Doutorado Filmes Alginato Uitosana Cobre

UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
FACULDADE DE ENGENHARIA QUMICA
DEPARTAMENTO DE TERMOFLUIDODINMICA REA DE CONCENTRAO:

ENGENHARIA DE PROCESSOS
OBTENO E CARACTERIZAO DE
MEMBRANAS MULTICAMADAS DE
QUITOSANA E ALGINATO CONTENDO
COBRE
AUTOR: RAFAEL GONALVES DE PAIVA
ORIENTADORA: PROFa. DRa. MARISA MASUMI BEPPU
Dissertao de Mestrado apresentada Faculdade de Engenharia Qumica como

parte dos requisitos exigidos para a obteno do ttulo de Mestre em Engenharia
Qumica.
Campinas So Paulo
02/2009
FICHA CATALOGRFICA ELABORADA PELA BIBLIOTECA DA REA DE
ENGENHARIA E ARQUITETURA - BAE - UNICAMP
Paiva, Rafael Gonalves de

P166o Obteno e caracterizao de membranas
multicamadas de quitosana e alginato contendo cobre /
Rafael Gonalves de Paiva. --Campinas, SP: [s.n.], 2009.
Orientador: Marisa Masumi Beppu.

Dissertao de Mestrado - Universidade Estadual de
Campinas, Faculdade de Engenharia Qumica.
1. Quitosana. 2. Alginatos. 3. Cobre. 4. Membranas

(Tecnologia). I. Beppu, Marisa Masumi. II.
Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de
Engenharia Qumica. III. Ttulo.
Ttulo em Ingls: Production and characterization of chitosan and alginate multilayer

membranes containing copper
Palavras-chave em Ingls: Chitosan, Alginate, Copper, Membranes
rea de concentrao: Engenharia de Processos
Titulao: Mestre em Engenharia Qumica
Banca examinadora: Theo Guenter Kieckbusch, Silvia Yuko Eguchi
Data da defesa: 18/02/2009
Programa de Ps Graduao: Engenharia Qumica
Aos meus pais
AGRADECIMENTOS
Agradeo a todos que estiveram em meu convvio durante este trabalho:
Meus pais, Jane e Randolfo, e meu irmo Guilherme, que nunca

hesitaram em me apoiar;
Companheiros de repblica: Cassiano, Ennio, Santizta, Daniel, Danilo,

Guilhermo e Guilherminho;
Colegas de laboratrio: Rdrigo, Gilberto, Emerson, Aline, Grnia, Raquel,

Tiba, Fernando Ferdinando Vasconcelos, Fernando Rosa e Wellington;
Professora Marisa, que sempre acreditou em meu potencial, e com quem

aprendi muito;
FAPESP, CAPES e CNPq, pelo apoio financeiro;
Laboratrio Nacional de Luz Sncrotron, pelas anlises de EXAFS;
Dra. Slvia Eguchi, pelas anlises de capacidade bacteriosttica;
Prof. Csar Costapinto Santana, por disponibilizar seu laboratrio para as

anlises de FTIR-ATR e Difuso de ons;
Todos aqueles que de alguma forma contriburam para a execuo deste

trabalho.
Este trabalho contm descobertas cientficas que se encontram em processo de
patenteamento. A explorao do conhecimento apresentado aqui deve ser
realizada com a anuncia dos autores.
i
RESUMO
Estudos envolvendo membranas tm atrado muito interesse nos ltimos anos,

uma vez que, alm da aplicao clssica em processos de separao, estas tm
sido usadas tambm em reas como medicina, microeletrnica, tratamento de
gua, etc. medida que o nmero de aplicaes cresce, a necessidade de
criao de estruturas elaboradas tambm aumenta. Neste contexto, este trabalho
realizou a adaptao da tcnica layer-by-layer de produo de membranas
multicamadas, porm visando a produo de membranas com espessuras de
ordem micromtricas. Foi realizada, tambm, a subseqente incorporao de ons
cobre a estas membranas. Caracterizaes morfolgicas, qumicas e cristalinas,
alm de testes de difuso de ons e avaliao de capacidade bacteriosttica das
membranas foram realizados. As anlises qumicas mostraram a interao entre
as cadeias de quitosana e alginato, garantindo a estabilidade dimensional da
membrana. Foi possvel observar tambm mudanas na cristalinidade das
membranas, que se tornaram mais amorfas aps a incorporao de ons cobre em
sua estrutura. Anlises de EXAFS mostraram que estes tomos se ligam
preferencialmente aos tomos de oxignio e nitrognio constituintes dos grupos
funcionais de alginato e quitosana, respectivamente. Alm disso, a incorporao
de cobre s membranas causou mudanas notveis na difusividade destas,
tornando a difuso de cloreto de sdio mais lenta do que nas membranas sem
cobre. A capacidade bacteriosttica foi sensivelmente influenciada pela presena
do metal nas membranas: as amostras com cobre, independente de sua
composio, proporcionaram inibio do crescimento bacteriano, tanto para E. coli
quanto para S. aureus, ao passo que as amostras sem cobre no apresentaram
capacidade bacteriosttica. Esses resultados mostram potencial aplicabilidade
destas membranas em situaes onde este tipo de capacidade requerida.
Palavras-chave: Quitosana, Alginato, Cobre, Membranas
ii
ABSTRACT
Study of membranes has attracted much interest in recent years due to their
applicability in areas such as medicine, microelectronics, water treatment, etc.
rather than in traditional separation processes. As the application range arises, the
need for establishing more elaborated structures also increases. In this context, the
present study adapts the layer-by-layer technique for production of micro-scale
multilayer membranes. Subsequent incorporation of copper ions is performed n
these membranes. Morphological, chemical and crystalline characterizations,
besides ion diffusion tests and evaluation of bacteriostatic ability were performed.
The chemical analysis showed the interaction between the chains of chitosan and
alginate, ensuring the dimensional stability of the membrane. Changes in
crystallinity of membranes were also observed, as they became amorphous after
the incorporation of copper ions in its structure. EXAFS analysis indicated that
these atoms are linked preferentially to oxygen and nitrogen atoms, constituents of
alginate and chitosan functional groups, respectively. Moreover, the amount of
copper to the membrane caused remarkable changes in its diffusivity, reducing its
value in comparison to membranes without copper. The bacteriostatic capacity was
significantly influenced by the presence of metal in membranes: the samples with
copper, regardless of its composition, provided inhibition of bacterial growth, both
for E. coli and for S. aureus, while the untreated control samples showed no
bacteriostatic capacity. These results show the potential of using these membranes
in applications where this kind of capacity is required.
Keywords: Chitosan, Alginate, Copper, Membranes

iii
SUMRIO
CAPTULO 1
INTRODUO......................................................................................................................1
CAPTULO 2
OBJETIVOS..........................................................................................................................4
CAPTULO 3
REVISO BIBLIOGRFICA .................................................................................................5
3.1. MEMBRANAS ............................................................................................................5
3.2. MTODO layer-by-layer DE PRODUO DE MEMBRANAS MULTICAMADAS .....7
3.3. QUITOSANA ..............................................................................................................9
3.4. ALGINATO ...............................................................................................................12
3.5. ASPECTOS GERAIS DO COBRE (PROCOBRE, 2007) .........................................14
CAPTULO 4
MATERIAIS E MTODOS ..................................................................................................19
4.1. PREPARAO DA SOLUO DE QUITOSANA ...................................................19
4.2. PREPARAO DA SOLUO DE ALGINATO ......................................................19
4.3. PREPARAO DAS MEMBRANAS ........................................................................20
4.3.1. MEMBRANA DE QUITOSANA ..........................................................................20
4.3.2. MEMBRANA DE ALGINATO.............................................................................20
4.3.3. MEMBRANA COMPOSTA ................................................................................20
4.4. INCORPORAO DE COBRE S MEMBRANAS ..................................................22
4.5. CARACTERIZAO DAS MEMBRANAS ...............................................................22
4.5.1. MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA (MEV) ................................23
4.5.2. ESPECTROSCOPIA DE ENERGIA DISPERSIVA DE RAIOS-X (EDX) ...........23
4.5.3. DIFRAO DE RAIOS-X (XRD) .......................................................................23
4.5.4. ESPECTROSCOPIA DE INFRAVERMELHO POR TRANSFORMADA DE

FOURIER (FTIR) .........................................................................................................24
iv
4.5.5. ESTRUTURA FINA ESTENDIDA DE ABSORO DE RAIOS-X (EXAFS)
(Mazali, 1998) ..............................................................................................................25
4.5.6. DIFUSO DE ONS ...........................................................................................30
4.6. AVALIAO DA CAPACIDADE BACTERIOSTTICA ............................................33
CAPTULO 5
RESULTADOS E DISCUSSO ..........................................................................................35
5.1. PREPARAO DAS MEMBRANAS ........................................................................35
5.2. MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA ..................................................37
5.3. ESPECTROSCOPIA DE ENERGIA DISPERSIVA DE RAIOS-X (EDX) .................38
5.4. DIFRAO DE RAIOS-X .........................................................................................41
5.5. ESPECTROSCOPIA DE INFRAVERMELHO POR TRANSFORMADA DE

