Universidad Autnoma de Zacatecas

Francisco Garca Salinas

Campus UAZ Siglo XXI, Carretera Zacatecas-Guadalajara Km 6. Ejido La
escondida, C.P. 98160, Zacatecas, Zacatecas
Lomas Guijarro Margarita, Mayorga Crdova Jonathan de Jess, Mercado
Vargas Jos Luis
Unidad Acadmica de Ciencias Qumicas Qumico
Farmacutico Bilogo 8A.

Sesin No. 5; Prctica 7: RECUENTO TOTAL DE LEUCOCITOS

Objetivo: Realizar la cuenta leucocitaria con el uso de la cmara de Neubauer en
sangre total y en base al resultado obtenido proporcionar la interpretacin del
mismo.
Introduccin
Los leucocitos circulan en sangre
pero tambin se hallan en el sistema
linftico y tejidos del organismo.
Llevan a cabo una funcin importante
de defensa. Algunas enfermedades
desencadenan una respuesta por
parte del sistema inmunitario y
ocasionan un incremento del nmero
o recuento de leucocitos. En otros
casos, se afecta la produccin de
leucocitos en la mdula sea o la
supervivencia de los mismos en la
sangre, de tal manera que el recuento
de leucocitos puede estar aumentado
o disminuido.
El recuento de leucocitos puede
indicar que existe algn tipo de
trastorno o enfermedad, si bien no
proporciona informacin acerca de la
causa. Para establecer el diagnstico
se deben solicitar pruebas
adicionales, entre las cuales se
incluyen frmula leucocitaria(recuento
diferencial de leucocitos), extensin
de sangre y en casos ms
graves aspirado o biopsia de mdula
sea. La frmula leucocitaria indica
cual es el tipo de leucocito que est
aumentado o disminuido y la
extensin de sangre y/o el aspirado o
biopsia de mdula sea ponen de
manifiesto la presencia de clulas
anmalas y/o inmaduras.
Material y reactivos
Material biolgico: sangre con EDTA
Cmara de Neubauer
Cubrehematimetro
Pipeta de Thoma para glbulos
blancos
Aspirador
Gasa
Solucin de Turk
Equipo: Microscopio ptico, agitador
de pipetas de toma, Piano
Procedimiento
 llenar la pipeta de Aspirar liquido de
Agitar 5 min.
thoma hasta 0.5 turk hasta 11

contar los leucocitos

Desechar las
en cada uno de los dejar reposar los
primeras 4 gotas y
cuadros grandes de la leucocitos 3 min
cargar la camara
camara

Laboratorio de Hematologa y Banco de Sangre

Q.F.B. Jonathan Jess Mayorga Crdova
Q.F.B. Margarita Lomas Guijarro
Q.F.B. Jos Luis Mercado Vargas

Campus UAZ Siglo XXI, Carretera Zacatecas-Guadalajara Km.6,

Ejido La escondida, C.P. 98160. Zacatecas, Zacatecas.

Nombre del paciente: Jonathan Jess Mayorga Crdova

Edad: 23 aos Sexo: Masculino

Doctor: A quien corresponda.

