Aplikasi kalsium preharvest menghambat beberapa aktivitas enzim sel dinding-memodifikasi

dan dinding delay sel pembongkaran pada saat panen komersial 'Fuji Kiku-8 apel
Abel Ortiza, Jordi Graellb, Isabel Laraa, *
a Departament de QUIMICA, Unitat de Postcollita-XaRTA, Universitat de Lleida , Rovira
Roure 191, 25.198 Lleida, Spanyol b Postcollita, Pusat UDL-IRTA (XaRTA), Universitat de
Lleida, Rovira Roure 191, 25.198 Lleida, Spanyol
articleinfo
Pasal sejarah: Diterima 23 Februari 2011 Diterima 30 April 2011
Kata Kunci: Apel dinding sel Buah pelunakan enzim aktivitas preharvest semprotan kalsium
abstrak
Untuk meningkatkan kekencangan apel selama rantai pascapanen, pengetahuan rinci tentang
biokimia underly- ing terkait pematangan dinding sel pembongkaran, peristiwa yang sangat
kompleks, diperlukan. Apel pelunakan dilaporkan dimediasi oleh hilangnya kalsium dari
lamella tengah, dan sesuai aplikasi kalsium diharapkan untuk melestarikan buah ketegasan.
Dalam karya ini, semprotan pra-panen kalsium (7 aplikasi mingguan di 1,6%, w / v, 81-123
hari setelah mekar penuh) yang diterapkan untuk 'Fuji Kiku-8 apel, dengan tujuan memeriksa
memperlakukan efek ment pada sel metabolisme dinding selama on-pohon pematangan buah
dan pematangan. Diterapkan kalsium ditingkatkan adhesi sel-sel seperti yang ditunjukkan
oleh pelestarian yang lebih baik dari lamella tengah dan dengan isi yang lebih tinggi dari
pektin ionik terikat dalam buah diobati, yang mengarah ke tingkat buah ketegasan yang lebih
tinggi pada saat panen komersial. Matrix breakdown glycan juga tertunda dalam respon
terhadap pengobatan kalsium. Kalsium beragam aplikasi sebagian ditekan
pectinmethylesterase, pektat liase, -galactosidase, l-arabinofuranosidase dan kegiatan -
xylosidase, tanpa hubungan yang jelas dengan tingkat produksi etilen.
2011 Elsevier-undang.

