1.

- Qu parsitos son los ms fcilmente detectados por el CPS directo y el de

flotacin?
El examen coproparasitoscopico (CPS) de concentracin es usado principalmente
el diagnostico de amibiasis intestinal crnica buscando la presencia de quistes asi
como se diagnostican la identificacin de los huevos en las heces, las
infestaciones por protozoos (p. ej., amebas) se diagnostican mediante los
hallazgos de trofozoito (estado activo), quistes u quistes (estadios acorazados) en
las heces. Hay varios mtodos pero los ms usados son: el mtodo de Faust y el
de Ferrera el mtodo de flotacin con sulfato de zinc es til para recuperar quistes
de protozoos y huevos de helmintos.

2. Qu parsitos son difciles de detectar por el CPS directo y el de flotacin?

Por el mtodo de flotacin no adecuada para huevos pesados de Ascaris
lumbricoides, Taenia sp y Fasciola heptica.
3. Por qu se pide que sean cuando menos tres muestras subsecuentes para
realizar un CPS?
El estudio se puede hacer con una sola muestra de heces fecales (examen
coproparasitoscopico simple), este estudio simple es suficiente cuando la
evidencia es tal que con una sola muestra se logran identificar gran cantidad de
parsitos. Sin embargo la mayor parte de las veces es mejor solicitar un examen
coproparasitoscopico seriado que consiste en evaluar 3 muestras de heces
fecales, una cada da por eso, normalmente se toman tres muestras de heces, en
tres das distintos. De esta forma se confirma la infeccin.
4. Qu tcnica es la idnea para buscar Enterobius vermicularis?
Se diagnostica ms fcilmente por el mtodo de Graham que consiste en la
aplicacin de un pedazo de cinta de celulosa adhesiva, transparente en la piel
perianal para adherir los huevos que el parsito deposita en esa regin. Una vez
tomada la muestra, la cinta se pega a un portaobjetos y se examina al
microscopio, facilitndose de esta manera la observacin de los huevos. Se
requiere, a veces de hasta 7 exmenes seriados para considerar a un individuo
negativo pero generalmente basta un examen tomando la muestra en la maana
antes de que defeque la persona y que se haya baado.
5. Para qu sirve la tcnica de ameba en fresco y en qu casos se debe utilizar?
Se utiliza para reconocer la presencia de trofozoitos en pacientes con enfermedad
diarreica aguda y se ha recomendado desde hace varias dcadas para confirmar
el diagnstico clnico de amebiasis.
6. D la proporcin en que se pone la muestra con el conservador.
Se hace una suspensin homognea con 1 a 2 g de materia fecal y 10 ml de agua
de la llave.
El uso de solucin preservadora y fijadora (FAF) deformas parsitas en la
coproparasitoscopia de rutina para el diagnstico de parasitosis intestinales, es
considerado en este trabajo como la parte esencial para la realizacin de
encuestas y trabajos de campo, cuando se desea tener una mayor confiabilidad,
asi como cuando se tienen que transportar las muestras a un laboratorio de
concentracin.
Si por algn motivo la muestra no se puede trasladar al laboratorio el mismo da
de ser emitida, se deber conservar en refrigeracin a 4C. Pero si se
guardara por varios das, entonces lo ms recomendable es el uso de
conservadores como el formol, para lo cual se mezclan 10 ml de formol al 10% por
cada 3 a 5 gramos de materia fecal.
1. Preparacin de la solucin FAF:
Solucin N 1 -Cristales de fenol o fenol fundido 20 g
-Solucin fisiolgica 125 mL
-Alcohol etlico al 95% 825 mL
-Formaldehdo 50 mL
Solucin N 2
Se mezclan las soluciones 1 y 2.

