UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

EAP DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

ANLISIS QUMICO POR INSTRUMENTACIN

PRCTICA #1:
DETERMINACIN DE UN ESPECTRO DE
ABSORCIN

PROFESORA:

ALUMNOS:

Nelly Milla Nuez

Carlos Eduardo Del Aguila Ramrez

FECHA DE ENTREGA: 27 de septiembre de 2016

 I. RESUMEN
La determinacin de un espectro de absorcin es un proceso mediante el cual la
materia disuelta en una solucin absorbe una cantidad de energa radiante de una
determinada longitud de onda. Esta absorcin es registrada en un
espectrofotmetro en tres tipos de datos: como absorbancia, como tramitancia y
como concentracin del analito.
La prctica se realiz en dos instancias, donde en la primera se verific el correcto
funcionamiento del espectrofotmetro, para lo cual se registr el espectro de
absorcin de una solucin de cloruro de cobalto (CoCl2) en HCl al 1%; y para la
segunda instancia se procedi a registrar con ayuda del espectrofotmetro el
espectro de absorcin del maz morado.
Los espectros de absorcin se pueden utilizar para identificar sustancias disueltas
en concentraciones muy bajas (ppm) puesto que cada sustancia posee un
espectro de absorcin nico; y tambin a partir de datos de transmitancia a
considerables longitudes de onda halladas con el espectrofotmetro, podemos
obtener las absorbancias y hacemos las grficas para cada una.
 II. PRINCIPIOS TERICOS
Espectrofotometra

Estudia la intensidad de absorcin o emisin de energa radiante por parte de la

materia. Se basa en la cualidad que posee la materia de absorber o emitir materia
a determinada longitud de onda, la cual es especfica para cada tipo de materia.

Espectro

Un espectro son las radiaciones de diferentes longitudes de onda que son

absorbidas por la muestra.

a. Espectro de emisin: Es el espectro de frecuencias de la radiacin

electromagntica emitida debido a un tomo o molcula que realiza una
transicin electrnica desde un estado de alta energa a un estado de baja
energa.
b. Espectro de absorcin: Es la fraccin de la radiacin electromagntica
incidente que es absorbida por la muestra en un rango de frecuencias.

Espectrofotmetro

Un espectrofotmetro es un fotmetro capaz de medir la intensidad como una

funcin de la longitud de onda de la fuente de luz. Comnmente es utilizado en la
medicin de la tramitancia o absorbancia de soluciones en determinados rangos
de longitudes de onda. Dentro de estos rangos de longitudes de onda, se
requieren realizar calibraciones en el instrumento utilizando estndares de una
gran variedad dependiendo de la longitud de onda.

Figura 1. Representacin esquemtica del funcionamiento de un

espectrofotmetro.
Solucin blanco

La solucin blanco es aquella que contiene todos los reactivos en la misma

concentracin de la muestra, sin embargo no contiene al analito en estudio. Es
utilizada para colocar en cero o en 100% la absorbancia o la tramitancia del
espectrofotmetro respectivamente.

Antocianinas

Las antocianinas son pigmentos vacuolares solubles en agua que pueden ser
rojos, prpuras o azules dependiendo del pH. Las antocianinas presentes en el
maz morado son: pelargonidina, peonidina, cianidina, mecocianina, delfinidina,
malvidina y petunidina. Las antocianinas presentan un espectro de absorcin
caracterstico en la regin visible entre 500 y 545 nm, siendo influenciado por los
cambios de pH.

Figura 2. Estructura qumica de las antocianinas del maz morado.

 III. PROCEDIMIENTO
a. Espectro de absorcin del cloruro de cobalto
- Se coloc en la celda el blanco (HCl al 1%), en otra celda la
solucin de CoCl 2 en HCl al 1%.
- A continuacin se midieron las tramitancias en el rango de 450 a
750 nm variando la longitud de onda cada 10 nm de intervalo,
cerca de la lectura de mxima absorcin se realizaron las lecturas
con inervalos de 2 nm.
- Se realizaron las grficas respectivas (%T vs y A vs ).
b. Espectro de absorcin del maz morado
- El maz morado se dej macerar en alcohol durante una semana previa a
la prctica.
- Se determin el espectro de absorcin utilizando como blanco el alcohol y
agua, para casos aislados.
- Se midieron las tramitancias entre 450 y 700 nm.
- Se realizaron las grficas respectivas (%T vs y A vs ).
 IV. TABLA DE RESULTADOS

Tabla1.1. Espectros de absorcin del cloruro de cobalto diluido en HCl al 1%.

