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FACULDADE FASIPE
DEPARTAMENTO DE BIOMEDICINA
ESTGIO SUPERVISIONADO
MICROBIOLOGIA
SINOP/MT
2017
2
Sumrio
1. INTRODUO .................................................................................................................................. 4
1.1 Rotina Laboratorial ........................................................................................................................... 5
CAPTULO I........................................................................................................................................... 6
COLORAO DE GRAM ..................................................................................................................... 6
1.1 Objetivos ........................................................................................................................................... 6
1.2 MATERIAIS ..................................................................................................................................... 6
1.3 MTODOS ....................................................................................................................................... 8
1.4 Resultados e Discusso ..................................................................................................................... 3
1.5 Concluso .......................................................................................................................................... 4
CAPTULO II ......................................................................................................................................... 5
ZHIEL NEELSEN (Pesquisa por BAAR) .............................................................................................. 5
2.1 Objetivo ............................................................................................................................................. 6
2.2 MATERIAIS ..................................................................................................................................... 6
2.3 Mtodo .............................................................................................................................................. 6
2.4 resultados e Discusses ..................................................................................................................... 7
2.5 Concluso .......................................................................................................................................... 8
CAPTULO III ........................................................................................................................................ 9
MEIOS DE CULTURA E AUTOCLAVE ............................................................................................. 9
3.1 Tipos de meios de cultivo.................................................................................................................. 9
3.2 Meios para Crescimento e Isolamento ............................................................................................ 10
3.3 Objetivo ........................................................................................................................................... 11
3.4 Materiais.......................................................................................................................................... 11
3.5 Mtodos ........................................................................................................................................... 12
3.6 Discusso......................................................................................................................................... 12
3.7 Concluso ........................................................................................................................................ 13
CAPTULO IV ...................................................................................................................................... 13
HEMOCULTURA ................................................................................................................................ 13
4.1 Objetivo ........................................................................................................................................... 14
4.2 Materiais.......................................................................................................................................... 15
4.3 Tcnica da coleta ............................................................................................................................. 15
4.4 Resultados e Discusso ................................................................................................................... 15
4.5 Concluso ........................................................................................................................................ 16
CAPTULO V ....................................................................................................................................... 17
3
UROCULTURA ................................................................................................................................... 17
5.1 Objetivo ........................................................................................................................................... 17
5.2 Materiais.......................................................................................................................................... 18
5.3 Mtodos ........................................................................................................................................... 18
5.4 Resultado e Discusso ..................................................................................................................... 18
5.5 Concluso ........................................................................................................................................ 19
CAPTULO VI ...................................................................................................................................... 20
COPROCULTURA............................................................................................................................... 20
6.1 Objetivo ........................................................................................................................................... 21
6.2 Materiais.......................................................................................................................................... 21
6.3 Mtodos ........................................................................................................................................... 21
6.4 Resultado e Discusso ..................................................................................................................... 22
6.4.1 Mtodo de Rugai com Lisina ....................................................................................................... 22
6.4.2 Tcnica .................................................................................................................................. 23
6.5 Concluso ........................................................................................................................................ 23
CAPTULO VII .................................................................................................................................... 24
ANTIBIOGRAMA ............................................................................................................................... 24
7.1 Objetivo ........................................................................................................................................... 25
7.2 Materiais.......................................................................................................................................... 25
7.3 Mtodos ........................................................................................................................................... 25
7.4 Discusso......................................................................................................................................... 26
7.5 Concluso ........................................................................................................................................ 26
CAPTULO VIII ................................................................................................................................... 27
CONSIDERAES FINAIS ................................................................................................................ 27
REFERNCIAS .................................................................................................................................... 28
ANEXOS............................................................................................................................................... 31
4
1. INTRODUO
forma de estrela ou quadrada. Algumas podem at formar pares, cadeias, grupos; tais formaes
geralmente so caractersticas de um gnero particular ou uma espcie de bactrias
(TORTORA, 2012).
