INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Practica No.1 Factores que influyen en las separaciones cromatogrficas
Fecha de realizacin: 31 de agosto de 2017
Equipo No.5: Pineda Blanco Alan David,

INTRODUCCIN El factor de retencin (Rf) es la distancia

que recorre la muestra desde el punto de
La cromatografa se define como la
aplicacin/distancia que recorre el
separacin de una mezcla de dos o ms
disolvente hasta el frente del eluyente.
compuestos por distribucin entre dos
Nos permite identificar diferentes analitos
fases, una de las cuales es estacionaria
en un sistema cromatogrfico. En
y la otra una fase mvil. Un rasgo
ocasiones se ven afectados los valores
caracterstico de la cromatografa es la
de Rf por la composicin de la fase mvil
presencia de dos fases; dispuestas de tal
y caractersticas de la fase estacionaria.
manera que mientras una permanece
estacionaria dentro del sistema (fase OBJETIVO GENERAL:
estacionaria), la otra se desplaza a lo
Analizar la influencia de algunos factores
largo de l (fase mvil). La clave de la
que afectan las separaciones
separacin en cromatografa es que la
cromatogrficas.
velocidad con la que se mueve cada
sustancia depende de su afinidad relativa OBJETIVOS PARTICULARES:
por ambas fases (equilibrio de
distribucin). En general, los Demostrar el efecto de la polaridad del
componentes ms afines a la fase disolvente.
estacionaria avanzan lentamente (ms Demostrar el efecto del volumen de
retenidos) mientras que los ms afines a muestra aplicada.
la fase mvil (menos retenidos) se
mueven con mayor rapidez. Por Demostrar el efecto de concentracin de
consecuencia, el medio cromatogrfico la muestra.
(columna, placa o papel) funciona como
Demostrar el efecto de la naturaleza del
un controlador de la velocidad de cada
disolvente de la muestra.
sustancia que constituye la mezcla,
logrando as su separacin y mediante el Analizar la presencia de otros analitos.
uso de un detector, su caracterizacin
qumica.
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Practica No.1 Factores que influyen en las separaciones cromatogrficas
Fecha de realizacin: 31 de agosto de 2017
Equipo No.5: Pineda Blanco Alan David (2013500238),

RESULTADOS NaCl: 2.0/3.9= 0.512

Sacarosa: 1.8/3.9=0.461
Original: 2.1/3.9=0.538
DISCUSIN

CLCULOS DE Rf
Exp. 1. Polaridad del disolvente
Rojo de metilo:
AcOEt: 3.2/4.0=0.800
AcOEt:Hex. (1:1): 1.8/4.2=0.428 Figura 1. Placas cromatogrficas con
AcOEt:Hex. (3:7): 1.2/4.4=0.272 solucin de rojo de metilo y Sudn I a
una concentracin de 1mg/mL en CH3CN
Sudn: en diferentes sistemas de elucin (de izq.
a der. AcOEt, AcOEt:Hex. (1:1) y
AcOEt: 3.9/4.0=0.975
AcOEt:Hex (3:7)
AcOEt:Hex. (1:1): 4.1/4.2=0.976
Experimento 1. Efecto de la polaridad
AcOEt:Hex. (3:7): 4.2/4.4=0.954 del disolvente
Exp. 4a. Efecto de matriz: Se utiliz como fase mvil 3
CH3CN: 1.7/4.1=0.414 disolventes. Se puede observar en la
figura 1 que el AcOEt es el disolvente
MeOH: 1.7/4.1=0.414 ms polar de los 3 y al ir agregando
Agua: 1.7/4.1=0.414 hexano en cantidades de (1:1) y (3:7)
la fase mvil va perdiendo polaridad.
Exp. 4b. Otros analitos: Nos arrojan los resultados que al ir
modificando la polaridad del
disolvente (baja la polaridad), los Rf
van disminuyendo hacindose ms
notable en el rojo que el de sudan,
Polaridad del disolvente Volumen
de la Concentracin
Efecto de matriz
muestra de la muestra

