Manual de Bioquimica Avanzada-2015

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE
NAYARIT
REA DE CIENCIAS DE LA SALUD
UNIDAD ACADMICA DE CIENCIAS

QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS
MANUAL DE PRCTICAS DE LA UNIDAD DE APRENDIZAJE

DE BIOQUMICA
Elabor
Dra. Leticia Mnica Snchez-Herrera
M. en C. Juana Edelia Vidales Paz
QFB. Dora Liliana Luna Vzquez
QFB. Nadia Roxana Martnez Rubio
QFB. Esther Herrera
QFB. Iris Celeste Tovar
QFB. Roco Barcelos Garca
Revis Aprobacin
Dr. Mauricio Ramrez Ruano Q.F.B. Manuel Salinas Mardueo

Coordinador de elaboracin de Director de la Unidad Acadmica de
Manuales de prcticas Ciencias Qumico Biolgicas y
Farmacuticas
Ciudad de la Cultura Amado Nervo, Tepic Nayarit, Agosto del 2015.
UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.
Programa de Qumico Farmacobilogo
Pgina 1 de 102
NDICE Pg.
1 INTRODUCCIN 6
2 PROPSITO DEL SISTEMA DE PRCTICAS 7
2.1 Encuadre del sistema de prcticas dentro de la profesin 7
2.2 Niveles de Desempeo 8
3 DESCRIPCIN DEL SISTEMA DE PRCTICAS 9
3.1 Estructura y programa del Sistema de Prcticas 9
3.2 Programa del sistema de prcticas 10
4 PRCTICAS GENERALES DE SEGURIDAD. REGLAMENTOS 11
4.1 Reglamento aplicable a la prctica y el mbito donde se desempea 11
4.2 Disposiciones del orden general 11
PORTADA DE PRCTICA No.1 13
5 NUMERO DE ALUMNOS POR UNIDAD DE PRACTICA 14
6 INTRODUCCIN DE LA PRIMERA PRACTICA 14
6.1 Fundamento 15
7 PROPOSITO ESPECIFICO DE LA PRIMERA PRACTICA 16
7.1 Criterios de desempeo de la primera practica 16
7.2 Resultados esperados 16
8 NORMAS DE SEGURIDAD ESPECIFICAS PARA LA PRIMERA PRACTICA 17
9 DESARROLLO DE LA PRACTICA 19
10 SISTEMA DE EVALUACION DE LA PRACTICA 21
10.1 Lineamientos generales de la evaluacin 21
10.2 Cuestionario 23
10.3 Evaluacin intermedia 23
10.4 Mtodo de asignacin de calificacin de laboratorio 23
11 BIBLIOGRAFA 24
12 PARA SABER MS 24
PORTADA DE PRACTICA No. 2 25
13 NMERO DE ALUMNOS POR UNIDAD DE PRCTICA 26
14 INTRODUCCIN DE LA SEGUNDA PRCTICA 26
14.1 Fundamento 27
15 PROPSITO ESPECFICO DE LA SEGUNDA PRCTICA 27
15.1 Criterios de Desempeo para la segunda prctica 27
16 NORMAS DE SEGURIDAD ESPECFICAS DE LA SEGUNDA PRCTICA 28
17 DESARROLLO DE LA SEGUNDAPRCTICA 30
18 SISTEMA DE EVALUACION DE LA SEGUNDA PRACTICA 33
18.1 Lineamientos generales para la evaluacin 33
Pgina 2 de 102
19 BIBLIOGRAFA 34
20 PARA SABER MS 35
21 NUMERO DE ALUMNOS POR UNIDAD DE PRACTICA 37
22 INTRODUCCIN DE LA TERCERA PRACTICA 37
22.1 Fundamento 39
23 PROPOSITO ESPECIFICO DE LA TERCERA PRACTICA 39
23.1 Criterios de desempeo de la primera practica 39
24 NORMAS DE SEGURIDAD ESPECIFICAS PARA LA TERCERA PRACTICA 40
27 BIBLIOGRAFA 45
28 PARA SABER MS 45
30 INTRODUCCIN DE LA CUARTA PRCTICA 47
31 PROPSITO ESPECFICO DE LA CUARTA PRCTICA 47
32 NORMAS DE SEGURIDAD ESPECFICAS DE LA CUARTA PRCTICA 49
35 BIBLIOGRAFA 56
36 PARA SABER MS 57
38 INTRODUCCIN DE LA QUINTA PRCTICA 59
38.1 Fundamento 60
39 PROPSITO ESPECFICO DE LA QUINTA PRCTICA 60

Pgina 3 de 102
40 NORMAS DE SEGURIDAD ESPECFICAS DE LA QUINTA PRCTICA 61
43 BIBLIOGRAFA 65
44 PARA SABER MS 66
PORTADA DE PARACTICA No. 6 67
47.1 Criterios de Desempeo para la sexta prctica 69
51 BIBLIOGRAFA 74
52 PARA SABER MS 75
54.1 Fundamentos 78
59 BIBLIOGRAFA 84

Pgina 4 de 102
60 PARA SABER MS 85
62.1 Fundamento 89
67 BIBLIOGRAFA 102
68 PARA SABER MS 103
Anexo 1 104
Anexo 2 105
Elaborado por 105

Pgina 5 de 102
1. INTRODUCCIN
La Bioqumica es la rama de la ciencia, cuya actividad primordial se halla

dirigida a desentraar las reacciones bsicas que determinan la estructura y el
funcionamiento de los organismos vivos.
Metabolismo viene del griego metabol, que significa cambio,
transformacin, que es lo que experimentan las biomolculas. Existen dos
grandes procesos metablicos, los que se llaman anabolismo y catabolismo El
anabolismo, tambin llamado fase biosinttica o metabolismo constructivo, son
las reacciones de sntesis necesarias para el crecimiento de nuevas clulas y la
conservacin de los tejidos. Ambos tipos de reacciones se encuentran
entrelazadas en lo que se llaman las rutas metablicas, las cuales se van
combinando para generar los compuestos finales especficos y esenciales que
permiten la vida. Por esta razn en nuestro cuerpo tienen lugar miles de
reacciones metablicas simultneamente.
Hablar del metabolismo resulta algo complicado, no solo por cada una
de las rutas que implica, sino adems por la interrelacin y
compartamentalizacin de forma global.
El conocimiento de la Bioqumica, para estudiantes de la licenciatura

orientada hacia el rea de las Ciencias Biolgicas, es necesario para
establecer los conceptos bsicos que harn comprensibles los mecanismos
moleculares que subyacen en el fenmeno de la vida y sus estados
patolgicos. Sin embargo, el estudio de las reacciones bioqumicas, an en los
mejores libros de texto, siempre deja mucho a la imaginacin y torna ms difcil
su entendimiento. Es por eso que para un mejor aprendizaje de la materia, los
cursos tericos deben ser completados con experimentos prcticos en el
laboratorio, los cuales se realizarn a la par en esta unidad de aprendizaje
(terico-prctico) y de esta forma ustedes desarrollen habilidades y destrezas
que le sern tiles para su futuro trabajo profesional.

Pgina 6 de 102
2. PROPSITO DEL SISTEMA DE PRCTICAS
El propsito de este manual es apoyar de la manera ms amplia la
unidad de aprendizaje de bioqumica, que se imparte en el programa de
qumico frmaco bilogo, para que obtengas mejores resultados, se te
recomienda relacionar los conceptos tericos con las actividades
experimentales interpretando las rutas metablicas en los procesos biolgicos y
su correlacin con el diagnstico de las enfermedades. As tambin
desarrollars habilidades y destrezas que podrs aplicar en otras unidades
posteriores, durante y despus de su formacin profesional.
Esta unidad de aprendizaje tiene como finalidad de que al trmino del
curso, seas capaz de aplicar tus conocimientos y despertar el inters cientfico
por la bioqumica, que te permitan ser competente tanto en el campo laboral
como en el profesional, poniendo en prctica el desarrollo de habilidades y
destrezas adquiridas durante tu formacin profesional.
Por lo anterior, podrn adquirir y construir los conocimientos terico-

prcticos, desarrollando trabajo en equipo, relacionando con la construccin de
un conocimiento bioqumico significativo en aspectos bsicos relacionados con
la regulacin metablica, algunas patologas y estados transitorios del
organismo. Lo anterior bajo el cumplimiento del reglamento interno y de las
normas de seguridad necesarias en el laboratorio, para garantizar el
funcionamiento y uso adecuado del material y equipo empleado. Mismas que
irs conociendo y aplicando durante la prctica y en el entorno inmediato.
Se pretende que los conocimientos adquiridos as como el desarrollo de
habilidades y destrezas puedan aplicarlos en otras unidades posteriores
durante y despus de su formacin profesional.
2.1. Encuadre del sistema de prcticas dentro de la profesin.
El objetivo fundamental de este manual es el de proporcionar al

estudiante los conocimientos adecuados respecto a las diferentes fases de los
procesos metablicos y sus interacciones en los organismos, estrechamente
relacionados con, carbohidratos, lpidos, y protenas entre otros; que son

Pgina 7 de 102
sustentadas por otras unidades de aprendizajes como son: Microbiologa,
Biologa Molcula, Inmunologa y Toxicologa.
La formacin de profesionistas con los conocimientos adecuados en la
regulacin del metabolismo y sus patologas desarrollar sus capacidades
terico-prcticos en el empleo de tcnicas para el anlisis y administracin de
procesos que apoyen el establecimiento de un diagnostico de laboratorio, un
dictamen y coadyuve en la resolucin de problemas de salud del individuo, la
comunidad y/o su entorno.
2.2. Niveles de desempeo

______________________________________________________________
Nivel 1. Se realizan funciones rutinarias de baja complejidad. Se reciben
instrucciones. Se requiere baja autonoma.
Nivel 2. Se realizan un conjunto significativo de actividades de trabajo, variadas

y aplicadas en diversos contextos. Algunas actividades son complejas y no
rutinarias. Presenta un bajo grado de responsabilidad y autonoma en las
decisiones. A menudo requiere colaboracin con otros y trabajo en equipo.
Nivel 3. Se requiere un importante nivel de toma de decisiones. Tiene bajo su
responsabilidad recursos materiales con los que opera su rea. As como
control de recursos financieros para adquisicin de insumos.
Nivel 4. Se desarrolla un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en las
que se tiene que mostrar creatividad y recursos para conciliar intereses. Se
debe tener habilidad para motivar y dirigir grupos de trabajo.
Nivel 5. Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en
las que se tiene que mostrar un alto nivel de creatividad, as como buscar y
lograr la cooperacin entre grupos e individuos que participan en la
implantacin de un problema de magnitud institucional.

Pgina 8 de 102
Con el sistema de prcticas que se aborda en este manual t nivel de
desempeo ser el 3, ya que realizars diversas actividades, con diferente
grado de dificultad en laboratorio que te permitirn caracterizar los cambios
bioqumicos que sufren los organismos vivos. Las razones por las que se
asume el nivel de desempeo antes mencionado es debido a:
1. La realizacin de las prcticas las hars en equipo, de forma ordenada
llevando una secuencia, as como un tiempo determinado.
2. Manejars materiales, reactivos, as como equipo empleado en cada
prctica.
3. Preparas soluciones cuando as se requiera y de la compra de materia prima
que se tenga que emplear.
4. Elaborars un protocolo y un informe por prctica que requerirs entregar en
tiempo y forma.
5. Para la elaboracin del protocolo necesitars que hagas bsquedas
exhaustivas para que puedas realizar y comprender el contexto.
6. Tu evaluacin se determinar en base a tu informe presentado.
3. DESCRIPCIN DEL SISTEMA DE PRCTICAS

3.1 Estructura y programa del Sistema de prcticas
Las prcticas en el Laboratorio se realizarn con el apoyo de los

materiales y equipos con lo que se cuenta, el fin que se persigue es de que
ustedes como estudiante sean independientes y capaz de poder realizar las
prcticas por si mismos y al inicio del curso el maestro sea solo un gua, de
esta manera podrn integrar los conocimientos tericos aprendidos en el aula y
desarrollar habilidades de observacin, identificacin, anlisis y comprensin
de reacciones qumicas. Las destrezas que puede llegar a adquirir seria en
relacin a manejos de equipos, precisin en cuanto a titulacin e identificacin
de reactivos en base a su grado de toxicidad, para lo cual se requiere que
presenten una actitud de responsabilidad y observancia de las normas de
seguridad y trabajo en el laboratorio, que sean metdicos y disciplinados
durante el desarrollo de la prctica, as como de cooperacin para trabajar en
equipo.

