ANTIOXIDANTES

Los antioxidantes son sustancias que protegen al organismo de la accin negativa de los
radicales libres, los alimentos antioxidantes por lo tanto, tienen propiedades beneficiosas y
son una defensa importante contra el dao celular que es la base de muchas enfermedades,
incluyendo cncer, enfermedades cardiovasculares y enfermedades degenerativas.
EXTRAIDO DE: https://www.canalnutricion.com/alimentos-antioxidantes-y-la-escala-orac/

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ANTIOXIDANTES

Los antioxidantes presentes en frutas y verduras han adquirido un gran reconocimiento en el

campo de la nutricin ya que, de acuerdo a mltiples evidencias tanto clnicas como
epidemiolgicas, su mayor consumo est fuertemente asociado a un menor riesgo relativo de
desarrollo de aquellas enfermedades que en la actualidad ms afectan a la poblacin mundial
(cardiovasculares, tumorales y neurodegenerativas).

El reconocimiento del beneficio que supone para la salud un mayor consumo de alimentos
ricos en antioxidantes ha generado, tanto entre profesionales de los sectores salud y agro-
alimentario, como entre consumidores en general.

Los antioxidantes naturales, presentes en los alimentos, como la vitamina C, vitamina E,

selenio y fitoqumicos, pueden neutralizar y eliminar estos radicales libres.

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METODO ORAC

El ORAC (Oxygen Radical Absorbance Capacity) es la Capacidad de Absorcin de Radicales de

Oxgeno.

El valor ORAC, o puntuacin de ORAC es un mtodo para medir la capacidad antioxidante de

diferentes alimentos y suplementos. Fue desarrollado por los investigadores del National
Institute on Aging del National Institute of Health de EE.UU. Aunque la relacin exacta entre
el valor ORAC de un alimento y su beneficio para la salud no ha sido establecida, se cree que
los alimentos ms altos en la escala ORAC actan de manera ms eficaz a la hora de neutralizar
los radicales libres.

El mtodo analtico para realizar el ORAC se basa en la medicin de la fluorescencia de una

molcula a la que se le somete a la accin de un generador de radicales libres. A medida que la
molcula fluorescente es atacada y daada por los radicales va perdiendo su fluorescencia. La
labor de los antioxidantes es la de proteger la molcula, y cuanto ms capacidad antioxidante
tiene un compuesto o alimento ms se preserva la capacidad de emitir luz de la molcula en
cuestin.

El grado de proteccin se mide con un medidor de fluorescencia y se cuantifica en

equivalentes de Trolox (TE). El Trolox es un anlogo de la vitamina E que se usa como
medida estndar

EXTRAIDO DE : http://www.ganodermalucidum.es/que-es-y-para-que-sirve-el-orac/

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 METODO ORAC

ORAC representa la capacidad de absorcin de radicales de oxigeno. Esto simplemente quiere

decir que bien hace un alimento a mi cuerpo en la lucha contra enfermedades como el cncer
y las enfermedades del corazn.

ORAC es una manera de medir a los radicales de oxgeno que un alimento especfico puede
absorber. Mientras ms radicales de oxigeno que una comida o alimento pueda combatir, mas
alto es su puntuacin en el ORAC. Ms alto su ORAC mayor es la posibilidad de ayudar a
nuestros cuerpos a luchar contra las enfermedades.

En las siglas ORAC estn las palabras radical de oxgeno.

Qu son los radicales de oxgeno? Por qu nosotros queremos neutralizarlos?

Los radicales de oxgeno son qumicos que corren alrededor dentro de nuestros cuerpo. Ellos
son una parte cotidiana normal del vivir diario. Pero,aunque todos nosotros tenemos los
radicales de oxgeno, ellos son malos para nosotros. Los radicales de oxgeno pueden daar
nuestras clulas.

Logran este dao por medio de un proceso que se llama Oxidacin. Si nuestros cuerpos
pueden Neutralizar y pueden detener a los radicales de oxgeno antes de que ellos daen
nuestro cuerpo, entonces ellos no nos daaran.

