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Universidade de So Paulo

Instituto de Cincias Biomdicas


(ICB)

BMM 121: Microbiologia


Bsica

Tcnica de Colorao de Gram

Experimento realizado no dia 2 de maro de 2011.


Resultados e Discusses:
Utilizando-se da Tcnica de colorao de Gram, a qual analisa a presena
de parede celular com espessa camada peptdeoglicana, Gram Positiva (+),
ou a presena de membrana externa com a presena de
Lipopolissacardeos (LPS), Gram Negativas (-). Deste modo analisou-se 4
bactrias distintas, afim de determinar suas classificaes como Gram
positivas (+) ou Gram negativas (-).

Os passos da Tcnica da Colorao de Gram se encontram na Tabela


abaixo:
Tabela I: Listagem dos passos e coloraes vistas aps a adio de substncia ao esfregao.

Passo Corante ou Aparncia (cor)


Outro
- - Gram (+) Gram (-)
1 Violeta de Violeta Violeta
Genciana
2 Lugol Violeta Violeta
3 lcool Violeta Incolor
4 Fucsina Violeta Vermelho

Analisou-se as seguintes bactrias:

1. Escherichia Coli;
2. Staphylococcus Aureus;
3. Streptococcus Pyogenes;
4. Subtilis Aula.
1. Escherichia Coli:

Realizado o esfregao e flambada a lamina, afim de que a adsoro das


bactrias com a lamina seja maximizada, e que no se aquea de mais a
lamina evitando que as bactrias morram. Adicionou-se o corante
primrio, Violeta de Genciana. Aps a lavagem do corante constatou-se
que o esfregao assumiu uma colorao violeta. Deste modo adicionou-se
o Lugol com a finalidade de fixar melhor o corante primrio. O esfregao
ento ficou com uma colorao escura, roxo escuro/ preto. Ento lavou-se
a lamina com Etanol e a colorao foi removida.
Por fim adicionou-se a Fucsina e o esfregao assumiu uma colorao
avermelhada. Aps a lavagem a colorao se manteve.
A anlise no microscpio tico revelou que as bactrias assumiram uma
colorao avermelhada devido fucsina sendo passvel de concluso que a
Escherichia Coli uma bactria Gram negativa (-). Fora isso notou-se que a
E. Coli possui um formato cilndrico indicando que um Bacilo.

2. Staphylococcus Aureus:

Aps flambar a haste metlica para que no ocorresse contaminao. Se


procedeu com o mesmo mtodo utilizado para a E.Coli. Logo adicionou-se
o Violeta de genciana e constatou-se que a colnia assumiu a colorao
violeta como ocorrido anteriormente. Assim adicionou-se o Lugol para que
o corante penetrasse na parede celular formando o complexo com Iodo.
Penetrado o Iodo ocorre a formao do complexo e a colorao se torna
mais ntida, caracterizada pela colorao roxa/ preta.
Assim adicionou-se o Etanol, porm dessa vez a colorao foi mantida. A
fucsina foi ento adicionada e a colorao tendeu a um roxo/ rosado.
Lavou-se a fucsina e a lamina foi levada ao microscpio. Constatou-se
ento que ao manter a colorao violeta/ rosada a bactria
Staphylococcus Aureus classificada como Gram Positiva (+). Alm de ser
constatado que possui um formato esfrico e que vrias bactrias vivem
agregadas umas as outras formando o cacho de uva.
3. Streptococcus Pyogenes:

4. Subtilis Aula:

Concluses:

Aps a realizao do experimento pode-se concluir que:

A bactria Escherichia Coli classificada como Gram Negativa (-)


devido colorao (avermelhada) assumida, indicando que possui
membrana celular externa formada por Lipossacardeo (LPS).
O Staphylococcus Aureus classificada como Gram Positiva (+),
devido a colorao (violeta/ roxa), indicando que possui uma
espessa camada Peptdeoglicana em sua parede celular.
Streptococcus Pyogenes classificada como Gram Positiva (+), pois
assumiu uma colorao (violeta/ roxa), como o Staphylococcus
Aureus, a colorao indica a presena de parede celular com
espessa camada Peptdeoglicana.
A bactria Subtilis Aula foi classificada como Gram Positiva (+), pois
assumiu uma colorao (violeta/ roxa), indicando a presena da
parede celular com espessa camada Peptdeoglicana, como o
Staphylococcus Aureus e o Streptococcus Pyogenes.

Referncias Bibliogrficas:
http://pt.wikipedia.org/wiki/T%C3%A9cnica_de_Gram (Acessado dia
13/03/2011).
http://en.wikipedia.org/wiki/Gram_staining (Acessado dia 13/03/2011).
http://col.redealuno.usp.br/WebCC/aluno_cursar.asp?did=4436&turma=7268

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