Quanto a sua estrutura as bactrias so compostas por parede celular, composta por
um complexo de carboidrato e protena chamado de peptideoglicano. O processo de reproduo
da maioria delas chamado de fisso binria (diviso em duas clulas iguais). Para a sua
nutrio, a maioria das bactrias faz uso compostos orgnicos encontrados na natureza
derivados de organismos vivos ou mortos, sendo que algumas so auttrofas (TORTORA,
2012).
Colorao de Hemocultura;
Gram; Urocultura;
Colorao de Ziehl Coprocultura;
Neelsen; Cultura de feridas.
6
CAPTULO I
COLORAO DE GRAM
1.1 Objetivos
A colorao uma tcnica de diagnostico rpida e precisa que fornece o diagnostico
etiolgico presuntivo. Classificando grupos especficos de bactrias por sua estrutura tintorial,
classificando-as em gram positiva ou gram negativas (CUNHA, 2012).
1.2 MATERIAIS
EPIs (luva, mascara, touca, jaleco); Kit para Colorao de Gram
Newprov.
8
1.3 MTODOS
Em alguns materiais clnicos importante avaliar a qualidade da amostra com objetiva de 10x,
verificando clulas epiteliais e leuccitos. Com objetiva de imerso de 100x, analisar vrias
3
Para Pereira; Palomo (2010) a colorao de Gram um dos mtodos mais utilizados em
laboratrios de microbiologia, sendo a porta de entrada para avaliao das amostras bacterianas
(PEREIRA, 2010).
Segundo eles, o emprego dessa tcnica requer avaliao criteriosa, por meio da
classificao dos microrganismos, como Gram-positivas ou Gram-negativas, possvel fazer a
deteco de bactrias associadas s infeces. Permitindo ao profissional Biomdico
estabelecer o diagnstico e dar incio ao tratamento emprico adequado para tal infeco
(PEREIRA; PALOMO, 2010).
De acordo com Levinson (2010) o teste de colorao de Gram se faz til na identificao
de diversas bactrias. Auxiliando tambm na escolha dos antibiticos adequados. De modo que,
no geral, bactrias Gram-positivas so sensveis a certas classes de antibiticos em relao s
Gram-negativas (LEVINSON, 2010).
Em relao a eficcias do mtodo de Gram, Morais et al (2008) ressalta que a anlise
dos esfregaos corados til para dar diagnstico rpidos em clnicas mdicas. Porm,
limitado, pois apenas aponta se no material h bactrias e qual o grau de sua sensibilidade. Em
comparao a outros testes, a tcnica de colorao de Gram no aponta com preciso a
especificidade das bactrias causadoras de infeces cervicais uterinas (MORAIS et al., 2008).
1.5 Concluso
Durante os dias do estgio supervisionado de microbiologia, foi possvel analisar
bactrias pelo mtodo de colorao de Gram, e pde-se observar as caractersticas morfolgicas
das bactrias. Permitiu-se concluir tambm que existem diferenas na composio da parede
celular de bactrias Gram positivas e Gram negativas, e que o mtodo proposto auxilia na
identificao de microrganismos patognicos ao homem.
CAPTULO II
ZHIEL NEELSEN (Pesquisa por BAAR)
2.2 MATERIAIS
EPIs (luva, mascara, touca, jaleco);
Microscpio;
Capela de exausto;
Bico de Bunsen;
Bisturi;
Frasco estril;
Lmina;
2.3 Mtodo
Fixar o material no calor com auxlio do bico de Bunsen na cmera de fluxo laminar,
utilizando todos os EPIs para proteo.
Cobrir a lmina com fucsina fenicada de Ziehl;
Com uma chama fraca sob a lmina, aquecer suavemente at a emisso de vapores,
durante 5 minutos. Evitar ebulio e evaporao do corante.
Lavar rapidamente em gua corrente;
Inclinar a lmina e gotejar a soluo descorante sobre o esfregao, at que no escorra
mais o lquido vermelho;
Lavar em gua corrente novamente;
Cobrir a lmina com a soluo de azul de metileno e deixar agir por 40 segundos a 1
minuto;
Lavar em gua corrente e secar entre duas folhas de papel filtro;
Observar em microscopia em objetiva de 100x com uso de imerso
As micobactrias apareceram corada de vermelho em fundo azul.
