CONCENTRACIN DE MICROORGANISMOS

1. RESUMEN

En el presente laboratorio determinaremos la concentracin de los microorganismos encontrados

en la muestra de estanque de arquitectura utilizando los siguientes mtodos:

Mtodo de la franja

Este mtodo es prctico, pero debe tenerse cuidado en la medicin. Consiste en verter una gota
de la muestra en el portaobjeto y cubrir con cubreobjetos, contabilizar el nmero de
microorganismos en cada campo y a partir de eso determinar la concentracin.

Mtodo de conteo Sedgwick-Rafter

El mtodo de Sedgwick Rafter es el mtodo de contaje ms preciso, pero se debe tener cuidado
en saber concentrar la muestra. Es desventajoso en la medida de que tambin se concentra
partculas en suspensin y si no se tiene el debido cuidado se dificulta el reconocimiento de la
muestra

2. INTRODUCCION

La concentracin de microorganismos nos da una idea de cuan contaminada esta una muestra o
un cuerpo de agua, es un parmetro de polucin del agua, en base a ello se realizan los
diferentes procesos para el tratamiento de agua para eliminar o disminuir la posible
contaminacin por parte de los microorganismos.

OBJETIVOS

Hallar la cantidad de campos para ambas celdas por medio del microscopio ptico.

Determinar la concentracin de los microorganismos encontrados en la muestra.

Comprender los mtodos para determinar la concentracin de microorganismos, observar y

determinar cul de los dos mtodos es el ms preciso

.
FUNDAMENTO TERICO

DEFINICIN DE ALGAS

Las algas difieren de los otros grupos de seres pequeos o microscpicos por poseer su pigmento
interno llenos de clorofila, que a veces estn ocultos parcialmente o enmascarados por otros
pigmentos, lo que las capacita en presencia de la luz, combinar agua con anhdrido carbnico para
formar almidn o sustancias anlogas y liberar oxgeno.
Las algas tienen la capacidad de modificar el pH, la alcalinidad, el color y la turbiedad.
MTODOS

CUALITATIVO

Nos proporciona informacin sobre las especies planctnicas presentes a travs de la diversidad
y abundancia relativa.

CUANTITATIVO
Nos proporciona informacin sobre la densidad total de plancton a travs del nmero de
microorganismos presentes por unidad de volumen de agua.

Examen para determinar la concentracin de organismos en un ambiente, aplicado especialmente

a recuento de algas y protozoos. Puede realizarse sobre muestra directa, concentrada o diluida.

Para expresar resultados se usan diferentes unidades. Las ms comunes son:

a) N organismos por mL o por L

b) Unidad estndar de rea (UEA) por mL

Elementos necesarios: microscopio con objetivos calibrados; ocular de Whipple, u otro ocular
reticulado, cmara de Sedgwick-Rafter, de Nebauer, otras.

a) Determinacin del N de Organismos por mL

Procedimiento: Introducir la muestra, previamente homogeneizada en la cmara

de recuento y cubrir con la lmina cubreobjeto, evitando la presencia de burbujas
de aire. Dejar reposar unos minutos. Colocar la cmara sobre la platina del
microscopio. Verificar la presencia del reticulado en el ocular. Escoger el objetivo
adecuado (generalmente 10x o 20x), enfocar y proceder a contar el nmero de
organismos por campo.

Se entiende por campo el rea ocupada por el cuadrado del reticulado (Whipple
u otro) Dependiendo de la densidad de los organismos en la muestra, se cuenta
como mnimo 10 campos al azar.

b) Determinacin de las Unidades Estndar de rea por mL

Una de las formas para estimar la densidad de algas en el agua es la determinacin

de una unidad convencional conocida como "Unidad Estndar de rea", que incluye
la superficie ocupada por los microorganismos en el campo del microscopio. Dicha
rea equivale a la ocupada por un cuadrado de 20 x 20 micrones por lado, o sea 400
micrones cuadrados.

1 UEA = 400

Procedimiento: Introducir 1 ml de muestra previamente homogeneizada en una

cmara de Sedgwick Rafter, cubrir con la lmina cubreobjeto, evitando dejar
atrapadas burbujas de aire.
 Dejar reposar unos minutos, y colocar en la platina del microscopio.

Verificar que el objetivo del microscopio cuente con el reticulado de Whipple. Escoger el
objetivo adecuado (generalmente 10x o 20x), enfocar y proceder a contar como unidades los
cuadrados (1x100 del reticulado de Whipple) ocupados totalmente por las algas y como
fraccin de unidad, los cuadrados parcialmente llenos.

3. METODOLOGIA

PROCEDIMIENTO

A. MTODO DE FRANJAS:
Es el conteo ms fcil que se pueda hacer con el portaobjeto,
utilizando un aumento de 100x (objetivo de 10x y ocular de 10x) y
400x (objetivo de 40x y ocular de 10x).

Materiales:

Muestras de algas
Portaobjeto y cubreobjeto
Microscopio ptico
Gotero
Contador

Procedimiento:

1. Se introduce la muestra de alga previamente homogenizada, con el gotero se

deja caer una gota en el portaobjeto y cubrir con la lamina de cubreobjeto y
evitando la burbujas de aire.

