UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE

CENTRO DE CINCIAS EXATAS E DA TERRA

INSTITUTO DE QUMICA
DISCIPLINA: MTODOS ESPECTROANALTICOS
DOCENTE: EDGAR PERIN MORAES

7,0
DETERMINAO DE CIDO ASCRBICO EM
FORMULAO FARMACUTICA POR
ESPECTROFOTOMETRIA UV-VIS E ADIO DE PADRO

Discentes: Elton Marlon de Arajo Lima

Flvia Heloise Balduno Santiago
Heloise Oliveira Medeiros de Arajo
Julyana Joyce Medeiros Arajo
Vanessa Bezerra Vilela

Natal
2016
 SUMRIO
RESUMO..................................................................................................................... 3
1. INTRODUO ........................................................................................................ 4
2. METODOLOGIA ..................................................................................................... 6
2.1. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS ........................................................................ 6
2.2. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL ................................................................... 6
3. RESULTADOS E DISCUSSO .............................................................................. 8
4. CONCLUSO ....................................................................................................... 14
5. REFERNCIAS ..................................................................................................... 15
 RESUMO
O cido ascrbico um slido cristalino de cor branca, hidrossolvel, sendo
pouco solvel em solventes orgnicos, uma forma oxidada da glicose (sendo uma
alfacetolactona com seis tomos de carbono, formando um anel lactona com cinco
membros e um grupo enadiol bifuncional com um grupo carbonilo adjacente. O cido
ascrbico (AAS), ou vitamina C, um importante agente antioxidante para o
metabolismo do ser humano que o prprio organismo no produz, necessitando que
ele seja ingerido atravs de alimentos e suplementos alimentares. A carncia severa
desta substncia torna o organismo vulnervel a doenas mais graves. O objetivo
deste trabalho foi determinar o teor de cido ascrbico em uma formulao
farmacutica com uso da espectroscopia na regio do UV-Vis e tambm pelo
processamento de imagens no programa PAINT, utilizou-se a aplicao da tcnica
de adio de padro para ambos mtodos de determinao utilizados. Preparou-se
solues de ferricianeto de potssio, cloreto de ferro III, cido ascrbico e da
soluo farmacutica, em seguida separou-se cinco bales volumtricos, no qual um
foi feito o branco, outro foi feito uma soluo sem cido ascrbico e nos outros trs
foi feito com diferentes volumes de cido ascrbico, logo em seguida foram levadas
as amostras para o espectrofotmetro, fez se a leitura em 700 nm e por ltimo tirou-
se fotos das cubetas com as amostras em um fundo branco. Utilizando a tcnica que
mede a absoro das amostras no UV-Vis, obteve-se que a concentrao de cido
ascrbico na soluo problema era de 13,5 mg/L 1,5, aps os clculos de diluio
obteve-se que a concentrao para o frmaco Cewin foi de 270000ppm. J PELO
processamento das fotos atravs do programa PAINT, obteve-se para a amostra
problema uma concentrao de soluo problema 7,31ppm 1,7. Aps os clculos
de diluio obteve-se que a concentrao para o frmaco Cewin foi de
146000ppm. Ambas as concentraes encontradas diferem da concentrao do
cido ascrbico afirmada na formulao do Cewin. O mtodo no qual a
absorbncia medida pela espectroscopia na regiao UV-Vis melhor, por possuir
uma maior confiabilidade, uma vez que o R 2 desse mtodo foi de 0,9987, enquanto
que para o mtodo utilizando o programa PAINT para a medio da absorbncia, o
R2 obtido foi de 0,9816, tendo uma baixa correlao linear, diminuindo a
confiabilidade dos seus resultados.

3
1. INTRODUO
O cido ascrbico (AAS), ou vitamina C, um importante agente antioxidante
para o metabolismo do ser humano que o prprio organismo no produz,
necessitando que ele seja ingerido atravs de alimentos e suplementos alimentares.
A carncia severa desta substncia torna o organismo vulnervel a doenas mais
graves, como por exemplo, o escorbuto (Andrade et al., 2002). Devido a suas
propriedades antioxidantes, seu consumo previne o envelhecimento dos tecidos
corporais, alm de proteger o sistema imunolgico, atuando como escudo contra
compostos nocivos para o corpo, possuir propriedades laxativas e cicatrizantes.
Esse composto pode ser encontrado em diversos alimentos naturais, como em
frutas ctricas, tomate, alface, alho e batatas, alm de farmacuticos, como
comprimidos efervescentes.
O cido ascrbico um slido cristalino de cor branca, hidrossolvel, sendo
pouco solvel em solventes orgnicos. De acordo com Vannuchi e Rocha (2012) o
cido ascrbico uma forma oxidada da glicose (C6H8O6), sendo uma
alfacetolactona com seis tomos de carbono, formando um anel lactona com cinco
membros e um grupo enadiol bifuncional com um grupo carbonilo adjacente.

