUO

AMINOGLICOSDEOS
- Bactericida
- Ligao a sub-unidade 30S impedindo a juno da sub-unidade 50S
- O acmulo de sub-unidades 30S aberrantes txico para a clula
- Amplo espectro de ao
- Ativos contra bacilos Gram negativos (principalmente enterobactrias) micobactrias,
enterococos, P. aeruginosa e estafilococos.

Gentamicina Netilmicina
Trobamicina Neomicina
Canamicina Estreptomicina
Amicacina
 3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:

INIBIDORES DA TRADUO

TETRACICLINAS
- Bacteriosttico
- Ligao a sub-unidade 30S, inativando o stio A
- Toxicidade baixa - uso e abuso - ampla resistncia
- Novas tetraciclinas: desestabilizao da membrana - altamente txicas para humanos

Tetraciclina
Clortetraciclina
Oxitetraciclina
Doxicilina
Minociclina
3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:

INIBIDORES DA TRADUO

MACROLDEOS, LINCOSAMIDAS e ESTREPTOGRAMINAS

- Bacteriosttico para a maioria das bactrias / bactericida para alguns Gram positivos.
Utilizados contra infeces respiratrias.
- Ligao a sub-unidade 50S impedindo a elongao do peptdio: peptidil-transferase
- Clindamicina => reserva para anaerbios, principalmente grupo B. fragilis
- Toxicidade baixa - uso e abuso => ampla resistncia

Lincosamida
Eritromicina
Roxitromicina*
Clindamicina
Macroldeos
Azitromicina*
Estreptograminas
Claritromicina*
* Novos Macroldeos Dalfopristina (estreptogramina A)
Quinupristina (estreptogramina B)
3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:

INIBIDORES DA TRADUO

OXAZOLIDINONAS (Linezolida)
- Classe de novos antimicrobianos sintticos com ao bacteriosttica
- Espectro de ao: principalmente contra Gram positivos
- Ligao a sub-unidade 50S impedindo a elongao do peptdio.
- Reservada para o tratamento de infeces por estafilococos e enterococos.

CLORANFENICOL
- Bacteriosttico
- Boa distribuio tecidual mesmo no crebro e fluidos crebro-espinhais
- Toxicidade - uso clnico restrito => txico para a medula ssea
- Ligao a sub-unidade 50S impedindo a elongao do peptdio: peptidil-transferase
- Utilizado no tratamento de meningites (3 patgenos clssicos)
3 - INTERFERNCIA NA SNTESE PROTICA:

INIBIDORES DA TRADUO

CIDO FUSDICO
- Ao bacteriosttica principalmente contra Gram positivos (estafilococos)
- Alta toxicidade seletiva
- Ligao ao fator de elongamento do peptdio interrupo da sntese de protenas
4 - INTERFERNCIA NA SNTESE DE CIDOS NUCLICOS:

QUINOLONAS
- Inibio da duplicao do DNA

- Bactericida

- Fluoroquinolonas: boa atividade antibacteriana e boas propriedades

farmacolgicas

- Ligao sub-unidade beta das DNA girases - inibio da atividade

- enzimas essenciais no enrolamento e relaxamento das fitas de DNA

- Usos:
- ativo contra Gram positivos e Gram negativos
- baixa atividade contra anaerbios => manuteno da microbiota residente

- boa penetrao em macrfagos e PMNs

 Quinolonas representativas

* As quinolonas de segunda, terceira e quarta gerao so fluoroquinolonas

cido nalidxico Primeira gerao

Ciprofloxacina Segunda gerao
Enoxacina
Lomefloxacina
Norfloxacina
Ofloxacina
Levofloxacina Terceira gerao
Gatifloxacina
Moxifloxacina
Sparfloxacina
Trovafloxacina Quarta gerao
4 - INTERFERNCIA NA SNTESE DE CIDOS NUCLICOS:

NOVOBIOCINA

- Bactericida

- Amplo espectro de ao (especialmente Gram positivos)

- Inibio da replicao do DNA - Ligao sub-unidade beta das DNA girases

- inibio do enrolamento das fitas de DNA (supercoiling)

- Uso: em testes - no h indicaes para o uso teraputico

separao de linhagens de:

Staphylococcus epidermides (sensvel)
e
Staphylococcus saprophyticus (resistente)
 4 - INTERFERNCIA NA SNTESE DE CIDOS NUCLICOS:

METRONIDAZOL
- Bactericida

- Inicialmente usado para tratamento de infeces por protozorios

- Amplo espectro de ao: Anaerbios, microaerfilos, protozorios e fungos

- Antimicrobiano de escolha contra o grupo B. fragilis

- Droga ativa apenas em anaerobiose

- Oxidao e fragmentao do DNA

 5 - INTERFERNCIA EM REAES ENZIMTICAS
(anlogos estruturais)

TRIMETOPRIM E SULFONAMIDAS
- Amplo espectro de ao: Gram negativos e Gram positivos

- Inibidores competitivos na sntese de cido tetrahidroflico (FH4)

- Alta toxicidade seletiva: clulas de mamferos no sintetizam FH4

- Sulfonamidas: similar ao PABA - inibe a reao da dihidropteroato - sintetase

-Trimetropim: similar ao cido dihidroflico inibidor da dihidrofolato redutase

- teis contra S. pyogenes, Haemophilus influenza, Chlamydia trachomatis
- Trimetoprim exerce efeito sinrgico quando utilizado com uma sulfonamida.
Sulfametoxazol-trimetoprim = co-trimoxazol.
cido dihidroflico

cido flico
 MECANISMO DE AO DE ALGUMAS DROGAS NA CLULA BACTERIANA

-lactamases
(gram negativas) Membrana externa
CROMOSSOMO E PLASMDIO -lactamases Porina
(gram positivas)
Novobiocina
(DNA-girase, sntese de DNA)
Quinolonas Peptoglicano
(DNA-girase, sntese de DNA, Espao periplasmtico
permeabilidade)
PBP
Metronidazol
(DNA, fragmentao)
Mitomicina (DNA, PABA ANLOGOS ESTRUTURAIS
sntese e fragmentao) Sulfonamida
(Dihidropteroato-sintetase,
RIBOSSOMOS E mRNA cido flico inibe a reao)
Aminoglicosdio (Rib. Trimetropim
30s, sntese protica) (Dihidrofolato redutase, inibe
(FH4) a reao)
Tetraciclina (Rib. 30s,
sntese protica) PBP

Clorafenicol (Rib. 50s,

sntese protica) PAREDE
MEMBRANA CITOPLASMTICA
Eritromicina (Rib. Penicilina, Cefalosporina, Imipenem (PBP,
50s, sntese protica) sntese)
Polimixina (desestruturao
Lincomicina (Rib. Glicopeptdeos (acil-D-alanil-alanina, sntese)
e alterao das propriedades
50s, sntese protica)
Cicloserina (anlogo D-alanina, sntese) osmticas - toxicidade)
Rifamicina (RNA-
Bacitracina (Defosforilao do pirofosfato, sntese)
polimerases, sntese mRNA)
 Antibiograma

Finalidade

Avaliar in vitro a interao frmaco x bactria

Determinando a sensibilidade Orientar o Tratamento

Concentrao mnima inibitria

33
 METODOLOGIAS
Avaliao QUALITATIVA
DISCO DIFUSO EM GAR
Avaliao QUANTITATIVA
DILUIO EM CALDO
Macrodiluio
Microdiluio
DILUIO EM GAR
AUTOMATIZADOS
ETEST
34
 Mtodo da Difuso em gar

FUNDAMENTO (Tcnica de Kirby-Bauer)

Os antibiticos impregnados nos discos, difundem
no gar e formam um halo de inibio ao seu redor
quando encontram bactrias sensveis. As bactrias
resistentes crescem prximo ao disco, no
ocorrendo a formao de halo
35
TESTE DE DISCO DIFUSO EM GAR

Princpio do mtodo

36
 Mtodo de Kirby-Bauer

Discos de papel de filtro impregnados com

concentraes fixas de antimicrobianos

Conforme nvel srico do frmaco a partir de doses padres

No h resultados numricos halos em mm

Interpretao R, I, S tabelas padres

37
 TESTE DE DISCO DIFUSO EM GAR

Utilizado rotineiramente
Fcil execuo
Flexibilidade na escolha dos antibiticos
Reprodutibilidade nos resultados
Padronizao dos resultados
Baixo custo

38
Teste de sensibilidade aos
antimicrobianos

Leitura e Interpretao

mm 39
 MEIO MUELLER- HINTON

Reprodutibilidade do teste.

Baixo teor de inibidores de sulfonamidas, trimetoprim

e tetraciclinas.

Permite crescimento satisfatrio da maioria dos

patgenos.
Grande nmero de dados e experincia com o meio.

40
 TESTE DE DISCO DIFUSO EM GAR

O que devemos saber sobre os meios?

Hidratar e autoclavar

60 a 70 mL 150 mm
4 mm
25 a 30 mL 90 mm

pH 7.2 a 7.4

Conservao 2 a 8o C

Teste de esterilidade
41
 TESTE DE DISCO DIFUSO EM GAR

O que devemos saber sobre os meios?

