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Director
Diego Ricardo Muoz
A mis padres Don Libardo y Doa Rosy, a mis hermanos, por todo su apoyo,
compresin, amor y cario, durante toda mi poca de estudios y los momentos
duros.
A mi amiga Jenny Lizarazo por su compaa durante toda la carrera, por su apoyo,
su compresin y por su ayuda para resolver mis dudas.
Figura 1: Caractersticas morfolgicas de las partes areas del genero Piper ..... 13
Figura 2: Distribucin geogrfica del genero Piper a nivel mundial[14] ............... 14
Figura 3: Distribucin geografa del genero Piper en Colombia[15] ...................... 14
Figura 4: Piper Imperiale[35] ................................................................................. 27
Figura 5: Estructura del DPPH en su forma radical y no radical ........................... 36
Figura 6: Estructura del agente estndar trolox .................................................... 37
Figura 7: Efecto de degradacin de color del DPPH con disoluciones extracto
etanlico de las hojas especie Piper imperiale ...................................................... 39
Figura 8: % de inhibicin por metodologa DPPH para el patrn Trolox y el
extracto etanlico de las hojas de la especie Piper imperiale ................................ 42
Figura 9: CCD en revelado UV a 365nm del compuesto 1 aislado del extracto
etanlico hojas especie Piper imperiale ................................................................. 43
Figura 10: Espectro RMN 1H (CDCl3, 300MHz) del compuesto 1 aislado del
extracto etanlico de la hojas especie Piper imperiale .......................................... 44
Figura 11: Ampliacin del espectro 1H RMN entre 6.70 a 6.50 ppm para el
compuesto 1 .......................................................................................................... 45
Figura 12: Ampliacin del espectro RMN 1H entre 5.60 y 3.80ppm para el
compuesto 1. ......................................................................................................... 46
Figura 13: Ampliacin del espectro RMN 1H entre 3.0 a 1.0 ppm, para el
compuesto 1. ......................................................................................................... 46
Figura 14: Espectro RMN 13C (CDCl3 75 MHz,) del compuesto 1. ........................ 47
Figura 15: Espectro COSY 1H-1H del Compuesto 1.............................................. 48
Figura 16: Ampliacin espectro HSQC RMN 1H ( 2.0 a 7.0ppm y RMN 13C 25 a
125ppm) del compuesto 1. .................................................................................... 49
Figura 17: Ismeros posibles de la estructura del compuesto 1 aislado del extracto
etanlico de las hojas de la especie Piper imperiale.............................................. 50
Figura 18: Ampliacin del espectro HMBC. Ubicacin cadena aliftica en anillo
aromtico. .............................................................................................................. 51
Figura 19: Ampliacin del espectro HMBC. Ubicacin grupo hidroxilo y metoxilo
en el anillo aromtico. ............................................................................................ 52
Figura 20: Ampliacin espectro HMBC. Ubicacin grupo carbonilo y grupo
metileno unido a un tomo electronegativo oxigeno en cadena aliftica ............... 53
Figura 21: Estructura del compuesto 1 con sus respectivas correlaciones
identificadas por el espectro HMBC 1H - 13C ......................................................... 53
Figura 22: Estructura elucidada del extracto etanlico de la hojas de la especie
Piper imperiale Etil Dihidroferulato. ........................................................................ 54
Figura 23: Estructura del pentadecil ferulato derivado del acido ferlico aislado de
la especie Salicornea herbacea ............................................................................. 56
Figura 24: Derivados del acido ferulico aislados de Plumeria bicolor ................... 56
LISTA DE DIAGRAMAS
9
Resumen
A partir del extracto etanlico de las hojas de la especie vegetal Piper imperiale se
realizo la determinacin de la actividad antioxidante por el mtodo de radical libre
DPPH y adicionalmente, a travs del fraccionamiento por CCD y CC se logro el
aislamiento y la identificacin del ester etlico del cido dihidroferlico (-(4-
hydroxy-3-methoxy-phenyl)-propionato de etilo.
A una parte del extracto etanlico de las hojas de la especie Piper imperiale, se le
realizaron pruebas fitoqumicas preliminares obteniendo resultados positivos para
alcaloides, esteroides, flavonoides, taninos y cumarinas.