Puntos gua.
PRCTICA 5.
Defina CPS, aplicacin y utilidad.
El examen coproparasitoscpico seriado CPS es uno de los estudios de
laboratorio en el que se analiza la materia fecal. En particular este estudio se
utiliza para detectar la presencia de parsitos intestinales, lo que sirve para
establecer un diagnstico definitivo de parasitosis. Las infestaciones por helmintos
(gusanos) se diagnostican mediante la identificacin de los huevos en las heces,
las infestaciones por protozoos (p. ej., amebas) se diagnostican mediante los
hallazgos de trofozoitos (estado activo), quistes u quistes (estadios acorazados)
en las heces.
Es un estudio prescrito bajo sospecha de presencia parasitaria, larvas, o huevos
de diferentes familias de helmintos, amebas, tenias y protozoos.
El mdico ordena este estudio cuando el paciente presenta:
Diarrea
Gases
Dolores o clicos, etc.
Cuando los parsitos se alojan en el aparato digestivo, una proporcin de ellos, o
las larvas, o los
Huevos... son eliminados con las heces. Como la cantidad que se elimina en cada
defecacin puede ser variable, y si hay poco nmero de parsitos en el intestino,
lgicamente tambin sern escasos en las muestras que se tomen, no siempre
que una muestra sale negativa se puede descartar la infeccin. Por eso,
normalmente se toman tres muestras de heces, en tres das distintos. De esta
forma se confirma la infeccin.
Agar NNN (Componentes, utilidad y fundamento)
NNN Modified Medium (Twin Pack) M681
NNN Modified Medium (Twin Pack) is used for cultivation of Leishmaniae and
Trypanosomes.
Composition**
Ingredients Gms / Litre
Part A -
Meat extract 3.000
Peptone
Sodium chloride
5.000
Agar
7.3 0.2
15.000
Part B -
Sodium chloride 8.000
Potassium chloride 0.200
Calcium chloride 0.200
Monopotassium dihydrogen phosphate 0.300
Dextrose 2.500
Final pH ( at 25C) 7.0 0.2
**Formula adjusted, standardized to suit performance parameters
Directions
Part A: Suspend 31 grams in 1000 ml distilled water. Heat to boiling to dissolve the
medium completely. Sterilize by autoclaving
at 15 lbs pressure (121C) for 15 minutes. Cool to 45-50C and aseptically add
10% of sterile defibrinated rabbit or human
blood after inactivation at 56C for 30mins. Mix well and dispense in 5 ml amounts
in test tubes or 25 ml amounts in flasks.
Allow tubed media to cool in slanted position.
Part B : Suspend 11.2 grams of Part B in 1000 ml distilled water. Heat to boiling to
dissolve the medium completely. Sterilize by autoclaving at 15 lbs pressure
(121C) for 15 minutes. Cool and add approximately 2 ml in tubes or 10-15 ml in
flasks
over solidified Part A medium.
Principle And Interpretation
The protozoan family Trypanosomatidae includes members from the genera
Leishmania and Trypanosoma , whichare flagellates that inhabit the blood and
tissues of humans.
NNN Medium was developed by Novy, McNeal (1) and modified by Nicolle (2).
NNN Modified Medium is a modification of the original medium and consists of two
phases, blood agar (Part A) and Lockes solution (Part B) (3). This modified
mdium is commonly used for diagnostic work (4, 5).This medium consists of a
blood agar base and an overlay medium. The blood agar base is a highly nutritious
medium that
supports the growth of fastidious organisms like Leishmania and Trypanosoma .
The specimens are inoculated into the liquid phase of the diphasic medium and
incubated. This favours the development of organisms in the insect vector. The
amastigotes transform to promastigotes in about 24 hours (5).

Condiciones de toma de muestra para un CPS a 3 y 5 muestras.

El paciente debe llevar al laboratorio tres muestras de heces fecales (excremento)
de tres das alternados, por ejemplo Lunes, Mircoles y Viernes; no es necesario
que el paciente se encuentre en ayuno, sino cuando el acostumbre a tenga ganas
de obrar. La muestra debe llevarla al laboratorio de preferencia una diaria en caso
de que el paciente no pueda o viva lejos se le pedir que mantenga las muestras
en refrigeracin hasta las tres muestras y las lleve al laboratorio. Se le pedir al
paciente que la cantidad de muestra sea semejante a una canica o una nuez de
castilla, y que tome las muestras en frasco de vidrio (nescaf o gerber) de boca
ancha y con cierre hermtico. Esto se le proporcionara por el laboratorio, junto con
un frasco pequeo que contenga de 5 a 10 ml de formol al 10%. Comentndole al
paciente que en el momento que obtenga la muestra le coloque el lquido del
frasco pequeo y cierre bien el frasco de vidrio.
Las muestras deben de procesarse diario, es decir conforme van llegando al
laboratorio, y por separado. En los casos en que el paciente lleve las tres
muestras juntas, estas se procesaran inmediatamente y por separado.
Nios: Se recoge una muestra de una sola deposicin con un hisopo estril y se
introduce en un frasco de las mismas condiciones. Una vez recogida la muestra se
mantiene a temperatura ambiente hasta el momento de entregarla al laboratorio.
En el laboratorio pueden realizar este procedimiento en bebs o nios muy
pequeos.

Caractersticas organolpticas, microscpicas y macroscpicas.

