Rara variante del receptor scavenger BI eleva el colesterol HDL e

incrementa el riesgo de enfermedad coronaria

El receptor scavenger BI (SR-BI) es el receptor principal del colesterol de lipoprotenas de alta densidad (HDL-C). En humanos, altas cantidades
de HDL-C en el plasma son asociadas con un menor riesgo de enfermedad coronaria (CHD, coronary heart disease). Ratones a los que se les ha
depletado del gen Scarb1 (ratones SR-BI knockout) han presentado niveles marcadamente elevados de HDL-C, pero, paradjicamente, tambin
elevada ateroesclerosis. El impacto de SR-BI en el metabolismo del HDL y del riesgo CHD en humanos se mantiene an poco claro. A travs de
secuenciacin enfocada en las regiones codificantes de genes modificadores de lpidos en 328 individuos con niveles extremadamente elevados
de HDL-C plasmtico, hemos identificado un homocigoto para una variante sin funcin, en el cual una leucina reemplaza a la prolina 376 (P376L),
en SCARB1, el gen que codifica para SR-BI. La variante P376L imposibilita el procesamiento post-traduccional de SR-BI y anula la captacin
selectiva de colesterol HDL en clulas transfectadas, en clulas tipo hepatocitos derivadas de clulas madre pluripotentes inducidas del sujeto
homocigoto, y en ratones. Estudios basados en grandes poblaciones revelaron que sujetos que son portadores (carriers) homocigotos de la
variante P376L poseen niveles significativamente elevados del HDL-C plasmtico. Los portadores de P376L presentan un profundo fenotipo
relacionado con el HDL y un elevado riesgo de presentar CHD (odds ratio (razn de probabilidades) = 1.79, lo cual es estadsticamente
significativo).

La potente asociacin inversa entre la
cantidad presente de colesterol de
lipoprotenas de alta densidad (HDL-C)
y el riesgo de enfermedad coronaria
(CHD, coronary heart disease) ha
generado inters en una potencial
relacin de causalidad entre el
metabolismo del HDL y la CHD. Sin
embargo, ensayos clnicos con drogas
que elevan los niveles de HDL-C, con
niacina, y con inhibidores de la
protena de transferencia de steres
de colesterol (CETP, cholesteryl ester
transfer protein) han tenido resultados
decepcionantes (1). Adems, estudios
recientes de variantes genticas
humanas asociadas con los niveles de
HDL-C han fallado intentando
demostrar una asociacin entre stas y
la CHD (2,3). La ms notable, una
variante que provocaba prdida de
funcin de LIPG, un gen que codifica
para una lipasa endotelial que, en su
estado heterocigoto, eleva el HDL-C en
~5 mg/dL, mostr no tener asociacin
con la CHD (4). A pesar de que estos
estudios previos sugieren que mayores
niveles de HDL-C podran no ser
causalmente protectores ante la CHD,
hemos razonado que anlisis genticos
humanos adicionales podran proveer
una profundizacin mecanstica de la
compleja relacin entre el HDL y la
CHD.
Hace dos dcadas atrs se Identificacin del homocigoto de
descubri que el receptor scavenger SCARB1 P376L y su asociacin con
clase B I (SR-BI), codificado por el gen un HDL-C extremadamente alto
SCARB1, era un receptor de HDL (5).
SR-BI promueve la captacin selectiva
Nosotros tuvimos la hiptesis de que
de steres de colesterol HDL (HDL-CEs)
humanos con niveles extremadamente
hacia adentro de las clulas,
altos de HDL-C podran albergar
particularmente en hepatocitos y en
variantes de prdida de funcin en
clulas esteroidognicas (5,6). En
SCARB1 y por ello desarrollamos un
ratones, la sobreexpresin de SR-BI en
experimento de resecuenciacin
el hgado reduce los niveles de HDL-C
enfocada en 328 participantes con un
(7-10), y la delecin gentica de SR-BI
HDL-C muy alto (mayor al percentil 95,
resulta en niveles elevados de HDL-C
o sea, a un HDL-C de 106.8 mg/dL), y
(11-13). De forma remarcable, estas
en un grupo control de 398 sujetos con
manipulaciones genticas en ratones
un bajo HDL-C (menor al percentil 25,
provocan efectos en la ateroesclerosis
o sea, a un HDL-C de 30.4 mg/dL). En
opuestos a lo predicho en datos
esta cohorte, nosotros secuenciamos
epidemiolgicos en humanos: La
los exones de ~990 genes localizados
sobreexpresin reduce la
hasta a 300 kb (kilobases) de cada uno
ateroesclerosis, a pesar de que se
de los 95 loci con asociaciones
estn reduciendo los niveles de HDL-C
significativas (P < 5 x 10-8) con respecto
(14-16), mientras que la delecin del
a los niveles plasmticos de lpidos
gen incrementa la ateroesclerosis a
identificados por el Global Lipids
pesar de que se aumente con ello los
Genetics Consortium al ao 2010 (22).