Rf Ancho
Rojo Rf de g/ Asimetra Otros
Disolvente L Disolvente Rf Rf
De Sudan banda mL (Si no) Analitos
Metilo (mm)
AcOEt 0.800 0.975 1 5 1 NO CH3CN 0.414 NaCl 0.512
AcOEt:hexano
0.428 0.976 2 5 5 SI MeOH 0.414 Sacarosa 0.461
(1:1)
AcOEt:hexano
0.272 0.954 4 5 10 SI H2O 0.414 Original 0.538
(3:7)
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esto quiere decir que las Cmo se puede observar en la tabla

interacciones cambian y los analitos
(colorantes) empiezan a interaccionar
ms con la fase mvil. Tambin nos
indican estos valores que el rojo de
metilo es ms polar
que el sudan ya que
se trabaja en una fase
estacionaria polar
(slica gel).
Por otra parte se
puede observar en la
tabla de resultados
que los valores de Rf
fueron disminuyendo conforme se
disminua la polaridad del eluyente, la
razn por la cual se puede explicar
ste hecho estriba en el poder
eluotrpico que presentan las
sustancias utilizadas.
El acetato de etilo presenta mayor
poder eluotrpico que el hexano, ya
que ste depende de la polaridad,
cuanto mayor sea la polaridad del
disolvente, mayor ser su capacidad
para desalojar y desplazar un
compuesto polar de la superficie
estacionaria, por lo que al
incrementar la concentracin del
hexano en la mezcla de elucin el
desplazamiento que presentan las
muestras es cada vez menor.
Experimento 2. Efecto del volumen
de muestra aplicada
Figura 2. Placa cromatogrfica con
solucin de rojo de metilo en CH3CN a
diferentes volmenes y concentraciones
(de izq. a der. 1L-0.5mg/mL, 2L-
1.0mg/mL y 4L-0.25mg/mL)
de resultados, los valores de ancho
de banda no cambiaron a pesar de
que el volumen de
muestra aplicada
fue distinto en cada
caso, ste hecho se
puede atribuir a que
obtenindose de la
relacin existente
entre la
concentracin a la cual se encontraba
la muestra y el volumen que se aplic
de sta, en todos los casos la
cantidad total de muestra aplicada fue
de 1 L , es decir, qumicamente
hablando , se aadieron igual nmero
de molculas del colorante, por lo
tanto, stas interaccionaron de igual
manera con los grupos silanoles de la
placa cromatogrfica, trayendo como
consecuencia valores iguales de
ancho de banda.
Experimento 3. Efecto de
concentracin de la muestra
Figura 3. Placa cromatogrfica con
solucin de rojo de metilo en CH3CN a
diferentes concentraciones (de izq. a der.
1mg/mL, 5mg/mL y 10mg/mL)
En el presente experimento se
aplicaron tres muestras sobre una
placa de silica gel (SiO2), en las
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cuales hubo una variacin en la

concentracin. En la primer muestra
[1mg/ml], en la segunda [5mg/ml] y
en la tercera [10mg/ml]. Experimento 4. Efecto de matriz

Se puede observar a. Efecto de la naturaleza del

en la figura 3 que en disolvente en la muestra
las dos ltimas
manchas hay cierto Figura 4. Placa cromatogrfica con
grado de coleo. En solucin rojo de metilo en diferentes
donde est ms disolventes (de izq. a der. CH3CN, MeOH
concentrado se y H2O en una concentracin de 1mg/mL)
presenta ms el
fenmeno. Esto es
debido que al tener
una concentracin alta [10mg/ml], se
tienen muchas molculas que
interactan con la silica; entonces se
ocupan todos los sitios activos en un
rea de la silica gel, es
decir, los silanoles.
Al tener un exceso, las molculas no
se estn reteniendo porque los sitios
activos ya estn ocupados, seguirn
eluyendo, haciendo que la mancha
sea ms larga.

El Rf que se obtuvo para cada No se puede utilizar como disolvente

mancha fue la misma en los tres
casos, de 0.414 como se puede
observar en la figura 4. En el caso del
CH3CN al ser un disolvente polar se
retendr con mayor fuerza en la silica
gel.
En el caso del metanol, existen
interacciones con los silanoles,
puentes de hidrgeno que se pueden
formar, esto a su vez implica que se
quede ms retenido, sin embargo no
sucedi esto.
agua. Los silanoles, son sitios
activos, y el agua bloquear estos
sitios activos por medio de puentes
de hidrogeno y por lo tanto no habra
retencin de analitos. La naturaleza
se tiene que tomar en cuenta ya que
de este depende la disolucin del
analito, al tener el mismo analito con
la misma concentracin y mismo
volumen, se analizan los disolventes
que en este caso los tres presentan
una polaridad parecida, siendo el
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agua la fase mvil en la cual se

