Manual de Bioquímica Uss 17-II

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DATOS DEL ESTUDIANTE
APELLIDOS Y NOMBRES:
CDIGO DE ESTUDIANTE: APODERADO:
DIRECCIN:
CORREO PERSONAL:
Correo crece: @crece.uss.edu.pe
FACULTAD:
ESCUELA PROFESIONAL: MEDICINA HUMANA
SEMESTRE ACADMICO: 2017-II CICLO y SECCIN:
TURNO DE PRCTICA: No DE MESA:
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Guzmn Vigo Csar, Alarcn Benavides Edwin, Ruiz Barrueto Miguel 2017 - 2
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PRESENTACIN
Los anlisis que se llevan a cabo en un laboratorio de Bioqumica tienen como objetivo separar, caracterizar,
modificar o cuantificar biomolculas. En la mayora de los casos se trabaja con muestras complejas que contienen
un gran nmero de biomolculas distintas. Por este motivo, las tcnicas y los mtodos utilizados tienen que ser
altamente especficos y su determinacin se basa en las propiedades fsicas, qumicas o bioqumicas de las
biomolculas. Los conocimientos metodolgicos para estudiar las biomolculas avanzan a pasos agigantados y
en la mayora de los casos se requieren de reactivos y equipos costosos, que se van perfeccionando y
simplificando con el avance de la ciencia y la tecnologa. De otro lado, el anlisis de tejidos y pruebas para los
fluidos corporales, que se aplican en la bioqumica clnica, son fundamentales para el cuidado de los pacientes,
contribuyendo significativamente al diagnstico, tratamiento, seguimiento y pronstico de la mayora de
padecimientos en el hombre.
La Bioqumica es la ciencia que se encarga de estudiar desde una perspectiva qumica la estructura y las funciones
de los seres vivos, comprendiendo las sustancias que se encuentran presentes en ellos y las reacciones qumicas
fundamentales en los procesos vitales; constituyndose en una de las ciencias ms importantes en la formacin
bsica de los estudiantes que cursan una carrera en ciencias. A pesar del espectacular desarrollo que en los
ltimos aos vienen experimentando las ciencias aplicadas y sus diversas tecnologas, la vigencia y trascendencia
de las ciencias bsicas se mantiene debido al notable papel que tienen como generadora de conceptos, principios
y teoras que configuran el soporte terico de toda invencin tecnolgica.
El presente Manual de Laboratorio de Bioqumica, pretende ser un instrumento que contribuye a alcanzar las
competencias curriculares propuestas para el estudiante a travs del desarrollo de actividades, revisiones en
publicaciones arbitradas, revisiones bibliogrficas electrnicas, observaciones y evaluaciones en cada sesin
prctica. La presente edicin del Manual lleva las correcciones y sugerencias observadas en ediciones anteriores,
tambin se han incorporado nuevas prcticas que permitirn ampliar el rea de conocimientos del estudiante en
esta asignatura.
La presente edicin se ha elaborado teniendo en cuenta los insumos adquiridos para los laboratorios en el presente
ciclo acadmico. Es nuestro deseo que el presente manual pueda ayudar al estudiante en la comprensin terica
y ejecucin prctica de la asignatura y en la apertura de investigaciones bsicas en el gran campo de las Ciencias
de la Salud. Se espera que el esfuerzo desplegado, cumpla su cometido en bien de una ptima formacin
profesional y una mejor comprensin del papel importante que cumple el estudio de la Bioqumica en el campo de
las Ciencias Biomdicas. As mismo se esperan las valiosas sugerencias de colegas y estudiantes que permitan
el perfeccionamiento de este manual en ediciones futuras.
LOS AUTORES
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NDICE
Pgina
PRESENTACIN 2
NDICE 3
NORMAS, RECOMENDACIONES Y PRECAUCIONES PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO
DE BIOLOGA Y BIOQUMICA 4
PRCTICA No 1: BIOSEGURIDAD Y MANEJO DE EQUIPOS E INSTRUMENTOS UTILIZADOS EN
BIOQUMICA 6
PRCTICA No 2: ESPECTROFOTOMETRA 15
PRCTICA No 3: OBTENCIN DE MUESTRAS DE SANGRE Y MANEJO DE SUERO Y PLASMA 20
PRCTICA No 4: METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS: DETERMINACIN DE GLICEMIA 27
PRCTICA No 5: DETERMINACIN CUANTITATIVA DE COLESTEROL LQUIDO 31
PRCTICA No 6: DETERMINACIN CUANTITATIVA DE TRIGLICRIDOS 34
PRCTICA No 7: DETERMINACION CUANTITATIVA DE PROTENAS TOTALES 38
PRCTICA No 8: ENZIMOLOGA I: DETERMINACIN DE LIPASA 43
PRCTICA No 9: ENZIMOLOGA II: DETERMINACIN DE FOSFATASA ALCALINA 49
PRCTICA No 10: : DETERMINACIN DE CREATININA 50
PRCTICA No 11 DETERMINACIN DE BILIRRUBINA TOTAL Y DIRECTA 53
PRCTICA N 12: EVALUACIN DEL ESTADO NUTRICIONAL 57
BIBLIOGRAFA
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MANUAL DE PRCTICAS BIOQUMICA
NORMAS, RECOMENDACIONES Y PRECAUCIONES PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO DE BIOLOGA

Y BIOQUMICA
El trabajo en el laboratorio, requiere la observacin de una serie de normas de seguridad, a fin de evitar posibles
accidentes debido a desconocimiento de lo que se est haciendo a una posible negligencia. Quien trabaja en el
laboratorio est expuesto a muchos riesgos, pues hay productos qumicos que son txicos, inflamables, explosivos,
corrosivos, carcinognicos y, a veces, existe el peligro derivado del uso de altos voltajes, de luz ultravioleta y otras
radiaciones.
I. NORMAS PERSONALES
1. Seguir las instrucciones y recomendaciones dadas por el docente para cada sesin prctica. No manipule
muestras, materiales, instrumentos o equipos por su cuenta.
2. Procure ingresar al laboratorio a la hora sealada, con el guardapolvo puesto y con el material de trabajo
previamente solicitado.
3. Es conveniente la utilizacin de guardapolvo (mandil) ya que evita que posibles sustancias qumicas lleguen a la
piel; adems, se evita posibles deterioros de las prendes de vestir. El guardapolvo es de uso exclusivo en el
laboratorio, hay que sacrselo si se va abandonar el mismo.
4. Si se tiene el cabello largo, es conveniente llevarlo recogido.
5. Durante su permanencia en el laboratorio aproveche y use adecuadamente el tiempo, materiales de trabajo, agua,
corriente elctrica, gas, mobiliario y espacio.
6. No arroje desechos a los lavaderos ni al piso. Procure colocarlos en los tachos correspondientes para que sean
descartados una vez finalizada la prctica. En el tacho con bolsa ROJA, se desechan los residuos de materiales
biolgico (restos vegetales y animales, material contaminado con sangre u otros); en el tacho con bolsa NEGRA
se arrojan los desperdicios comunes no contaminados (papeles, plsticos, etc.).
7. Est estrictamente prohibido comer, beber y fumar dentro del laboratorio.
8. Sobre la mesa de trabajo del laboratorio debe de tener solamente el material solicitado y libreta de apuntes.
Coloque las carteras, mochilas, libros y otros en los casilleros o en los lugares destinados para ellos.
9. Durante el desarrollo de la prctica observe y grafique con detalle los diversos experimentos, protocolos o vistas
microscpicas; intercambie conceptos, ideas y puntos de vista con sus compaeros y profesor.
10. Al trmino de la prctica el estudiante debe limpiar su mesa de trabajo, lavar el material de vidrio utilizado, lavarse
cuidadosamente las manos, despojarse del guardapolvo y retirarse ordenadamente.
II. NORMAS DE UTILIZACIN DE PRODUCTOS QUMICOS
1. Antes de utilizar un compuesto qumico, asegurarse de que es el que se necesita.

2. No devolver a los frascos de origen los sobrantes de los productos qumicos o medios de cultivo. Si existiese
sobrante, desecharlo.
3. No tocar con las manos y menos con la boca, los productos qumicos, utilizar peras de succin o propipetas.
4. Los cidos requieren un cuidado especial, cuando haya que diluirlos, nunca echar agua sobre ellos; por el
contrario, se debe agregar el cido sobre agua.
5. Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) no deben estar cerca de fuentes de calor. Si hay que calentar
tubos con estos productos, se har al bao mara, nunca directamente a la llama.
6. Si se vierte sobre la piel cualquier cido o producto corrosivo, lavarse inmediatamente con abundante agua y avisar
al encargado del laboratorio.
7. Si se preparan soluciones qumicas, stas deben colocarse en un frasco limpio y seco y rotulado
convenientemente.
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III. NORMAS DE UTILIZACIN DEL MATERIAL DE VIDRIO
1. Tener cuidado con los bordes y puntas cortantes de los tubos u objetos de vidrio.
2. El vidrio caliente no se diferencia a simple vista del vidrio frio. Para evitar quemaduras, dejarlo enfriar antes de
tocarlo.
3. Las pipetas usadas deben colocarse en recipientes que contienen una solucin desinfectante (mezcla sulfocrmica
o bicloruro de mercurio). De la misma manera se procede para tubos de ensayo, lminas cubreobjetos y laminillas.
4. Si se tiene que calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo, debe considerarse lo siguiente:
a) La boca del tubo de ensayo no debe apuntar a ningn compaero de trabajo ni a s mismo. Puede hervir el
lquido y salir disparado, ocasionando un accidente.
b) El tubo de ensayo debe calentarse por la parte lateral, nunca por el fondo, agitando suavemente.
Todos los que trabajan en el laboratorio, deben saber dnde est el botiqun, las botellas de irrigacin de los ojos, y
los extintores de incendio.
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PRACTICA N 1
BIOSEGURIDAD Y MANEJO DE EQUIPOS E INSTRUMENTOS
UTILIZADOS EN BIOQUMICA
I. COMPETENCIAS:
1.1. Conoce las normativas para proteger la salud de las personas que puedan estar expuestas a riesgos
relacionados con la exposicin a agentes biolgicos, qumicos, fsicos, ergonmicos y psicosociales, en el
laboratorio.
1.2. Comprende el manejo y eliminacin de residuos generados en el laboratorio.
1.3. Reconoce smbolos internacionales para su desempeo correcto dentro y fuera de las instalaciones del
laboratorio.
1.4. Reconoce los diferentes equipos e instrumentos utilizados en el desarrollo de la parte prctica del curso de
Bioqumica.
II. INTRODUCCIN:
En el campo de la salud existen diversos lugares donde el profesional se desempea, como hospitales, clnicas,
postas, centros asistenciales, etc. Sin embargo el laboratorio tambin constituye un lugar de trabajo, tanto en el
campo clnico, educativo, de investigacin e incluso de enseanza, siendo por ello necesario que se conozcan las
pautas mnimas necesarias para el normal desempeo dentro de l.
Se define como bioseguridad al conjunto de combinaciones especficas (normas) de trabajo, equipo de seguridad
y facilidades diseadas para minimizar la exposicin de los trabajadores y el ambiente a los agentes infecciosos;
es as que las normas de bioseguridad estn destinadas a reducir el riesgo de transmisin de microorganismos de
fuentes reconocidas o no reconocidas de infeccin en Servicios de Salud vinculadas a accidentes por exposicin
a sangre y fluidos corporales, as como tambin agentes fsicos y qumicos.
Los objetivos de estas normas son:

1. Proteger la salud del personal que pueda estar expuesto a riesgos relacionados con la exposicin a agentes
biolgicos, qumicos y fsicos.
2. Establecer la conducta a seguir frente a un accidente con exposicin a dichos elementos.
3. Participar de las normas de Bioseguridad a todo el personal que directa o indirectamente toma contacto con el
laboratorio.
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NIVELES DE BIOSEGURIDAD
TIPOS DE REAS DE TRABAJO:
1. rea contaminada.- rea donde se manipulan microorganismos de riesgo. Ejemplo: Laboratorios donde se
manipulan virus, produccin de antgenos etc.
2. rea de trnsito limitado.- rea donde el trnsito est permitido slo a personas previamente autorizadas,
debido a la presencia de agentes microbianos que tienen poca capcidad de causar enfermedad al ser humano
(Grupo I y II). El acceso del personal administrativo est terminantemente prohibido.
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3. rea de trnsito restringido.- rea en las que el trnsito est permitido slo al personal adecuadamente
protegido y autorizado, debido a la presencia de agentes del grupos III (Puede causar una enfermedad grave
en el hombre y presenta un serio peligro para los trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad
y existiendo frente a l generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. Implican patologa grave, de difcil y largo
tratamiento, que pueden curar con secuelas y ocasionalmente producir la muerte).
4. rea limpia.- rea del laboratorio donde no se manipulan microorganismos de riesgo. Ejemplo: donde se
mantienen los medios de cultivos celulares, se preparan los medios de cultivo y a la vez se realiza la formulacin
de la vacuna.
5. rea libre.- rea de trnsito libre para todo el personal. Ejemplo: pasadizos comunes, comedor y otras reas
de uso comn.
MICROORGANISMOS INFECTANTES POR GRUPOS DE RIESGO
Grupo de riesgo Microorganismo infectante

RIESGO 1
- Acanthamoeba
Agrupa microorganismos que tienen
- Plasmodium
escaso o nulo riesgo de provocar
- Protozoarios
enfermedades
- Helmintos intestinales
RIESGO 2
- Acinetobacter - Treponema pallidum
Agrupa a microorganismos que - Aeromonas - Vibrio
pueden provocar enfermedades - Bordetella - Neisseria
humanas de riesgo moderado. - Bartonella bacilliformis - Salmonella typhi
Si provoca una infeccin al personal - Clostridium - Shigella
de laboratorio, sta tiene tratamiento y - Corynebacterium - Yersinia
cura - Entamoeba hystolitica - Pseudomonas
- Escherichia coli - Sataphylococcus
entoropatgena - Haemophylus
- Leishmania - Leptospira
RIESGO 3
Agrupa microorganismos que pueden - Brucella - Paracoccidiodis brasilensis

provocar enfermedades humanas - Histoplasma capsulatum - Taenia solium
graves. Tienen tratamiento, cura y se - Mycobacterium - Trypanosoma cruzi
limita. tuberculosis - Yersinia pestis
- Mycobacterium bovis
RIESGO 4
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Agrupa microorganismos que - Virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)

provocan enfermedades graves en el - Virus de fiebre hemorrgica bola.
ser humano. No hay tratamiento para
su cura.
SEALES DE SEGURIDAD (PICTOGRAMAS)
1. DE PROHIBICIN: Redondas, con pictograma de color negro sobre fondo blanco, con bordes y banda transversal
de izquierda a derecha. Ejemplos:
DE ADVERTENCIA: Triangulares, con pictogramas de color negro y fondo amarillo o naranja.
2. DE SEGURIDAD: Rectangulares o cuadrangulares, con pictogramas de color blanco y fondo verde.
3. DE OBLIGATORIEDAD: Circulares y con pictogramas de color blanco con fondo azul.
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GESTIN EN MANEJO DE RESIDUOS
1. Generalidades: La gestin de residuos debe ser considerada como una parte importante de la seguridad
en los laboratorios. Los desechos que se generan pueden estar contaminados por microorganismos o
contener sustancias qumicas txicas y peligrosas. En menor medida, el personal del laboratorio puede
estar expuesto a los efectos de las radiaciones ionizantes.
Los casos de infecciones o intoxicaciones en el laboratorio son conocidos lo que obliga a la adopcin de
medidas de proteccin para el personal que trabaja en este mbito. La visin que se pretende dar est
sobre todo encaminada a la proteccin del personal de los laboratorios, no olvidar que las actividades que
en ellos se realizan pueden afectar a la salud comunitaria.
La mejor manera de racionalizar los residuos es mediante una gestin integrada cuyos pilares bsicos son
la minimizacin, segregacin y eliminacin.
2. Clasificacin de los Residuos segn su Peligrosidad:
Clase A: Residuos Biocontaminados (Peligrosos)

Tipo A 1: Atencin al paciente. Instrumentos y materiales utilizados en la toma de muestra de
sangre, tejidos y otros.
Tipo A 2: Material biolgico.
Tipo A 3: Sangre humana y productos derivados.
Tipo A 4: Quirrgicos y anatomopatolgicos.
Tipo A 5: Animales contaminados.
Clase B: Residuos Especiales

Tipo B 1: Qumicos peligrosos.
Tipo B 2: Farmacuticos.
Tipo B 3: Radioactivos.
Clase C: Residuos Comunes: Similares a los domsticos. Incluye a los generados en administracin
como: cartn, papel, material de oficina, basura orgnica, etc.
3. Manejo de Residuos Slidos:

Las bolsas de recoleccin de residuos slidos se deben de diferenciar por colores:
Residuos Biocontaminados: Color roja.
Residuos Especiales: Color amarilla.
Residuos comunes: Color negra.
Si los residuos son punzantes o cortantes debe utilizarse recipientes rgidos resistentes a la perforacin
cuyo volumen no supere los 2 L y que contengan desinfectante (hipoclorito de sodio al 10%), el cual debe
ocupar los 2/3 del volumen del recipiente.
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MANEJO DE EQUIPOS E INSTRUMENTOS UTILIZADOS EN BIOQUMICA
ESPECTROFOTMETRO
El Espectrofotmetro es un instrumento para medir la trasmitancia o absorbancia de una muestra, en funcin de

la longitud de onda de la radiacin electromagntica. Un espectrofotmetro consta de los siguientes
componentes clave:
1. Una fuente que genera una banda ancha de radiacin electromagntica. Puede ser una lmpara halgena o
de volframio que suministra la luz de la zona visible del espectro (400 700nm), o de nen, argn o de
hidrgeno, para la zona ultravioleta (200 400 nm)
2. Un dispositivo de dispersin que selecciona una longitud de onda particular de la radiacin de la fuente.
Comnmente, se utilizan prismas y redes halogrficas de difraccin, que junto a una rendija de entrada y otra
de salida configuran el monocromador
3. Un rea de muestra: Clula transparente a la radiacin incidente monocromtica que contiene el material bajo
estudio disuelto en un solvente adecuado. Suele ser de 1 cm. De espesor.
4. Uno o ms detectores para medir la intensidad de la radiacin: Normalmente, es un tubo fotomultiplicador o
un tubo fotodiodo.
Fig 1. Espectrofotmetro UNICO S2100UV
Anlisis colorimtricos: El objetivo del anlisis cualitativo es identificar una substancia o encontrar los
elementos que la componen. El anlisis cuantitativo es usado para determinar la cantidad (concentracin) de un
componente especfico de la muestra. El anlisis colorimtrico es una tcnica de determinacin cuantitativa, que
compara la densidad de color de la muestra con el de un patrn.
La muestra coloreada tiene caractersticas especiales de absorcin y de esta forma su color complementario es
adsorbido en la regin visible. La cantidad o concentracin de una substancia puede ser determinada por la
medicin del quantum del color complementario absorbido. Esto es el principio de los anlisis colorimtricos. Si
la muestra fuera incolora y transparente, se adicionan reactivos que a travs de reacciones qumicas produzcan
el color.
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MEDICIN DE VOLMENES
PIPETAS Y MICROPIPETAS
Las mediciones y transferencias de volmenes exactos y precisos son requisitos bsicos de la bioqumica . Estos
procedimientos son hechos utilizando instrumentos como las pipetas manuales, las micropipetas, las buretas, las
probetas o los balones de aforar. Cada uno de ellos cumple una funcin en particular dentro del laboratorio pero
en algunos casos estas funciones pueden sobreponerse. El grado de precisin de los mismos puede variar
considerablemente as que la utilidad del instrumento a utilizar para realizar una medicin en particular es un
paso crtico para obtener el resultado esperado.
MICROPIPETAS AUTOMTICAS
Las micropipetas son instrumentos que se utilizan para la dispersin de lquidos en el Laboratorio de Bioqumica.
Los volmenes de las soluciones que se necesitan medir son en el orden de microlitros (L), requirindose
exactitud, precisin y reproductibilidad de los mismos. Los errores en la medicin que se pueden cometer
dependen en gran medida del usuario y no de las micropipetas en s. El funcionamiento se basa en el principio
de desplazamiento del aire y en la utilizacin de puntas desechables. Las pipetas cubren un amplio rango de
volumen que va de 0,5 microlitros hasta 5 ml. Para que las medidas sean correctas deben tenerse en cuenta las
siguientes consideraciones generales:
1. La micropipeta debe mantenerse siempre en posicin vertical durante todo el proceso de pipeteo, nunca
inclinada. Tambin, cuando la pipeta no se utilice se debe dejar siempre en posicin vertical en el soporte de
pipetas. Nunca la deje horizontalmente encima de la mesa y menos una vez que tenga lquido succionado.
2. ada pipeta sirve para medir un determinado volumen. Las de volumen fijo miden solamente un nico volumen.
En las de volumen variable, se puede seleccionar un volumen dentro de un rango de valores determinado. En
stas, solo se deben ajustar volmenes a los que se recomiendan para cada micropipeta.
3. Las micropipetas existen de rango nico y rango variable, en el caso de estas ltimas algunas traen un freno
que impide cambiar de volumen, tener cuidado al momento de manipular estas micropipetas para evitar su
deterioro. Al cambiar de volumen hacerlo lentamente para evitar malograr el instrumento.
4. Los modelos que toman volmenes inferiores a 200 L usan puntas o tips amarillos, y las micropipetas que
toman volmenes superiores a 200 L hasta 1000 L usan puntas azules. La micropipetas que miden volmenes
menore s 20 L utilizan puntas blancas o transparentes.
5. La micropipeta debe cogerse como un pual. La empuadura debe de reposar sobre el dedo ndice.
Todas las micropipetas tienen dos topes. Para el pipeteo de rutina se utiliza el modo directo, consistente en:1)
Presin hasta el primer tope para tomar el volumen calibrado. 2) Presin hasta el segundo tope para expulsar el
volumen tomado.
6. Existen otros modos de pipeteo que se utilizan para Soluciones muy viscosas o cuando se tenga que pipetear
repetidamente una solucin. Tanto la presin como la liberacin del mbolo de la pipeta se debe realizar
lentamente y con suavidad. Si se realiza bruscamente, se pueden formar burbujas dentro de la punta de la
pipeta, que alteraran las medidas. Tambin se pueden formar burbujas si la punta no est ajustada a la pipeta.
La solucin es ajustarla mejor.
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Fig. 2 Micropipeta mostrando sus partes
CENTRFUGA
Equipo de laboratorio que sirve para separar sustancias de diferentes densidades utilizando la fuerza centrfuga.
La centrifugacin es una tcnica de sedimentacin acelerada, empleada en el anlisis o separacin de mezclas
de partculas, clulas, arganelas, o molculas. Se puede regular velocidad, tiempo, temperatura, existiendo
rotores angular y baculante.
CLASES DE CENTRIFUGACIN
Segn la velocidad:
a. A baja velocidad (menos de 10 rpm).
b. A alta velocidad (entre 10,000 a 20,000 rpm).
c. Ultracentrifugacin (ms de 20,000 rpm).
Fig. 3 Centrfuga digital
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Segn el propsito:
a .Centrifugacin analtica: Mide propiedades fsicas de partculas que sedimentan (coeficiente de

sedimentacin o masa molecular).
b. Centrifugacin preparativa: Aisla partculas, clulas o molculas.
Segn el medio en el que se centrifuga y la forma como se aplica:
a.Centrifugacin diferencial (frontera mvil): el comportamiento de cada componente de la muestra depende de

su forma tamao y densidad. Se obtiene dos fracciones sedimento y sobrenadante.
b. Centrifugacin zonal o de velocidad de sedimentacin: la muestra se aplica en una capa delgada sobre el
medio de centrifugacin, que es un gradiente de densidad.
c. Centrifugacin isopcnica o de equilibrio de sedimentacin: Se utiliza una gradiente de densidad, pero el

tiempo de sedimentacin es lo suficientemente largo (hasta 1 o 2 das) como para que se alcance el equilibrio
de sedimentacin (entre la fuerza centrfuga, el empuje hidrosttico de la clula y su difusin)
d. Mtodos de barrera: mtodo rpido, tpico por ejemplo en la obtencin de linfocitos de sangre circulante libres
del resto de clulas sanguneas.
e. Centrifugacin en un medio de densidad constante. Se emplea para ellos medios comerciales como Ficol-
Paque, lymphoprep, entre otros.
BAO MARA
El bao de Mara (Fig 4 y 4b) es un equipo que se utiliza en el laboratorio para realizar pruebas serolgicas y
procedimientos de incubacin, aglutinacin, inactivacin, biomdicos, farmacuticos y hasta industriales. Por lo
general, se utilizan con agua, pero tambin permiten trabajar con aceite. Los rangos de temperatura en los cuales
normalmente son utilizados estn entre la temperatura ambiente y los 60 C. Tambin se pueden seleccionar
temperaturas de 100 C, utilizando una tapa de caractersticas especiales. Los baos de Mara son fabricados
con cmaras cuya capacidad puede seleccionarse entre los 2 y los 30 litros.
Fig. 4a Bao Maria
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Fig.4b. Partes del Bao Maria
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PRACTICA N 2
ESPECTROFOTOMETRA
I. COMPETENCIAS.
1. Explica las bases tericas del uso y funcionamiento de un espectrofotmetro.

2.Manipula y opera correctamente el espectrofotmetro UNICO S2100 UV.
3.Comprende el concepto de Espectrofotometra.
4.Aplica la tcnica de la fotometra en la medicin de la concentracin desconocida de un colorante a travs de
una curva de calibracin previamente construida.
II. INTRODUCCIN.
El estudio a nivel bioqumico de cualquier biomolcula requiere la utilizacin de tcnicas analticas que permitan
su determinacin cualitativa y cuantitativa, as como su caracterizacin fsico-qumica y biolgica. Uno de los
mtodos ms sencillos, accesibles, tiles y utilizados es la espectrofotometra, en general, y la espectrofotometra
ultravioleta-visible, en particular. Se pueden identificar y cuantificar biomolculas en solucin y en muestras
biolgicas, con el empleo de reactivos especficos que reaccionan con el compuesto a analizar y forman un
producto coloreado que permite detectarlo en muestras complejas.
El fundamento de la espectrofotometra se debe a la capacidad de las molculas para absorber radiaciones,

entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV-visible. Las longitudes de onda de las radiaciones que una
molcula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atmica y de las
condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza inica, constante dielctrica), por lo que dicha tcnica constituye
un valioso instrumento para la determinacin y caracterizacin de biomolculas.
FUNDAMENTACIN
Las molculas pueden absorber energa luminosa y almacenarla en forma de energa interna. Esto permite poner
en funcionamiento ciclos vitales como la fotosntesis en plantas y bacterias. Cuando la luz (considerada como
energa) es absorbida por una molcula se origina un salto desde un estado energtico basal o fundamental, E1,
a un estado de mayor energa (estado excitado), E2. Y slo se absorber la energa que permita el salto al estado
excitado.
Cada molcula tiene una serie de estados excitados (o bandas) que la distingue del resto de molculas. Como
consecuencia, la absorcin que a distintas longitudes de onda presenta una molcula - esto es, su espectro de
absorcin - constituye una seal de identidad de la misma. Por ltimo, la molcula en forma excitada libera la
energa absorbida hasta el estado energtico fundamental. En espectrofotometra el trmino luz no slo se aplica
a la forma visible de radiacin electromagntica, sino tambin a las formas UV e IR, que son invisibles. En
espectrofotometra de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV cercano, de 195-400 nm) y el
visible (400-780 nm).
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La regin UV se define como el rango de longitudes de onda de 195 a 400 nm. Es una regin de energa muy
alta. Provoca dao al ojo humano as como quemadura comn. Los compuestos con dobles enlaces aislados,
triples enlaces, enlaces peptdicos, sistemas aromticos, grupos carbonilos y otros heterotomos tienen su
mxima absorbancia en la regin UV, por lo que sta es muy importante para la determinacin cualitativa y
cuantitativa de compuestos orgnicos. Diversos factores - como pH, concentracin de sal y el disolvente - que
alteran la carga de las molculas, provocan desplazamientos de los espectros UV.
La fuente de radiacin ultravioleta es una lmpara de deuterio. En la regin visible apreciamos el color visible
de una solucin y que corresponde a las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color que
absorbe es el complementario del color que transmite. Por tanto, para realizar mediciones de absorcin es
necesario utilizar la longitud de onda en la que absorbe luz la solucin coloreada. La fuente de radiacin visible
suele ser una lmpara de tungsteno y no proporciona suficiente energa por debajo de 320 nm.
Longitud de Onda - (nm) Color Color Complementario

380-435 Violeta Verde-amarillo
435-480 Azul Amarillo
480-490 Azul-verdoso Anaranjado
490-500 Verde-azulado Rojo
500-560 Verde Prpura
560-580 Verde-amarillo Violeta
580-595 Amarillo Azul
595-650 Anaranjado Azul-verdoso
650-780 Rojo Verde-azulado
Transmitancia y Absorbancia: Cuando un rayo de luz de una determinada lo ondangitud de

de intensidad Io incide perpendicularmente sobre una disolucin de un c qumico queompuesto
absorbe luz o cromforo, el compuesto absorber una parte de la incidente (Ia) yradiacin
dejar pasar el resto (It), de forma que se cumple: Io = Ia + It
La Transmitancia (T) de una sustancia en solucin es la relacin entre la cantidad de luz transmitida que llega
al detector una vez que ha atravesado la muestra, It y la cantidad de luz que incidi sobre ella, Io, y se representa
normalmente en tanto por ciento: % T = It/Io x 100. La transmitancia nos da una medida fsica de la relacin de
intensidad incidente y transmitida al pasar por la muestra. La relacin entre %T y la concentracin no es lineal,
pero asume una relacin logartmica inversa.
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La absorbancia (A) es un concepto ms relacionado con la muestra puesto que nos indica la cantidad de luz
absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T, en consecuencia:
A = log 1/T = -log T = -log It/Io
Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia es del 100% e indica que la
muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces A vale log 1 = 0. La cantidad de luz
absorbida depender de la distancia que atraviesa la luz a travs de la solucin del cromforo y de la
concentracin de ste.
Ley de Lambert-Beer
Esta ley expresa la relacin entre absorbancia de luz monocromtica (de longitud de onda fija) y concentracin
de un cromforo en solucin:
A = log I/Io = cl
La absorbancia de una solucin es directamente proporcional a su concentracin a mayor nmero de

molculas mayor interaccin de la luz con ellas -; tambin depende de la distancia que recorre la luz por la
solucin a igual concentracin, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra ms molculas se
encontrar -; y por ltimo, depende de , una constante de proporcionalidad -denominada coeficiente de
extincin- que es especfica de cada cromforo. Como A es adimensional, las dimensiones de dependen de
las de c y l. La segunda magnitud (l) se expresa siempre en cm mientras que la primera (c) se hace, siempre
que sea posible, en M, con lo que las dimensiones de resultan ser M-1cm-1. Este coeficiente as expresado,
en trminos de unidades de concentracin molar (o un submltiplo apropiado), se denomina coeficiente de
extincin molar (M). Cuando, por desconocerse el peso molecular del soluto, la concentracin de la disolucin
se expresa en otras unidades distintas de M, por ejemplo gL-1, las dimensiones de resultan ser distintas, por
ejemplo g-1Lcm-1, y al coeficiente as expresado se denomina coeficiente de extincin especfico (s).
La ley de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores de c altos, vara con la concentracin,
debido a fenmenos de dispersin de la luz, agregacin de molculas, cambios del medio, etc.
Espectrofotmetro UV-visible: La medicin de absorbancia de la luz por las molculas se realiza en unos
aparatos llamados espectrofotmetros. Todos constan, segn se indica en la figura, de:
Fig. 6 SISTEMA INTERNO DEL EXPECTROFOTMETRO
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18
PARTES DEL ESPECTROFOTMETRO
1. Una fuente de energa radiante: lmpara de deuterio y tungsteno.