FOURIER ........................................................................................................................45
5.6. ESTRUTURA FINA ESTENDIDA DE ABSORO DE RAIOS-X (EXAFS) ............49
5.7. DIFUSO DE ONS .................................................................................................53
5.8. AVALIAO DA CAPACIDADE BACTERIOSTTICA ............................................57
CAPTULO 6
DISCUSSO GERAL .........................................................................................................62
6.1. PRODUO E CARACTERIZAO QUMICA DAS MEMBRANAS ......................62
6.2. ANLISE ESTRUTURAL .........................................................................................64
6.3. APLICABILIDADE ....................................................................................................66
CAPTULO 7
CONCLUSES...................................................................................................................69
CAPTULO 8
SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS........................................................................71
CAPTULO 9
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ...................................................................................72
ANEXO 1 - Fotografias dos resultados dos testes de avaliao bacteriosttica. ...............77
v
Introduo
CAPTULO 1
INTRODUO
O estudo envolvendo membranas tem atrado interesse nos ltimos tempos,

j que alm da aplicao clssica em processos de separao de misturas, estas
tm sido utilizadas tambm em outras reas, como, por exemplo, medicina
(Crdenas, 2008), microeletrnica, tratamento de gua, sensores eletrnicos, etc.
(Joly, 2000). Ao mesmo tempo em que as aplicaes envolvendo membranas se
tornam mais numerosas, cresce a necessidade de criao de estruturas que
atendam a demandas especficas, sem perda de funcionalidade.
Nesse contexto surgem tcnicas como, por exemplo, o mtodo layer-by-

layer de obteno de membranas multicamadas (Decher, 2002). Este mtodo
apresenta vantagens como nenhum outro, principalmente na sua simplicidade e
baixo custo operacional. A desvantagem que este ainda um mtodo que
produz em escala extremamente reduzida, da ordem de nanmetros, podendo
apresentar complexidade para adaptao de produo em grande escala.
exatamente neste ponto que o presente trabalho se insere, ao propor um

mtodo de obteno de membranas multicamadas, adaptado do mtodo layer-by-
layer, mas com o intuito de trabalhar na escala micromtrica, para sistemas onde
o refinamento nanomtrico do mtodo layer-by-layer no seja requerido. Alm
disso, a proposta produzir membranas de maior dimenso, maior espessura, e
conseqentemente, de maior facilidade ao manuseio e de uso nas anlises que
forem pertinentes.
Trata-se de um mtodo que tem a caracterstica de ser completamente

adaptvel, com a capacidade de atender aos mais diferentes requisitos, bastando
para isso, mudar o conjunto de polmeros que so utilizados para a produo da
-1-
Introduo
membrana. Vale ressaltar que alm de polmeros, tambm podem ser utilizados
outros materiais, como protenas, micropartculas, compostos inorgnicos, etc.
Neste trabalho, alm da possibilidade de se obter membranas

multicamadas atravs de uma forma adaptada do mtodo layer-by-layer, ser
estudada a capacidade de se obter estas membranas usando-se biopolmeros,
tais como a quitosana e o alginato. Ambos tm se mostrado interessantes sob
vrios pontos de vista, com propriedades que os tornam capazes de substituir
alguns polmeros derivados de petrleo, e tambm para outras aplicaes. Ambos
so provenientes de fontes renovveis e abundantes e, alm disso, so
biodegradveis. Sabemos tambm, de estudos anteriores, que os dois polmeros
possuem propriedades qumicas, fsicas e biolgicas que os potencializam como
matria-prima para vrias aplicaes, desde biomdicas at em alimentos (Kurita,
2006).
Sabe-se, por exemplo, que quitosana e alginato tm capacidade de interagir

com ons metlicos, apresentando boa capacidade de adsoro destes (Rinaudo,
2008). Isto faz com que possam ser utilizados, por exemplo, em processos de
tratamento de efluentes, retirando estes ons de uma corrente de gua que
eventualmente ser devolvida natureza; ou para um pr-tratamento de gua que
ser fornecida para os moradores de uma cidade, atravs da rede pblica.
Propomos, no presente trabalho, a utilizao de quitosana e alginato para

obteno de membranas organizadas em camadas, visando obter uma estrutura
final com caractersticas mais interessantes do que aquelas encontradas
isoladamente em cada um dos materiais. Adicionalmente, podemos tambm nos
beneficiar de caractersticas sinrgicas que possam surgir da associao dos
polmeros e da forma como a membrana construda.
Tambm procedemos com a incorporao de cobre a essas membranas,

com o intuito de podermos caracterizar sua funcionalidade quanto capacidade
de inibir a proliferao de microorganismos, aproveitando-se da boa interao dos
polmeros com este metal. Sabemos que uma propriedade do cobre que o torna
importante a sua capacidade bacteriosttica, podendo ser utilizado em situaes
-2-
Introduo
onde no se deseja a proliferao de bactrias ou outros agentes patognicos

(PROCOBRE, 2007).
Os resultados deste trabalho proporcionam um melhor entendimento de

como os biopolmeros quitosana e alginato podem ser utilizados sob a forma de
membranas, servindo como alternativa a polmeros sintticos, no biodegradveis
e derivados de petrleo. Alm disso, foi possvel entender como o cobre se ligou a
estes polmeros, e quais as conseqncias, do ponto de vista estrutural e
biolgico, de sua adio nas membranas. Com estas informaes podemos prever
algumas potenciais aplicaes para as membranas multicamadas de quitosana e
alginato, organizadas em camadas, contendo cobre.
Outro ponto interessante e que deve ser considerado que o estudo a

respeito desta forma de obteno de membranas pode ser replicada para qualquer
outra aplicao e para qualquer conjunto de matrias primas, sejam polmeros,
aminocidos, etc., e tambm com o nvel de complexidade desejado, com um,
dois ou mais componentes.
-3-
Objetivos
CAPTULO 2
OBJETIVOS
Os objetivos deste trabalho so:
Desenvolvimento do mtodo de obteno de membranas multicamadas;
Realizao de ensaios de incorporao de ons cobre s membranas

multicamadas produzidas;
Caracterizao das membranas obtidas atravs de:

o Caracterizao qumica;
o Caracterizao estrutural;
o Testes de difuso de ons;
o Avaliao de capacidade bacteriosttica.
Anlise do potencial do mtodo de obteno de membranas atravs dos

resultados obtidos;
-4-
Reviso Bibliogrfica
CAPTULO 3
REVISO BIBLIOGRFICA
3.1. MEMBRANAS
De uma forma simplificada, membrana uma barreira seletiva entre duas

fases, onde o termo seletiva inerente a uma membrana ou a um processo que
utilize membranas. importante notar que esta uma definio macroscpica,
enquanto que uma separao deve considerar tambm, e principalmente, o
ambiente microscpico. Esta definio tambm no aborda os aspectos de
funcionalidade e estrutura da membrana (Mulder, 1991).
A fim de se obter uma definio mais informativa a respeito das

membranas, podemos classific-las de acordo com vrios critrios: espessura,
estrutura, propriedades de transporte, carga eltrica. Levando em considerao a
natureza das membranas, podemos dividi-las em dois grupos com estruturas
completamente distintas, podendo ser biolgicas ou sintticas. Dentro de cada um
destes grupos, pode-se utilizar as mais variadas e convenientes divises. Quando
falamos de membranas sintticas, podemos classific-las como orgnicas
(polimricas ou lquidas) ou inorgnicas, por exemplo (Mulder, 1991).
Considerando-se as membranas sintticas, os mais variados compostos

podem ser utilizados para a produo destas, desde cermicas at polmeros
naturais. Alm disso, existem vrias formas de se produzir estas membranas,
dependendo-se principalmente das caractersticas da matria-prima, e da
finalidade para a qual a membrana ser empregada.
As membranas so utilizadas em vrias reas, tais como aplicao em

clulas de combustvel (Wan, 2006), tratamento de gua potvel, remoo de
-5-
Reviso Bibliogrfica
metais pesados de guas residuais e processos de separao de misturas

azeotrpicas, entre outras. Na maioria dos casos, os processos envolvendo
membranas servem como alternativa a outras tcnicas. Estas aplicaes tm em
comum o fato de explorar caractersticas especficas do polmero que
eventualmente formar a membrana.
Quando mais de um polmero utilizado para produzir a membrana,

podemos refinar as caractersticas que interessam para a finalidade escolhida,
atravs das interaes qumicas e fsicas entre as cadeias polimricas. As
caractersticas das solues que passaro pela membrana tambm so
importantes, no que diz respeito polaridade.
Devido maior ateno ultimamente dispensada s causas ambientais, e a