menampilkan pola yang tidak meleleh,

INTRODUCING
Tekstur, bersama dengan rasa, merupakan
pendorong utama preferensi apel (Malus
domestica Borkh.) (Jaeger et al., 1998;
Harker et al., 2008). Keteguhan pada apel
dikaitkan dengan tekstur yang berair dan
renyah, sedangkan buah lembut dapat
menyebabkan makanan ringan, atribut
tekstur yang menyebabkan sensasi seperti
pati di mulut, umumnya dianggap tidak
enak. Selain itu, meskipun pelunakan
pelunak buah apel yang dipoles
buah yang lebih kencang lebih tahan
terhadap kerusakan fisik selama
penanganan dan penyimpanan yang lebih
lama, dan karenanya memiliki nilai
komersial lebih tinggi.
Pelunakan buah yang terkait dengan
pematangan umumnya terkait dengan
pelarutan lamella tengah dan dengan
perubahan komposisi, struktur dan
keterkaitan antara polisakarida dinding sel
(Brummell and Harpster, 2001; Vicente et
al., 2007; Goulao and Oliveira, 2008).
Tindakan sejumlah besar protein dinding
sel lokal bertanggung jawab atas
modifikasi ekstensif pada polimer ini,
menyebabkan pelarutan, depolimerisasi
dan penataan ulang yang pada akhirnya
mempengaruhi kekuatan dinding sel dan
menyebabkan pelunakan buah (Brummell,
2006; Vicente et al., 2007; Goulao and
Oliveira, 2008). Pengetahuan terperinci
tentang biokimia dari peristiwa yang dapat
dilakukan pematangan ini diperlukan
untuk meningkatkan keteguhan apel di
pasaran. Perbedaan besar telah dilaporkan
di antara spesies buah mengenai tingkat
dan regulasi enzim modifikasi pada
polisakarida dinding sel selama pelunakan
(reviewed in Goulao and Oliveira, 2008),
yang berarti bahwa proses ini harus
dipelajari secara khusus untuk setiap jenis
buah.
Meskipun pelunakan buah apel telah
menjadi subyek banyak penelitian
(reviewed in Johnston et al, 2002),
pemahaman faktor penyebab
kekencangannya masih buruk. Pelunakan
apel diketahui disertai dengan pelarut
pektin yang meningkat, dan dengan
menurunkan kandungan residu galaktosil
dan arabinosil (Knee, 1973). Pelunakan
Apple juga disarankan untuk dimediasi
oleh kehilangan kalsium dari lamella yang
kaya pektin, dan oleh karenanya apel yang
diolah dengan kalsium biasanya lebih
kencang dari kontrol yang tidak diobati
(reviewed in Johnston et al., 2002),
walaupun aplikasi kalsium pra-panen
tidak selalu menyebabkan ketegasan yang
lebih tinggi pada saat panen (Siddiqui dan
Bangerth, 1995). Sebuah karya baru-baru
ini (Goulao et al., 2007) telah
menunjukkan perubahan dalam satu set
aktivitas enzim pengubah dinding sel
selama pengembangan buah apel 'Mondial
Gala', namun tidak ada data mengenai
perubahan simultan dalam komposisi
dinding sel. Oleh karena itu, dalam
penelitian ini kami memeriksa pola
temporal perubahan komposisi dinding sel
dan aktivitas berbagai enzim terkait
selama pematangan pohon dan
pematangan 'buah apel Fuji Kiku-8.
Semprotan kalsium pra-panen juga
diterapkan dalam upaya untuk
mengevaluasi peran kalsium dalam
pelestarian struktur dinding sel dan
keteguhan buah.
MATERIAL METHODS
2.1. Bahan tanaman, pengolahan
kalsium dan analisis kualitas
Buah apel Fuji Kiku-8 (buah Malus
domestica Borkh), tumbuh pada pohon
berusia 7 tahun yang dicangkokkan pada
batang bawah M-9 EMLA di Stasiun
Percobaan IRTA di Mollerussa (NE
Spain), disemprotkan mingguan dengan
CaCl2 (1,6 %, w / v). Masa perawatannya
adalah 23 Juni-4 Agustus 2008, masing-
masing 81 dan 123 hari setelah mekar
penuh (dafb). Sampel buah yang tidak
seragam dan bebas cacat dari pohon yang
diobati dan tidak diobati kemudian dipetik
setiap minggu selama dua bulan (11
Agustus-22 Oktober), yang mencakup
kisaran dafb 130-202. Panen komersial
berlangsung pada 195 dafb.
Sampel diberi kode H1-H10, sesuai
dengan tanggal pengambilan berturut-
turut. Pada setiap tanggal sampling,
keteguhan (dinyatakan sebagai N) diukur
pada dua sisi berlawanan dari 15 buah,
menggunakan penetometer Effegi yang
dilengkapi dengan ujung cembung