Pgina 9 de 102
3.2 Programa del sistema de prcticas. El programa de prcticas de
bioqumica ser secuencial y coordinado con la parte terica revisada en el
aula.
Fecha Prctica Material necesario para la
practica
17 de agosto Encuadre
24 de agosto Practica No. 1 Actividad enzimtica de la Hgado de pollo y verduras

catalasa en diferentes tejidos
31 de agosto Practica No. 2 Factores de bombeo de
protrones
7 de septiembre Practica No.3 Glucosa pospondral Muestra de sangre
21 de septiembre Practica No. 4.1 Extraccin de Hgado de pollo por equipo

glucgeno
28 de septiembre Practica No. 4.2 Cuantificacin de Muestra de Orina
glucgeno
Practica No. 5 Determinacin de cuerpos
cetnicos
5 de octubre Practica No. 6 Determinacin de Muestra de sangre
colesterol en sangre
19 de octubre Practica No. 7 Determinacin de Muestra de sangre

protenas por el mtodo de Bradford
26 de octubre Practica No. 8 Productos finales del Muestra de sangre

metabolismo. (urea, acido rico y
creatinina)
4. PRCTICAS GENERALES DE SEGURIDAD. REGLAMENTOS

4.1 Reglamento aplicable a la prctica y el mbito donde se
desempean
El Laboratorio debe seguir prcticas generales de seguridad basadas en la
Normas Oficiales Mexicanas de las cuales se han seleccionado algunas que
determinan el buen funcionamiento del mismo y estas son:
Pgina 10 de 102
ESPECIFICACIONES NORMAS OFICIALES MEXICANAS
CONDICIONES DEL MEDIO AMBIENTE
El laboratorio cuenta con las condiciones y niveles de
iluminaciones suficientes y adecuadas para el tipo de NOM-025-STPS-1999
actividad que realiza.
Se cuenta con normas de Seguridad e Higiene que
permitan reducir el riesgo de accidentes en el rea de NOM-017-STP-2001
trabajo.
Se prohbe en zonas controladas el consumo de alimentos,
bebidas y tabaco, el uso de cosmticos y sustancias para
ser aplicadas en la piel, as como el empleo de pauelos NOM-087-ECOL-1995
que no sean desechables.
SISTEMA CONTRA INCENDIOS
Se instalarn equipos contra incendio de acuerdo al grado
de riesgo de incendio, a la clase de fuego que se pueda
presentar en el laboratorio y a la cantidad de materiales en NOM-002-STPS-2000
el almacn y proceso.
La puertas de salida normales de las rutas de evacuacin y
de las salidas de emergencia, debern ser libres de NOM-002-STPS-2000
obstculos, candados, picaportes o cerraduras con seguros
puestos durante las horas laborales
Los extintores deben ser revisados al momento de su
instalacin y, posteriormente, a intervalos no mayores de NOM-002-STPS-2000
un mes.
EQUIPOS DE PROTECCIN
Equipo de personal, seleccin, uso y manejo en los centros NOM-017-STPS-2001
de trabajo
Sistema para la identificacin y comunicacin de peligros y NOM-018-STPS-2000
riesgos por sustancias qumicas peligrosas en los centros
de trabajo
La regla bsica al interior del laboratorio pretende servirte de gua para que no
presentes percance alguno durante la realizacin de las prcticas.
4.2 Disposiciones de orden general

Es este apartado se establecen los reglamento y recomendaciones que
debers observar durante TODAS las prcticas y estancia en los laboratorios
de tu unidad acadmica correspondiente. Es importante que sepas que la
aplicacin de estos preceptos sern evaluados en cada una de las prcticas y
que es tu responsabilidad cumplirlos y dar evidencia de ello.

Pgina 11 de 102
DESCRIPCIN DE LAS PRCTICAS

Pgina 12 de 102
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE NAYARIT
UNIDAD ACADMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y
FARMACUTICAS
PRCTICA No. 1
ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA CATALASA

EN DIFERENTES TEJIDOS
ELABORADO POR:
Dra. Leticia Mnica Snchez Herrera
QFB Dora Liliana Luna Vzquez
QFB Esther Herrrera
QFB. Iris Celeste Tovar Ocampo
QFB Rocio Barcelos Garca

Pgina 13 de 102
5. NMERO DE ALUMNOS POR UNIDAD DE PRCTICA
Para la realizacin de la prctica es necesario trabajar por equipo
teniendo como mximo cuatro estudiantes.
6.- INTRODUCCIN
Las reacciones qumicas que se dan en los seres vivos no podran tener
lugar sin la presencia de las enzimas. Estas macromolculas, que
generalmente son protenas, catalizan las reacciones bioqumicas, permitiendo
que los sustratos se convierten en los productos que necesitan la clula. Una
enzima que podemos encontrar en todos los seres vivos es la catalasa.
La catalasa es una enzima presente en los peroxisomas de las clulas
de todos los tejidos animales y vegetales. Acta sobre el perxido de hidrogeno
(agua oxigenada) descomponindolo en agua y oxgeno y liberando energa en
forma de calor. El agua oxigenada es un producto resultante de las reacciones
metablicas y si no se destruye puede ser toxica para la clula. Si se pone un
tejido en contacto con el agua oxigenada se observa una efervescencia
(produccin de oxigeno). El perxido de hidrogeno es un residuo del
metabolismo celular de muchos organismos vivos y tienen entre otras, la
funcin protectora contra microorganismos patgenos, principalmente
anaerobios, pero dada su toxicidad debe transformarse rpidamente en
compuestos menos peligrosos. Esta funcin la efecta a catalasa que cataliza
su descomposicin en agua y oxgeno.
Razones por las que se realiza el examen

La funcin de la catalasa en los tejidos es necesaria por que durante el
metabolismo celular, se forma una molcula toxica que es el perxido de
hidrgeno (H2O2). La catalasa aumenta la velocidad de la descomposicin del
perxido de hidrogeno aproximadamente 1000 millones de veces. (Devlin
1999).
6.1 Objetivos
1. Poner de manifiesto la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales y
vegetales.
Pgina 14 de 102
2. Examinar la accin de la temperatura sobre la actividad de las enzimas .
7. PROPOSITO ESPECFICO DE LA PRCTICA

En esta prctica detectaras la presencia de catalasa en los diferentes
tejido0s y estudiar dos factores que influyen en la actividad de la mismo;
temperatura y pH.
7.1 Criterios de desempeo

Estars capacitado para manejar adecuadamente el equipo de
laboratorio cuando:
1.- Conozcas y cumplas el reglamento y normatividad para la actividad a
realizar.
2.- Utilices la vestimenta y equipo de proteccin personal en el laboratorio
4.- Selecciones el material y equipo adecuado para el desarrollo de la prctica
5.- Cuando interpretes los resultados obtenidos de las muestras analizadas
7.2 Resultados Esperados
Comportamiento responsable en el interior del laboratorio.

Manejo adecuado del material y equipo: Este parmetro se refiere a
seguir con varios de los lineamientos sealados por el Reglamento Interno
del Laboratorio. El desarrollo de sta habilidad te permite que desarrolles
de forma favorable tu prctica. Durante toda la prctica.
Desarrollo de la prctica y descripcin detallada de todo el proceso,

as como los tiempos empleados durante el desarrollo de la misma
Un reporte de investigacin resultado de la tarea entregado en 8 das a

partir del inicio de la prctica.
8. NORMAS DE SEGURIDAD ESPECFICAS DE LA PRCTICA

10.1 Normas Oficiales Mexicanas Especficas para la Prctica Normas oficiales
mexicanas que aplican para las actividades a realizar dentro del sistema de prcticas.
Pgina 15 de 102
NOM-025-STPS-199, NOM-002-STPS-2000, NOM-017-STPS-2001, NOM-018-
STPS-2000
Normas de seguridad especficas

Las referidas en las prcticas generales de seguridad

Pgina 16 de 102
DIAGRAMA FLUJO

Pgina 17 de 102
9. DESARROLLO DE LA PRCTICA
Material y equipo que sern utilizados en esta prctica son:

Tubos de ensaye 17 x 150
Mechero
Pipetas Graduadas de 5 mL
Gradilla
Trocitos de hgado de pollo
Trocidos de varios vegetales
Perxido de hidrogeno al 10%
cido actico al 5%
Procedimiento
En tres tubos de ensayo colocar varios trozos de hgado de pollo u otros
tejidos. Marcar los tubos A, B, C.
Tubo A. aadir 5 mL de perxido de hidrgeno.
Tubo B. aadir 5 mL de vinagre, dejar actuar por unos minutos. Y colocar 5 mL
de cido actico al 5 %.
Tubo C. calentar sobre un mechero durante 1 minuto hasta que hierva el
hgado, despus aadir 5 mL de perxido de hidrgeno.
Repetir el proceso con los vegetales.
Observar, interpretar y anotar resultados.
10. SISTEMA DE EVALUACIN DE LA PRCTICA
OBSERVACIONES Y RESULTADOS

Pgina 18 de 102
10.2 Investigar y contestar el siguiente cuestionario.
1. Qu es la catalasa y su funcin de la en el organismo?

2. Cul es el sustrato de esa enzima en el organismo?
3. Cul es el producto que se obtiene de su actividad?
4. Cul es el efecto del tratamiento trmico en la estructura enzimtica?
5. La catalasa es especfica con el perxido de hidrgeno? Si o No

Pgina 19 de 102
10.3 Evaluacin intermedia: Los puntos a evaluar en esta parte
intermedia de la prctica son:
Ser evaluado en lista de cotejo
10.4 Mtodo de asignacin de calificaciones del laboratorio
ACTIVIDAD A CALIFICAR PONDERACIN
Participacin 4%
Lista de cotejo 4%
Reporte en bitcora 12%
11. BIBLIOGRAFIA
Campbell M. K. y Farell S.O. 2004. Bioqumica. 4. Edicin. Ed.
Thomson. Mxico
Garrido P. A. Teijn y cols. Fundamentos de Bioqumica Metablica. Ed.
ALFAOMEGA. Mxico. 2005.
Benyon S., Roach J. ONeale. Metabolismo y Nutricin. Madrid Espaa.
2004.
Devlin T.M. Bioqumica. Libro de Texto con Aplicaciones Clnicas. 4.
Edicin. Ed. Revert. Barcelona. 2004.
Laguna J.P. E. Bioqumica de Laguna. 5. Edicin. Editorial El Manual
Moderno. Mxico. 2002.
Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de Bioqumica. 4a. Edicin.
Ediciones Omega. Barcelona. 2005.
McKee T, McKee RJ. Bioqumica. 3. Edicin. Editorial. McGraw-Hill
Interamericana. Espaa. 2003.
Murray KR, Granner DK, Mayes PA, Rodwell VW. Bioqumica de Harper.
16. Edicin. Editorial El Manual Moderno. Mxico. 2004.
12. PARA SABER MS
Holum JR. Fundamentos de Qumica General, Orgnica y Bioqumica

para Ciencias de la Salud. : Editorial Limusa Wiley. Mxico. 2001.
Mathews-Van Holde. Bioqumica. Ed. McGrawHill Interamericana.
Espaa.
Pea, A. Qu es el metabolismo. Editorial Fondo de Cultura Econmica.
Mxico. D.F.
Revista de Educacin Bioqumica (REB). rgano de difusin de la
asociacin Mexicana de Profesores de Bioqumica, A.C.
reb@laguna.fmedic.uanm.mx

