Guia BCyM 2016 II PDF

Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Medicina Humana

Lima Per
2016 - II
CONTENIDO
Pg.
Normas para el estudiante del curso de Biologa Celular y Molecular 03
Introduccin 05
Instrucciones para el desarrollo de las prcticas 06
Prctica N 1: Principios de Bioseguridad en el laboratorio 08
Prctica N 2: Fundamento de Microscopa 14

Prctica N 3: Permeabilidad de la Membrana Citoplasmtica.
(smosis) 23
Prctica N 4: Permeabilidad de la Membrana Citoplasmtica.

(Difusin y dilisis) 27
Prctica N 5: La clula procarita y eucaritica: reconocimiento de estructuras 30
Prctica N 6: Obtencin y anlisis de fracciones celulares 36
Prctica N 7: Metabolismo Celular: Proceso de respiracin celular 39
Prctica N 8: Extraccin del ADN 42
Prctica N 9: Fundamentos de la Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). 45
Prctica N 10: Fundamentos de Electroforesis 48
Prctica N 11: Ciclo celular: Mitosis y Meiosis 52
Prctica N 12: Ciclo celular: Mitosis y Meiosis 56
Referencias Bibliogrficas 63
NORMAS PARA EL ESTUDIANTE DEL CURSO DE
BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR
El estudiante debe INGRESAR AL LABORATORIO CON MANDIL LARGO, LIMPIO,

ABOTONADO Y BIEN PLANCHADO mientras dure la prctica. Debe usar pantaln largo, zapatos o
zapatillas y las chicas deben tener el cabello amarrado.
LLEGAR PUNTUAL a las prcticas es seal de respeto hacia los profesores y compaeros. Slo se dar
5 minutos de tolerancia.
Debe entrar NICAMENTE CON LOS MATERIALES NECESARIOS, como cuaderno de trabajo,
lpices, lapiceros, etc. y el material solicitado por el Docente para cada prctica.
ESTUDIAR los conceptos tericos que servirn para el desarrollo de la prctica correspondiente antes
de ingresar al laboratorio. Se tomarn pasos todas las clases de laboratorio que comprendern dos
preguntas de lo desarrollado la prctica anterior y una pregunta de la prctica a realizarse.
Los alimentos, bebidas, maletines y/o mochilas estn prohibidos dentro del laboratorio, siendo los
LABORATORIOS AMBIENTES DE TRABAJO Y ESTUDIO.
El uso de celulares durante las clases distrae e incomoda a los dems, antes de ingresar al laboratorio,
asegrese de apagar su telfono mvil.
Los grupos de laboratorio son de mximo 3 alumnos, todos los integrantes del grupo son responsables
del contenido de los informes, por lo tanto la calificacin es para todo el grupo.
Es indispensable para un correcto anlisis en los informes, el uso de textos y artculos que provean las
bases tericas que fundamenten los temas que se han de tratar. En caso de usar fuentes de Internet el
estudiante debe cerciorarse que sta sea respaldada por instituciones de prestigio que aseguren la
veracidad de la informacin suministrada. Todos los trabajos entregados deben tener sus referencias
citadas segn el sistema Vancouver.
El fraude es el engao por parte del estudiante en el desarrollo de una actividad acadmica o institucional
para obtener un provecho indebido, como copiar trabajos realizados por otras personas (compaeros,
estudiantes de ciclos pasados, autores o documentos bajados de internet), sin indicar de quien provienen;
usar ayudas no autorizadas durante los exmenes, poner su nombre en el trabajo en el que no particip.
Tambin comete falta el estudiante que ayude a otra persona a cometerlo por ejemplo; prestndole un
trabajo ya elaborado para que lo entregue como propio, soplarle las respuestas o ponerle en un trabajo
cuando este no lo ha realizado.
Es responsabilidad de cada grupo traer el material para cada prcticas (revisar la gua), de lo contrario no
podrn realizar el laboratorio y la calificacin se ver afectada.
El alumno ES RESPONSABLE de cualquier accidente que ocurra con el material y/o equipo con el que
trabaje, debiendo reponer dicho material a la brevedad posible. Cualquier accidente con vidrios,
reactivos, cultivos biolgicos y/o similares deber comunicarse al responsable del laboratorio o al
profesor de prcticas a fin de tomar las medidas adecuadas.
El ORDEN Y LA LIMPIEZA son obligatorios en el laboratorio de Biologa Celular y Molecular,

asegrese de aplicarlos durante y despus de la prctica, debiendo dejar el lugar usado como usted lo
encontr.
MANTENGA LOS EQUIPOS EN SU SITIO, moverlos podra daarlos. Salvo indicaciones expresas
del docente de aula, los equipos permanecern en sus respectivos lugares, en caso de observar cualquier
anomala informar al docente inmediatamente. Si al finalizar la prctica se encuentran microscopios con
lminas que debieron ser desechadas con anterioridad, el profesor bajar puntos a la nota de trabajo en el
laboratorio del da a toda la mesa.
Por su seguridad y la de sus compaeros se tienen que cumplir en todas las clases las normas de
BIOSEGURIDAD.
Realizada la prctica ANOTAR Y/O DIBUJAR las experiencias observadas, este proceso le ayudar
para realizar los informes respectivos y para el repaso respectivo.
Los laboratorios SON AMBIENTES DE TRABAJO: Para las demostraciones de sentimientos y juegos
habr otros momentos oportunos.
LA MANIPULACIN DE LOS EQUIPOS SE HAR EXCLUSIVAMENTE POR EL PROFESOR

que solicitar la ayuda del responsable de laboratorio si fuera necesario. Los alumnos slo podrn
manipular los equipos dirigidos por el docente o el responsable de laboratorio
INTRODUCCIN
Todos los seres vivientes estn formados por clulas; y estas a su vez estn formadas por biomolculas; pero
el nmero y la variedad de cada una de estas molculas y clulas difieren grandemente entre los distintos
organismos. Algunos organismos se componen de solamente una clula. Otros como los seres humanos, se
componen de billones de clulas. La Biologa como ciencia, enmarca los principios bsicos del conocimiento
requerido sobre el estudio de los seres vivos. Se trata de una ciencia natural que ha ido forjando, a travs del
tiempo la lucha constante, por conocer y transformar la naturaleza. A travs de su desarrollo, ha surgido una
diversidad de campos especializados dentro de lo que destaca la Biologa Celular y Molecular que se encarga
del estudio de los componentes moleculares de las clulas y su relacin con otras ramas de la Biologa como
la Gentica, con sus estudios del genoma humano, la clonacin de animales, la terapia gnica y la transgnica
como tambin el desarrollo de animales y vegetales transgnicos, avances muy importantes en las Ciencias
de la Salud.
A fin de conocer mejor las complejas y delicadas estructuras de los seres vivos, es necesario el contacto
directo con los muestras que se van a estudiar, por lo que es importante relacionar la teora con la prctica;
para lo cual brindamos el presente Manual de Biologa Celular y Molecular, detallndose las experiencias de
laboratorio con principios muy sencillos y fciles de comprender, para que el estudiante tenga un material
didctico de trabajo que le servir de gua para realizar sus experiencias de laboratorio.
El Manual tiene dos objetivos fundamentales: en primer lugar; introducir al estudiante en el desarrollo de
procedimientos experimentales que le permitan estudiar la clula como unidad estructural, funcional y
reproductiva de los sistemas vivos, as como los procesos metablicos que mantienen y renuevan su
organizacin; y en segundo lugar, desarrollar en el estudiante habilidades para buscar, seleccionar, organizar
e interpretar la informacin experimental; conducindolo a la formulacin de interrogantes sobre una realidad,
con base en la teora ya existente y as alcanzar soluciones a preguntas planteadas en los procesos biolgicos.
Los autores
INSTRUCCIONES PARA EL DESARROLLO DE LAS
PRCTICAS
Lee la gua de prctica previa al desarrollo de la experiencia en el laboratorio.

Investiga previamente sobre los conceptos bsicos del tema a desarrollar en la prctica.
Escucha atentamente las indicaciones de los docentes y sigue las instrucciones del manual de
prcticas.
En caso de que las pruebas experimentales sean individuales realiza todas las pruebas mencionadas
en el manual en forma independiente.
En el caso de las experiencias grupales, trabaja en coordinacin con tu grupo, realizando una
distribucin equitativa de las tareas asignadas, cumpliendo con rapidez y eficiencia, ya que de tu
trabajo depende todo el grupo.
Realiza cuidadosamente tus pruebas experimentales, entendiendo el porqu de los hechos acaecidos.
Al efectuar cada uno de los pasos del desarrollo experimental, observa minuciosamente tus
experimentos y anota y/o esquematiza con claridad los cambios ocurridos (color, volumen,
aumentos observados, emisin de gases, texturas, etc.), as como los resultados finales. Estos
resultados son de forma individual y debern ser entregados a los docentes el da de la prctica para
su revisin y firma, siendo anexados en el informe final.
Discute y analiza con los miembros de tu grupo el porqu de estos resultados y las conclusiones
preliminares, encontrando patrones, explicando sucesos, hechos y construyendo deducciones.
Desarrolla en forma grupal o individual segn las indicaciones de los docentes el informe de prctica,
utilizando fuentes de informacin de nivel universitario que expliquen de forma sustentada tus
resultados y conclusiones desarrolladas que ser entregado al ingresar al laboratorio de la clase
siguiente.
Resuelve los cuestionarios que tienen como objetivo reforzar los conceptos aprendidos en teora y
prctica, porque estas preguntas sern consideradas ara tomar en los pasos al inicio de la prctica.
Cita tus referencias segn el sistema Vancouver.
Las resultados prcticas desarrolladas por uno o un grupo de ESTUDIANTES NO PUEDEN SER
TRANSFERIBLES A OTROS.
FICHA DE EVALUACIN DE LA PRCTICA:
N .
Nombre del Estudiante:.
Mesa:Fecha:
Puntaje COMPETENCIAS A EVALUAR 0 1 2
2 Llega con puntualidad / tarde / no asiste a la prctica (F y T)
3 Ingresa al laboratorio debidamente y cumple las normas de

Bioseguridad.
3 Entrega el informe desarrollado de la prctica anterior al ingreso al
aula y trae todos los materiales que requiere para el desarrollo de
las prcticas indicadas en el Manual de laboratorio.
2 Trabaja en equipo cumpliendo con eficiencia el rol que le toca en

la experiencia y en el desarrollo del informe de laboratorio.
2 Esquematiza y toma nota de sus resultados y participa activamente

en el anlisis de los resultados obtenidos
1 Muestra respeto a las opiniones de sus docentes y/o compaeros
de trabajo
2 Participa activamente en el desarrollo de los conceptos tericos que
se brindan en la primera parte de la sesin.
4 Participa activamente en el desarrollo de la experiencia
demostrando inters, habilidad y destreza en las preparaciones
experimentales.
1 Muestra Inters por su aprendizaje y sobre todo en relacin a la
prctica desarrollada.
20 NOTA
0 = No logrado 1 = En proceso 2= Logrado

CRITERIOS QUE SE TOMARN EN CUENTA PARA
LA EVALUACIN DE LOS INFORMES DE
PRCTICA
RBRICA PARA LA EVALUACIN DE INFORME DE LABORATORIO
DESEMPEO
Puntaje ASPECTO A EVALUAR LOGRADO (3) NO LOGRADO (0)
EN PROCESO (2)
TOTAL
Se ajusta
No incluye todos los
completamente al
Se ajusta al formato datos solicitados y los
formato y posee toda
establecido pero omite presentados estn muy
1 Cartula y presentacin la informacin
datos relevantes de la desordenados. No se
requerida para la
presentacin. ajusta al formato de
presentacin del
presentacin.
informe.
Las fuentes informacin La mayora de los
excelentemente conceptos estn Algunos supuestos
integradas con el sustentados. estn evidenciados y
material prctico,
Presentan alguna justificados. Las citas
coherente redaccin.
Muy buen uso de las
desconexin en la de integran de modo
fuentes secundarias. Lo redaccin y no estn deficiente, pobre o
Introduccin (marco terico y presentado argumenta del todo claras dbil integracin de
1 objetivos de la prctica) totalmente el tema. respecto a lo fuentes secundarias.
Redaccin de los desarrollado en el Redaccin insuficiente
objetivos
laboratorio. Objetivos de objetivos, se omite
completamente
ajustada al desarrollo del experimento algunos propsitos del
experimental de la redactados con laboratorio. Uso no
prctica de laboratorio. pequeas omisiones y adecuado de verbos.
Correcto uso de verbos. errores de redaccin.
No utiliza el tiempo
Describe en primera pasado y ni redacta en
Describe en tiempo
persona los materiales primera persona los
pasado y en primera
Procedimiento experimental y metodologa utilizada materiales y
persona los materiales
1 (materiales y mtodos
y metodologa utilizada
en el desarrollo de sus metodologa utilizada
usados) experiencias sin en el desarrollo de sus
en el desarrollo de sus
utilizar el tiempo experiencias, la
experiencias.
pasado. informacin es
incompleta.
Figuras, tablas y La mayor parte de las

