Rev Cubana Farm 2002;36(1):28-34

Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos

VALIDACIN DE LOS MTODOS ANALTICOS

PARA LA IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN
DEL DEXTROMETORFANO JARABE
Alfredo Fernndez Serret,1 Yeni Aguilera Cabrera,2 Ivn Morales Lacarrere3 y Esther Alonso
Jimnez4

RESUMEN
Para realizar el control de la calidad del dextrometorfano jarabe, se aplic la tcnica
descrita en la USP 23, y se comprob la fiabilidad de esta mediante la evaluacin de la
precisin, exactitud, linealidad y especificidad. Se incluyen adems, la determinacin
de las caractersticas organolpticas, pH y contenido por frasco como ensayos propios
de medicamentos lquidos de administracin oral o de uso externo.

DeCS: DEXTROMETORFANO/anlisis; DEXTROMETORFANO/farmacologa;

CONTROL DE CALIDAD; CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA PRESION;
CALIDAD DE LOS MEDICAMENTOS; TOS/quimioterapia; QUIMICA
FARMACEUTICA.

La validacin es el proceso esta- La validacin proporciona un alto

blecido para la obtencin de pruebas
documentadas y demostrativas de que un
mtodo de anlisis es lo suficiente fiable
y reproducible para producir el resultado
previsto dentro de intervalos definidos
(Validacin de mtodos analticos.
Monografa. Seccin catalana de la AEFI.
Comisin de normas de buena fabricacin
y control de calidad. Sept., 1989:1-94).
grado de confianza y seguridad del mtodo
analtico y se realiza con carcter obli-
gatorio cuando se desarrolla un nuevo
procedimiento, ya que permite asegurar
que el mtodo propuesto hace lo que tiene
que hacer.1
Es necesario sealar que los mtodos
descritos en farmacopeas u otros textos
oficiales se consideran validados, aunque

1
Master en Ciencias. Licenciado en Qumica. Investigador Auxiliar.
2
Licenciada en Ciencias Farmacuticas. Hospital Clinicoquirrgico "Enrique Cabrera."
3
Licenciado en Ciencias Farmacuticas. Investigador Agregado.
4
Tcnica en Tecnologa Farmacutica.