EXTRAIDO DE : https://gomezlazaromercadeo.wordpress.com/2011/06/02/tabla-de-valores-o-
r-a-c/

Referencias:
1. Agricultural Research, Noviembre 1996, pp. 4-8 See ORAC char The Watsons
approach to Optimal Health &
Longevity@: http://optimalhelath.cia.com.au/OracLevels.htm
2. Ronald Prior, et al., Jean Mayer USDA Human Nutrition Research Center on Aging
atTufts, Boston, Mass., in J. Agric. Food Chem.1998;46:2686-2693 & HortScience
1999.
3. J. Agric. Food Chem 2001 Nov;49(11).5165-70

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METODO ORAC

ORAC (Oxygen Radical Absorbance Capacity, o capacidad de absorcin de radicales de oxgeno)

es un ensayo de laboratorio que permite cuantificar in vitro la capacidad que tiene una
muestra (generalmente de un alimento) para apagar la reactividad que tienen cierto tipo de
radicales libres, particularmente, los del tipo peroxilo. Si bien en el ensayo ORAC dichos
radicales son generados qumicamente, especies reactivas que comparten cierta similitud con
tales radicales seran generadas en el organismo humano, en un proceso que conduce a la
oxidacin masiva de diversos blancos biolgicos. En el ensayo ORAC, el apagamiento de
radicales peroxilo por parte de molculas con actividad antioxidante presentes en las muestras
analizadas se evidencia a travs de la inhibicin de la oxidacin de una molcula blanco
(fluorescena). Dicha inhibicin corresponde al aporte que colectivamente hacen a la actividad
antioxidante el conjunto de molculas con capacidad apagadora de radicales peroxilo
presentes en una muestra, esto es, tanto polifenoles como otros compuestos de naturaleza
no-polifenlica (como carotenos y vitaminas C y E). Esto ltimo permite medir la actividad
antioxidante de alimentos cuya composicin puede ser muy diversa, en trminos de la
naturaleza qumica de las molculas que definen sus propiedades antioxidantes.

(FALTA AGREGAR )

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METODO ORAC

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MEDICION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE

Existen diferentes mtodos para medir la capacidad antioxidante de los alimentos y los
fitoqumicos: Capacidad de Absorcin de Radicales de Oxgeno (ORAC), Reduccin de la
energa de in frrico (FRAP) y la equivalencia de Trolox capacidad antioxidante (TEAC) .
ORAC mide el efecto inhibitorio de los radicales libres mediante una reaccin qumica azo-
inducida por la oxidacin de fluorescena. Es decir, la intensidad de la fluorescencia de
fluorescena disminuye despus de la adicin de un azo-iniciador, que acta como un
generador de radicales libres. En otras palabras, cuanto ms fluorescencia hay, quiere decir
que menor es la presencia de radicales libres, viceversa. As la degeneracin de la
fluorescena (efecto fluorescente) se reduce por la presencia de antioxidantes. A mayor
fluorescencia, mayor capacidad antioxidante.

LIMITACIONES DEL METODO ORAC

El mtodo de ORAC slo se mide la degradacin de la fluorescena, pero no identifica a los

radicales libres implicados.Tampoco hay relacin entre los valores de ORAC y el beneficio para
la salud porque hay tambin otros factores involucrados, tales como el metabolismo de los
fitoqumicos y la absorcin en la sangre y las clulas.

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LIMITACIONES DEL MTODO ORAC

El mtodo ORAC slo mide la degradacin de la fluorescena, pero no identifica los radicales
libres involucrados. Tampoco hay ninguna relacin entre los valores de ORAC y el beneficio
para la salud debido a que otros factores tambin estn involucrados, tales como el
metabolismo de los fitoqumicos y la absorcin en la sangre y las clulas. Los valores ORAC
tambin estn sobrevalorados por los vendedores de suplementos alimenticios, que slo
anuncian el valor ORAC sin tener en cuenta los beneficios en la salud reales. Las plantas
tambin contienen compuestos beneficiosos sin valor ORAC, como xantonas, minerales y
fibras.

