Bacteriologa

Seminario 4

Bacterias Gram
negativas Parte 2
Microbiologa1
IICtedra
FacultaddeMedicina(UBA)
Objetivos

1. Respecto a H. pylori: Importancia como agente colonizador de

mucosa gstrica, caracterizar patogenia y su nicho ecolgico
Mencionar metodologa diagnstica

2. Gnero Brucella: Importancia de transmisin zoontica, asociar

especie con animal transmisor, caracterizar factores de
patogenicidad

3. Haemophilus y Neisseria: Ejemplos de especies capsuladas.

Importancia de vacunacin

4. Identificar factores de virulencia de B. pertusis. Importancia de

vacunacin

5. Destacar a B. fragilis como microorganismo anaerobio y formar

parte de la biota normal
Helycobacter spp
Helycobacter
Bacilogramnegativo
Espiralados
Mvil(flagelopolar)
Microaeroflico
ProducengrancantidaddeUREASA(permitesobreviviralos
cidosgstricos)
Catalasapositivos
Oxidasapositivos
Nofermentancarbohidratos
EllpidoA(LPS)muestraunabajaactividadendotxica.
Hay3especies:
Helicobacteriasgstricas(gastritis)
H.pylori
H.cinaedi Helicobacteriasentricas(gastroenteritis)
H.fennelliae
Agenteetiolgicodegastritis,
ulcerasppticas,adenocarcinoma
gstricoylinfomasBdeltejido
asociadoalamucosagstrica
(MALT)

Elserhumanoeselprincipalreservorio
deH.pylori.

Transmisinfecal-oral.
H. pylori:
UnavezadquiridaH.pylori,lainfeccinsehacecrnicay
persistedeporvidasinohaytratamiento.

Factoresdevirulencia:
Ureasa(NH3aumentaelphneutralizandolaacidez)
Atravesarlacapademocogstricomedianteelmovimiento
activodelflagelo.
Adherencia (hemaglutinina, adhesinas, Ag. Sanguneos de
Lewis)
Citotoxina vacuolizante A (VacA): protena que al ser
endocitada por las clulas epiteliales causa lesiones
mediantelaformacindevacuolas.
ProtenaCagA:citotoxinaqueinterfiereenlaestructuradel
citoesqueletodelaclulahusped.
 Labacteriaingresaalaluzgstrica.Laureasalepermite
sobrevivirenelambienteacidoporlaproduccindeNH3que
loneutraliza.
Losflageloslepermitenalabacteriaatravesarlacapademoco
yadherirsealasclulasepiteliales(adhesinas)
LuegolaH.pyloriliberalaprotenaCagAylaVacA.Estaultima
inducelaformacindegrandesvacuolasenlasclulas.

Ademssereclutanneutrfilosquecausandaotisularporla
produccindeIROs.
Manifestaciones clnicas:
Gastritis: inflamacin de la mucosa gstrica (infiltracin de
neutrfilosyclulasmononucleares)
Fase aguda: sensacin de plenitud, nauseas, vmitos e hipoclorhidria
(menorproduccindeacidoenelestomago)
Gastritiscrnica:laenfermedadselimitaalantrogstrico(produccin
normalobajadeAc.Clorhdrico)oatodoelestomago,pangastritis(sin
secrecinacida)
Un 10-15% de pacientes con gastritis crnicas desarrollan
ulceras ppticas.
Carcinoma gstrico: debidoaquelagastritiscrnicasustituye
lamucosagstricanormalporfibrosisconproliferacindeun
epiteliointestinal.
Linfoma asociado al MALT.
H. cinaedi y H. fenelliaeproducengastroenteritisybacteriemia
enpacientesinmunodeprimidos.
 Diagnstico de H.pylori
Existendiferentesmtodos:
Deteccin de anticuerpos especficos en una muestra de
sangredelpacienteodeheces,utilizandoantgenos.
Pruebadelalientoconurea,enlacualelpacientebebeurea
marcadacon 14 Co 13 C,producindoseposteriormente(debido
almetabolismodelabacteria)dixidodecarbonomarcado,el
cualesdetectadoenlarespiracin.
Biopsia, en la cual se mide la ureasa activa en la muestra
extrada(eldenominado"testrpidodelaureasa").
Muestrahistolgicaodeuncultivocelular.
PCR, la cual permite tambin identificar genes asociados a
virulencia(CagAyVacA),genesasociadosaadhesin(BabA)y
genesderesistenciaaantibiticos(Claritromicina).
BRUCELLA
CocobaciloGramnegativo
Intracelularfacultativo
Aerobiosestrictos
Soncatalasayoxidasapositivo
Hidrolizanurea
Latemperaturaoptimaesde37CysupHde6,6y7,4
ProduceBRUCELOSIS

