ANARANJADO DE ACRIDINA

DETERMINACION DE MICROORGANISMOS POR FLUORESCENCIA

Principio
El colorante Anaranjado de Acridina es un colorante fluorescente utilizado Procedimiento
en la determinacin del ciclo celular debido a que se intercala entre el ADN
y el ARN. 1. Preparar un frotis de la muestra a teir en un porta limpio.
El colorante es til, asimismo, para la tincin de microorganismos en mues- 2. Dejar secar al aire.
tras gruesas o purulentas.
3. Fijar el frotis con metanol al 100 % durante 1 2 min.
4. Escurrir el metanol en exceso y dejar secar el frotis.
Reactivo 5. Cubrir el porta con el colorante Anaranjado de Acridina
Anaranjado de Acridina 1 x 250 ml Ref. 99 00 30 durante 2 min.
Reactivo listo para su uso. 6. Enjuagar completamente con agua del grifo y dejar secar.
7. Los frotis se pueden examinar inicialmente a un aumento de
Composicin 100X a 400X, utilizando un microscopio de fluorescencia.
Anaranjado de Acridina 0,1 g/L, Tampn Acetato, pH 3.6 0,5M, en disolucin
8. Los resultados deben ser confirmados mediante examen a
acuosa.
1000 X, con un objetivo de inmersin.
Conservacin y estabilidad
El colorante se conserva hasta la fecha de caducidad indicada en la
etiqueta, si se mantiene a una temperatura entre 15 y 25C. El frasco debe
mantenerse siempre bien cerrado.
Resultados
Las bacterias y los hongos se tien de naranja brillante. El fondo aparece
de color negro a verde amarillento.
Precauciones
Las clulas inflamatorias y epiteliales humanas y los restos de tejidos se
El colorante, como todo producto de laboratorio, se debe manipular con
tien de color verde plido a amarillo.
precaucin. Seguir las indicaciones de la etiqueta y la Ficha de Seguridad
Los leucocitos activados se teirn de amarillo, naranja o rojo, dependiendo
del producto.
del nivel de activacin y de la cantidad de RNA producida, mientras que los
Deben cumplirse las normas vigentes de seguridad en el trabajo y las
eritrocitos o no se tien o se tien de color verde plido.
pautas marcadas por las Buenas Prcticas de Laboratorio considerando las
muestras como posibles riesgos biolgicos, tanto en su manipulacin como
en su eliminacin.
La eliminacin de los residuos debe hacerse segn la normativa legal
Bibliografa
vigente.
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Muestra
Frotis celulares.
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La recogida y preparacin de las muestras debe realizarse siguiendo las
41,1000-1002.
indicaciones de los protocolos de referencia aceptados internacionalmente.
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Notas al mtodo
En extensiones demasiado gruesas se pueden obtener falsos resultados
debido a restos celulares que se tien.
El colorante no distingue entre bacterias Gram positivas y negativas.
Los ncleos o grnulos de los leucocitos activados y desintegrados pueden
parecer cocos en los aumentos ms bajos
Se aconseja realizar un estudio de la extensin a 1000X para confirmar la
morfologa.
La tcnica descrita puede modificarse de acuerdo con las preferencias del
operador para lograr mayor o menor intensidad de coloracin, lo cual implica
variaciones en los tiempos de tincin, decoloracin, lavado,..etc.
Agua altamente clorada puede alterar la coloracin.

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Revisin: Julio 2011 PRO4_REG9_ACRIDINA_5