EXTRAIDO DE : http://bio-salud.net/valores-orac-contra-los-radicales-libres
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Las reacciones de oxidacin son esenciales en los procesos metablicos celulares. Dichas
reacciones involucran la transferencia de electrones que producen RL. Esta situacin es
incompatible con la vida, a menos que existan en las clulas mecanismos de defensa que
neutralicen los RL. A estas defensas se les denomina antioxidantes y se considera como tal a
cualquier sustancia que en concentraciones normales posea una afinidad mayor que cualquier
otra molcula para interaccionar con un RL. El antioxidante al colisionar con l, le cede un
electrn oxidndose y transformndose en un RL dbil no txico.

RADICAL LIBRE:

Es un atomo con electron desapareado , tiene una alta inestabilidad y son muy reactivos.

TIPOS DE RADICALES LIBRES

ANTIOXIDANTES
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MECANISMOS SET Y HAT

Las propiedades benficas de los polifenoles estn asociadas a su estructura qumica que es
capaz de interactuar con las especies reactivas de oxgeno y nitrgeno, que son los radicales
libres ms dainos, mediante dos mecanismos: uno de transferencia de electrones (SET) y el
otro de transferencia de un tomo de hidrgeno (HAT). En el mecanismo SET, el antioxidante
(ArOH) puede donar un electrn al radical perxilo, formando entre los productos un anin
perxilo y un catin radical del antioxidante (ArO+); y en el mecanismo HAT, el antioxidante
(ArOH) atrapa un radical perxilo por donacin de tomos de hidrgeno, generando un
hidroperxido y un radical antioxidante ms estable qumicamente (ArO). Los mecanismos se
describen a continuacin (9):

La cuantificacin de los polifenoles totales es una forma directa de estimar el contenido

de antioxidantes en una matriz alimentaria, siempre y cuando se correlacionen con
medidas de la expresin de los mismos a travs de una tcnica que evale su actividad,
como el mtodo ORAC (Capacidad atrapadora del radical oxgeno) (10). Este mtodo es
un ensayo que mide la capacidad de un compuesto para atrapar el radical perxilo,
relevante en la oxidacin de lpidos en los alimentos; mediante un mecanismo de
transferencia de un tomo de hidrgeno HAT (11-12). En este ensayo, los radicales
perxilo (ROO) generados por iniciadores de radicales libres, reaccionan con una sonda
fluorescente para formar un producto no fluorescente; es decir, a medida que avanza la
reaccin la sonda fluorescente se consume y disminuye la fluorescencia. El antioxidante
adicionado al medio compite con la sonda fluorescente, mantenindose la fluorescencia
(9,13). Adems, este mtodo puede medir la expresin antioxidante de compuestos
hidroflicos y lipoflicos en una muestra (14), y es muy utilizado para determinar la
capacidad antioxidante de los alimentos y productos naturales (9-10)

EXTRAIDO DE : http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0124-
41082014000100003

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El estrs oxidativo surge en sistemas biolgicos despus de una prolongada
exposicin a oxidantes, o a una disminucin de la capacidad antioxidante del
sistema, o a ambas; y est frecuentemente asociado con la generacin de
radicales libres como las especies reactivas oxigenadas (EROs), las cuales estn
fuertemente implicadas en la patologa de enfermedades como el cncer,
enfermedades cardiacas, arterosclerosis; enfermedades cerebrales y el
envejecimiento prematuro, entre otras.1,2

Evaluacin de la actividad antioxidante

Ensayo de decoloracin del catin radical --difenil--picrilhidrazilo (DPPH): para

cuantificar la capacidad captadora de radicales libres de los extractos se determina
el grado de decoloracin que provocan sus componentes a una solucin metanlica
de DPPH mediante el mtodo de Brand-Williams, con algunas
modificaciones.13,14 Se prepar una solucin madre de DPPH aproximadamente 20
mg/L del radical en metanol, 990 L de esta solucin se mezclaron con 10 L de
solucin de extracto (a diferentes concentraciones). Se prepar un blanco de
muestra que contena 990 L MeOH con 10 L de muestra y un blanco de referencia
con 990 L DPPH y 10 L de solvente. Se incub a temperatura ambiente durante
30 min en la oscuridad y se midi la absorbancia a 517 nm. Los resultados se
expresaron como valores TEAC (trolox equivalent antioxidant capacity) mediante la
construccin de una curva patrn usando como antioxidante TROLOX .