10
Introduccin
Pocos estudios sobre la especie Piper imperieale han mostrado que posee cierta
actividad antioxidante frente a metodologas como el DPPH y FRAP, adems se
han logrado identificar una cierta cantidad de compuestos naturales como
polifenoles entre ellos el acido ferlico[4], estos compuestos se caracterizan por
ser antioxidantes y se han convertido en un tema importante debido que ayudan a
prevenir y retrasar la aparicin de enfermedades como el cncer, cirrosis hepatitis
y diabetes causadas por la presencia de radicales libres[5], por esta razn era
necesario realizar un estudio sobre la especie Piper imperiale, sus propiedades
antioxidantes y su composicin, contribuyendo al conocimiento qumico y biolgico
de la especie, y ayudando en avances mdicos frente a enfermedades provocadas
por la presencia de radicales libres.
11
1 MARCO TEORICO
12
Figura 1: Caractersticas morfolgicas de las partes areas del genero
Piper
13
Figura 2: Distribucin geogrfica del genero Piper a nivel mundial[14]
Las especies del genero Piper han sido de gran utilidad para la vida cotidiana, por
su importancia a nivel econmico, comercial y medicinal, entre ellas podemos
encontrar la P. nigrum donde sus frutos secos son pulverizados para obtener la
pimienta[6]. En Colombia las especies de este gnero se conocen como anises y
son utilizadas para el tratamiento de enfermedades como diarrea, disentera,
dolores de estomago, caries dentales y cicatrizantes. Tribus indgenas como los
motilones en el Norte de Santander y los Embera en el Choco las utilizan como
analgsicos, antiinflamatorios y contra picaduras de serpientes[7].
14
Tabla 2: Usos etnobotnicos de especies del genero Piper
FORMA DE
NOMBRE PARTE USO
USO
Control de dolores
Piper angostifolium Raz En decoccin menstruales y hemorragias
internas[16].
Uso como diurtico y
antisptico de las vas
Extracto del fruto
Piper cubeba Fruto urinarias, empleado para
en agua
combatir afecciones como
cistitis y uretritis[17].
La tribu Bari usa los tallos
para prevenir la caries y
como estimulante,
Piper erithroxyloides Tallos Masticado
produciendo un efecto
narctico que duerme la
lengua[7].
Se emplean como remedios
para la tos.
Hojas
Piper guineense En infusin
Usadas como tratamiento
Semillas
para los dolores de
estomago[8]
Se emplea como astringente
Frescas y para detener hemorragias
Hojas
trituradas traumticas y como
hemosttico externo[18].
Piper marginatum
En decoccin Usada contra el
Raz
paludismo[19]
Las especies del genero Piper han mostrado gran potencial frente actividades
antitumorales, antibiticos, antifngicos e insecticidas, razones por las que se han
realizado investigaciones fitoqumicas encontrando que las especies estn
compuestas por metabolitos de tipo flavonoide, amida, propinilfenoles, lignanos,
neolignanos, kavapironas y terpenos[21, 22].
15
1.5.1 Amidas
Las amidas (conocidas en el gnero Piper como piperamidas) son los compuestos
ms caractersticos del genero Piper porque han mostrando resultados de
propiedades insecticidas y fungicidas. Especies como la Piper tuberculatum estn
constituidas por amidas como la N-[10-(13,14-metilenedioxifenil)-7(E),9(Z)-
pentadienoil]-pirrolidina y la arboreumina las cuales poseen propiedades
antifungicas[23].
CH3 O O O CH3
H H H H
H3C CH3
NH NH
H3C CH3H3C CH3
OH OH
Arberoumina
De las hojas de la Piper arboreum se han aislados pirrolidinas que son activas
contra el hongo Cladosporium sphaerospermum[23].