niveles de HDL-C (17-20). Una
Entre los sujetos con alto HDL-C,
potencial explicacin se relaciona con
identificamos un homocigoto P376L
el flujo de colesterol desde los
para SCARB1 (g.125284671 G>A,
macrfagos a travs de la va reversa
c.1127 C>T, p.P376L, rs74830677) en
de transporte de colesterol (RCT,
una mujer de 67 aos con un HDL-C de
reverse cholesterol transport); la
152 mg/dL, y confirmamos esto
sobreexpresin de SR-BI incrementa la
mediante secuenciacin Sanger. Este
RCT en macrfagos, y el knockout de
sujeto no albergaba mutaciones en
SR-BI reduce la RCT en macrfagos
otros genes asociados con un alto
(21). La relevancia de estas
HDL-C, como CETP y LIPG. En adicin a
observaciones en humanos se
este homocigoto, cuatro
mantiene incierta.
heterocigotos P376L fueron
identificados mediante secuenciacin
enfocada en el grupo de alto HDL-C; no
se encontraron heterocigotos en el
grupo de bajo HDL-C (P = 0.008, test de
exactitud de Fisher).
Para identificar portadores
(carriers) adicionales de P376L,
nosotros genotipamos una cohorte
expandida de sujetos de HDL-C muy
alto versus sujetos de HDL-C bajo.
Dentro de 524 sujetos adicionales con
un muy alto HDL-C (HDL-C promedio
de 95.0 mg/dL), identificamos a 11
heterocigotos para P376L; mientras
que dentro de 758 sujetos con bajo
HDL-C (HDL promedio de 33.5 mg/dL),
identificamos a 3 heterocigotos. En
total, nuestra secuenciacin y
genotipado combinados para el
descubrimiento de la variante P376L
mostr que esta variante est
sobrerrepresentada de manera
significativa en sujetos con un HDL-C
[frecuencia del alelo menos comn
(MAF) = 0.010 en alto HDL-C versus
0.0013 en controles de bajo HDL-C, P =
0.000126, test de exactitud de Fisher,
Tabla 1].
Como esta variante est presente
en la coleccin de lo que es el exoma,
expandimos nuestro anlisis a los
datos de la coleccin de exoma del
Global Lipid Genetics Consortium
hechos en >300000 individuos. La
variante P376L fue muy rara en esta
poblacin (MAF de ~0.0003). sta se
encontr significativamente asociada
con altos niveles de HDL-C con una
magnitud de efecto relativamente
grande (beta = 8.4 mg/dL; P = 1.4 x
10-15). Notorio destacar, esta variante
no estuvo asociada a los niveles
plasmticos vistos en estos pacientes
de colesterol de lipoprotenas de baja
densidad (LDL-C) y de triglicridos
(TGs) (Tabla S1). As, podemos
concluir que el SCARB1 P376L se
encuentra asociado especficamente
con niveles elevados de HDL-C.
Fenotipos relacionados a HDL de veces en el nmero de partculas
los homocigotos y heterocigotos grandes de tipo HDL-2b en
P376L de SCARB1 comparacin a los controles no
portadores (Fig. 1D). Hubo ms apoA-I
(Fig. 1E y fig. S2) y apoC-III (Fig. 1F) en
Posteriormente reclutamos al
las partculas HDL grandes en el
homocigoto P376L, a ocho portadores
portador homocigoto y en los
heterocigotos, y a no portadores de
heterocigotos. La capacidad de eflujo
alto HDL-C y normal HDL-C control
de colesterol fue similar en los
para realizar un fenotipado ms
portadores y en los controles (Fig. 1G).
