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Polibotnica,
ISSN (Versin impresa): 1405-2768
rfernan@ipn.mx
Departamento de Botnica
Mxico
www.redalyc.org
Proyecto acadmico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto
Nm. 34, pp. 171-184, ISSN 1405-2768; Mxico, 2012
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compounds with stimulant, choleretic and las especies del gnero Aspergillus juegan
digestive activity, helpful in the treatment un papel muy importante, ya que se de-
of cardiovascular and chronic degenerati- sarrollan fcilmente en la mayora de los
ve diseases and able to reduce the risk of productos agrcolas despus de cosecha-
cancer or act as a bactericide. Given this dos. El control de plagas y enfermedades
diversity of effects and seeking alternatives dependen principalmente de la utilizacin
to help improve the quality of agricultural de agroqumicos sintticos, lo que ha
production, the biological activity of etha- incrementado la poblacin de organismos
nol extracts of piquin chile fruits (Capsicum fitopatgenos resistentes provocando un
annuum var. aviculare L.) and of capsaicin aumento significativo de los costos de pro-
on Aspergillus flavus growth was evaluated, duccin y problemas graves de contami-
using two techniques: 1) In the well in plate nacin ambiental. A travs del tiempo, los
diffusion technique, 20 L of capsaicin or mtodos de combate de microorganismos
extract at a concentration of 200, 400, 600, patgenos o deterioradores de alimentos,
800 and 1000 ppm were poured into wells han tenido innovaciones significativas, las
made in potato dextrose agar (PDA) plates cuales han sido motivadas principalmente
previously inoculated with A. flavus spores. por la emergencia de nuevos patgenos,
2) For the dilution technique, 2 mL of cap- la creciente demanda de alimentos y la
saicin or fruit extract in the concentrations necesidad de evitar la contaminacin del
mentioned were added to PDA making a medio ambiente. Tomando en cuenta estos
homogeneous mixture before solidification. tres factores, uno de los controles que
The activity of the treatments was reflected ha adquirido mayor importancia en los
by the formation of an inhibition halo and ltimos aos, es aquel que basa su accin
the radial growth of fungus in each techni- en el uso de sustancias de origen natural,
que, respectively. The results showed that esto es, extractos obtenidos de plantas
both capsaicin and piquin chile extracts con actividad como fungicidas, herbicidas
significantly inhibited radial growths of A. bactericidas e insecticidas (Rovalo, 1983).
flavus, these results are statistically equal to El uso de plantas superiores para tratar in-
those obtained by applying the commercial fecciones tanto bacterianas como fngicas
fungicide captan. es una prctica muy antigua y en un tiempo
fue el nico mtodo disponible para tratar
Keywords: fungal pathogens, postharvest, enfermedades (Recio y Ros, 1989). Se
capsaicin, piqun chile. estima que nicamente alrededor del 2% de
las plantas superiores han sido evaluadas
INTRODUCCIN por sus propiedades pesticidas y, de hecho,
la gran mayora de ellas lo han sido por sus
Las prdidas econmicas debidas a enfer- propiedades insecticidas, por lo que prcti-
medades de postcosecha en granos, frutas camente no existen fungicidas comerciales
y hortalizas son provocadas principalmente con este origen (Gamboa-Alvarado et al.,
por hongos y bacterias que causan la de- 2003; Lpez-Bentez et al., 2004).
gradacin de los tejidos y su consiguiente
pudricin. Los hongos responsables de estas En Mxico existe un gran nmero de es-
prdidas son diversos pero indudablemente pecies vegetales ampliamente distribuidas,
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S. Moreno-Limn, et al.: Efecto antifngico de capsaicina y extractos de chile piqun sobre crecimiento in vitro de A. flavus
que han sido evaluadas para determinar su en concentracin de 4000 ppm inhibieron en
actividad biolgica sobre hongos fitopat- diferente grado el crecimiento de Colleto-
genos, como es el caso de, entre muchas trichum gleosporides, Alternaria alternata
otras, Fluorensia cernua D.J. (hojasn), y Rhizopus sp, mientras que Jasso et al.
de la que se han reportado efectos de in- (2007), reportaron que el cido nordihi-
hibicin sobre Rhizoctonia solani Kuhn y droguayartico (NDGA) en 300 y 500 ppm
Phytophthora infestans (Mont.) de Bary, inhibi eficazmente el crecimiento radial de
con extractos metanlicos (Gamboa-Alva- Aspergillus flavus y Aspergillus parasiticus.
rado et al., 2003), sobre Colletotrichum spp Moreno-Limn et al. (2011), encontraron
con extractos hexnicos, y contra termitas que los extractos etanlicos y metanlicos
con extractos hexnicos, de ter dietlico y en concentracin de 3 mg/mL lograron
etanlicos (Tellez et al., 2001), as como inhibir hasta el 100% el crecimiento de
el caso de Alternaria alternata, Colletotri- Aspergillus flavus y Penicillium sp.
chum gloeosporioides y Penicillum digita-
tum, cuyos tratamientos efectivos fueron En lo que respecta a los extractos de hojas
fracciones de hexano y metanol:cloroformo de Citrus limon y Persea americana inhi-
a 4000 mgL, para A. alternata y a partir de bieron completamente el desarrollo de C.