A colorao de Ziehl-Neelsen se baseia-se na capacidade de algumas bactrias
resistirem aos mtodos comuns de colorao devido composio altamente lipdica da parede
celular. Aps o processo de colorao a quente, as bactrias uma vez coradas, no sofrem ao
de descorantes fortes, como a soluo de lcool-cido. Sendo assim, a fucsina de Ziehl cora
todas as bactrias de vermelho, e aps a descolorao com lcool-cido, somente os bacilos
lcool-cido resistentes (BAAR) conservao esta cor. Como mtodo para facilitar a
visualizao cora-se o fundo com azul de metileno, estabelecendo-se um contraste ntido entre
elemento celulares e outras bactrias (azuis) e os BARR (vermelhos) (SANTANNA;
CERQUEIRA, 2007).
2.5 Concluso
O mtodo de colorao de Ziehl-Neelsen utilizado como porta de entrada para
deteco de doenas causadas por micobactrias. Apesar de no se tratar do padro-ouro para
o diagnstico de Tuberculose, serve como auxilio ao profissional por ser de fcil e rpido
deteco.
CAPTULO III
MEIOS DE CULTURA E AUTOCLAVE
3.3 Objetivo
So utilizados para propiciar o crescimento de microrganismos in vitro ou como
meio de transporte, independentemente da situao, ele utilizado como fonte de crescimento
para que o mesmo possa ser isolado e identificado. Existem vrias classes de meios de cultura
devida variedade de microrganismos (BROOKS et al., 2012).
3.4 Materiais
o EPIs (luva, mscara, touca, jaleco); o Proveta;
o Placas de petri; o Amostra de sangue;
o Balana; o Fita 3M;
o Kit para gar (Cled, Macconkey, o Fita adesiva;
Sangue, Chocolate); o Autoclave;
o Bico de Bulsen; o Papel craft;
o gua destilada; o Gaze; algodo;
o Trip com placa de amianto; o Bico de Bunsen;
o Bquer; o Saco para autoclave;
o Basto de vidro; o Fita reativa Ph.
o Erlenmeyer;
3.5 Mtodos
Pesar a base do meio de cultura seguindo a bula do produto, com a esptula e o
Erlenmeyer na balana de preciso;
Medir gua destilada e colocar junto com a amostra pesada;
Colocar o trip e a tela de amianto em cima do bico de bulsen, e colocar o Erlenmeyer
em cima do trip, mexer at que o gar fique dissolvido;
Esperar esfriar, fechar com boneco e papel Kraft e levar para a autoclave;
Por ltimo verter o meio nas placas de petri, sem formar bolhas, espere gelificar e levar
para a geladeira.
3.6 Discusso
Os resultados obtidos durante os experimentos propostos na aula do estgio foram
devido aos protocolos dos procedimentos que so essenciais para o preparo de cada cultura,
citados no decorrer do relatrio. Aps isso, foi possvel observar que os meios se solidificam
rapidamente e que cada gar possui finalidades de isolamento e crescimento especficos para
cada tipo de microrganismos.
Segundo Tortora (2012) os fatores essenciais para que possa ocorrer o crescimento
microbiano se dividem em duas categorias principais: fsicas e qumicos. Os quais incluem
temperatura, pH, presso osmtica, fontes de carbono, nitrognio, enxofre, fsforo, oxignio e
fatores orgnicos de crescimento.
Para fazer o isolamento de um microrganismo, Prescott, Harley e Klein (2002)
ressaltam que se deve empregar o meio de cultura mais adequado para que possa ocorrer o seu
desenvolvimento e durante preparo do meio muitas vezes preciso empregar o ambiente natural
como modelo de composio, pois muitos dos microrganismos necessitam dos requerimentos
nutricionais os quais podem refletir o tipo de ambiente onde ele encontrado.
De acordo com Ogunseitan (2005) mesmo com toda a tecnologia disponvel, no
possvel obter uma informao concreta sobre os aglomerados microrganismos que
possivelmente possam estar presentes em amostras retirada do meio ambiente, devido
inadequao de alguns dos microrganismos s metodologias de recuperao, isolamento e
cultivo utilizadas hoje em dia.