Existen7especiesdeBrucellaperosolo5causanpatologasen
humanos:
-B. melitiensis :cabrasyovejas
-B. abortus :bovinos
-B. suis :porcinos
-B. canis :caninos
-B. maris :mamferosmarinos
FACTORES DE VIRULENCIA
LPS:A(abortus)yB(melitensis),esreconocidoporlosTLR4
Protenademembranaexterna
Flagelo
PATOGENIA
Pueden sobrevivir en periodos prolongados
en el interior de clulas
fagocticas
Puedeninfectarfagocitosprofesionales(macrfagos,linfocitosbyclulas
dendrticas)yfagocitosnoprofesionales
Si el husped no controla a Brucella en puerta de entrada
la infeccin
progresa con la diseminacin de las bacterias pudiendo afectar cualquier
parnquima
Cuando Brucella ingresa por va oral , penetra a travs de las clulas M
intestinalhacialaplacadePeyer ydesdeallsediseminahacialosrganos
delsistemaretculoendotelial
La Ig M aumenta al inicio y produce su pico al tercer mes para
luego ir
disminuyendo paulatinamente , la Ig G comienza aumentar luego de la
segunda semana .En lo referente a la respuesta celular el perfil activo
frenteaestasinfeccioneseselTH1conlaformacindegranulomas
 DIAGNOSTICO:
Aislamientodesangredebrucellaporhemocultivo:
-Etapaaguda:hemocultivo
-Etapacrnica:hemocultivo,cultivodeLCR,demedula
seaodeliquidoarticular
Otros cultivos:Biopsiaheptica,gangliolinftico,lquidoperitoneal,
liquidosinovial,pusdeabscesos
En reas endmicas de B.abortus y B.suis se realiza serologa
(aglutinacinentubo);tambinpuededetectarseAcporELISA
Laidentificacindelaespeciesellevaacabomediante:
Pruebasbioqumicas(Ej.:oxidasapositiva)
Crecimientoencolorantes(fuscinaparaB.abortus yB.melitiensis,
tioninaparaB.suisyB.melitiensis)
Aglutinacinconantisuerosespecficos
Elisa
Haemophilus spp.
 GNERO HAEMOPHILUS
CocobaciloGramnegativo
Anaerobiofacultativo
Exigentesnutricionalmente:requierenfactorX(hemina)yfactor
V(NADoNADP)paracrecer
Oxidasapositivos
Catalasapositivos(H.ducreyiescatalasanegativa)
Reservorio:humano
Transmisin:LaportacinfarngeadeHaemophilus influenzaeb
esimportanteenlatransmisinqueseproduceporgotitas
areasoporcontactodirectoconsecreciones.

Desarrolloenagarchocolate
Haemophilus influenzae: Patogenicidad
Adhesinas:
Fimbrias:Colonizacindenasofaringe
OMP(protenasdemembranaexterna):P1yP2.GeneranAcprtectores
LOS(Lipooligosacrido):asociadoalainflamacin.GeneraAcprotectores

Cpsula: (Fosfatodepolirribitol)
Lascepasquenoposeencpsulasedenominanno tipificables.
Elpolisacridocapsularpermitedefinir6serotipos:eltipobproduceel95%delas
enfermedadesinvasivas.
Los anticuerpos anti-cpsula son protectores. Los anticuerpos frente a la cpsula
suponen un estmulo importante de la fagocitosis bacteriana y la actividad
bactericidamediadaporelcomplemento.Estosanticuerpossedesarrollan
comoconsecuenciadeunainfeccinnatural,lavacunacinconPRPpurificado,ola
transferenciapasivadeanticuerposmaternos.