500 mg/L de la fraccin de etanol para C. gloeosporioides in vitro (Bautista-Baos
gloeosporioides y P. digitatum (Guerrero et al., 2003), el clavo, la semilla de ans
Rodrguez et al., 2007). Tambin se ha estrella y 27 especies ms inhibieron com-
demostrado suficientemente, que los ex- pletamente el crecimiento de Aspergillus
tractos de Larrea tridentata (gobernadora) flavus, Aspergillus ochraceus y Aspergillus
tienen accin antifngica bajo condiciones versicolor (Hitokoto et al., 1980), extractos
in vitro, e in vivo al incorporar extractos y/o de Tagetes minuta, Lippia javanica, Ama-
polvos al suelo. La actividad fungicida de la ranthus spinosus y Vigna unguiculata mues-
resina de este arbusto fue reportada contra tran actividad inhibidora contra Fusarium
Rhizoctonia solani, Fusarium oxysporum, verticillioides, F. proliferatum, Aspergillus
Phythium spp y otros fitopatgenos por flavus y A. parasiticus (Thembo et al.,
Brinker (1993), de igual manera Araujo 2010). Los ensayos in vitro realizados por
(1997) observ que el extracto de gober- Salih y Nehal (2010), demostraron la acti-
nadora en diclorometano inhiba el 92% vidad antipatgenos de los jugos de la hoja
del crecimiento de Aspergillus flavus. Por de 11 especies de plantas contra Fusarium
otra parte, Tequida-Meneses et al. (2002), solani, Phytophthora spp. y Rhizoctonia
reportaron que extractos alcohlicos inhi- solani. Los extractos acuosos de Pulicaria
bieron el crecimiento de Aspergillus flavus, vulgaris, Lavandula dentata, Conyzoides
A. niger, Penicillium chrysogenum, P. ex- ageratum, Ficus retusa, Mummularia
pansum, Fusarium poae y F. moniliforme. zizyphus, Tortilis acacia, Phragmanthera
De este mismo arbusto Lira-Saldivar et sp. aff. rufescens (cuando se asocia con
al. (2003), observaron su efecto mediante Tortilis acacia), Lawsonia alba y Olea
diferentes bioensayos sobre Phythium sp, europaea exhiben propiedades antifngicas
Botrytis cinerea, Colletotrichum coccodes contra Fusarium solani, Phytophthora spp.
y F. oxysporum f. sp licopersici. De acuerdo y Rhizoctonia solani con grados variables.
con Vargas-Arispuro et al. (2006), extractos Por otro lado, Chenopodium ambrosioides,
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S. Moreno-Limn, et al.: Efecto antifngico de capsaicina y extractos de chile piqun sobre crecimiento in vitro de A. flavus
biano de polvos y extractos vegetales. Por obtener concentraciones de 1000, 800, 600,
lo que es importante continuar desarrollan- 400 y 200 ppm.
do investigaciones y contribuir a dilucidar
su efecto biolgico y las posibilidades de Los extractos de chile fueron obtenidos
su empleo. Aprovechando el conocimiento a partir de 16.88 g de frutos secos de
etnofarmacolgico existente sobre la gran chile piqun, los cuales se maceraron y
variedad de plantas, el presente estudio se disolvieron en 100 mL de alcohol etlico
plante para evaluar la actividad fungicida absoluto, se dejaron en reposo durante
de capsaicina y extractos de chile piqun 24 horas, y posteriormente utilizando un
(Capsicum annuum L. var. aviculare) sonizador se aplicaron cuatro pulsos de 15
para inhibir el crecimiento de Aspergillus minutos cada uno en intervalos de cinco
flavus, y de esta manera contribuir a evitar minutos, se reposaron durante 10 minutos
el deterioro de la calidad de productos y se filtraron. A partir de esta solucin
poscosecha creando as una alternativa se realizaron diluciones para obtener las
para contrarrestar el uso de fungicidas mismas concentraciones a las cuales se
qumicos. prepararon los estndares (1000, 800, 600,
400 y 200 ppm). Es pertinente aclarar que
MATERIAL Y MTODOS las muestras de chile provenan de un stock
previamente cuantificado para contenido de
Obtencin y aislamiento de hongos capsacicina por HPLC a una concentracin
de 6300 ppm.