O
N
N-[10- (13,14-metilenedioxifenil)-7(E)-pentaenoil]-pirrolidina
O
N
N-[10-(13,14-metilenedioxifenil)-pentanoil]-pirrolidina
16
De los extractos en diclorometano de las hojas de Piper elonatum y Piper
glabratum se han logrado aislar cuatro amidas como las nombradas a
continuacin[10]:
R OH
HO O NH
OCH3
O
NH R2
R1
1.5.2 Flavonoides
17
OH
H3CO OH
OH O
Asebogenina
OH
H3CO OH
OCH 3 O
Flavokavaina C
HO O HO OCH3
OH O OH O
Chrysina Uvangoletina
18
Flavononas de gran importancia como la pinocembrina y pinostrobina por estar
relacionadas con la inhibicin de crecimiento y toxicidad contra hongos y la
preservacin de la madera se han aislado de la especie Piper steerni[25].
R1O O
R1= H Pirocembrina
R1=CH3 Pirostrobina
OH O
1.5.3 Propilfenoles
R5
R2
1.5.4 Pironas
Las pironas tambin conocida como kavalactonas se crea que eran compuestos
encontrados solamente en la especie Piper methysticum, pero en algunos estudios
se han logrado aislar de la especie Piper sanctum[9, 20].
19
OCH3
R4
O O
R1 R3
R2
Kavalactonas R1 R2 R3 R4 C5 C6 C7 C8
10-Methoxyyagonina OCH3 OCH3 = =
Desmethoxyyagonina = =
Dihydromethusticina OCH2O
Hydroxykavaina OH =
Kavaina =
Methysticina OCH2O =
Yangonina OCH3 = =
1.6.5 Terpenos
Los aceites esenciales del genero Piper esta constituidos por una gran variedad
de monoterpenos como borneol, alcanfor, cineol, eugenol, cubebol y safrol. En la
especie Piper auritum se han identificado compuestos como nonanal, miristicina y
safrol, siendo este ultimo el de mayor concentracin con alrededor de 90%[26].
H3C CH3
CH3
O CH3
H3C
H
H3C
OH Cineol
Borneol
20
OH
OCH3
CH2
CH2
Safrol
Eugenol
CH3
O CH2
H3C
HO
O H
O H3C CH3
Miristicina
H3C
Cubebol
H3CO H3C
H3CO
CH2
H3CO
Kadsurenona
21
O
O
O
O
O
O
H
H H
H
O H3CO
O
Sesamina
O Fargesina
H3CO
O
H3C
CH3
HO
Conocorpan
CH3
H3C O H3C
O
CH2
HO
O
HO
O
Cuneifolin CH3
22
1.6 Actividad biolgica genero Piper
OCH 3
CH3
HO
O OH
HO
NH H3C CH3
Borneol
Aduncamida OCH 3
O
N
O
Pipernolanina
23
CH3
H3C NH
CH3
O
N-isobulilamida pellitorina
O
CH3
NH
O CH3
Guineensina
O
CH3
NH
O CH3
Pipercida
O
CH3
NH
O CH3
Retrofractamida A
N
O
O
Piperidina
24
1.7 Actividad antioxidante del genero Piper
Las hojas de la especie P. peltatum han mostrado prueba positiva frente a pruebas
fitoqumicas para compuestos fenlicos los cuales se caracterizan por su actividad
antioxidante, la cual se ha comprobado con ensayos de DPPH y FRAP[33].
O OH
H3CO
OH
HO OH
OH HO
25
OH
OH OH
OH
HO O
HO O
OH
OH
OH O
OH
Quercetina
OH O
Catequina
OH
OH
HO
HO O
OH
OH
OH
OH
Resveratrol
Epicatequina
Las partes areas de la especie Piper imperiale han mostrado una elevada
actividad antioxidante y actividad antibacterial frente a bacterias causantes de la
tuberculosis, esto puede ser atribuido al elevado contenido de compuestos como
polifenoles, flavonoides y estilbenos que estn presentes en ellas[4].
rbol o arbusto de 2 a 6 m de alto, con tallos verdes, algo vellosos o con puntas
blandas gruesos de 2 cm de ancho, de pocas ramas. Hojas alternadas, por lo
general dos a lo largo del tallo, verrugosas de 20 a 60 cm de largo y 15 a 35 cm de
ancho, con forma de corazn, pice acuminado, base asimtrica cordaba con un
lado pegado al peciolo. Sus flores de color verde y en algunas ocasiones moradas,
de espigas colgantes hasta de 28 a 55 cm de largo y 8-10 mm de espesor. Fruto
carnoso de color verde a marrn rojizo de 0,2 cm de ancho [34, 35].