Examen solicitado Resultado Valor de Referencia

Leucocitos 5000 /L 4000-11000 /L

Interpretacin
La cantidad de leucocitos totales en el paciente estn dentro de los valores de
referencia, adems presentaban una morfologa adecuada esto significa que el
paciente no presenta ninguna patologa relacionada.
Cuestionario
Mencione al menos 5 errores que
pueden ocasionar resultados
invlidos
1.-no llenar la cmara correctamente
de manera homognea
2.-no llenar bien la pipeta de toma
hasta los volmenes indicados
3.-no agitar correctamente
4.-mal conteo de clulas
3.- Describa otra metodologa para
cuantificar leucocitos
Mtodo longitudinal. Con una pipeta
Pasteur se coloc una gota de sangre
a una distancia de uno a dos cm del
borde de un portaobjetos, con el borde
liso de un segundo portaobjetos y
formando un ngulo de
aproximadamente 30, se extendi la
gota de sangre teniendo cuidado de
que el deslizamiento fuera constante y
uniforme.
Mtodo transversal. Con una pipeta
Pasteur se coloc una gota de sangre
en la parte media de un portaobjetos,
sobre la gota se dej caer un segundo
portaobjetos, de tal manera que la
sangre se extendiera en forma rpida
y uniforme. En el momento en que la
sangre dej de extenderse, se desliz
paralelamente el portaobjetos superior
con un movimiento constante.
Mtodo con plumillas. La punta de una
plumilla (de las comnmente
empleadas para dibujo con tinta china)
se sumergi en la muestra de sangre
previamente mezclada,
posteriormente la plumilla se presion
ligeramente contra la pared del tubo
de la muestra para eliminar el exceso
de sangre. La punta de la plumilla se
coloc sobre un portaobjetos limpio, y
formando un ngulo de
aproximadamente 30, se desliz
longitudinalmente aplicando una ligera
presin. Este procedimiento se repiti
dos veces ms en diferentes lugares
del mismo portaobjetos, obteniendo
as tres extensiones lineales de
sangre.
Tincin. Una vez realizadas las
extensiones sanguneas, las clulas
se tieron de acuerdo con la tcnica
de Wright. Recuento de las clulas en
las laminillas teidas. El personal
seleccionado para realizar el recuento
diferencial de leucocitos en las
extensiones sanguneas estuvo
constituido por qumicos clnicos con
una experiencia de al menos 5 aos
en el rea de hematologa. El nmero
de clulas evaluadas en cada
extensin fue de 100, nmero
rutinariamente contado en los
laboratorios. En todos los casos, la
cuenta de leucocitos se inici
inspeccionando la extensin
sangunea con el objetivo de bajo
aumento para as seleccionar la
regin con la mejor distribucin de
leucocitos. Posteriormente, se cambi
al objetivo de inmersin colocndolo
en el extremo superior de la extensin
sangunea, inicindose el recuento y
clasificacin de los leucocitos en
direccin del extremo inferior en
campos sucesivos. Cuando fue
necesario, se continu con el recuento
de ms campos desde el extremo
superior al inferior, hasta completar el
nmero de clulas requeridas. En el
caso particular del mtodo de la
plumilla, la cuenta y clasificacin de
las clulas se inici desde
edigraphic.com BRAMBILA Y COL. 6
BIOQUIMIA VOL. 28 NO. 3, 4-12,
2003 el inicio de la extensin
sangunea, hasta completar 100
clulas. En este estudio nicamente
se compararon polimorfonucleares
(PMN), neutrfilos (N), linfocitos (L) y
monocitos (M). Debido al bajo
porcentaje de eosinfilos y basfilos
en las extensiones sanguneas, estas
clulas se incluyeron en el grupo de
los PMN. Los resultados obtenidos se
expresaron en valores absolutos
(clulas/L) de cada tipo celular
estudiado.
Equipo automatizado. La evaluacin
del nmero total de leucocitos y el
diferencial de leucocitos en los
especmenes se determin con el
autoanalizador de clulas hemticas
CellDyn 3000 (Abbot Laboratorios), de
acuerdo a las instrucciones del
proveedor. Este autoanalizador
emplea un sistema capilar que permite
la separacin de clulas individuales.
La incidencia de un rayo lser sobre
cada clula produce un fenmeno de
absorcin y dispersin de luz de
acuerdo a su tamao. La luz
emergente es captada y registrada por
cuatro detectores localizados en
diferentes ngulos. De esta forma el
CellDyn 3000 es capaz de contar y
diferenciar hasta 2,500 clulas/seg,
los resultados son expresados en
forma de histogramas de frecuencia
en relacin al volumen. Para asegurar
la calidad de los resultados, este
estudio se realiz bajo un sistema de
control de calidad interno basado en el
uso diario de sangre control comercial
a tres niveles. Los resultados fueron
aceptados solo si los CV para la
cuenta del total de leucocitos, N y L de
los controles estuvieron dentro de los
lmites de tolerancia del 10%, criterio
clnico de aceptabilidad de acuerdo a
Dacie.
4.-Cmo se prepara el lquido de
Turk, y en qu se diferencia con el
lquido de dilucin para el conteo
de eritrocitos?
Para el Recuento de Leucocitos se
utiliza un lquido de dilucin llamado
lquido diluyente de Trk, que se
compone de las siguientes
sustancias: Por cada 100 ml. De agua
destilada:
*2 ml de cido actico glacial
*1 ml de solucin acuosa de violeta
de genciana al 1%Funcin del lquido
de Trk: El cido actico produce lisis
de los eritrocitos sin alterar a los
leucocitos. El violeta de genciana tie
el ncleo de los leucocitos para que
estos puedan observarse mejor. El
violeta de genciana puede ser
sustituido por azul de metileno.
Solucin de Hayem: Esta solucin
se usa como la solucin de dilucin
en la
preparacin de sangre para la cuenta
de los glbulos rojos de la sangre.
Con
frecuencia se usa como solucin
colorante para manchas de sangre,
cuando se
aaden 0,05 gramos de eosina a la
solucin indicada aqu. Antes de
hacer la
mancha, mezcle una parte de sangre
por 100 partes de esta solucin
colorante.
Luego haga la mancha de sangre en
un portaobjeto limpio. Pese estas
sales y
adalas a 100 ml. de agua destilada
5.-Investigue otro anticoagulante a
parte del EDTA puede ser utilizado
para realizar una Biometra
hemtica
Aunque el EDTA es el anticoagulante
ms utilizado para la determinacin de
la biometra hemtica, al revisar la
literatura encontramos que el cido
ctrico dextrosa (ACD) es el
anticoagulante de eleccin, debido a
su pH, para asegurar una buena
conservacin de los hemates.
Algunos autores han evaluado con
muy buenos resultados el citrato
dextrosa fosfato (CDP) para la
realizacin de la biometra hemtica y
la determinacin de los tiempos de
coagulacin sangunea,
considerndolo un anticoagulante
muy bueno, debido a que, al igual que
el ACD, mezclado con la sangre tiene
un pH de 7.46, muy cercano al
fisiolgico, caracterstica que
garantiza la mayor conservacin de
las clulas sanguneas y de los
factores de la coagulacin.
Conclusin
Se realizo un conteo de leucocitos
totales utilizando una cmara de
Neubauer, lo cual es un parmetro
importante pues esto nos puede
hablar de muchos procesos
fisiolgicos, pero ms de inters son
procesos patolgicos en los cuales
estn involucrados los leucocitos pues
es el sistema inmune quien modula o
hace frente a infecciones de distinta
naturaleza as como tambin puede
estar generando un proceso
autoinmune o por el contrario una
inmunodeficiencia
Bibliografa
Rodak, B., Fritsma, G., & Keohane, E.
(2014). Hematologia. Mexico: Editorial Medica
Panamericana.
Lorenzi, T. (2000). Atlas de hematologia.
Grupo Gen - Guanabara Koogan.