diameter 11 mm. Kandungan padatan larut
(SSC) dan keasaman titrasi (TA) diukur
dengan jus yang ditekan dari keseluruhan
buah. SSC ditentukan dengan refraktori
genggam (Atago, Tokyo, Jepang), dan
hasilnya dinyatakan sebagai% sukrosa
dalam larutan yang setara. TA ditentukan
dengan memberi titrasi 10 ml jus dengan
NaOH 0,1 N sampai pH 8,1 dengan
menggunakan fenolftalein 1% (v / v);
Hasil diberikan sebagai asam g malat L-1.
Hidrolisis pati dinilai secara visual
menggunakan skala 1-10 EUROFRU (1,
pati penuh; 10, tanpa pati), setelah
mencelupkan bagian buah penampang
enam bagian pada larutan KI 0,6% (b / v)
I2 -1,5% (b / v) selama 30 detik.
Sampel dari jaringan daging juga diambil
(3 repli-cates 2 apel / tiruan) pada setiap
tanggal pemetik dari buah yang diobati
dan tidak diobati, dibekukan dalam
nitrogen cair, beku-kering, bubuk, dan
disimpan pada suhu -80 C sampai
pengolahan.
2.2. Penentuan kadar kalsium
Jaringan Lyophilised (1 g) dituang dalam
tungku redam pada suhu 500 C selama 2
jam. Abu dicerna sesudahnya dengan 4
mL HCl: air suling (1: 1, v / v) dan
dipanaskan pada suhu 70 C sampai
sampel dehy-dration lengkap. Bahan
kering kemudian disuspensikan kembali
dalam 2 mL HCl: air suling (1: 1, v / v)
selama 15 menit, disaring melalui
'Whatman 40 Ash-less', dan filtrat
diencerkan menjadi 50 mL dalam air
suling. Sampel kemudian dianalisis
dengan spektroskopi emisi plasma
induktif digabungkan (ICP-OES) dalam
spektrometer 'Horiba Jobin Yvon
ACTIVA', dan hasilnya dinyatakan
sebagai mg 100 gFW-1.
2.3. Ekstraksi, fraksinasi dan analisis
bahan dinding sel
Bahan dinding sel (CWM) diekstraksi
dalam rangkap tiga dari jaringan
lyophilised (3g) menurut Redgwell et al.
(1992). Sampel dihomogenisasi dalam 20
mL fenol: asam asetat: air (2: 1: 1, w / v /
v) (PAW) selama 20 menit. Setelah
sentrifugasi homogenat pada 4000 x g dan
4 C selama 45 menit, pelet
disuspensikan kembali dalam 10 mL air
dan disentrifugasi lagi.
The PAW dan supernatan pencuci air
digabung dan dialihkan secara intensif
(mol. Wto cut-off 7000) selama 2 hari
melawan air Milli-Q pada suhu 4 C.
Dialisat disentrifugasi pada 4000 x g dan
4 C selama 45 menit untuk sedimen
keluar dari endapan yang terbentuk
selama dialisis. Supernatan (selanjutnya,
fraksi yang larut dalam PAW; PAW)
dipulihkan, diliofilisasi dan ditimbang.
Hasil PAW dinyatakan sebagai% (w / w)
FW. Pelet yang diperoleh setelah ekstraksi
PAW dan pencucian air kemudian dicuci
dua kali dalam aseton, diperoleh dengan
penyaringan vakum melalui filter kertas
Whatman grade 4, diberi lyophilised dan
ditimbang untuk menentukan hasil CWM,
yang dinyatakan sebagai% (w / w) FW.
Untuk fraksi lebih lanjut, CWM (100 mg)
dari masing-masing ulangan diekstraksi
secara berurutan dengan air, 0,05 M
sikloheksana-trans-1,2-diamina tetra-
asetat (CDTA), 0,05 M Na2 CO3, dan 4
M KOH seperti yang dijelaskan
sebelumnya (Selvendran dan O'Neill,
1987), untuk mengurangi pektin yang
larut dalam air, pektin yang tidak terikat
secara kovalen, pektin terikat kovalen dan
matriks gliseptor (hemiselulosa).
Masing-masing fraksi disaring melalui
Miracloth, dialihkan secara intensif (mol
dimatikan 7000) selama 2 hari melawan
air Milli-Q pada suhu 4 C, diberi
lyophilised dan ditimbang. Hasil panen
dinyatakan sebagai% (w / w) CWM.

Fraksi yang mengandung CDTA dan

Na2CO3 adalah hidrolisis dengan asam
sulfat untuk analisis lebih lanjut.
Untuk hidrolisis, 1 mL 12 M H2SO4
ditambahkan ke 30-35 mg fraksi untuk
dianalisis. Setelah pra-hidrolisis selama 1
jam pada suhu 37 C, suspensi
diencerkan dengan 11 mL air suling dan
dipanaskan pada 100 C selama 2 jam.
Kandungan asam kimia dalam hidrolisat
diukur dengan metode m-hidroksidipenil
(Blumenkrantz dan Asboe-Hansen, 1973)
dengan menggunakan asam galakturonat
sebagai standar. Total gula netral
diperkirakan 490 nm dengan uji asam
fenol-sulfat (Dubois et al., 1956), dengan
galaktosa sebagai standarnya.