Umidade

Efeito da Timidina ou Timina

Inibidores das sulfonamidas e trimetoprim.

Conservao 2 a 8 oC

Teste de esterilidade

Efeitos da variao de Magnsio e Clcio

42
 Inculo

3 a 5 colnias 4 a 5 mL de caldo ou salina

Ajustar a turbidez

0,5 McFarland
1 a 2 x 108 UFC/mL

Estabilizar 15 min.

43
Inoculao

Superfcie do gar no deve estar

mida

Inoculao homognea

Esperar diminuir a umidade antes da

aplicao dos discos

44
45
46
 DISCOS

Agente antimicrobiano em concentrao padronizada

Correlacionada com a obtida na corrente circulatria

Conservao dos discos em geladeira ou congelados

Temperatura ambiente para uso

Observar prazo de validade

Uma vez colocados no remover disco pois a difuso da droga

inicia imediatamente

47
 TESTE DE DISCO DIFUSO EM GAR

Discos
Conservao 8oC ou
freezer (no frost free)
Imipenem, Ertapenem Cefaclor e combinaes de c.clavulnico

Retirar do refrigerador ou do freezer at

2 horas antes do uso
Evitar umidade
Data de validade

48
 Incubao

Imediatamente aps colocao dos discos

No mximo 15 minutos
Estufa bacteriolgica -35-37C
Tempo de incubao:16 a 18 horas

49
 LEITURA
Deve haver crescimento confluente.
Colnias isoladas indicam inoculo
insuficiente-Teste deve ser repetido.

Medida do dimetro do halo realizada em mm.

50
 Discos utilizados nos testes

Utilizam-se discos de concentrao nica e adequada,

para cada antibitico, obteno de halos de inibio
indicadores do grau de sensibilidade de diferentes
bactrias.

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 INTERPRETAO

Aps medida do halo

Consultar tabela para classificar nas categorias

Sensvel:

A infeco pode ser adequadamente tratada utilizando o antimicrobiano na

dose recomendada para aquele tipo de infeco.
Intermedirio:
_ Inclui isolados cujo MIC se aproxima dos nveis obtidos no sangue e tecidos
mas apresenta resposta menor do que a microorganismos sensveis.
Resistente:
No inibida pelas concentraes usuais.

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 Parmetros para Interpretao

a) Concentrao mnima inibitria (C.M.I.) - dose mnima de

antibitico que, adicionada ao meio de cultura (lquido ou
slido), capaz de inibir totalmente o crescimento de um
inculo padro;

b) Zona de inibio ( Z.I.) - dimetro do halo estril em torno

do disco, em placas semeadas com as mesmas cepas
bacterianas.

53
 CIM
Concentrao de antimicrobiano

No stio da infeco

Necessria para inibir o crescimento da bactria

infectante.

Valor numrico (mg/mL)

til para ajuste de dose

54
Etest Difuso

55
 E-test - MIC

56
 O MIC expressa a concentrao mnima do
antimicrobiano que necessria para inibir o crescimento
do microrganismo que est sendo avaliado. Existem
tabelas para a converso desses valores em R, I ou S,
sendo que no Brasil normalmente utilizada a tabela
preparada pelo National Committe for Clinical Laboratory
Standards (CLSI), rgo americano responsvel pela
padronizao de testes laboratoriais.

57
Interpretao do Etest

58
 Interpretando a CIM
SENSVEL OU SUSCEPTVEL (S)

CIM < Concentrao atingida no stio (sangue) aps dose

padro
A infeco pode ser tratada
Com a dose recomendada

A categoria susceptvel implica que a infeco causada

pela cepa bacteriana isolada pode ser adequadamente
tratada com a dosagem do antimicrobiano recomendada
para o tipo de infeco e o agente infeccioso.

-Desde que no haja contra indicao.

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 Resistente (R)
A categoria resistente inclui isolados que no so inibidos
pelas concentraes usuais do antimicrobiano na dosagem
padro e/ou falha quando um especfico mecanismo de
resistncia expressado.

Intermediria (I)
A categoria intermediria inclui isolados cujos MICs so
prximos aos do sangue e tecidos. Ela permite a aplicabilidade
do antimicrobiano em infeces em stios onde as drogas so
fisiologicamente concentradas ou quando doses maiores
podem ser utilizadas.
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 Sistema MicroScan
Sistema MicroScan (Dade Behring) - AutoScan-4 e WalkAway 40 ou 96

AutoSCAN - 4 Walkaway 40 e 96

Painel

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