28
debe aclararse que ellos se refieren sola-
mente a mtodos generales y a materias
primas. Estos no precisan de validacin,
aunque deben ser comprobados antes de
su utilizacin rutinaria con la verificacin
de la idoneidad en las condiciones de
laboratorio. Sin embargo, para el caso de
las formas farmacuticas terminadas, que
pueden variar su composicin cualitativa o
cuantitativa segn el fabricante, habr que
proceder en cada caso a la validacin del
mtodo analtico. Para demostrar la
aplicabilidad de estos mtodos que no
tienen en cuenta todos los posibles
excipientes de una forma farmacutica, ser
necesario, por lo menos, efectuar una
validacin abreviada que evale que la
especificidad, exactitud y precisin son
adecuadas (Validacin de mtodos
analticos. Monografa. Seccin catalana de
la AEFI. Comisin de normas de buena
fabricacin y control de calidad. Sept.,
1989:1-94).
El presente trabajo tuvo como objetivo
la validacin del mtodo analtico reporta-
do en la USP 232 para el control de la calidad
del dextrometorfano jarabe, medicamen-
to antitusivo de gran eficacia empleado
ampliamente para combatir los accesos de
tos.3
MTODOS
Para el desarrollo de este estudio se
emple como materia prima el bromhidrato
de dextrometorfano (C18H25NO HBr H2O),
perteneciente al lote 910156 del fabricante La
Roche, y muestras de los lotes 31, 32 y 33
para evaluar las especificaciones de calidad
del dextrometorfano jarabe.
Mtodos analticos para el control
de calidad
Se emple la tcnica analtica descrita
en la monografa para el control de la calidad
29
del jarabe de dextrometorfano segn la USP
232 que incluye los ensayos siguientes:
Identificacin. Se basa en la compro-
bacin de la propiedad dextrorrotatoria de
la solucin de bromhidrato de dextrome-
torfano obtenida despus de un tratamiento
de extraccin al jarabe. Las mediciones se
realizaron en un polarmetro Carl Zeiss. Este
ensayo se fundamenta en una reaccin
qumica de coloracin la cual permite
identificar compuestos que contienen el
grupo O- alquil unido a un anillo bencnico o
a un anillo en una estructura policclica que
contiene un anillo bencnico.
Cuantificacin. Se basa en la separacin
selectiva del bromhidrato de dextrometorfano,
mediante la cromatografa lquida de alta
resolucin de fase reversa por formacin de
par inico y la cuantificacin de este, frente a
una muestra de referencia que emplea el
mtodo de comparacin absoluta o patrn
externo. Se emple un cromatgrafo lquido
equipado con un detector UV, y se esta-
blecieron las condiciones operacionales
siguientes:
Flujo de la fase mvil: 1,0 mL/min.
Detector UV a longitud de onda: 280 nm.
Sensibilidad del detector: 0,08 AUFS.
Volumen inyectado: 20 L.
Se incluyen adems, la determinacin
de las caractersticas organolpticas, pH y
contenido por frasco como ensayos
propios para el control de la calidad de los
medicamentos lquidos de administracin
oral o de uso externo.4
Validacin de los mtodos de identificacin
del principio activo
Especificidad. Se comprob la especifi-
cidad de los mtodos de identificacin,
mediante la aplicacin de las metodologas
descritas en la monografa a una muestra
placebo de la formulacin.
Validacin del mtodo de cuantificacin
del principio activo
Linealidad del sistema. Para el
estudio de la linealidad del sistema se
prepar una curva de calibracin en un
intervalo de concentracin desde 24,0 has-
ta 192,0 g/mL (20-160 % de la cantidad
terica declarada), que incluy 7 concen-
traciones diferentes. El anlisis se realiz
por triplicado.
Precisin del mtodo. En el caso de
la repetibilidad, este estudio se realiz por
quintuplicado a una muestra de con-
centracin nica que represent el 100,0 %
de la cantidad terica declarada; mientras
que para la reproducibilidad, se analiz con
la misma muestra homognea de con-
centracin nica, y se efectuaron las valora-
ciones por 2 analistas en 2 d diferentes. Para
su evaluacin se realiz un anlisis de
varianza.
Exactitud, linealidad del mtodo e
intervalo. Para el estudio de la exactitud
se emple el mtodo de recuperacin, me-
diante la preparacin de muestras con dife-
rentes niveles de bromhidrato de dextrometor-
fano, que representan el 80, 90, 100, 110 y
120 % de la concentracin terica del
principio activo en el jarabe, segn la
formulacin propuesta. Simultneamente,
se analizaron la linealidad del mtodo y el
intervalo. El anlisis se realiz por triplicado.
Especificidad. Con el objetivo de
evaluar la especificidad del mtodo
cromatogrfico, se someti el placebo de
la formulacin seleccionada y el medi-
camento a hidrlisis cida con cido
clorhdrico 3 M, alcalina con hidrxido de
sodio 3 M y oxidacin con perxido de
hidrgeno a una temperatura de 100 C por
3 h. Adems, el placebo fue sometido a
calentamiento a 70 C por 30 d.
Todos los resultados obtenidos fueron
evaluados estadsticamente con la ayuda
del programa Origin Versin 5.0 para
Windows.
30
RESULTADOS
Validacin del mtodo de identificacin
del principio activo
La solucin obtenida al someter el
placebo al proceso de extraccin no
present actividad ptica. De igual forma
no se desarroll coloracin alguna
indicativa de la presencia de este tipo de
compuesto en la muestra de placebo
ensayada.
Validacin del mtodo de cuantificacin
del principio activo
Linealidad del sistema. La curva de
calibracin a 280 nm result ser lineal en
el intervalo de concentraciones compren-
didos entre 24,0 y 192,0 g/mL. Al aplicar
el mtodo de los mnimos cuadrados a los
resultados registrados se obtuvo la
ecuacin de la recta que se expres segn
y = 11 019,41 x 2 909,67. El coeficiente
de correlacin lineal fue de 0,9998.
Al aplicar la prueba de linealidad se
obtuvo un valor de desviacin estndar
relativa del 0,22 % y al aplicar la prueba
de proporcionalidad los lmites de con-
fianza del trmino independiente incluyen
el cero.
Precisin del mtodo. En la tabla 1 se
exponen los resultados correspondientes
a este estudio. Para el caso especfico de
la repetibilidad, los coeficientes de varia-
cin fueron menores que 1,5 % y el
coeficiente de variacin total menor que
2 %. Las F experimentales de Fisher resul-
taron ser menores que las tabuladas.
Exactitud, linealidad del mtodo e intervalo
Los resultados obtenidos en el estudio
de la linealidad del mtodo se muestran en
la tabla 2, donde la pendiente de la curva de
TABLA 1. Estudio de la precisin del mtodo. Repetibilidad y reproducibilidad