Absorbancia
() %T
= %

450 81.9 0.0867

460 79.5 0.0996

470 76.9 0.114

480 75,4 0.122

490 73.1 0.136

495 72.5 0.140

498 71.4 0.146

500 71 0.149

502 70.5 0.152

504 70.1 0.154

506 69.6 0.157

508 69.2 0.1599

510 69.5 0.158

512 69.3 0.159

514 69.4 0.1586

516 69.3 0.159

518 69.6 0.157

520 70.3 0.153

530 73.2 0.135

540 78.6 0.105

550 84.7 0.072

560 89.7 0.047

570 93.8 0.028

580 96.2 0.017

590 96.8 0.014

600 97.6 0.0106

610 98 0.0088

620 98.2 0.0079

630 97.6 0.0105

640 97.8 0.0097

650 98 0.0088

660 98.2 0.0079

670 98.6 0.0061

680 99.1 0.0039

690 99.6 0.0017

700 99.5 0.0022

Tabla 1.2 Espectros de absorcin del maz morado diluido en alcohol.
Absorbancia
() T%
= log10 %

450 73 0.1367

460 74.1 0.1302

470 73.3 0.1349

480 72.8 0.1379

490 72.2 0.1415

492 72 0.1427

494 72.1 0.1421

496 72.2 0.1415

498 71.9 0.1433

500 71.8 0.1439

502 71.6 0.145

504 71.2 0.1475

506 71.3 0.147

508 71 0.1487

510 70.9 0.1494

512 71 0.1487

514 70.7 0.1506

516 71.1 0.1481

518 70.4 0.1524

520 70.9 0.149

522 70.5 0.1518

524 70.6 0.1512

526 70.3 0.153

528 70.5 0.1518

530 70.2 0.1537

532 70.1 0.1543

534 70.3 0.153

536 70.5 0.1518

538 70.4 0.1524

540 70.8 0.150

542 70.9 0.1494

544 70.5 0.1518

546 71 0.1487

548 71.3 0.1469

550 71.4 0.1463

560 73.4 0.134

570 75.3 0.1232

580 78.4 0.1057

590 81.4 0.0894

600 81.6 0.0883

610 87.9 0.0560

620 90.6 0.0429

630 93 0.0315

640 94.7 0.0237

650 95.4 0.0205

660 96.7 0.0146

670 97.5 0.0110

680 98 0.0088

690 98.2 0.0079

700 98.7 0.0057

Tabla1.3. Espectros de absorcin del maz morado diluido en agua.
Absorbancia
() T%
= log10 %
450 77.4 0.111
460 77.5 0.1107
470 76.2 0.118
480 74.6 0.127
490 72.4 0.140
492 71.7 0.144
494 69.2 0.1599
496 71.1 0.148
498 70.5 0.1518
500 70.3 0.1530
502 69.5 0.158
504 68.6 0.1637
506 68 0.167
508 67.4 0.1713
510 67.1 0.173
512 66.4 0.1778
514 65.9 0.1811
516 65.9 0.1811
518 64.8 0.188
520 64.3 0.1918
522 64.2 0.1925
524 63.5 0.1972
526 63.2 0.1992
528 63 0.201
530 62.6 0.203
532 62.5 0.204
534 62.4 0.205
536 61.9 0.208
538 62.2 0.206
540 62 0.2076
542 61.5 0.2111
544 61.5 0.2111
546 61.6 0.210
548 61.9 0.208
550 62.2 0.206
560 64.6 0.1898
570 78.2 0.1068
580 79.9 0.097
590 75.9 0.1198
600 80.3 0.095
610 85.6 0.0675
620 90.5 0.043
630 93.5 0.029
640 93.5 0.029
650 95.6 0.0195
660 96.6 0.0150
670 97.9 0.0092
680 98.6 0.0061
690 98.8 0.0052
700 98.9 0.0048
 V. DISCUSIN DE RESULTADOS