2. Un monocromador para la seleccin de radiaciones de una determinada longitud de onda: filtros, prismas, redes de
difraccin.
3. Un compartimento donde se aloja un recipiente transparente (cubetas) que contenga la muestra. Pueden ser de
vidrio, cuarzo o plstico transparente. Para medir en UV se deben usar las de cuarzo o slice fundido, porque el vidrio
no transmite la radiacin UV.
4. Un detector de luz y un amplificador convertidor de las seales luminosas en seales elctricas.
5. Un registrador o sistema de lectura de datos.
Desde el punto de vista operativo, el primer paso es seleccionar la fuente de luz y longitud de onda a la que se va a
realizar la medida. Hay espectrofotmetros de un solo haz (con una sola celdilla para alojar la cubeta con la muestra) y
de doble haz (con dos celdillas para dos cubetas); en nuestro caso se trabajar con los de un solo haz, pero con cmara
para cuatro cubetas. Se mide primero la absorbancia del disolvente (conocido como blanco) y al que se le asigna el
valor de cero mediante el ajuste del mando, de forma que la intensidad incidente y transmitida sean iguales (Io= It), y
por tanto la absorbancia es cero. A continuacin se pone en la celdilla la cubeta con la muestra y se lee la absorbancia
de sta.
El espectrofotmetro es un equipo utilizado para la medicin de color; sin embargo, no mide directamente el color, mide
la luz reflejada o transmitida por un material. Esta informacin, despus de una integracin de estmulos, se transforma
en expresiones numricas del color. Un espectrofotmetro moderno consiste en una fuente de energa radiada, un
sistema de dispersin para proporcionar radiaciones monocromticas, y un sistema detector para medir la cantidad de
radiacin que atraviesa el instrumento.
III. MATERIAL Y MTODOS
3.1 Materiales y equipos

Materiales:
10Tubos de ensayo 13x100
Azul de Metileno 0.1 mg/mL
Safranina 0.1 mg/mL
Agua destilada 500 ml
Equipos e instrumentos:
01 Espectrofotmetro nico 2100 UV-VISIBLE
Micropipetas automticas de 2-20, 100-1000 L.
Otros:
10 cubetas para espectrofotmetro.
03 gradilla
03 Marcadores indelebles
Tips para micropipeta de rango variable
Procedimiento.
3.2 Determinacin de los espectros de absorcin:

1. Llenar hasta lo permitido una cubeta para espectrofotmetro con colorante azul de metileno
(realizar lo mismo con la solucin de safranina).
2. Llevar a cero de absorbancia el equipo, con agua destilada.
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19
3. Leer la absorbancia del colorante preparado para cada una de las longitudes de onda en el
espectrofotmetro, segn lo sealado en la tabla 1 y anotar los resultados.
4. Reconocer cual es la longitud de onda, que corresponde a la mxima Absorbancia.
Construir una grfica, colocando las absorbancias en las ordenadas y las longitudes de onda en las
abscisas.
3.2.1 Preparacin de una curva de calibracin:

1. Preparar 5 diluciones del colorante proporcionado (1:2, 1:4, 1:8, 1:16 y 1:32), utilizando agua
destilada como diluyente.
2. Leer cada dilucin a la longitud de onda seleccionada en la experiencia anterior.
3. Construir un grfico en un papel milimetrado colocando la Absorbancia en el eje de las ordenadas
y las concentraciones en el eje de las abcisas. Tener en consideracin que la concentracin menos
diluida es 1:32 (0.03125 de colorante y 1.9687 de agua).
4. Preparar una solucin de colorante (0,1 mg/ml) utilizada, leer la absorbancia y utilizando la curva
de calibracin determine su concentracin.
I. RESULTADOS.
Tabla 1: Absorbancias para azul de metileno (0.1 mg/mL), segn longitudes de onda.
Longitud de onda Absorbancia Azul de metileno

410
460
510
560
610
660
Tabla 2: Absorbancias para diluciones de azul de metileno (0.1 mg/mL), a una longitud de onda de:
Longitud de onda Absorbancia Azul de metileno

1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
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20
PRACTICA N 3
OBTENCIN DE MUESTRAS DE SANGRE Y
MANEJO DEL SUERO Y PLASMA
I. COMPETENCIAS.
1. Reconoce reas especficas para la obtencin de muestras de sangre.

2. Obtiene una muestra de sangre capilar mediante el mtodo de puncin cutnea.
3. Obtiene una muestra de sangre venosa en tubo de ensayo con y sin anticoagulante
4. Comprende la importancia de la obtencin correcta de muestras de sangre para un anlisis bioqumico.
II. INTRODUCCION:
El objetivo del laboratorio clnico es la obtencin de informacin sobre el estado de salud de una persona. Esta
informacin puede utilizarse para establecer un diagnstico, evaluar la evolucin y/o pronstico de una
enfermedad, valorar la efectividad de un tratamiento, realizar un cribado en una poblacin, etc. Para ello, a
partir de muestras biolgicas, se realizan pruebas en las que se miden una serie de magnitudes de ndole
diferente: bioqumicas, hematolgicas, inmunolgicas, microbiolgicas, parasitolgicas, toxicolgicas, etc.
La toma de muestras es el acto en el que se obtiene, una parte de tejido, lquido, secrecin o excremento de
una persona, para su estudio en un laboratorio, cuando dicha obtencin se efecta con un mtodo invasivo se
denomina extraccin. Las muestras que se requieren para los estudios hematolgicos son: sangre (venosa y
capilar), mdula sea y L.C.R.
Se puede considerar que la sangre es un tejido conectivo fluido, porque est compuesto por clulas y una
sustancia intercelular lquida: el plasma sanguneo. La cantidad total de sangre en un individuo adulto es de
aproximadamente 5-6 litros, representando as el 7-8% del peso corporal. El plasma corresponde al 54% del
volumen sanguneo, mientras que la porcin celular, representa el 46% restante. La sangre es el lquido ms
frecuentemente utilizado con finalidades analticas. Los tres procedimientos generales para la obtencin de
sangre de un individuo son: puncin arterial, puncin venosa, puncin cutnea.
En los tres casos, si inmediatamente de extrada la sangre se mezcla en un tubo con un anticoagulante, se tiene
lo que se llama sangre entera, y se mantiene en ese estado por un tiempo prolongado. Si luego el tubo se
centrifuga a baja velocidad, se obtienen dos fracciones claramente definidas:
a. Un precipitado de clulas, compuesto por eritrocitos comprimidos (aproximadamente 45% del volumen
total) por encima de los cuales existe un volumen de glbulos blancos y plaquetas (aprox. 1%)
b. un sobrenadante fluido que corresponde al plasma y representa el 54% restante.
Si no se agregan anticoagulantes a la sangre, y se deja reposar el tubo durante unos minutos, se produce la
coagulacin de esa muestra, obtenindose tambin dos fracciones:
a. el cogulo, constituido principalmente por las clulas y
b. el lquido excluido del cogulo denominado suero.
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En resumen, el suero se diferencia del plasma porque carece de fibringeno (que ha sido convertido en la fibrina
del cogulo), protrombina y otros factores de la coagulacin consumidos durante dicho proceso, y por contener
adems, en baja concentracin, sustancias de importancia fisiolgica liberadas por las plaquetas durante la
coagulacin, por ejemplo, el factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF).
La tcnica de eleccin para la obtencin de muestras de sangre depender de los parmetros que se deseen
analizar. La puncin venosa es tcnicamente ms fcil y es la usualmente utilizada para la mayora de las
determinaciones de rutina, pero proporciona valores incorrectos de saturacin de O2 y pCO2, parmetros que
deben medirse a partir de una puncin arterial. Estas determinaciones de los gases en sangre son crticas para
valorar los problemas de oxigenacin que se encuentran en enfermedades tales como el asma, neumonas,
embolia pulmonar.
La sangre obtenida por puncin de la piel (a veces denominada incorrectamente sangre capilar) es una mezcla
de sangre procedente de arteriolas, vnulas y capilares, y contiene tambin lquido intersticial e intracelular.
Por lo tanto, est compuesta por una fraccin arterial y una fraccin venosa. La mayor presin en las arteriolas
hace que la muestra sea ms rica en sangre arterial.
1.1Extraccin de sangre venosa

La sangre venosa es la muestra hematolgica por excelencia, por la riqueza de datos que aporta y su relativa
facilidad para obtenerla.
Normas bsicas para la extraccin de sangre venosa
a. Identificar SIEMPRE al paciente antes de realizar la extraccin. En el caso de extraer muestras para una
transfusin sangunea esta identificacin se har de forma inequvoca.
b. Colocar el compresor (o torniquete) entre 7 y 10 cm por encima del lugar elegido para la venopuncin, soltarlo
inmediatamente despus de canalizar la vena. NUNCA DEBE ESTAR COLOCADO MS DE DOS MINUTOS
pues altera el equilibrio entre el lquido y los elementos formes de la sangre (aumento 10% el valor del
hematocrito, del 15% de la coagulacin, etc.)
c. Realizar una puncin lo ms atraumtica posible, sobre todo si incluye estudio de coagulacin, cuanto ms
limpia sea la puncin menos factores titulares se liberarn.
d. Evitar las causas de hemlisis de la muestra: El uso de jeringa y aguja para la extraccin multiplica el riesgo
de hemolizar las muestras: tirar con excesiva fuerza del mbolo de la jeringa, usar llave de tres vas, forzar el
paso de sangre por la aguja o llenar el tubo sin dejar deslizar la sangre por la pared interna del mismo
e. Si se usa jeringa y aguja para realizar la extraccin, hay que recordar: No destapar NUNCA los tubos, al
volver a cerrarlos puede producirse un exceso de presin dentro y hacer que salte el tapn durante el
transporte.
f. Respetar el volumen de llenado de cada tubo, y en especial el de coagulacin.
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g. Llenar los tubos dejando resbalar la sangre por la cara interna de los mismos, no dejarla caer directamente
al fondo, ni forzar el paso de la sangre por la aguja.
1.2 Extraccin de sangre en situaciones especiales
a. Evtese la extraccin de sangre del brazo donde el paciente tenga colocada una va de perfusin, la muestra
obtenida estar diluida. Si no hubiera otra opcin (vas en ambos brazos por ejemplo), y siempre que sea
posible, cierre la perfusin y espere al menos dos minutos para realizar la extraccin.
b. La extraccin de sangre de un catter debe asegurar que ni la solucin perfundida ni el uso de heparina van
a interferir en el resultado del anlisis. Siempre debe desecharse un volumen de al menos dos o tres veces el
de la luz del catter, si la extraccin es para un estudio de coagulacin no debe usarse este mtodo si no es
en el momento de la implantacin de la va. Se recomienda utilizar un adaptador de vaco para el llenado de
los tubos.
c. La obtencin de sangre arterial para realizar estudios hematolgicos no est aconsejada. En cualquier caso
tenga en cuenta que las jeringas de extraccin arterial estn heparinizadas, por lo que no pueden usarse para
la extraccin de un estudio de coagulacin.
d. No obstante, en la prctica diaria se dan situaciones en las que no es posible usar otra opcin que las
descritas en los puntos anteriores, en estos casos debe informarse al Laboratorio de las caractersticas de la
extraccin y de la imposibilidad de realizarla de otra forma.
1.3 Sangre capilar
La mal denominada sangre capilar es la obtenida mediante puncin cutnea. En realidad es una mezcla de
sangre procedente de arteriolas, vnulas y capilares con lquidos intersticiales e intracelulares; su composicin
depende fundamentalmente de la cantidad de flujo sanguneo en la zona de puncin y de la profundidad de
penetracin de la lanceta. En el laboratorio de bioqumica este tipo de muestra se usa para tres
determinaciones, el tiempo de sangra, determinacin de hematocrito y la determinacin del grupo sanguneo.
En adultos la zona de puncin ideal es el lateral de los dedos de la mano, en recien nacidos se usa tambin la
superficie plantar externa o interna del taln (sin superar los 2,4 mm de profundidad).
Aspectos que deben considerarse en una puncin cutnea:

a.Una vez desinfectada la zona de puncin debe dejarse secar el antisptico usado para que no interfiera en
el anlisis posterior de la muestra y para que haya un mejor flujo de las gotas.
b.Desechar la primera gota que fluye; est contaminada de factores y lquidos tisulares.
c.Si las gotas no fluyen libremente aplicar una ligera presin sobre la zona, no se debe exprimir ni forzar el
flujo, esto puede hemolizar la muestra o incrementar la proporcin de fluidos intersticiales en ella.
d.El precalentamiento de la zona de puncin puede favorecer su vascularizacin.
e.Utilizar siempre lancetas para realizar esta tcnica. El uso de agujas hipodrmicas est totalmente
desaconsejado. (Una de las primeras causas de pinchazos accidentales).
Rotulacin de muestras
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23
Las muestras se rotulan con las iniciales del paciente, la hora y fecha de la toma de muestra y los exmenes
a realizar.
III. MATERIAL Y MTODOS:

Material
Algodn hidroflico.
Alcohol al 70% o alcohol yodado.
Ligadura o torniquete de 25 a 30 cm de largo.
Jeringas de 5 mL.
Agujas descartables N 21 de 1 1/2"
Viales o tubos con anticoagulante EDTA (heparina citrato).
Viales o tubos sin anticoagulante.
Procedimiento para la obtencin de muestras de sangre

Puncin venosa
Se deben seguir los siguientes pasos:
a.Verificar que los elementos por utilizar estn listos, y que el paciente se sienta cmodo.
b.Aplicar el torniquete aproximadamente cuatro dedos por encima de la flexin del codo o de 7 a 10 cm del
codo, sujetar con un medio nudo (Fig. 7.1).
c.Limpiar la zona con alcohol al 70% o alcohol yodado, en un rea de 2 pulgadas (Fig.7.2).
d.El paciente deber abrir y cerrar la mano durante unos segundos y despus la mantendr cerrada, esto
ayudar a visualizar las venas superficiales (Fig.7.3).
e.Se retira el estuche protector de la aguja y se coge la jeringa de tal manera que el bisel se encuentre hacia
arriba (Fig. 7.4).
f.Se coloca la aguja en direccin paralela a la vena (haciendo un ngulo de 45), se perfora la piel haciendo
avanzar la aguja 0,5-1 cm en el tejido subcutneo, luego se perfora la vena (Fig. 7.5).
g.Se aspira la jeringa hasta el volumen requerido.
h.Se retiraa el torniquete y se indica al paciente que deje de hacer puo. Colocar el algodn seco encima de
la puncin y se retirar la aguja (Fig.7.6).
i.Retirar la aguja de la jeringa. Verter la muestra lentamente por las paredes del vial con anticoagulante. No
olvidar colocar una gota en la lmina portaobjeto para realizar el frotis. Agitar el vial en crculos sobre la mesa
para homogeneizar la muestra con el anticoagulante.
Fig 7a. Venas para la puncin

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Fig. 7b Venas distales de extremidades superiores
Fig. 7c. Venopuncin
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Fig. 7d. Patrones de trayecto de las venas superficial en la fosa cubital derecha. Los patrones se clasificaron en
cuatro tipos: vena ceflica (CV), vena baslica (BV), vena cubital medial (MCV), vena antebraquial mediana (MABV)
Fig. 7 Procedimiento para la extraccin
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Puncin cutnea
Cuando la cantidad de sangre que se precisa es muy pequea o cuando por diferentes motivos no pueda
practicarse una puncin venosa, debe recurrirse a la puncin capilar.
Materiales requeridos:
Algodn.
Alcohol al 70%.
Lancetas desechables.
Papel de filtro No 2
Procedimiento:
a.La sangre capilar se obtiene de la cara lateral del dedo medio o anular en los adultos y del dedo gordo del
pie o taln en los nios.
b.Desinfectar la zona con alcohol al 70%, secar con algodn estril.
c.Punzar la piel con una lanceta estril desechable (2 mm de profundidad).
d.Usar gasa estril para desechar la primera gota y recoger las siguientes en tubos capilares. Evitar
comprimir la extremidad para obtener sangre porque se altera la composicin sangunea.
Fig. 8 reas para la toma de muestra