Figura 1. Estrutura do AAS.

Para identificao e quantificao desta espcie em alimentos e frmacos

pode-se usar uma tcnica analtica, como a espectroscopia na regio do UV-Vis,
que possui robustez, custo relativamente baixo e grande nmero de aplicaes
desenvolvidas. A calibrao do equipamento onde sero realizadas as medies
pode ser feita de vrias formas, dentre elas, pode-se realizar uma anlise
quantitativa por adio de padro. A determinao do teor de uma substncia por
adio de padro consiste na elaborao de padres a partir da prpria amostra,
diminuindo a interferncia causada por efeito de matriz (Vieira et al., 2009).

O objetivo deste trabalho foi determinar o teor de cido ascrbico em uma

formulao farmacutica com uso da espectroscopia na regio do UV-Vis e tambm
4
pelo processamento de imagens no programa PAINT, utilizou-se a aplicao da
tcnica de adio de padro para ambos mtodos de determinao utilizados.

5
2. METODOLOGIA

2.1. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

Para a realizao desta prtica foram necessrios:

Bales volumtricos de 100 mL;
Basto de vidro;
Bckers;
Pipetas;
Balana analtica;
Cubetas de vidro;
Celular com cmera de alta resoluo;
gua destilada;
Ferricianeto de potssio (K3Fe(CN)6) P.A.-ACS, fabricado e embalado por
Grupo Qumica, Ramos Rio de Janeiro Brasil;
Cloreto de ferro III (FeCl3.6H2O) P.A.-ACS, Qumica Contempornea Ltda,
Diadema So Paulo Brasil;
cido ntrico (HNO3), J.T. Baker, S.A., Xalostoc Mxico;
cido ascrbico (C6H8O6 - Vitamina C), marca Cewin, Porto Alegre Brasil;
Espectrofotmetro UV-Vis (Spectrophotometer SP 2000 UV), da marca BEL
photonics.

2.2. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

Preparou-se uma soluo estoque de 10.000 ppm de ferricianeto de potssio,

em seguida foi preciso diluir a soluo para a concentrao desejada, ento, fez uso
de 5 mL da mesma, e transferiu para um balo de 100 mL para se obter uma
soluo final de 100 ml de uma soluo de 500 mg L-1 de [K3Fe(CN)6] em meio cido
de 0,014 mol L-1 de HNO3.
Preparou-se uma soluo estoque de 1.000 ppm de cloreto de ferro III em
seguida foi preciso diluir a soluo para a concentrao desejada, ento, fez uso de

6
10 mL da mesma, e transferiu para um balo de 100 mL para se obter uma soluo
final de 100 ml de uma soluo de 100 mg L-1 de on Fe (III) em gua destilada.
Preparou-se uma soluo estoque de 1.000 ppm de cido ascrbico, em
seguida foi preciso diluir a soluo para a concentrao desejada, ento, fez uso de
2,5 mL da mesma, e transferiu para um balo de 50 mL para se obter uma soluo
final de 50 ml de uma soluo de 50 mg L -1 de C 6H8O6 em meio cido de 0,014 mol
L-1 de HNO3.
Preparou-se uma soluo estoque de 2.000 ppm da soluo farmacutica, em
seguida foi preciso diluir a soluo para a concentrao desejada, ento, fez uso de
0,5 mL da mesma, e transferiu para um balo de 100 mL para se obter uma soluo
final de 100 ml de uma soluo de 10 mg L -1 em meio cido de 0,014 mol L -1 de
HNO3, a qual foi a soluo problema.
Depois de feita as diluies, selecionou-se 5 bales de vidro de 50 mL.
Em 4 deles foi adicionado 10 ml da soluo hexacianoferrato de potssio, 20
mL da soluo de ferro (III) e 5 mL da soluo problema. E fez-se um branco sem a
soluo problema, apenas com 10 mL da soluo hexacianoferrato de potssio e 20
mL da soluo de ferro (III).
Completou-se o primeiro balo com soluo de 0,014 mol L -1 de HNO 3. Nos
outros bales foi adicionado 2, 4 e 8 mL da soluo padro de cido ascrbico 50
mg L-1. E em seguida foram todos completados com soluo 0,014 mol L -1 de HNO 3,
incluindo o branco.
Logo aps, foi ajustado o espectrofotmetro para o comprimento de onda na
regio de 700 nm e foi feito a leitura em triplicata das solues dos cinco bales.
Retirou-se as cubetas, colocou-as sobre um fundo branco e fotografou as mesmas,
para usar as imagens na quantificao do cido ascrbico.