Alm dos solos, Tortora et al., (2006) socializa que tambm podem ser isolados
microrganismos do ambiente areo e aqutico. Os microrganismos que so encontrados no
ambiente aqutico acabam sendo afetados pela disponibilidade de O2, nutrientes bem como a
luminosidade.
Segundo Ogunseitan (2005) os microrganismos que conseguem se desenvolvem em
ambientes que apresentam condies extremas de temperatura, salinidade, acidez ou
alcalinidade so chamados de extremfilos. E seu isolamento tem ficado muito importante
ultimamente devido possibilidade de cultiv-los sem que tenha contaminaes ou o uso de
suas enzimas em condies que desativam outras que no so de interesse, como no caso da
Taq polimerase utilizada no processo de PCR.
Para Lightfoot e Maier, (2003) importante a esterilizao dos meios e dos materiais
que utilizado, pois podem ser fonte de contaminao e consequentemente faz com que
ocorram alteraes na amostra ou pesquisa que est se realizando. Cuja finalidade tornar
inativos ou remover todos os microrganismos vivo.
3.7 Concluso
A aula de preparo de meio de cultura no estgio de microbiologia teve como o objetivo
principal contribuir para o ensino dos acadmicos referente s metodologias de esterilizao,
materiais e equipamentos utilizados em um laboratrio de microbiologia; como tambm o
preparo de diferentes meios de cultura. Creio eu, que este objetivo foi alando com sucesso.
CAPTULO IV
HEMOCULTURA
definida como hemocultura a cultura para bactrias e/ou fungos em amostra de sangue.
Bacteremia definida como presena de microrganismos na corrente sangunea e geralmente
ocorre pelos seguintes mecanismo sendo eles entrada direta na corrente sangunea, via agulhas,
infuses contaminadas ou outros equipamentos vasculares como cateteres (bacteremia
primaria) e outro mecanismo a drenagem de dos microrganismos a partir de um foco primrio
de infeco ou atravs de vasos linfticos e da at o sangue (bacteremia secundaria)
(OPLUSTIL et al., 2010).
Uma antissepsia mal realizada ou uso de antissptico inadequado poder comprometer
p exame de hemocultura. Vrios antisspticos, tais como o lcool a 70%, tintura de iodo,
povidine e clorexidina muito utilizado, o estudo tem demostrado que a tintura de iodo e a
clorexidina possuem atividade antissptica superior. Por isso a antissepsia da pele deve ser
rigorosa, evitando os contaminantes da pele. O ndice de contaminao deve ser mnimo < 3%
(ARAJO, 2012).
Os microrganismos mais frequentes em hemoculturas so: Staphylococcus aureus,
Staphylococcus coagulase-negativa, Enterococcus spp., Streptococcus spp., Escherichia
aeruginosa e Acinetobacter spp. O frasco de hemocultura deve ser incubado 35 mais ou menos
2C, aps 24 horas semear em gar sangue e fazer gram se positivo, realizar identificao e
antibiograma e emitir resultado parcial. Se for negativo incubar a 35 mais ou menos 2 em CO2,
aps 48 horas semear em gar sangue e fazer gram, se positivo novamente identificar e
antibiograma, emitir resultado, negativo realizar novamente o processo por at o7 dia, no
stimo dia semear em gar chocolate, positivo com presena de bactrias no gram, proceder
semeadura para anaerbios, negativo liberar o resultado e desprezar o frasco, fungos deve-se
incubar a 30 por mais 10 dias (OPLUSTIL et al., 2010).
4.1 Objetivo
Identificar microrganismos presentes no sangue, atravs de um meio de cultivo
especifico.
4.2 Materiais
o Frasco de hemocultura;
o Ala calibrada;
o Placa de petri;
o gar sangue e chocolate;
o Estufa.
4.5 Concluso
O estgio proporcionou a ns acadmicos do curso de Biomedicina da Faculdade
Fasipe a realizao de exames de extrema importncia mdica e, a hemocultura foi um destes
que nos possibilitou a entender sua metodologia e sua importncia, pois se esse exame for feito
sem um cuidado maior poder acarretar em resultados errneo e consequentemente em
teraputica errada, que muitas vezes poder levar os pacientes a bito, uma vez que o quadro
clnico evolui de forma rpida sem chances de resultados positivos.