Ensayo de decoloracin con el radical catinico ABTS+: se fundamenta en la

cuantificacin de la decoloracin del radical ABTS+, debido a la interaccin con
especies donantes de hidrgeno o de electrones.15 El radical catinico ABTS+ es un
cromforo que absorbe a una longitud de onda de 734 nm y se genera por una
reaccin de oxidacin del ABTS (2,2'-azino-bis- (3-etil benzotiazolin-6-sulfonato de
amonio) con persulfato de potasio. Las mediciones se realizaron a una longitud de
onda de 734 nm.15 En la evaluacin se utilizaron 10 L de extracto y 990 L de la
solucin del radical ABTS+. A los 30 min de reaccin a temperatura ambiente y en
la oscuridad, se ley el cambio en la absorbancia respecto a la referencia del
reactivo, a una longitud de onda de 734 nm. La referencia del reactivo consisti en
una solucin del radical ABTS+ con el solvente de la muestra. Los resultados se
expresaron como valores TEAC (trolox equivalent antioxidant capacity) mediante la
construccin de una curva patrn usando como antioxidante TROLOX .

Ensayo FRAP (ferric reducing/antioxidant power): este mtodo evalu la capacidad

antioxidante de una muestra de acuerdo con su capacidad para reducir el hierro
frrico (Fe+3) presente en un complejo con la 2,4,6-tri(2-piridil)-s-triazina (TPTZ)
hasta la forma ferrosa (Fe+2), que tuvo un mximo de absorbancia a una longitud
de onda entre 590-595 nm.16 Este ensayo se llev a cabo en un buffer cido
actico-acetato de sodio (pH 3,4), que contena TPTZ y FeCl 3. Se utilizaron 900 L
de esta solucin, 50 L de muestra y 50 L de agua destilada. Luego de 60 min de
reaccin se determin la absorbancia a una longitud de onda de 593 nm. Para cada
muestra se tuvo en cuenta la lectura de la absorbancia del blanco sin cromforo, de
la misma manera que en las pruebas anteriores. La curva de referencia se
construy usando cido ascrbico como patrn primario Las actividades de las
muestras se expresaron como AEAC (ascorbic acid equivalent antioxidant capacity:
mg de cido ascrbico/100 g extracto).

Ensayo ORAC (oxygen radical absorbance capacity): el procedimiento experimental

estuvo basado en reportes previos de Ouy otros,17-19 en el cual se empleaba Trolox
como estndar y condiciones controladas de temperatura a 37 C y pH 7,4. Las
lecturas se realizaron a una l de excitacin 493 nm y slit de excitacin 5, l de
emisin 515 nm y slit de emisin 13, con atenuador de 1 % y sin placa
atenuadora. Para el desarrollo de la tcnica se utilizaron soluciones de fluorescena
1x10-2 M en PBS (75 mM), AAPH 0,6 M en PBS (75 mM). La muestra contena 21 L
de fluorescena, 2,899 L de PBS, 30 L del extracto ensayado y 50 L de AAPH.
Como referencia se uso Trolox. El efecto protector del antioxidante fue calculado
usando las diferencias de reas bajo la curva de decaimiento de la fluorescena
entre el blanco y la muestra, se compar contra la curva del Trolox y se expres en
micromoles equivalentes de Trolox por gramo de muestra (mol Tx/g muestra), de
acuerdo con la ecuacin siguiente:

Donde AUC es el rea bajo la curva de la muestra, AUC rea bajo la curva para el
control, AUCTrolox rea bajo la curva para el Trolox, f es el factor de dilucin de los
extractos.18,19

Anlisis estadstico

Las mediciones se realizaron por triplicado y los resultados se presentaron como la

media y su desviacin estndar (DE). Todos los clculos se realizaron en el
programa estadstico STATGRAPHICS Plus 2.0.

EXTRAIDO DE : http://bvs.sld.cu/revistas/pla/vol_15_2_10/pla03210.htm

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Los radicales libres son responsables de causar un gran nmero de enfermedades entre
las que se incluyen el cncer, enfermedades cardiovasculares, trastornos neuronales,
Alzheimer, Parkinson, deterioro cognitivo leve, enfermedades del hgado inducidas por
el alcohol, colitis ulcerosa, el envejecimiento y la aterosclerosis (Alam et al., 2013).