Todas las figuras, grficos son en general figuras, grficos y
grficos y tablas estn correctos, aunque tablas son correctas
5 Resultados.
bien diseados, presentan algn pero en varios casos
numerados y titulados. problema menor que presentan limitaciones
podra ser mejorado. de importancia
Todos los resultados

comparativos y las Casi todos los
Parte de los datos se
tendencias presentes resultados han sido
han interpretado y
en los datos han sido interpretados y
discutido
Anlisis y discusin de los interpretados y discutidos
5 resultados discutidos correctamente. Se
correctamente, pero se
identifican errores e
correctamente. Buena identifican
imprecisiones de
comprensin de lo imprecisiones
importancia.
indicado por los menores.
resultados.
Se exponen con Se exponen todas las Aunque recojan los

claridad, concisin y conclusiones bsicas, principales aspectos
acierto todas las pero se podra mejorar estudiados, se explican
5 Conclusiones
conclusiones la formulacin. y comentan errnea o
importantes. Excelente Algunos aspectos ambiguamente. Pobre
comprensin. vagos. comprensin
Presenta una
Referencia
bibliografa
Referencias usadas en la bibliogrfica completa Referencia
incompleta, obviando
preparacin del informe y bien formulada, con bibliogrfica completa,
2 (citadas segn sistema excelentes citas en el pero sin utilizar dentro
algunas referencias
obligatorias. (Guas y
Vancouver) informe de del marco terico.
apuntes personales,
laboratorio.
etc.).
20 Nota
PRCTICA N 1
PRINCIPIOS DE BIOSEGURIDAD EN EL
LABORATORIO
En cualquier laboratorio, se deben de seguir normas y procedimientos para que las personas que
laboran en dicho ambiente no pongan en riesgo su salud y la de la comunidad que lo rodea. Dicho
conjunto de medidas especficas a seguir es lo que se conoce como Bioseguridad.
Por tanto, podemos definir bioseguridad como el conjunto de medidas preventivas orientadas a
mantener, controlar y reducir factores de riesgo laborables procedentes de agentes de riesgo
(biolgicos, fsicos o qumicos) con el objetivo de proteger la salud y la seguridad del personal que
labora en un determinado establecimiento de salud, laboratorio de diagnstico o de enseanza
universitaria.
PRINCIPIOS BSICOS DE BIOSEGURIDAD

Se debe tener presente que la sangre humana y los fluidos corporales debern ser tratados como si
estuvieran potencialmente contaminados con patgenos transmisibles por sangre como el VIH y
VHB. Se asume que cualquier contacto directo con estos fluidos puede resultar en infeccin y por lo
tanto se requiere que cada trabajador utilice su equipo de proteccin personal.
Con el fin de evitar accidentes laborales se den tener en cuenta los siguientes principios:
1. Universalidad. Se debe asumir como potencialmente infectante, todo paciente o residuo
biolgico.
Principio Universal: TODO PACIENTE DEBE SER ASUMIDO COMO PORTADOR

DE UN AGENTE INFECCIOSO
2. Uso de barreras para la proteccin personal y disminuir los riesgos, para ello se usan guantes,
lentes protectores, mandil, etc.
3. Lavado de manos.
4. Manejo seguro de los residuos slidos, con el fin de eliminar los residuos biocontaminados
y lograr una buena segregacin de la basura.
AGENTES DE RIESGO
Durante el desarrollo de su trabajo en el laboratorio, dependiendo del tipo de laboratorio y del tipo
de actividad que en este se realiza, el personal puede enfrentarse a diversas situaciones de peligro
que ocasionen efectos adversos a la salud. Estas situaciones de peligro se deben a la exposicin a
ciertos agentes causantes de daos fsicos o enfermedades que pueden ser transmitidas. Estos agentes
de riesgo pueden ser agrupados en tres categoras, en relacin a su naturaleza y caractersticas:
Agentes de riesgo biolgicos
Consiste en la presencia de un organismo, o la sustancia derivada de un organismo, que provoca una
amenaza a la salud humana. Esto puede incluir transmisin por ingestin, inhalacin, inoculacin, o
por contacto directo a travs de piel o mucosas. Entre estos agentes de riesgo se incluyen bacterias,
hongos, parsitos, virus, priones, como tambin, tejidos y fluidos de organismos vivientes que porten
o puedan portar ese material, que pueden resultar patgenos.
Agentes de riesgos fsicos y mecnicos

Son estados energticos con un efecto nocivo, de acuerdo a la intensidad y el tiempo de exposicin
a los mismos, para la salud humana. Entre los cuales encontramos, temperaturas extremas (altas y
bajas) que pueden ser capaces de ocasionar quemaduras, las radiaciones (ionizantes y no ionizantes),
objetos punzo-cortantes (vidrios resquebrajados de recipientes daados o tubos rotos, hojas de
bistur, navajas, etc.), electricidad, el ruido producido por aparatos que ocasiona disminucin de la
audicin, mala iluminacin, carga fsica, vibracin, uso de muebles de trabajo inadecuados.
Agentes de riesgo qumicos

Es aquel riesgo susceptible de ser producido por una exposicin no controlada a productos qumicos,
la cual puede producir efectos locales y sistmicos segn la naturaleza del producto, la va de entrada
en el organismo, el tiempo de exposicin, etc. Los agentes de riesgo qumicos pueden a su vez ser
clasificados de acuerdo a sus caractersticas y su modo de accin:
Corrosivos que causan destruccin o alteracin a los tejidos
Txicos, cuyos efectos se manifiestan segn la va de exposicin, por inhalacin, ingestin
o contacto directo con piel o mucosas
Carcinognicos o mutagnicos
Inflamables y explosivos
Etc.
La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) teniendo en cuenta los peligros relativos asociados a
los organismos patgenos que son manipulados en los laboratorios ha realizado una clasificacin de
los microorganismos infecciosos por grupos de riesgo en 4 grupos. Los factores utilizados para
agruparlos se basan en: (a) patogenicidad, (b) dosis infectiva, (c) modo de transmisin, (d) rango de
hospedero, (e) disponibilidad de medidas de prevencin efectivas y, (f) disponibilidad de tratamiento
efectivo.
Y teniendo en cuenta esta clasificacin, los laboratorios son divididos en 4 niveles de bioseguridad
o de contencin, que consisten en la combinacin de tres elementos: tcnica microbiolgica, equipo
de seguridad y diseo de la instalacin. Cada nivel de bioseguridad tiene barreras establecidas para
ofrecer proteccin contra los microorganismos, las cuales aumentan con cada nivel. Los laboratorios
de nivel de bioseguridad 1 trabajan con agentes menos peligrosos y requieren de menos precauciones,
mientras los laboratorios de bioseguridad nivel 4 tienen los mtodos ms estrictos.
En la tabla N1 se detalla los diferentes niveles de bioseguridad de un laboratorio y algunos aspectos
relacionados con cada uno de ellos.
Manual de Prctica de Biologa Celular y Molecular
10
Tabla N 1: Niveles de bioseguridad
Nivel de
Grupo de riesgo
bioseguridad Agentes de riesgo biolgico Tipo de laboratorio Medidas de bioseguridad
(GR)
(BSL)
GR1, riesgo
Bacillus subtilis, Bacillus
individual y Enseanza bsica, Precauciones universales, se trabaja en la mesa de
BSL-1 (Bsico) licheniformis, ciertas cepas de E.
poblacional nulo o investigacin laboratorio al descubierto
colino patognicas
bajo
Piletas de lavado de manos, instalaciones de
Campylobacter jejuni, Helicobacter descontaminacin de desechos, acceso restringido,
GR2, riesgo pylori, Neisseria gonorrhoeae, seales de advertencia. Personal vacunado,
Servicios de atencin
individual capacitado y bajo vigilancia mdica. El riesgo
BSL-2 (Bsico) Blastomyces dermatitidis, Coccidia, primaria, diagnstico,
moderado, primario del personal est relacionado con
Toxoplasma gondii, Adenovirus, investigacin
poblacional bajo exposiciones accidentales a sangre, fluidos
Papovavirus corporales, etc., que pueden contener un agente
infeccioso.
Acceso restringido al laboratorio, personal
Coxiella burnetii, Mycobacterium
altamente capacitado en el manejo de agentes (con
tuberculosis, VIH, bacterias
potencial de transmisin respiratoria),
GR3, riesgo multirresistentes como
BSL-3 Diagnstico especial, descontaminacin de todos los desechos, cambio de
individual elevado, Staphylococcusa ureus resistente a
(Contencin) investigacin ropas de proteccin de laboratorio y su
poblacional bajo meticilina (MRSA) y Streptococcus
descontaminacin antes de ser lavadas. Pre-
pyogenes resistente a eritromicina
cmaras, puertas dobles de ingreso, flujo de aire
(SPRE).
negativo.
Personal altamente capacitado, acceso ms
BSL-4 GR4, riesgo
Virus del Ebola, virus Marburg, Unidad de patgenos restringido, duchas qumicas, uso de trajes
(Contencin individual y
virus Lassa, virus Junn. peligrosos especiales, cambio de ropa. Laboratorios en zonas
mxima) poblacional alto
aislados.
11
MANEJO DE RESIDUOS SOLIDOS DE ESTABLECIMIENTOS DE SALUD
Para hacer un correcto manejo sanitario de los residuos slidos es necesario, en primer lugar, realizar
una adecuada clasificacin/segregacin previa de los mismos. Dicha clasificacin permite la separacin
de residuos contaminados con agentes patgenos o txicos del resto de residuos. La clasificacin se basa
en la naturaleza y los riesgos asociados, y se divide en tres categoras: Clase A (Residuo
Biocontaminado), clase B (Residuo especial) y Clase C (Residuo Comn) (Tabla N2).
Tabla N2: Clasificacin de residuos slidos sanitarios
Clase Ejemplo Color de Bolsa

Cultivos, vacunas vencidas o
inutilizadas. Muestras de sangre,
suero, tejidos, rganos. Residuos
quirrgicos y patolgicos. Material Rojo.
Aquellos generados en el
punzocortante que estuvieron en
A proceso de atencin e
contacto con pacientes o agentes
investigacin mdica
infecciosos. Animales
contaminados. Residuos
contaminados provenientes de la
atencin al paciente.
Aquellos con potencial Residuos qumicos peligrosos.
peligro por lo corrosivo, Residuos farmacuticos (vencidos,
B inflamable, txico, desactualizados, no utilizados). Amarilla
explosivo y reactivo para Residuos radioactivos.
la persona expuesta.
Residuos generados por
Todo material que no administracin, limpieza de
C puede clasificarse en las jardines, patios, reas pblicas, Negra
categoras A y B. restos de la preparacin de
alimentos.
Bolsas rojas: reas Bolsas amarillas: reas Bolsas negras: residuos

biocontaminadas especiales comunes
unescontaminadas
12
La segregacin de los residuos en las diferentes categoras es considerada una etapa fundamental para
las siguientes etapas del ciclo de manejo de residuos: segregacin y almacenamiento primario,
almacenamiento intermedio, transporte interno, almacenamiento final, tratamiento, recoleccin final y
por ltimo, disposicin final (Figura N1).
Figura N1: Ciclo del manejo de residuos slidos hospitalarios
FUENTE: MINSA Norma tcnica: Procedimientos para el manejo de residuos slidos hospitalarios
(R.M. N217-2004/MINSA)
PRECAUCIONES UNIVERSALES
1. Lavarse siempre las manos con abundante agua y jabn.

2. Usar barreras de proteccin como guardapolvo largo, guantes, mascarilla, etc. y de ser posible llevar
el cabello recogido.
3. Evitar lesiones por agujas, bisturs y otros instrumentos cortantes durante los procedimientos y
limpieza del material utilizado.
4. Desinfectar, esterilizar y descartar adecuadamente los instrumentos despus de usarlos.
Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac, Gisella Guilln

13
COMPETENCIAS
Desarrolla actitudes responsables en el trabajo en el laboratorio.

Define las normas que se deben adoptar dentro de los laboratorios de la Universidad Cientfica
del Sur para prevenir accidentes.
Analiza cules son los riesgos a los que puede estar expuesto durante el aprendizaje en el
laboratorio.