profundo del metabolismo del HDL y
En contraste al fenotipo infrtil de los
caractersticas relacionadas. Todos los
ratones Scarb1-deficientes hembra
participantes P376L del estudio fueron
(18), el homocigoto P376L tena dos
de ascendencia europea, casi
hijos saludables y no report
exclusivamente descendientes de
problemas de infertilidad. Tampoco
judos Ashkenazi. Las caractersticas
observamos los fenotipos
clnicas y perfiles lipdicos de los
esteroidognicos o plaquetarios
sujetos estn detallados en la Tabla 2.
reportados en ratones Scarb1-
Mediante anlisis por cromatografa
deficientes (vase material
lquida rpida de protenas (FPLC) de
suplementario).
lipoprotenas plasmticas se confirm
el incremento en grandes partculas de
SCARB1 P376L resulta en una
HDL en el homocigoto (Fig. 1A). Los
completa prdida de funcin de
niveles de colesterol y de
SR-BI
apolipoprotena A-I (apoA-I) en el HDL
se hallaron significativamente
elevados en el homocigoto y en los En vista del profundo fenotipo de HDL
heterocigotos en comparacin a los de los portadores de P376L, nos
controles, pero los niveles de apoA-II enfocamos en comprender el impacto
en el HDL no se vieron elevados (Tabla de la variante en la funcin de SR-BI.
2 y Fig. 1B). No hubo diferencias entre Generamos clulas madre
los portadores de P376L y los controles pluripotentes inducidas (iPSCs)
en la cantidad absoluta de colesterol utilizando clulas mononucleares de la
libre de HDL o en la proporcin de sangre perifrica proveniente del
colesterol libre y esterificado en su homocigoto P376L y de un control no
HDL (Fig. 1C). Los heterocigotos P376L portador. Luego diferenciamos estas
presentaron un incremento de 2.8 clulas a clulas tipo hepatocitos (HLC-
veces y el homocigoto uno de 6.1 hepatocyte-like cells) para estudiar el
Tabla 1. Asociacin de SCARB1 P376L con HDL-C en cohortes de alto HDL-C versus bajo LDL-C. Portadores de la variante
P376L fueron examinados desde el Penn High HDL Study a travs de dos enfoques, secuenciacin enfocada del gen
SCARB1 en un total de 726 sujetos (328 de alto HDL-C y 398 de bajo HDL-C) y genotipado dentro de la coleccin de exoma
(Illumina) en 1282 sujetos adicionales (524 de alto HDL-C y 758 de bajo HDL-C). La asociacin de la variante P376L con la
cohorte de alto HDL-C desde ambos enfoques por s solos y en combinacin fue evaluada mediante test de exactitud de
Fisher. N, nmero de participantes; NonC, no portadores; Het, heterocigotos; Hom, homocigotos.
Alto HDL-C (>percentil 95) Bajo HDL-C (<percentil 25)
Cohorte de Asociacin
(N) (N)
descubrimiento (P)
Total NonC Het Hom Total NonC Het Hom
Secuenciacin
enfocada de 328 323 4 1 398 398 0 0 0.008398
SCARB1
Genotipado del
524 513 11 0 758 755 3 0 0.005296
exoma
Combinados 852 836 15 1 1156 1153 3 0 0.000127
Fig. 1. Composicin y funcionalidad de HDL en un SCARB1 P376L homocigoto, en carriers heterocigotos, y en controles. (A) Fraccionamiento por FPLC de lipoprotenas
plasmticas del sujeto P376L homocigoto (rojo) y de un control de HDL-C normal. (B) Contenido de colesterol, apoA-I, y apoA-II en el HDL total. (C) Colesterol libre (FC) y colesterol
esterificado (CE) en el HDL total (izquierda) y proporcin FC/CE en el HDL total (derecha). (D) Concentraciones de las subclases de HDL tras separacin por ultracentrifugacin
por gradiente de densidad. (E) Contenido de ApoA-I en las respectivas subclases de HDL. (F) Contenido de ApoC-III en las respectivas subclases de HDL. (G) Capacidad de eflujo
de colesterol desde macrfagos de la lnea celular THP-1. Todos los datos se reportan como promedio SD (desviacin estndar).