disuelve ms el analito, siendo el
agua el ms puro. Esto puede influir
en la resolucin, obteniendo una
resolucin baja.
b. Presencia de otros analitos.
Figura 5. Placa cromatogrfica con
solucin de rojo de metilo ms diferentes
muestras (de izq. a der. NaCl, Sacarosa
y sol. Original)
CONCLUSIONES
A mayor polaridad de disolvente o
fase mvil, se tendr un mayor valor
en Rf
Cuanto ms concentrada esta la
muestra presentara una mayor
interaccin con la fase estacionaria
por lo puede presentar una asimetra
(coleo).
La naturaleza de disolvente afecta
directamente el Rf ya que de este
depende la interaccin del analito-
fase estacionaria y analito-fase mvil.
La presencia de otros analitos puede
afectar nuestras interacciones ya que
puede influir en la polaridad de
nuestro analito y as en las
interacciones con fase mvil y fase
estacionaria.
CUESTIONARIO
La presencia de sacarosa y NaCl
podra modificar el Rf gracias a la
afinidad que estos tienen por la fase
estacionaria, la sacarosa y el NaCl
son analitos de tipo polar por lo cual
tendrn un comportamiento similar,
se observ en sacarosa (figura 5)
una mancha ms tenue lo que nos
indicara que la sacarosa es mas a fin
a la fase mvil que el rojo con NaCl.
Tipos de interacciones
moleculares:
El estudio de las interacciones
intermoleculares consideraremos dos
grupos:
1) Interacciones de naturaleza
electrosttica: Fuerzas de Van der
Waals, dipolo-dipolo, Fuerzas de
London o de
dispersin, dipolo-
dipolo inducido
2) Enlace de
hidrgeno
Resolucin: Es
el parmetro que
expresa el grado de separacin que
se puede obtener en un sistema
cromatogrfico para dos
componentes dados.

Defina brevemente los siguientes Coeficiente de particin: cociente

trminos: entre la concentracin de
componente presente en la fase
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estacionaria y la concentracin de slido activo (componentes con

componente presente en la fase
mvil:
Asimetra de pico: des variacin en
los picos debidos a un gran nmero
de factores como lo son presencia de
puntos de gran actividad en las fases
estacionarias, reacciones qumicas
del compuesto en la columna,
volmenes muertos en el sistema
cromatogrfico etc.
Aplicaciones de la cromatografa
en capa fina en el rea
farmacutica
Cromatografa en capa fina (TLC)
ofrece un mtodo rpido, barato y
reproducible para la deteccin de
materiales de plantas medicinales. No
hay tal abundancia de material
vegetal para evaluar y probar todava
para la actividad biolgica y
esperemos que sean til propiedades
medicinales. Tal material vegetal
sigue desempeando un papel en la
identificacin de los compuestos de
plomo para la industria farmacutica.
Como las tuberas de drogas en las
compaas farmacuticas empiezan a
"funcionar en seco" protegidas por
patentes xito compuestos una vez
ms hay una reincorporacin a la
planta qumica medicinal de la
cabeza en la estructura novedosa
qumica.
polaridad baja o media)
Separacin por reparto: deferente
solubilidad en fases estacionaria y
mvil (componentes con polaridad
media o alta)
Separacin por tamao molecular: las
molculas ms grandes pasan por los
espacios intersticiales de la fase
estacionaria la cual retiene los
analitos de tamao pequeo
Separacin por intercambio inico: se
basa principalmente en la diferente
afinidad para el intercambio de iones
de los componentes de la muestra.
BIBLIOGRAFA
1.-D.A. Skoog, J.J. Leary,
Anlisis Instrumental,
McGraw-Hill, Madrid (1996)
2.-H.H. Willard, L.L. Merritt
Jr.,J.A. Dean, F.A. Settle Jr.,
Mtodos Instrumentales de
anlisis, Grupo Editorial
Iberoamericana S.A. de C.V.,
Mxico(1991).

Mecanismo de separacin
cromatogrfica en capa fina:

Separacin por adsorcin: diferente

afinidad de los componentes de la
muestra sobre la superficie de un
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Equipo No.5: Pineda Blanco Alan David (2013500238),

Harris, D. (2007)." Anlisis qumico cuantitativo". Espaa: Editorial Revert.

p.p 357-360.

M., V. (1988)." Tcnicas analticas de separacin". Espaa: Editorial

Revert.p.p 557-559.

Direcciones URL:
http://www.uib.es/depart/dqu/d
quo/pau/Cromatograf
%92a/chrom10/chrom/GC/con
cept/main.htm
http://www.relaq.mx/RLQ/tutori
ales/cromatografia/Gas,htm