Pgina 20 de 102
FARMACUTICAS
PRCTICA No. 2
Estudio del bombeo de protones por levaduras;
efecto de los inhibidores de la cadena de
transporte de electrones y de los desacoplantes
ELABORADO POR:
QFB Esther Herrera

Pgina 21 de 102
14.- INTRODUCCIN
Las levaduras Saccharomyces cerevisiae son organismos unicelulares que se

dividen por gemacin. En comn con otras clulas eucariontes, las levaduras
tienen un ncleo _ _ en donde reside la informacin gentica de la clula_ ,
mitocondrias _ en donde se lleva a cabo la sntesis de ATP_ y un retculo
endoplsmico y aparato de Golgi que se encargan de la sntesis de protenas
cuya localizacin final es la membrana plasmtica o el exterior. A nivel de la
membrana plasmtica, las levaduras tienen una ATPasa de H+ que acopla la
hidrlisis del ATP con el bombeo de protones hacia afuera de la clula. Esta
protena es semejante desde un punto de vista estructural y funcional a la
ATPasa de Na+/K+ de las clulas animales y, al igual que la bomba de
sodio/potasio, se inhibe con concentraciones micromolares de vanadato. Como
resultado de la actividad de la ATPasa de H+ en la levadura, se genera un
gradiente electroqumico de protones que se utiliza para impulsar el transporte
de nutrientes al interior de la clula, proceso catalizado por sistemas de
transporte llamados simportadores o uniportadores. Para darse una idea de la
importancia de esta enzima en la economa celular y en la energizacin de la
membrana celular, basta decir que la ATPasa de H+ consume hasta un 25 %
del ATP que se sintetiza en la clula. Adems de esta ATPasa de H+ de la
membrana plasmtica, las levaduras tienen otra bomba de protones en la
membrana interna de las mitocondrias, la ATP sintasa, que se encarga de la
sntesis del ATP. En contraste con la enzima de membrana plasmtica, el flujo
de protones a travs de la ATP sintasa induce la sntesis de ATP. Uno de los
inhibidores ms efectivos de esta enzima es la oligomicina. As, se puede
proponer uno de los muchos ciclos en los que interviene el ATP en la levadura:
por un lado, el ATP se sintetiza en la mitocondria por medio de la ATP sintasa,
y a nivel de la membrana plasmtica, la ATPasa de H+ lo hidroliza para
bombear protones al exterior de la clula. El factor comn en ambos casos es
un flujo de protones a travs de la membrana.
Pgina 22 de 102
14.1 Fundamento
Bloqueo del intercambio de electrones entre los complejos que conforman

las reacciones de oxido reduccin truncando el transporte de electrones y la
formacin de ATP.

Al terminar esta practica, el alumno podr identificar las enzimas que
participan en reacciones de xido reduccin, importancia de los cofactores y el
efecto de algunos inhibidores.

laboratorio cuando:
realizar.
3.- Emplees de manera correcta, la tcnica durante todo el proceso
4.- Realices un diagrama de flujo para tu mejor comprensin

Comportamiento responsable en el interior del laboratorio. Este
parmetro forma parte de los saberes formativos necesarios para lograr la
competencia del comportamiento en el laboratorio. Es importante que
recuerdes que siempre es calificado por el docente responsable de la
prctica. Durante toda la prctica.

del Laboratorio. El desarrollo de sta habilidad te permite que desarrolles de
forma favorable tu prctica. Durante toda la prctica.
Pgina 23 de 102
as como los tiempos empleados durante el desarrollo de la misma. Es
importante ser observador (a) y de manera minuciosa anotar los resultados
que se obtengan durante el tiempo que se lleve a cabo el desarrollo de la
prctica, en caso de que no sean los resultados esperados, ver que es lo
que pas, y hacer las anotaciones especificas durante la metodologa.
Que el alumno relacione el consumo de glucosa con los cambios de pH

producidos por las levaduras.
Que el alumno describa las vas por las cuales la glucosa genera los
cambios de pH.
Que el alumno interprete el efecto de los inhibidores y los desacoplantes
sobre la salida de protones.

partir del inicio de la prctica: sta parte de la actividad en el laboratorio
tiene la finalidad para que tu:
Desarrolles la habilidad de investigacin bibliogrfica.
As como la aplicacin prctica en tu actividad profesional futura.

10.1 Normas Oficiales Mexicanas Especficas para la Prctica Normas
oficiales mexicanas que aplican para las actividades a realizar dentro del
sistema de prcticas.
STPS-2000


Pgina 24 de 102
DIAGRAMA DE FLUJO

Pgina 25 de 102
La prctica se desarrollar una vez vista la unidad correspondiente a la misma.

Al trmino de la prctica se debe entregar perfectamente limpio y en buen
estado el equipo que se us. Limpiar la mesa de trabajo y cerrar muy bien las
llaves del agua.

Tres vasos de precipitado de 100 ml.
Pipetas de 5 y 10 ml.
Tiras reactivas
Levadura (Saccharomyces cerevisiae) 200 mg/ml.
Solucin de glucosa (10%) para una concentracin
final de 1%.
Solucin de dinitrofenol 40 mmol/l en etanol.
Solucin de azida de sodio 400 mmol/l.
Agua destilada
EXPERIMENTO (AZUL DE METILENO)

TUBO 1
1 .Diluir 0.5 ml de la levadura con 4.5 ml de agua destilada.
2. Adicionar 2 gotas de azul de metileno y posteriormente incubar en bao mara a
37C durante 2 minutos.
3.- Observar cualquier cambio (color) que presente el tubo
TUBO 2
1. Diluir 0.5 ml de la levadura Diluir 0.5 ml de la levadura con 4 ml de agua destilada.
Y agregar 0.5 ml de solucin de glucosa al 10% con 4 ml de agua destilada.
TUBO 3
y agregar 0.5 ml de la solucin de azida de sodio 400
mmol/l, concentracin final de 5 mmol con 4 ml de agua destilada.
Pgina 26 de 102
TUBO 4
y agregar 0.2 ml de la solucin de dinitrofenol 40 mmol/l, concentracin final de
200 mol/l con 3.8 ml de agua destilada.
EXPERIMENTO (MEDICION DE pH)

TUBO 1
1 .Diluir 0.5 ml de la levadura con 4.5 ml de agua destilada.
2. Determinar el pH de la solucin y repetir la medicin dos veces ms con intervalos
de 3 minutos para obtener la lnea basal.
TUBO 2
1. Diluir 0.5 ml de la levadura 0.5 ml de solucin de glucosa al 10% con 4 ml de
agua destilada.
2. Determinar el pH de la solucin y repetir la medicin dos veces ms con
intervalos de 3 minutos para obtener la lnea basal.
3. Determinar el pH de la solucin cada 5 minutos 4 veces, y luego cada 10
minutos 2 veces ms
TUBO 3
1. Diluir 0.5 ml de la levadura con 4 ml de agua destilada.
y agregar 0.5 ml de la solucin de azida de sodio 400 mmol/l, concentracin final de 5
mmol con 4 ml de agua destilada.
2. Determinar el pH de la solucin cada 5 minutos 4 veces, y luego cada 10 minutos 2
veces ms
TUBO 4
1. Diluir 0.5 ml de la levadura con 4 ml de agua destilada.
Y 0.2 ml de la solucin de dinitrofenol 40 mmol/l, concentracin final de 200 mol/l
con 3.8 ml de agua destilada.
2. Determinar el pH de la solucin cada 5 minutos 4 veces, y luego cada 10
minutos 2 veces ms.

Pgina 27 de 102

Pgina 28 de 102
Anlisis de resultados
1. Analizar el significado de los cambios de pH en el experimento control, con
dinitrofenol como desacoplante y con azida de sodio como inhibidor.
3. Hacer una relacin de las vas que producen estos cambios; tomar en cuenta que
las levaduras poseen una ATPasa de protones en la membrana mitocondrial que se
encarga de sintetizar ATP y que tienen otra ATPasa de protones en la membrana
plasmtica cuya funcin es similar a la bomba de Na+/K+ en las clulas de los
mamferos (ver fig).

18.1 Lineamientos Generales para la Evaluacin.
En ste apartado se refiere a la observacin que el docente responsable hace
a su desempeo dentro del laboratorio. Para sta prctica tu evaluacin ser a
travs de los siguientes parmetros:
Realizar un reporte de prctica en tu bitcora de laboratorio, de acuerdo
al anexo 1.

Pgina 29 de 102
1. Cules son las fuentes de carbono que usa la levadura?

2. Cules son las vas metablicas que catabolizan a los carbohidratos?
3. En qu consisten la gluclisis y la fosforilacin oxidativa?
4. Cules son los productos finales del catabolismo de los carbohidratos en
las levaduras?
5. Cules son los inhibidores de la cadena respiratoria de los sitios I, II y III?
Describa su efecto sobre el consumo de O2 y la sntesis del ATP.
6. Reaparece el color azul una vez que el tubo es agitado? Por qu?
1. Cmo sabe que el azul de metileno se redujo completamente y a que se

atribuye?
8. A qu llamamos potencial de reduccin y de que manera lo situamos en la
cadena respiratoria?
9. Cules son los inhibidores especficos y desacoplantes de la fosforilacin
de la cadena respiratoria?
10. Describe los sistemas de lanzaderas y cul de es la ms activa.
18.3 Evaluacin intermedia: Los puntos a evaluar en esta parte

intermedia de la prctica son:
Ser evaluada en lista de cotejo (ver anexo 2).
18.4 Mtodo de asignacin de calificaciones de la prctica
ACTIVIDAD A CALIFICAR
PONDERACIN
Participacin 4%
Lista de cotejo 4%
19. BIBLIOGRAFIA
Thomson. Mxico
Pgina 30 de 102
20. PARA SABER MS
1. Pea A. Studies on the mechanism of K+ transport in yeast. Arch

Biochem Biophys. 1975; 167:397-409.
2. Pardo JP. La ATPasa de H+ de la membrana plasmtica de los
hongos.
Mensaje Bioqumico. 1990; 13: 119-172. Revista de Educacin
Bioqumica (REB). rgano de difusin de la asociacin Mexicana de
Profesores de Bioqumica, A.C. reb@laguna.fmedic.uanm.mx

Pgina 31 de 102
FARMACUTICAS
PRCTICA No. 3
DETERMINACION DE GLUCOSA POSPANDRIAL
ELABORADO POR:
Q.F.B Esther Herrera
QFB. Rocio Barcelos Garca

Pgina 32 de 102
22.- INTRODUCCIN
En condiciones normales la concentracin plasmtica de la glucosa se

mantiene entre lmites estrechos producto del equilibrio entre su ingreso y
salida al espacio intravascular, lo que depende en el primero de la absorcin
intestinal y de su produccin endgena, y en el segundo de su nivel de
captacin por los tejidos.
Una vez ingeridos los alimentos (perodo pospandrial) aumentan los valores de
insulina circulante producto de la mayor concentracin de glucosa plasmtica y
a la accin de las incretinas (hormonas intestinales liberadas durante la
alimentacin). La insulina es una hormona secretada por las clulas del
pncreas en el periodo pospandrial anablico, que favorece el transporte de
glucosa y aminocidos al interior de las clulas de distintos tejidos (muscular,
adiposo y heptico), estimula la sntesis de protenas y enzimas que intervienen
en la gluconeognesis (biosntesis de glucgeno) y la glucolisis (formacin de
CO2 y H2O en aerobiosis y de lactato en anaerobiosis) e inhibe la liplisis, la
glucogenlisis y la gluconeognesis.
Despus de 4 a 6 horas de la ingestin de alimentos, el metabolismo pasa a

una fase de ayuno o catabolia caracterizado por la disminucin de la
concentracin de insulina e incremento de cuatro hormonas llamadas
contrarreguladoras de la glucosa:
1. Glucagn: secretada por las clulas de los islotes pancreticos