Tabla 2. Caractersticas de los portadores de SCARB1 P376L y controles reclutados para el fenotipado profundo. Caractersticas demogrficas, el perfil lipdico y las
caractersticas de sus apolipoprotenas de un homocigoto P376L, ocho heterocigotos, y controles no portadores de sujetos identificados de la secuenciacin o del genotipado
desde la cohorte del Penn High HDL Study para fenotipado profundo. Las mediciones lipdicas desde el plasma se realizaron utilizando un autoanalizador. En donde fuese
aplicable, los datos corresponden al promedio SD. Los nmeros corresponden a los grupos para comparacin. Grupo 1, controles de HDL-C normal; grupo 2, controles de HDL-
C alto; grupo 3, heterocigotos SCARB1 P376L. Testeos: ANOVA o chi-cuadrado. Grupos: Comparacin entre grupos por nmero mediante comparacin mltiple de Tukey.
*Significativo a un P < 0.05. **Significativo a un P < 0.05 por chi-cuadrado, pero no por ANOVA. El guin representa ausencia de comparacin significativa. BMI, ndice de masa
corporal; PTA, mtodo de precipitacin con fosfotungstato; VLDL, lipoprotena de muy baja densidad; Lp(a), lipoprotena a.

Grupo Significancia
Medicin
1 2 3 P376L Hom Testeada Por grupos
Nmero de
11 10 8 1 -
sujetos
Edad (aos) 61.6 (9.7) 64.2 (12.5) 67.5 (15.3) 65 n.s. -
Sexo (M/F) 6/5 5/5 6/2 0/1 n.s.** -
BMI (kg/m2) 26.4 (2) 22.9 (1.3) 25.6 (3.9) 21 * 1/2
TC (mg/dL) 185.8 (22.3) 215.8 (29.9) 228 (33.2) 280 * 1/3
Glucosa (mg/dL) 93.5 (2.9) 91.6 (7.0) 98.8 (5.3) 86 n.s. -
LDL-C (mg/dL) 109.1 (17.3) 97.4 (21.6) 116.6 (27.1) 109 n.s. -
HDL-C (PTA)
51 (11.4) 110.1 (19.8) 86.9 (19.9) 152 * 1/2, 1/3, 2/3
(mg/dL)
TG (mg/dL) 121.2 (35) 71.5 (32.3) 99.5 (23.7) 57 * 1/2
Alcohol >1/da
4 4 2 0 n.s.** -
(n)
VLDL-C (mg/dL) 26.9 (8.8) 19 (6.2) 23.1 (9.2) 13 n.s. -
Lp(a) (mg/dL) 22.3 (18.8) 19 (22.7) 15.9 (21.2) 17 n.s. -
apoA-I (mg/dL) 172.2 (33.3) 241.7 (41.2) 229.6 (36.1) 327 * 1/2, 1/3
apoA-II (mg/dL) 40.5 (7) 49.5 (11.5) 46.6 (5.5) 45 n.s. -
apoB (mg/dL) 99.7 (13.4) 82.8 (17.1) 95.9 (18.2) 92 n.s. -
apoC-II (mg/dL) 4.32 (1.55) 6.09 (2.69) 4.49 (2.17) 5.3 n.s. -
apoC-III (mg/dL) 11.4 (4.3) 15.5 (6.9) 13.7 (2.7) 16.1 n.s. -
apoE (mg/dL) 4.52 (0.89) 6.03 (1.86) 4.94 (1.12) 6.4 * 1/2
metabolismo de HDL en la
configuracin de la expresin
endgena de SCARB1 intracelular. Las
HLCs diferenciadas a travs de este
protocolo recapitularon el fenotipo de
hepatocitos cultivados, como en la
secrecin de albmina y de VLDL
(lipoprotena de muy baja densidad)
(23-26). Las lneas celulares
provenientes del donante control y del
sujeto homocigoto P376L
demostraron la expresin de genes
especficos de hepatocitos, como el
gen ALB (albmina) y AFP (alfa-
fetoprotena) y exhibieron una
expresin comparable del gen SCARB1
(fig. S3). En comparacin con las lneas
de hepatocitos iPSC del control,
aquellas del homocigoto P376L
demostraron una profunda reduccin
en la captacin selectiva de colesterol
desde el HDL in vitro (Fig. 2A). Se
observaron resultados similares en
experimentos con clulas COS7
transfectadas con plsmidos
expresando a SCARB1 wild-type (WT) o
su variante P376L (fig. S3, A y B), junto
a una defectuosa unin al HDL in vitro
a 4C (fig. S4, C y D).