A) CARACTERES ORGANOLEPTICOS MACROSCOPICOS.
1.- Cantidad: Debe ser una evaluacin completa. La cantidad varia con la
alimentacin, la dieta en carnes, quesos, leche, arroz, papas fritas y pan blanco,
produce menor cantidad que la dieta vegetariana, adems la cantidad depende del
grado de integridad funcional digestiva.
2.- Consistencia: Por lo normal son moldeadas y blandas. Pero existen:
a). Acuosas (como agua).
b). Blandas (diarrea).
C) Pastosa (fibrosa)
d). Dura (estreimiento).
3.- Forma: Si la consistencia es normal las heces semejan a un cilindro que se
repliega sobre s mismo conservando su forma. La superficie presenta
depresiones y relieves, ejemplos de algunas formas:
4.- Color: La coloracin parda habitual se deben a urobilina y estercobilina, el
color es segn la alimentacin:
a). Lactantes (amarillo canario).
b). Carnvoros. (Castao oscuro caf).
c). Vegetarianos. (Verdoso).
d). Pan o papas. (Amarillentas).
e). Blanco grisceo. (Cenizas), ictericias obstructivas, hepatitis, ingestin de bario
(peptobismol).
f). Amarillentas con matices esteatorrea, (diarrea de fermentacin, insuficiencia
Pancretica)
5.- Olor. Tiene un olor en particular debido a ciertos productos aromticos
originados en el intestino por la accin de microorganismos de fermentacin o de
putrefaccin que actan sobre hidratos de carbono y protenas.
B). EXAMEN MACROSCOPICO.
Se efecta una dilucin de las heces fecales con solucin fisiolgica (solucin
salina) en una caja Petri. Se les observa colocando el recipiente de vidrio sobre un
fondo blanco o negro de esta forma se apreciaran los restos alimenticios de carne,
fcula o tejido conjuntivo que a veces se confunde con moco, para distinguir entre
tejido conjuntivo y moco se agregan unas gotas de cido actico glacial 1:3, y se
observa al microscopio, colocando en un portaobjetos con una pipeta de Pasteur
una gota de la dilucin y cubriendo con un cubreobjetos; el tejido conjuntivo se
aclara, mientras que el moco se hace ms compacto.
CARACTERISTICAS DEL MOCO:
La presencia de este indica irritacin o inflamacin del intestino principalmente el
colon.
Mezclado con las heces, aspecto brillante procede del intestino delgado.
Moco visible proviene del colon.
Transparente: como catarro alrgico (colon irritable), estrs.
Opaco con clulas epiteliales: proceso inflamatorio agudo.
Moc sanguinolento: neoplasma, amebas o bacterias.
Moc sanguinolento y pus: colitis ulcerosa, carcinoma, desinteria basilar,
diverticulitis aguda o tubrculos intestinales.
Los restos de fcula se aprecian de color violceo cuando se agregan unas gotas
de Lugol, las grasas se identifican con facilidad en la prueba de dilucin porque
forma una capa oleosa en la superficie.
C).EXAMEN MICROSCOPICO (CITOLOGIA DE MOCO FECAL).
Se efecta una dilucin de las heces fecales con solucin fisiolgica (solucin
salina) en una caja Petri.
1.- Fibras musculares: Se practica colocando entre portaobjetos y cubreobjetos
una gota de dilucin fecal con ayuda de una pipeta Pasteur y una gota de Lugol.
La observacin macroscpica revela la presencia de fibras musculares con
diversos grados de digestin (se presentan en forma de cilindros con estras
longitudinales y transversales de color amarillo o anaranjado).
Fibras vegetales: Se caracterizan por ser de doble pared, contienen clorofila y
poseen un canal central muy marcado (se observan como resortes o espirales).
2.- Parsitos: Se recomienda la observacin microscpica de una gota de
Suspensin de excremento en solucin salina, colocada entre portaobjetos y
Cubreobjetos.
3.- Clulas: Se prctica colocando una gota de dilucin fecal entre portaobjetos y
Cubreobjetos, se reporta la presencia de clulas epiteliales en cruces las cuales
Indican irritacin.
4.- Leucocitos: Se observan agregando una gota de cido actico al 10% (o
lquido
de turk), ms una gota de materia fecal, se realiza una suspensin en un tubo de
ensaye. Su presencia indica infeccin bacteriana. Si hay ms de 10 leucocitos por
campo debe realizarse una diferencial de la muestra fecal por medio de la tcnica
de Wrigth (ver manual de Hematologa), y se debe diferenciar entre
Polimorfonucleares (PMN) y Mononucleares (MN).Mayor cantidad de PMN la
infeccin es causada por bacterias, mayor cantidad de MN la infeccin es viral.
Tambin se reportan los eritrocitos.
En condiciones normales, las heces no suelen contener clulas epiteliales, ni
leucocitos, ni eritrocitos. Es fcil apreciar la presencia de leucocitos. En la
deposicin mucosa de los que sufren alergia intestinal se observa un exceso de
eosinfilos. La presencia de clulas epiteliales es un indicador de irritacin
gastrointestinal. La presencia de clulas epiteliales, eritrocitos y bacterias se
reporta en cruces de la siguiente manera:

ABUNDANTES (+++)
MODERADAS (++)
ESCASAS (+)
La presencia de leucocitos se encuentra asociada con moco y se observa en
diferentes enfermedades intestinales. Se observa un predominio de PMN en
amibiasis aguda, shigelosis, colitis, tambin se observan macrfagos y MN con
gran predominio en fiebre tifoidea. Los PMN y MN se reportan contando en total
100 clulas.
5.- Cristales: Se realiza colocando una gota de dilucin fecal entre portaobjeto y
cubreobjetos, agregando una gota de Lugol.
Cristales de Oxalato de Calcio: Normal y aumentada su presencia en
Insuficiencia gstrica.
Cristales de Colesterol: Clculos vesiculares.
Cristales de Hamatoidina: Agujas amarillas, se presentan en grupos, aparecen
despus de hemorragias.
 Cristales de Charcot Leyden: Presentes en amibiasis, diarreas por Isospora belli,
son cristales octadricos alargados, producidos por la degradacin de eosinfilos.}
D). EXAMEN QUMICO.
1.- pH: La apreciacin de la reaccin de las heces se hace con papeles
indicadores de pH. El valor normal es de 6.9 a 7.2, no es vlida la determinacin si
el paciente est en tratamiento con antibiticos orales. El pH de las heces es un
dato orientador sobretodo en diarreas infantiles, cuando es cido es de origen
bacteriano.
2.- Grasas: Se realiza una dilucin de la muestra fecal con solucin salina, se
toma 1.0 ml. Ms una gota de reactivo de Saathoff en un tubo de ensayo, se agita
y se coloca una gota de la suspensin entre portaobjeto y cubreobjetos y se lee al
microscopio, se observan gotas rojas, de 2 a 3 por campo son de grasas neutras y
es normal. Ms de 3 gotas por campo son patolgicas. Lo cual puede deberse a:
Transito acelerado, deficiencia enzimtica en absorcin.

Exmenes cualitativos y cuantitativos (Tcnica y fundamento)

Los mtodos coproparasitoscopicos se dividen en:

- Cualitativos: Son aquellos que solo nos informan si hay o no formas

parasitarias en el producto estudiado.

- Cuantitativos: Nos dan a conocer numricamente cuantas formas

parasitarias estn presentes, las cuales se reportan
por gramo o mililitro de heces, segn la tcnica
que se utilice.

Los mtodos cuantitativos son de concentracin por centrifugacin, flotacin de

Ferreira, por dilucin de Stoll, tcnica de Beaver, mtodo modificado de Kato-
Miura y la tcnica de Kato-Katz.
Los mtodos coproparasitoscopicos se dividen en cualitativos, que son aquellos
que solo nos informan si hay o no formas parasitarias en el producto estudiado, y
cuantitativos que nos dan a conocer numricamente cuantas formas parasitarias
estn presentes, las cuales se reportan por gramo o mililitro de heces, segn
la tcnica que se utilice. Entre los mtodos cualitativos tenemos el examen
directo en fresco, el frotis fecal estandarizado de Kato, el de concentracin por
flotacin de Faust, el Willis y el Sheater. Los de concentracin por
sedimentacin son: el de Ritchie, de sedimentacin en copa o de
sedimentacin gravitacin simple. Los mtodos cuantitativos son de
concentracin por centrifugacin, flotacin de Ferreira, por dilucin de Stoll,
tcnica de Beaver, mtodo modificado de Kato-Miura y la tcnica de Kato-Katz.