Analista Da 1. Repetibilidad Da 2. Repetibilidad Reproducibilidad

Analista 1 1. 104,2 % 6. 103,7 %

2. 103,9 % 7. 104,4 %
3. 103,8 % 8. 104,1 % Xmedia= 104,1 %
4. 104,0 % 9. 103,1 %
5. 104,6 % 10. 104,3 % s = 0,39
Xmedia = 104,1 % Xmedia = 103,9 %
CV = 0,30 % CV = 0,51 %
11. 104,4 % 16. 104,2 % n = 20
Analista 2 12. 104,0 % 17. 103,8 %
13. 104,5 % 18. 104,0 %
14. 104,0 % 19. 103,9 % CV= 0,38 %
15. 104,7 % 20. 104,8 %
X media = 104,2 % Xmedia = 104,1 %
CV= 0,30 % CV = 0,38 %

Intervalo de confianza = 104,1 0,2

Lmites de aceptacin: Repetibilidad CV 1,5 %
Reproducibilidad CV 2,0 %

Fuente de Grados de Suma de Medias de

variacin libertad (gl) cuadrados cuadrados Fcal Ftab

Analista 1 0,242 0,242 Fa Fgla/Fgld

(a) 2,9876 38,51
Da 2 0,162 0,081 Fd Fgld/Fgle
(d) 0,5087 4,69
Error 16 2,548 0,1592
(e)

F = F de Fisher; gla = grados de libertad para los analistas; gld = grados de libertad para los das; gle = grados
de libertad del error.
Fa < Fgla/gld; Fd < Fgld/gle.

recuperacin present un valor de 0,9972. TABLA 2. Exactitud del mtodo. Curva de recuperacin
La curva de recuperacin mostr un mg % de
comportamiento lineal dado por la ecuacin mg aadidos recuperados recuperacin Precisin
de la lnea recta y el coeficiente de 96,0 94,5 98,4 X media = 99,0 %
correlacin de 0,9993. La recuperacin media 95,4 99,4 S2 = 0,30
fue del 98,7 %. Al aplicar la prueba de 95,3 99,3 CV = 0,56 %
108,0 105,6 97,8 Xmedia = 98,1 %
linealidad se obtuvo un valor de desviacin 106,8 98,9 S2 = 0,49
estndar relativa igual al 1,0 % y el intervalo 105,4 97,6 CV= 0,71 %
120,0 118,6 98,8 Xmedia = 98,5 %
de confianza del trmino independiente 118,2 98,5 S2 = 0,062
incluy el cero. 118,0 98,3 CV= 0,52 %
132,0 130,7 99,0 Xmedia = 99,1 %
Especificidad. En la figura 1 se presen- 130,3 98,7 S2 = 0,26
tan los cromatogramas de las muestras 131,6 99,7 CV = 0,52 %
144,0 142,5 98,9 Xmedia = 98,9 %
placebos sometidas a condiciones drsticas. 141,9 98,5 S2 = 0,123
En todos los casos se observa la aparicin 142,9 99,2 CV = 0,36 %

de picos secundarios que eluyen a tiempos Lmites de aceptacin: Rmedia = 98,7 %

de retencin pequeos, los cuales R media 98,0 102,0 % CV = 0,58 %
CV 2,0 %
modifican el cromatograma de la muestra Ecuacin de la curva de recuperacin:
y = 0,9972 x 1,1533.
placebo. r = 0,9993.