14
PRCTICA N 2
FUNDAMENTOS DE MICROSCOPA
El ojo humano con una visin en ptimas condiciones solo puede observar elementos cuyo tamao
sean mayores a 0,1 mm Para poder visualizar y catalogar las dimensiones por debajo de dicho
tamao, surgi la necesidad de crear instrumentos y tcnicas adecuadas que permitan explorar el
campo de la Biologa Celular. Por esta razn, aparecen en primer lugar las lupas y los microscopios
simples, muy tiles para el estudio de estructuras macroscpicas pero insuficientes para poder
realizar un estudio de estructuras celulares. Para cumplir con este fin, aparece el microscopio ptico
comn o microscopio compuesto. El microscopio ptico compuesto no es ms que un sistema ptico
de lentes convergentes que cumplen la funcin de aumentar la imagen de un objeto.
Fuente: LABORATORIODE BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR, UNIVERSIDAD CIENTIFICA DEL

SURhttp://www.cientifica.edu.pe

15
Fuente: GENOMA SUR INTRODUCCIN A LA CLULA

http://www.genomasur.com/lecturas/Guia01.htm
EL MICROSCOPIO PTICO
Parte mecnico y sus componentes:

Pie o base: se encuentra en la parte inferior del aparato, proporcionndole estabilidad.
Columna o brazo: estructura metlica que sostiene a las dems piezas del microscopio.
Platina: placa horizontal donde se coloca el portaobjetos con la muestra y es sujetada por un
sistema de pinzas que permiten deslizar el portaobjetos en dos sentidos perpendiculares. Adems
posee una perforacin central para el paso de los rayos de luz.
Diafragma: Est asociado a la platina ubicado entre la fuente de luz y el condensador. Es una
membrana metlica que se abre o cierra, cuya funcin es regular la intensidad de luz que
atraviesa el objeto y eliminar los rayos perifricos que distorsionan las imgenes.
Tornillos macro y micromtrico: son las que desplazan la platina en un sentido vertical
posibilitando el enfoque. El tornillo macromtrico es el que da un ajuste grueso, con
movimientos amplios de la platina (cm, mm). El micromtrico permite un ajuste fino, casi
imperceptible (m) para lograr una imagen ntida de la muestra a observar.
Revolver: sitio donde se montan los objetivos.
Cabezal: soporta el revlver y los oculares. Pueden ser mono, binocular o trinocular. Los
cabezales trinoculares son poseen una adaptador para una cmara fotogrfica.
Parte ptico y sus componentes:

Condensador: Lente o sistema de lentes de forma cnica que posee un sistema de dos lentes
convergentes que utilizan para hacer eficiente la iluminacin, de manera que la mayor parte de
los rayos luminosos de la fuente atraviesen el preparado y entren en el sistema ptico del
microscopio.
Ocular: es la lente o sistema de lentes ms cercana al ojo del observador, montada en un tubo
monocular o en dos tubos binocular. Las lentes llevan impreso el nmero de aumentos: 6X, 10X
y 15X; El ms comn es el de 10X. (X se lee por).
Objetivo: es la lente ms cercana al objeto a observar. En el revlver existen cuatro o cinco
objetivos montados de distintos aumentos. Estos llevan escrito el aumento que puede alcanzarse
con ellos, usualmente son de 4X, 10X, 40X, y 100X. Los cuatro primeros se denominan lentes
secos y la ltima, lente hmedo o de inmersin, ya que debe sumergirse en aceite de origen
sinttico cuyo ndice de refraccin sea prximo al del vidrio.
*Fuente de luz o lmpara. Los haces de luz pueden ser natural o artificial, cuando es natural (solar)
un espejo situado en la base del microscopio recoge la luz del medio y la refleja a travs del objeto

16
y del sistema de lentes. La luz artificial la constituye generalmente un foco de luz halgena
ubicado en el microscopio y conectado a un circuito elctrico de bajo voltaje (6 a 12V).
CONCEPTOS BSICOS
Aumento total (AT): es la imagen obtenida de un objeto que se obtiene al multiplicar el aumento de
la lente objetivo utilizada por el aumento de la lente ocular.
AT= Aumento objetivo (4x, 10x, 40x y 100x) X el aumento del ocular (10X).
Poder de resolucin (PR): es la capacidad de un instrumento ptico, en este caso el microscopio,
para visualizar los detalles de un objeto; es decir, es la capacidad de poder distinguir dos puntos muy
prximos como separados desde una distancia determinada.
ENFOQUE
Asegrese primero de que el microscopio est sobre una base slida y se encuentre conectado a
una toma de corriente elctrica.
Utilice siempre el objetivo de menor aumento (4X), para el primer enfoque de una muestra.
Encienda la fuente de luz, lleve el condensador a una distancia de 1 a 2 mm de la platina
Verifique que el diafragma est abierto y el objetivo perpendicular a la platina.
Coloque una de las lminas preparadas sobre la platina y asegrela con las pinzas del sistema de
desplazamiento que tiene la platina.
Procure que la muestra que va a ser observada se encuentre en el centro del orificio de la platina.
Gire el tornillo macromtrico hasta obtener una distancia de 1 a 2 cm entre el objetivo y la lmina
preparada. ESTA OPERACIN DEBE HACERLA SIN COLOCAR SUS OJOS SOBRE EL
OCULAR.
Ahora coloque los ojos sobre los oculares y mantngalos abiertos, ajuste el sistema de binoculares
a su distancia ocular, de modo que observe un solo y gran campo de luz.
Siga moviendo la platina hacia arriba utilizando el tornillo macromtrico hasta que visualice la
muestra en la lmina que prepar. Este enfoque se llama ENFOQUE GRUESO.
Empiece a girar, con los dedos pulgar e ndice de ambas manos, el tornillo micromtrico hasta
que pueda observar ntidamente la muestra, esto es el ENFOQUE FINO, que se ajusta a la visin
de cada observador.
Rote el revlver para cambiar de objetivo.
Manipule el tornillo micromtrico y enfoque nuevamente la muestra que est observando.
En el caso de que use el objetivo de inmersin, una vez que haya enfocado su muestra con el
objetivo de 40X, previo al cambio con el objetivo de 100X, se agrega una gota de aceite de cedro,
se ubica el objetivo y se enfoca la muestra usando el tornillo micromtrico con mucho cuidado.
COMPETENCIAS
1. Identifica las partes del microscopio ptico.
2. Reconoce los diferentes componentes del microscopio.
3. Conoce las caractersticas del microscopio ptico.
4. Efecta el enfoque fino y observar el detalle de la muestra.
5. Realiza preparaciones en el laboratorio.

17
MATERIALES
MATERIALES DEL LABORATORIO
Microscopios pticos Tijeras
Papel lente Lminas porta objeto y laminillas
Goteros cubre objeto.
Navaja
MATERIALES DEL ESTUDIANTE

Corcho natural Hoja de diario
PROCEDIMIENTOS
Preparacin de muestras:
Tome una lmina portaobjeto limpia, estas lminas y los cubreobjetos siempre debe tomarlos
por los bordes usando los dedos pulgar e ndice.
Con una navaja corte una lmina delgada de corcho, colquelo en el centro de la lmina
portaobjeto. Enfoque a 40X, 100X y 400X. Esquematice a 400X.
Repita la misma operacin en otra lmina y coloque esta vez la letra e minscula recortada de
un diario cualquiera. Asegrese de colocar la letra como usted la lee (e). Enfoque a 40X, 100X
y 400X. Esquematice a 40 y 100X
.

18
TIPOS DE MICROSCOPA (continuacin)

COMPETENCIAS
1. Reconoce la importancia delos diferentes tipos de microscopio.
2. Conoce las caractersticas del microscopio de campo oscuro, contraste de fases,
fluorescencia y microscopios electrnicos, en el estudio de los sistemas biolgicos.
3. Reconoce el impacto que produjo en el estudio de los sistemas biolgicos el desarrollo de la
microscopia electrnica.
MARCO TERICO
El uso de determinados componentes colocados en el condensador o en los objetivos se interponen

al haz luminoso emitidos por la lmpara, filtrando u obstaculizando la luz y dan lugar a los distintos
tipos de microscopa ptica como la de campo claro, campo oscuro y contraste de fases. Estos tipos
de dispositivos en un microscopio de contraste de fases manipulan fsicamente los haces luminosos
seleccionando parte de las ondas de las que se compone dicho haz, lo que provoca una imagen
contrastada de la muestra sin necesidad de teirla. En el caso de la microscopia de fluorescencia, se
utiliza una lmpara que emite un haz luminoso fuera del rango de la luz visible y se aprovecha esta
propiedad de filtrar los haces de luz para poder manejar la longitud de onda que incide y emite una
muestra determinada mediante filtros. Actualmente, el microscopio de fluorescencia ms utilizado
es el de epifluorescencia, que simplemente indica que la luz filtrada no atraviesa la muestra sino que
incide sobre ella a travs de la lente objetivo, y esta misma lente es la encargada de recoger la luz
que emite la muestra excitada.
Otro tipo de microscopa es la Microscopa Electrnica, cuya principal virtud radica en la potencia
amplificadora que no posee un microscopio ptico, debido a que la microscopia ptica est limitada
por la longitud de onda de la luz visible (alrededor de 4000 ngstroms). En cambio un microscopio
electrnico utiliza electrones para iluminar un objeto, siendo la longitud de onda de un electrn de
0,5 ngstroms; razn por la cual en un microscopio electrnico se puede mostrar estructuras mucho
ms pequeas. La imagen que se produce es por la dispersin de los electrones, mientras que en el
microscopio ptico la imagen que se produce es por absorcin de los fotones. Es decir, la imagen
que se puede observar se debe a la diferente absorcin de la luz por las distintas estructuras de la
muestra, mientras que en el microscopio electrnico la formacin de la imagen est en funcin de la
dispersin y, por consiguiente, perdida de los electrones. Existen dos tipos bsicos de microscopios
electrnicos: el microscopio electrnico de transmisin (Transmission Electron Microscope, TEM)
y el microscopio electrnico de barrido (Scanning Electron Microscope, SEM).
En el microscopio electrnico de transmisin (MET), la observacin de una muestra biolgica se

necesita realizar cortes histolgicos ultrafinos. Los haces de electrones se dirigen hacia el muestra
que se desea aumentar y uno de estos electrones que es emitido por la lmpara rebota o es absorbido
por el objeto y otros la atraviesan formando una imagen aumentada de la muestra en estudio. Los
microscopios electrnicos de transmisin pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces.
En un microscopio electrnico de barrido (MEB), las imgenes que se crean es una imagen ampliada
de la superficie de un objeto a observar. En este tipo de microscopio la ventaja que se tiene es que
no necesario realizar un corte del objeto en capas para poder observarlo, sino que se puede colocar

19
un fragmento o la muestra completa dependiendo del tamao con muy pocos preparativos. La MEB
explora la superficie de la muestra a evaluar y provee una imagen punto por punto, al contrario de
que ofrece la MET, que examina una gran parte de la muestra cada vez. Su funcionamiento se basa
en recorrer la muestra con un haz muy concentrado de electrones. Los microscopios electrnicos de
barrido pueden ampliar los objetos 200.000 veces.
TIPOS DE MICROSCOPIOS
MICROSCOPIO UTILIDAD
ptico de campo claro Para observar muestras teidas.
Para la observacin de microorganismos

vivos, invisibles a la microscopia de campo
ptico de campo oscuro
claro debido a que no se tien con facilidad,
porque se distorsiona su visualizacin.
Para facilitar la visualizacin de estructuras

ptico de Contraste de fases
internas de muestras vivas no teidas
Observar estructuras internas especficas

ptico de Fluorescencia mediante la utilizacin de fluorocromos o
anticuerpos marcados.
Examinar virus o la ultraestructura interna de

Electrnico de transmisin cortes delgados de clulas (aumento de 10000
- 100000X)
Estudiar las caractersticas de las superficies

Electrnico de barrido
externas de organismos, clulas y virus.
Fuente: Comunicacin personal.
MATERIALES
Placas fotografas usando los diferentes tipos de microscopio ptico y electrnico.
PROCEDIMIENTOS
Teniendo en cuenta la informacin presente en la explicacin del docente, analice las
siguientes fotografas de muestras observadas mediante microscopa.

20
Tipo de microscopia utilizada

.
Tipo de microscopio utilizado
.
Fuente: Angiognesis en tumores de clulas germinales testiculares

http://www.conganat.org/3congreso/cvhap/comunicaciones/059/index.htm

...
.
Fuente: Microscopio virtual

http://www.biologia.edu.ar/microscopia/meb.htm

21

.
..


.
..


22

.
.


.
.