Para evaluar el impacto fisiolgico
de la variante P376L en los niveles de
HDL-C y en el catabolismo in vivo,
utilizamos vectores de virus adeno-
asociados (AAV) para dirigir la
sobreexpresin heptica del SR-BI WT
o de su variante P376L en ratones
depletados de Scarb1 [ratones Scarb1
knockout (KO)]. Los dos grupos de
ratones demostraron niveles similares
de expresin heptica del mRNA de
Scarb1 (fig. S5A) y de la protena SR-BI
(fig. S5B). Ratones expresando la
Scarb1 WT demostraron una robusta
reduccin del 73% en la HDL-C. En
contraste, ratones expresando la
variante P376L no presentaron
reduccin alguna de la HDL-C; sus
niveles de HDL-C fueron comparables a
los de ratones control inyectados con
AAV-null (Fig. 2B). A pesar de que el
clearance de la protena HDL marcada
con I125 no tuvo diferencias entre los
tres grupos, el clearance de
[3H]HDL-CE fue mucho ms lento en
ratones expresando la variante P376L
en comparacin a aquellos expresando
SR-BI WT y fue comparable a la de los
ratones control (Fig. 2, C y D). El
clearance selectivo de HDL-CE desde el
plasma fue aumentado por el SR-BI WT
pero fue indetectable en ratones
expresando P376L (Fig. 2E y fig. S5C),
al igual que la captacin heptica de
[3H]CE a las 24 horas (fig. S5D). Esto
indica que la variante de secuencia
P376L resulta en una completa prdida
de la funcin cannica de la SR-BI
esencialmente, la captacin selectiva
de HDL-CE.
Imaginamos que la marcadamente
reducida captacin de HDL-CR podra
ser producto de un procesamiento
aberrante de la protena SR-BI P376L,
lo cual conducira a una incorrecta
localizacin en la superficie celular.
Para probar esto, aislamos protenas
de la superficie celular de clulas COS7
transfectadas con SR-BI WT y P376L
utilizando biotinilacin y encontramos
una marcadamente reducida
presencia de SR-BI en la superficie
celular en lisados de clulas
transfectadas con P376L tras ensayos
de captura con estreptavidina (fig.
S4E). En vista de que SR-BI
experimenta una N-glicosilacin en el
retculo endoplsmico concomitante a
un correcto plegado, nuestra hipotsis
fue que una alterada modificacin
posttraduccional podra ser la causa de
su reducida localizacin en la
superficie celular (27-29). Medimos los
pesos moleculares de las formas de
SR-BI luego de un tratamiento de los
lisados de las COS7 transfectadas y de
las HLC derivadas de iPSC con
endoglicosidasa-H (Endo-H), en
conjunto a lisados de hgado de ratn
expresando SR-BI WT o mutante (Fig.
2, F y G). Formas de mayor peso
molecular representan formas N-
glicosiladas resistentes a Endo-H y
parcialmente sensibles en la superficie
celular tras modificacin por la alfa-
manosidasa II en el aparato de Golgi
(28). En las HCLs diferenciadas
derivadas de iPSC del homocigoto
P376L (Fig. 2F), encontramos una
cantidad mucho menor de SR-BI
celular total en las lneas celulares
mutantes en comparacin a la
cantidad en las clulas WT, a pesar de
una comparable expresin del gen
SCARB1 (fig. S3C). Luego del
tratamiento con Endo-H, la SR-BI
predominante en los lisados celulares
y de hgado de SCARB1 WT de manera
transversal a los modelos fue la forma
parcialmente sensible, junto a
cantidades pequeas de la forma
totalmente resistente. En contraste, la
SR-BI presente en lisados de clulas y
de tejidos de los grupos expresando
P376L fue en absoluto la forma
inmadura, totalmente sensible a Endo-
H (Fig. 2, F y G, y fig. S4F). En conjunto,
estos datos son consistentes con un
modelo en el cual la variante de
secuencia P376L altera la N-
glicosilacin post-traduccional de
SR-BI para prevenir ya sea su trnsito
desde el ER a Golgi o posteriores
modificaciones post-traduccionales en
el Golgi, lo cual resulta de manera final
en una reducida expresin en la
superficie celular.