26
Figura 4: Piper Imperiale[35]
REINO Plantae
DIVISION Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
ORDEN Piperales
FAMILIA Piperaceae
GENERO Piper
ESPECIE Imperiale
27
2. Parte experimental
28
Tabla 4: Pesos hojas seco y molidas Piper imperiale y su extracto
etanlico.
Peso Seco Material
Peso Extracto (g)
Vegetal (g)
350 28
Extracto Etanolico
Extracto III
Residuo I Residuo II
Pruebas: Pruebas:
Alcaloides Esteroides y/o triterpenoides, Pruebas:
Flavonoides Lactonas terpenicas
Nafto y/o antraquinonas Cumarinas
Saponinas cardiotnicas
Taninos
29
2.4.1 Anlisis preliminar de alcaloides (Residuo I)
HgI2 + I- [HgI4]2-
Hg
NH 2I
O
Hg
Oxiyoduro mercuriamonico
30
Diagrama 2: Prueba para el reconocimiento de alcaloides.
Residuo I
(Anlisis alcaloides)
Filtrado Residuo
(Descartar)
Preparacin de Reactivos.
31
2.4.2 Anlisis preliminar de esteroides y/o triterpenoides, nafto y/o
antroaquinonas, taninos y saponinas (Residuo II)
Filtrado Residuo
Los 5mL del filtrado se adicionan a un tubo de ensayo que contenga 10mL de
solucin MeOH/H2O (9:1), se agita y se deja en reposo hasta la separacin de 2
capas, se toma la fase superior. La fase obtenida se aplica en una placa de CCD y
se corre primero con una mezcla ciclo hexano/AcOEt (95:5) y luego con una
mezcla de EdP/ter etlico/Acido actico (80:20:1), se procede a marcar todas las
manchas (no se toman en cuenta). Rociar sobre la placa Reactivo de Liebermann-
Burchard y calentar por 5 a 10 minutos a 110C, si aparecen manchas de color
rojo, azul o verde es prueba positiva para esteroides y/o triterpenoides.
32
2.4.2.2 Anlisis preliminar de flavonoides
O
O
+ Mg/2HCl
+ MgCl2
O
OH
O
+
O Cl
HCl
OH
+ H2O + H2
OH
OH
Filtrado Residuo
(Desechar)
Filtrado Residuo
1. Concentrar a 3mL
2. Purificar con columna de 10mm de dimetro con silica gel
como fase estacionaria y un sistema CHCl3/MeOH 9:1 como
fase mvil
Solucin 1
34
2.4.3.1 Reconocimiento de lactonas terpenicas
Con las fracciones obtenidas se realizaron CCD con varios juegos de solventes
buscando la mejor separacin, escogiendo la fraccion C1F3 con un peso de
460.2mg, la cual se fracciono en CC con una fase estacionaria de slica gel y una
fase mvil CH2Cl2/AcOEt 95:5, se recogieron 53 fracciones que se reunieron en 6
fracciones denominadas como C2F1-C2F8.
35
Diagrama 5: Fraccionamiento de Columna del extracto etanlico de las
hojas de la especie Piper imperiale
NO 2
NO 2
O 2N NH N O 2N N
N
NO 2 NO 2
36
Cuando una solucin de DPPH se mezcla con una solucin donadora de protones
como un antioxidante, el radical se reduce perdiendo la intensidad de color y su
absorbancia dndose la siguiente reaccin[39, 40]:
DPPH + AH DPPH + A
CH3
HO
O
H3C O
CH3 OH
CH3
Trolox
Figura 6: Estructura del agente estndar trolox
37
3. DISCUSIN Y RESULTADOS
Quinonas Borntrger -
Taninos Gelatina-sal +
Vainillina en Acido
Lactonas Terpenicas -
fosforico
Saponinas Cloruro de zinc -
38
Los flavonoides son compuestos que se caracterizan por poseer un esqueleto de
tipo C6C3C6 y en el gnero Piper se ha encontrado la presencia del tipo chalconas,
flavanonas y dihidrochalconas, las pruebas fitoqumicas para flavonoides fueron
positivas en el extracto etanlico de las hojas de la especie P. imperiale
corroborando la presencia de este tipo de compuestos en el gnero Piper y en la
especie.