23
PRCTICA N 3
PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA
CITOPLASMTICA. (SMOSIS)
Fuente: http://php.med.unsw.edu.au/cellbiology/index.php?title=Cell_Membranes_and_Compartments
La membrana celular es una estructura supramolecular que est presente en todos los tipos celulares.
Est constituida bsicamente por una bicapa fosfolpidica, en donde se insertan protenas (perifricas
o integrales). Algunas clulas pueden presentar carbohidratos asociados a lpidos y/o protenas,
encontrndoselas en la monocapa externa y en menor porcentaje.
La membrana celular rodea a las clulas dndole una individualidad, debido a que separa dos medios
acuosos: la regin intracelular llamada citoplasma y la externa o regin extracelular. Esta membrana
es un filtro, altamente selectivo, que controla la entrada de nutrientes y la salida de los productos
residuales, debido a esta propiedad es considerada como semipermeable.
En la actualidad se considera al modelo de Mosaico Fluido (Singer y Nicholson, 1972) como la
estructura bsica de las membranas. Este modelo propone que los lpidos se disponen formando una
verdadera bicapa que permite desplazamientos, donde las protenas integrales se insertan tomando
contacto con la superficie extra e intracelular. Uno de los conceptos bsicos de este modelo es que la
bicapa permite desplazamientos considerables de sus componentes. Por lo tanto, la doble capa no es
esttica, sino que es capaz de permitir y propiciar un movimiento a lo largo del plano estructural de
la membrana. Una de las caractersticas ms relevantes de la organizacin molecular de las
membranas es la asimetra de todos sus componentes, lo cual significa que en ambas mitades de la
bicapa los componentes se distribuyen de diferente manera.
Las funciones de la membrana son de transporte (el intercambio de materia entre el interior de la
clula y su medio externo), reconocimiento y comunicacin (gracias a molculas situadas en la parte
externa de la membrana, que actan como receptoras de sustancias.

24
SMOSIS Y PRESIN OSMTICA

El componente principal de la clula es el agua, que acta como solvente de solutos orgnicos e
inorgnicos. El movimiento de agua a travs de una membrana semipermeable se llama smosis
(difusin de agua) y sucede siempre del rea de mayor concentracin de agua (y por tanto, con menor
concentracin de soluto) al rea de menor concentracin de agua (y con mayor concentracin de
soluto). El proceso de smosis involucra necesariamente la presencia de una membrana
semipermeable que separa dos zonas con concentraciones diferentes (Figura 2).
El movimiento del agua a travs de las membranas biolgicas es siempre pasivo (sin gasto de
energa), la fuerza que dirige este movimiento se conoce como presin osmtica.
Fuentes: http://keepinapbiologyreal.wikispaces.com/Osmosis
Figura 2. Proceso de smosis
Cuando la clula se encuentra en una solucin cuya concentracin de solutos es menor que la del
medio interno de la clula, se dice que la clula est en una solucin hipotnica y como
consecuencia, el agua entra a la clula causando que se expanda. Si la concentracin de solutos es
mayor fuera de la clula, se dice que la clula est en una solucin hipertnica; provocando que la
clula pierda agua y pierda tamao. Si las concentraciones de soluto son iguales en ambos lados de
la membrana, se dice que la clula est en una solucin isotnica, donde el movimiento neto es cero.
Las clulas animales y vegetales funcionan ptimamente en ambientes isotnicos. Las clulas
vegetales cuando se les coloca en una solucin hipotnica, la vacuola se llena de agua y ocurre un
fenmeno llamado turgencia, mientras que en las clulas animales el agua tiende a entrar,
provocando que las clulas se hinchen y lleguen incluso a estallar, fenmeno llamado lisis. Por otra
parte, si la clula vegetal se le coloca en una solucin hipertnica, pierde agua y la clula sufre el
fenmeno denominado plasmlisis al separarse la membrana celular de la pared celular, lo cual suele
ser letal; mientras, la clula animal pasara por un fenmeno de crenacin (Figura 3).

25
En Clula Vegetal
Fuente: http://bio1100.nicerweb.com/Locked/media/ch04/tonicp.html
En Clula Animal
Fuente: http://catalog.flatworldknowledge.com/bookhub/4309?e=averill_1.0-ch13_s05
Figura 3: Efecto de diferentes concentraciones de solucin salina en clulas animales y clulas

vegetales
COMPETENCIAS
1. Identifica la caracterstica de permeabilidad de la membrana celular.

2. Reconoce e identificar soluciones hipotnicas, isotnicas e hipertnicas.
3. Diferencia las respuestas celulares a diferentes concentraciones salinas.
4. Deduce como la pared celular afecta el comportamiento osmtico de la clula.
5. Desarrolla habilidades en el trabajo de laboratorio
MATERIALES
Goteros 3 beaker de 100 ml
Solucin NaCl 0.2% (0.015M) Sacabocado
Solucin NaCl 0.8% (0.15M) Balanza
Solucin NaCl 0.9% Lanceta
Solucin NaCl 5% (0.3M) Alcohol yodado

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Algodn Laminas cubreobjetos

Lminas portaobjetos

1 papa mediana Hoja de afeitar
Hojas de Elodea sp Plumn marcador
PROCEDIMIENTOS
1. Efecto de soluciones hipotnicas, hipertnicas e isotnicas en clulas vegetales (Elodea sp):

Colocar una hoja de Elodea sp sobre una lmina portaobjeto, colocar una gota de solucin salina
al 0.2%, rotular la lmina con el marcador y cubrir la muestra con una laminilla. Observar al
microscopio a 40X, 100X y 400X. Esquematice sus observaciones a 400X. Repetir el
procedimiento con las soluciones al 0.8 % y 5%. Esquematizar sus observaciones.
2. Efecto de soluciones hipotnicas, hipertnicas e isotnicas en clulas animales (glbulos

rojos). Limpiar y desinfectar con alcohol la pulpa del dedo anular. Punzar con la lanceta estril
y colocar en cada lmina portaobjeto una gota de sangre. A cada lmina agregar 1 gota de
solucin de NaCl: a la primera NaCl 0.9%; a la segunda, NaCl 0.2% y a la tercera, NaCl 5%.
Marcar cada uno de los preparados. Observar al microscopio y esquematizar a 400X.
3. Osmolaridad en las clulas vegetales: Se observar como los diferentes tipos de soluciones
afectan el equilibrio y el funcionamiento de las clulas vegetales. La osmolaridad se expresa
como moles de soluto por litro de solucin; mientras ms alta es la osmolaridad, mayor es la
concentracin de soluto.
Preparar 3 beakers de 40 mL rotulados para cada solucin. Usar un cortador cilndrico para sacar
1 cilindro de la papa de 5cm de largo. Cortar de cada cilindro 9 rueditas uniformes de
aproximadamente 5mm de grosor, separarlas en tres grupos y pesar cada grupo por separado y
tocar la textura inicial. Anotar los datos. Transferir a los vasos rotulados con las soluciones de
NaCl 0.015, 0.15 y 0.30M y anotar el tiempo en que se inicia Incubar por 30 minutos a
temperatura ambiente. Retirar cada grupo de rueditas de las soluciones en que estn sumergidas
a una hoja de papel secante. Anotar si hubo cambios en textura y pesarlas nuevamente. Analizar
y discutir los resultados.

27
PRCTICA N 4
PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA
CITOPLASMTICA
(DIFUSIN Y DILISIS)
DIFUSIN
Es el movimiento de molculas de una regin de alta concentracin a otra de menor concentracin
producido por la energa cintica de las molculas. Todas las molculas de gases y lquidos tienden
a moverse o difundirse en todas direcciones hasta que se encuentran distribuidas regularmente por
todo el espacio disponible.
La difusin no requiere gasto de energa por parte de la clula y por lo tanto es un movimiento pasivo.
La velocidad de difusin depende del tamao de las molculas y de la temperatura, la causa de la
difusin es el movimiento trmico de las molculas. Con el crecimiento de la temperatura de la
solucin, la velocidad de difusin, por lo comn, aumenta.
Fuente: http://en.wikipedia.org/wiki/Diffusion
Fuente: http://www.tutorvista.com/content/biology/biology-iii/biomembranes/physical-processes.php
Fig. 4. En la difusin, las molculas tienden a esparcirse y separarse lentamente con el tiempo. Las
molculas se mueven a favor del gradiente de concentracin.

28
DILISIS
Es la difusin de molculas de bajo peso molecular a travs de una membrana semipermeable, stas
se desplazan desde la solucin ms concentrada a la ms diluida. (Figura 5). Es el fundamento de la
hemodilisis que intenta sustituir la filtracin renal deteriorada.
Fuentes: The purification of proteins is an essential first step in understanding their function
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi?book=stryer&part=A438
Fig. 5. En el proceso de dilisis, las molculas de bajo peso molecular son capaces de atravesar la
membrana semipermeable, movindose a favor del gradiente de concentracin.
COMPETENCIAS
1. Identifica la caracterstica de permeabilidad de la membrana celular.
2. Describe los mecanismos de difusin y dilisis a nivel molecular.
3. Enumera factores que afectan la velocidad de difusin.
4. Desarrolla habilidades en el trabajo de laboratorio
MATERIALES
40 ml de agua helada 40 ml de solucin de almidn al 1%

40 ml de agua caliente Agua destilada
Reactivo de Biuret 3 Beakers 100 ml
Colorante Azul de Metileno 2 Beaker 500 ml
Nitrato de plata 2 tubos de ensayo
Solucin de Lugol Embudo
40 ml de solucin de albmina 1.5%
40 ml de solucin de Cloruro de Sodio
al 30%

Pabilo Navaja de afeitar
2 Palitos de anticucho 2 buches limpios de pollo
1 huevo

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PROCEDIMIENTO.
1. Difusin# 1(factor temperatura): En este experimento, se estudiar el movimiento browniano

de las molculas y el efecto de la temperatura. Colocar en un beaker, 40 ml de agua a temperatura
ambiente; en otro, 40 mL de agua helada y un tercero, 40 mL de agua caliente. Aadir
simultneamente a cada uno de ellos una gota de colorante azul de metileno (sin mover
demasiado el agua) y observar el comportamiento de la gota en el agua. Anotar sus
observaciones.
2. Dilisis #1 (de afuera hacia adentro): Atar con pabilo un extremo del buche y por el otro
extremo aadir, usando un embudo, 40 mL de solucin de almidn al 1%. Cerrar el orificio del
buche que qued abierto con pabilo y con ayuda de un palito de anticucho, colocar en un beaker
que contenga 150 mL de agua con varias gotas de solucin de Lugol hasta tener un color dorado.
Dejar actuar durante 30 minutos. Retirar del beaker y anotar los cambios de color dentro del
buche.
3. Dilisis #2 (de adentro hacia afuera): Atar con pabilo un extremo del buche, por el otro extremo
aadir, usando un embudo, 40 mL de solucin de Cloruro de Sodio al 30% y 40 mL de solucin
de albmina al 0.5%. Cerrar con pabilo el extremo que qued abierto, mezclar y con ayuda del
palito de madera, colocar en un beaker que contenga 150 mL de agua destilada. Dejar actuar por
30 minutos. Retirar del beaker y proceder a verter 6 ml de la mezcla de dentro del buche a un
tubo de ensayo y adicionar 4 gotas de reactivo de Biuret. Repetir el procedimiento con la solucin
del beaker. Anotar los cambios de color en cada uno de los tubos. Adems, a la solucin del
beaker aadir cinco gotas de solucin de nitrato de plata (AgNO3) y anotar los cambios de color.

30
PRCTICA N 5
LA CLULA EUCARITICA Y PROCARIOTA:

RECONOCIMIENTO DE ESTRUCTURAS
La Teora Celular establece que todos los seres vivos estn constituidos por clulas, que todos los
seres vivos son la expresin de cada una de las clulas que lo constituyen, que una clula slo
proviene de una ya existente y que la clula es la unidad bsica de todo ser vivo. Se han identificado
hasta el momento dos tipos celulares: la clula procariota (que se caracteriza principalmente por que
el material gentico constituido por ADN desnudo y que se encuentra libre en el citoplasma celular),
y la clula eucariota (que se caracteriza porque el material gentico formado de ADN asociado a
protenas se encuentra separado del citoplasma por una membrana denominada membrana nuclear),
pero ambos tipos celulares comparten estructuras en comn: la membrana celular, el citosol o
hialoplasma, el citoesqueleto, los ribosomas y el material gentico.
La clula eucariota presenta mayor tamao y organizacin que la clula procariota y en su citoplasma
se encuentran estructuras celulares que van a cumplir diversas funciones que se conocen con el
nombre de organelas celulares, inclusiones citoplasmticas, sustancias ergsticas y/u otras
estructuras.
Las clulas procariotas son por lo general muy pequeas, con una estructura interna relativamente
muy simple. Casi todas las clulas procariotas estn rodeadas por una pared relativamente dura
llamada peptidoglucano. Son cosmopolitas. El citoplasma de la mayor parte de procariotas es en
apariencia relativamente homogneo. En general, el ADN est enrollado, adherido a la membrana
plasmtica y concentrada en una regin de la clula, llamada nucleoide. Los procariotas incluyen los
reinos Monera (simple bacterias) y Archaea. Carecen de las caractersticas "organelas" envueltas en
membrana subcelular de los eucariotas, pero pueden contener sistemas de membrana dentro de la
pared celular. Las clulas procariticas pueden tener pigmentos fotosintticos tales como los
encontrados en las cianobacterias ("bacterias azules"). Algunas clulas procariotas tienen flagelos
externos en forma de ltigo para la locomocin o pili como pelos para adherirse. Las clulas
procariotas tienen mltiples formas: cocos (redonda), bacilos (bastones), y espiralada o espiroquetas
(clulas helicoidales).
En la clula eucariota se pueden distinguir dos tipos de clulas, la clula eucariota animal y la clula
eucariota vegetal. Estas clulas tienen estructuras en comn como: la membrana celular, citosol,
citoesqueleto, retculo endoplasmtico, aparato de Golgi, mitocondrias y ncleo; pero tambin tienen
estructuras propias que las caracterizan, por ejemplo: la clula eucariota animal presenta centriolos
y estructuras locomotoras como los cilios y flagelos, mientras que las clulas vegetales se
caracterizan por la presencia de una pared celular compuesta principalmente carbohidratos y
plastidios que pueden tener o no pigmentos.
Todas las organelas celulares trabajan coordinadamente para el funcionamiento general y preciso de
la clula, muchas veces resulta difcil entender este proceso de forma dinmica y con todos las
estructuras celulares trabajando a la vez y en estrecha colaboracin logrando que la clula se
convierta en una mquina biolgica perfecta que cumple sus funciones vitales de forma precisa y
constante, convirtindose en la pieza base de los organismos multicelulares.