Veinte semillas de maz comercial y sin
desinfectar, se distribuyeron en cuatro pla- Preparacin del inculo
cas Petri conteniendo agar-papa-dextrosa
(PDA) y se incubaron a 28C durante 96 Las colonias fungosas que se desarrollaron
horas en una cmara de incubacin. Una y cuya morfologa se relacion con Asper-
vez obtenidas las colonias fungosas fueron gillus, fueron cultivadas sobre placas con
resembradas para su aislamiento y posterior agar (PDA) e incubadas por siete das a
purificacin e identificacin taxonmica 252C. Una vez crecidas fueron identifi-
(Lpez, 1978). cadas y seleccionadas las correspondientes
a A. flavus. Se realizaron resiembras y a
Preparacin de solucin estndar y ex- cada una de las cajas Petri donde crecieron
tractos de chile las colonias se les agregaron 10 mL de so-
lucin salina estril al 0.85% con 0.1% de
Para la preparacin de la solucin estn- Tween 80 (Polisorbato 80, Sigma, EU), se
dar de capsaicina se tomaron 100 mg de agitaron durante tres minutos y con la ayuda
capsaicina grado reactivo (C18H27NO3) de una asa bacteriolgica estril, se frot la
Sigma-Aldrich y se disolvieron en 50 superficie de la colonia fungosa, de manera
mL de alcohol etlico absoluto (OH Et.), suave y firme. La suspensin as obtenida
obteniendo as una solucin de 2000 ppm, se vaci directamente a un tubo de ensayo
la cual fue colocada en frascos mbar y estril y se utiliz para la realizacin de las
refrigerada hasta su posterior uso. A partir diferentes pruebas homogeneizando antes
de este stock se realizaron diluciones para de su uso.
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S. Moreno-Limn, et al.: Efecto antifngico de capsaicina y extractos de chile piqun sobre crecimiento in vitro de A. flavus
efecto mayor con los extractos de chile, embargo, este efecto se redujo a los 10 das
al registrarse halos de inhibicin de hasta de crecimiento. Este comportamiento de la
10.9 mm, mientras que con la capsaicina reversin del efecto tambin fue observado
los halos fueron de 8.28 mm (grfica 1). en el presente trabajo, sin embargo sta se
En relacin a la comparacin entre las present a los 21 das. De cierta manera lo
diferentes concentraciones y los controles, anterior se relaciona con lo reportado por
la diferencia estadstica demuestra que los Wilson et al. (1997), quienes observaron
halos de inhibicin ms grandes se presen- una alta persistencia de actividad antifn-
taron con el fungicida comercial Captan, gica en algunas variedades de tres especies
sin embargo estos dimetros de inhibicin de chile (Capsicum annuum, C. chinense y
son estadsticamente iguales a los que se C. frutescens).
presentaron con la aplicacin de extractos
de chile en concentraciones de 0.4 y 0.8 Estos resultados sugieren que el efecto no
mg. Con capsaicina la menor inhibicin se puede ser atribuido nicamente a la capsi-
mostr con las concentraciones de 1.2 y 2.0 cina, sino que puede deberse a una mezcla
mg con 3 y 4.67 mm de dimetro. Por otra de los diferentes componentes del chile. En
parte los extractos de chile piqun en todas este sentido debemos de considerar que las
las concentraciones muestran una mayor plantas producen metabolitos secundarios
inhibicin que la capsaicina (grfica 2). como mecanismo de defensa, los cuales
pueden ser constitutivos o sintetizados de
Los resultados mostraron que la capsaicina nuevo, siendo estos ltimos compuestos
en todas las concentraciones evaluadas de bajo peso molecular, sintetizados como
presenta inhibicin del crecimiento de A. respuesta al ataque de un patgeno o a
flavus, lo cual difiere de lo reportado por una situacin estresante, tal es el caso de
Acero-Ortega et al. (2003), quienes obser- las llamadas fitoalexinas que se producen
varon que la capsaicina y la dihidrocapsai- como consecuencia de la infeccin. Dentro
cina no afectaron el crecimiento de Erwinia de las fitoalexinas se encuentran lactonas
carotovora pero s lo hicieron los extractos sesquiterpnicas, cumarinas, indoles,
de las tres variedades de chile y algunos de flavanonas, diterpenos, isoflavonoides,
sus constituyentes como los cidos meta- alcaloides, fenoles, entre otros (Grayer y
cumrico y transcinmicos. Por otra parte Harborne, 1994). De acuerdo con Dewitt
los resultados obtenidos concuerdan con lo et al. (2000), el ingrediente activo que les
reportado por Masood et al. (1994) quienes confiere las propiedades antibacteriales e
establecieron que la actividad mostrada incluso fungicidas son la capsicina (al-
por C. annuum se debi a la capsantina caloide), la capsicidina, el capsidol, los
y a la capsaicina. Tambin demostraron capsiansidos y la capsicodendrina. Por
que la primera inhiba completamente el lo que es recomendable evaluar de manera
crecimiento y la produccin de aflatoxinas individual y mezclados cada uno de estos
de A. parasiticus a concentraciones que componentes.