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PRACTICA N 4
METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS:
DETERMINACIN DE GLICEMIA
I. COMPETENCIAS
1. Comprende y explica la importancia de la glucosa en el metabolismo humano y su relacin con diversas

patologas.
2. Determina la concentracin de glucosa en estado basal en una muestra biolgica mediante el mtodo
enzimtico colorimtrico.
3. Explica la importancia de este procedimiento y su aplicacin en la prctica clnica
II. INTRODUCCIN
Los carbohidratos se definen como aldehdos y cetonas polihidroxlicos (aldosas y cetosas, respectivamente). Los
carbohidratos simples como la glucosa se denominan monosacridos. Dos monosacridos ligados por un puente
llamado glucosdico forman un disacrido. Ms de dos monosacridos unidos por puentes glucosdicos se denomina
polisacrido. Los carbohidratos de la dieta consisten de monosacridos tales como la glucosa, fructosa y galactosa;
de disacridos tales como la sacarosa, lactosa y maltosa y de polisacridos tales como el almidn. Las enzimas
intestinales convierten a los disacridos y polisacridos en monosacridos.
La principal funcin bioqumica de la glucosa es la de proporcionar energa para los procesos de la vida. El adenosn
trifosfato ("ATP") es la fuente de energa universal para las reacciones biolgicas. La oxidacin de la glucosa por las
vas glucoltica y del cido ctrico es la fuente principal de energa para la biosntesis del ATP. El sistema para regular
los niveles de glucosa sangunea funciona para lograr dos fines. El primero es para almacenar glucosa en exceso
en relacin a las necesidades corporales inmediatas en un reservorio compacto (glucgeno) y el segundo es para
movilizar la glucosa almacenada de manera que mantenga el nivel de glucosa sangunea.
La regulacin de la glucosa sangunea es esencial para mantener al cerebro, cuya fuente energtica primaria es la
glucosa, abastecido por una cantidad constante de la misma. La funcin de la insulina es desviar la glucosa
extracelular a los sitios de almacenamiento intracelular en la forma de macromolculas (como el glucgeno, lpidos
y protenas). Es as que la glucosa es almacenada en tiempos de abundancia para los momentos de necesidad. En
respuesta a la baja glucosa en sangre, como en perodos de ayuno, una serie de agentes hiperglucemiantes acta
en las vas metablicas intermediarias para formar glucosa a partir de las macromolculas almacenadas. De esta
forma las protenas y el glucgeno son metabolizados para formar glucosa-6-fosfato (gluconeognesis), la cual es
hidrolizada a glucosa en el hgado y liberada a la sangre para mantener los niveles de glucosa sangunea.
Los agentes hiperglucemiantes ms importantes son el glucagn, la epinefrina, el cortisol, la tiroxina, la hormona de
crecimiento y ciertas hormonas intestinales. El comportamiento de cada uno de estos agentes es diferente en la
regulacin de la glucosa sangunea; mientras que la insulina favorece el metabolismo anablico (sntesis de
macromolculas), estas hormonas, en parte, inducen el metabolismo catablico para romper grandes molculas.
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Cuando se tiene un exceso de glucosa en la sangre por arriba del lmite superior normal para una edad, se presenta
la hiperglucemia. Aunque los valores altos de glucosa srica en ayunas se relacionan con suma frecuencia con la
presencia de diabetes sacarina, el nmero de enfermedades y trastornos fisiolgicos que pueden llevar a
incrementos mayores es vasto. El aumento de la concentracin de glucosa srica se dan en: respuesta a la tensin,
enfermedad de Cushing, diabetes mellitus, acromegalia, hipertiroidismo, pancreatitis crnica, administracin de
algunos frmacos como diurticos clorotiacdicos porque suprimen la secrecin de insulina, coma hiperosmolar no
cetnico.
La hipoglucemia es un trastorno caracterizado por una concentracin de glucosa en ayunas, menor al lmite inferior
normal para el grupo de edad y esto sucede en: enfermedad heptica, desnutricin, posgastrectoma, tolerancia
deficiente a la glucosa, administracin excesiva de insulina, hipoglucemia funcional o espontnea, ingestin de
alcohol en ayunas. Debido a que la concentracin de glucosa srica por lo general se vuelve anormal slo cuando
hay un trastorno grave de esta interaccin, el verificar la glucosa srica ayuda a evaluar la funcin e integridad del
sistema. La prueba de glucosa en ayunas evala de modo aproximado la capacidad del cuerpo para regular la
glucosa y proporciona informacin acerca de la clase de anormalidad, si es que la hay. No se tomarn alimentos ni
bebidas, excepto agua, cuando menos por ocho horas antes de tomar la muestra.
FUNDAMENTO:
La oxidacin de la glucosa a cido glucnico es catalizada por la glucosa oxidasa produciendo tambin perxido de
hidrgeno. El perxido de hidrgeno reacciona con la 4-aminoantipirina y el cido p-hidroxibenzoico en presencia
de la peroxidasa para dar lugar a un derivado quinnico, cuya coloracin es proporcional a la concentracin de
glucosa en la muestra.
UTILIDAD DIAGNSTICA
La determinacin de glucosa en suero u orina se utiliza para la evaluacin de los trastornos del metabolismo de los
hidratos de carbono. La glucosa es la fuente ms importante de energa de las clulas del organismo. La insulina,
producida en las clulas pancreticas, facilita la entrada de glucosa en las clulas de los tejidos.
El aumento de la glucosa en sangre est relacionada con una disminucin de la actividad de la insulina o con una
deciencia de ella. En suero o plasma se encuentran valores elevados de glucosa principalmente en pacientes con
diabetes mellitus pero tambin con pancreatitis aguda, sndrome de Cushing, acromegalia y gigantismo.
La hipoglucemia puede darse como respuesta al ayuno, o bien puede ser debida a frmacos, venenos o errores
congnitos del metabolismo. La presencia de glucosa en la orina sin que el individuo tenga diabetes suele ser una
seal de enfermedad en los tbulos renales.
La determinacin de glucosa en LCR tiene inters principalmente en caso de meningitis bacterianas, en las que su
concentracin es mnima o no se detecta.
Una nica prueba de laboratorio no permite establecer un diagnstico clnico. Este debe basarse en la totalidad de
los datos clnicos y de laboratorio.
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3.1. Material
Espectrofotmetro calibrado a 505 nm.
5 Tubos de ensayo de 13 x100mm, 1 micropipeta de 10 L y 1 micropipeta de 1000 L.
Puntas para micropipeta, gradilla.
Muestra Clnica: Suero o plasma venoso libre de hemlisis. Se obtendr en el laboratorio.
1. La muestra debe recolectarse en ayuno (sin ingesta de alimentos durante ocho horas cuando menos antes
de la prueba). Debe recolectarse en tubo colector de tapn rojo para suero el cual no contiene
anticoagulante, o de color lila el cual contiene EDTA anticoagulante para obtener plasma.
2. La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm durante 5 minutos para separar el suero o plasma. La glucosa
en suero o plasma es estable al menos 3 das a 2-8C.
3. La muestra es inaceptable si: a) Si el suero se obtiene turbio, b) Si la identificacin es inadecuada, c) Si el
tubo de recoleccin no es el adecuado, d) Cuando se haya excedido el tiempo mximo de anlisis
permisible, e) No se han observado interferencias por hemoglobina(4 g/L); bilirrubina (20mg/L); creatinina
(100mg/L), galactosa (1g/L).
3.2. Reactivos:
Kit 1 x 100 mL., Contiene:
A. 1 x 100 mL Reactivo
B. 1 x 5 mL Estndar
3.3. PREPARACIN
El reactivo y el estndar estn listos para su uso.
Composicin del reactivo
La concentracin en la disolucin reactiva es:
Tampn fosfato pH 6,8 100 mM
Ac. p-hidroxibenzoico 39,5 mM
4-aminoantipirina 0,8 mM
Fenol 4,5 mM
Glucosa oxidasa 18 kU/L
Peroxidasa 1,1 kU/L
Estabilizantes no reactivos
Estndar: Disolucin acuosa equivalente a 100 mg de glucosa/dL (5,55 mmol/L).
3.4. MTODO
MUESTRA
1. Obtener la muestra de modo convencional (Suero, plasma o LCR.)
La glucosa en suero o plasma (no as en sangre total, a causa de los fenmenos glucolticos) se
conserva como mximo 2-3 das a 2-8 C.
El LCR debe ser limpio y sin restos celulares. En estas condiciones la glucosa es estable 48 horas
a 2-8C
2. Rotular tubos de ensayo: con las letras B (blanco), M (muestra), P (patrn/Estndar))
3. Colocar en cada uno de ellos las cantidades que se indican en la tabla:
B (blanco) M (muestra) P (patrn/estndar)

Reactivo de trabajo (L) 1000 1000 1000
Muestra (L) 10
Patrn (L) 10
4. Mezclar e incubar a 37C 5 - 10 min. o 20-25 min. a 20 - 25C
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5. Colocar el contenido de los tubos en cubetas para lectura en el espectrofotmetro. Leer la absorbancia (Abs)
del Patrn y la muestra, frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mnimo 30 minutos.
6. Leer absorbancias a una longitud de onda de 505 nm. La estabilidad del color est determinada como mnimo
de 1 h, protegido de la luz solar directa
IV. RESULTADOS:
Clculos:
(Abs) Muestra X 100 (Conc. Patrn) = mg/dL de glucosa en la muestra

(Abs) Patrn
Factor de conversin: mg/dL x 0,0555 = mmol/L

Unidades S.I.
mg/dL x 0,0555 = mmol/L
VALORES DE REFERENCIA
Suero, plasma (en ayunas):
Adulto: 74 - 115 mg/dL (4,1-6,4 mmol/L)
Nio: 60 - 100 mg/dL (3,3-5,6 mmol/L)
Neonato : 30 - 80 mg/dL (1,7-4,5 mmol/L)
Neonato prematuro: 20 - 60 mg/dL (1,1-3,3 mmol/L)
LCR:
Adulto: 40 - 70 mg/dL (2,2-3,9 mmol/L)
Nio: 60 - 80 mg/dL (3,3-4,5 mmol/L)
Orina: 1 - 15 mg/dL (0,1-0,8 mmol/L)
Estos valores son a ttulo orientativo. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de
referencia.
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PRACTICA N 5
DETERMINACIN CUANTITATIVA DEL COLESTEROL LQUIDO
I. COMPETENCIAS
1. Conoce el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin cuantitativa del Colesterol.

2. Explica la importancia del colesterol en el metabolismo humano y su relacin con diversas patologas.
3. Determinar la concentracin de colesterol lquido mediante el mtodo enzimtico colorimtrico.
II. INTRODUCCIN
El colesterol es una de las molculas ms importante del organismo humano. Es el compuesto esencial de las
membranas celulares. Adems es el precursor de tres clases importantes de compuesto biolgicos activos, el
cido biliar, las hormonas esteroideas y la vitamina D. Los desrdenes del metabolismo del colesterol juegan un
papel importante en la etiologa de la enfermedad cardiovascular.
El colesterol en presente en el organismo tiene un doble origen, el exgeno, que procede de la dieta, se encuentra
en su mayor parte en forma libre no esterificado-. El colesterol esterificado es hidrolizado por la colesterol esterasa
pancretica dando colesterol libre y cidos grasos.El colesterol endgeno se forma fundamentalmente a nivel
heptico e intestinal y es eliminado por el hgado con la bilis- o utilizado para la sntesis de cidos biliares.
El colesterol acompaado de triacilgliceroles y fosfolpidos, es transportado en lipoprotenas. Las ms comunes

son las HDL y las LDL. Su importancia radica en que son capaces de proveer los medios para el transporte de
grasa entre los diferentes rganos y tejidos. Su importancia clnica radica en el papel que desempean en el
desarrollo de la ateroesclerosis: un fenmeno que posee un rango de enfermedades del sistema cardiovascular,
tal como la enfermedad cardiaca o el paro. Estas enfermedades son actualmente la principal causa de mortalidad
en las poblaciones occidentales.
El Colesterol puede causar problemas cuando existe en el organismo en cantidad mayor que la necesaria. El
exceso de Colesterol se puede depositar en diversas partes del cuerpo, como las paredes de las arterias. Las LDL
transportan el Colesterol por todo el organismo y son las causantes de los depsitos que obstruyen las arterias,
por lo que son consideradas como la fraccin de Colesterol daino".
En tanto se cree que las HDL extraen el Colesterol de la pared de las arterias, siendo por tanto, un indicador
favorable. El Colesterol sanguneo proviene de dos fuentes: una fuente endgena, que corresponde a la produccin
propia del organismo, en especial en el hgado y representa el 60 a 80% del Colesterol total y una fuente exgena,
que proviene de los alimentos que consumimos.
SIGNIFICADO CLNICO
Niveles elevados de colesterol en sangre se van a encontrar en casos de:
1. Dietas ricas en colesterol y grasas saturadas; estas ltimas pueden elevar hasta en un 15-20% la cifra de
colesterol sanguneo.
2. Hipotiroidismo, como consecuencia de la disminucin del metabolismo lipdico
3. Diabetes mellitus: debido al incremento notable del metabolismo lipdico
G
32
4. En enfermedades de retencin renal: en estos casos se eleva tanto el colesterol sanguneo como los triglicridos
y los fosfolpidos. Se cree que es debido a la inhibicin de la lipoprotein lipasa, de manera que se elevan
considerablemente las grasas sanguneas.
5. En casos de ictericia obstructiva
Niveles bajos de colesterol en sangre suelen ser indicativos de hepatitis grave y cirrosis.
El estudio del nivel srico permite la deteccin y clasicacin de las diversas hiperlipidemias y la evaluacin del
riesgo de enfermedades cardacas.
Los valores de colesterol son bajos en hipolipoproteinemias, hipertiroidismo y en algunos tipos de anemias.
Una nica prueba de laboratorio no permite establecer un diagnstico. Los resultados se han de evaluar en el
contexto de todos los datos clnicos y de laboratorio obtenidos.
PRINCIPIO DEL MTODO

El colesterol presente en el suero o plasma, a travs de las cadenas de reaccin indicadas, forma un complejo
coloreado que se puede cuanticar espectrofotomtricamente.
III. MATERIALES Y MTODOS
Suero o plasma del paciente

Gradillas y tubos de prueba de 13 x 100 mm
Pipetas automticas de rango variable.
Cronmetro
Jeringas de 5 ml. Descartables
Tips para micropipetas y torundas con algodn
Ligaduras de ltex y gasa
Centrfuga, Espectrofotmetro y Bao mara
1. REACTIVOS
Kit 1 x 100 mL., contiene:
B. 1 x 5 mL Estndar
PREPARACIN DEL REACTIVO DE TRABAJO
El reactivo y estndar estn listos para su uso.
COMPOSICIN DEL REACTIVO
Tampn Mes pH 6,5 75 mM
Fenol 6 mM
2,4-diclorofenol 0,2 mM
Colesterol esterasa 500 kU/L
Colesterol oxidasa 300 kU/L
Peroxidasa 1200 kU/L
G
33
Estndar: Disolucin de colesterol en isopropanol/agua equivalente a 200 mg/
dL(5,18 mmol/L).
2. MUESTRAS
Suero o plasma: No usar anticoagulantes con citrato.
No utilizar muestras hemolizadas. Separar el suero de los hemates lo antes posible.
3. PROCEDIMIENTO
1. Obtener la muestra de modo convencional

Muestra (L) 10
Patrn (L) 10
4. Mezclar e incubar durante 5min a 37C 5 o 10 min. a 20 - 25C
5. Colocar el contenido de los tubos en cubetas para lectura en el espectrofotmetro. Leer la absorbancia
(Abs) del Patrn y la muestra, frente al Blanco de reactivo a una longitud de onda de 505nm. El color es estable
como mnimo 30 minutos.
6. La estabilidad del color est determinada como mnimo de 1 h, protegido de la luz solar directa
4. RESULTADOS
CLCULOS:
Factor de conversin:
Unidades SI
(mg/100 mL) x 0,0259 = mmol/L
Interpretacin clnica
Segn las recomendaciones de la Sociedad Europea de Aterosclerosis:
G
34
PRACTICA N 6
DETERMINACIN CUANTITATIVA DE
TRIGLICRIDOS LQUIDOS
I. COMPETENCIAS
1. Conoce el mtodo para realizar una determinacin cuantitativa de triglicridos.
2. Fundamenta la reaccin en la determinacin triglicridos y comprende la importancia de su cuantificacin en
relacin a diversas patologas
3. Determina la cantidad de Triglicridos en una muestra se suero sanguneo.
4. Conoce los valores de normales de triglicridos en suero sanguneo y relaciona las patologas a valores
alterados de ste.
II. INTRODUCCIN
Los triglicridos son lpidos al igual que el colesterol y los fosfolpidos. Los triglicridos son la forma ideal para el
almacenamiento de energa en nuestro organismo. Un hombre adulto y delgado tiene unos 15 kg de triglicridos, lo
que representa un depsito de energa suficiente como para vivir tres meses sin comer. El lugar donde se almacenan
se llama tejido adiposo y, adems de servir como depsito, tiene otras funciones importantes. Por ejemplo, debido
a que los triglicridos son lquidos a temperatura ambiente, las capas de grasa alrededor de algunos rganos, como
los riones, actan como una especie de almohadn lquido que proporciona una importante proteccin; tambin el
tejido adiposo subcutneo determina que el aspecto fsico de una mujer y el de un hombre sean diferentes, y acta
como una capa aislante trmica.
Existen dos fuentes importantes de produccin. Una de ellas es la fuente externa, es decir, los triglicridos que
ingerimos con los alimentos, y otra es la fuente interna, que consiste en los triglicridos que produce el hgado. Los
triglicridos de ambas fuentes van a circular por la sangre para llegar a todo el organismo en un medio de transporte
que recibe el nombre de lipoprotenas; las que transportan a los triglicridos procedentes de la dieta se llaman
quilomicrones y las otras, VLDL. No debemos de olvidar que estos medios de transporte no son exclusivos de los
triglicridos, sino que tambin transportan a otros lpidos como el colesterol.
Se considera ideal tener unos triglicridos por debajo de 150 mg/dl, y valores superiores a 200 mg/dl constituyen lo
que se llama una hipertrigliceridemia, es decir, un exceso de triglicridos por encima de los lmites saludables; esta
se considera leve hasta valores de 400 mg/dl, moderada hasta valores de 1.000 mg/dl y grave o severa por encima
de esas cifras.
La asociacin entre hipertrigliceridemia y enfermedad coronaria (infarto, angina de pecho, trombosis...) no est
totalmente clara. Sin embargo, hemos de tener en cuenta que las personas que tienen los triglicridos altos suelen
tener tambin bajo el colesterol-HDL (colesterol bueno) y esto s que representa un riesgo para desarrollar una de
estas enfermedades. Adems, con mucha frecuencia la elevacin de los triglicridos se asocia con la obesidad, que
suele cursar, no solo con valores altos de triglicridos, sino tambin de colesterol-LDL (colesterol malo). La
hipertrigliceridemia tambin suele asociarse con hipertensin arterial (tensin alta) y con diabetes, factores todos
ellos que se asocian a un alto riesgo de padecer enfermedad coronaria.
Si la hipertrigliceridemia es muy importante, el principal riesgo es padecer una grave enfermedad que se conoce
con el nombre de pancreatitis, que se trata de una inflamacin del pncreas. Si bien la mayora de las pancreatitis
asociadas a hipertrigliceridemia aparecen en personas con triglicridos muy altos, pueden tambin producirse en
personas con triglicridos en ayunas moderadamente altos si, por ejemplo, hacen una comida muy rica en grasa.
G
35
Determinadas enfermedades cursan con aumento de triglicridos. Entre las ms frecuentes estn la diabetes, las
enfermedades del hgado, del tiroides y del rin. Las embarazadas pueden tambin tener cifras elevadas de
triglicridos en sangre. Junto con la diabetes, las causas ms frecuentes de triglicridos elevados son la obesidad
y el consumo de alcohol.
SIGNIFICADO CLNICO
El aumento del nivel de triglicridos en sangre es un factor de riesgo en el desarrollo de enfermedades coronarias.
Alrededor del 50% de los lpidos de las lesiones ateromatosas que ocurren en las arterias coronarias son
triglicridos, por lo que es posible relacionarlos con la patognesis de la ateroesclerosis coronaria.
La determinacin de triglicridos permite evaluar en forma temprana el riesgo a desarrollar ateroesclerosis
coronaria.
Los TGL pueden estar aumentados por quilomicronemia (Fredickson tipo I y V), hipertrigliceridemia tipo IV, en
diabetes mellitus, insulinoresistencia, obesidad, hipotiroidismo, pancreatitis, enfermedad del almacenamiento del
glucgeno, sndrome nefrtico, hipertrigliceridemia sensible a los hidratos de carbono, enfermedad de Tangier,
enfermedad de Von Gierke, anemia perniciosa, pancreatitis aguda, sndrome de Down, cirrosis biliar, septicemia.
PRINCIPIO DEL MTODO