31
 2,158
2,51
FIG. 1. Cromatogramas de las muestras placebos
sometidas a condiciones drsticas: a) placebo sin
degradar, b) placebo degradado a 70 C, c) hidrlisis
cida del placebo, d) hidrlisis bsica del placebo y
e) oxidacin con perxido de hidrgeno.
Los cromatogramas de las muestras de
medicamento sometidas a hidrlisis cida,
bsica y oxidacin con perxido de
hidrgeno se presentan en la figura 2.
No se observ una hidrlisis apreciable
en medio cido ya que al trmino de 3 h con
tratamiento con cido clorhdrico (b) se
obtuvo una concentracin del 97,8 % de
principio activo. Sin embargo, la hidrlisis en
medio bsico (c) mostr una degradacin
ms acentuada, para una concentracin del
76,0 % de dextrometorfano. De igual forma,
se obtuvo la degradacin del medicamento
en medio oxidante (d), con el 66,0 % de este
despus de sometida la muestra al tratamiento.
Los resultados del control de la calidad
de los lotes estudiados se presentan en la
tabla 3.
32
FIG. 2. Cromatogramas de las muestras del
medicamento sometidas a condiciones drsticas: a)
medicamento sin degradar, b) hidrlisis cida de la
muestra, c) hidrlisis bsica de la muestra y d)
oxidacin con perxido de hidrgeno.
DISCUSIN
Los ensayos realizados para el estudio
de especificidad en la muestra placebo,
comprobaron que los mtodos descritos
resultaron ser especficos. Para ambos
casos, ninguno de los excipientes
presentes en la formulacin interfieren en
los ensayos de identificacin propuestos
en la monografa.
Se comprob el cumplimiento de la
linealidad del sistema en el intervalo de
concentraciones estudiado por el elevado
valor del coeficiente de correlacin
alcanzado. El valor de la desviacin estndar
relativa result adecuado si se tiene en
cuenta que el valor aceptable debe ser
 TABLA 3. Resultados analticos del control de la calidad
Ensayos Lote 31
Caractersticas Responde Responde
organolpticas
Identificacin A) Responde A) Responde A) Responde
B) Responde
Contenido del 119,0 mL
frasco
pH 3,88
Valoracin 102,3 % 103,1 %
menor o igual que 2 %. De igual forma el
intercepto de la curva no fue significativo.
Los coeficientes de variacin
resultaron ser menores que 1,5 %, lo cual
demuestra la buena repetibilidad del mto-
do de cuantificacin. No se observaron
diferencias significativas entre las medias
de ambos analistas, ya que Fa<Fgla/gld, por
tanto el mtodo analtico fue reproducible
por ambos analistas. De igual forma, no se
detectaron diferencias significativas entre
ambos das (Fd<Fgld/ /gle), y el mtodo
analtico fue reproducible en distintos das
por un mismo analista. El coeficiente de
variacin total menor que 2 % demostr que
el mtodo presenta buena reproducibilidad.
La curva de recuperacin mostr un
comportamiento lineal debido al valor del
coeficiente de correlacin cercano a la
unidad. La exactitud y linealidad del mtodo
se comprobaron mediante las pruebas
estadsticas realizadas, ya que el valor de la
pendiente no difiere significativamente del
valor unitario y el valor del intercepto no
difiere significativamente de cero. La
recuperacin media cumpli con el criterio
de aceptacin para este tipo de anlisis, lo
cual coincide con los trabajos publicados
por otros autores.5,6 Los resultados permi-
Lote 32 Lote 33 Especificaciones
Responde Lquido ligeramente
siruposo, incoloro, olor
caracterstico y sabor
dulce-amargo
A)Solucin
dextrorrotatoria
B) Responde B) Responde B) Coloracin amarilla
que torna a rojo.
118,0 mL 119,0 mL No menor de 118,0 mL
3,88 3,90 3,8-4,20
103,4 % 95,0-105,0 %
tieron concluir que el mtodo es preciso,
exacto y lineal en el intervalo de
concentracin estudiado.
De la figura 1 se puede concluir que
no existe interferencia ni de los excipientes
ni de sus productos de degradacin, ya que
estos eluyen a menores tiempos de reten-
cin que el dextrometorfano, por lo que el
mtodo result ser especfico con respecto
al placebo y a sus productos de degra-
dacin.
El dextrometorfano result ser estable
en medio cido; sin embargo, la hidrlisis
en medio bsico mostr una degradacin
acentuada, lo cual permite concluir que el
principio activo se degrada fcilmente en
esta condicin. De igual forma se observ
la degradacin del medicamento en medio
oxidante. Por lo tanto, el mtodo cromato-
grfico result ser especfico para cuantificar
el principio activo despus de la degra-
dacin de este.
Los ensayos de identificacin y valo-
racin cumplieron con los requisitos de
calidad establecidos segn USP 23 para el
medicamento estudiado. Se incluyen ade-
ms, el cumplimiento de las caractersticas
organolpticas, contenido por frasco y pH,
segn los lmites establecidos para medica-
mentos de administracin oral o de uso externo.
33
 SUMMARY
The technique described in the USP 23 was applied to carry out the quality control of
the dextrometorphan syrup . The reliability of this method was proved by evaluating
the accuracy, exactitude, lineality and specificity. The determination of the organoleptic
characteristics, pH and content per bottle were also included as own trials of liquid
drugs for oral adminstration or for external use.

Subject headings: DEXTROMETORPHAN/pharmacology; QUALITY CONTROL;

HIGH PRESSURE LIQUID CHROMATOGRAPHY; DRUGS QUALITY; COUGH/drug
therapy; CHEMISTRY, PHARMACEUTICAL.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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Recibido: 13 de noviembre del 2001. Aprobado: 20 de diciembre del 2001.

M.Sc. Alfredo Fernndez Serret. Centro de Investigacin y Desarrollo de Medicamentos. Ave. 26 No. 1605
entre Boyeros y Puentes Grandes, municipio Plaza de la Revolucin, Ciudad de La Habana, CP 10600, Cuba.

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