Tcnicas especiales y fundamento de: Graham, cpsula de Beal, amiba en

fresco, tamizado, citologa de moco fecal, mtodo de Baerman, tcnica de Harada-
Mori y sedimentacin simple en copas.
La prueba de Beal o prueba enteral se utiliza en la obtencin de contenido
duodenal, para la bsqueda de protozoarios y helmintos de localizacin en
duodeno. Para ello por va bucal se hace llegar la capsula de beal, la cual
posee un hilo trenzado de nylon y algodn con un extremo libre que se fija a
la mejilla del paciente. La capsula permanece en el duodeno durante un
tiempo, para posteriormente extraer y exprimir el hilo, a fin de colectar el
material impregnado, mismo que se observa microscpicamente.
El mtodo de la cinta adhesiva de celulosa engomada, o tcnica de Graham,
consiste en utilizar cinta adhesiva transparente para tomar muestras de la
regin anal y perianal, misma que se coloca posteriormente sobre un
portaobjetos para buscar formas parasitarias microscpicas.
El tamizado de heces es un procedimiento de utilidad para recuperar formas
parasitarias macroscpicas; se recomienda especialmente para bsqueda de
proglotides de Taenia.
Para su realizacin se colocan os tamices uno sobre otro, de tal manera que el de
malla ms abierta quede hasta arriba y el de malla ms cerrada hasta abajo. A
continuacin, las heces de 24 horas de un paciente se tamizan al chorro de agua,
para ayudar al paso por las mallas, y las formas parasitarias son retenidas, se
colectan y se observan detalladamente para establecer el diagnstico correcto.
El de Faust es un excelente mtodo, pero no detecta formas parasitarias
pesadas, por ser un mtodo de concentracin por flotacin.
Coproparasitoscopico directo en fresco: se realiza con heces recin
emitidas, est indicado para identificar trofozoito y larvas. Se utilizan promedio
50 mg de materia fecal que se diluyen un una gota de solucin salina isotnica, se
coloca un porta objetos y se procede con la observacin al microscopio, se
agrega Lugol.
Coproparasitoscopico de concentracin por flotacin con salmuera:
tcnica cualitativa, denominada mtodo de Willis, se realiza con una solucin
saturada de cloruro de socio.
La materia fecal se homogeniza en una pequea cantidad de salmuera, y a
continuacin se aplica suficiente solucin de salmuera, hasta el borde del frasco.
Se deja reposar 30 min, se coloca el porta objetos y se colecta el material flotante,
luego se procede a la lectura microscpica.
Coproparasitoscopico de concentracin por flotacin simple en solucin
saturada de sacarosa: esta tcnica tambin es cualitativa y se realiza de
la misma forma que la de Willis, pero se utiliza solucin de sacarosa de 1200 .
Coproparasitoscopico de concentracin por centrifugacin flotacin,
tcnica de Faust: tcnica cualitativa, muy utilizada en base al uso de sulfato
de zinc con una densidad de 1180 Be. Se combina la concentracin por
flotacin con la solucin hipertnica ms el uso de centrifugacin. Se homogeniza
la muestra con agua, se procede a centrifugar y lavar dos veces, y finalmente
se homogeniza con la solucin de sulfato, y se colecta el material a observar del
sobrenadante con un asa de alambre.
Mtodo de Ritchie: tcnica cualitativa que se realiza con formol ter. Se
utiliza una solucin de formalina al 10% para fijar a los parsitos y el ter, para
facilitar la liberacin de las formas parasitarias de la materia fecal. Se
homogeniza la muestra con solucin salina isotnica y se centrifuga, se lava y
se obtiene el sedimento.
Mtodo de Stoll: tcnica cuantitativa, con la aplicacin de solucin de hidrxido
de sodio 0.1N. Se realiza utilizando probetas y pipetas calibradas y haciendo
una suspensin de materia fecal con solucin de hidrxido de sodio 1:15.
Se toma el material para Observacin de la parte media de la probeta, se coloca
en el portaobjetos, se cubre, se lee toda la preparacin, se cuentan todas las
formas parasitarias y se obtiene el factor de la tcnica, para luego multiplicar el
nmero de formas parasitarias de la preparacin por el Factory se reporta nmero
de huevos por mililitro de heces.
Coproparasitoscopico por frotis grueso de Kato-Miura: tcnica cuantitativa, se
realiza con cubreobjetos de celofn impregnado con solucin de verde de
malaquita y glicerina. Con la glicerina se aclaran las formas parasitarias y el
verde de malaquita se usa como contraste. El frotis de heces se lleva a cabo
con 50 mg de materia fecal, previo filtrado a travs de una malla de alambre. Para
el reporte se hace un regla de tres para llevar a un gramo y se reporta el nmero
de formas parasitarias por gramo de heces.
Kato-Katz: tcnica cuantitativa que se realiza exactamente igual que la
anterior, la variante es que se utiliza un cartn de 3 mm de grosor, con un
orificio de 6 mm de dimetro, para colectar una muestra de heces ya tamizada,
llenando el orificio del cartn