uma provvel escassez de petrleo no futuro, o nmero de estudos envolvendo
membranas compostas por polmeros naturais tem aumentado. Nesta linha de
associao de dois polmeros naturais para produo de uma membrana, estudos
produzindo membranas compostas por uma blenda de biopolmeros (quitosana e
amido de milho, por exemplo) foram conduzidos (Xu, 2004). Estas membranas
foram caracterizadas por FTIR e DRX, e foi possvel notar que houve uma forte
interao, tanto no que diz respeito a ligaes qumicas quanto a caractersticas
conformacionais (aumentando-se a quantidade de amido na mistura, maior o
carter amorfo da membrana) entre os dois polmeros. Testes de permeao de
vapor tambm foram realizados e notou-se que quanto maior a relao
amido/quitosana, menor o fluxo atravs da membrana.
Quitosana e alginato esto entre os biopolmeros utilizados para a produo

de membranas compostas, para a realizao de experimentos de pervaporao
(Moon, 1999). As membranas foram submetidas reticulao, e esta etapa se
mostrou uma boa alternativa para promover a adeso das duas camadas de
polmeros, e conseqentemente para proporcionar um fluxo de soluo satisfatrio
atravs da membrana.
Uma boa parte dos estudos de separao de misturas tem o seu foco
voltado para misturas de gua e lcoois por (pervaporao), e a capacidade de
-6-
Reviso Bibliogrfica
separao de misturas por membranas compostas por quitosana e alginato,

preparadas sobre um substrato de polmero sinttico, foi analisada (Kim, 2007). As
anlises realizadas mostraram que a seletividade e permeabilidade da membrana
dependem das caractersticas (tamanho da molcula, polaridade e superfcie
hidroflica) das molculas da soluo a ser permeada. Foram realizados ensaios
com solues aquosas e puras de metanol, propanol, isopropanol e terc-butil-
lcool, e no caso do metanol, o comportamento foi diferente, devido aos diferentes
tamanhos de cada molcula. Este trabalho interessante por mostrar atravs de
simulao molecular as interaes entre as molculas de quitosana e alginato, e
desta forma, explicar as diferenas no desempenho da membrana com diferentes
solues.
Alguns estudos, alm de utilizar polmeros naturais tentam tambm

combinar estes polmeros com outros polmeros sintticos, a fim de obter uma
membrana com alta performance, estabilidade e fluxo de soluo. A combinao
de quitosana e PTFE modificado, para utilizao em ensaios de desidratao de
uma soluo aquosa de isopropanol, um exemplo (Liu, 2007). Do PTFE obtm-
se boa resistncia trmica e mecnica, enquanto que da quitosana temos o bom
fluxo de permeado. O resultado uma membrana com grande fluxo de soluo e
boa seletividade, sendo assim adequada para separao de misturas
azeotrpicas.
3.2. MTODO layer-by-layer DE PRODUO DE

MEMBRANAS MULTICAMADAS
Nos ltimos anos, vrios estudos tm desenvolvido a tcnica layer-by-layer,

como um mtodo simples e verstil para produo de membranas multicamadas
(Decher, 2002). Os filmes orgnicos produzidos a partir desta tcnica tm
potencial aplicao em reas tais como sensores, coberturas redutoras de atrito,
tica, fabricao de dispositivos eletrnicos.
-7-
Reviso Bibliogrfica
O processo bsico envolve a imerso de um substrato, preferencialmente

carregado eletricamente, em uma soluo diluda de um polieletrlito de carga
oposta. A interao eletrosttica entre o substrato e o polieletrlito promover a
adsoro e a carga da superfcie do substrato ser invertida. O substrato, agora
com carga negativa, lavado para a retirada do excesso de polieletrlito e
mergulhado em outra soluo de polieletrlito, com carga oposta primeira
soluo. Assim, a carga inicial do substrato restabelecida, e tem-se a formao
de um filme com duas camadas de polieletrlitos sobre a superfcie do mesmo. A
repetio desta seqncia de processos de adsoro de polieletrlitos leva
formao de uma membrana multicamadas. A figura 3.3.1 ilustra o mtodo layer-
by-layer.
Figura 3.2.1. Mtodo layer-by-layer de produo de membranas multicamadas (figura adaptada de

Decher, 2002).
Este processo de construo de membranas multicamadas tem vrias

vantagens sobre outros mtodos: baseado em adsoro espontnea, o
substrato pode ter, a princpio, qualquer tamanho, forma, topografia ou topologia, e
no necessrio controle estequiomtrico para manter-se a funcionalidade da
membrana, uma vez que os defeitos no se propagam de uma camada para outra.
Alm disso, um mtodo extremamente simples, relativamente rpido,
-8-
Reviso Bibliogrfica
ambientalmente limpo, barato, e a funcionalidade da superfcie pode ser

controlada diretamente, ao se escolher os polieletrlitos apropriados (Chen, 1997).
3.3. QUITOSANA
A quitosana a forma desacetilada da quitina, o segundo polmero natural

mais abundante na natureza, depois da celulose, sendo que ambos possuem
estrutura molecular muito semelhante (Chu, 2002). Suas cadeias so basicamente
iguais, com uma diferena no grupo funcional ligado ao carbono 2: enquanto que
na celulose temos um grupo hidroxila, na quitina temos um grupo acetamido ligado
a esse tomo de carbono (Kurita, 2006).
Quitina (poli(N-acetil-D-glucosamina)) encontrada principalmente no reino

animal, como um composto de proteo e estrutural, constituinte de
exoesqueletos. Apesar da grande quantidade disponvel, e de ser encontrada
principalmente em invertebrados, a quitina uma substncia sem notveis
aplicaes biolgicas.
A opo encontrada para a utilizao da grande quantidade de quitina

disponvel a sua transformao em quitosana, atravs de desacetilao. Neste
processo, utiliza-se uma soluo 50% (w/w) de hidrxido de sdio e temperatura,
que pode variar de 120 a 150 oC. Com esse processo, consegue-se um grau de
desacetilao de 5 a 30%. Repetindo-se o processo possvel chegar maiores
graus de desacetilao (Kurita, 2006). A figura 3.3.1 mostra as cadeias de
celulose, quitina e quitosana.
A produo de quitina e quitosana atualmente baseia-se em cascas de

caranguejo e camaro que, por sua vez, so descartadas por empresas de
pescados, localizadas principalmente nos Estados Unidos e Japo. Alm destes
pases, outros, como Noruega, Chile e Mxico, por terem uma forte indstria
pesqueira, podem ser considerados potenciais fornecedores de material-prima
para a produo de quitosana. Para a produo de 1kg de quitosana, com grau de
-9-
Reviso Bibliogrfica
desacetilao de 70%, a partir de cascas de caranguejo, so necessrias 6,3kg de

cido clordrico, 1,8kg de hidrxido de sdio, 0,5t de gua para o processo e 0,9t
de gua de resfriamento (Kumar, 2000).
Figura 3.3.1: Estrutura molecular das cadeias de celulose, quitina e quitosana.
A quitosana tem como propriedades principais a no-toxicidade, boa

capacidade de formao de filmes e fibras, adsoro de ons metlicos, entre
outras. Alm disso, tem a vantagem de ser um material natural, biodegradvel e
no poluente. Assim, a quitosana tem sido largamente estudada para aplicao
nos mais diversos fins: purificao de gua, processamento de alimentos,
quelao de ons metlicos, agente de liberao controlada de frmacos,
membranas semipermeveis, produtos cosmticos e farmacuticos (Kumar,
2000).
- 10 -
Reviso Bibliogrfica
Na rea biomdica, a propriedade antibacteriana da quitosana tem sido

utilizada para inibio do crescimento de certas colnias de bactrias, entre elas
E. coli e S. aureus (Qi, 2004). Testes foram realizados com nanopartculas de
quitosana pura, e tambm com cobre adsorvido, e os resultados mostraram que a
quitosana, com ou sem cobre, uma tima substncia quando se deseja inibir o
crescimento de bactrias. Tal caracterstica pode ser til, por exemplo, para se
evitar rejeio quando realizada uma cirurgia de transplante de rgos.
A quitosana tambm tem sido utilizada na rea de liberao controlada de

frmacos (Mladenovska, 2007), onde se necessrio liberar tal substncia a uma
taxa controlada, e tambm em local especfico. Neste estudo, a quitosana foi
utilizada em associao com o alginato, onde foram produzidas micropartculas
atravs de spray-drying, e as anlises realizadas mostraram que a interao entre
a quitosana e o frmaco eletrosttica, dessa forma, no modificando a estrutura
do mesmo. Ainda foi possvel concluir que as micropartculas produzidas tinham
grande tendncia a adeso mucosa intestinal, que justamente onde se deseja
liberar o frmaco.
Atualmente, a maioria das embalagens de alimentos disponveis no