CAPTULO V
UROCULTURA
5.1 Objetivo
A urocultura o exame mais indicado para apontar uma infeco urinria, seja da bexiga
ou dos rins, sendo realizada a cultura de uma amostra de urina que pode ser feita quando houver
ou no a suspeita de infeco do trato urinrio (ITU). Esse exame tambm ajuda quando o
primeiro curso de antibiticos no eliminou uma infeco conhecida, para indicar outros
antibiticos mais eficazes para trat-la (OPLUSTIL et al., 2010).
5.2 Materiais
5.3 Mtodos
A urocultura o exame mais solicitado em laboratrio de microbiologia, pelo simples
fato de que a infeco do trato urinrio uma doena frequente e a amostra de urina facilmente
coletada (OPLUSTIL et al., 2010)
Homogeneizar a urina sem centrifugar. Imergir a ala calibrada na urina de forma
vertical duas a trs vezes para neutralizar o efeito da tenso superficial, retirar a ala
certificando-se de que ela contm a amostra de urina. Semear em placa de gar MacConkey,
CLED ou meio cromognico. Incubar em estufa de 35 mais ou menos por 18 a 24 horas e na
sedimentoscopia foi observado a presena de microrganismo ou nmero elevado de leuccitos,
incubar por mais 18 a 24 horas e sempre correlacionar com a leitura de Gram. Se forem
observados coco gram-positivos, recomenda-se semear a amostra em gar sangue para
favorecer o isolamento de Streptococcus agalactiae. E observar a presena de hemlise, quando
presente. Leitura das placas interpretar o crescimento das colnias de acordo com a
quantidade de urina semeada nas placas (OPLUSTIL et al., 2010).
5.5 Concluso
Com essa metodologia que ns acadmicos tivemos a oportunidade de realizar durante
o estgio de microbiologia da Faculdade Fasipe possibilitou o conhecimento de que a urocultura
um exame considerado padro-ouro para o diagnstico de infeces do trato urinrio quando
realizado de forma correta, assim como devemos levar em considerao os sinais clnicos
aparentes dos pacientes.
CAPTULO VI
COPROCULTURA
6.2 Materiais
Coletor estril;
EPIs;
Amostra de Fezes;
Ala bacteriolgica;
Bico de Bunsen;
Placa de Petri;
gar MacConkey;
Estufa.
6.3 Mtodos
A coprocultura consiste na realizao da semeadura das fezes nas placas de petri
previamente preparadas com meio de cultura especifico para a amostra em questo, como o
gar MacConkey (OPLUSTIL et al., 2010).
Semear e Incubar as placas de MC e SS a 35 mais ou menos 2C por 18 a 24 horas e
3 o caldo de enriquecimento a 35 mais ou menos 2C por 2 a 18 horas ou aps 6 a 8 horas (GN).
Aps 12 a 18 horas de incubao do caldo de enriquecimento, semear uma amostra da superfcie
do caldo em uma placa do meio seletivo. Se for caldo GN, semear aps 6 a 8 horas de incubao
(PAGANA; PAGANA, 2015).
As colnias suspeitas do primeiro plaqueamento so repicadas no meio de Rugai ou
(IAL modificado) ou EPM-MILi. Colnias suspeitas do MC e SS que devem ser identificadas:
MC- colnias lactose positiva e lactose negativa. SS- colnias incolores pequenas produtoras
ou no de H2S. Recomendamos repicar ao menos 3 a 5 colnias com morfologia diferente, de
cada placa, para o meio de identificao. Incubar a placa semeada do caldo de enriquecimento
e o meio de identificao a 35 mais ou menos 18 a 24 horas (OPLUSTIL et al., 2010).
6.4 Resultado e Discusso
6.5 Concluso
A metodologia empregada pela coprocultura, na qual ns acadmicos desempenhamos
durante o estgio e que possibilitou o entendimento e sua importncia mdica, foi possvel
concluir que os pacientes que cederam as amostras no eram portadores da Salmonella spp. e
Shigella spp., que desempenham quadros clnicos que muitas vezes podem ser fatais.