Los triglicridos presentes en la muestra se hidrolizan enzimticamente por la accin de las lipasas dando lugar a
glicerol y cidos grasos. En presencia de glicerol quinasa (GK), el ATP fosforila el glicerol para dar glicerol-3- fosfato
y el correspondiente ADP. Mediante la glicerolfosfato oxidasa (GPO) el glicerol -3- fosfato es oxidado a
dihidroxiacetona-fosfato y perxido de hidrgeno.
En la ltima etapa, con la peroxidasa como catalizador, el perxido de hidrgeno reacciona con la 4- aminoantipirina
y el 4-clorofenol para dar lugar a la quinoneimina. La intensidad del color generado es proporcional a la cantidad
de triglicridos presentes en la muestra.
Suero o plasma del paciente

Gradillas y tubos de prueba de 13 x 100 mm
Pipetas automticas de rango variable.
Cronmetro
Jeringas de 5 ml. Descartables
Tips para micropipetas y torundas con algodn
Ligaduras de ltex y gasa
Centrfuga, Espectrofotmetro y Bao mara
G
36
1. REACTIVOS
Kit 1 x 100 mL., contiene:
B. 1 x 5 mL Estndar
El reactivo y estndar estn listos para su uso.
COMPOSICIN DEL REACTIVO:
Tampn Pipes pH 6,8 50 mM
4-clorofenol 4,2 mM
ATP 2 mM
Aspartato Mg 40 mM
Glicerol-quinasa 800 U/L
Glicerol-3-fosfato oxidasa 2000 U/L
Peroxidasa 500 U/L
Lipasas 9000 U/L
Estndar: Disolucin de glicerol en agua equivalente a 200 mg/dL (2,29 mmol/L)
2. MUESTRAS
Suero o plasma: No usar anticoagulantes con citrato. Los triglicridos se conservan 4 das si se mantiene la
muestra a 2-8C, y hasta 3 meses a - 20C
No utilizar muestras hemolizadas. Separar el suero de los hemates lo antes posible.
3. PROCEDIMIENTO:

Muestra (L) 10
Patrn (L) 10
4. Mezclar e incubar durante 5min a 37C 5 o 10 min. a 20 - 25C
5. Colocar el contenido de los tubos en cubetas para lectura en el espectrofotmetro. Leer la absorbancia (Abs)
del Patrn y la muestra, frente al Blanco de reactivo a una longitud de onda de 505 nm. La estabilidad del
color est determinada como mnimo de 1 h, protegido de la luz solar directa
4. RESULTADOS
CLCULOS:
Factor de conversin:
Unidades S.I.
(mg/dL triglicridos) x 0,01143 = mmol/L triglicridos
G
37
Mujeres: 40 - 160 mg/dL; 0,457 1,828 mmol/L
Hombres: 35 - 135 mg/dL; 0,400 1,543 mmol/L
Estos valores son a ttulo orientativo. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de
referencia.
Interpretacin clnica
G
38
PRACTICA N 7
DETERMINACIN CUANTITATIVA DE
PROTENAS TOTALES Y ALBMINA
I. COMPETENCIAS
1. Conoce el mtodo para realizar una determinacin de la cantidad de protenas totales.

2. Fundamenta la reaccin en la determinacin de protenas totales y comprende la importancia de su
cuantificacin en relacin a diversas patologas
3. Determina la cantidad de albmina en una muestra se suero sanguneo.
4. Conoce los valores de referencia de protenas totales y de albmina en el suero sanguneo relacionndolos
con patologas a valores alterados de stos.
II. INTRODUCCIN
La sangre est formada por una solucin acuosa que contiene molculas de tamao variable y tipos de elementos
celulares. Los elementos formes de la sangre se encuentran formando una suspensin en agua denominada
plasma. Aunque el plasma es el medio natural de las clulas sanguneas, la mayora de las determinaciones
qumicas se hacen en suero. Las protenas del plasma pueden clasificarse en dos grupos: las que son
sintetizadas por el hgado (albmina) y las inmunoglobulinas (producidas por las clulas plasmticas de la
mdula sea).
El plasma humano tiene una concentracin en protenas de 60--80 g/L (frecuentemente se expresa en g/dL; 6-
-8 g/dl). Casi la mitad de esta protena plasmtica es albmina, cuyo rango de concentracin es 35--45 g/L.
En el plasma, las protenas contribuyen a mantener el volumen del fluido circulante, transportan sustancias
relativamente insolubles y actan en la inactivacin de compuestos txicos y en la defensa contra agentes
invasores. La determinacin de protenas totales es til para el monitoreo de cambios ocasionados por diversos
estados de enfermedad. En condiciones patolgicas como prdidas renales, desnutricin, infecciones
prolongadas, etc., suelen presentarse hipoproteinemias, mientras que en otras como mieloma mltiple,
endocarditis bacteriana y hemoconcentracin de diversos orgenes, (ej.: deshidratacin) se observan
hiperproteinemias.
La albmina es una protena de 62.000 D que acta como protena de reserva, adems de importante
transportador (cidos grasos, bilirrubina y frmacos) y regulador osmtico. Es producida por el hgado. Su
concentracin aumenta en casos de deshidratacin y disminuye en casos de ascitis/edema y dao heptico
severo. La determinacin de la concentracin de protenas en sangre puede ser llevada a cabo por diferentes
mtodos. Su determinacin es til en la deteccin de: 1. Hiperproteinemia producida por hemoconcentracin,
deshidratacin o aumento en la concentracin de protenas especficas, 2. Hipoproteinemia por hemodilucin
debida a un defecto en la sntesis proteica, perdidas excesivas (hemorragias) o catabolismo proteico excesivo.
El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clnicos y de laboratorio.
G
39
La albmina es una de las ms importantes protenas plasmticas producidas en el hgado. Entre sus mltiples
funciones se incluye nutricin, mantenimiento de la presin onctica y transporte de sustancias como Ca ++,
bilirrubina, cidos grasos, drogas y esteroides.
UTILIDAD DIAGNSTICA DE LA DETERMINACION DE PROTENA TOTAL

La determinacin de la protena total en suero se utiliza en el estudio del estado nutricional o de procesos
edematosos. Los niveles de protena total son elevados (> 9,0g/dL) en: hiperinmunoglobulinemia, gammapatas
mono o policlonales, deshidratacin, enfermedad heptica crnica y neoplasias, sobre todo en mielomas.
Los valores inferiores a lo normal (< 6,0g/dL) estn asociados a la prdida de protenas en casos de
gastroenteropatas, quemaduras, sndrome nefrtico o son debidos a la disminucin de la sntesis de protenas
en enfermedad heptica crnica, agammaglobulinemia, sndrome de malabsorcin o malnutricin.
En casos de embarazo, administracin de lquidos intravenosos, alcoholismo crnico, insu ciencia cardaca o
hipertiroidismo, los valores de protena en sangre son tambin inferiores a los normales.
Alteraciones en los valores de albmina indican enfermedades del hgado, desnutricin, lesiones de la piel como
dermatitis, quemaduras severas o deshidratacin. El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos
los datos clnicos y de laboratorio.
En esta prctica vamos a utilizar uno de los mtodos que se utilizan con ms frecuencia: el mtodo de Biuret. En
l la disolucin de protena se mezcla con un reactivo que determina que aparezca o se intensifique un color
(azul) que se cuantifica midiendo la absorbancia a una determinada longitud de onda frente a un blanco de
reactivo. El color generado es poco estable y depende de las condiciones de reaccin, por lo que hay que realizar
una curva patrn con soluciones de una protena de concentracin conocida (albmina bovina).
UTILIDAD DIAGNSTICA DE LA DETERMINACION DE LA ALBMINA

Se encuentran valores de Albmina disminuidos en infecciones graves, ebre reumtica, enfermedades
hepticas, como cirrosis o hepatitis crnica activa. Tambin los valores son inferiores a lo habitual en procesos
de malabsorcin u obstruccin intestinal y en casos de sndrome nefrtico.
En quemaduras graves se observa disminucin de los valores de Albmina, mientras que estos aumentan en
procesos de deshidratacin.
PRINCIPIO DEL MTODO PROTENAS TOTALES: En la determinacin de Protenas totales, Los enlaces
peptdicos de las protenas en medio alcalino reaccionan con el ion cprico, para dar un complejo color violeta
azulado con mximo de absorcin a 540 nm, cuya intensidad es proporcional a la concentracin de protenas
totales en la muestra ensayada.
PRINCIPIO DEL METODO ALBMINA: La albmina se combina con el verde de bromocresol a pH ligeramente
cido, producindose un cambio de color del indicador, de amarillo verdoso a verde azulado (complejo coloreado)
proporcional a la concentracin de albmina presente en la muestra ensayada.
III. A. MATERIALES Y MTODO PROTENAS TOTALES
Materiales:
Suero o plasma heparinizado
Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 540 nm.
G
40
Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
Tubos de ensayo de 13 X100mm.
1 micropipeta cap. 1.0 mL.
1 Micropipeta cap. 25 L.
Puntas para Micropipetas.
Gradilla.
1. REACTIVOS
Kit 3 x 100 mL. . Contiene:
A. 3 x 100 mL Reactivo Biuret
B. 1 x 5 mL Estndar
El reactivo y el estndar estn listos para su uso
NaOH 0,47 M
Yoduro potsico 23,3 mM
Sulfato de cobre (II) 6,5 mM
Tartrato sdico-potsico 22,1 mM
Conservantes y estabilizantes
Estndar: Disolucin acuosa de protenas equivalente a 5 g/dL (50 g/L).
2. MUESTRA
Suero o plasma sin hemlisis. Las muestras son estables 5 das, conservadas a 2 - 8C.
Para el uso del reactivo con otros udos corporales (lquido amnitico, orina, exudados, etc.) debe tenerse
presente el margen de valores a detectar, que son variables segn el tipo de muestra, y la sensibilidad del
reactivo.
3. PROCEDIMIENTO:

Muestra (L) 20
Patrn (L) 20
4. Mezclar bien y dejar 10 min a temperatura ambiente (20 - 25C)
5. Colocar el contenido de los tubos en cubetas para lectura en el espectrofotmetro. Leer la absorbancia
(Abs) del Patrn y la muestra, frente al Blanco de reactivo a una longitud de onda de 540 nm. La estabilidad
del color est determinada como mnimo de 3 h, protegido de la luz solar directa
4. RESULTADOS
CLCULOS:
Factor de conversin
Unidades S.I.
(g/dL) x 10 = g/L
Adultos: 6,4 - 8,3 g/dL
NIos:
Recin nacidos: 4,6 - 7,0 g/dL
< 1 ao: 5,1 - 7,3 g/dL
G
41
1 - 2 aos: 5,6 - 7,5 g/dL
> 3 aos: 6,0 - 8,0 g/dL
Estos valores son a ttulo orientativo. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios
valores de referencia.
III. B. MATERIALES Y MTODO PARA DETERMINACIN DE ALBMINA

DETERMINACIN DE ALBMINA
Materiales:
Suero o plasma heparinizado
Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 540 nm.
Tubos de ensayo de 13 X100mm.
1 micropipeta cap. 1.0 mL.
1 Micropipeta cap. 25 L.
Puntas para Micropipetas.
Gradilla.
1. REACTIVOS
Kit 2 x 250 mL.. Contiene:
A. 2 x 250 mL Verde de bromocresol
B. 1 x 5 mL Estndar
El Reactivo est listo para su uso.
Las concentraciones en la disolucin reactiva son:
Tampn succinato pH 4,2 50 mM
Verde de bromocresol 0,75 g/L
Tensoactivos
Estndar: Disolucin acuosa equivalente de 5 g/dL de albmina (50 g/L). Listo para su uso.
2. MUESTRA
Suero o plasma sin hemlisis. Las muestras son estables 5 das, conservadas a 2 - 8C.
Para el uso del reactivo con otros udos corporales (lquido amnitico, orina, exudados, etc.) debe
tenerse presente el margen de valores a detectar, que son variables segn el tipo de muestra, y la
sensibilidad del reactivo.
3. PROCEDIMIENTO:

Muestra (L) 10
Patrn (L) 10
4. Mezclar bien y dejar 5 min a temperatura ambiente (20 - 25C)
5. Colocar el contenido de los tubos en cubetas para lectura en el espectrofotmetro. Leer la
absorbancia (Abs) del Patrn y la muestra, frente al Blanco de reactivo a una longitud de onda de 630
nm.
INTERFERENCIAS
Mientras que la reaccin entre el verde de bromocresol y la albmina es instantnea, otras fracciones
proteicas producen con el reactivo una coloracin adicional con el tiempo. Se recomienda, por lo tanto,
no demorar la lectura para evitar las interferencias.
G
42
4. RESULTADOS
CLCULOS:
Factor de conversin: Unidades SI (g/dL) x 10 = g/L
3,5 - 5,0 g/dL
Los valores indicados son a ttulo orientativo; cada laboratorio debe establecer su propio rango de valores de
referencia.
G
43
PRACTICA N 8
ENZIMOLOGA I: DETERMINACIN DE LIPASA
I. COMPETENCIAS
1. Aplicar el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de la lipasa en una muestra biolgica.
2. Establecer los valores de referencia de la enzima Lipasa y compara con el valor de nuestra muestra
problema a analizar.
3. Seala las principales patologas que se presentan por variaciones de los valores Lipasa en una muestra
biolgica
II. INTRODUCCIN
La lipasa (LPS) es una enzima que pertenece a las hidrolasas, hidroliza los steres de glicerol de triglicridos
de cidos grasos de cadena larga. La lipasa hidroliza preferencialmente los enlaces estricos de los carbonos
1 y 3 de la molcula de triglicridos y produce dos molculas de cido graso y una molcula de 2- monoglicrido.
Se observa actividad de lipasa en pncreas mucosa intestinal, estmago, leucocitos y tejido adiposo. Sin
embargo, slo la lipasa pancratica tiene significado clnico; su principal funcin consiste en hidrolizar los
triglicridos de la dieta que han sido emulsificados por cidos biliares y ayudan as a la absorcin de grasas en
el intestino delgado.
Como la lipasa se produce principalmente las clulas acinares del pncreas, su utilidad clnica se relaciona casi
de manera exclusiva con el diagnstico de laboratorio de pancreatitis aguda. Otras afecciones en las cuales se
incrementa la actividad de lipasa incluyen intoxicacin aguda con alcohol y traumatismos accidentales o
quirrgicos del abdomen.
A pH alcalino, el substrato de lipasa 1,2-O-dilauril-rac-glicero-3-cido glutrico-(6- metilresoru na)-ster se

desdobla por accin de la lipasa pancretica, formndose 1,2O dilaurilrac-glicerol y cido glutrico-(6
metilresoru na)-ster, que es un producto inestable.
ste, en solucin alcalina, se transforma espontneamente en cido glutrico y metilresoruna, cuya intensidad
de color a 578 nm es directamente proporcional a la actividad de la lipasa presente en la muestra.
SIGNIFICADO CLNICO DE LA LIPASA