7
3. RESULTADOS E DISCUSSO

O Ferro no estado (II) mais estvel do que o Ferro (III). Assim, ocorre a
reduo do Ferro (III) para o Ferro (II), ocorrendo a formao de um novo complexo,
o [Fe(CN) 6]4-, no qual, o Ferro presente est no seu estado mais estvel (Fe 2+) eo
Fe3+ que estava presente no complexo inicial (hexacianoferrato - [Fe(CN) 3-
6] ) ir
para o meio e posteriormente, ir se ligar ao novo complexo, formando o
Fe4[Fe(CN)6]3 (azul da prssia).
As reaes ocorridas so as seguintes:
2 Fe3+ + C6H8O6 2Fe2+ + C6H6O6 + 2H+
Fe2+ + [Fe(CN)6]3- Fe3+ + [Fe(CN)6]4-
4Fe3+ + 3[Fe(CN)6]4- Fe4[Fe(CN)6]3
Para a determinao do cido ascrbico na soluo problema utilizou-se dois
mtodos de anlise: atravs da absoro utilizando o UV-Vis e pelo processamento
de imagens (fotos das amostras) pelo programa PAINT. Em ambos os mtodos,
utilizou-se a tcnica de adio de padro.
3.1 Utilizao do mtodo de adio de padro para quantificar o cido
ascrbico.
A partir da espectrometria de absoro no UV-Vis das amostras contendo
cido ascrbico, e atravs do mtodo de adio de padro, foi possvel a
determinao da concentrao de cido ascrbico.
Padro Absorbncia
0 mL 0,145
2 mL 0,370
4 mL 0,585
8 mL 0.955

Sabendo que,

1 =







=


=

Temos:

1


1 =



=

8





1

0,145 50 2

2 =

+
=
1+
=
= 12,9 mg/L


0,225 5

1

0,145 50 4

3 =

+
=
1+

=
= 13,2 mg/L


0,440 5

1
0,145 50 8

4 =

+
=
1+

=
= 14,32 mg/L


0,810 5

Assim, a mdia das concentraes obtidas e o desvio padro so

apresentados a seguir:


= 13,5

= 0,75


Considerando z=2, a concentrao do cido ascrbico encontrada foi de:


[


] = 13,5 1,5
/

Atravs da obteno do grfico (figura 1) de volume de padro versus

absorbncia, foi possvel ter um timo valor de coeficiente de determinao, e isso
nos mostrou que o modelo consegue explicar os valores observados.

1,0

y=0,10079x+0,161
2
0,8 R =0,9987
Absorbncia (A)

0,6

0,4

0,2

0,0
0 2 4 6 8
Volume de padro (mL)

Figura 1 grfico de volume de padro versus absorbncia

Com o valor de concentrao mdia obtido acima, foi possvel obter a

concentrao de acido ascrbico na soluo farmacutica, fizemos a seguinte
relao:

9
 10 mg/L ___________________ 200000 ppm
13,5 mg/L _________________ X
X= 270000 ppm de cido ascrbico
O valor da concentrao de cido ascrbico obtido para a soluo
farmacutica est acima do informado na embalagem. Erro?
3.2 Utilizao de imagens para quantificar o cido ascrbico.
Para determinao da quantidade de cido ascrbico na formulao
farmacutica atravs do processamento de imagens, inicialmente, foram tiradas
fotografias (Fotos 1, 2, 3, 4, 5 e 6), com a cmera de um celular comum, das cubetas
em um fundo branco.