31
La membrana celular delimita el territorio celular y como se ha observado en prcticas anteriores es

la puerta de entrada y salida celular, la pared celular presente en las clulas vegetales es una estructura
de sostn y proteccin. El citoplasma celular est formado por el hialoplasma, citoesqueleto y
organelas celulares. El hialoplasma es un medio acuoso, con un 85% de agua en el cual esta disuelta
gran cantidad de molculas formando una solucin coloidal; prtidos (aminocidos, enzimas,
protenas estructurales), lpidos, glcidos (polisacridos, metabolitos), cidos nucleicos (nucletidos,
nuclesidos, ADN, ARN, ARNt, ARNr) sales e iones.
El movimiento ciliar est adaptado al medio lquido y es cumplido por pequeos apndices
especialmente diferenciados. Se trata de filamentos contrctiles variables en nmero y tamao, que
reciben el nombre de flagelos, si son escasos y largos y cilios, si son cortos y numerosos. En los
protozoarios, hay centenares o miles de pequeos cilios cuyo movimiento permite al organismo
desplazarse con rapidez en el medio lquido. En algunos protozoarios especiales los cilios se fusionan
y forman apndices cnicos ms gruesos denominados cirros.
En Protozoarios, toda la clase flagelados se caracteriza por la presencia de flagelos. Entre los
metazoarios, solo los espermatozoides tienen la propiedad de desplazarse como clulas aisladas por
medio de esos apndices.
Las mitocondrias son organelas proveedoras de energa y los plastidios con pigmento cumplen la
funcin de dar color a las estructuras vegetales adems de la fotosntesis (cloroplastos), mientras que
los plastidios sin pigmento llamados tambin leucoplastos guardan los productos obtenidos durante
la fotosntesis.
COMPETENCIAS
1. Reconoce e identificar una clula procariota
2. Identifica y reconocer clulas eucariotas.
3. Diferencia una clula procaritica de una clula eucaritica.
4. Identifica las estructuras celulares en las clulas eucariotas.
5. Identifica y diferenciar las clulas eucariotas animales y vegetales.
6. Identifica las estructuras propias de las clulas eucariotas animales y vegetales.
7. Maneja el material biolgico siguiendo las normas de bioseguridad.
8. Diferencia los distintos tipos de microscopa en el reconocimiento de estructuras celulares.
9. Maneja muestras biolgicas hmedas y coloreadas para su observacin microscpica.
MATERIALES
Microscopio de campo claro Solucin de rojo neutro

Goteros Aceite de inmersin
Lminas y laminillas Papel lente
Hojas de bistur u hojas de afeitar Lugol
Lminas fijadas de espermatozoides Pinzas de punta fina
Colorante verde de Janus

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Agua del pantano

Una cebolla
Una rama de Elodeasp
Plumn marcador
PROCEDIMIENTO
1. OBSERVACIN DE ESTRUCTURAS DE CLULAS PROCARIOTAS
Clulas Procariticas. Se observarn lminas fijadas de bacterias coloreadas con coloracin

Gram al microscopio ptico con el objetivo de inmersin (100X). Observe la forma y tamao
de las clulas. Esquematice.
Coco
Gram+
Bacilo Gram-
1000 X
Fuente: Laboratorio de Biologa. Universidad Cientfica del Sur
2. OBSERVACIN DE ESTRUCTURAS DE CLULAS VEGETALES
Ncleo, Nuclolo y pared celular: En una lmina portaobjeto coloque una gota de safranina o
azul de metileno y sobre ella un fragmento de catafilo de cebolla extrado con una pinza. El
fragmento tomado debe ser transparente y debe colocarse completamente extendido sobre la
lmina. Ponga una lmina cubreobjetos y sin aplicar presin elimine cuidadosamente el exceso
de lquido con ayuda de un papel secante. Observe al microscopio y esquematice sus
observaciones a 100X y 400X.

33
Nuclelo
Pared celular
Ncleo
400 X
400 X
Clula de catafilo de cebolla Allium cepa
Observacin de plastidios y ciclosis: Coloque una hoja de Elodeasp en una lmina, aadir una
gota de agua y observa al microscopio. Esquematice a 400X.
400 XX
400
Cloroplastos (clorifila) en Elodea sp.
3. OBSERVACIN DE ESTRUCTURAS DE CLULAS ANIMALES:
Ncleo, citoplasma y mitocondrias: Con un hisopo estril haga un raspado de epitelio bucal y
estire la muestra en una lmina porta objeto y djelo secar a medio ambiente durante tres minutos.
Cubra la muestra con Verde de Janus y djelo reposar cinco minutos luego elimine el exceso de
colorante. Observe el citoplasma claro, limitado por la membrana, el ncleo ms teido y las
mitocondrias pueden ser observadas de color azul-verdoso. Esta coloracin se debe al sistema
citocromo-oxidasa, en cambio en el citoplasma el colorante es reducido a su leucobase.
Esquematice a 400X.

34
Mitocondria
Ncleo
Citoplasma
1000 X
CLULAS DE EPITELIO BUCAL
Cilios y flagelos:
Observacin de cilios en Protozoarios: Coloca una gota del cultivo de Protozoarios sobre una
lmina portaobjeto y cbrala con una laminilla. Observe el movimiento de los cilios.
Cilios
1000 X
CILIADO Loxophyllum sp.

35
Observacin de flagelos: Coloque una lmina fijada de espermatozoides en el microscopio y
obsrvela a 1000x. Esquematice.
Flagelo
1000 X
ESPERMATOZOIDE HUMANO

36
PRCTICA N 6
OBTENCIN Y ANLISIS DE FRACCIONES

CELULARES
Fuente: Separacin de mezclas

http://quimicalibre.com/separacion-de-mezclas-cromatografia-y-centrifugacion/
Las diferentes metodologas utilizadas para el estudio de la composicin celular, entre ellas las
tcnicas bioqumicas, fisiolgicas y citolgicas. Permiten analizar en gran medida la anatoma y
localizacin de las estructuras y organelas celulares. Sin embargo, si se desea profundizar en la
funcionabilidad de cada componente celular se deben realizar ensayos bioqumicos y fisiolgicos.
Generalmente el primer paso es obtener fracciones enriquecidas con las distintas estructuras u
organelas.
Una de las tcnicas ms utilizadas para obtener dichas fracciones es el Fraccionamiento Celular, el
cual es un conjunto de procedimientos que tienen como principal objetivo obtener fracciones puras
o enriquecidas de un determinado componente celular, ya sea ste una organela como el ncleo,
mitocondrias, lisosomas, peroxisomas, etc. Y dependiendo del estudio que se desee elaborar la
fraccin celular tambin puede estar compuesta por restos de membrana celular o por complejos
multiproteicos como el citoesqueleto de actina, microtbulos y poros nucleares.
Todo proceso de Fraccionamiento Celular tiene tres etapas:

37
HOMOGENIZADO
Ruptura de las clulas o tejidos para obtener un lisado celular (o tisular), de tal modo que se liberen
sus componentes, en particular sus organelas, sin que estos sufran mayores daos y que se encuentren
en condiciones adecuadas para su purificacin. Para el caso de la ruptura celular, tambin existen
diversas alternativas como es; el mtodo mecnico, donde se hace uso de instrumentos como el
mortero, pinzas, homogeneizadores y ultrasonido que permiten la disgregacin y lisis celular. Pero
si se desea partir de un cultivo celular, no es necesario separar las clulas y se pasa directamente a la
lisis celular. En el caso del mtodo qumico, el uso de detergentes, enzimas y el shock osmtico.
Tambin cumplen con la funcin de romper y lisar la membrana celular.
FILTRADO
Proceso que consiste en la separacin de componentes no deseados presentes en la suspensin celular

mediante un medio poroso, que retiene slidos y permite el pasaje del lquido. Dependiendo de la
naturaleza del contaminante, esto puede ser tan simple como verter el homogeneizado a travs de
una gasa y recoger el filtrado en el otro lado.
CENTRIFUGADO (purificacin)
Una vez que se tienen todos los componentes celulares libres, es necesario separarlos en fracciones,
es decir, realizar su fraccionamiento y el mtodo ms utilizado para este fin es la centrifugacin de
gradiente de densidad o tambin el de centrifugacin diferencial; cuando los diferentes componentes
celulares se encuentran suspendidos en un lquido, tienden a sedimentar hacia el fondo por el efecto
de la gravedad. Para acelerar este proceso, se puede colocar a un tubo conteniendo esta suspensin
en un rotor giratorio, de forma de someter a las partculas a una fuerza centrfuga.
COMPETENCIAS
1. Identifica las fracciones celulares a partir de hgado de pollo.
2. Deduce el rendimiento y pureza de cada fraccin.
3. Conoce la tcnica de fraccionamiento celular para el estudio de las organelas celulares.
4. Usa colorantes que identifiquen organelas especficas celulares.
5. Distingue los tipos de microscopa de campo claro y fluorescencia en las muestras preparadas.
MATERIALES:
Mortero Buffer Tris 10 mM pH 7,5

Gasa Colorante Hoechst 33258
Tubos ependorf de 1,5mL Mytotracker
2 beaker de 100 ml Lminas y laminillas
Verde de Janus Microscopio de campo
Cubetas con hielo claro y de fluorescencia.
1 beaker de 50 ml

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10 gr. de hgado de pollo
PROCEDIMIENTO
1. Colocar el hgado en el mortero, asegrese de moler bien y de extraer los ligamentos

conjuntamente con la grasa. Realice una pasta uniforme del hgado y seguidamente adicione
20 ml de la solucin Tris 10 mM pH 7,5. Con una gasa filtre en un beaker limpio.
2. Transvasar 250 l del extracto a 2 tubos eppendorf y agregue 500 l de la solucin de buffer
Tris 10 mM pH 7,5. Rotulndose con la palabra ncleo. Centrifugue a 3000 rpm durante 3
minutos. (El pellet que ha quedado se denomina fraccin nuclear y resuspender en 200 l de
Tris 10 mM pH 7,5).
3. Coloque el sobrenadante del proceso anterior a 2 ependorf nuevos y mrquelos con la palabra
mitocondrias. Centrifugar a 10000 rpm durante 8 minutos. (El pellet que ha quedado se
denomina fraccin mitocondrial, eliminar el sobrenadante y resuspender el pellet en 200 l
de buffer Tris 10 mM pH 7,5).
4. Ahora observaremos la fraccin nuclear. Para ello colocamos 10 l del resuspendido del
tubo marcado como ncleo, en una lmina porta objeto y le adicionamos una gota de Azul
de metileno y cubrir con una lmina cubreobjeto. Hacer las observaciones en el microscopio
de campo claro y realice sus esquemas. En otra lmina adicionar 10 l del colorante Hoechst
33258 y cubrir con una lmina cubreobjeto., dejar reposar por 2 min. Observe en el
microscopio de fluorescencia y realice sus esquemas.
5. Observacin de mitocondrias. Tomar el tubo marcado como mitocondrias y en un ependorf
de 0,5 ml adicione 5 l del resuspendido y 5 l del colorante mytotracker dejndolo incubar
por 10 min a 37C. En otro ependorf de 0,5 l realice la misma operacin y adicione 5 l del
colorante verde de Janus. Realice un frotis y observe al microscopio de fluorescencia y de
campo claro. Esquematizar a 400X