La lipasa se encuentra elevada en pancreatitis de cualquier origen, y estos valores permanecen elevados durante
ms tiempo que los de la amilasa.
En alteraciones crnicas del pncreas se encuentra un valor elevado de lipasa y lo mismo ocurre en casos de
cirrosis biliar primaria, insu ciencia renal crnica y en pacientes en hemodilisis.
G
a. DETERMINACION DE LIPASA
MATERIALES
Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 578 nm

Bao mara (37C )
Centrfuga
Cubetas de 1,0 cm de paso de luz
Suero o plasma heparinizado (suero libre de hemlisis)
Material habitual para extraccin de sangre.
1. REACTIVOS
Kit 1 x 80 mL. Contiene:
A.1 x 50 mL Disolucin tampn
B. 1 x 30 mL Substrato
C. 1 x 1 mL Estndar liolizado
La concentracin est indicada en la etiqueta del vial
Los reactivos A y B, estn listos para su uso.
El estndar liolizado se debe rehidratar con 1 mL de agua desionizada.
COMPOSICIN DE LOS REACTIVOS
Las concentraciones de los reactivos son:
A. Disolucin tampn
Tampn Bicina pH 8,0 50 mM
Colipasa 1 mg/L
Desoxicolato Na 1,8 mM
Cloruro clcico 12 mM
B. Substrato
Tampn Tartrato pH 4,0 12 mM
1,2-O-dilauril-rac-glicero-3-
cido glutrico-(6-metilresoru na)-ster 0,27 mM
Taurodesoxicolato 9,0 mM
Estabilizantes y conservantes
CONSERVACIN Y ESTABILIDAD
Los componentes del kit almacenados a 2-8C, son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
El estndar una vez rehidratado es estable 15 das a 2-8C.
2. MUESTRA
Suero o plasma heparinizado. No emplear plasma con EDTA. Utilizar muestras exentas de hemlisis. La
actividad lipsica en suero es estable 4 das a 2-8C y 24 horas a temperatura ambiente ( 25C).
45
3. PROCEDIMIENTO:

2. Llevar el reactivo de trabajo y el instrumento a 37C. Pipetear en el tubo de reaccin
Agua (L) 10
Muestra (L) 10
Patrn ( estndar) (L) 10
Reactivo de trabajo A (L) 1000 1000 1000
Mezclar e incubar 5 min a 37C. Adicionar seguidamente el reactivo B
Reactivo de trabajo B (L) 600 600 600
4. Mezclar bien. Al cabo de 60 segundos leer la absorbancia Abs1

5. Pasados 90 segundos ms, leer de nuevo la absorbancia Abs2
4. RESULTADO
Suero, plasma: 60 U/L.

Los valores indicados son a ttulo orientativo. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de
referencia.
G
46
PRACTICA N 9
ENZIMOLOGA II: DETERMINACIN
DE FOSFATASA ALCALINA
I. COMPETENCIAS
1. Demuestra manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de la enzima fosfatasa alcalina en una
muestra biolgica.
2. Reconoce valores normales de referencia de las actividades de esta enzima y compara con el valor de la
muestra problema a analizar.
3. Reconoce cuales son las principales patologas que se presentan por variaciones de valores de esta enzima
en una muestra biolgica.
II. INTRODUCCIN
La fosfatasa alcalina (Ortofosfrico monoster fosfohidrolasa) es una enzima ampliamente distribuida que
hidroliza el enlace ster fosfrico entre un grupo fosfato y un radical orgnico a pH bsico (pH ptimo entre 9 y
10) liberando fosfato inorgnico. Es una enzima que est presente en la totalidad de tejidos corporales,
principalmente en el epitelio intestinal (donde participa en el transporte de lpidos) y en los osteoblastos (donde
interviene en el proceso de remodelacin sea), y tambin en la placenta (sobre todo en el tercer bimestre del
embarazo), y en el hgado, donde se halla en las membranas de los sinusoides y canalculos.
Est presente en rin, hgado, intestino y hueso. La medida de niveles anormales de fosfatasa alcalina en el
suero indican la existencia de enfermedades seas degenerativas (raquitismo, osteomalacia, hiperparatiroidismo
secundario, osteosarcoma) o bien daos hepticos. El aumento fisiolgico de los niveles plasmticos de fosfatasa
alcalina se produce en animales en fase de crecimiento (se est formando tejido seo) o en hembras gestantes
(fosfatasa alcalina de la placenta).
Ante una concentracin aumentada de fosfatasa alcalina en el plasma puede considerarse la posibilidad de que
la enzima provenga de tejidos no hepticos. Para confirmar el origen hepatobiliar de la fosfatasa alcalina se
puede medir la concentracin de otras enzimas procedentes del tracto biliar, como la 5-nucleotidasa o la -
glutamiltransferasa: una concentracin elevada en el plasma de cualquiera de las dos indica que la fosfatasa
alcalina es de procedencia hepatobiliar y no sea. No obstante debe tenerse en cuenta que la concentracin de
5-nucleotidasa puede elevarse en el embarazo, mientras que la -glutamiltransferasa puede inducirse por
diversos frmacos o por abuso de alcohol.
La concentracin de fosfatasa alcalina es de sensibilidad diagnstica para Colestasis. Cuando se produce una
obstruccin biliar, se induce la sntesis enzimtica en los hepatocitos adyacentes al canalculo biliar y se forma
una mayor cantidad de fosfatasa alcalina, que pasa a los sinusoides. Este aumento se refleja en una
concentracin en el plasma elevado. Las causas ms probables de aumento del nivel de FAL: Enfermedad sea
de Paget, obstrucciones hepticas, hepatitis, hepatotoxicidad por medicamentos y osteomalacia. Causas ms
probables de disminucin del nivel de FAL: Cretinismo y dficit de vitamina C.
G
47
PRINCIPIO DEL MTODO
El control de la liberacin del p-nitrofenol por la accin de la fosfatasa alcalina srica sobre el sustrato p-
nitrofenilfosfato, permite la determinacin de la actividad del enzima.
En condiciones ptimas de reaccin, la Abs/min es proporcional a la concentracin de fosfatasa alcalina
presente en la muestra.
La velocidad de formacin del p-Nitrofenol, determinado fotomtricamente, es proporcional a la concentracin

cataltica de fosfatasa alcalina en la muestra ensayada (SUERO).
El p-nitrofenol (pNF) en solucin alcalina es amarillo y su concentracin puede ser determinada

espectrofotomtricamente. La absorbancia de la solucin (intensidad del color amarillo) es una medida de la
concentracin del producto.
SIGNIFICADO CLNICO
La fosfatasa alcalina es un enzima cuya concentracin srica puede estar alterada por diversas enfermedades.
Su principal aplicacin clnica tiene relacin con aquellos casos de enfermedad obstructiva heptica, con
elevaciones importantes del nivel basal, especialmente en obstrucciones extrahepticas y en enfermedades
metablicas seas asociadas a un aumento de la actividad osteoblstica.
El aumento de actividad asociado a metstasis seas slo se produce en el caso de lesiones osteoesclerticas.
MATERIALES
Bao mara (37C )
Centrfuga
Cubetas de 1,0 cm de paso de luz
G
48
Suero o plasma heparinizado (suero libre de hemlisis)
Material habitual para extraccin de sangre.
1. REACTIVOS
Kit 1 x 60 mL.
A. 1 x 50 mL Tampn / Enzimas
B. 1 x 10 mL Tampn / Substrato
Los reactivos A y B, estn listos para su uso. En caso de que se quiera trabajar como Monorreactivo: mezclar
los volmenes deseados manteniendo la proporcin 4 partes de A (Disol. tampn) + 1 parte de B (Sustrato).
COMPOSICIN DEL REACTIVO DE TRABAJO
Tampn 2-Amino-2-metil-1-propanol pH 10,4 0,70 M
p-nitrofenilfosfato 12 mM
HEDTA 1,55 mM
Acetato de magnesio 1,50 mM
Sulfato de zinc 0,95 mM
Estabilizantes y conservantes
Los componentes del kit almacenados a 2-8C, son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la
etiqueta.
Una vez mezclados los componentes A y B, la disolucin monorreactiva es estable 3 semanas a 2-8 C y 1
semana a temperatura ambiente ( 25 C), siempre que se mantenga al abrigo de la luz.
2. MUESTRA
Suero o plasma con heparina. Utilizar muestras exentas de hemlisis.
Los sueros mantenidos a 2-8C, son estables durante 7 das.
3. PROCEDIMIENTO:
2. Llevar el reactivo de trabajo y el instrumento a 37C. Pipetear en el tubo de reaccin
3. Colocar en cada uno de ellos las cantidades que se indican en la tcnica Monorreactiva:
4. Utilizar agua para el blanco

5. Mezclar bien. Poner en marcha el cronmetro.
6. Transferir a la cubeta de lectura y leer las absorbancias despus de 1, 2, 3 y 4 min.
G
4958
7. Determinar la Abs/min promedio de las lecturas
4. RESULTADO
CLCULOS
Se utiliza la frmula indicada para obtener el factor para calcular las U/L: U/L = Abs/ min x Factor
Monorreactivo: Longitud de onda: 405 nm Factor: 2760
Birreactivo: Longitud de onda 405 nm Factor: 3432
Adultos: Hombres Mujeres
53 128 U/L 42 141 U/L (*)
Menores de 18 aos: Niveles muy variables, entre 42 383 U/L

(*) En mujeres embarazadas el valor puede ser el doble que en mujeres no embarazadas.
Los valores indicados son a ttulo orientativo. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
valores de referencia.
G
50
59
PRACTICA N 10
DETERMINACIN DE CREATININA
I. COMPETENCIAS
1. Conoce el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de creatinina

2. Reconoce los valores de referencia de la creatinina
3. Define cules son las principales patologas que se presentan valores altos o bajos de creatinina
II. INTRODUCCIN
La creatinina es un producto final del metabolismo muscular. Se origina a partir de la creatina por prdida de una
molcula de agua. A su vez, la creatina se produce por hidrlisis del fosfato de creatina, por accin de la creatin-
fosfo-kinasa (CPK), apareciendo como metabolitos de dicha reaccin el fosfato energtico y la creatina. El radical
fosfato puede aportar energa directamente por dicha reaccin o a travs de su acoplamiento a una molcula de
ADP para formar ATP y posterior hidrlisis por accin de ATPasa.
La eliminacin de creatinina en el cuerpo humano tiene lugar casi exclusivamente a travs de la filtracin
glomerular, siendo un importante ndice del funcionalismo renal. A diferencia de la urea, la eliminacin de creatinina
por la orina no viene afectada por la diuresis, al mismo tiempo que para una misma persona es muy constante su
eliminacin diaria con casi independencia de la dieta alimenticia, siendo la masa muscular el factor condicionante
ms directo de su excrecin total por da. La eliminacin de creatinina en un intervalo de 24 horas es un valor
constante, dependiente principalmente de la masa muscular del individuo, y que por otro lado el clculo del
aclaramiento de la creatinina ser un parmetro directo del funcionalismo renal.
La creatinina es el resultado de la degradacin de la creatina, componente de los msculos y puede ser

transformada en ATP, fuente de energa para las clulas. La produccin de creatinina depende de la modificacin
de la masa muscular. Vara poco y los niveles suelen ser muy estables. Se elimina a travs del rin. En una
insuficiencia renal progresiva hay una retencin en sangre de urea, creatinina y cido rico. Niveles altos de
creatinina son indicativos de patologa renal. El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los
datos clnicos y de laboratorio.
PRINCIPIO DEL TEST DE CREATININA
En medio alcalino la creatinina forma con el c. pcrico un compuesto coloreado, picrato alcalino de creatinina, que
se determina fotomtricamente. El color producido en la reaccin es proporcional a la concentracin de creatinina
de la muestra, en condiciones ptimas de ensayo.
La reaccin qumica aplicable para fotometra es la descrita por Jaffe, basada en el color anaranjado (Complejo
rojizo) que se produce al reaccionar la creatinina con el picrato alcalino. Hay varias substancias en el suero y orina
que actan como cromgenos inespecficos, lo que es un problema principalmente para el clculo del aclaramiento.
Por este motivo tiene una gran importancia la adecuacin de todas las variables de la reaccin, muy especialmente
el pH, con el fin de obtener la mxima sensibilidad para la creatinina y la mnima interferencia de cromgenos.
Adaptando la reaccin a una medida cintica, se logra una gran especificidad debido a que la creatinina reacciona
con el picrato alcalino con ms rapidez que los cromgenos (metilguanidina, picramato), por lo que la medida del
incremento de color en un breve perodo de tiempo inicial de la reaccin valorarn principalmente creatinina, con
poca influencia de los cromgenos inespecficos, por esto es recomendable, de ser posible, la determinacin
cintica.
51
SIGNIFICADO CLNICO DE LA CREATININA

La creatinina aumenta en suero en casos de insu ciencia renal, aguda o crnica, en hipertiroidismo y en acromegalia
o gigantismo activos.
En orina el aumento se presenta en diabetes mellitus e infecciones. Tambin, el ejercicio favorece el aumento de su
excrecin por la orina.
Durante el embarazo o por disminucin de la masa muscular, la concentracin de Creatinina en suero se reduce,
mientras que en orina se encuentra disminuida en insu ciencia renal, miopatas, anemias o hipotiroidismo.
Una nica prueba de laboratorio no permite establecer un diagnstico. Los resultados se han de evaluar en el contexto
de todos los datos clnicos y de laboratorio obtenidos.
A). CREATININIA
1. MATERIALES:
. Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
Equipamiento habitual de laboratorio.
Suero o plasma heparinizado.
Orina: Diluir la muestra al 1/50 con agua destilada. Mezclar. Multiplicar el resultado
obtenido por 50 (factor de dilucin)
2. REACTIVOS
A. 1 x 100 mL Disolucin c. pcrico
B. 1 x 100 mL Disolucin alcalina
C. 1 x 5 mL Estndar
Mezclar volmenes iguales de los dos reactivos (A y B) antes de proceder al ensayo.
COMPOSICIN DEL REACTIVO DE TRABAJO
Ac. pcrico 55 mM
DMSO 2,8 mM
NaOH 0,50 M
G
Estndar. Disolucin acuosa de creatinina equivalente a 2,0 mg/dL ( 176,8 mol/L). Lista para su uso
Los componentes del kit almacenados a temperatura ambiente ( 25C), son estables hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta. Los reactivos A y B una vez mezclados son estables 21 das a
temperatura ambiente ( 25C). Conservar en la oscuridad.
3. PROCEDIMIENTO:
2. Llevar el reactivo de trabajo a temperatura ambiente. Pipetear en el tubo de reaccin
Reactivo (L). 1000 1000 1000

Muestra (L) 100
Patrn ( estndar) (L) 100
4. Mezclar bien y colocar en las cubetas. El blanco es el contenido del reactivo

5. Anotar las Absorcin a los 20 y 80 segundos.
4. RESULTADO
CALCULO
Concentracin de creatinina
Determinar la Abs obtenida para la muestra y el ST segn la frmula:
Unidades S.I. :(mg/dL) x 88,4 = mol/L

Suero/plasma Orina(*)
Hombres: 0,6-1,1 mg/dL 21-26 mg/Kg/24 h.
Mujeres: 0,5-0,9 mg/dL 16-22 mg/Kg/24 h
G
53
PRACTICA N 11
DETERMINACIN CUANTITATIVA DE BILIRRUBINA TOTAL Y DIRECTA