IgA proteasa: degradaIgAdemucosas

Neuraminidasa
 Haemophilus influenzae:
Manifestaciones clnicas

No Neumona,sinusitis,otitismedia,
capsulado conjuntivitis

H.influenzae
Meningitisbacterianapurulenta
Neumona
Capsulado Epiglotitis
Celulitis
Artritissptica
Bacteriemiaconfocooculto

H.Influenzaenotipificablesonocapsuladossonoportunistas.
Haemophilus influenzae:
Diagnstico
Tomademuestra
Microscopa:seobservancocosococobacilosgramnegativos
Cultivo:serealizaenAGARCHOCOLATE
Pruebasbioqumicas
DeteccindeAgcapsulares,principalmentedelgrupob

 Haemophilus influenzae:
Vacunacin
LavacunacinactivaconvacunasconjugadasconPRP(antgeno
capsular purificado) permite prevenir la mayora de las
infeccionesporHaemophilus influenzae tipob
 Haemophilus ducreyi
Eselagenteetiolgicodelaenfermedaddetransmisinsexual:
chancro blando o chancroide , caracterizada por una ppula
dolorosa a la palpacin con una base eritematosa que se
transforma en una ulceracin dolorosa con linfadenopata
asociada

Factoresdevirulencia:
Citotoxina
Fimbrias
LOS
Hemolisina
 Haemophilus ducreyi: Diagnstico
Clnico:lesingenital
Tomademuestra
Microscopa
Cultivo(H.ducreyi requierequeelmicrobilogoinvestigue
especficamenteestabacteriapuestoquesurecuperacin
exigetcnicasespecialesdecultivo)
Pruebasbioqumicas:
FactorX+
FactorV-
Catalasa-
Nofermenta:glucosa,sacarosa,manosa,lactosa
 NEISSERIA
DiplococosGramnegativosconrequerimientosexigentes
decrecimiento
Aerobios
Oxidasapositivos
Generancidoporoxidacindehidratosdecarbono
Reservoriohumanoexclusivo
Muchasespeciessonflorahabitual

Dosespeciespatgenas:
Neisseria meningitidis
Neisseria gonorrhoeae
Neisseria spp.
Neisseria meningitidis
EPIDEMIOLOGA
Coloniza nasofaringe de personas sanas
Es la segunda causa de meningitis en adultos
Transmisin: por aerosolizacin de las secreciones
La incidencia ms elevada en nios menores de 5 aos, en personas
que viven en instituciones cerradas y en pacientes con defectos en
los ltimos factores del complemento
ENFERMEDADES
Meningitis: inflamacin purulenta de las meninges; elevada tasa de
mortalidad excepto con tratamiento precoz
Meningococemia: infeccin diseminada caracterizada por trombosis
de pequeos vasos sanguneos y afectacin multiorgnica
Neumona: forma ms leve, caracterizada por bronconeumona en
sujetos con enfermedad pulmonar de base
Neisseria meningitidis
FACTORES DE VIRULENCIA
SOBREVIVEDENTRODELOSPMNYLOSDESTRUYE

FIMBRIASYPILI:permitenlacolonizacindelanasofaringe
PROTENASDEMEMBRANAEXTERNA:Clase1a5
LOS:endotxico,esantignico
IgAPROTEASA
CPSULA:antifagocitaria.Sehandescripto12serogrupos:A,
B,C,H,I,K,L,X,Y,Z,29E,W135.
A,B,C,YyW135sonlomsasociadosaenfermedad
ExistenVACUNAScontracpsulaA,C,ACyACYW135
CpsulaBnoesinmunognica,porellolasvacunasse
realizanconprotenasdemembanaexterna
RecordarreaccincruzadagrupoBconK1deE.coli

Neisseria meningitidis: Diagnstico

Tomademuestra:LCR,hemocultivo
Microscopia:Gram
Cultivo:Agarsangre,agarchocolate,mediodeThayerMartin
Pruebasbioquimicas
Oxidasapositivo
Generancidoapartirdegucosaymaltosa
Pruebasdedeteccinrpidadeantgenoscapsulares
PCR
 Neisseria gonorrhoeae
ENFERMEDADES
Las infecciones estn limitadas a las superficies mucosas con clulas
epiteliales columnares (uretra, crvix, recto, faringe, conjuntiva);
no en
vagina (clulas escamosas) excepto en prepberes, en quienes puede
producirvulvovaginitis