39
PRCTICA N 7
METABOLISMO CELULAR: PROCESO DE

RESPIRACIN CELULAR
Posteriormente a los mecanismos de nutricin y digestin celular, las clulas usan las molculas
producto de estos procesos como fuente para la elaboracin de energa que es necesaria para la
actividad celular, para lo cual pasan procesos como la desaminacin de los aminocidos, la beta-
oxidacin de los cidos grasos y la gluclisis que tienen como objetivo la formacin de cido pirvico
y otras molculas necesarias para los proceso de respiracin celular. El cido pirvico obtenido de
estos procesos, principalmente de la gluclisis, puede dependiendo del individuo y del medio en el
cual se encuentra ir a dos rutas metablicas:
La ruta aerbica denominada tambin catabolismo aerobio degradndose completamente hasta CO2
y agua, este mecanismo se realiza en las mitocondrias que actan como centrales energticas de la
clula y sintetizan ATP producto de esta degradacin.
La otra ruta mencionada es el proceso anaerbico llamada tambin catabolismo anaerbico, que en
ausencia de oxgeno transforma el cido pirvico en otras molculas degradndose parcialmente, esta
ruta tiene dos procesos ms estudiados: el catabolismo lctico que por accin de la lactato
deshidrogenasa se transforma en cido lctico y la va alcohlica donde el cido pirvico se
descarboxila formando un acetaldehdo y este es reducido por accin del NADH a alcohol etlico.
Este ltimo tipo de fermentacin la realizan algunas especies de levaduras como la Saccharomyces
cerevisae que son utilizadas en la industria de la panificacin y en la industria cervecera, estas
levaduras tienen la capacidad de poder realizar los dos tipos de respiracin dependiendo de la
abundancia de nutrientes en el medio, cuando se encuentran en un medio rico en carbohidratos
escogen la ruta anaerbica.
En la presente prctica, utilizando un respirmetro artesanal, se observar la accin de diferentes

carbohidratos como facilitadores en el proceso de respiracin celular anaerbica y la accin de un
antimetabolito que interferir en el proceso de respiracin celular inhibiendo una de las etapas de la
gluclisis.
La accin del inhibidor sobre la respiracin celular: La enzima enolasa cataliza la reaccin que
convierte el 2 fosfoglicerato (2PG) en fosfoenolpiruvato (PEP), la enolasa para reaccionar requiere
de la presencia de iones de magnesio que mantiene su estructura y de iones manganeso como
cofactor. En el siguiente experimento se usar el flor para precipitar los iones magnesio y as inhibir
la reaccin. Esta inhibicin se puede detectar como una disminucin en la velocidad del proceso
respiratorio, (disminucin en la produccin del CO2) en las clulas de levadura. Debido a que los
fluoruros son extremadamente venenosos para los humanos, maneje las soluciones con sumo cuidado
en este ejercicio y asegrese de lavarse las manos tan pronto como termine.

40
COMPETENCIAS
1. Comprende los procesos de respiracin celular
2. Investiga el efecto de un antimetabolito en la respiracin celular
3. Demuestra la accin de algunos carbohidratos como facilitadores de la respiracin
anaerbica
MATERIALES:

9 Tubos de ensayo pequeos 3 mL de NaF 0.01 molar
9 Tubos de base grandes 3 mL de NaF 0.10 molar
Agua destilada Pipetas
Solucin de glucosa al 5% Gradilla
Solucin de fructosa al 5% Varilla de vidrio
Solucin de sacarosa al 5% Plumn marcador para vidrio
Solucin de almidn al 5% Incubadora a 37C

Levaduras seca
Regla milimetrada
PROCEDIMIENTO
Fabricacin de un Respirmetro artesanal

Para construir un respirmetro simple, siga las siguientes instrucciones: llene con agua uno de los
pequeos tubos de ensayo (en el experimento se usa la suspensin de levaduras y las otras sustancias
en lugar de agua). Invierta el tubo de ensayo sobre el tubo de base plana. Hgalo rpidamente, de tal
manera que se derrame la menor cantidad posible de lquido del tubo de ensayo. Si hay burbuja de
aire, se mide con la regla graduada en milmetros; si ste contiene clulas de levadura respirando, el
dixido de carbono tender a acumularse desplazando as ms lquido. Despus de un rato, el
volumen de la cmara de aire constituye una medida de la cantidad de respiracin que haya tenido
lugar.
Preparacin de las muestras experimentales
1. Preparacin de muestras utilizando diferentes carbohidratos
Rotule los tubos de ensayo numerndolos del 1 al 5 por el lado curvo, mantngalos boca abajo
mientras inscribe el nmero. Llnelos como se indica en la siguiente tabla:
REACTIVO 1 2 3 4 5
Levadura 3 mL 3mL 3 mL 3 mL 3mL
Agua destilada 5 mL
Glucosa 5 mL
Fructosa 5 mL
Almidn 5 mL
Sacarosa 5 mL

41
2. Preparacin de muestras utilizando antimetabolitos
Rotule los tubos de ensayo numerndolos del 1 al 5 por el lado curvo, mantngalos boca abajo
mientras inscribe el nmero. Llnelos como se indica en la siguiente tabla:
REACTIVO 1 2 3 4 5
Levadura 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL 3 mL
Agua destilada 5 mL
Glucosa 5 mL 2 mL 2 mL 2 mL
NaF (0,01 M) 3mL
NaF (0,05 M) 3 mL
NaF (0,10 M) 3 mL
*Llenar el tubo hasta el borde

Invierta cada tubo de ensayo dentro de un tubo de base plana para armar el respirmetro. Mida
la cmara de aire formada y anote sus resultados en la tabla de esta pgina como lectura inicial.
Lleve los respirmetros a incubadora a 37C durante una hora. Vuelva a medir la cmara de gas
de cada tubo y anote los resultados bajo la columna lectura final en la misma tabla.
RESULTADOS
TABLA DE RESULTADOS MUESTRA 1
Longitud Inicial Longitud Final ( L. Final L. Inicial)

TUBO (mm) (mm) (Produccin de CO2)
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
TABLA DE RESULTADOS MUESTRA 2
Longitud Longitud Final ( L. Final L. Inicial

TUBO Inicial (mm) (mm) (Produccin de CO2)
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5

42
PRCTICA N 8
EXTRACCIN DE ADN
Fuente: AccuPrep Genomic DNA Extraction Kit

http://bioneer.com.au/Products/DNA-RNA-Preparation-Kits/Single-Spin-Column-type-Nucleic-Acid-Extraction-Ki/Genomic-DNA-
Extraction-Kits-(1)/Genomic-DNA-Extraction-Kits.aspx
La biologa molecular es una de las herramientas ms tiles de las que se vale hoy en da la ciencia
y la medicina moderna, la extraccin de ADN es un tipo de metodologa que mediante la
manipulacin del material gentico ha permitido, entre otras cosas, el desarrollo de la clonacin de
secuencias de ADN para el estudio de mutaciones que estn involucradas en las diferentes patologas
humanas, mapeo y secuenciacin de genes con fines teraputicos. Con este conocimiento se logra el
desarrollo de la terapia gentica, el anlisis de diversidad molecular de especies, anlisis forenses y
de paternidad.
COMPETENCIAS
1. Extrae ADN a partir de muestras biolgicas.

2. Conoce las diferentes tcnicas de aislamiento de ADN.
3. Analiza cada proceso de la tcnica de aislamiento de ADN.

43
MATERIALES
Extraccin del ADN Puntas de 10 -100 l y de
100 -1 000 l
Kit de extraccin de ADN Tubos ependorf de 1,5 mL
Micropipetas de 20 100, 100 - 1000 Microcentrfuga16000 rpm
l. Vortex.
PROCEDIMIENTO
Extraccin de ADN usando kit de extraccin Gene JET Genomic DNA (Thermo Scientific)
Extraccion de ADN de sangre Total.

1. A un tubo ependorff, adicionar una muestra de 200 l de sangre fresca o congelada.
2. Transferir 20 l de clulas o sangre a un tubo que contiene 20 l proteinasa K.
3. Aadir 20 l de RNasa a la muestra. Someter a vrtex por 15 segundos e incubar a temperatura
ambiente durante 2 min.
4. Aadir 100 l de Buffer lisis y homogenizar utilizando vrtex por 15 segundos.
5. Incubar a 55 C durante 10 min.
6. Aadir 100 l de etanol 96-100%. Mezclar en el vrtex por 15 segundos.
7. Incubar la lisis por 5 min a temperatura ambiente.
Proceso de purificacin:
1. Colocar la lisis (260 l) en la columna de extraccin.
2. Centrifugar la columna a 8500 rpm por 1 min, descartar el filtrado por la columna y colocar la
columna en un nuevo tubo de lavado.
3. Lavar la columna con 200ul de buffer de lavado, centrifugar a 8500 rpm por 1 min y eliminar el
filtrado.
4. Colocar la columna en un nuevo tubo de lavado, adicionar 200ul de buffer de lavado y centrifugar
la columna a velocidad mxima por 3 min para poder filtrar cualquier residuo del buffer de lavado.
5. Colocar la columna en un nuevo tubo de recoleccin (1,5ml).
6. Aadir 100 l de Buffer de elucin a la columna.
7. Incubar a temperatura ambiente durante 1 min. Centrifugar la columna a velocidad mxima
durante 1 min a temperatura ambiente.
8. Para recuperar ms ADN, realizar una segunda etapa de elucin utilizando el mismo volumen de
buffer de elucin (opcional)
9. Incubar a temperatura ambiente por 1 min. Centrifugar a velocidad mxima por 1 min (opcional)
10. El tubo contiene ADN genmico purificado.
11. Almacenar el ADN purificado a -80C para otras aplicaciones.

44
EXTRACCIN DE ADN (continuacin)
Cuantificacin de cidos nucleicos (Qubit)
Para la cuantificacin de cidos nucleicos existen diferentes metodologas, como es el caso de la

espectrofotometra que nos permite medir el ADN en microgramos, y la fluorometra de mayor
sensibilidad que nos permite medir pequeas cantidades de ADN expresando los resultados en
nanogramos.
MATERIALES
Extraccin del ADN
Qubit Kit (cuantificacin de ADN) Puntas de 10 -100 l y de 100 -1 000

Micropipetas de 20 100, 100 - 1000 l
l. Tubos de PCR (250 l)
Vortex
PROCEDIMIENTO
1. En un tubo ependorf de PCR colocar 1 l de la muestra en 199 l de buffer.

2. Calibrar el Qubit segn se indique el manual.
3. Medir las todas las muestras y anotar los resultados y comparar los resultados.
A. Equipo de cuantificacin de ADN, Qubit 2.0.
Fuente:
https://www.thermofisher.com/us/en/home/industrial/spectroscopy-elemental-isotope-
analysis/molecular-spectroscopy/fluorometers/qubit.html

45
PRCTICA N 9
FUNDAMENTOS DE LA REACCIN EN CADENA

DE LA POLIMERASA (PCR)
La reaccin en cadena de la polimerasa, cuyas siglas en ingles son PCR (Polymerase Chain Reaction)
es una tcnica muy usada en el campo de la biologa molecular, la cual fue desarrollada por Kary
Mullis en 1986. El objetivo de esta tcnica es obtener un gran nmero de copias de un fragmento de
ADN particular mediante una amplificacin in vitro. Es una tcnica de amplificacin selectiva, la
cual se basa en la capacidad de la enzima ADN polimerasa en fabricar una cadena de ADN
complementaria a una ya existente.
Para realizar la tcnica de PCR se necesita de:

Desoxinucleotidostrifosfato (dNTPs), mezcla de los cuatro Desoxinucleotidos que son el
sustrato para la sntesis del nuevo ADN.
Cebadores (primers),oligonucletidos complementarios a una de las hebras del ADN,
delimitando la zona de ADN que se quiere amplificar.
ADN polimerasa, enzima termoestable (Taq polimerasa) que se encarga de la sntesis de la
cadena de ADN.
ADN molde, molcula que contiene la regin de ADN que se va a amplificar.
Solucin tampn o buffer, solucin que permite el adecuado funcionamiento de la ADN
polimerasa.
Iones divalente (Mg++)
Cada ciclo de PCR consiste en tres etapas: la primera, donde el ADN molde es incubado a altas
temperaturas para desnaturalizarlo y de esta manera permitir el fcil acceso de los cebadores al ADN
molde; la segunda o etapa de alineamiento, donde los cebadores hibridan con sus secuencias
complementarias del ADN molde y por ltimo, la etapa de elongacin en la cual la ADN polimerasa
sintetiza de los fragmentos de ADN a partir de los cebadores que ya se han alienado. La deteccin del
producto de una PCR se realiza normalmente mediante una corrida electrofortica.
Es por eso que el PCR es una herramienta que se ha desarrollado para ofrecer una alternativa para el
estudio del ADN. Debido al impacto dentro de la comunidad cientfica porque ofrece las siguientes
cualidades.
Sensibilidad: hace referencia a la mnima cantidad de ADN que es necesario para que se
produzca la amplificacin.
Especificidad: solo se obtiene un solo producto amplificado.
Eficiencia: amplificacin mxima que se puede obtener en un nmero determinado de ciclos.
Fidelidad: se refiere a los errores que comete la ADN polimerasa durante la amplificacin.