I. COMPETENCIAS
Conoce el manejo adecuado de la tcnica para la determinacin de bilirrubina

Reconoce los valores de referencia de bilirrubina
Define cules son las principales patologas que se presentan valores altos o bajos de bilirrubina
II. INTRODUCCIN
La bilirrubina se origina por degradacin del grupo hemo de la hemoglobina, que a su vez aparece
en el plasma como consecuencia de la destruccin de los glbulos rojos en el sistema retculo endotelial. La
hemoglobina, una vez liberada en el interior del eritrocito, se combina con las haptoglobinas, protenas plasmticas
especficas para su transporte. En una primera etapa y tras su liberacin de la haptoglobina, se forma, por accin
de una oxigenasa, un grupo formilo, con lo que se rompe el anillo tetrapirrlico del hemo, formndose el compuesto
denominado biliverdina, que en una etapa posterior y por accin de una reductasa se transforma en bilirrubina.
Desde un punto de vista analtico y clnico, interesa conocer los niveles de bilirrubina total y diferenciar
cuantitativamente la "bilirrubina libre" o preheptica que aumenta principalmente en procesos de tipo hemoltico,
de la "bilirrubina conjugada" o heptica que est incrementada en la disfuncin heptica y ms concretamente
fallos de los mecanismos de su eliminacin, a travs del sistema biliar, cuyo primer paso es introducirse del
hepatocito a los canalculos biliares.
Casi todas las tcnicas de cuantificacin de la bilirrubina se basan en la reaccin de Malloy-Evelyn, que valora
colorimtricamente por la formacin de azobilirrubina, de color rojo cereza, cuando a la bilirrubina se la hace
reaccionar en determinadas condiciones con el cido sulfanlico diazotado.
La bilirrubina se origina por la degradacin de la hemoglobina. Es transportada del bazo al hgado y se excreta en
la bilis. La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubina en plasma. Causas ms probables
de la hiperbilirrubinemia: Bilirrubina Total: Aumento de la hemlisis, alteraciones genticas, anemia neonatal,
alteraciones eritropoyticas, presencia de drogas.
PRINCIPIO DEL TEST DE BILIRRUBINA
La bilirrubina total se determina por reaccin con el cido sulfanlico diazoado, en presencia de cafena, que da
lugar a la formacin de un azopigmento. La bilirrubina directa se determina mediante la reaccin anterior, en
ausencia de cafena.
La bilirrubina conjugada, muy polar, reacciona en medio acuoso con el reactivo de diazotacin, por lo que se le
llam directa, pues al poner en contacto el suero y el reactivo apareca directamente el color. Sin embargo, la
bilirrubina libre, poco polar, no da directamente la reaccin y es preciso aadir un tercer reactivo que inicialmente
fue el metanol- para que produzca la reaccin de diazotacin con la consiguiente aparicin del color; por este
motivo se llam bilirrubina indirecta.
G
54
Como fundamento se dice que la bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el cido sulfanlico diazotado
midindose fotomtricamente. De las dos fracciones presentes en suero, bilirrubin-glucurnido y bilirrubina libre
ligada a la albmina, slo la primera reacciona en medio acuoso (bilirrubina directa) precisando la segunda la
solubilizacin con cafena para que reaccione (bilirrubina indirecta). En la determinacin de la bilirrubina indirecta
se determina tambin la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total. La intensidad del color formado
es proporcional a la concentracin de bilirrubina presente en la muestra ensayada
SIGNIFICADO CLNICO DE LA BILIRRUBINA
La bilirrubina es un producto del metabolismo de la hemoglobina que se transporta al hgado, all se conjuga con
cido glucurnico y el hgado la segrega a travs de la bilis. Esta bilirrubina conjugada es la llamada bilirrubina
directa, mientras que la bilirrubina no conjugada se denomina bilirrubina indirecta. La bilirrubina total en el suero
equivale a la bilirrubina directa ms la bilirrubina indirecta.
La bilirrubina directa aumenta en la obstruccin de vas biliares, cirrosis y hepatitis.
El aumento de la bilirrubina indirecta o de la total puede indicar enfermedades hemolticas, ictericia neonatal
siolgica, enfermedad Gilbert o intolerancia a la fructosa.
BILIRRUBINA TOTAL
MTODO:
1. MATERIALES:
Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 546 nm .
2. REACTIVOS
Kit 1 x 250 mL.
A. 1 x 50 mL Ac. Sulfanlico.
B. 2 x 100 mL Cafena.
C. 1 x 2 mL Nitrito sdico.
Preparacin del reactivo diazo: Mezclar 1 parte de la disolucin C con 50 partes de la disolucin A.
Las concentraciones en las disoluciones reactivas son:
A. c. sulfanlico 6 mM
HCl 0,17 M
B. Cafena 0,25 M
Benzoato sdico 0,50 M
C. Nitrito sdico 0,4 M
MUESTRA
Suero o plasma exento de hemlisis.
La bilirrubina srica disminuye en un 50 % despus de 1 hora a temperatura ambiente ( 25C), y expuesta a
la luz solar directa. Las muestras mantenidas a 2-8C en la oscuridad son estables aproximadamente 3 das.
3. PROCEDIMIENTO:
3. Colocar en cada uno de ellos las cantidades que se indican en la tabla, Blanco: Agua:
G
4. Mezclar bien, incubar a temperatura ambiente (20-25)

5. Leer exactamente a los10 min.
6. RECUERDA 1ml es igual a 1000 (L) y 0,1 ml es igual a 100 (L)
4. RESULTADOS
CALCULOS:
Abs = Abs muestra (M) Abs (BM) de la muestra
Abs x 12,8 = mg bilirrubina total / dL
Unidades SI
mg / dL x 17,1 = mol / L
Adultos: hasta 1 mg/dL de bilirrubina total
62
Recin nacidos Prematuros No-Prematuros
< 1 da 1,0 - 8,0 mg/dL 2,0 - 6,0 mg/dL
< 2 das 6,0 - 12,0 mg/dL 6,0 - 10,0 mg/dL
3-5 das 10,0 - 14,0 mg/dL 4,0 - 8,0 mg/dL
Estos valores son orientativos. Se recomienda que cada laboratorio establezca
sus propios valores de referencia.
B). BILIRRUBINA DIRECTA
1. MATERIALES:
Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 546 nm .
2. REACTIVOS
A. 1 x 50 mL c. Sulfanlico.
B. 2 x 100 mL Disolucin salina.
C. 1 x 2 mL Nitrito sdico.
Preparacin del reactivo Diazo: Mezclar 1 parte de la disolucin C con 50 partes de la disolucin A.
Las concentraciones en las disoluciones reactivas son:
A. Ac. Sulfanlico. 6 mM
HCl 0,17 M
B NaCl 0,9%
C. Nitrito sdico. 0,4 M
Los componentes del kit almacenados a temperatura ambiente ( 25C) son estables hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta. El reactivo diazo es estable 15 das a temperatura ambiente ( 25C).
MUESTRA
Suero o plasma exento de hemlisis.
La bilirrubina srica disminuye en un 50 % despus de 1 hora a temperatura ambiente ( 25C), y expuesta
la luz solar directa. Las muestras mantenidas a 2-8C en la oscuridad son estables aproximadamente 3 das.
3. PROCEDIMIENTO:
3. Colocar en cada uno de ellos las cantidades que se indican en la tabla, Blanco: Agua:
4. Mezclar bien, incubar a temperatura ambiente (20-25)

5. Leer exactamente a los 5 min.
4. RESULTADOS
CALCULOS:
Abs = Abs PR - Abs BL M
Donde:
Abs. M: Absorcin de la muestra
Abs BM: Absorcin del blanco de muestra
Abs x 12,8 = mg bilirrubina directa / dL
Unidades SI
mg / dL x 17,1 = mol / L
Adultos: hasta 0,25 mg/dL de bilirrubina directa
Estos valores son orientativos. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de
referencia.
G
57
PRACTICA N 12
EVALUACION DEL ESTADO NUTRICIONAL
I. COMPETENCIAS
1. Identificar medidas antropomtricas ms usadas en la evaluacin del estado nutricional (peso, talla,
circunferencia braquial, etc).
2. Medir, evaluar y analizar datos antropomtricos, relacionndolos con el crecimiento fsico, la nutricin y la
salud.
3. Utilizar correctamente los instrumentos disponibles, estndares de referencia, sistemas de gua y mtodos
para la evaluacin de la composicin corporal
4. Describir la importancia de la evaluacin nutricional y del monitoreo del crecimiento del adulto
II. INTRODUCCION
La evaluacin del estado nutricional constituye una actividad prioritaria en la atencin individual de la salud, a nivel
colectivo o poblacional. Nos permite proponer polticas, guiar programas, intervenciones, acciones educativas y
modificarlas de ser necesario, a fin de lograr una correcta atencin y utilizacin efectiva de los recursos.
La evaluacin del estado nutricional puede realizarse a travs de estudios transversales (en un momento determinado),
longitudinales o de sistemas de vigilancia. Para ello, puede utilizarse mtodos indirectos, directos o ambos. Los mtodos
indirectos ms comunes incluyen el uso de indicadores socioeconmicos, de disponibilidad y consumo de alimentos.
Estos mtodos generalmente requieren de personal especializado, tiempo y representatividad de muestras, lo que los
hace costosos. Dentro de los mtodos directos se encuentran los indicadores antropomtricos, bioqumicos y la
evaluacin clnica. Los indicadores bioqumicos son utilizados para medir deficiencias especficas de nutrientes; se
realizan a travs de submuestras y por lo general son costosos; mientras que los mtodos clnicos slo son tiles
cuando se ha manifestado la enfermedad. Por el contrario, los estudios antropomtricos son los utilizados con mayor
frecuencia en los servicios de salud y comunidad; son fciles de obtener, de muy bajo costo y muy tiles.
Las medidas antropomtricas ms usadas en la evaluacin del estado nutricional son: el peso, la talla, la circunferencia
braquial y los pliegues cutneos. Los valores de estas medidas no tienen significado por si solos, a menos que se
relacionen con la edad, entre ellos u otros dimetros. Cuando se establecen relaciones entre ellos se llaman ndices.
Los ndices ms usados son el peso para la edad P(E), la talla para la edad T(E) y el peso para la talla P(T).
DETERMINACIN DE LA VALORACIN NUTRICIONAL ANTROPOMTRICA
La antropometra evala el tamao corporal y la proporcin entre talla y peso. Igualmente, permite estimar de forma
indirecta los distintos compartimentos corporales (agua, masa magra y masa grasa).
Cambios en el peso y en las circunferencias de la cintura y de la cadera, entre otros, son indicadores de variaciones en
el estado nutricional, que pueden valorarse por comparacin con los valores previos o con los intervalos de normalidad
obtenidos en estudios poblacionales.
Las medidas antropomtricas son fciles de obtener, aunque su fiabilidad depende del grado de entrenamiento de
quin toma la medida, requieren un instrumental sencillo (balanza, calibrador de pliegues cutneos, cinta mtrica
flexible, tallmetro) y su costo es bajo.
La principal causa de error en la determinacin e interpretacin de los parmetros antropomtricos se debe a la falta
de precisin, pues los valores obtenidos dependen mucho de quin, cmo y donde se miden. La hidratacin, el tono
muscular y la edad tambin influyen.
G
CLASIFICACIN DE LA VALORACIN NUTRICIONAL SEGN IMC

La clasificacin de la valoracin nutricional antropomtrica se debe realizar con el ndice de masa corporal (IMC). En
ese sentido, los valores obtenidos de la toma de peso y medicin de la talla sern utilizados para calcular el IMC a
travs de la siguiente frmula: IMC = Peso (kg)/(talla (m) , y el resultado deber ser comparado con el Cuadro 1 de
clasificacin del estado nutricional segn IMC.
Clasificacin de la valoracin nutricional de las personas adultas mayores segn ndice de masa corporal
(IMC)
Fuente: Organizacin Panamericana de la Salud (OPS). Gua Clnica para Atencin Primaria a las Personas Adultas Mayores. Mdulo 5.
Valoracin Nutricional del Adulto Mayor. Washington, DC 2002.
La clasificacin de la valoracin nutricional con el IMC es referencial en esta etapa de vida, debido a que las
modificaciones corporales que ocurren durante el proceso de envejecimiento, afectan las medidas antropomtricas
como el peso y la talla requiriendo que la persona adulta mayor sea evaluada de manera integral.
INTERPRETACIN DE LOS VALORES DE NDICE DE MASA CORPORAL (IMC):
IMC 23,0 (delgadez)

Las personas adultas mayores con un IMC 23,0 son clasificadas con valoracin nutricional de delgadez, que es una
malnutricin por dficit, y puede estar asociado a diferentes problemas, tales como: psquicos (depresin, trastornos de memoria
o confusin, mana, alcoholismo, tabaquismo), sensoriales (disminucin del sentido del gusto, visin, auditivo), fsicos (movilidad,
astenia), sociales (soledad, malos hbitos dietticos, maltrato), bucales (falta de piezas dentarias), digestivos (malabsorcin),
hipercatablicas (cncer, diabetes), entre otras.
G
83
IMC > 23 a < 28 (normal)
Las personas adultas mayores con un IMC de > 23 a < 28, son clasificadas con valoracin nutricional normal, y es el
IMC que debe tener y mantener esta poblacin, de manera constante.
IMC 28 a < 32 (sobrepeso)
Las personas adultas mayores con un IMC de 28 a < 32, son clasificadas con valoracin nutricional de sobrepeso,
que es una malnutricin por exceso, caracterizado por la ingesta elevada de caloras, malos hbitos alimentarios,
escasa actividad fsica, entre otros.
IMC 32 (obesidad)
Las personas adultas mayores con un IMC 32, son clasificadas con valoracin nutricional de obesidad, que es una
malnutricin por exceso, e indica un mayor riesgo de sufrir de enfermedades cerebrovasculares, enfermedades
cardiovasculares, cncer de mamas, diabetes mellitus tipo 2 no insulinodependiente, enfermedad por reflujo
gastroesofgico, osteoartrosis, y prdida de la movilidad.
VALORACIN DE COMPARTIMIENTO PROTEICO
Constituye el 15-20% del peso corporal total y est representado por las protenas corporales, tanto estructurales como
funcionales.
a) Compartimento proteico somtico
Las protenas musculares se determinan por ndices indirectos:
1. Peso corporal
Refleja la masa muscular, dado que sta representa alrededor del 20% de ese peso.
2. Excrecin urinaria de creatinina (ndice creatinina-altura = ICA)
La produccin endgena y la excrecin de creatinina reflejan indirectamente la masa muscular corporal total, ya que
alrededor del 2% del fosfato de creatina del msculo se transforma diariamente a creatinina.
Resulta de comparar la excrecin de creatinina de un paciente con la atribuda a otro sujeto de altura semejante y peso
ideal (ICA % = excrecin actual / excrecin ideal de creatinina x 100) (Tabla )
b) Compartimento proteico visceral
Representado por la concentracin plasmtica de las protenas circulantes (fundamentalmente por las protenas de
sntesis heptica: albmina, transferrina, protena ligadora de retinol y prealbmina).
Limitaciones: Los niveles sricos de las protenas de sntesis heptica dependen no slo de una nutricin proteica
adecuada, sino tambin de la capacidad de sntesis heptica, del ndice de aprovechamiento metablico, del estado de
hidratacin y de la excrecin.
G
Albmina
Su medicin es el parmetro tradicional de valoracin del compartimiento proteico visceral. El hgado es su nico
lugar de sntesis.
Interpretacin:
Normalidad: 3,5-4,5 g/dl
Malnutricin leve: 2,8-3,4 g/dl
M. moderada: 2,1-2,7 g/dl
M. grave: < 2,1 g/dl
Limitaciones:
Pool intravascular del 40%
Vida media prolongada: 20 das
Cambios de decbito a bipedestacin el pool intravascular (hasta el 16%)
Niveles en hepatopatas, edema idioptico, sndrome nefrtico, hipotiroidismo, enteropata pierdeprotenas,
quemaduras trmicas
Niveles en transfusiones (sangre y plasma).
Transferrina
El hgado es el principal lugar de sntesis, y la regula por medio de la ferritina presente en el hepatocito.
Interpretacin:
Normalidad: 220-350 mg/dl
M. proteica leve: 150-200 mg/dl
M. P. moderada: 100-150 mg/dl
M. P. grave: < 100 mg/dl
Limitaciones:
Vida media: 8-10 das
Niveles en procesos agudos, anemia perniciosa, anemia de procesos crnicos, hepatopata, sobrecarga de hierro,
sndrome nefrtico, enteropata pierde-protenas, terapia con esteroides Niveles en hipoxia, embarazo, tratamiento
con estrgenos o anovulatorios, deficiencia de hierro
Protena fijadora del retinol (PFR)
Sntesis heptica. Vida media corta (10-12 horas), por lo que rpidamente refleja alteraciones de la sntesis proteica
heptica. Niveles normales en adultos de 3-6 mg/dl.
Interpretacin:
M. proteica: < 3 mg/dl.
Limitaciones:
brusco en estrs metablico agudo
Se filtra y metaboliza en rin (no es vlido en insuficiencia renal)
Prealbmina
Sntesis heptica. Vida media corta de 2-3 das. Valores normales: 20-50 mg/dl.
Interpretacin:
M. proteica: < 20 mg/dl
Limitaciones:
brusco en estrs metablico agudo
Se afecta ms por la restriccin energtica que por la proteica
VALORACIN DEL COMPARTIMIENTO GRASO
El tejido adiposo constituye, en el sujeto con normopeso, alrededor de un 25% del peso corporal total. Las reservas
grasas pueden ser estimadas por el peso corporal y mediante la cuantificacin de la grasa subcutnea.
a) Grasa subcutnea
Su medida es una estimacin fiable del compartimiento graso, ya que el 50% del tejido adiposo se encuentra en el
espacio subcutneo. Las mediciones del pliegue tricipital han sido las ms utilizadas, pero las mediciones en ms de
un lugar proporcionan una valoracin ms precisa del volumen de este compartimiento.
Pliegues utilizados: tricipital, subescapular, suprailaco, abdominal, bicipital. Las ms utilizadas son las dos primeras.
Pliegue tricipital
Se realiza aplicando un calibrador regulado a presin durante 3 segundos en el punto medio entre acromion y olcranon
del brazo no dominante, pellizcando piel y tejido celular subcutneo, repitiendo la operacin 3 veces y anotando la
media de las 3 determinaciones. Se compara con referencias poblacionales.
G
85
Pliegue subescapular
Se realiza aplicando el calibrador 1 cm por debajo de la punta de la escpula derecha, con el paciente en
sedestacin, promediando 3 determinaciones y comparando con referencias poblacionales.
M. calrica leve o moderada: si < p25 y grave si < p10. Requiere la no existencia de enfermedades cutneas ni
edema, as como cierta experiencia del investigador.
b) Grasa corporal total (GCT)
Se puede calcular conociendo los pliegues tricipital (PT) y subescapular (PS).
c) Porcentaje de grasa corporal (% GC)