Gonorrea: Enfermedaddetransmisinsexual,
caracterizadaporsecrecinpurulentaenla
localizacin afectada(p.ej.,uretra,cuellodel
tero,epiddimo,prstata,ano)
Infecciones diseminadas: diseminacindelainfeccin
desdeelaparatogenitourinarioatravsdelasangre
Oftalma neonatal: infeccinocularpurulenta
adquiridaporelneonatoalpasarporcanaldeparto
Neisseria gonorrhoeae
FACTORES DE VIRULENCIA:
Pili, protenas PorB y Opa: Intervienenenlafijacinyla
penetracinenlasclulashusped
LOS: Endotoxina.
Vive dentro de los pmn y pueden pasar a sangre
EPIDEMIOLOGA:
Afectaexclusivamentealserhumano
EslaETSmasfrecuenteluegodeChlamydia
Existesubregistro
Elprincipalreservoriosonlaspersonasasintomticas
Altaincidenciaenmujeresde15a19aosyenvaronesde20a
24aos;enpersonasconmltiplesparejassexuales
Lasmujeresconinfeccionesasintomticastienenaltoriesgode
desarrollar enfermedad plvica inflamatoria y gonococcia
diseminada
Bordetella
pertussis
 Bordetella pertussis
AGENTE ETIOLGICO DE LA TOS CONVULSA
BaciloGRAMNEGATIVO
Aerobioestricto
Fastidioso
Reservorio:HUMANO

Afectalavaareasuperior
Colonizalasciliasdelepiteliorespiratorio
Sediseminaporcontigidad

 Bordetella pertussis
Tos convulsa: Presenta 2 estados:
1) Colonizacin
Enfermedaddeltractorespiratorio Hemaglutininafilamentosa
superior:Fiebreytos. Toxinapertussis
Labacteriapuedeaislarsede Otros2tiposdeadhesinas,2tipos
nasofaringe defimbriasypertactina

2) Toxemia
Tosseca,prolongadayparoxstica. Adenilatociclasainvasiva
Excesivaproduccindemucusy Toxinaletal
Citotoxinatraqueal
vmitos.Estridorcaracterstico Toxinapertussis
LPS
Factores de patogenicidad
HEMAGLUTININA FILAMENTOSA (HAF)
EstimulalafagocitosisporPMN
Forma estructuras filamentosas en la superficie celular. Une residuos de
galactosadesulftidospresentesengrancantidadenlamembranadelas
clulasciliadas.
Mutacionesensuexpresinreducenlacapacidadparacolonizar
Anticuerposanti-HAFprotegencontralainfeccin.
TOXINA PERTUSSIS (TP)
Esunhexmero(S1,S2,S3,dosS4yS5)quepuedeactuarcomoadhesinay
comotoxina.EstimulalafagocitosisporPMN
ToxinatipoA-B(A=S1yB=S2aS5)
S2yS3funcionancomoadhesinas:S2seuneaunglicolpidodelasclulas
ciliadas; S3 se une a ganglisidos que se encuentran principalmente en
clulasfagocticas
S1eselcomponenteA,quetieneactividadADP-ribosilante.
Acanti-componentesdelatoxinaprevienenlacolonizacinen
clulasciliadasyprotegendelainfeccin.
Factores de patogenicidad
ADENILATOCICLASA INVASIVA
ProduceAMPcdirectamentesloenclulaseucariotas
Actalocalmentereduciendolafagocitosis
Sloesefectivacuandoseuneacalmodulina

CITOTOXINA TRAQUEAL
Fragmentodepeptidoglicanoqueselibera.
EstxicaparalasclulasepitelialesciliadasyestimulalaliberacindeIL-1
(fiebre)

LPS
Esheterogneo,segnlacantidaddefosfatosenlamolculalipdica
2tiposdeLPS:
ConLpidoA:nopirognic
ConLpidoX:pirognico.SuAgOesunpotenteadjuvante
Complicaciones principales de la Tos
Convulsa