39
En las tablas 7 y 8 se muestran los resultados obtenidos de absorbancia
determinados para las disoluciones del patrn Trolox y el extracto etanlico de las
hojas de la especie Piper imperiale.
TROLOX
[ ] g/mL ABSORBANCIA
40
Donde Ao corresponde a la absorbancia del blanco 0,7717 y Ab corresponde a la
absorbancia de la muestra.
Trolox
[] % INHIBICION ERROR
DESVIACION
g/mL MEDICION 1 MEDICION 2 MEDICION 3 PROMEDIO ESTANDAR
41
En el siguiente grafico se muestras los porcentajes de inhibicin para el patrn
Trolox y el extracto etanlico de las hojas de la especie Piper imperiale.
42
En estudios previos realizados al extracto etanolico de las hojas de la especie
Piper imperiale se encontr que este posee un IC50 de 27.31.1 g/mL, utilizando
como estndar hidroxiquinona y concentraciones de 2, 4, 6, 8 y 10 g/mL para el
estndar y el extracto[4].
43
TMS
CDCl3
Figura 10: Espectro RMN 1H (CDCl3, 300MHz) del compuesto 1 aislado del
extracto etanlico de la hojas especie Piper imperiale
44
J=8.30 Hz
J=7.80 Hz
J=1.84 Hz
Figura 11: Ampliacin del espectro 1H RMN entre 6.70 a 6.50 ppm para el
compuesto 1
45
J=7.21Hz
Figura 12: Ampliacin del espectro RMN 1H entre 5.60 y 3.80ppm para el
compuesto 1.
J=7.76Hz J=7.76Hz
Figura 13: Ampliacin del espectro RMN 1H entre 3.0 a 1.0 ppm, para el
compuesto 1.
46
Con el espectro de RMN 13C JMOD a 75 MHz (Figura 14) se puede establecer que
el compuesto 1 posee 12 seales de carbono, con las caractersticas de: cuatro
carbonos tipo cuaternario 173.29, 146.39, 143.98, 132.28, dos carbonos tipo
metilo 56.26, 14,23, tres carbonos tipo metileno 60.23, 36.60, 30.75 y tres
seales tipo metino 121.13, 114.49, 110.64.
47
El espectro COSY 1H 1H del compuesto 1 (Figura 15), muestra la correlacin
entre protones de carbonos vecinos, confirmando la presencia de protones
aromticos en posicin orto por las correlaciones entre 6.83 (d, J = 7.8 Hz, 1H), y
6.69 (d, J = 8.3 Hz, 2H).
48
Tambin se corroboraron correlaciones entre los protones de tipo metilo unido al
tomo electronegativo oxigeno con su carbono correspondiente con
desplazamiento en RMN 1H en 3,87 y un desplazamiento en RMN 13C en
56.23. Otras correlaciones encontradas fueron las de los protones de tipo
metileno 2.58, 2,88 con los carbonos 36.60, 30.75.
Figura 16: Ampliacin espectro HSQC RMN 1H ( 2.0 a 7.0ppm y RMN 13C
25 a 125ppm) del compuesto 1.
Con los espectros de RMN 1H, RMN 13C, COSY y HSQC se pudo determinar que
la estructura del compuesto 1 corresponde a un anillo aromtico con tres protones
(dos en posiciones orto y uno en posicin meta con respecto a los otros dos
protones) y tres sustituciones; un grupo hidroxilo, un grupo metoxilo y una cadena
aliftica con un grupo ester, obteniendo la posibilidad de seis ismeros para la
estructura del compuesto 1 (Figura 17).
49
CH3 CH3
R
O O
H OH
H OH H R
H H
H H H H
O
R OH
H3C
OH R
OH
H R H O
H O
CH3 CH3
H H H H
H H
O OH
R
H3C
50
Figura 18: Ampliacin del espectro HMBC. Ubicacin cadena aliftica en anillo
aromtico.