2. Determinar el volumen de una gota de la muestra utilizando el mismo gotero

(nmero de gotas en 10 ml).

3. Determinar el nmero de campos en cada lado del cubreobjeto (con objetivo

de 10x y 40x).
 Campos del microscopio

N de campo N de microorganismos
1 .
2
.
Total de campos total de microorganismos

Promedio: Suma del N total de m.o

Suma del N total de campos

4. Determinacin del nmero de microorganismos por campo (con objetivo de

10x y 43x).

5. Determinacin del nmero de campos en todo el cubreobjetos

N de campos en = (N de campos en cada lado del cubreobjetos)2

todo el cubreobjetos

6. Determinacin de la concentracin de microorganismo.

Concentracin de m.o. =promedio x N de campo en todo el cubreobjetos

Volumen de gota

B. MTODO DE CELDA SEDGMITH-RAFTER:

Materiales:

Muestras de algas
Celda Sedgmith-rafter
Cubreobjeto
Microscopio ptico
Pipeta

Procedimiento:

1. En la celda de segdmith-rafter, el cubreobjeto se gira 45 y en cada rea vaca se llena

con cantidades iguales de 1 ml. de la muestra utilizando para esto la pipeta.
Muestra

50 %

50 %

2. Una vez llenado se gira el cubreobjeto hasta taparlo. No se debe haber burbujas.

3. Determinar el N de campos a lo ancho de la celda (con objetivo de 10x y 40x).

 Campos del microscopio

N de campo N de microorganismos
1 .
2
.
Total de campos total de microorganismos

4. Determinar el N de microorganismo por campo (con objetivo de 10x y 43x).

Promedio: Suma del N total de m.o

Suma del N total de campos

5. Determinacin del N de campo (entrada de celda).

N de campos en = (N de campo a lo ancho) x (N de campo a lo largo celda)

toda la celda

6. Determinacin de la concentracin de microorganismo.

Concentracin de m.o = promedio x N de campo entrada de celda

Volumen (ml)

4. RESULTADOS

DATOS 1 (METODO DE LA FRANJA)

24 gotas 2ml
1gotas xml = 0.0833ml
Objetivo: 10X
N DE CAMPO N DE M.O
1 9
2 3
3 5
4 7
5 3
6 7
7 9
 8 10
9 12
10 10
11 9
12 11

a) Determinacin del N de campos, N de campos en todo el cubre objetos y el

N microorganismos por campo.

Nmero de campos en cada lado: 12

Nmero de campos en todo el cubre objetos: 12^2= 144
Nmero de microorganismos: 95

. . 95 . .
= = = 7.9166 8
12

b) Determinacin de la concentracin de microorganismos.

- Concentracin de m.o.:
..
()( ) 8 95campos

= = = 9123.65 . ./
1 0.0833

DATOS 1 (METODO DE LA FRANJA)

Objetivo: 43X
N DE CAMPO N DE M.O
1 11
2 10
3 6
4 5
5 8
6 8
7 8
8 9
9 5
10 7
11 4
12 4

c) Determinacin del N de campos, N de campos en todo el cubre objetos y el

N microorganismos por campo.

Nmero de campos en cada lado: 12

Nmero de campos en todo el cubre objetos: 12^2= 144
Nmero de microorganismos: 85
 . . 85 . .
= = = 7.0833 8
12

d) Determinacin de la concentracin de microorganismos.

- Concentracin de m.o.:
..
()( ) 8 85campos

= = = 8163.26 . ./
1 0.0833

DATOS 2 (MTODO DE LA CELDA)

Objetivo: 10X
N DE CAMPO N DE M.O
1 9
2 3
3 5
4 7
5 3
6 7
7 9
8 10
9 12
10 10
11 9
12 11

a) Determinacin del N de campos y el N microorganismos por campo.

Nmero de campos en cada lado: 12

Nmero de microorganismos: 95

. . 95 . .
= = = 7.9166 8
12

b) Determinacin del N de campos en toda la celda SEDGWICK-RAFTER.

- Nmero de campos en el ancho (22 mm) de la celda: 12

22
- Nmero de campos en el largo (22 mm) de la celda: 12 = 12
22
- Nmero de campos totales: (N campos anchos) x (N campos largos) = 144
 c) Determinacin de la concentracin de microorganismos.

- Nmero total de microorganismos:

. . =
. . = 7.9166 144 = .

- Concentracin de m.o.:
. .
. = = = . . ./
0.0833

DATOS 2 (MTODO DE LA CELDA)

Objetivo: 43X
N DE CAMPO N DE M.O
1 11
2 10
3 6
4 5
5 8
6 8
7 8
8 9
9 5
10 7
11 4
12 4

a) Determinacin del N de campos y el N microorganismos por campo.

Nmero de campos en cada lado: 12

Nmero de microorganismos: 85

. . 85 . .
= = = 7.0833 8
12

b) Determinacin del N de campos en toda la celda SEDGWICK-RAFTER.