2. Adrenalina: sintetizada por la mdula suprarrenal
3. Cortisol: sintetizada en la corteza suprarrenal
4. Hormona del crecimiento: hipofisaria
Durante este periodo conocido como posabsortivo se suprime parcialmente la

sntesis de la glucosa y se incrementa su produccin mediante la glucogenlisis
(degradacin del glucgeno que se transforma en glucosa y cido lctico), y la
gluconeogenesis (formacin de glucosa a expensa de aminocidos, lactatos y
Pgina 33 de 102
glicerol). La glucogenolisis provee el 75% de las necesidades de glucosa en las
primeras 12 horas de ayuno, mientras que la gluconeognesis produce el 25%
restante; aunque posteriormente es esta ltima la principal proveedora, el
hgado el rgano efector de esta accin metablica y la alanina su sustrato
principal. Cuando el ayuno es prolongado otra fuente importante de glucosa es
la gluconeognesis renal, basada ms bien en la glutamina.
Si el estado de ayuno persiste, la glucemia disminuye paulatinamente al igual

que su utilizacin, y se produce el cambio hacia una economa energtica a
expensas de una liplisis de triglicridos del tejido adiposo con la formacin de
glicerol y cidos grasos libres, que se transforman en el combustible principal
de diversos tejidos, reducindose aun ms la captacin de glucosa por el
cerebro. Tambin se forman a partir de los cidos grasos libres los cetocidos
acetoacetato e hidroxibutirato, cuya funcin es servir como energticos
sustitutivos de la glucosa en el encfalo.
El sistema contrarregulador es de gran importancia, ya que previene o limita las
hipoglucemias tanto fisiolgicas como tras la administracin de
hipoglucemiantes, lo que protege as la funcin cerebral. Es precisamente el
hipotlamo el sitio anatmico donde se encuentran los sensores ms
importantes del descenso de la glucosa, aunque tambin parecen existir en el
hgado y el pncreas.
Ante una hipoglucemia estos sensores envan estmulos que provocan la
liberacin de las hormonas contrarreguladoras de la glucosa antes
mencionadas, cuyo objetivo es aumentar la concentracin de glucosa por
diversos mecanismos. El glucagn y la adrenalina son los ms importantes, ya
que su accin contrarreguladora comienza de forma temprana; mientras que el
cortisol y la hormona del crecimiento no evidencian su papel contrarregulador
hasta pasadas unas horas de comenzada la hipoglucemia.

Pgina 34 de 102
22.1 Fundamento
La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidacin de la glucosa a cido

glucnico. El perxido de hidrogeno (H2O2) producido se detecta mediante un
aceptor cromognico de oxigeno, fenol, amino fenazona (4-AF), en presencia
de la (POD). La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin
de glucosa presente en la muestra ensayada

Al terminar esta prctica, el alumno podr determinar y valorar el azcar
sanguneo a los tiempos indicados e interpretar los resultados obtenidos

laboratorio cuando:
realizar.


Pgina 35 de 102



STPS-2000


Pgina 36 de 102
DIAGRAMA DE FLUJO

Pgina 37 de 102
La prctica se desarrollar una vez vista la unidad correspondiente a la misma,

el jefe de equipo tenga la funcin de liderazgo para que organice el desarrollo
de la prctica. Al trmino de la prctica se debe entregar perfectamente limpio y
en buen estado el equipo que se us. Limpiar la mesa de trabajo y cerrar muy
bien las llaves del agua, elaborar el glosario de trminos correspondiente a la
unidad, este se presenta al final de cada prctica el cual se localiza al final de
la prctica. Si se cumplen cada una de las actividades para est prctica en
tiempo y forma tu calificacin final ponderada ser de un 6%

Tubos de ensaye 13X100 Suero o plasma humano
Micropipeta de 2 a 20 L Reactivo para determinacin de
glucosa
Pipeta graduada de 1 Ml
Espectrofotmetro
Centrifuga
Caldas para espectrofotmetro
NOTA: LOS DATOS Y CONCENTRACIONES DE LA PREPARACION ESTAN

SUJETOS AL REACTIVO CON EL QUE SE TRABAJE
Metodologa
1.- Tomar una muestra de sangre en ayuno al paciente A, centrifugar unas ves
que esta se coagule. Despus de haber desayunado el mismo paciente, tomar
una muestra de sangre, a la media hora y a las dos horas, dejar coagular,
centrifugar y separar el suero.
2.- Tomar una muestra de sangre en ayuno al paciente B, centrifugar unas ves
que esta se coagule. Continuar con el ayuno y seguir como el paso uno.
3.- Tomar una muestra de sangre en ayuno al paciente C, centrifugar unas ves
que esta se coagule, dar refresco de cola al mismo paciente y continuar como
el paso uno.

Pgina 38 de 102
4.- Tomar una muestra de sangre en ayuno al paciente D, centrifugar unas ves
que esta se coagule, pedir al paciente que haga ejercicio (15 a 20 min) y
continuar como el paso uno.
5.- Hacer las determinaciones cuantitativas de glucosa.
Longitud de onda505 nm (490-550)
1. Pipetear en cada tubo:

Blanco Patrn Muestra
R (mL) 1,0 1,0 1,0
Patrn (L) --- 10 ---
Muestra (L) --- --- 10
2. Mezclar e incubar 10 minutos a 37C 30 minutos a temperatura ambiente
(15-25).
3. Leer la absorbancia (A) del patrn y la muestra, frente al Blanco de reactivo.
El color es estable como mnimo 30 min.
CLCULOS
(A)Muestra/(A) Patrn x 100 (Conc. Patrn) = mg/dL de glucosa en la muestra.
VALORES DE REFERENCIA
Suero o plasma:
60 110 mg/dL

Pgina 39 de 102
Pgina 40 de 102
al anexo 1.
1.- En cules rutas, la glucosa se degrada para la obtencin de energa?

2.- Cunto tiempo pasa para que la concentracin de glucosa regrese a los
valores normales?
3.- Cul es la concentracin mxima de glucosa que se observa en un
individuo aparentemente sano?
4.- Cmo se regulan negativamente los niveles de glucosa en sangre?
5.- Cmo se regulan positivamente los niveles de glucosa en sangre
6.- Qu sacridos se pueden transformar o generar glucosa durante la
digestin o metabolismo?
7.- Por qu es menos afn el hgado por la glucosa?
26.3 Evaluacin intermedia: Los puntos a evaluar en esta parte intermedia

de la prctica son:
Se evaluar en lista de cotejo (ver anexo 2).
ACTIVIDAD A CALIFICAR
PONDERACIN
Participacin 4%
Lista de cotejo 4%

Pgina 41 de 102
27. BIBLIOGRAFIA
Thomson. Mxico
2004.
Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de Bioqumica. 4. Edicin.
28. PARA SABER MS

para Ciencias de la Salud. :Editorial Limusa Wiley. Mxico. 2001.
Espaa.
Mxico. D.F.

Pgina 42 de 102
FARMACUTICAS
PRCTICA No. 4
EXTRACCIN Y CUANTIFICACIN DE GLUCOGENO CON EL

REACTIVO DE ANTRONA
ELABORADO POR:
Q.F.B Esther Herrera

Pgina 43 de 102
30. INTRODUCCIN
El glucgeno es el principal polisacrido de reserva de las clulas animales y
al igual que la amilopectina es de forma en ramificado y presenta alfa-glucosa
enlaces 1,4 en la parte lineal y alfa-1,6 en los puntos de ramificacin. El
glucgeno es especialmente abundante en el hgado, en donde puede alcanzar
hasta el 7% del peso hmedo; se halla presente tambin en el msculo
esqueltico. En clulas hepticas, el glucgeno se encuentra almacenado en
grnulos grandes, contiene unidas en forma muy ntima, las enzimas
responsables de su sntesis y degradacin.
El glucgeno puede hidrolizarse por la accin de la enzima amilasa que se
encuentra en la saliva y jugo pancretico, la cual rompe los enlaces a 1-4 de
las ramas exteriores del glucgeno para dar glucosa, una cantidad pequea de
maltosa y un ncleo resistente llamado dextrina lmite.
Los polisacridos son considerablemente menos solubles que los
monosacridos en solucin alcohlica, el glucgeno puede separarse de los
azcares y otros compuestos solubles en agua por precipitacin con alcohol.
La cuantificacin puede hacerse hidrolizando el glucgeno seguida de una
prueba para azcares reductores. Puede utilizarse el mtodo general para
carbohidratos con la utilizacin de antrona (9-oxiantraceno) que reacciona con
los carbohidratos y produce un color azul caracterstico.
Reacciona con los monosacridos, disacridos y polisacridos; dextrinas,
almidones, gomas y glucsidos, pero el color producido no es el mismo para
los diferentes carbohidratos.

Al trmino de la prctica, el alumno ser capaz de establecer la estructura
del glucgeno, as como conocer la funcin y utilidad fisiolgica del
homopolisacarido

Pgina 44 de 102
laboratorio cuando:
realizar.
5.- Establecer la estructura y funcin del homopolisacarido glucgeno.



Aprenders a identificar el carbohidrato principal de nuestro metabolismo en
forma de glucgeno.
Conocers la separacin de carbohidratos por sus propiedades
Identificars como y donde se encuentra almacenada la glucosa en nuestro
organismo.
Pgina 45 de 102
Aprenders a cuantificar la concentracin de azcar almacenada en hgado.

STPS-2000


Pgina 46 de 102
DIAGRAMA DE FLUJO

Pgina 47 de 102
llaves del agua,
Equipamiento
Bao de agua hirviendo.
Bao de hielo y agua del grifo.
Centrfuga.
Balanza.
Estufa a 35C.
Colormetro.
Agitador de tubos.
Material
Tubos de vidrio (2,2 x 16 cm; 1,5 x 16 cm) y gradilla.

Tubos de centrfuga cnicos de plstico con tapn.
Guantes de ltex.
Pipetas automticas (0,1 y 1,0 mL) (puntas).
Pipetas de vidrio (5,0 y 10 mL).
Propipeta.
Papel de filtro.
Pinzas
Reactivos
Hgado de pollo
Solucin de hidrxido potsico 30 %
Solucin de tricloroactico. Al 10% (TCA)
Solucin de sulfato de sdio.
Etanol al 95%
Solucin de glucosa 9 mg/mL
Solucin de antrona en cido sulfrico (2g/L).
Solucin amortiguadora de fosfato sdico . (pbs 1 x con NaCl 0,005 M)
Pgina 48 de 102
Agua destilada
1. Obtencin de la muestra (parte 1)
Aislamiento de glucgeno de hgado pollo.

1. Se ponen 3 mL de la solucin de hidrxido potsico al 30% en un
tubo de ensayo de vidrio grueso.
2. Se pesan 4 g de tejido (aproximadamente) y se introducen en el tubo

anterior. Anotar el peso exacto.
3. Se calienta en un bao de agua hirviendo, agitando con cuidado para

acelerar el proceso, durante 20 minutos (o hasta su digestin). USAR
UN TROZO DE PAPEL HIGINICO O PINZAS PARA MANIPULAR
LOS TUBOS. PRECAUCION: ALCALI HIRVIENDO!!
4. Se enfra el tubo bajo el grifo una vez acabada la digestin.
5. Una vez enfriado el tubo de ensayo (comprobarlo por contacto con el

dorso de la mano), se aaden 0,2 mL de la solucin saturada de
Na2SO4 y se mezclan fuertemente. Dejar reposar 5 minutos.
6. Se precipita el glucgeno que est en solucin por adicin de 7 mL

de etanol al 95%. Se agita y deja en fro en un bao de hielo durante
5 minutos.
7. Se pasa la solucin a tubos de centrfuga cnicos de plstico con

tapn, y se centrifuga a la mxima velocidad (5.000 r.p.m) durante 5
minutos. Se desecha el sobrenadante y se coloca el tubo invertido
sobre papel de filtro.
8. Se aaden 5 mL de la solucin de TCA al 10% al tubo y se disuelve

totalmente el sedimento agitando fuertemente.
9. Se centrifuga de nuevo 5 minutos (5.000 r.p.m).
10. Se pesa un tubo de centrfuga cnico de plstico vaco y anota el

peso. Marcarlo con una seal para su posterior identificacin.
11. Se aade el sobrenadante obtenido en la ltima centrifugacin a un

tubo de ensayo largo, al que previamente se han aadido 10 mL de
etanol al 95%, desechando el sedimento de la centrifugacin. Se deja
reposar 5 minutos para que se produzca la precipitacin del
glucgeno.