SCARB1 P376L est asociado con
un aumentado riesgo de CHD en
humanos
A pesar de que se produzca un potente
incremento en la HDL-C, la deficiencia
de SR-BI en ratones provoca
ateroesclerosis acelerada (17-20). La
relacin entre la reducida funcin de
SR-BI y la enfermedad cardiovascular
ateroesclertica no ha sido establecida
en humanos. El sujeto P376L no
presentaba CHD clnica, pero su grosor
ntima-media carotdeo (cIMT) era de
0.789 mm (promedio entre izquierda y
derecha), lo cual se ubica sobre el
percentil 75 para las mujeres de su
edad; en adicin a esto, ella
presentaba placas detectables a travs
de su arteria cartida interna izquierda
y en la bifurcacin de su arteria
cartida interna derecha. Las
mediciones de su cIMT en los P376L
heterocigticos no fueron
significativamente diferentes en
 comparacin a ambos grupos de
control (fig. S8), pero producto del
pequeo tamao de muestra, el poder
estadstico es limitado.
Para alcanzar un mayor poder
estadstico que permita responder
esta pregunta, desarrollamos un
metaanlisis de amplios estudios de
genotipado de exomas de casos con
CHD y controles saludables para
determinar la relacin de la variante
P376L con el riesgo de CHD (Tabla 3).
Dentro de 16 sets de muestras
provenientes de dos consorcios [el
CARDIoGRAM Exome Consortium y el SCARB1 poseen niveles
CHD Exome+ Consortium], nosotros significativamente elevados de HDL-C
evaluamos la asociacin entre ser y un significativamente aumentado
portador de P376L y tener CHD en riesgo de tener CHD
137995 individuos. A travs de 49846
casos de CHD y 88149 controles de Discusin
CHD, encontramos que los portadores
de P376L presentan un riesgo Estudios en ratones han provisto de
significativamente mayor de contraer importantes observaciones sobre los
CHD en comparacin con no efectos del SR-BI en el metabolismo
portadores [odds ratio para la del HDL, en el RCT, y en la
enfermedad dentro de los portadores ateroesclerosis. Estos estudios
= 1.79; P = 0.018] (Tabla 3). As, los revelaron que la sobreexpresin de SR-
portadores de esta variante P376L de BI reduce la HDL-C (7-10) y reduce la

Fig. 2. SCARB1 P376L es una variante null in vitro e in vivo. (A) Captacin de [3H]Colesterol ter (CEt) (izquierda) y captacin selectiva de colesterol desde las HDL (derecha)
en HLCs derivadas de iPSC del homocigoto P376L versus un control no portador. Las clulas fueron incubadas con [3H]CEt y con HDL humana doblemente marcada con
tiramina celobiosa (TC) marcada con 125I. Todos los valores fueron normalizados a la expresin relativa del gen ALB en cada lnea celular. Todos los datos representan valores
promedios para los pozos de cada lnea celular respectiva SD. (B) Niveles de colesterol HDL plasmtico antes y luego de 12 das tras la administracin del AAV a ratones
Scarb1 KO. (C) Clearance de [3H]Colesterol ter (CEt) (izquierda) y radio catablico fraccional (derecha) desde el plasma de ratones Scarb1 KO inyectados con AAVs null o
SR-BI tras la administracin de [3H]CE/HDL humana doblemente marcada con TC marcada con 125I. (D) Clearance de TC marcada con 125I (izquierda) y radio catablico
fraccional (derecha) desde el plasma tras la administracin de HDL doblemente marcado. (E) Captacin selectiva de colesterol en ratones expresando null, SR-BI WT, o
P376L medido mediante las diferencias relativas entre las tasas catablicas fraccionales de elementos marcados con 3H y 125I. (F) Sensibilidad a Endo-H en HLCs derivadas
de iPSC homocigotas P376L versus no portadoras. Lisados celulares de cada genotipo fueron tratados con Endo-H para remover complejos glicanos N-enlazados desde las
formas maduras de la protena y luego se les realiz inmunoblot para la SR-BI. Los pesos moleculares de las diferentes formas de SR-BI tras el tratamiento con Endo-H se
indican en la izquierda. (G) Sensibilidad a Endo-H de la SR-BI de lisados hepticos de ratones expresando AAVs null, SR-BI WT, o SR-BI P376L. Los lisados fueron tratados con
Endo-H, seguido de un inmunoblot para SR-BI. Los pesos moleculares de las diferentes formas de SR-BI tras el tratamiento con Endo-H se indican a la izquierda. (A) Valores
promedio para los pozos de las respectivas lneas celulares SD; [(B) hasta (E)] promedios SD para cada uno de los tres grupos. *P < 0.05; **P < 0.01, ***P < 0.001 segn
anlisis de varianza (ANOVA) [(B) y (C)]; clearance plasmtico, test t no pareado (E).