- Nmero de campos en el ancho (22 mm) de la celda: 12

22
- Nmero de campos en el largo (22 mm) de la celda: 12 = 12
22
- Nmero de campos totales: (N campos anchos) x (N campos largos) = 144

c) Determinacin de la concentracin de microorganismos.

 - Nmero total de microorganismos:

. . =
. . = 7.0833 144 = . .

- Concentracin de m.o.:
. . .
. = = = . . ./
0.0833

Comparando Resultados, tenemos:

Objetivo 10X
Datos 1 Datos 2
N de campos a lo ancho de LA CELDA 15 14
N de campos a lo largo de la Celda 37.5 35
N de campos en el total de la Celda 562.5 490
Promedio de M.O. por campo 31.267 21.286
Concentracin de M.O./ml 17 587.69 10 430.14

5. CONCLUSIONES

Segn los resultados obtenidos en el mtodo de la celda Sedgwick-Rafter,

podemos decir que la muestra de agua analizada estaba muy concentrada.

Determinar la concentracin de microorganismo en una determinada muestra de

agua nos ayuda a realizar interpretaciones y anlisis de los parmetros de
calidad del agua, as como para evitar o determinar fallas en los sistemas de
abastecimiento y tratamiento de aguas.

Se puede concluir que mediante el mtodo de la franja se obtiene una mayor

precisin (menor error) ya que el otro mtodo si se demora mucho presenta
sedimentacin lo que hace tener un mayor margen de error.

6. RECOMENDACIONES
 Al agregar el lquido a la celda o al colocar el cubreobjetos sobre la gota de agua
debe evitar que se formen burbujas de aire que distorsionan la adecuada
determinacin de la concentracin de microorganismos.

El microscopio utilizado debe estar en buenas condiciones ya que se debe

observar ntidamente los microorganismos para poder contarlos.

Antes de agregar la muestra es recomendable que se agite para homogenizar el

lquido y as obtener mejores resultados.

Para calcular el nmero de campos se debe tener mucho cuidado con las
tangentes y el punto de cambio a otro campo.

No demorar mucho para evitar la evaporacin de la muestra por efecto de la luz

reflejada que incide sobre la celda.

Utilizar el contador para realizar el experimento y evitar confusiones en los datos

obtenidos.

Tener en cuenta la profundidad a la que se toma la muestra con la pipeta o el

gotero durante el proceso.

7. CUESTIONARIO

I. Cul de los dos metodos es mas exacto?. explique

II. QU problemas ocasionan los microorganismos en los sistemas de abastecimiento

de agua?

III. CMO SE PUEDE CONTROLAR BACTERIAS ,prtotozoarios, algas, hongos y VIRUS?

Entre los agentes qumicos de desinfeccin ms utilizados, se destacan el cloro elemental

gaseoso (Cl2), el hipoclorito (ClO-), la mezcla de cloro con amonaco (Cl2/NH3) que forman
cloramina, el dixido de cloro (ClO2), el ozono (O3) y el permanganato de potasio (KMnO4).
Tambin se utiliza extensamente la luz ultravioleta.

Uso del permanganato (MnO4-), que se obtiene a partir del dixido de manganeso (MnO2). Se
trata de un compuesto bastante oxidante, y es utilizado principalmente en el control de olor y
sabor, remocin de color y control de crecimiento de microorganismos en estaciones de
tratamiento de aguas. El permanganato de potasio inhibe el crecimiento de bacterias (por
ejemplo, coliformes, Vibrio cholerae, Salm. Typhi y Bact. Flexner) y virus (polivirus, bacterifagos)
 La radiacin UV es una alternativa de creciente aplicacin en la desinfeccin de aguas de
abastecimiento y residuales. Se ha comprobado fehacientemente que la radiacin UV es eficiente
en la inactivacin de bacterias, virus (colifago, virus de la hepatitis A, polivirus y rotavirus) y
protozoarios (por ejemplo, cistos de Giardia lambia y Giardiamuris, Acanthamoebarhysodes y
Cryptosporidiun).

IV. Qu problemas ocasiona las algas ciabacterias en zona de recreacin ?

V. explique EL CRECIMIENTO DE ALGAS EN SISTEMAS DE ABASTECIMIENTO DE AGUAS

Y EN ZONAS DE RECREACIN?

En piscinas el problema sera que el agua obtendra una turbiedad verde y generara un cierto
rechazo sobre los usuarios, adems que el agua no sera buena para el aseo. El problema de
las algas siempre aparecer en depsitos de agua se quiera o no, en pequeos lugares como
esquinas o paredes aparecen algas, que hacen que la superficie sea jabonosa y resbaladiza, lo
cual produzca un accidente.

8. BIBLIOGRAFA

Hidrobiologa aplicada a la ingeniera Sanitaria..Samuel Murger Branco

Mervin C. Palmer - Editorial Interamericana aos 1962 pginas 8 y 9

http://sisbib.unmsm.edu.pe/bibvirtual/Tesis/Basic/Marchand_P_E/discusion.htm

Tcnicas de muestreo de Plancton y Perfiton-Tcnicas para el recuento de plancton.

http://repositorio.ine.gob.mx/ae/ae_003156.pdf