Pgina 49 de 102
12. Se traslada la solucin al tubo de centrfuga de plstico, previamente
pesado, y se centrifuga durante 5 minutos ms a 5.000 r.p.m
13. Una vez acabada la centrifugacin se tira el sobrenadante. El

sedimento obtenido representa el glucgeno prcticamente exento de
sustancias contaminantes. Dejarlo secar en la estufa a 35C hasta su
utilizacin.
Cuantificacin de la muestra
Determinacin de la pureza del glucgeno obtenido
1. Se pesa en la balanza el tubo con el glucgeno desecado, obtenido en la

parte anterior, y se anota el resultado.
2. Se disuelve este glucgeno a razn de 8 mg de dicho glucgeno por mL

de de PBS 1 con NaCl 0,005 M (el in que activa la -amilasa). De esta
manera queda preparado el glucgeno para las siguientes
determinaciones.
3. Se prepara una dilucin 1/50 del glucgeno disuelto anteriormente (0,1

mL en 5 mL de agua).
4. Se preparan tres tubos de ensayo como se describe en la
5. Tabla 1:
Tabla 1. Determinacin de la pureza del glucgeno

Tubo (n) A B C
Glucosa (9 mg/mL) 1 mL --- ---
Agua --- --- 1 mL
Glucgeno (dilucin 1/50) --- 1 mL ---
Antrona (2 g/L H2SO4) 5 mL 5 mL 5 mL
Una vez preparados los tubos, se sumergen en un bao con agua hirviendo
durante 5 minutos. Pasado este tiempo, se enfran en un bao de
hielo. (Precaucin al coger los tubos. Usar pinzas)
6. Se mide la absorbancia a 620 nm ajustando a 0 con el tubo C (blanco).

Pgina 50 de 102
7. Para calcular el porcentaje de pureza se aplica la relacin:
A620 GLUCGENO / A620 GLUCOSA
8. Se expresa la relacin de absorbancia obtenida como mg de

glucgeno/g de tejido, (rendimiento).
Resultados esperados
Una vez finalizada la parte prctica, hay que presentar los resultados
obtenidos. Para ello se debe indicar el rendimiento total en glucgeno y calcular
el contenido en glucgeno del hgado, expresndolo en mg de glucgeno por g
de tejido fresco.
A continuacin se muestra un ejemplo representativo de resultados
esperados:
En la Tabla 2 se muestran las absorbancias determinadas en las muestras
Tabla 2. Absorbancia a 620 nm

Glucosa Estndar 1,420
Glucgeno 0,527
Porcentaje de glucgeno obtenido:
Rendimiento de glucgeno en hgado:
Clculo de los g glucgeno puro en 25 mg del precipitado obtenido a partir de

4,54 g de hgado utilizado como muestra:

Pgina 51 de 102

Pgina 52 de 102
al anexo 1.
1.- Cul es la funcin del sulfato de sodio en la extraccin?

2.- Cul es la reaccin de la antrona con los azcares?
3.- En qu rganos del cuerpo humano ocurre la sntesis de glucgeno?
4.- Cmo se regula la sntesis de glucgeno?

de la prctica son:
Se evaluar lista de cotejo (ver anexo 2).
Participacin 4%
Lista de cotejo 4%
Reporte en bitcora 12 %
35. BIBLIOGRAFIA
Thomson. Mxico
2004.

Pgina 53 de 102
36. PARA SABER MS
Carrol, N., R. Longley y J. Roe. 1956. The determination of glucogen in

liber and muscle by use of anthron reagent. J. Biol Chem. 220, 553.
Rendina, G. 1974. Tcnicas de Bioqumica Aplicada. Mxico.

Pgina 54 de 102
FARMACUTICAS
PRCTICA No. 5
DETERMINACION DE CUERPOS CETNICOS
ELABORADO POR:
QFB Esther Herrera

Pgina 55 de 102
Para la realizacin de la prctica es necesario trabajar por equipo.
38.- INTRODUCCIN
Cuando el metabolismo de la glucosa est trastornado como diabetes

mellitus no tratada, las fiebres, la diarrea y otros vmitos, el ayuno etc., se
excretan en la orina cantidades excesivas de productos intermediarios del
metabolismo de las grasas, sobre todo cido betahidroxibutrico y cido
acetoacetico (cido diactico). Esta ltima sustancia se transforma lentamente
en acetona cuando la orina se deja reposar a la temperatura ambiente. La
presencia de este compuesto en la orina, es un trastorno conocido como
acetonuria.
La acetona es un cuerpo cetnico, que se produce en el metabolismo oxidativo,
y que est presente en la orina normal del ser humano en cantidades muy
pequeas.
Existen diversas situaciones en las que la acetona aparece en cantidades

mayores en la orina, como ocurre en el embarazo, en situaciones de ayuno, en
la cetoacidosis alcohlica y en la cetoacidosis diabtica, por indicar las ms
frecuentes. Todas estas situaciones tienen en comn una acumulacin anormal
de cetonas en el organismo, a consecuencia de la insuficiencia o de la
inadecuada utilizacin de los hidratos de carbono. En vez de stos, se
comienzan a utilizar como fuente metablica los cidos grasos, cuyos
productos finales, las cetonas, se van acumulando y, en consecuencia, su
presencia se va haciendo patente en la orina.
Ante un enfermo con acetonuria es necesario realizar un estudio del plasma

sanguneo para descartar, en primer lugar, una simple cetosis (mayor
proporcin de cuerpos cetnicos) debida al ayuno.
La cetoacidosis diabtica es una complicacin de la diabetes

insulinodependiente y tiene lugar cuando se produce un dficit de insulina y un
aumento de la concentracin de glucagn. Se caracteriza por la presencia de
Pgina 56 de 102
acetonuria, la prdida de potasio en la orina y el aliento con un olor afrutado por
la presencia de acetona.
38.1 Fundamento
Tanto la acetona como el cido diactico producen un color prpura con

el nitroprusiato de sodio alcalino. La prueba permite reconocer acetona aun en
dilucin de 1 a 10 000, y el cido diactico en dilucin de 1 a 125 000.

Al terminar esta prctica, el alumno podr identificar los cuerpo cetnicos
por medio del color.

laboratorio cuando:
realizar.
5.- Al termino de la practica, el alumno tendr la capacidad de manejar pruebas

colorimtricas para la identificacin de cuerpos cetnicos.


Pgina 57 de 102

Al termino de la practica, el alumno tendr la capacidad de identificar si en

una muestra de orina estn presentes cuerpos cetnicos, a travs de una
prueba colorimtrica.
Tambin, deber conocer las enfermedades causantes de que se presenten

estos compuestos.


STPS-2000

Pgina 58 de 102
DIAGRAMA DE FLUJO

Pgina 59 de 102

llaves del agua,
Tubos de ensaye
Cristales de nitroprusiato
Sulfato de amonio
Solucin concentrada de sulfato de
amonio
Pipetas graduadas de 10 mL
Muestra problema (orina) Muestra A
Muestra (orina) Proporcionada por el
maestro Muestra B
PROCEDIMIENTOS
Agregar cada tubo:
Muestra A Muestra B
Cristal de nitroprusiato Un cristal pequeo Un cristal pequeo
Sulfato de amonio 2 gr. 2 gr.
Muestra de orina paciente 10 mL ---
Muestra de orina proporcionada 10 mL
por el maestro
Mezclar bien los tubos
Sol. Conc. de hidrxido de amonio 2 mL 2 mL
(peso especfico 0.88).
NOTA: Si estn presentes grandes cantidades de acetona, se desarrollan un

color prpura intenso. Un color plido o la falta de color constituyen una
reaccin negativa.

Pgina 60 de 102

Pgina 61 de 102
42.1: Lineamientos generales para la evaluacin
El maestro evaluara al alumno de acuerdo a los criterios especficos
marcados por el propsito particular de la prctica. Adems, se evaluaran las
capacidades personales de cada alumno para el manejo del material y
reactivos utilizados, de acuerdo a las normas de seguridad correspondientes.
Para sta prctica tu evaluacin ser a travs de los siguientes parmetros:
al anexo 1.
1.- Cules son los cuerpos cetnicos?

2.- Qu caractersticas tiene una persona que entra en cetosis? Cmo se le
identifica?
3.- En qu condiciones una persona entra en cetosis?

de la prctica son:
Se evaluar en lista de cotejo (Ver anexo 2)
Participacin 4%
Lista de cotejo 4%
43. BIBLIOGRAFIA
Thomson. Mxico
2004.
Pgina 62 de 102
44. PARA SABER MS

Espaa.
Mxico. D.F.

Pgina 63 de 102
FARMACUTICAS
PRCTICA No. 6
DETERMINACIN DE COLESTEROL EN SANGRE
ELABORADO POR:
QFB Esther Herrera

Pgina 64 de 102
45.- NMERO DE ALUMNOS POR UNIDAD DE PRCTICA
Para la realizacin de la prctica es necesario trabajar por equipo.
46.- INTRODUCCIN
El colesterol, es una molcula compleja que forma parte de todas las grasas y
aceites animales. Acta como precursor en la sntesis de vitamina D,
pertenece a un grupo de compuestos conocidos como esteroides, y est
relacionado con las hormonas sexuales producidas en las gnadas y las
hormonas de la corteza suprarrenal.
Cuando el colesterol se eleva en la sangre por encima de unos niveles,
considerados como normales, se produce una enfermedad conocida como
hipercolesterolemia. Se consideran normales, valores de colesterol en la
sangre iguales o inferiores a 200 mg/dl. Valores de riesgo se consideran como
moderados 200-239mg/dL, y valores altos 240mg/dL o ms. Existe una
estrecha relacin entre los niveles de colesterol de la sangre, los niveles de
otras grasas o lpidos y el desarrollo de la aterosclerosis
Aunque muchos alimentos, sobre todos los lcteos y la grasa de la carne,

contienen colesterol, el cuerpo tambin lo sintetiza a partir de sustancias libres
de colesterol. No obstante, las investigaciones indican que una dieta rica en
colesterol genera en la sangre niveles anormalmente altos de colesterol, as
como de grasas y lpidos relacionados con l. Las pruebas demuestran de una
manera contundente que las personas con dichos niveles son ms propensas a
padecer aterosclerosis e infartos que las personas con niveles bajos.
Los altos niveles de lipoprotenas de baja densidad en el plasma aumentan
tambin el riesgo de infarto y enfermedades del corazn.
El colesterol y sus derivados se segregan a travs de las glndulas sebceas

de la piel para actuar como lubricantes y como cubiertas protectoras del pelo y
la piel.

Determinara la concentracin de colesterol en sangre por el mtodo
enzimtico colorimtrico.

Pgina 65 de 102
Al termino de la practica el alumno deber de conocer la importancia que
tiene el mantener los niveles normales de colesterol en el organismo

laboratorio cuando:
realizar.