mercado feita de polmeros sintticos, derivados do petrleo. Esses polmeros
no so biodegradveis, contribuindo assim para a poluio e aumento de lixo no
meio ambiente. A biodegradabilidade da quitosana faz com que esta possa ser
utilizada tambm nesta rea, como uma alternativa para produo de embalagens
biodegradveis (Srinivasa, 2007).
Alm disso, a quitosana tambm pode ser utilizada sob a forma de filmes
finos, que aplicados sobre a superfcie do alimento, aumenta o tempo de validade
do mesmo, antes que ocorra oxidao (escurecimento). Ela pode funcionar
tambm como agente clarificante e deacidificante de frutas e bebidas, controlador
de texturas, estabilizante de colorao, prolongador de sabor, entre outras
aplicaes (Shahidi, 1999).
Uma propriedade notvel da quitosana ser um timo agente quelante e de

soro de ons de metais pesados. Isso faz com que a quitosana possa ser
- 11 -
Reviso Bibliogrfica
utilizada no tratamento de gua, removendo ons metlicos, tais como cobre, zinco
e mercrio, entre outros (Kaminski, 2008).
A quitosana tambm utilizada para a adsoro de molculas maiores,

como por exemplo, corantes utilizados na indstria txtil (Wong, 2008). Nesse
caso, nota-se que a capacidade de adsoro das molculas pela quitosana est
relacionada heterogeneidade dos grupos funcionais ligados cadeia principal e,
portanto, ao grau de desacetilao. Ao se aumentar o grau de desacetilao, o
desempenho da quitosana diminui, uma vez que a uniformidade dos grupos
ligados cadeia principal aumenta (maior quantidade de grupos amino).
3.4. ALGINATO
O alginato um polissacardeo encontrado em grandes propores em

algas marrons, principalmente dos gneros Macrocystis, Laminaria e Ascophyllum.
parte constituinte das paredes celulares e do material intracelular destas, em
geral associado a ons metlicos como clcio, magnsio, estrncio e brio
(Dimitriu, 2005).
Quimicamente, o alginato um copolmero formado por cido -D-

manurnico e -L-gulurnico. A proporo dos dois cidos na cadeia polimrica
varivel e pode depender da espcie da qual se extrai o alginato, e at mesmo do
local e da poca em que o alginato foi extrado. A figura 3.4.1 mostra a estrutura
qumica dos dois cidos que compem uma molcula de alginato.
Praticamente todo o alginato produzido hoje extrado de algas da

natureza, pois o cultivo dessas espcies muito caro e impediria que o alginato
fosse utilizado na indstria, devido ao alto preo do produto final.
Aproximadamente 40.000 toneladas de alginato so produzidas por ano.
- 12 -
Reviso Bibliogrfica
Figura 3.4.1: Representao das molculas dos cidos que compem o alginato.
O processo de produo do alginato comea com o processamento das

algas, e subseqente reao com carbonato de sdio. O meio reacional filtrado
e cloreto de sdio ou de clcio adicionado ao lquido resultante, formando-se
assim, fibras de alginato de sdio ou clcio, que precipitam. Aps vrias etapas de
purificao, o sal de alginato est pronto para uso (Rinaudo, 2008).
As caractersticas qumicas e fsicas do alginato variam muito de acordo

com a proporo entre os dois cidos que o constituem, influenciando, por
exemplo, em sua resistncia mecnica e na tendncia de formar filmes (Rinaudo,
2008). Independente de sua composio, a propriedade mais importante do
alginato a sua capacidade de formao de gel, quando em contato com ons
metlicos divalentes. Nesse caso, sua interao com estes ons se d devido ao
cido -L-gulurnico (Phillips, 2000).
O gel de alginato tem como propriedade interessante ter sua formao

independente de temperatura, e isso faz com que o alginato possa ser utilizado na
maioria das vezes sob a forma de gel. No entanto, uma parte significativa das
aplicaes do alginato o utiliza na forma lquida, seja como aditivo para tintas, ou
em alimentos onde a viscosidade e a estabilizao de misturas, disperses e
emulses precisem ser melhoradas. Recentemente, descobriu-se que a molcula
de alginato, com toda sua variedade de composio qumica e peso molecular,
tem diferentes efeitos em sistemas biolgicos e proporciona diferentes
- 13 -
Reviso Bibliogrfica
propriedades em fase lquida, funo da proporo entre os seus dois cidos

componentes (Phillips, 2000).
Dentre as aplicaes na rea mdica, o alginato tem sido utilizado na

liberao controlada de frmacos, como, por exemplo, nifedipina (Ramesh Babu,
2007). Primeiramente, so produzidas microesferas de alginato, reticuladas com
glutaraldedo. Em seguida, o frmaco incorporado microesfera. Os resultados
mostraram que o frmaco se dispersou de forma uniforme na microesfera, e estas
permaneceram at 12 horas no organismo, liberando a nifedipina de forma
controlada.
Na mesma rea, o alginato tem sido utilizado tambm, como proteo para
ferimentos. So produzidas fibras com os sais de alginato e essas so aplicadas
sobre o ferimento, ajudando na cicatrizao e protegendo contra contaminaes.
Neste caso, as fibras tambm podem conter frmacos incorporados sua
estrutura (Qin, 2008).
Outra rea onde o alginato utilizado de forma extensa no campo

alimentcio. O alginato apresenta propriedades que possibilitam sua utilizao
como estabilizante, espessante e emulsificante, nos mais variados alimentos:
cerveja, sorvete, derivados de leite, pes, massas, etc. (Brownlee, 2005).
3.5. ASPECTOS GERAIS DO COBRE (PROCOBRE, 2007)
O cobre um material puro e natural. Segundo os historiadores, foi o

primeiro metal utilizado pelo homem, e seu descobrimento se d por volta de
13.000 AC., quando foi encontrado em sua forma pura. Posteriormente veio a
substituir a pedra como ferramenta de trabalho, e em sua evoluo foi utilizado em
armas, objetos de decorao e utenslios domsticos. Descobriram-se objetos

feitos em cobre na China, datadas por volta de 6.500 AC; e nas regies situadas
entre o rio Tigre e Eufrates, no Oriente Mdio. Seu uso se torna constante pelos
- 14 -
Reviso Bibliogrfica
sculos seguintes, marcando presena na evoluo tecnolgica do homem. As

propriedades fsicas e qumicas do cobre e seus derivados, como o bronze e o
lato, pela sua durabilidade e alta resistncia corroso, os tornaram de
significativa utilidade e funcionalidade. O uso do cobre se intensificou na Idade
Mdia, Revoluo Industrial, Idade Moderna, at os dias atuais. Sua real
contribuio para o desenvolvimento industrial se processou a partir de 1831,
quando Faraday descobriu o gerador eltrico. Mas j durante o sculo XIV, a
Inglaterra, como maior produtora de cobre, motivou a abertura de novas minas, o
que posteriormente ocorreu tambm nos EUA, Chile, frica do Sul, Canad e
Brasil (Bahia).
O cobre no magntico e pode ser utilizado puro ou em ligas com outros

metais que lhe conferem excelentes propriedades qumicas e fsicas. Pode ser
utilizado nas mais variadas reas, desde biologia, meio ambiente, energia,
metalurgia, entre outras.
O cobre, por exemplo, pode ser utilizado como agente sanificador,

garantindo a higiene, devido s suas propriedades antimicrobianas, funcionando
como agente esttico com uma eficcia ou taxa dependente das condies do
ambiente, a concentrao de ons de cobre e o tipo de microorganismos. De fato,
muitas espcies de bactrias indesejveis, mofo, algas e fungos so desativados,
e outros tm uma taxa de 0% de sobrevivncia. Esta propriedade apia o uso de
cobre como superfcie higinica.
A literatura cientfica cita a eficcia do cobre para inativar muitos tipos de

micrbios entre os quais se incluem:
a) fungos: Actinomucor elegans, Aspergillus nger, Penicillium

chrysogenum, Rhizopus niveus;
b) bactrias: Campylobacter jejuni, Proteus, Escherichia coli,

Staphylococcus aureus, Streptococcus grupo D, e Pseudomonas aeruginosa.
Bacterium linens, Bacillus megaterium, Bacillus subtilis, Brevibacterium
erythrogenes, Achromobacter fischeri, Photobacterium phosphoreum;
- 15 -
Reviso Bibliogrfica
c) leveduras: Candida utilis, Candida albicans, Saccharomyces

mandshuricus, Saccharomyces cerevisiae, Torulopsis utilis;
d) vrus: poliovrus, rotavrus.
Durante os ltimos anos, os estudos de eficcia antimicrobiana em

diferentes superfcies de contato demonstraram claramente que o cobre e certas
ligas de cobre deixam inativos vrios dos tipos mais potentes de micrbios. Os
mecanismos antimicrobianos do cobre so complexos e ocorrem em diferentes
formas, tanto dentro das clulas quanto nos espaos intersticiais entre as
mesmas. Um fator crtico responsvel pelas propriedades antimicrobianas do
cobre a capacidade deste metal de aceitar ou doar facilmente seus eltrons
devido sua alta oxidao cataltica e alto potencial de reduo. Isto faz com que
os ons de cobre alterem as protenas dentro das clulas dos micrbios para que
as estas j no possam realizar suas funes normais. Os cientistas tambm
observaram que o cobre responsvel por inibir o transporte eletrnico nas
interaes da parede celular, ligando o DNA e desordenando as estruturas
helicoidais.
Sob condies especficas, o cobre pode eliminar micrbios ou evitar seu