46
PROCESO DEL PCR
Fuente: Fundamentos de PCR

http://pseudomonas-syringae.org/outreach/Module_3_Home.htm/
Dentro de las aplicaciones de esta tcnica se pueden mencionar el diagnstico de enfermedades

infecciosas, en el diagnstico prenatal de enfermedades genticas, diagnstico de cncer, en tcnicas
de clonaje y secuenciacin de ADN genmico, los anlisis forenses, identificacin de sospechosos
con pequeas muestras de sangre, semen o pelo, identificacin de padres en litigios de paternidad,
microbiologa ambiental,
COMPETENCIAS
1. Conoce los fundamentos en lo que se basa la tcnica de PCR.
2. Conoce la importancia del uso de la tcnica de PCR para el diagnstico de enfermedades en los
seres humanos.
3. Explica cmo se genera un fragmento especifico de ADN genmico humano utilizando la
tcnica de PCR.
MATERIALES
Termociclador
Micropipetas de 20 100, 100 - 1000 Agua estril
l. Muestras de ADN
Puntas de 10 -100 l y de Mix de PCR (taq polimerasa, dNTPs,
100 -1 000 l primer, Mg, agua)
Tubos ependorf de 1,5 mL Primers Alfa tubiluna y Beta actina.
Microcentrfuga16000 rpm
Tubos ependorf

47
PROCEDIMIENTO
1. En un tubo de PCR colocar 25 l de solucin de reaccin final (mix de PCR):
Mix PCR Master Mix PCR

Componente Concentracin Concentracin Volumen Componente Volumen
a la que se final en la a aadir a aadir
conserva reaccin (l) (l)
Agua ------ ------- 12 Agua 12
Tampn 10X 1X 7,5 Tampn
MgCl2 25 mM 1 mM 1 MgCl2 10
Primers R 10 M 0,4 M 0,5 dNTPS
Primers F 10 M 0,4 M 0,5 Taq polimerasa
dNTPS 10 mM 0,4 mM 1 Primers R 0,5
Taq 5 unidades/l 1 unidad/25 l Primers F
0,5 0,5
polimerasa
ADN ------ ------ 2 ADN 2
Concentracin final de la reaccin 25 25
2. Centrifugar brevemente para mezclar bien los componentes.

3. Colocar los ependorf con la solucin de mix de PCR en el termociclador, el cual ya debe tener
programado las condiciones de amplificacin.
Desnaturalizacin Hibridacin Elongacin N de ciclos Mantener a

94C por 1 min 52C por 1 min 72C 30 seg 30 4C
El protocolo de amplificacin estar sujeto a variaciones de acuerdo al primers con que se trabaje al momento de la prctica.
4. Finalizada el proceso de amplificacin, retirar los ependorf del termociclador y guardar las muestras a
4C si el amplificado se llegara a utilizar en un lapso de poco tiempo. Si no fuese el caso mantener a
20C.
Termociclador Applied Biosystems: Programado de las condiciones de amplificacin.

Fuente: http://www.equiposylaboratorio.com/sitio/productos_mo.php?it=13268
48
PRCTICA N 10
FUNDAMENTOS DE ELECTROFORESIS
La electroforesis en gel es una tcnica molecular muy utilizada con la cual se puede observar la
concentracin e integridad del ADN (extrado o producto de PCR), protenas y otras biomolculas.
La electroforesis va a permitir la separacin de molculas como protenas y cidos nucleicos a travs
una matriz tamponada de pH 8, la cual va a funcionar como un filtro o matriz molecular permitiendo
separar molculas en un campo elctrico, de acuerdo al tamao o peso molecular, la carga neta y la
estructura tridimensional que poseen. Por lo cual, molculas de ADN de tamao diferente van a
emigrar de forma distinta en un gel de electroforesis; siendo la distancia recorrida por cada fragmento
de ADN inversamente proporcional al logaritmo de su peso molecular. Los materiales usados como
soporte son los polmeros como la agarosa o la poliacrilamida, papel (celulosa), almidn y acetato
de celulosa.
Los cidos nucleicos (ADN, ARN) estn cargados negativamente debido a los grupos fosfatos, por
lo cual cuando se aplica una corriente elctrica a una matriz de gel que contiene las muestras de
cidos nucleicos que se encuentra en una solucin a pH neutro o bsico, entonces los fragmentos de
cidos nucleicos migrarn hacia el polo positivo, nodo.
La separacin de los fragmentos de ADN por electroforesis se regula a travs de la concentracin de
agarosa (o poliacrilamida) en el gel y el voltaje aplicado durante la corrida electrofortica; por lo
tanto, los fragmentos de menor tamao migran ms rpido hacia el nodo que aquellos de mayor
tamao y el incremento del voltaje aumenta proporcionalmente la velocidad de migracin de los
fragmentos en el gel.
La poliacrilamida es un soporte muy usado cuando se realiza una electroforesis de muestras de cidos
nuclicos debido a que es transparente, elstico, tienen una porosidad controlable y permiten una
buena visualizacin de las bandas durante un tiempo prolongado. Los geles de poliacrilamida se
forman por polimerizacin de la acrilamida con la bisacrilamida. Estos geles suelen emplearse
cuando los fragmentos de ADN que van a ser visualizados son de bajo peso molecular (menos de
1000 pares de base), mientras que para fragmentos de mayor peso molecular se emplea los geles de
agarosa.
El tamao del poro formado por el gel depende de la concentracin de los acrilamida: a mayor
concentracin, menor tamao del poro y se dificulta el movimiento de los fragmentos a lo largo del
gel permitiendo de esta manera obtener una mayor resolucin en los fragmentos pequeo. Una
desventaja que posee la acrilamida sobre la agarosa es que es un compuesto txico pero su poder de
resolucin es mayor. Todas las molculas de ADN al tener carga negativa van a migrar hacia el polo
positivo pero al entrar en los polos del gel, las molculas ms grandes van a tener un movimiento
ms lento debido a su dificultad para pasar entre los poros, mientras las molculas ms pequeas lo
hacen ms rpidamente y llegan antes al polo positivo.
Una electroforesis tpica consiste en preparar un gel de acrilamida a una determinada concentracin,
mezclar las muestras que se van a analizar con un colorante adecuado que va permitir el frente de
corrida de la electroforesis, colocar las muestras en el gel, realizar la corrida electrofortica y por
ltimo, visualizar los cidos nucleicos para lo cual se emplea un determinado colorante, el nitrato de
plata.

49
A
A. Preparacin del gel; B. Cargar la muestra en el gel; C. Revelado del gel de agarosa
Fuente: Corrida electrofortica
http://stp.insht.es:86/stp/basequim/012-electroforesis-en-gel-de-agarosa-exposici%C3%B3n
La electroforesis en cidos nucleicos en geles de poliacrilamida permite determinar el peso molecular

de los cidos nucleicos, para lo cual es necesario utilizar marcadores de tamao molecular conocido
y de esta manera de acuerdo a la posicin del fragmento del ADN en el gel de acrilamida poder
calcular los pesos moleculares de las muestras de ADN analizadas. Tambin permite analizar los
fragmentos de ADN cortados con enzimas de restriccin, aislar y recuperar fragmentos de ADN
purificados.
COMPETENCIAS
1. Aprecia la tcnica de electroforesis en gel.
2. Comprende los conceptos que estn involucrados en la separacin de cidos nucleicos en una
corrida electrofortica.
3. Observa la muestra de ADN aislada de la prctica anterior.
MATERIALES
Muestra de ADN obtenida de la Guantes.
prctica anterior. Gradilla para tubos de 1,5 mL.
Marcador de peso molecular. Puntas para volmenes de 0,5 - 20 l.
Cmara de electroforesis y accesorios Agarosa al 2 %.
(peines, soporte, tabla niveladora, Buffer Tris borato EDTA 1X
etc). (TBE) pH 8-8.3.
Fuente de poder. Buffer carga para ADN.
Micropipetas para volmenes de 0,5 - Colorante Sybr green
20 l. Transiluminador de luz UV.

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PROCEDIMIENTO
Asegurarse de usar guantes durante la manipulacin de las muestras, los reactivos y el
equipo.
Preparar 50 ml de agarosa al 2% y adicionar 20 l de colorante Sybr green, dejar polimerizar

por 10 min aproximadamente. Sumergir el sistema conteniendo los geles polimerizados en
su tanque (cmara electrofortica) con el buffer TBE 1X para ADN. Al momento de sumergir
los geles en el tanque, asegurarse que los pocillos del gel estn totalmente saturados de
buffer.
Sobre un pedazo de lmina extensible de parafilm, preparar una mezcla de 5 l ADN con 1l
de buffer carga repartida en alcuotas de acuerdo al nmero de muestras que se colocarn en
los pocillos (considerar el uso de un marcador de peso molecular estndar de ADN).
Con el uso de puntas de 20 l proceder a cargar cuidadosamente la muestra en los pocillos

del gel de agarosa evitando la contaminacin del pocillo contiguo.
Finalizada la colocacin de las muestras ADN en los pocillos, cubrir el tanque con la tapa y
conectar los cables de los electrodos en la fuente de poder. Encender la fuente de poder y
proceder a seleccionar el voltaje adecuado (puede estar comprendido entre 75 a 120 voltios).
Luego de seleccionar las condiciones de voltaje, iniciar el proceso de la electroforesis.

Durante el proceso se evidenciarn dos frentes de corrida de diferente color y distancia de
migracin. Ambos colores, azul oscuro y azul claro corresponden a los colorantes azul de
bromofenol y xilenecianol, que conforman el buffer de la muestra. El xilenecianol en geles
de agarosa al 2 % migra de manera similar a un fragmento de ADN de 160 pares de base
(pb), mientras que el azul de bromofenol a esta misma concentracin de agarosa es
equivalente a un fragmento de 45 pb.
Transcurrido el tiempo de corrida de la electroforesis, proceder al desmontaje del equipo

empezando con la desconexin de los electrodos de la fuente de poder, removiendo el sistema
que contiene el gel de agarosa.
Remover el gel del soporte, para realizar este proceso se requiere tener mucho cuidado, pues
el gel es muy frgil y puede romperse con facilidad.
Desplazar el gel hacia el transiluminador para el revelado, encender el equipo y verificar que
este a una longitud de onda de 420 nm.
Dejar hasta que empiecen a aparecer las bandas y registrar el resultado final.
Observar los resultados obtenidos y discutir.

51
RESULTADO ESPERADO
2000
1900
1800
1700
1500
1600
1500
1400
1300
1200
1100
1000
900
800
700
600
500
400
300
200
100
M: marcador de peso molecular.

Carril N 1,2,3,4,5,6,7: muestras problemas de ADN.

52
PRCTICA N 11
CICLO CELULAR: MITOSIS
Fuente: http://esperanzacuartoeso.blogspot.com/
Las clulas se generan a partir de otras clulas y la nica forma de producir ms clulas es por divisin
de las ya existentes. Este ciclo de reproduccin celular en el cual la clula duplica su contenido
(duplicacin) y luego se divide en dos (divisin) es conocido como ciclo celular. Este proceso se
divide en dos fases: INTERFASE Y DIVISIN CELULAR
LA INTERFASE, se divide en:
G1, llamada la fase de crecimiento, se inicia con una clula hija que proviene de la divisin
celular anterior. Se produce mucha actividad en la clula, la cual aumenta de tamao,
sintetiza nuevo material citoplasmtico sobre todo protenas y ARN, los cuales se necesitaran
para continuar con el ciclo celular.
S, o fase de sntesis de ADN, es la fase en que tiene lugar la duplicacin del ADN. Cuando
acaba este periodo el ncleo contiene el doble de protenas nucleares y de ADN que con el
que haba iniciado, cada cromosoma ahora tiene dos cromtidas hermanas.
G2, o segunda fase de crecimiento, en ella se sigue sintetizando ARN y protenas que se
necesitaran para la fase de mitosis. El final de este periodo queda marcado por la aparicin

53
de cambios en la estructura celular, cambios visibles en el microscopio ptico y que nos
indican el principio de la Mitosis o divisin celular.
LA DIVISIN CELULAR
Cariocinesis
MITOSIS
La mitosis es la fase del ciclo celular en el cual las molculas replicadas de ADN durante la Interfase,
se reparten el material nuclear (cariocinesis), dando lugar a la formacin de dos ncleos hijos con la
misma dotacin gentica entre s y que la clula que las dio origen. Al final de la mitosis suele
acompaarse por un proceso de citocinesis, que es la divisin del citoplasma en dos, permitiendo que
se formen dos clulas hijas. Esta cariocinesis ocurre en clulas somticas.
Gracias a este proceso de divisin celular, las clulas son capaces de multiplicarse, participar en
procesos de desarrollo, de crecimiento y de regeneracin celular.
La mitosis se puede dividir en cuatro etapas: profase, metafase, anafase, telofase, cada una de ellas
caracterizada por una serie particular de sucesos.
Profase. En esta fase, los cromosomas duplicados se preparan para la separacin y la maquinaria
mittica se ensambla. El material gentico se condensa permitiendo observar los cromosomas como
filamentos dobles (cromtidas hermanas) unidos por un estrangulamiento (centrmero). Al final de
la profase han desaparecido la membrana nuclear y el nuclolo.
1000 X
Metafase. Los cromosomas estn alineados en la placa ecuatorial de la clula (placa metafsica), en
la parte media entre los dos polos. Las cromtidas de cada cromosoma estn conectadas por su
cinetocoro con las fibras del huso, los cuales son jalados hacia los extremos.
1000 X