iban de 0.2 a 1.0 mg/mL. Cuando se es-
tudi a la capsaicina tambin se encontr Al respecto Isman (2000) menciona que en
efecto inhibitorio slo que fue menor que general, las propiedades de los metabolitos
el observado por el otro compuesto. Sin no se conocen en forma amplia y algunos
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Grfica 1. Promedio del halo de inhibicin del crecimiento de A. flavus con capsicina y
extractos de chile piqun.
Grfica 2. Promedio del halo de inhibicin del crecimiento de A. flavus con diferentes
concentraciones de capsicina y extractos de chile piqun.
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S. Moreno-Limn, et al.: Efecto antifngico de capsaicina y extractos de chile piqun sobre crecimiento in vitro de A. flavus
pueden actuar de manera individual contra los alcaloides, los cuales se acumulan en
una o pocas especies de hongos y otros cerca del 20% de las especies de plantas (De
como la alicina del ajo pueden tener un Lucca y Laflamme, 2001), y poseen gran
amplio espectro de accin, no slo contra importancia como defensa qumica contra
especies de hongos fitopatgenos, zoopa- patgenos como hongos, bacterias, nem-
tgenos y de humanos sino tambin contra todos y virus (Wink, 1994; De la Cuadra et
bacterias, nemtodos e insectos. As mismo al., 1994). En este sentido en las solanceas,
Espinosa-Garca (2001) establece que los los alcaloides son frecuentes y algunos es-
metabolitos secundarios generalmente estn tn relacionados con la defensa contra los
presentes como mezclas de compuestos y hongos, por lo que este gnero constituye
los patgenos pueden ser afectados diferen- un recurso potencial para la obtencin de
cialmente por los compuestos individuales productos con actividad fungicida.
o por las mezclas en determinadas concen-
traciones y proporciones. Aunque existen CONCLUSIONES
pocas evidencias experimentales, en general
se acepta que una alta diversidad qumica en La inhibicin del crecimiento de A. flavus
una especie proporciona una mayor defensa con capsaicina y extractos de chile, es
contra los patgenos. estadsticamente igual a la inhibicin pre-
sentada con el fungicida comercial Captan.
Por otra parte, en relacin a los resultados Sin embargo, los extractos de chile piqun
obtenidos con la tcnica de dilucin de ex- muestran una mayor inhibicin que la cap-
tractos en agar se observ que al aplicarse saicina. La tcnica de dilucin del extracto
los extractos directamente en el medio se en agar permite una mayor difusin de los
present una inhibicin del 100 % en todas componentes en el medio. Los resultados de
las concentraciones evaluadas (Fig. 1a), sin este estudio sugieren que podra ser posible
embargo el crecimiento se reactiva despus utilizar extractos de chile como inhibidores
de 21 das, lo que permite identificar una naturales para el control de Aspergillus
accin fungisttica ms que fungicida. Esto flavus en productos agrcolas, sin embargo
tambin fue demostrado por Masood et al. es necesaria su evaluacin in vivo. Se reco-
(1994), sin embargo ellos observaron una mienda seguir esta lnea de investigacin,
reactivacin del crecimiento despus de mediante la evaluacin individual y en
10 das. Por otra parte se observ que en mezcla de los diferentes metabolitos secun-
concentraciones menores a las 200 ppm, darios que se presentan en esta especie, as
el crecimiento no se inhibe al 100% lo que como utilizar diferentes solventes, ya que
puede ser observado en la Fig. 1b. es de suma importancia encontrar nuevas
fuentes de control de hongos que atacan a
Diferentes investigaciones han evidenciado los granos, las cuales sean inofensivas tanto
que los extractos vegetales que contienen para el hombre como para el ambiente.
aceites esenciales muestran una mayor
actividad fungicida (Bravo et al., 1998; Car- LITERATURA CITADA
pinella et al., 2003; Wilkinson et al., 2003);
sin embargo, existen tambin investigacio- Acero-Ortega, C., Dorantes-lvarez, L.,
nes de otros metabolitos secundarios como Jaramillo-Flores, M.E., Hernndez-Sn-
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Fig. 1. Accin fungicida de capsaicina y extractos de chile piqun sobre A. flavus, despus
de 21 das de incubacin a 252C con tratamientos de capsaicina y extractos de chile
piqun en concentraciones de: a) 0.4, 0.8, 1.2, 1.6 y 2 mg y b) 0.3, 0.2, 0.1 y 0.05 mg.
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