Infeccionessecundarias
Otitismedia
Neumona

Dao neurolgico ireversible por edema,

hemorragias,mbolosencerebro
Diagnstico de Tos convulsa

Hisopadofarngeooaspiradonasofarngeo
CultivoenBordetGengou(5-7das)
IFDenlamuestra

Linfocitosis
Tos convulsa: Vacunas
SegnelMinisteriodeSalud,seaplica:
Alos2,4y6meses:conlaVACUNA PENTAVALENTE (DTP-HB-Hib:difteria,ttanos,
Tosconvulsa,HepatitisB,Haemophilusinfluenzaeb)
Alos18meses:conlaVACUNA CUDRUPLE(DTP-Hib:difteria,ttanos,Tos
convulsa,Haemophilusinfluenzaeb)
Alos6aos:conlaVACUNA TRIPLE BACTERIANA CELULAR(DTP:difteria,ttanos,
Tosconvulsa)
Alos11aos:conlavacunaTRIPLE BACTERIANA ACELULAR(dTpa:difteria,
ttanos,Tosconvulsa)
Duranteelembarazo:conlavacunatriplebacterianaacelularapartirdelasemana
20degestacin.
Apurperasquenosehayanvacunadoduranteelembarazooenelposparto
inmediato.
Alpersonaldesaludqueprestacuidadoaniosmenoresdeunao.
Aconvivientesdeprematurosmenoresde1500gramos.
 Legionella
pneumophila
Legionella pneumophila
BaciloGramnegativo
Flagelado
Aerbico
Patgenointracelularfacultativo
Causainfeccionesoportunistas
Estpresenteenelaguayenelmedioambiente
Reservorioambientalenamebasyprotozoarios
 Legionella pneumophila
Generalmente se adquiere por respirar vapor de agua que contiene las
bacterias. El vapor puede provenir de baeras o duchas calientes o de
unidades de aire acondicionado en edificios grandes.
Las bacterias no pasan de una persona a otra.
Produce enfermedad en ancianos e inmunocomprometidos

LEGIONELOSIS
Neumona necrotizante severa multifocal

FIEBRE DE PONTIAC:
Enfermedad febril no pulmonar
Legionella pneumophila:
Diagnstico
Cultivoenmediosselectivos(Agar
BCYE)

IFD:paradetectarantgenos
deLegionellaenmuestras
clnicas.SeAcmonoclonales
unidosafluorescena.

Hibridizacinmolecularconsondas
especficas
Gnero Bacteroides
 Gnero Bacteroides
Bacilos Gram negativos, anaerobios no formadores de
esporas

Principal componente de la flora habitual gastrointestinal,

vaginalybucalenlosmamferos

Enelintestinodelhuspedjueganunpapelimportanteenel
procesamiento de las molculas complejas en otras ms
simples

Se han encontrado concentraciones tan altas como 10 10 -

1011clulasporgramodeheceshumanas

Bacteroides es generalmente resistente a una amplia

variedaddeantibiticos
 Bacteroides fragilis
Aunquerepresenta sloel1-2%delafloranormal, eslaespecie
aisladasenel81%delasinfeccionesclnicasanaerbicas

Noesinvasivo,peropuedeproducirinfeccionesintraabdominales
encasoquelapareddelamucosadelintestinosealtere(ciruga
gastrointestinal, apendicitis perforada o gangrenosa, lcera
perforada, diverticulitis, traumatismo, y enfermedad intestinal
inflamatoria)

El modelo actual para el desarrollo de estas infecciones

abdominalessebasaenelconceptodesinergia
Bacteroides fragilis
Despusdelainterrupcindelaparedintestinal,lafloranormalse
infiltra en la cavidad peritoneal normalmente estril, y durante la
etapatemprana,agudadelainfeccin(aprox.20hs),losaerobios
(ej, E.coli) son los miembros ms activos de la infeccin,
destruyendoeltejidoyreduciendoelpotencialdeoxido-reduccin

Cuando el oxgeno ha disminudo, se crean las condiciones

ideales para la replicacin de los anaerobios, y los Bacteroides
comienzanapredominardurantelasegundaetapa,crnicadela
infeccin

Los Bacteroides contribuyen al desarrollo de una infeccin

sinrgicadetresmaneras:
Estimulandolaformacindeabscesos,
Porreduccindelafagocitosisporleucocitospolimorfonucleares,e
Inactivacindelosantibiticosporbeta-lactamasas
Factoresdevirulencia:
Cpsula:antifagocitaria.Estimulauna
respuestamediadaporclulasT
LPS
Fimbrias:adhesin
Enterotoxinas:rompeuninentreclulas
epitelialesdelintestino
Exoenzimas
Diagnstico
Toma de muestra: es importante el medio de
transporte para conservar los anaerobios y la
correcta eleccin de la metodologa (Ej.
Puncin-aspiracin)
Microscopa
Cultivo:medioscomplementados
conbilisyenatmsferaanaerobia