Los compuestos antioxidantes tienen la capacidad de inhibir o interrumpir las reacciones de

transformacin que causan daos a las biomolculas

EXTRAIDO DE : http://www.redalyc.org/html/856/85632845001/

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Existen diversos mtodos para evaluar la actividad antioxidante [5, 8, 29, 36], ya sea in
vitro o in vivo. Una de las estrategias ms aplicadas en las medidas in vitro de la capacidad
antioxidante total de un compuesto, mezcla o alimento, consiste en determinar la actividad del
antioxidante frente a sustancias cromgenas de naturaleza radical; la prdida de color ocurre
de forma proporcional con la concentracin [2, 31]. No obstante, las determinaciones de la
capacidad antioxidante realizadas in vitro nos dan tan slo una idea aproximada de lo que
ocurre en situaciones complejas in vivo.
La capacidad antioxidante de una mezcla no viene dada solo por la suma de las capacidades
antioxidantes de cada uno de sus componentes; tambin depende del microambiente en que
se encuentra el compuesto. Los compuestos interactan entre si pudiendo producirse efectos
sinrgicos o inhibitorios. Por otra parte, es necesario considerar que los ensayos in
vivo pueden presentar algunos inconvenientes, como la adaptabilidad en respuesta al
aumento del estrs oxidativo [35, 36, 39, 43].

Alternativamente, diversos compuestos cromgenos (ABTS, DPPH, DMPD, DMPO y FRAP) son
utilizados para determinar la capacidad de los compuestos fenlicos que contienen los frutos
para captar los radicales libres generados, operando as en contra los efectos perjudiciales de
los procesos de oxidacin, que implican a especies reactivas de oxgeno (EROS) [4, 13, 23, 38,
45].

Los mtodos ms aplicados son ABTS y DPPH [3, 5, 32, 34, 35]. Ambos presentan una excelente
estabilidad en ciertas condiciones, aunque tambin muestran diferencias. El DPPH es un
radical libre que puede obtenerse directamente sin una preparacin previa, mientras que el
ABTS tiene que ser generado tras una reaccin que puede ser qumica (dixido de manganeso,
persulfato potasio, ABAP) [3, 25, 38, 45], enzimtica (peroxidase, mioglobulina), o tambin
eletroqumica [19, 20]. Con el ABTS se puede medir la actividad de compuestos de naturaleza
hidroflica y lipoflica, mientras que el DPPH solo puede disolverse en medio orgnico, y el
DMPD solo en medio acuoso [3, 5, 11, 38]. El radical ABTS+ tiene, adems, la ventaja de que su
espectro presenta mximos de absorbancia a 414, 654, 754 y 815 nm en medio alcohlico,
mientras que el DPPH presenta un pico de absorbancia a 515 nm [23, 42], y el DMPD a 505 nm
[11].

Los resultados obtenidos en la determinacin de la actividad antioxidante por los mtodos

indicados (Tabla 1 y 2) se han expresado en equivalentes a vitamina C (VCEAC), o equivalentes
a Trolox (TEAC),

Entre los mtodos utilizados para determinar la capacidad de un antioxidante para captar
radicales libres, el radical ABTS+ es uno de los ms aplicados, al considerarse un mtodo de
elevada sensibilidad, prctico, rpido y muy estable [3]; a pesar de esto los valores actividad
antioxidante pueden depender del tiempo escogido para efectuar la medida. La absorbancia
medida por el mtodo ABTS se determinada a los 1 y 7 minutos; los resultados obtenidos por
algunos investigadores indican que la reaccin con el radical ABTS+ no se completa hasta
pasado 1 minuto, y segn RE et al. [38] el tiempo de 4 minutos es el ms apropiado. No
obstante, SELLAPPAN et al. [45], sugieren tiempos de medida de 6 minutos para los patrones
de referencia y de 7 minutos para los compuestos puros, extractos de plantas o de alimentos.

EXTRAIDO DE : http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0101-
20612005000400016