54
Anafase. La anafase comienza cuando las cromtidas hermanas de cada cromosoma se separan e
inician su movimiento hacia los polos opuestos de la clula. El acortamiento de las fibras del huso y
la divisin del cinetocoro contribuye a la separacin de los cromosomas. La anafase constituye una
fase importante de la divisin celular porque en ella se debe realizar la correcta distribucin de las
dos copias de la informacin gentica original.
1000 X
Telofase. Durante la telofase las clulas hijas regresan a la condicin de Interfase. Las cromtidas
llegan a los polos y comienzan a descondensarse, en esta fase donde se reconstruye la membrana
nuclear alrededor de cada conjunto cromosmico lo cual definir los nuevos ncleos hijos.
1000 X
Fuentes: MITOSIS
http://www.etitudela.com/profesores/rma/celula/04f7af9d590edee08/04f7af9d5f0dc0808/04f7af9d5f0dc3a0a/index.html
A continuacin tiene lugar la divisin del citoplasma o Citocinesis.
COMPETENCIAS
1. Observa y reconocer las fases de la Mitosis
MATERIALES
Lminas fijadas de clulas meristemticas de Allium cepa
PROCEDIMIENTO
1. Llevar la lmina al microscopio, localizar las clulas que presentan estructuras filamentosas
intensamente teidas e identifique las fases de la mitosis. Esquematizar sus observaciones.

55
Fuente: Mitosis
http://www.bio.miami.edu/dana/250/25009_4print.html

56
PRCTICA N 12
CICLO CELULAR: MEIOSIS
Fuente: http://ptbestaribiology.blogspot.com/2011/05/what-is-meiosis.html
La MEIOSIS es un tipo de divisin celular por el cual la dotacin cromosmica queda dividida
exactamente por la mitad. En este proceso, dos divisiones celulares sucesivas (DIVISIN I Y
DIVISIN II) ocurren despus de un ciclo de replicacin de ADN dando lugar a cuatro clulas
haploides a partir de una diploide.
Esta divisin ocurre en clulas germinales, que se localizan en los rganos reproductores, las
gnadas, y cuya funcin es la formacin de clulas sexuales o gametos, los que se forman al
dividirse por meiosis.
DIVISIN MEITICA I (reduccional). Se divide en:
Profase I. Fase ms compleja y larga de la Meiosis, la cual se subdivide 5 fases:
Leptoteno. Se inicia con la CONDENSACIN de los cromtidas, observndoselas como

filamentos aparentemente simples. Duplicacin de centrmero, formacin del huso,
disgregacin de la envoltura nuclear y nuclolo.
Cigoteno. APAREAMIENTO (SINAPSIS) de los cromtidas, la cual empieza por los
telmeros,formacin de los BIVALENTES (cada par de homlogos duplicado)
Paquiteno. Los cromosomas comienzan a condensarse, se realiza el intercambio cromosmico
(CROSSING OVER) entre los cromosomas homlogos. A medida que los cromosomas
homlogos continan acortndose y engrosndose, se puede observar que estas formaciones
estn formadas por 4 cromtidas y se les denomina TTRADAS.
Diploteno. Los cromosomas homlogos empiezan a separarse pero quedan unos puntos de unin
entre ellos, denominados QUIASMAS. Los quiasmas son la manifestacin citolgica de donde
se produjeron entrecruzamiento.

57
Diacinesis. Los quiasmas se desplazan hacia los extremos del bivalente, fenmeno llamado
TERMINALIZACIN. Los cromosomas se unen a las fibras del huso.
Metafase I. La membrana nuclear desaparece, las ttradas se ordenan en el plano ecuatorial, se

forma el huso acromtico, los centrolos, si existen, estn en los polos.
Anafase I. Los cromosomas homlogos (ttradas) se separan totalmente y se mueven hacia polos
opuestos guiados por las fibras del huso. Desaparecen los quiasmas.
Telofase I. Los cromosomas se ubican en cada polo de la clula. Los cromosomas empiezan a
condensarse, se forma la envoltura nuclear, dando lugar a ncleos que poseen un nmero haploide
de cromosomas, cada uno formado por dos cromtidas.
Fuentes: Meiosis
http://www.tokresource.org/tok_classes/biobiobio/biomenu/meiosis/index.htm

58
Citocinesis. Divisin del citoplasma en dos clulas hijas. No hay interfase, la segunda divisin
empieza inmediatamente.
ESQUEMA DE RECOMBINACIN GNICA

Fuentes: Recombination Synapsis
http://www.mhhe.com/biosci/ap/ap_prep/bioD6b.html
DIVISIN MEITICA II (ecuacional). Esta divisin se bsicamente una divisin mittica, pero
sin ninguna replicacin de ADN. Este proceso de divisin ocurre de manera simultnea en ambas
clulas hijas, resultado de la primera divisin. Se divide en cuatro fases:
Profase II. Comienza a desaparecer la envoltura nuclear y el nuclolo, la cromatina comienza a

condensarse, los centriolos se desplazan hacia los polos, se forma el huso.
Metafase II. Las fibras del huso se unen a los cinetocros de los cromosomas y los dirigen hacia el
plano ecuatorial de la clula.

59
Anafase II. El centrmero se divide y las cromtidas hermanas son desplazada hacia polos opuestos
arrastradas por las fibras del huso.
Telofase II. Cada uno de los polos recibe un juego haploide de cromosomas, se forman los nuevos
ncleos.
Citocinesis Que origina cuatro clulas, cada una con nmero haploide de cromosomas (n) y
constituidas de una sola cromtide. Estas clulas formarn los gametos.
Fuentes: Meiosis
http://www.tokresource.org/tok_classes/biobiobio/biomenu/meiosis/index.htm
COMPETENCIAS
1. Identifica las fases de la Meiosis

2. Reconoce la importancia de la Meiosis en la variabilidad gentica
3. Investiga las consecuencias genticas de la Meiosis
MATERIALES
Lminas fijadas de clulas germinales Zea mays

60
PROCEDIMIENTO
1. Llevar la lmina al microscopio e identificar las fases. Esquematizar sus observaciones.

LEPTOTENO ZIGOTENO PAQUITENO DIPLOTENO DIACINESIS
1000 X 1000 X 1000 X 1000 X 1000 X
Fuente: PLANTS AND ANIMALS CELLS LAPBOOK

http://www.squidoo.com/cell-lapbook

61
1000 X 1000 X
METAFASE I ANAFASE I
1000 X 1000 X
TELOFASE I PROFASE II
1000 X 1000 X
METAFASE II ANAFASE II

62
1000 X 1000 X
TELOFASE II CITOCINESIS

63
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Alberts B, Jonson A, Bray D, Lewis J, Raff M, Roberts K. y Walter P. Biologa molecular

de la clula. 5ta ed. Barcelona-Espaa: Ediciones Omega; 2010.
Alexander P, Bahret M, Chaves J, Courts G y SkolkyD'Alessio N. Biologa.
EnglewoodCliffs. New Yersey: Editorial Prentice Hall; 1992.
Atlas de Biologa: los mecanismos de la vida. Barcelona: Cultural; 1998.
Audesirk T, Audesirk G y Byers B. Biologa: la vida en la tierra. 6ta ed. Mxico: Pearson
Educacin; 2003.
Bernstein R y Bernstein S. Biologa. 10ma ed. Colombia: Mc Graw Hill Interamericana;
1998.
Curtis H, Barnes N, Schnek A y Massarini A. Biologa. 7ma ed. en espaol. Buenos Aires.
Editorial Mdica Panamericana. 2008.
De Robertis E, Hib J y Ponzio R. Biologa celular y molecular. 12ava ed. Buenos Aires:
Editorial El Ateneo; 1997.
Karp G. Biologa celular y Molecular. 4ta ed. Mxico D.F: Mc Graw Hill Interamericana;
2005.
Paniagua Gmez-Alvarez R, Nistal Martn de Serrano M y Sesma Egozcue M. Citologa e
histologa vegetal y animal : biologa de las clulas y tejidos animales y vegetales. 3ra ed.
Madrid : Mc Graw Hill Interamericana; 2002.
Smith C y Wood E.Biologa celular. Wilmintong, Delaware- EUA: Editorial Addison-Wesley
Iberoamericana SA. 1998.
Smith, C. y Wood, E. Biologa molecular y biotecnologa. Wilmintong, Delaware- EUA:
Editorial Addison-Wesley Iberoamericana SA. 1998.
Solomon E, Berg L, Martin D y Villee C. Biologa de Villee. 4ta ed. Mxico D.F: Editorial
Mc Graw Hill Interamericana; 1998.
Villee C. Biologa. 8va ed. Mxico D. F: Mc Graw Hill Interamericana; 1996.

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Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Medicina Humana

Normas para el estudiante del curso de Biologa Celular y Molecular 03

Instrucciones para el desarrollo de las prcticas 06

Prctica N 1: Principios de Bioseguridad en el laboratorio 08

Prctica N 2: Fundamento de Microscopa 14

Prctica N 4: Permeabilidad de la Membrana Citoplasmtica.

Prctica N 5: La clula procarita y eucaritica: reconocimiento de estructuras 30

Prctica N 6: Obtencin y anlisis de fracciones celulares 36

Prctica N 7: Metabolismo Celular: Proceso de respiracin celular 39

Prctica N 8: Extraccin del ADN 42

Prctica N 9: Fundamentos de la Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). 45

Prctica N 10: Fundamentos de Electroforesis 48

Prctica N 11: Ciclo celular: Mitosis y Meiosis 52

Prctica N 12: Ciclo celular: Mitosis y Meiosis 56

El estudiante debe INGRESAR AL LABORATORIO CON MANDIL LARGO, LIMPIO,

El ORDEN Y LA LIMPIEZA son obligatorios en el laboratorio de Biologa Celular y Molecular,

LA MANIPULACIN DE LOS EQUIPOS SE HAR EXCLUSIVAMENTE POR EL PROFESOR

Lee la gua de prctica previa al desarrollo de la experiencia en el laboratorio.

Nombre del Estudiante:.

3 Ingresa al laboratorio debidamente y cumple las normas de

2 Trabaja en equipo cumpliendo con eficiencia el rol que le toca en

2 Esquematiza y toma nota de sus resultados y participa activamente

0 = No logrado 1 = En proceso 2= Logrado

Figuras, tablas y La mayor parte de las

Todos los resultados

Se exponen con Se exponen todas las Aunque recojan los

PRINCIPIOS BSICOS DE BIOSEGURIDAD

Principio Universal: TODO PACIENTE DEBE SER ASUMIDO COMO PORTADOR

Agentes de riesgos fsicos y mecnicos

Agentes de riesgo qumicos

Tabla N 1: Niveles de bioseguridad

MANEJO DE RESIDUOS SOLIDOS DE ESTABLECIMIENTOS DE SALUD

Tabla N2: Clasificacin de residuos slidos sanitarios

Clase Ejemplo Color de Bolsa

Bolsas rojas: reas Bolsas amarillas: reas Bolsas negras: residuos

Figura N1: Ciclo del manejo de residuos slidos hospitalarios

1. Lavarse siempre las manos con abundante agua y jabn.

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac, Gisella Guilln

Desarrolla actitudes responsables en el trabajo en el laboratorio.

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac, Gisella Guilln

Fuente: LABORATORIODE BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR, UNIVERSIDAD CIENTIFICA DEL

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac, Gisella Guilln

Fuente: GENOMA SUR INTRODUCCIN A LA CLULA

Parte mecnico y sus componentes:

Parte ptico y sus componentes:

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac, Gisella Guilln

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac, Gisella Guilln

MATERIALES DEL ESTUDIANTE

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac, Gisella Guilln

TIPOS DE MICROSCOPA (continuacin)

El uso de determinados componentes colocados en el condensador o en los objetivos se interponen

En el microscopio electrnico de transmisin (MET), la observacin de una muestra biolgica se

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac, Gisella Guilln

ptico de campo claro Para observar muestras teidas.

Para la observacin de microorganismos

Para facilitar la visualizacin de estructuras

Observar estructuras internas especficas

Examinar virus o la ultraestructura interna de

Estudiar las caractersticas de las superficies

Fuente: Comunicacin personal.

Joyce del Pino, Rafael Alvis, Danae Liviac, Gisella Guilln

Tipo de microscopia utilizada