GCT/Peso actual X 100. Segn la ecuacin de Siri:
siendo C para el varn de 1,1143 y para la mujer de 1,1278; y M para el varn de 0,0618 y para la mujer de 0,0775.
M. calrica leve o moderada: si % GC es < Percentil 25 y grave si < P 10 .
La impedancia bioelctrica (bi o tetrapolar, esta ltima la preferible), es til en la valoracin del contenido total de grasa
corporal, pero no del patrn de distribucin, y del resto de compartimentos, y siempre en sujetos con IMC entre 17 y
35.
G
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MATERIAL
Calibrador (Personal body fat tester)
El Personal Body Fat Tester (PBFT) Fig. , es un calibrador de muy bajo costo para la medicin del porcentaje de grasa
corporal es ligero y fcil de usar. Este es un calibrador muy bsico, aunque sorprendentemente da medidas bastante
repetibles y precisas cuando se usa correctamente. Su pequeo tamao ligero lo hace adecuado para tomar sus propias
medidas de pliegue cutneo en la privacidad del hogar, y con grficos proporcionados se puede fcilmente convertir
las medidas en porcentaje de grasa corporal.
MTODO
A. Determinacin de Parmetros antropomtricos y composicin corporal
1.Registro de la talla: se determina con la persona descalza, de espaldas al vstago vertical del tallmetro, con los
brazos relajados y la cabeza en una posicin de forma que el meato auditivo y el borde inferior de la rbita de los ojos
estn en un plano horizontal.
2.Registro del peso: El peso es un buen parmetro de evaluacin del estado nutricional individual. Se debe medir,
preferiblemente, con una balanza digital calibrada, con el sujeto de pie, apoyado de forma equilibrada en ambos pies,
con el mnimo de ropa posible o con bata clnica, despus de evacuar la vejiga y el recto. Hay que distinguir entre: 1.
Peso habitual: es el que usualmente tiene el individuo. 2. Peso actual: es el que se determina en el momento de realizar
la valoracin. Peso ideal: se obtiene a partir de la talla y la complexin en tablas de referencia. Se dispone de distintas
tablas que pueden ser visitadas en : http://www.healthchecksystems.com/heightweightchart.htm.,
http://www.lifeinsurancerecommendations.com/policy-review/height-and-weight-chart/ ,
http://www.who.int/childgrowth/standards/weight_for_height/en/. Tambin puede calcularse con alguna de las
numerosas ecuaciones que se han propuesto con dicho fin.
3.Determinacin del IMC: A partir del peso (kg) y de la talla (m). calcular el IMC o ndice de Quetelet, mediante la
siguiente frmula: IMC = Peso (kg) / Talla2 (m)
4.Circunferencia de la cintura: Valores de ms de 88 cm en la mujer y 102 cm en el hombre, estn asociados con un
riesgo sustancialmente aumentado de complicaciones metablicas.
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5.Registro del del Pliegue cutneo suprailiaco

Este pliegue cutneo es medido justo arriba de la cresta ilaca en la linea midaxilar. El eje longitudinal sigue las lneas
naturales de desdoblamiento de la piel (lineas topolgicas llamadas lneas de Langer) y corre diagonalmente. El sujeto
debe permanecer recto de pi con los pies juntos y los brazos colgando a los lados, aunque el brazo puede estar
separado del cuerpo y flexionado ligeramente para mejorar el acceso al sitio. La persona que realiza la medicin debe
sujetar el pliegue cutneo a 1 cm posterior de la linea midaxilar y medir el pliegue sobre dicha lnea.
Seguir los pasos que a continuacin se grafican:
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Paso 1 El sitio a utilizar para la medicin es el pliegue cutneo suprailaco (aproximadamente una pulgada por encima
del hueso de la cadera derecho, vea la figura 1).
Paso 2 Mientras est de pie, pellizque firmemente el pliegue suprailaco entre el pulgar y el ndice izquierdo, ver las
figuras 2 y 3. Coloque las pinzas BFT sobre el pliegue cutneo mientras contina sosteniendo el pliegue cutneo con
la mano izquierda, ver la figura 4 .
Paso 3 Presione con el pulgar indicado en el BFT hasta que sienta un ligero clic. La parte deslizante se detendr
automticamente en la medida correcta, ver la figura 5. Despus de leer la medicin, regresar la parte deslizante a la
posicin de inicio de la derecha. Repita tres veces y utilice el promedio como medida. Consulte la tabla de interpretacin
de grasa corporal para determinar el porcentaje de grasa corporal y su significado.
6. Registro del pliegue Tricipital
Debido a su accesibilidad, el trceps es el sitio ms comnmente medido. El sitio de pliegue cutneo del trceps (tricipital)
est en la cara posterior del brazo, sobre el msculo trceps, a medio camino entre la proyeccin lateral del proceso
acromin de la escpula y el margen inferior del proceso olcranon del cbito. Estas marcas seas son fcilmente
distinguibles. El punto medio entre los procesos acromin y olcranon debe ser marcado a lo largo del lado lateral
(exterior) del brazo con el codo flexionado a 90 grados. El brazo del sujeto debe luego colgar suelto hacia un lado, con
la palma dirigida anteriormente para determinar apropiadamente la lnea media posterior.
El sitio de pliegue cutneo debe ser marcado a lo largo de la linea media posterior del brazo al mismo nivel del punto
medio marcado previamente. La persona que realiza la medicin deber colocarse detrs del sujeto, sosteniendo el
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pliegue con la mano izquierda a 1 cm proximal del sitio del pliegue. Las puntas del plicmetro debern estar a 1 cm
del pulgar y el ndice, perpendicular al eje longitudinal del pliegue.
6. Registro del pliegue Bicipital

El pliegue cutneo bicipital es un pliegue vertical en el aspecto anterior del brazo, sobre la loma del msculo bceps,
directamente opuesto al sitio de pliegue tricipital.
7. Registro del pliegue subescapular

El sitio subescapular est a 1 cm por debajo del ngulo inferior de la escpula. El eje longitudinal del pliegue cutneo
est en un ngulo de 45 grados directamente abajo y hacia el lado derecho (en las mediciones en el lado derecho del
cuerpo, y a la inversa en las mediciones del largo izquierdo del cuerpo). El sitio puede ser localizado buscando
suavemente el ngulo inferior de la escpula o haciendo que el sujeto coloque su brazo por detrs de la espalda.
La medicin se realiza con el sujeto de pi, con ambos brazos relajados a los lados. La piel es sujetada 1 cm por
arriba y medial al sitio de medicin a lo largo del eje.
IV. RESULTADOS
V: CONCLUSIONES
VI. BIBLIOGRAFA
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BIBLIOGRAFA
1. Aguilar L, Contreras M, Del Canto J, Vlchez W. Gua tcnica para la valoracin nutricional antropomtrica de la
persona adulta mayor. Lima: Ministerio de Salud, Instituto Nacional de Salud, 2013.
2. Althof Klinder Heintz; Sedimento Urinario; 6.ed; ed. Mdica Panamericana; Mxico 2003.
3. Anderson, Shauna C, Susan Cockayne; Qumica Clnica; 1 ed; trad. Ma.Teresa Aguilar; ed. Interamericana-
McGraw-Hill; Mxico, 1995.
4. Bayern. Manual de usuario Rapidchem 744/754.
5. Berg JM, Tymoczko JL, Stryer L. Bioqumica. 6ta. Edic. Edit. Revert, S. A. Barcelona (Espaa). 2011
6. Caballero E., de Cooper J., Gilkes E. Laboratorio Clnico, Manual de Flebotoma. Madrid, C.S.C.; disponible
en: www.ilustrados.com/documentos/manualflebotomia.doc.
7. Campbell MK, Farrell SO. Bioqumica. 6ta Edic. Edit. CENGAGE Learning. Mxico (Mxico). 2009.
8. Examen de sangre. Internet:http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/esp_imagepages/100 htm.
9. Fabiani F. Informacin y consejos para reducir el riesgo cardiovascular. Qu son los triglicridos?. Sociedad
Espaola de Arteriosclerosis. Disponible en: http://www.se-arteriosclerosis.org/assets/54.pdf
10. Flaschka H.A. Qumica Analtica Cuantitativa; 9.ed; trad. Antonio Eroles Gmez; ed. Continental S.A. de C.V;
Mxico 1984.
11. Gaw A, Murphy M, Srivastava R, Cowan R, OReilly D. Bioqumica Clnica. 5ta. Edic. Edit. ELSEVIER.
Barcelona (Espaa). 2015.
12. Gonzlez J.M., Arilla E., Rodrguez-Segada M., Sanchez Pozo A; Bioqumica Clnica; 1 ed; ed. McGraw-Hill;
Mxico, 1998.
13. Graff Sister. Anlisis de Orina, Atlas a color; 1 ed; trad. Pablo Rubn Koval; ed. Mdica Panamericana S.A;
Mxico 1983.
14. Hyunsu Lee, Sang-Hoon Lee, Sung-Jin Kim, Woo-Ik Choi, Jae-Ho Lee, and In-Jang Choi. Variations of the
cubital superficial vein investigated by using the intravenous illuminator. Anat Cell Biol. 2015 Mar;48(1):62-65.
15. Kaolan A., Pesce A.Qumica Clnica Teora, anlisis y correlacin; 3 ed; trad. Tania Carren Valencia; ed.
Javier Ortega Cesea; Mxico 1996.
16. Lpez-Santiago N. Pruebas de coagulacin. Coagulation tests. Acta Pediatr Mex. 2016 jul;37(4):241-245.
17. Mesejo A, Martnez J. Martnez C. Manual Bsico de Nutricin Cclnica y Diettica. Cap I. Valoracin del
estado nutricional. 2 Edicin. Hospital Clnico Universitario de Valencia, 2012. Disponible en:
http://www.bartolomebeltran.com/actualidad/archivos/ManualNutricion.pdf
18. Morn Luis; Obtencin de muestras sanguneas de Calidad analtica; 1 ed; ed. Mdica Panamericana S.A. de
C.V; Mxico D.F. 2001.
19. OMS. Mdulos de vaoracin clnica Parte I. Mdulo 5. Valoracin nutricional del adulto mayor. OPS. Oficina
Regional de la ORGANIZACIN MUNDIAL DE LA SALUD. Disponible en:
http://www.sld.cu/galerias/pdf/sitios/gericuba/modulo5.pdf
20. Presidencia de La Repblica; CGEA, Gua tcnica para la elaboracin de manuales de procedimientos;
Coleccin guas tcnicas, serie organizacin y mtodos nm. 9.
21. Reactivos para diagnostico clnico, Quimica Clnica Aplicada. Disponible en:https://www.qca.es
22. Terrs Speziale Arturo M; Clnica y Laboratorio: Ciencia y Tecnologa; 2ed; ed. Graphimedic S.A. de C.V;
Mxico 2002.
23. Tresler K. Laboratorio clnico y pruebas de diagnstico; 3 ed; trad. Dr. Jorge Mrigo; ed. El manual moderno;
Mxico, D.F, 1998.
24. Velzquez R. Manual de Prcticas de Bioqumica Clnica. Universidad Nacional Autnoma de Mxico.
Facultad de Qumica. D.F. 2009.
25. Whitehead T.P.; Manual, Principios de Control de Calidad (Lab/76.1); Organizacin Mundial de la Salud;
Qumica Clnica 1984.
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Manual de Bioquímica Uss 17-II

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DATOS DEL ESTUDIANTE

CDIGO DE ESTUDIANTE: APODERADO:

Correo crece: @crece.uss.edu.pe

ESCUELA PROFESIONAL: MEDICINA HUMANA

SEMESTRE ACADMICO: 2017-II CICLO y SECCIN:

TURNO DE PRCTICA: No DE MESA:

NORMAS, RECOMENDACIONES Y PRECAUCIONES PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO

PRCTICA No 1: BIOSEGURIDAD Y MANEJO DE EQUIPOS E INSTRUMENTOS UTILIZADOS EN

PRCTICA No 3: OBTENCIN DE MUESTRAS DE SANGRE Y MANEJO DE SUERO Y PLASMA 20

PRCTICA No 4: METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS: DETERMINACIN DE GLICEMIA 27

PRCTICA No 5: DETERMINACIN CUANTITATIVA DE COLESTEROL LQUIDO 31

PRCTICA No 6: DETERMINACIN CUANTITATIVA DE TRIGLICRIDOS 34

PRCTICA No 7: DETERMINACION CUANTITATIVA DE PROTENAS TOTALES 38

PRCTICA No 8: ENZIMOLOGA I: DETERMINACIN DE LIPASA 43

PRCTICA No 9: ENZIMOLOGA II: DETERMINACIN DE FOSFATASA ALCALINA 49

PRCTICA No 10: : DETERMINACIN DE CREATININA 50

PRCTICA No 11 DETERMINACIN DE BILIRRUBINA TOTAL Y DIRECTA 53

PRCTICA N 12: EVALUACIN DEL ESTADO NUTRICIONAL 57

NORMAS, RECOMENDACIONES Y PRECAUCIONES PARA EL TRABAJO EN EL LABORATORIO DE BIOLOGA

II. NORMAS DE UTILIZACIN DE PRODUCTOS QUMICOS

1. Antes de utilizar un compuesto qumico, asegurarse de que es el que se necesita.

III. NORMAS DE UTILIZACIN DEL MATERIAL DE VIDRIO

Los objetivos de estas normas son:

TIPOS DE REAS DE TRABAJO:

MICROORGANISMOS INFECTANTES POR GRUPOS DE RIESGO

Grupo de riesgo Microorganismo infectante

Agrupa microorganismos que pueden - Brucella - Paracoccidiodis brasilensis

Agrupa microorganismos que - Virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)

SEALES DE SEGURIDAD (PICTOGRAMAS)

DE ADVERTENCIA: Triangulares, con pictogramas de color negro y fondo amarillo o naranja.

2. DE SEGURIDAD: Rectangulares o cuadrangulares, con pictogramas de color blanco y fondo verde.

3. DE OBLIGATORIEDAD: Circulares y con pictogramas de color blanco con fondo azul.

GESTIN EN MANEJO DE RESIDUOS

2. Clasificacin de los Residuos segn su Peligrosidad:

Clase A: Residuos Biocontaminados (Peligrosos)

Clase B: Residuos Especiales

3. Manejo de Residuos Slidos:

MANEJO DE EQUIPOS E INSTRUMENTOS UTILIZADOS EN BIOQUMICA

El Espectrofotmetro es un instrumento para medir la trasmitancia o absorbancia de una muestra, en funcin de

Fig 1. Espectrofotmetro UNICO S2100UV

Fig. 2 Micropipeta mostrando sus partes

Fig. 3 Centrfuga digital

a .Centrifugacin analtica: Mide propiedades fsicas de partculas que sedimentan (coeficiente de

b. Centrifugacin preparativa: Aisla partculas, clulas o molculas.

Segn el medio en el que se centrifuga y la forma como se aplica:

a.Centrifugacin diferencial (frontera mvil): el comportamiento de cada componente de la muestra depende de

c. Centrifugacin isopcnica o de equilibrio de sedimentacin: Se utiliza una gradiente de densidad, pero el

Fig. 4a Bao Maria

Fig.4b. Partes del Bao Maria

1. Explica las bases tericas del uso y funcionamiento de un espectrofotmetro.

El fundamento de la espectrofotometra se debe a la capacidad de las molculas para absorber radiaciones,

Longitud de Onda - (nm) Color Color Complementario

Transmitancia y Absorbancia: Cuando un rayo de luz de una determinada lo ondangitud de

La absorbancia de una solucin es directamente proporcional a su concentracin a mayor nmero de

Fig. 6 SISTEMA INTERNO DEL EXPECTROFOTMETRO

1. Una fuente de energa radiante: lmpara de deuterio y tungsteno.

III. MATERIAL Y MTODOS

3.1 Materiales y equipos

3.2 Determinacin de los espectros de absorcin:

3.2.1 Preparacin de una curva de calibracin:

Longitud de onda Absorbancia Azul de metileno

Longitud de onda Absorbancia Azul de metileno

1. Reconoce reas especficas para la obtencin de muestras de sangre.