 ateroesclerosis (14-16), mientras que
la delecin gnica de SR-BI incrementa
la HDL-C y acelera la ateroesclerosis
(17-20). La importancia clnica de estos
descubrimientos se ha mantenido
incierta, sin embargo. Estudios de
inyeccin de HDL-CE marcadas en
humanos sugieren que la mayora del
HDL-CE es transportado hacia el
hgado va un intercambio mediado
por CETP a lipoprotenas conteniendo
apoB ms que una captacin directa
desde el HDL por el hgado (30), lo cual
nos lleva a preguntarnos la
importancia de la SR-BI heptica en la
fisiologa humana. Se ha encontrado
que variantes genticas cercanas al
locus SCARB1 estaban
significativamente asociadas con
niveles plasmticos elevados de
HDL-C, lo cual sugiere que SR-BI podra
jugar un rol en el metabolismo del HDL
en humanos (22,31). Se haba
reportado una familia con una rara
variante de SCARB1 en la cual serina
reemplaza a la prolina 297 (P297S), en
la que los portadores heterocigotos de
la variante presentaban niveles
modestamente elevados de HDL-C
(31). Sin embargo, la variante
mantena la mayora de la actividad
SR-BI, no se identificaron
homocigotos, el efecto aparente en la
HDL-C era modesto, y el poder
estadstico para juzgar sus efectos en
la aterosclerosis era insuficiente.
A travs de la secuenciacin de
sujetos con niveles plasmticos
extremadamente altos de HDL-C,
identificamos a un homocigoto para la
variante P376L de SR-BI. Nuestros
enfoques complementarios
demostraron consistentemente que
esta variante virtualmente confiere
una completa prdida de la funcin de
SR-BI. Nuestros resultados
demuestran muchas similitudes en las
consecuencias de la deficiencia de
SR-BI en ratones y en humanos,
incluyendo una tendencia hacia
partculas de HDL largas y un
incremento significativo en la apoA-I,
pero no en apoA-II, en el plasma y en
el HDL (12,32,33). El homocigoto era
una mujer que tena dos hijos sanos,
sin problemas de fertilidad o
complicaciones asociadas, lo cual
sugiere que, en humanos, la
deficiencia de SR-BI no afecta a la
funcin reproductiva de la misma
manera que lo hace en ratones (18,
34). En ratones, la captacin de CE
mediada por SR-BI desde la HDL es un
proceso crtico que conlleva a la
sntesis de hormonas esteroidales en
tejidos adrenales y gonadales, y una

Tabla 3. Meta-anlisis de la asociacin de la variante P376L de SCARB1 con la CHD. Casos de CHD y controles saludables a travs del CARDIoGRAM Exome Consortium y del
CHD Exome+ Consortium fueron genotipados para la variante P376L de SCARB1 mediante utilizacin de la coleccin de exomas. BioVU, Vanderbilt, University Medical Center
Biorepository; BH, British Heart Foundation; GoDARTS-CAD, Genetics of Diabetes and Audit Research Tayside Study; MHI, Montreal Heart Institute; North Geman, German North
Coronary Artery Disease Study; Ottawa, Ottawa Heart Study; PAS, Premature Atherosclerosis StudyAcademic Medical CenterAmsterdam; Penn, University of Pennsylvania
CHD Cohort; South German, German South Coronary Artery Disease Study; WHI-EA, Womens Health InitiativeEuropean American Cohort; CCHS, Copenhagen Heart Study;
CIHDS/CGPS, Copenhaguen Ischemic Heart Disease Study/Copenhagen General Population Study; EPIC-CVD, European Prospective Investigation into Cancer and Nutrition
Cardiovascular Disease Study; MORGAM, MOnica Risk, Genetics, Archiving and Monograph Project; PROSPER, Prospective Study of Pravastatin in the Elderly at Risk Study;
WOSCOPS, West of Scotland Coronary Prevention Study. La asociacin de la variante P376L con casos de CHD fue determinada utilizando un meta-anlisis de efectos fijos de
Mantel-Haenszel; los resultados dieron un odds ratio = 1.79; P = 0.018.