crescimento adicional. Sua eficcia e taxa de inatividade microbiana dependem da
temperatura, da umidade, da concentrao de ons de cobre e do tipo de
microorganismo com o qual est em contato. Sob condies timas, quando
estiveram em contato com o cobre, obtiveram-se taxas de sobrevida de 0% em
alguns micrbios.
Em conseqncia do anterior, o cobre um ingrediente ativo em diferentes

tipos de produtos antimicrobianos. Na agricultura, o sulfato de cobre, o cobre-8-
quinolato, o octoato de cobre, o xido de nanocobre e o arsenato de cobre
amoniacal so usados para combater fungos em lavouras e no tratamento de
produtos txteis e madeiras. Nos ambientes marinhos, as pinturas baseadas em
cobre e o revestimento de cobre nos barcos tm potentes propriedades
antiincrustaes.
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Reviso Bibliogrfica
Para os consumidores, o cobre um ingrediente ativo em enxges bucais,

creme dental e medicamentos. Estudos experimentais extensivos realizados
durante os ltimos anos confirmaram que o cobre e certas ligas de cobre deixam
os micrbios patognicos inativos ao contato, tanto a temperatura ambiente
quanto a temperaturas de esfriamento.
Nos edifcios modernos de hoje, a preocupao da exposio a

microorganismos txicos criou uma grande necessidade de se melhorar as
condies higinicas dos sistemas de ar condicionado, ventilao e aquecimento,
os quais se acreditam que so causadores de mais de 60% das enfermidades nos
edifcios (por exemplo, demonstrou-se que as palhetas de alumnio nos sistemas
de ar condicionado, ventilao e calefao so uma fonte importante de
populaes microbianas).
Nas pessoas imunocomprometidas, a exposio a potentes

microorganismos provenientes dos sistemas de ar condicionado, ventilao e
calefao pode causar infeces severas, possivelmente causando a morte. O uso
do cobre antimicrobiano em vez de materiais biologicamente inertes nos tubos do
trocador de calor, nas palhetas, nos filtros e nos dutos, um meio vivel e de
baixo custo, para ajudar a controlar o crescimento de bactrias e fungos que se
desenvolvem nestes sistemas.
No caso dos hospitais, prticas de higiene inadequadas causaram um

grande aumento na incidncia de infeces durante os ltimos 20 anos, apesar
dos significativos avanos no entendimento de como micrbios patognicos
causam enfermidades e mortes. A habilidade intrnseca do cobre para inativar
certas bactrias e o recente descobrimento de sua capacidade para inativar a
bactria MRSA (que chegou a ser a maior preocupao dos administradores de
sade em todo mundo), abre a possibilidade de que a substituio das superfcies
de contato com ligas de cobre nas instalaes de sade, em conjunto com boas
prticas higinicas, possam ajudar a reduzir a incidncia das infeces
microbianas oriundas de superfcies poludas.
- 17 -
Reviso Bibliogrfica
Os exemplos de produtos sanitrios que se beneficiariam das superfcies de

contato de ligas de cobre higinicas incluem as maanetas, ferrolhos de porta,
trilhos de cama, corrimo, torneiras, toalheiros, cadeiras de visita e tecidos
(uniformes, lenis, pijamas de pacientes), cabos de instrumentos, postes para
infuses endovenosas, e equipamentos de exerccios e reabilitao.
- 18 -
Materiais e Mtodos
CAPTULO 4
MATERIAIS E MTODOS
4.1. PREPARAO DA SOLUO DE QUITOSANA
Uma soluo 1% em massa foi preparada pela dissoluo de 5g de

quitosana extrada de casca de caranguejo (adquirida da Sigma EUA, com no
mnimo 85% de desacetilao), em 495ml de soluo actica 3% em massa. Os
flocos foram dispersos por agitao e mantidos por uma semana a 4oC para
completa solubilizao. A soluo viscosa foi filtrada a vcuo para remoo do
material insolvel, obtendo-se um filtrado lmpido e homogneo. Esta soluo foi
estocada sob refrigerao (5oC) em um frasco de polietileno para posterior
utilizao.
4.2. PREPARAO DA SOLUO DE ALGINATO
Uma soluo 1% em massa foi preparada pela dissoluo de 5g de alginato

de sdio (adquirido da Vetec), em 495ml de soluo 0,1M de hidrxido de sdio. A
mistura foi deixada em repouso por 4 dias, e aps esse tempo foi agitada para
homogeneizao e completa solubilizao. Obteve-se uma soluo lmpida e sem
partes insolveis, que foi estocada sob refrigerao em frasco de polietileno, para
posterior utilizao.
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Materiais e Mtodos
4.3. PREPARAO DAS MEMBRANAS
4.3.1. MEMBRANA DE QUITOSANA
A soluo de quitosana foi espalhada sobre placas de Petri e colocadas em

estufa a 50 3oC para evaporao do solvente, at que no mais se observasse
alterao na massa de quitosana, obtendo-se assim uma pelcula transparente e
com boa resistncia mecnica. Estas pelculas foram imersas em uma soluo de
NaOH 1M, a 25oC, por 24h, para neutralizao dos grupos amino da quitosana.
Em seguida foram lavadas com gua durante 10 minutos para a remoo do
NaOH, e estocadas em gua Milli-Q, a 5oC (Beppu, 1999).
4.3.2. MEMBRANA DE ALGINATO
A soluo de alginato foi espalhada sobre placas de Petri e estas colocadas

em estufa a 50 3oC para evaporao do solvente, at que no mais se
observasse alterao na massa de alginato, obtendo-se assim uma pelcula
opaca. Estas pelculas foram imersas em uma soluo de acido sulfrico 0,1M, em
gua e etanol 1:1 (v/v), a 25oC, por 24h, para neutralizao dos grupos hidroxila
do alginato. Em seguida, foram lavadas com gua para a remoo do acido
sulfrico e do etanol, e estocadas em gua Milli-Q, a 5oC.
4.3.3. MEMBRANA COMPOSTA
A produo da membrana composta de quitosana e alginato foi baseada no

mtodo layer-by-layer de produo de membranas multicamadas, com a diferena
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Materiais e Mtodos
de que neste caso cada camada de soluo polimrica foi obtida por
espalhamento da soluo em placa de Petri, na horizontal, e no por imerso na
posio vertical. Alm disso, as membranas produzidas tm maiores dimenses
na seo transversal (espessura e rea superficial) do que aquelas produzidas
pela tcnica layer-by-layer propriamente dita.
Assim como na tcnica layer-by-layer, a formao da membrana se deu

atravs da interao eletrosttica entre as cadeias polimricas: a quitosana se
comporta como um poliction, devido aos grupos amino, e o alginato se comporta
como um polinion, devido aos grupos hidroxila presentes (Simsek-Ege, 2003).
A produo das membranas iniciou-se com o espalhamento da soluo de

quitosana sobre a placa de Petri. Escolheu-se iniciar a produo da membrana
com a quitosana, por sabermos, de trabalhos anteriores, que este polmero possui
boa aderncia ao vidro. A quantidade utilizada foi suficiente para cobrir toda a
superfcie da placa com uma fina pelcula (12 ml para uma placa de 9 cm de
dimetro). Esta foi ento colocada em estufa a 50oC para evaporao do solvente.
A secagem foi interrompida antes que a pelcula formada se soltasse da placa,
pois tal ocorrncia no desejada, uma vez que impossibilitaria a deposio
satisfatria de outra camada polimrica. O controle do ponto timo da secagem foi
feito pesando-se a placa, e identificando-se, aproximadamente, qual era o ponto
ideal de interrupo da secagem.
Em seguida, espalhou-se a soluo de alginato sobre a camada de

quitosana seca, tambm em quantidade suficiente para se cobrir a placa com uma
fina camada de soluo (10 ml para uma placa de 9 cm de dimetro). A placa foi
novamente levada estufa para evaporao do solvente, e da mesma forma a
secagem foi interrompida antes da membrana se soltar da placa.
Aps a secagem da camada de alginato temos a formao de uma

bicamada (uma camada de cada polmero). Em nosso estudo foram produzidas
membranas com 2 e 4 bicamadas. As membranas prontas foram colocadas em
uma soluo de cido sulfrico 0,1M, em soluo gua e etanol 1:1 (v/v), por 24h,
para neutralizao dos grupos funcionais. A membrana neutralizada foi lavada
- 21 -
Materiais e Mtodos
com gua para remoo de resduos, e armazenada em gua Milli-Q sob

refrigerao. As quantidades subseqentes de soluo de quitosana e alginato
foram de 10 ml.
4.4. INCORPORAO DE COBRE S MEMBRANAS
Foi preparada uma soluo de cobre 1000ppm, atravs da dissoluo de