CAPTULO VII
ANTIBIOGRAMA
7.1 Objetivo
O antibiograma um poderoso teste laboratorial que ir auxiliar o mdico a ter uma
melhor direo para saber qual o medicamento correto a prescrever para o paciente. Com este
teste, o mdico tem menos chances a erros de prescrio, de no prescrever um medicamento
em que a bactria j seja resistente a este, e obtendo assim um tratamento eficiente e rpido
(BRASIL, 2013).
7.2 Materiais
EPIs
Amostra de uma colnia bacteriana;
Antibiticos;
Bico de Bunsen;
Soluo salina estril;
Tubo com escala 0,5 de Mac Farland;
Swab estril
gar Mueller Hinton;
Estufa;
Rgua;
Pina.
7.3 Mtodos
Retirar uma colnia de bactrias com swab;
Suspender as colnias em soluo salina estril, at atingir a turvao conforme a escala
de Mac Farland;
Embebedar o swab estril na suspenso;
Semear no gar Mueller Hinton por esgotamento, at que fique totalmente semeado;
Flambar a pina, fazer induo de ESBL (Amoxicilina+ c. Clavulnico ao centro;
Sulfazotrim, Azetroanam, Ceftriaxona, Ceftazidima ao redor).
Espalhar 10 a 15 antibiticos, deixando espaos entre eles (2cm) e inocular cada um
deles na superfcie do gar, pressionar um pouco;
Incubar a placa na estufa a 35 mais ou menos 2 C por 24 horas;
Fazer a leitura dos halos com uma rgua em milmetros, consultar a tabela para
Determinar se a bactria sensvel ou resistente ao antibitico.
7.4 Discusso
O antibiograma realizado em gar Mueller Hilton, padronizado por Kirby e Bauer,
devido aos seus favorecimentos a condies para crescimento das principais bactrias. O
antibiograma pode ser realizado para diversos tipos de materiais biolgicos como urina, fezes,
lquor, sangue e secrees (BRASIL, 2004).
Os discos distribudos aps seu tempo determinado se classificam em halos podendo
ser classificados em sensvel e resistente. Sensvel quando formar um halo ao redor do
antibitico, indicando assim que o paciente pode ser tratado com aquele antibitico, e resistente
quando no forma halo ao redor do antibitico, no podendo indicar aquele antibitico para os
pacientes, pois no ter eficcia. Ainda possvel classificar em intermediria, forma halos
menores, e a droga dever ser administrada em doses maiores, para combater o microrganismo
(TRABULSI, 2008).
7.5 Concluso
O estgio de microbiologia do stimo semestre de Biomedicina da Faculdade Fasipe,
proporcionou tambm, a ns acadmicos, o entendimento e a metodologia empregada no teste
de antibiograma, assim como sua importncia mdica, a qual possibilita por meio de sua
metodologia uma melhor escolha teraputica para cessar os efeitos produzidos de cada tipo de
microrganismo patognico.
CAPTULO VIII
CONSIDERAES FINAIS
CUNHA, Burque A. Fundamentos em pneumonia. ed. 3. Porto Alegre RS: Artmed, 2012.
FERRI, Anise, et al. Diagnstico da tuberculose: uma reviso. Rev Liberato, v. 15, n. 24, p.
105-212, jul. /dez. 2014. Novo Hamburgo.
LABORCLIN. Manual para antibiograma, difuso em disco (Kirby e Bauer). Rev 05.
04/2011
MURRAY, Patrick R, et al. Microbiologia Mdica. 5 ed. Rio de Janeiro: Elsevier, 2006.
NEWPROV. Produtos para laboratrio. Meio rugai com lisina. Disponvel em:
<http://www.newprov.com.br/index.php/produtos/listagem/categoria%7C%7Corganizar%7Ca
-z%7Cbusca%7Crugai%7C> acesso: 03/06/2017.
OLIVEIRA, Raphaella Ingrid Santana; Relatrio de Aula Prtica Meio de Cultura. Aracaju-
Maro, 2013.
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ASSINATURA DO(A) ACADMICO(A)
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ASSINATURA DO(A) PROFESSOR(A)
Sinop-MT 39 /06/2017