Foto 2
Foto 1: Amostras 4 e 5

Foto 4: Amostras 5, 1, 2 e 3

10
 Foto 5

Foto 6

Com o auxlio do programa Paint, no qual podemos criar desenhos ou editar

imagens digitais, encontramos a intensidade do Red no padro de cor RGB para
cada amostra. As medidas de intensidade do Red foram feitas em triplicata. A tabela
abaixo ilustra os resultados obtidos:
Amostra Red foto Red foto Red foto Red foto Red foto Red foto Mdia
1 2 3 4 5 6
1 - - - 142 141 141 141,33

2 - - - 116 115 113 114,67

3 - - - 94 98 97 96,33

4 46 56 52 - - - 51,33

5 - - - 153 154 151 152,67

A partir das intensidades do Red do branco(amostra 5), 0, e das mdias do

Red das amostras, I, pode-se calcular a absorbncia de tais amostras utilizando a
relao abaixo:

= log
0
Os resultados obtidos esto explicitados na tabela abaixo:

11
 Amostra A

1 0,034

2 0,124

3 0,199
T estranho
4 0,473

5 (Branco) 0

Com tais dados foi possvel construir uma curva analtica e, ento, obter a sua
equao e o coeficiente de correlao linear, cujo valor foi 0,9816. Veja:

Curva de calibrao y = 0,0549x + 0,0152

R = 0,9816
0,5
0,45
0,4
0,35
Absorbncia

0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
V (p)

Sabendo que,

1 =







=


=

Temos:

1


1 =



=

1



2 =
+ =
1+

1



3 =

+
=
1+

1



4 =

+
=
1+

12
 Desta forma, encontramos o
, o qual representa a concentrao da soluo

antes de ser adicionado a ela o padro, ou seja, a concentrao da soluo

problema inicialmente.
Assim, temos que a mdia dos obtidos de cada amostra 7,31 mg/L e o

desvio padro 0,85. Portanto, a concentrao da soluo problema 7,31 mg/L

1,7.

Como a soluo problema supostamente a 200 foi diluida para 10 ppm

(mg/L), a partir de uma regra de trs simples, encontrou-se que a concentrao do

frmaco de 146 , o qual foi um resultado abaixo do esperado. Tal decrscimo

pode ter se dado devido a erros experimentais, alm disso, o mtodo por
processamento de imagens pouco preciso, pois dependendo do tipo de cmera
utilizada e da regio da imagem na qual o selecionador de cores colocado, a
intensidade do Red ir variar, afetando assim o resultado final.

13
4. CONCLUSO

A formulao do frmaco Cewin, afirma conter 200mg/ml, ou seja,

200.000ppm de cido ascrbico em sua composio. Para a avaliao do valor real
de cido ascrbico numa amostra do frmaco Cewin, utilizou-se dois mtodos de
anlise: atravs da absoro utilizando o UV e pelo processamento de imagens
(fotos das amostras). Em ambos os mtodos, utilizou-se a tcnica de adio de
padro.
Utilizando a tcnica que mede a absoro das amostras no UV-Vis, obteve-se
que a concentrao de cido ascrbico na soluo problema era de 13,5 mg/L
1,5, aps os clculos de diluio obteve-se que a concentrao para o frmaco
Cewin foi de 270000ppm. R2= 0,9987
Utilizando o processamento das fotos atravs do programa PAINT, obteve-se
para a amostra problema uma concentrao de soluo problema 7,31ppm 1,7.
Aps os clculos de diluio obteve-se que a concentrao para o frmaco Cewin
foi de 146000ppm.
Ambas as concentraes encontradas diferem da concentrao do cido
ascrbico afirmada na formulao do Cewin, no mtodo utilizando o PAINT, a
concentrao encontrada foi inferior e no mtodo utilizando o UV-Vis, a
concentrao encontrada foi acima do esperado.
Comparando os dois mtodos, pode-se chegar concluso que o mtodo no
qual a absorbncia medida pelo espectrmetro UV melhor, por possuir uma
maior confiabilidade, uma vez que o R 2 desse mtodo foi de 0,9987, enquanto que
para o mtodo utilizando o programa PAINT para a medio da absorbncia, o R 2

obtido foi de 0,9816, tendo uma baixa correlao linear, diminuindo a confiabilidade
dos seus resultados.

14
5. REFERNCIAS

ANDRADE, R. S. G.; DINIZ, M. C. T.; NEVES, E. A.; NBREGA, J. A.

Determinao e distribuio de cido ascrbico em trs frutos tropicais.
Ecltica Qumica, v. 27, p. 393-401, 2002.

VANNUCCHI, H.; ROCHA, M. M. Funes Plenamente Reconhecidas de

Nutrientes - cido ascrbico (Vitamina C). ILSI Brasil, So Paulo, 2012.

VIEIRA, M. S.; BOHRER, S. D.; ROTTA, R. E.; GERBASE, A. E.; FERRO, M. F.

Aplicao do mtodo da adio padro para a quantificao de biodiesel em
blendas comerciais de biodiesel/diesel. XXIX ENCONTRO NACIONAL DE
ENGENHARIA DE PRODUO, Salvador BA, 2009.

15