0,5 g de sulfato de cobre em 500 ml de gua Milli-Q. Esta soluo foi usada para
incorporar o cobre s membranas. O processo de incorporao de cobre s
membranas foi realizado atravs da imerso das membranas na soluo de cobre,
por 48 h. O cobre foi incorporado s membranas compostas, de quitosana e de
alginato.
Trabalhos anteriores neste grupo de pesquisa mostraram que o cobre um

metal com grande capacidade de interao com polmeros naturais (Beppu, 2004;
Vieira, 2008), cuja dessoro no ocorre facilmente com eluentes comuns. Alm
disso, o cobre, com o seu histrico de utilizao desde tempos mais antigos
(PROCOBRE, 2007), pode ser um agente bacteriosttico menos nocivo sade
humana, em comparao a outros metais utilizados para este fim, como por
exemplo, sais de prata.
4.5. CARACTERIZAO DAS MEMBRANAS
As membranas obtidas foram caracterizadas por MEV (microscopia

eletrnica de varredura), EDX (espectroscopia de energia dispersiva de Raios-X),
DRX (difrao de Raios-X), FTIR-ATR (espectroscopia de infravermelho por
transformada de Fourier, utilizando-se o aparato de reflexo total atenuada) e
EXAFS (estrutura fina estendida de absoro de Raios-X). Alm destas
- 22 -
Materiais e Mtodos
caracterizaes, foram realizados tambm ensaios de difuso de ons e testes de

capacidade bacteriosttica.
4.5.1. MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA (MEV)
No presente trabalho, as amostras foram congeladas com nitrognio

lquido, para a produo de criofraturas, de forma a analisarmos a seo
transversal das mesmas. Aps esta etapa, procedeu-se com o recobrimento com
carbono. Foi utilizada, para observao, uma tenso de 20kV, e a microscopia foi
realizada utilizando um microscpio Leica, modelo Leo440i, do Laboratrio de
Recursos Analticos e de Calibrao (LRAC) da FEQ/UNICAMP.
4.5.2. ESPECTROSCOPIA DE ENERGIA DISPERSIVA DE

RAIOS-X (EDX)
Utilizou-se a tcnica de EDX para fazer o mapeamento dos elementos

cobre nas membranas produzidas, aps a etapa de incorporao do cobre s
mesmas. O mapeamento foi feito no Laboratrio de Recursos Analticos e de
Calibrao (LRAC) da FEQ/UNICAMP, no microscpio eletrnico de varredura da
Leica, modelo Leo440i com detector de EDX da Oxford modelo 7060 (Goldstein,
1992). Os parmetros para anlise foram 20kV de tenso, para um tempo de
mapeamento de 10 minutos.
4.5.3. DIFRAO DE RAIOS-X (XRD)
Para a realizao das anlises de difrao de Raios-X foi utilizado o

equipamento X-Ray Diffractometer da Rigaku, da Faculdade de Engenharia
- 23 -
Materiais e Mtodos
Mecnica FEM/UNICAMP. A anlise foi feita usando-se radiao CuK1 =

0,1542nm, 40kV, 40mA. As varreduras foram feitas em intervalos 2 variando de
5o a 90o, com uma velocidade de varredura de 0,5 grau 2/min.
4.5.4. ESPECTROSCOPIA DE INFRAVERMELHO POR

TRANSFORMADA DE FOURIER (FTIR)
A absoro de radiaes eletromagnticas por parte de tomos ou

molculas exige que estas apresentem energia apropriada e que haja um
mecanismo de interao que permita a transferncia de energia. O mecanismo
apropriado excitao vibracional proporcionado pela variao peridica de
dipolos eltricos na molcula durante as vibraes; a transferncia de energia
ocorre, ento, por interao destes dipolos oscilatrios com o campo eltrico
oscilatrio da luz (radiao infravermelha) desde que a freqncia com que ambos
variam seja a mesma.
No espectro de infravermelho habitual, ao invs de se representar

absorbncia como nos espectros de ultravioleta e visvel, traar a percentagem de
luz transmitida em funo do comprimento de onda (ou, do nmero de ondas por
cm).
O espectro infravermelho de polmeros pode ser considerado simples

levando-se em considerao o grande nmero de tomos envolvidos (Billmeyer,
1984). A anlise vibracional de polmeros fornece informaes sobre trs
importantes caractersticas estruturais:
A composio qumica;
A estrutura configuracional e conformacional;
As foras interatmicas associadas s ligaes de valncia ou interaes
intermoleculares.
- 24 -
Materiais e Mtodos
Devido sua praticidade, o infravermelho a ferramenta espectroscpica

preferida na caracterizao de polmeros e biopolmeros (Kroschwittz, 1985). As
amostras podem ser preparadas de diversas maneiras (pastilhas, filmes, fitas,
etc.). Os dados obtidos podem ser tratados com subtrao, adio, anlise de
fatores, deconvoluo espectral e podem ser usados quantitativamente (Koenig,
1979).
No presente trabalho, foram realizadas anlises FTIR das membranas

produzidas, com e sem cobre. Alm disso, o aparato de ATR (attenuated total
reflection reflexo total atenuada), de cristal de germnio foi utilizado em
conjunto com o espectrmetro de infravermelho da Nicolet, modelo Proteg 460.
Todas as anlises das membranas foram realizadas do lado que estava em
contato com o ar, quando da produo das mesmas.
4.5.5. ESTRUTURA FINA ESTENDIDA DE ABSORO DE

RAIOS-X (EXAFS) (Mazali, 1998)
Atualmente, a espectroscopia de absoro de raios X tem sido vastamente

utilizada em diversas reas, principalmente na qumica do estado slido, na
cincia dos materiais, catlise, na qumica bio-inorgnica, alm de outras reas
que atuam em sistemas desordenados, como em vidros e lquidos.
Um espectro de absoro de raios X (XAS) fornece informaes a respeito

das transies eletrnicas nos nveis mais internos de um tomo, sendo que o
processo bsico consiste na excitao dos eltrons localizados em nveis 1s ou 2p
atravs da absoro de raios X.
O espectro ilustrado na Figura 4.5.5.1, pode ser descrito dividindo-o em trs

regies principais:
- 25 -
Materiais e Mtodos
regio de pr-borda (pre-edge): refere-se a transies eletrnicas com

absoro de energia menor que a energia de ligao, as quais ocorrem
apenas quando o tomo absorvedor possui estados desocupados ou
parcialmente desocupados. Tais transies tm poucas probabilidades e,
portanto, produzem somente pequenas oscilaes no espectro de
absoro. A posio exata do pico depende de detalhes de estado de
oxidao, stio de simetria e da natureza da ligao;
borda de absoro (egde): regio caracterizada pelo aumento abrupto da
absoro quando a energia absorvida suficiente para retirar eltrons do
tomo absorvedor;
transies para o estado do contnuo: correspondem a absoro de
energias maiores que a energia de ligao, ocorrendo transies para o
estado do contnuo, no localizados no tomo absorvedor e o excesso de
energia carregado pelo fotoeltron na forma de energia cintica. Esta
regio subdividida em:
o regio de XANES (X-ray absorption near edge structure): est
compreendida na faixa de at 50 eV acima da borda de absoro, a
qual apresenta variaes estreitas e intensas da absoro. O
espectro XANES trabalha na regio onde o comprimento de onda do
fotoeltron da ordem das distncias interatmicas e, portanto, o
seu livre caminho mdio longo o suficiente para que possam
ocorrer espalhamentos mltiplos antes que ele retorne ao tomo
central. Dessa maneira, o espectro XANES envolve espalhamentos
mltiplos e transies para nveis desocupados, sendo rico em
informaes cristaloqumicas do tomo absorvedor, como o estado
de oxidao, a densidade de estados desocupados e a estrutura
cristalina em que est inserido o tomo absorvedor.
o regio de EXAFS (Extended X-ray absorption fine structure): a
absoro de energia ocorre na faixa de 50 a 1000 eV acima da borda
de absoro e apresenta oscilaes mais suaves na absoro. No
espectro EXAFS esto envolvidos apenas dois tomos, um
- 26 -
Materiais e Mtodos
absorvedor e outro retroespalhador, ocorrendo o chamado

espalhamento simples, sendo possvel obter informaes a respeito
da distncia e do nmero de vizinhos ao redor do tomo central.
Nesta regio, o caminho livre mdio do fotoeltron curto e os
espalhamentos mltiplos se tornam improvveis.
Figura 4.5.5.1: Representao esquemtica do espectro de absoro de Raios-X e das transies

eletrnicas que correspondem s caractersticas bsicas do espectro.
Basicamente, o processo fsico que envolve as oscilaes de absoro na

regio de EXAFS a interferncia entre a onda emitida pelo tomo emissor e a
onda retroespalhada pelo tomo vizinho. As modulaes no coeficiente de
absoro surgem ao considerarmos uma molcula diatmica AB. O fotoeltron
emitido por A suficientemente rpido para ser tratado como um eltron livre e
sua funo de onda pode ser considerada como uma onda quase plana. Quando
atinge o potencial do tomo vizinho B, a onda espalhada em todas as direes
com uma amplitude f(,k), a qual depende da direo e da energia cintica do
eltron. A onda retroespalhada (=) retorna ao tomo absorvedor A com uma
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Materiais e Mtodos
diferena de fase total dada pelo caminho ptico percorrido at B (ida e volta),
mais uma diferena de fase causada por atravessar duas vezes o potencial do
tomo central A.
As oscilaes observadas no espectro de absoro resultam da

interferncia (construtiva e destrutiva) entre a onda emitida e a onda
retroespalhada, medida na posio do tomo emissor. As oscilaes (k)
produzidas pelas diferentes camadas atmicas em torno do tomo absorvedor
somam-se para produzir o sinal total de EXAFS. De acordo com a aproximao de
ondas planas, a expresso geral, vlida para a excitao de estados de simetria s
(isto , borda K de absoro) e para sistemas orientados aleatoriamente no
espao, a seguinte:
Onde: o - absoro do tomo absorvedor isolado;
- coeficiente de absoro atmico para uma energia E;
k - vetor de onda do fotoeltron, dado por: , sendo
m a massa do eltron e h a constante de Planck. O valor E0 corresponde origem

da energia cintica do eltron, a qual prxima da energia da borda de absoro,
mas no necessariamente coincide com esse valor. E a energia do fotoeltron
incidente;
- defasagem total produzida no processo de retroespalhamento: =