Consorcio o Portadores de P376L Total Frecuencia

cohorte de Casos Controles Casos de CHD Controles Casos Controles
estudio
CARDIoGRAM Exome Consortium
BioVU 6 10 4587 16546 0.0013 0.0006
BHF 6 10 2833 5912 0.0004 0
GoDARTS-CAD 1 0 1568 2772 0.0006 0
MHI 0 4 2483 8085 0 0.0005
North German 0 1 4464 2886 0 0.0004
Ottawa 0 1 1024 2267 0 0.0004
PAS 1 1 728 808 0.0014 0.0012
Penn 3 0 683 156 0.0044 0
South German 4 0 5255 2921 0.0008 0
WHI-EA 8 29 2860 14929 0.0028 0.0019
CHD Exome+ Consortium
CCHS 1 1 2020 6087 0.0003 0.0001
CIHDS/CGPS 4 3 8079 10367 0.0003 0.0001
EPIC-CVD 4 2 9810 10970 0.0002 0.0001
MORGAM 0 0 2153 2118 0 0
PROSPER 1 0 640 638 0.0008 0
WOSCOPS 0 0 659 687 0 0

Total 34 52 49486 88149 0.00068 0.00059

deficiencia de SR-BI altera el contenido
adrenal de colesterol, afecta la
respuesta glucocorticoide adrenal
ante el estrs, y puede llevar a
hipoglicemia inducida por el ayuno (6,
35, 36). No observamos mayores
diferencias en la glucosa en ayunas, el
cortisol srico, en la hormona
adrenocorticotrpica, o en las
hormonas gonadales femeninas en los
sujetos P376L heterocigotos versus los
controles, y observamos slo un
modesto incremento en la
testosterona en los heterocigotos
P376L machos en comparacin a los no
portadores. Nosotros postulamos que
la diferencias en la expresin o en la
capacidad de up-regulation de
receptores de lipoprotenas
conteniendo apoB relacionados a
SR-BI entre los modelos de ratn y en
humanos en tejidos esteroidognicos
podra dar cuenta, al menos
parcialmente, de la falta de
recapitulacin de algunos de los
fenotipos de deficiencia de SR-BI en
ratones. Tampoco observamos
diferencias en los niveles de plaquetas,
el contenido de colesterol, o en su
activacin en los portadores de P376L,
a pesar de haber reportes de
trombocitopenia y de alterada
actividad plaquetaria en ratones
Scarb1 KO (31). Estos resultados
sugieren una contribucin
relativamente diferente de SR-BI a la
funcin plaquetaria entre los ratones y
los humanos. Ntese que los fenotipos
del SCARB1 P376L homocigoto
(elevada HDL-C y partculas grandes de
HDL pero esteroidognesis
relativamente normal, viabilidad
reproductiva, y funcin plaquetaria)
son comparables a aquellos
observados en ratones deficientes del
dominio contenedor de PDZ 1 (PDZK1),
una protena adaptadora para SR-BI
(37).
Probablemente el descubrimiento
ms importante de nuestro estudio
sea que, a pesar de la elevacin en la
HDL-C, los portadores de P376L
exhiben un riesgo aumentado de CHD,
al igual que los ratones Scarb1 KO.
Nuestros resultados son consistentes
con un creciente tpico de discusin
en la biologa de la HDL de que las
concentraciones en estado
estacionario de HDL-C no son
causalmente protectoras ante la CHD,
y que la funcin de la HDL y el flujo de
colesterol podran ser ms
importantes que sus niveles absolutos.
Utilizando un ensayo in vivo de RCT en
macrfagos, hemos mostrado
previamente que ratones Scarb1 KO
poseen daada su RCT de macrfagos,
incluso a pesar de tener niveles
elevados de HDL-C (21). Nuestros
resultados sugieren que la reducida
funcin heptica de SR-BI en humanos
afecta a la RCT, lo cual lleva a un
incremento en el riesgo de CHD a pesar
de estar elevados los niveles de HDL-C.
No obstante, la SR-BI tambin est
expresada en tipos celulares
vasculares, incluyendo clulas
endoteliales, clulas del msculo liso
vascular, y macrfagos, en donde
podra tener tambin un efecto
protector ante la aterosclerosis
(38,39). Nuestros resultados tambin
son consistentes con el concepto
previamente sugerido (39) de que la
up-regulation o la optimizacin de la
SR-BI podra ser un nuevo enfoque
teraputico para reducir el riesgo de
CHD en la poblacin general.
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