El instrumento est apropiadamente calibrado cuando la transmitancia mnima

(mxima absorbancia) del HCl ocurre entre 510 y 515 nm de acuerdo a la tesis de
Aguilar Gonzales Control de calidad analtico en un laboratorio de anlisis de
aguas, segn estos datos nos indicara que el espectrofotmetro con el que se
realiz las lecturas en laboratorio funciona correctamente ya que la mxima
absorbancia obtenida fue de 508 nm a 69.2%T.

Luego de corroborar la calibracin del equipo se procedi a hacer las lecturas de

las antocianinas del maz morado. La absorcin mxima de las antocianinas en
maz morado se encuentra en el rango de 520-540 nm en la regin visible, es la
longitud de onda ms comn usada en la medicin espectrofotomtrica de
antocianinas (Horbowic 2008), lo que nos afirmara que los datos obtenidos en
espectro de absorcin de maz morado diluido en agua son correctos ( = 532
a 70.1 T%) mientras que el diluido en etanol no estara dentro del rango ( =
542 y = 544).

De acuerdo a diversos estudios, entre ellos EXTRACCIN DE ANTOCIANINAS

DE LAS CORONTAS DE Zea mays L. MAZ MORADO, el mejor diluyente para la
lectura de antocianinas es el etanol ,lo que ha sido confirmado durante la practica
ya que los valores obtenidos durante las series de lecturas de maz morado
disueltas en agua tenan una tendencia a elevarse y disminuirse constantemente
en cambio en las lecturas del maz morado disueltas en alcohol una vez que haba
llegado a su absorbancia mxima comenzaba a decrecer, por lo que los valores
obtenidos pueden verse visto afectados a que no se emple bien la tcnica,
generando oscilaciones de la REM al momento de abrir y cerrar la tapa del porta
cubetas. Otro motivo podra ser el la mala praxis al momento de tomar la cubeta
por el lado incorrecto (lado de lectura, sin ranuras).Lo que nos indica que se debe
ser muy cuidadoso al momento de realizar las lecturas debido a que el equipo es
muy sensible y puede proporcionarnos datos errneos de no utilizarse de manera
adecuada.
 VI. CONCLUSIONES
- Comparando los datos obtenidos de las 3 muestras analizadas, se puede
decir que las antocianinas del maz morado se encuentran dentro de un
rango que va desde 500 a 550 nm, datos que son corroborados por los
hallados en el trabajo de G. Ortega y M. Guerra.
- En la espectrofotometra es una tcnica instrumental de mucha ayuda para
el investigador, ya que debido a que cada sustancia absorbe la energa
radiante a cierta longitud de onda, se puede saber que sustancias son las
que se encuentran dentro de la muestra problema.

VII. RECOMENDACIONES
- Realizar la limpieza del tubo con la muestra y el blanco de
manera adecuada.
- Evitar agarrar los tubos de muestra y blanco bajo la marca para
evitar lecturas equvocas.
VIII. BIBLIOGRAFA

- Grisel Ortega, Mercedes Guerra. Separacin, caracterizacin estructural y

cuantificacin de antocianinas mediante mtodos qumicos-fsicos. Parte II.
Red de Revistas Cientficas de Amrica Latina, el Caribe, Espaa y
Portugal. Septiembre Diciembre, 2006, pp. 3 11.
- Douglas A. Skoog. Principios de anlisis instrumental. Cengage Learning.
6ta Edicin.
- Aguilar.M.(1983).Control de calidad analtico en un laboratorio de anlisis
de aguas.
- Arilm Gorriti G et al. EXTRACCIN DE ANTOCIANINAS DE LAS
CORONTAS DE Zea mays L. MAZ MORADO. Ciencia e Investigacin
2009; 12(2): 64-74.
- Miguel Aguilera Ortz. PROPIEDADES FUNCIONALES DE LAS
ANTOCIANINAS. Revista de Ciencias Biolgicas y de la Salud. 2011; pp.
16-22.