2(k) + (k), sendo a defasagem devida ao tomo absorvedor e a defasagem
devida ao tomo vizinho;
R: a distncia do tomo absorvedor ao tomo retroespalhador;
f(,k) : amplitude do retroespalhamento;
N: nmero de tomos vizinhos
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Materiais e Mtodos
As oscilaes (k) carregam informaes a respeito da ordem local ao redor

do tomo absorvedor, como o nmero de coordenao e distncia aos vizinhos
nas camadas mais prximas.
Podemos enumerar algumas caractersticas da espectroscopia de absoro

de raios X que a tornam uma ferramenta nica para estudos estruturais:
A energia de ligao dos eltrons mais internos caracterstica de

cada tomo e, portanto, XAS (XANES e EXAFS) uma tcnica que
possui seletividade atmica, desde que se disponha de uma fonte de
raios X sintonizvel em energia, o que possvel com fontes de luz
sncrotron;
XAS testa apenas a estrutura na vizinhana em torno do tomo
excitado, isto , o ordenamento a curto alcance;
possvel estudar a estrutura local em torno de tomos em uma
matriz, mesmo que este se encontre em concentraes muito baixas;
Devido ao seu carter local, o formalismo do retroespalhamento
aplicvel tanto para materiais no estado gasoso quanto para matria
condensada, esteja ela no estado lquido, vtreo ou cristalino.
A coleta de dados na espectroscopia EXAFS realizada por dois modos

principais: transmisso e fluorescncia. Um dos fatores de escolha a
concentrao do elemento a ser sondado na amostra e a possibilidade de se obter
filmes finos. O modo de transmisso mais utilizado para amostras concentradas
enquanto a fluorescncia, para amostras diludas ou extremamente finas. O efeito
de espessura a fonte mais comum de impreciso em medidas de EXAFS, sendo
a espessura tima em torno de 2,55mm. Um esquema da montagem de uma linha
EXAFS est ilustrado na Figura 4.5.5.2.
- 29 -
Materiais e Mtodos
Figura 4.5.5.2: Esquema de montagem da linha de EXAFS.
Em nosso trabalho, a tcnica de EXAFS foi utilizada para entendermos

como o cobre se liga s cadeias polimricas de quitosana e alginato, obtendo-se
informaes sobre distncia de ligao, e a quais tomos da cadeia o cobre se
liga. As medidas foram realizadas na linha de luz D04B - XAS do Laboratrio
Nacional de Luz Sncrotron (LNLS), com as seguintes especificaes tcnicas:
Fonte de luz: im defletor D04B (15), y = 0,222mm; Feixes na amostra
(dimenses e fluxo): vertical : 0,5 - 1,5 mm e horizontal : 1,0 - 10,0 mm, Fluxo na
amostra: 3 x 109 ftons/(s.mrad.100mA) 6 keV; Monocromador: cristal sulcado de
silcio Si(111) (2d = 6,271 ): 3 000 - 12 000 eV, Si(220) (2d = 3,840 ): 5 000 - 24
000 eV; Resoluo em energia (E/_ E): 5.000 - 10.000; Detectores: cmaras de
ionizao, detector de eltrons em atmosfera de He, cintilador para altas
contagens, detector de estado slido Si(Li), detector de estado slido Ge (15
elementos);
4.5.6. DIFUSO DE ONS
A fim de que fosse possvel se observar diferenas entre as membranas

produzidas, com e sem cobre, foram realizados ensaios de difuso de ons. Para
tanto, utilizou-se uma clula de difuso (Figura 4.5.6.1), acoplada a um sistema
que consistia em uma bomba peristltica e um medidor de condutividade (Figura
- 30 -
Materiais e Mtodos
4.5.6.2). A difuso de ons pode ser medida atravs da medida da concentrao

destes nos dois compartimentos da clula em funo do tempo, sendo que entre
os dois compartimentos coloca-se a membrana, a qual se deseja medir a
difusividade.
Para tanto, foi feita uma curva de calibrao de condutividade versus

concentrao para cada soluo salina usada. Utilizamos a bomba peristltica, e o
condutivmetro e o software da BioRad Biologic Controller e Workstation para
medir a condutividade da soluo no compartimento onde se injetava gua
ultrapura Millli-Q, A quantidade de sal no outro compartimento era ento
calculada a partir de um balano de massa, desprezando-se a membrana como
fase participante do equilbrio inico .
Os termos geomtricos da clula podem ser agrupados em uma constante

denominada constante da clula:
Onde: A rea de transferncia;
V1, V2 volume de soluo em cada um dos compartimentos.
Figura 4.5.6.1. Esquema da clula de difuso.
- 31 -
Materiais e Mtodos
Figura 4.5.6.2. Montagem do sistema de difuso de ons.
Atravs do balano de massa e da equao de Fick, chega-se equao

que relaciona as concentraes iniciais e finais em relao ao tempo:
Onde: C concentrao final ou inicial nos compartimentos;
L espessura da membrana;
D coeficiente de difuso;
t tempo de difuso;
constante da clula.
Atravs das equaes acima, torna-se possvel obter D para cada

membrana. O experimento foi realizado com cloreto de sdio 1M, para cada um
dos tipos de membranas obtidas. De trabalhos anteriores neste grupo de
pesquisa, sabemos que o cobre incorporado s membranas no possui tendncia
de ser liberado para a soluo salina (Beppu, 2004; Vieira, 2008). Assim, o
experimento de difuso de ons no corre, a princpio, o risco de ter os seus
- 32 -
Materiais e Mtodos
resultados influenciados pela liberao de cobre, anteriormente incorporado

membrana, para a soluo salina.
4.6. AVALIAO DA CAPACIDADE BACTERIOSTTICA
Grande quantidade de tcnicas de laboratrio tm sido usadas para medir a

susceptibilidade de uma bactria a agentes antimicrobianos. Estas incluem difuso
em disco e diluio em gar, entre outras.
Testes de susceptibilidade so indicados em dois casos: o primeiro, quando

a vulnerabilidade de uma bactria a um determinado agente no conhecida,
mais freqentemente quando esta bactria de uma espcie capaz de possuir
mecanismos de resistncia, produzindo substncias que inativam os agentes
antimicrobianos, por exemplo.
O segundo caso se d quando se deseja testar um novo produto, a fim de

se avaliar sua capacidade antimicrobiana. Ao pesquisar a atividade antimicrobiana
de um produto desconhecido, o ensaio geralmente realizado em 3 etapas: 1)
atividade inibitria; 2) determinao de MIC (Concentrao Inibitria Mnima) e
CMM (Concentrao Microbicida Mnima); e 3) Time-Kill (determinao de Valor
D, teste de reduo decimal ou curva de morte microbiana) (Block, 2001).
A atividade inibitria, que o primeiro ensaio realizado, medida pela

capacidade do produto em inibir o crescimento microbiano. Para os produtos
slidos, utilizada a tcnica do halo de inibio, e em produtos lquidos miscveis
em gua, utilizada a tcnica da diluio seriada em tubos, denominada MIC.
Esta metodologia seguida pelas Farmacopias (Americana, Brasileira, Europia,
etc.) e pelo NCCLS (2003), sendo utilizada para a avaliao de antibiticos e
produtos que controlam o crescimento microbiano.
- 33 -
Materiais e Mtodos
Produtos slidos, em gel, ou insolveis em gua so avaliados pela tcnica

de halo de inibio, que pode ser realizada sobre corpos de prova ou em poos
em gar, sendo o mtodo atestado pelo INCQS Fiocruz.
O segundo mtodo permite determinar o tempo de contato e reduo

decimal, e conhecido como Teste em Suspenso, Teste de Reduo Decimal ou
Time-Kill Test (Block, 2001).
Para o presente trabalho, foram preparadas amostras com as membranas