Se determino que la ubicacin del grupo metoxilo en el anillo aromtico esta sobre
el carbono cuaternario 146.39 por su correlacin con los protones en 3,87
(Figura 19). Para el grupo hidroxilo se determino que este se encuentra entre el
carbono con el grupo que posee el grupo metoxilo y un carbono de tipo metino por
sus correlaciones de protn en 5.51 con los carbonos 114.49, 143.97, 146.39
(Figura 19).
51
Figura 19: Ampliacin del espectro HMBC. Ubicacin grupo hidroxilo y
metoxilo en el anillo aromtico.
Para la cadena aliftica se pudo determinar la ubicacin del grupo carbonilo por su
correlacin con protones de tipo metileno 2.88 y 2.52 (Figura 20). Los protones
del grupo metileno unido al tomo electronegativo oxigeno 4,12 poseen una
correlacin con un carbono de tipo metilo 14.23 y con el carbono del grupo
carbonilo 173.29 (Figura 20) dando la ubicacin del grupo ester en la cadena
aliftica.
52
Figura 20: Ampliacin espectro HMBC. Ubicacin grupo carbonilo y grupo
metileno unido a un tomo electronegativo oxigeno en cadena aliftica
OH
H O
CH3
H H
O O
H3C
OH
H 4 3 O 3a
CH3
5
2
H 6 H
1
7
8
1' 9
2' O
H3C O
54
El compuesto 1 es un metabolito secundario por primera vez aislado del extracto
etanlico de las hojas de la especie Piper imperiale, derivado del acido
dihidroferlico. Para verificar la elucidacin del compuesto aislado se realizaron
revisiones bibliogrficas y se pudo encontrar los RMN 13C para la estructura
sintetizada del ester etlico del cido dihidroferlico [44] comparando sus
desplazamientos (Tabla 12), y se encontr que la mayoria de estos coincidan con
la estructura elucidada corroborando que el compuesto aislado si es el ester etlico
del cido dihidroferlico
55
CH3 O
O CH3
O
HO
Figura 23: Estructura del pentadecil ferulato derivado del acido ferlico
aislado de la especie Salicornea herbacea
HO O
OR
El ester etlico del cido dihidroferlico aislado del extracto etanolico de la especie
P. imperiale es un metabolito secundario que podra poseer caractersticas de
actividad antioxidante ya que estructuras similares como las nombradas
anteriormente han sido estudiadas y dado prueba positiva frente a metodologas
de DPPH y FRAP, adems se ha encontrado que el acido ferulico posee actividad
antioxidante[47] una caracterstica que tambin podran tener sus derivados,
adems en estudios previos se logro identificar la presencia del acido ferulico en el
extracto etanolico de las hojas de la especie Piper imperiale[4].
56
Conclusiones
57
Recomendaciones
58
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
59
15. Quijano A., Areas of endemism and distribution patterns for Neotropical
Piper species (Piperaceae). Journal of Biogeography, 2006. 33: p. 1266.
16. Ponz, E., La Medicina Tradicional de los Tacana y Machineri, ed. F. PIEB.
2005, La Paz Bolivia.
17. Lifchitz, A., Plantas medicinales. Guia Practica de Botanica Universal, ed.
Kier. 2006, Buenos Aires.
18. Melendez, E., Plantas Medicinales de Puerto Rico, ed. Universidad
de.Puerto Rico. 1982, Puerto Rico.
19. Lopera P., El milagro de las plantas: aplicaciones medicinales y
orofaringeas., ed. S. Pablo. 2005.
20. Xuan T., Wei C., Efficacy of extracting solvents to chemical components of
kava (Piper methysticum) roots. The Japanese Society of Pharmacognosy
and Spinger, 2007.
21. Peres V., Chemical composition and cytotoxic, mutagenic and genotoxic
activities of the essential oil from Piper gaudichaudianum Kunth leaves.
Food and Chemical Toxicology, 2009.
22. Parmar V., Kirpal S., Phytochemistry Of The Genus Piper. Phytochemistry,
1996. 46.
23. Silva, R., Kato M., Antifungal amides from Piper arboreum and Piper
tuberculatum. ELSEVIER, 2001.