Pgina 66 de 102
Al trmino de la prctica, el alumno tendr la capacidad de determinar la
concentracin de colesterol en la yema de huevo


STPS-2000


el jefe de equipo tenga la funcin de liderazgo para que organice el desarrollo
de la prctica. Al trmino de la prctica se debe entregar perfectamente limpio y
en buen estado el equipo que se us. Limpiar la mesa de trabajo y cerrar muy
bien las llaves del agua, elaborar el glosario de trminos correspondiente a la
unidad, este se presenta al final de cada prctica el cual se localiza al final de
la prctica.

Pgina 67 de 102
DIAGRAMA DE FLUJO

Pgina 68 de 102
Bao Mara Jeringas

Tubos de ensaye 13x100 Torniquete
Espectrofotmetro Torundas
Cubetas para espectrofotmetro Suero humano
Micropipetas Equipo para determinacin de Colesterol
Procedimiento experimental
1. Condiciones del ensayo.

Longitud de onda 505nm
Cubeta.. 1cm paso de luz
Temperatura 37C
Reactivo Blanco Patrn Muestra
Reactivo de trabajo (mL) 1 1 1

Patrn (L) --- 10 ---
Muestra (L) --- --- 10
Mezclar e incubar 5 minutos a 37C 10 min. a temperara ambiente.
Leer la absorbancia (A) del Patrn y la muestra, frente a Blanco de reactivo.

El color es estable mnimo 60 min.
NOTA: La metodologa de la determinacin de colesterol en sangre podra

variar dependiendo del kit con el que se trabaje.

Pgina 69 de 102

Pgina 70 de 102
al anexo 1.
1. Cul es la ruta y cmo se regula la sntesis de colesterol?

2. Cul es la funcin del colesterol en el organismo?
3. Qu alimentos son ricos en colesterol?
4. Cul es el contenido de colesterol en los siguientes alimentos: Leche
entera, carne magra, manteca de cerdo, mantequilla, margarina, cacahuate

de la prctica son:
Se evaluar en lista de cotejo (Ver anexo 2)
Participacin 4%
Lista de cotejo 4%
51. BIBLIOGRAFIA
Thomson. Mxico
2004.

Pgina 71 de 102
Lehninger AL, Nelson, DL. Principios de Bioqumica. 4. Edicin.
52. PARA SABER MS

Espaa.
Mxico. D.F.

Pgina 72 de 102
FARMACUTICAS
PRCTICA No. 7
Determinacin de protenas
Por el mtodo de Biuret
Elaborado por:
QFB. Rocio Barcelos Garca
QFB. Nadia Martinez Rubio
QFB. Esther Herrera
QFB. Dora Luna Vzquez

Pgina 73 de 102
54. INTRODUCCIN
Las protenas ocupan un lugar de mxima importancia entre las molculas
constituyentes de los seres vivos (biomolculas). Prcticamente todos los
procesos biolgicos dependen de la presencia o la actividad de este tipo de
molculas (Berg et al, 2008).
Determinar la concentracin de protenas en una muestra biolgica es una

tcnica de rutina bsica cuando se aborda un esquema de purificacin de una
protena concreta, cuando se quiere conocer la actividad especfica de una
preparacin enzimtica, para el diagnstico de enfermedades, as como para
muchos otros propsitos. Existen diferentes mtodos para la cuantificacin de
protenas. Muchos de estos mtodos se basan en: a) la propiedad intrnseca de
las protenas para absorber luz en el UV, b) para la formacin de derivados
qumicos, o c) la capacidad que tienen las protenas de unir ciertos colorantes
(Segal, 2005).
La reaccin de biuret es una reaccin coloreada (violeta) debida a la formacin
de un complejo de Cu en un medio alcalino en compuestos que poseen ms de
un enlace peptidico, como las proteinas (Cambell et al, 2006)
La curva de patrn es un mtodo de qumica analtica empleado para medir la
concentracin de una sustancia en una muestra por comparacin con una serie
de elementos de concentracin conocida. Se basa en la existencia de una
relacin en principio lineal entre un carcter medible (por ejemplo la
absorbancia en los enfoques de espectrofotometra) y la variable a determinar
(la concentracin). Para ello, se efectan diluciones de unas muestras de
contenido conocido y se produce su lectura y el consiguiente establecimiento
de una funcin matemtica que relacione ambas; despus, se lee el mismo
carcter en la muestra problema y, mediante la sustitucin de la variable
independiente de esa funcin, se obtiene la concentracin de esta. Se dice
pues que la respuesta de la muestra puede cuantificarse y, empleando la curva
patrn, se puede interpolar el dato de la muestra problema hasta encontrar la
concentracin (Harris, 2003).
Razones por las que se realiza el examen

Esta prctica se lleva a cabo para que los alumnos conozcan uno de los
diferentes mtodos colorimtricos que existen. Aprender el manejo del
espectrofotmetro y su aplicacin en los mtodos colorimtricos.
Aprender el empleo de una curva patrn para la determinacin de la cantidad
de molculas presentes en una muestra, en este caso de protenas.
Determinar la concentracin de protenas en una muestra en suero, utilizando
el mtodo de Biuret.
Pgina 74 de 102
54.1 Fundamento
El nombre de la reaccin procede del compuesto coloreado formado por la
condensacin de dos molculas de urea con eliminacin de amonaco.
Reaccin del Biuret Si una solucin fuertemente alcalina de sulfato cprico
(CuSO4) se aade a una solucin de protena se forma una complejo entre el ion
cprico y los enlaces peptdicos, con aparicin de una coloracin violeta-prpura,
que presenta un mximo de absorcin a 540 nm.
Las caractersticas ms importantes de la reaccin son:
La reaccin del Biuret se aplica, a partir de los tetrapptidos, a todos los
pptidos y protenas.
Su rango de determinacin es de 1 a 6 mg/ml.
No depende de la composicin de aminocidos.
Algunos compuestos (NH4+, Tris, etc.) dan la reaccin.
55.PROPOSITO ESPECFICO DE LA PRCTICA

Al terminar esta prctica, el alumno sabr utilizar el espectrofotmetro e
identificar cuales son los mtodos de cuantificacin de protenas
colorimtricos.

laboratorio cuando:
realizar.
5.- Manejo y calibracin del Espectrofotmetro.
6.- Coloques de manera correcta la muestra dentro del equipo para su posterior
lectura.


Pgina 75 de 102
Aprenders a identificar cuales son los factores que pueden alterar las
reacciones enzimticas.
Conocers la manera en la que los diferentes factores enzimticos, alteran
la velocidad de reaccin de las enzimas


10.1 Normas Oficiales Mexicanas Especficas para la Prctica Normas
oficiales mexicanas que aplican para las actividades a realizar dentro del
sistema de prcticas.
STPS-2000

Las referidas en las prcticas generales de seguridad.

esta prctica tiene como objetivo que se formen equipos y que se nombre un
responsable para cada uno; que el jefe de equipo tenga la funcin de liderazgo
para que organice el desarrollo de la prctica. Al trmino de la prctica se debe
entregar perfectamente limpio y en buen estado el equipo que se us. Limpiar
la mesa de trabajo y cerrar muy bien las llaves del agua.

Pgina 76 de 102
DIAGRAMA DE FLUJO
DIAGRAMA FLUJO

Pgina 77 de 102
Reactivos
Muestra de suero
BSA 1 mg/mL
Solucin salina fisiolgica
Reactivo de Biuret
Material:
Gradilla
12 Tubos de vidrio
Pipetas Volumtricas
Micropipetas

Procedimiento:
1. Medir en cada uno de los tubos los siguientes volmenes de la
disolucin patrn de albmina de suero bovino (BSA) y de agua
destilada que se indican en la siguiente Tabla:
Muestra la muestra se le har una dilucin con solucin salina fisiolgica

2. A cada uno de los tubos de ensayo se aaden 2 mL de reactivo de Biuret, se
tapa con papel parafilm y se invierte dos o tres veces para mezclar.
3. Se toma la gradilla con los tubos de ensayo y se introduce en el bao de
agua termostatizado a 37 C, dejndose que se desarrolle el color durante 15
min.
Pgina 78 de 102
4. Se enfran los tubos de ensayo
5. Se ajusta el cero de absorbencia con la solucin blanco exenta de protena
(tubo 1). A 540 nm.
6. Se miden las absorbancias de los tubos 2 a 8.
7. Se anotan las medidas de absorbancia.
8. Una vez realizadas las medidas, se limpian cada uno de los tubos de
ensayo con escobilla y jabn. Las marcas de rotulador se eliminan fcilmente
por frotacin con el estropajo. Se lava con abundante agua del grifo y se
enjuagan los tubos con agua destilada. Se dejan en la gradilla boca abajo hasta
el da siguiente para que se sequen.
9. Se calcula la concentracin de protena que se ha colocado en cada uno de

los tubos de ensayo.
Como ejemplo: en el ensayo de Biuret, en el tubo 2 se han colocado 0,2 mL de
BSA 10 mg/mL y se han diluido a un volumen de 2 mL con agua. Por tanto la
concentracin de protena en el tubo ser:
(0,2 mL x 10 mg/mL) : 2 mL = 1 mg/mL.
Resultados esperados:
Graficar la curva
Sacar la ecuacin de la recta para determinar la concentracin de la muestra.
Calcula la concentracin de protena que se ha colocado en cada uno de los
tubos de ensayo. Como ejemplo: en el ensayo de Biuret, en el tubo 2 se han
colocado 0,2 mL de BSA 10 mg/mL y se han diluido a un volumen de 2 mL con
agua. Por tanto la concentracin de protena en el tubo ser:
(0,2 mL x 10 mg/mL) : 2 mL = 1 mg/mL

Pgina 79 de 102

Pgina 80 de 102
Realizar un reporte de prctica en tu bitcora de laboratorio, de acuerdo al anexo 1.
1. Se podr determina la concentracin de cualquier muestra de protenas

con esta recta patrn?
2. Los aminocidos y dipptidos daran positiva la reaccin de Biuret?
3. Servir esta reaccin para determinar protenas en orina?

de la prctica son:
Ser evaluado en lista de cotejo
58.4 Mtodo de asignacin de calificaciones del laboratorio
Participacin 4%
Lista de cotejo 4%
59. BIBLIOGRAFIA
Thomson. Mxico
2004.
Pgina 81 de 102
60. PARA SABER MS

para Ciencias de la Salud. : Editorial Limusa Wiley. Mxico. 2001.
Espaa.
Mxico. D.F.

Pgina 82 de 102
FARMACUTICAS
PRCTICA No. 8
Estudio de los productos finales

del metabolismo nitrogenado
ELABORADO POR:
QFB. Esther Herrrera

Pgina 83 de 102
62. INTRODUCCIN
Las protenas de la dieta son la fuente primaria de nitrgeno en el cuerpo. Los
aminocidos producidos por la digestin de protenas son absorbidos a travs
del epitelio intestinal y entran a la circulacin portal. Las clulas incorporan los
aminocidos, los cuales son usados para la sntesis de protenas y otros
compuestos nitrogenados o son oxidados para producir energa. Los
compuestos derivados de aminocidos, adems de las protenas celulares,
incluyen hormonas (como la tiroxina, epinefrina e insulina), neurotransmisores,
creatina fosfato, el hemo de la hemoglobina y de los citocromos, el pigmento de
la piel (la melanina), las purinas y las pirimidinas, etanolamina, colina,
esfingosina, el glutatin, los cidos glicoclico y tauroclico, la tioetanolamina
de la CoA, el xido ntrico y las poliaminas entre muchos otros. Se puede decir
que todos los compuestos nitrogenados del organismo son sintetizados a partir
de aminocidos.
Los aminocidos son fuente de energa, sus esqueletos de carbono son
directamente oxidados o convertidos a glucosa y sta es oxidada o
almacenada en forma de glucgeno. Los aminocidos tambin pueden ser
convertidos en triacilgliceroles para ser almacenados en el tejido adiposo.
A pesar de la uniformidad de los aminocidos como bloques estructurales de
las protenas, no existe un planteamiento unitario en cuanto a su metabolismo,
ya que su estructura hidrocarbonada es diversa y, aunque algunos de ellos
pueden interconvertirse mediante reacciones metablicas, cada uno es un
compuesto nico, con un metabolismo y funciones biolgicas individuales.
Quiz la parte de su metabolismo ms uniforme sea el destino de su parte
nitrogenada. El nitrgeno se libera como amonaco, cuya mayor parte se
convierte en urea, un compuesto no txico, muy soluble en agua, que se
excreta fcilmente por los riones.