24. Avila M., Prieto J., Cuca L., Flavonoides con Actividad Antifungica Aislados
de Piper septuplinervium (Miq.) C. DC. (Piperaceae). Revista Colombiana
de Quimica, 2011. 40.
25. Posso R., Diaz A., Estudio qumico de Piper steerni. Revista Colombiana de
Qumica, 1994. 23.
26. Garcia A., Rene J., Determinacion de la composicion qumica y actividad
antioxidante in vitro del aceite esencial de Piper auritum kunth (Piperaceae)
difundida en la costa colombiana. Universidad Tecnologica de Pereira,
2007.
27. Boluda C, Lignanos (2): actividad farmacologica. Revista de Fitoterapia,
2005.
28. Mesa A., Cardona F., Actividad antiplasmodial y citotoxica de extractos
etanolicos de especies de gnero Piper. Boletin Latinoamericano y del
Caribe de Plantas Medicinales y Aromaticas, 2012.
29. Sung-Eun Lee, Fungicidal activity of pipernonaline, a peperidine alkaloid
deriver from long pepper, Piper longum L., against phytopathogenic fungi.
Cop Protection, 2000.
30. Park K., Larvicidal activity of isobutylamides identified in Piper nigrum fruits
against three mosquito species. Agricultural and food chemistry, 2002.
31. Aguirre J., Belmares R., Actividad antioxidante de algunas plantas
tropicales, subtropicales y semideserticas. Revista cientifica de la
Universidad Autonona de Coahuila, 2012.
32. Cardona G., Rojano B., Actividad leishmanicida y antioxidante de extractos
de Piper daniel-gonzalezzi Trel. (Piperaceae). Medigraphic.
60
33. Puertas M., Rojano B., Capacidad antioxidante in vitro de fracciones de
hojas de Piper peltatum L. Revista Cubana de Plantas Medicinales, 2009.
14.
34. Escobar E., Presentacion de Yotoco "Reserva Natural", ed. Universidad
Nacional de Caldas. Palmira. 2001, Palmira
35. Margaret B. Gargiullo, B.M., Larry Kimball, A Field Guide to Plans of Costa
Rica, ed. O.U. Press. 2008, New York.
36.
http://www.biovirtual.unal.edu.co/ICN/?controlador=ShowObject&acci
on=show&id=121834. [cited.
37. Galindo A., Analisis Fitoquimico Preliminar. Metodologia y su aplicacion en
la evaluacion de 40 plantas de la familia Compositae, ed. Universidad
Nacional de Colombia. 1983.
38. Bilbao, M., Analisis Fitoquimico Preliminar. Quimica de Productos
Naturales, ed. Universidad del Quindio. 1997, Armenia.
39. Molyneux, P., The use of the stable free radical diphenylpicryohydrazyl
(DPPH) for estimating antioxidant activity. Songklanakarin J. Sci. Technol,
2004.
40. Martirosyan, D., Functional Foods for Cardiovascular Diseases. 2005.
41. Gros E., Pomilio A., Introduccion al estudio de los productos naturales, ed.
S.g.d.l.o.d.l.E. Unidos. 1985, Washington D. C.
42. Gonzalez Y., Pea M., Taninos de diferentes especies vegetales en la
prevencion del fotoenvejecimiento. Revista Cubana de Investigaciones
Biomedicas, 2001. 20.
43. Hatano, Y., Katsumura Y., Charged Particle and Photon Interactions with
Matter, ed. C. Press. 2011, United States of America.
44. Beck, J., Kim J., Campbell B., Fungicidal Activities of Dihydroferulic Acid
Alkyl Ester Analogues. Journal of Natural Products, 2006. 70.
45. Xiaomin W., Pentadecyl ferulate, a potent antioxidant and antiproliferative
agent from the halophyte Salicornia herbacea. Elsevier, 2013. 141.
46. Dobhal M., Aidross M., Ferulic acid esters from Plumeria bicolor. Pergamon,
1999.
47. Maurya, D. Paul T., Antioxidant and prooxidant nature of hydroxycinnamic
acid derivatives ferulic and caffeic acids. Food and Chemical Toxicology,
2010. 48.
61