Pgina 84 de 102
La sntesis se realiza principalmente en el hgado, donde se lleva a cabo la
mayor parte de la biosntesis de aminocidos no esenciales y gran parte de la
degradacin de todos los aminocidos.
EL NITRGENO NO PROTENICO EN LA SANGRE

El nitrgeno no protenico en la sangre se encuentra en un grupo heterogneo
de sustancias que incluye la urea, la creatinina, la creatina, el cido rico, los
aminocidos no proteicos ornitina y citrulina, algunos pptidos como el glutatin
y otros, con una concentracin total de nitrgeno de 25 a 40 mg/dl. La urea es
el principal compuesto nitrogenado no proteico del plasma, otros constituyentes
principales en orden decreciente de contribucin de nitrgeno son los
aminocidos, el cido rico, la creatinina, la creatina y el amonio.
Las cantidades exactas de cada componente varan segn la ingesta de
protenas y el estado fisiolgico del organismo. Aunque la urea es el mayor
producto final del metabolismo nitrogenado, el nitrgeno es tambin excretado
en otros compuestos: la creatinina es producida a partir de la creatina fosfato,
el cido rico a partir de la degradacin de las bases pricas y el amonio es
liberado por la glutamina, particularmente en el rin como una va de
excrecin de H+ por la orina. Otros productos nitrogenados derivados del
metabolismo de neurotransmisores, hormonas y dems compuestos
especializados son excretados tambin por la orina aunque representan una
mnima parte del nitrgeno eliminado. Algunos de estos productos, como la
bilirrubina (formado en la degradacin del grupo hemo), son excretados
principalmente en las heces. Azoemia es una designacin bioqumica que se
refiere a cualquier aumento de la concentracin plasmtica de compuestos
nitrogenados no proteicos, principalmente urea y creatinina.
Compuesto Concentracin Cantidad

Nitrogenado Plasmtica Excretada
En orina/da
Urea 20-30 mg/dl 12-20 g de
nitrgeno
ureco
cido rico 3-6 mg/dl 250-750 mg

Pgina 85 de 102
Creatinina 1-2 mg/dl Hombres:14-26
mg/Kg
Mujeres:11-20
mg/Kg
NH4+ 10-70 l/dl 140-1500 mg de
nitrgeno de
amonio
62.1 Fundamento
La urea es el principal producto final del catabolismo protenico. Se forma en el
hgado y en el rin a partir de bixido de carbono y amoniaco en el ciclo de la
urea. La expresin nitrgeno ureico surge del hecho de que tradicionalmente
la urea se determina a partir del nitrgeno contenido en el amoniaco que se
forma por la accin de la enzima ureasa sobre la urea. Aunque es un trmino
similar, no es equivalente al de urea, y se puede establecer una correlacin
entre ambos mediante la expresin: urea (mg) = nitrgeno ureico (mg) x 2.14
(el peso molecular de la urea es de 60 e incluye 2 tomos de nitrgeno por
molcula. Por lo tanto el BUN = 60/28= 2.14). Por ello un valor de BUN de 20
mg/dl equivale a una urea de 20 x 2.14 42.8 mg/dl.
La concentracin srica de urea vara bastante en los individuos normales y
depende de factores tan diversos como la ingesta diettica de protenas y el
estado de hidratacin del organismo. La elevacin de sus valores en el torrente
circulatorio se denomina uremia. Los sntomas clnicos pueden presentarse con
valores cercanos a 50 mg/dl (>8 mmol/l). El catabolismo protenico rpido y el
deterioro de la funcin renal son las principales causas de su elevacin.
La urea se filtra normalmente libre a travs de los glomrulos renales de modo
que, una pequea cantidad se absorbe en los tbulos y el resto se excreta en
la orina. Sin embargo, el cambio en la concentracin de la urea sangunea no
es indicativo de una causa determinada ya que muchas enfermedades pueden
provocar alteraciones en su concentracin. Las modificaciones en la
concentracin de urea srica suelen clasificarse por su origen en prerrenales,
renales o postrenales. Las causas prerrenales pueden agruparse en factores
que resultan de perfusin renal inadecuada y, por tanto, de una menor filtracin
glomerular (deshidratacin, shock, disminucin del volumen sanguneo y fallo

Pgina 86 de 102
cardaco congestivo) o transtornos resultantes de valores anormalmente altos
de protenas sanguneas. La ingestin excesiva de protenas y el incremento
del catabolismo de las protenas (fiebre, estrs y quemaduras) son otras
causas adicionales del incremento de urea srica.
Las causas renales son aquellas con alteracin de la filtracin glomerular y, por
tanto retencin de urea como consecuencia de una enfermedad renal crnica o
aguda. Por ltimo, las causas posrenales se deben a padecimientos que
causan obstruccin de las vas urinarias inferiores, con paso de la urea de la
orina estancada a la circulacin sangunea. Tambin son significativos los
valores bajos de urea en la enfermedad heptica grave, ya que un hgado
lesionado es incapaz de sintetizar urea, lo cual permite la acumulacin de
amonio en la sangre causando encefalopata heptica (asterixis, ataxia, coma,
confusin, estupor, lenguaje lento y somnolencia).
La determinacin de urea, por s sola, es de poco valor diagnstico, y deben
realizarse valoraciones comparativas a lo largo del tiempo o utilizarse
conjuntamente con otras pruebas.
La determinacin de urea se basa en la accin de la enzima ureasa sobre la
urea para producir amoniaco y cido carbnico. El amonio formado se valora
hacindolo reaccionar con cido _-cetoglutrico en presencia de la glutamato
deshidrogenasa. La disminucin de la absorbencia frente al tiempo (_
Absorbencia) a 340 nm, correspondiente a la oxidacin de NADH a NAD+, es
proporcional a la concentracin de urea.
Urea + H2O + 2 H+ 2 NH4+ + CO2

2 NH4+ + 2 -cetoglutarato + 2 NADH
H2O + 2 NAD+ + 2 glutamato
El alumno deber cuantificar los niveles de urea, creatinina y cido rico

y cual es su participacin con el metabolismo.

Pgina 87 de 102
laboratorio cuando:
realizar.




Pgina 88 de 102
Aprenders a identificar cuales son los factores que pueden alterar el
metabolismo de las protenas



STPS-2000


Pgina 89 de 102
DIAGRAMA DE FLUJO

Pgina 90 de 102
La prctica se desarrollar una vez vista la unidad correspondiente a la misma.

llaves del agua.
3 Gradillas con 2 y 3 tubos. Suero.
Pipetas automticas Reactivo para determinacin de urea

Puntas para pipetas automticas Reactivo para determinacin de
creatinina
3 Pipetas de 1 mL Reactivo para determinacin de
cido rico
Espectrofotmetro a 340, 492 y 520 nm.


Pgina 91 de 102
PROCEDIMIENTO
Como la urea es degradada rpidamente por accin bacteriana, las muestras
tomadas para proceder a su determinacin deben ser refrigeradas hasta su
procesamiento.
Hacer la determinacin cuantitativa de urea
Longitud de onda510 nm (500-550)
1. Pipetear en cada tubo:

Blanco Patrn Muestra
R 1 (mL) 1,0 1,0 1,0
Patrn (L) --- 25 ---
Muestra (L) --- --- 25
2. Mezclar y aadir.
R 2 (mL) 1,0 1,0 1,0
Mezclar e incubar 15 min a 37C.
Leer la (A) del Patrn y la muestra, frente a Blanco de reactivo.
CLCULOS
(A)Muestra/(A) Patrn x 50 (Conc. Patrn) = mg/dL de urea en la muestra.
VALORES DE REFERENCIA
Suero o plasma:
15 45 mg/dL
AMONIO
La produccin de urea es un medio de destoxificacin del amonio derivado del
catabolismo proteico, de la flora intestinal y de la desaminacin oxidativa de los
aminocidos. El intestino es una fuente importante de amonio, en donde se
forma por degradacin bacteriana de las protenas de la dieta y de la urea. La
mayor parte de este amonio es separado de la sangre de la vena porta por el
hgado para ser convertido en urea. En otras condiciones, las pequeas
cantidades de amonio que escapan a la destoxificacin y a la excrecin renal,
se encuentran presentes en la sangre; la concentracin normal del nitrgeno
del suero debido al ion amonio suele ser menor de 70 mg/dl.
En vista de la toxicidad del amonio, una elevacin apreciable de los niveles de
Pgina 92 de 102
amonaco en sangre podra afectar seriamente el equilibrio cido-base y a la
funcin cerebral. Las hepatopatas graves traen como consecuencia un
aumento de la concentracin del amonio en la sangre, el plasma y el lquido
cefalorraqudeo. Las enfermedades hepticas en las que se encuentran tales
elevaciones tienen muy mal pronstico, ya que indican lesin intensa del
hgado con inminente insuficiencia heptica, la cual va acompaada de
diversas manifestaciones txicas, particularmente en el cerebro.
Las deficiencias de cualquiera de las enzimas del ciclo de la urea, aunque muy
poco frecuentes, son todas ellas causas importantes de incremento de los
niveles plasmticos de amonaco y de las manifestaciones txicas. En las
acidosis metablicas, la excrecin renal del in amonio (por la hidrlisis de
glutamina) aumenta porque el rin lo secreta para eliminar junto con l
protones en la orina.
Las muestras para la determinacin del amonio deben obtenerse de
preferencia de sangre arterial o de los capilares del lbulo auricular, ya que el
metabolismo del amonio en el msculo aumenta los valores de ste en sangre
venosa y, por lo tanto, tambin el ejercicio puede causar un aumento en la
concentracin de amonaco. La muestra de sangre recin obtenida se debe
vaciar en un tubo refrigerado, colocarse en agua helada y enviarse de
inmediato al laboratorio para su anlisis (el retraso en el procesamiento puede
ocasionar resultados falsamente elevados).
Los niveles de amonaco varan con la ingestin de protenas. Este compuesto
es principalmente excretado por la orina pero tambin hay prdidas importantes
por las heces y la piel.
La medicin de amonio se basa en el mismo principio que la determinacin del
nitrgeno de la urea.
CREATINA Y CREATININA
Estas sustancias nitrogenadas no proteicas junto con la urea pueden ser
consideradas en su conjunto porque las concentraciones que alcanzan en el
suero muy frecuentemente se ven afectadas simultneamente en cualquiera de
las dos direcciones (aumento o disminucin) por los mismos factores.

Pgina 93 de 102
La creatina es sintetizada en el hgado y en el rin a partir de tres
aminocidos: arginina, glicina y metionina en forma de S-adenosilmetionina. La
creatina as formada es transportada a los msculos por la sangre, donde es
fosforilada hasta formar fosfato de creatina, compuesto de gran importancia
como fuente de energa para la contraccin muscular intensa durante breves
periodos. Normalmente, la fosfocreatina se desdobla en creatinina. En algunos
padecimientos, en particular las enfermedades musculares, se libera creatina
en cantidades mayores a la circulacin y se puede determinar en la orina.
La creatinina se forma de manera continua en los msculos a partir del fosfato
de creatina; alrededor de 2% de la creatina se convierte directamente en
creatinina; posee gran difusibilidad y es fundamentalmente excretada por los
riones, adems de las pequeas cantidades que se eliminan por heces.
La concentracin srica de creatinina es relativamente constante en virtud de
su relativa independencia de factores como la dieta (ingesta de protenas),
grado de hidratacin o metabolismo de protenas, siendo la masa muscular el
factor condicionante ms directo de su formacin y excrecin total por da.
La depuracin de la creatinina es una prueba rutinaria de eleccin por la
facilidad con que se practica. No es, sin embargo, una medida real de la
filtracin glomerular, ya que una pequea parte de la creatinina se secreta a
nivel tubular. A pesar de ello es una prueba adecuada para seguir la evolucin
de los padecimientos que afectan al glomrulo. Debido a que el rin la excreta
continua y fcilmente, los valores aumentados en suero y disminuidos en orina
indican disminucin en la velocidad de filtracin glomerular. Por consiguiente, la
creatinina es un indicador muy especfico de la funcin renal.
La variacin diurna de la creatinina puede estar relacionada con los alimentos,
con valores mnimos que se presentan alrededor de las 7:00 horas y valores
mximos alrededor de las 19:00 horas. Por tanto, esta prueba realizada con un
espcimen urinario recolectado en 24 horas refleja tanto los valores mximos
como los mnimos de creatinina. Las mediciones de creatinina se hacen en
suero y en orina de 24 horas. La recoleccin de orina debe ser de preferencia
en un periodo de 24 horas, pero esto no es necesario si se conoce el tiempo de
la recoleccin con exactitud, an si es menor, por ejemplo 22 4 horas.

Pgina 94 de 102
La medicin se basa en la reaccin de Jaff, en la que la creatinina se trata con
solucin alcalina de picrato (17.5 mmol/l) para producir un complejo de color
naranja rojizo brillante. Hay varias sustancias en el suero y orina que actan
como cromgenos inespecficos (glucosa, protenas y otros cromgenos no
derivados de la creatinina), lo que representa un problema para la
determinacin. Por este motivo se adapta la reaccin de Jaff a un mtodo,
que consiste en medir el cambio en la absorbancia durante un breve perodo de
tiempo. La medida del incremento de color al inicio de la reaccin valorar
principalmente la creatinina, ya que sta reacciona ms rpidamente con el
picrato alcalino que los otros cromgenos inespecficos. El incremento de color
detectado al poco tiempo de iniciarse la reaccin ser debido nicamente a la
concentracin de la creatinina presente y, por tanto, no valorar las posibles
interferencias.
Mtodo
Pipetear en los siguientes tubos:
Tubo Muestra Patrn Blanco
Muestra 100 l -
Patrn - 100 l
Reactivo 1 ml 1 ml 1 mL
Mezclar y poner en marcha el cronmetro, anotar las absorbancias a los 30

(A1) y a los 90 (A2) segundos, calcular: = A2 A1.
Leer en el espectrofotmetro frente a blanco de reactivos a 492 nm.
Clculos:
Con las diferencias de absorbencia anotadas (A), aplicar la siguiente ecuacin:
A MUESTRA A BLANCO
------------------------------------------X [2 Conc. Estndar] = mg/dl de creatinina
A PATRN A BLANCO
El resultado se obtiene en mg/dl
mg/dl Creatinina x 88.4 = mmol/l.

Pgina 95 de 102
No utilizar sueros lipmicos. La creatinina tiene una estabilidad de menos de 24
horas en refrigeracin.
Valores de referencia en suero o plasma: hombres 0.7 1.4 mg/dl
mujeres 0.6-1.1 mg/dl

CIDO RICO
El cido rico es el producto final del catabolismo de las purinas en el hombre y
se forma a partir de la xantina, por la accin de la xantina oxidasa en una
Reaccin que requiere de oxgeno molecular. En animales inferiores, el cido
rico es oxidado por accin de la uricasa y se transforma en alantona, que es
su producto de excrecin. Algunos peces excretan cido alantoico; los anfibios
y peces, urea; y finalmente, los invertebrados marinos, amonio.
La cantidad de cido rico formado depende de la velocidad del catabolismo de
las purinas endgenas y de la degradacin de las purinas provenientes de la
dieta. El aumento del nivel de cido rico en la sangre puede deberse a un
aumento en el metabolismo de purinas endgenas, una disminucin en la
eliminacin de cido rico, un aumento en la ingestin de purinas o a una
reutilizacin disminuida de purinas.
La medicin del cido rico del suero es muy til para el diagnstico de la gota,
que es un sndrome provocado por la acumulacin de cristales de cido rico
en las articulaciones y el rin.
El mtodo de determinacin de cido rico consiste en incubar el suero con
uricasa, que cataliza la hidrlisis especfica de cido rico a alantona. En una
reaccin catalizada por la peroxidasa (POD), el perxido de hidrgeno formado
en la reaccin anterior oxida al indicador (cido 2,4,6-tribromo-3-cido
hidroxibenzoico y 4-aminoantipirina, compuestos que son incoloros en su forma
reducida.) originando un derivado colorido (quinoneimina). La intensidad del
color es proporcional a la concentracin del cido rico en la muestra; se mide
en el fotocolormetro a 520 nm.

Pgina 96 de 102
Mtodo
Pipetear en los siguientes tubos:
Tubo Muestra Patrn Blanco
Muestra 25 l - ----
Patrn - 25 l
Solucin reactiva de 1 mL 1 Ml 1 mL
cido rico
Mezclar e incubar 5 min. A 37C.

Leer la absorbencia (A) en el espectrofotmetro frente a blanco de reactivos a
520 nm.
Clculo de la concentracin de cido rico:
MUESTRA
------------------- X [6] conc. Del patrn = mg/dL de cido rico
Patrn
Expresar el resultado obtenido en mg/dl y mmol/L (peso molecular del cido

rico 168.1).
Compare sus resultados con los valores normales de cido rico en suero.
Valores de referencia suero o plasma: para mujeres de 2.5 a 6.8 mg/dL
para hombres de 3.6 a 7.7 mg/dL


Pgina 97 de 102

Pgina 98 de 102
al anexo 1.

1.- De qu rutas provienen la Urea, el cido rico y la creatinina?
2.- Cmo se regula la sntesis de cido rico y creatinina?
3.- En qu condiciones patolgicas se incrementa la produccin de urea y
creatinina?
4.- Cul es la funcin de la creatina?
5.- Qu alimentacin podra incrementar la produccin de cido rico?

de la prctica son:
Se evaluar en lista de cotejo (Ver anexo 2).
Participacin 4%
Lista de cotejo 4%
67. BIBLIOGRAFIA

Thomson. Mxico
2004.

Pgina 99 de 102
68. PARA SABER MS
Gonzlez de Buitrago JM. Bioqumica clnica. Mxico: McGraw-Hill

Interamericana Editores, 1999.
Fossati P. Use of 3,5-dichloro-2- hydroxy-benzensulfonic acid/4-
aminophenazone chromogenic system in direct enzymic assay of uric
acid in serum and urine. Clin Chem. 1980; 26:227.
Montgomery R. Bioqumica: Casos y texto. 6a. ed. Barcelona: Editorial
Harcourt-Brace; 1998.
DOcon, C. Fundamentos y tcnicas de anlisis bioqumico. Editorial
Paraninfo; 1998.
Chernecky CC. Pruebas de laboratorio y procedimientos diagnsticos.
2a. ed. Mxico: McGraw-Hill Interamericana Editores; 1999.
Gaw A. Bioqumica clnica. 2a. ed. Editorial Harcourt; 2001

Pgina 100 de 102

ANEXO 1
Contenido del reporte de prctica:
Portada
Resultados
Discusin de resultados
Conclusiones
Bibliografa consultada (3 referencias de libros y no mas de 1 referencia
de Internet)
ELABORADO POR:

QFB. Esther Herrera
QFB. Roco Guadalupe Barcelos Garca
ACTUALIZADO EN DICEMBRE 2010 POR:
Q.F.B. Nadia Roxana Martnez Rubio

Q.F.B. Juan Manuel Agraz Cibrin
ACTUALIZADO EN AGOSTO 2013 POR:
QFB. Iris Celeste Tovar

QFB. Roco Guadalupe Barcelos Garca
QFB. Esther Herrera

Pgina 101 de 102

ANEXO 2
Lista de Cotejo:
Lista de cotejo Practica No 1 Practica No 2 Practica No 3 Practica No 4

Si No Si No Si No Si No
Diagrama de flujo
Participacin
Trabajo en Equipo
limpieza antes,
durante
y despus de la
prctica
Disciplina y respeto
Aplic conocimiento
previo a la practica
Lista de cotejo Practica No 5 Practica No 6 Practica No 7 Practica No 8

Si No Si No Si No Si No
Diagrama de flujo
Participacin
Trabajo en Equipo
limpieza antes,
durante
y despus de la
practica
Disciplina y respeto
Aplico conocimiento
previo a la practica

Pgina 102 de 102

Manual de Bioquimica Avanzada-2015

Uploaded by

Document Information

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Manual de Bioquimica Avanzada-2015

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE

REA DE CIENCIAS DE LA SALUD

UNIDAD ACADMICA DE CIENCIAS

MANUAL DE PRCTICAS DE LA UNIDAD DE APRENDIZAJE

Dr. Mauricio Ramrez Ruano Q.F.B. Manuel Salinas Mardueo

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.

La Bioqumica es la rama de la ciencia, cuya actividad primordial se halla

El conocimiento de la Bioqumica, para estudiantes de la licenciatura

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.

Por lo anterior, podrn adquirir y construir los conocimientos terico-

2.1. Encuadre del sistema de prcticas dentro de la profesin.

El objetivo fundamental de este manual es el de proporcionar al

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.

2.2. Niveles de desempeo

instrucciones. Se requiere baja autonoma.

Nivel 2. Se realizan un conjunto significativo de actividades de trabajo, variadas

responsabilidad recursos materiales con los que opera su rea. As como

control de recursos financieros para adquisicin de insumos.

Nivel 4. Se desarrolla un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en las

que se tiene que mostrar creatividad y recursos para conciliar intereses. Se

debe tener habilidad para motivar y dirigir grupos de trabajo.

Nivel 5. Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en

lograr la cooperacin entre grupos e individuos que participan en la

implantacin de un problema de magnitud institucional.

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.

3. DESCRIPCIN DEL SISTEMA DE PRCTICAS

Las prcticas en el Laboratorio se realizarn con el apoyo de los

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.

24 de agosto Practica No. 1 Actividad enzimtica de la Hgado de pollo y verduras

7 de septiembre Practica No.3 Glucosa pospondral Muestra de sangre

21 de septiembre Practica No. 4.1 Extraccin de Hgado de pollo por equipo

19 de octubre Practica No. 7 Determinacin de Muestra de sangre

26 de octubre Practica No. 8 Productos finales del Muestra de sangre

4. PRCTICAS GENERALES DE SEGURIDAD. REGLAMENTOS

4.2 Disposiciones de orden general

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.

ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA CATALASA

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.

Razones por las que se realiza el examen

7. PROPOSITO ESPECFICO DE LA PRCTICA

7.1 Criterios de desempeo

7.2 Resultados Esperados

Comportamiento responsable en el interior del laboratorio.

Desarrollo de la prctica y descripcin detallada de todo el proceso,

Un reporte de investigacin resultado de la tarea entregado en 8 das a

8. NORMAS DE SEGURIDAD ESPECFICAS DE LA PRCTICA

Normas de seguridad especficas

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.

Material y equipo que sern utilizados en esta prctica son:

10. SISTEMA DE EVALUACIN DE LA PRCTICA

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.

1. Qu es la catalasa y su funcin de la en el organismo?

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.

Ser evaluado en lista de cotejo

10.4 Mtodo de asignacin de calificaciones del laboratorio

ACTIVIDAD A CALIFICAR PONDERACIN

12. PARA SABER MS

Holum JR. Fundamentos de Qumica General, Orgnica y Bioqumica

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS Y FARMACUTICAS.