de quitosana, alginato e composta, com e sem cobre. Utilizando a tcnica do halo
de concentrao inibitria, conforme preconizado pelo INCQS (1988), as amostras
foram caracterizadas quanto atividade antimicrobiana. A ausncia de
crescimento sobre o corpo de prova indica presena de atividade inibitria. A
formao de halos de inibio indica que o agente antimicrobiano pode migrar
atravs do meio de cultura, inibindo o crescimento microbiano nesta regio.
As amostras foram depositadas sobre meio solidificado, inoculado com os

microrganismos teste. A incubao das placas foi realizada a 32oC por 48 horas.
Foram utilizados um representante das bactrias Gram-Negativas (Escherichia
coli) e outro representante das bactrias Gram-positivas (Staphylococcus aureus).
- 34 -
Resultados e Discusso
CAPTULO 5
RESULTADOS E DISCUSSO
5.1. PREPARAO DAS MEMBRANAS
Neste trabalho foram produzidos 4 tipos diferentes de membranas:
Membrana de quitosana;
Membrana de alginato;
Membrana com 2 bicamadas quitosana-alginato;
Membrana com 4 bicamadas quitosana-alginato.
Todas as membranas foram produzidas seguindo-se o mesmo

procedimento, de evaporao do solvente (casting), seguida por uma etapa de
neutralizao, conforme j descrito anteriormente.
Tanto a membrana de quitosana quanto a membrana de alginato foram

produzidas utilizando-se o mesmo volume inicial de soluo polimrica. As
membranas de quitosana, aps a etapa de neutralizao se mostraram resistentes
do ponto de vista mecnico, podendo ser manuseadas sem problemas. As
membranas de alginato, antes da neutralizao, se apresentavam quebradias, de
forma que no era possvel retir-las da placa de Petri. Aps a neutralizao, a
membrana de alginato se mostrou estvel, insolvel em gua, mas com uma
resistncia mecnica baixa.
Tambm interessante notar que apesar do volume de soluo utilizado

ser o mesmo, com a mesma concentrao, a espessura das membranas
resultantes foi diferente. As membranas de quitosana apresentaram espessura de
0,1 0,01 mm, e as membranas de alginato, espessura de 0,07 0,01 mm.
- 35 -
As membranas compostas foram produzidas de acordo com o que j foi

descrito anteriormente. A criticidade na produo destas membranas est na
determinao do ponto timo de secagem, quando a deposio de uma nova
camada polimrica ser promovida. No desejado que a camada polimrica
anterior deposio esteja completamente seca, uma vez que este fato provocar
deformao na membrana e o desprendimento da placa de Petri. Assim, a
determinao do ponto timo foi feita atravs de controle do peso da placa com
soluo polimrica. Este controle garantiu que a quantidade de solvente
evaporada fosse a ideal, para que nova camada de soluo polimrica pudesse
ser adicionada, sem causar deformaes ou perda da membrana.
A quantidade de soluo polimrica utilizada para cada camada foi igual

para cada polmero, mas variou entre a primeira bicamada e as demais. Na
primeira camada de quitosana foi preciso utilizar um volume 20% maior de
soluo.
Tal fato pode ser explicado, j que a primeira camada colocada

diretamente sobre a placa e a interao entre o polmero do qual a placa feita e
a soluo polimrica (no caso, a quitosana) deve ser menor do que a interao
entre os polmeros quitosana e alginato. Essa interao est relacionada s
cargas disponveis em cada um dos polmeros, j que a quitosana tem
disponibilidade de cargas positivas, e o alginato tem disponibilidade de cargas
negativas, nas solues em seus pH`s utilizados (Simsek-Ege, 2003).
A deposio de camadas consecutivas, umas sobre as outras, proporciona a

formao de uma membrana espessa e rgida, com grande resistncia mecnica.
Aps a neutralizao, a membrana se torna mais malevel, mas sua resistncia
mecnica permaneceu inalterada. A membrana de 2 bicamadas apresentou
espessura de 0,23 0,01 mm, enquanto que a de 4 bicamadas apresentou
espessura de 0,37 0,01 mm. Tais medidas foram obtidas atravs do clculo da
mdia aritmtica de cinco medidas realizadas em pontos diferentes de cada
amostra, mida, utilizando-se um micrmetro Mitutoyo, srie 103.
- 36 -
Cada membrana se comportou de forma diferente, aps a incorporao de

cobre: as membranas de quitosana ficaram menos flexveis., enquanto que as
membranas de alginato apresentaram um aumento na resistncia mecnica ao
manuseio. A espessura de todas as membranas (incluindo as multicamadas),
diminuiu com a incorporao do cobre.
5.2. MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA
A morfologia das membranas produzidas, com ou sem incorporao de

cobre, pode ser analisada por microscopia eletrnica de varredura. Foram
realizadas micrografias das superfcies e tambm de criofraturas produzidas nas
membranas. A superfcie das membranas no forneceu nenhuma informao
relevante, ao contrrio das superfcies de fraturas.
As membranas de quitosana com e sem cobre, no apresentaram

diferenas que pudessem ser observadas por MEV. No caso das membranas de
alginato, as micrografias mostram que a membrana com cobre possui morfologia
diferente daquela sem o metal. Observa-se uma grande quantidade de poros
formados na superfcie da membrana, aps a adio de cobre (Figura 5.2.1). A
formao destes poros se d devido ao rearranjo das cadeias de alginato, ao
entrar em contato e interagir com os tomos de cobre. Este comportamento do
alginato quando em contato com ons divalentes conhecido como efeito egg-
box (Phillips, 2000).
Observou-se tambm a formao das membranas compostas, com

camadas bem definidas de quitosana e alginato, tanto para a membrana com duas
ou quatro bicamadas. Alm disso, pode-se observar tambm, que mesmo sendo
utilizado o mesmo volume de polmero para cada camada da membrana
composta, a espessura das mesmas diferente, dependendo do polmero. As
camadas de quitosana so mais espessas que as camadas de alginato (Figura
- 37 -
5.2.2), por causa da diferena de densidade entre as solues; a soluo de

quitosana tem densidade maior do que a soluo de alginato.
Figura 5.2.1. Micrografia da superfcie e superfcie de fratura da membrana de alginato sem cobre
(a) e com cobre (b).
Figura 5.2.2. Micrografia da superfcie de fratura da membrana de 2 bicamadas (a) e 4 bicamadas

(b) de quitosana e alginato.
5.3. ESPECTROSCOPIA DE ENERGIA DISPERSIVA DE

RAIOS-X (EDX)
- 38 -
Utilizando-se a tcnica de EDX, foi possvel fazer um mapeamento dos ons

de cobre adsorvidos s membranas, tanto na superfcie quanto em suas sees
transversais. Inicialmente, utilizando a microscopia eletrnica de varredura, foram
obtidas as imagens, e com o analisador de Raios-X, pde-se mostrar como os
ons esto distribudos, no campo correspondente. As figuras 5.3.1 (a), (b) e 5.3.2
(a), (b) mostram a micrografia obtida utilizando-se detector de eltrons
secundrios e o mapeamento utilizando Raios-X, em quitosana e alginato,
respectivamente. Podese observar que a distribuio do cobre em ambas as
membranas uniforme.
Figura 5.3.1. Micrografia da superfcie da membrana de quitosana (a) e mapeamento de ons cobre
correspondente (b).
Figura 5.3.2. Micrografia da superfcie da membrana de alginato (a) e mapeamento de ons cobre
correspondente (b).
- 39 -
As figuras 5.3.3 (a), (b) e 5.3.4 (a), (b) mostram a micrografia obtida e o
mapeamento para as membranas de 2 e 4 bicamadas, respectivamente.
Observou-se que no caso das membranas compostas, o cobre se encontra em
maior quantidade nas camadas de alginato. Comparando-se com este, a
quitosana apresenta uma quantidade de cobre bem menor.
Figura 5.3.3. Micrografia da superfcie de fratura da membrana de 2 bicamadas (a) e mapeamento

de ons cobre correspondente (b).
Figura 5.3.4. Micrografia da superfcie da fratura da membrana de 4 bicamadas (a) e mapeamento

de ons cobre correspondente (b).
- 40 -
5.4. DIFRAO DE RAIOS-X
A caracterizao por difrao de Raios-X foi realizada para todas as

membranas, com e sem cobre. Em geral, polmeros possuem carter
predominantemente amorfo, e desta forma no esperado que seus
difratogramas sejam semelhantes a de outros compostos cristalinos e inorgnicos,
com picos bem definidos.
No entanto, a anlise de DRX das membranas produzidas mostra a

presena de halos, seja na amostras com ou sem cobre. Por exemplo, nas
membranas de quitosana sem cobre, pode-se identificar halos principais
localizados em 2 = 11o e 20o, e halos menores em 2 = 32o e 44o. Na membrana
sem cobre, estes halos desaparecem, e os dois primeiros esto presentes
novamente, porm com intensidade bem menor (Figura 5.4.1).
Figura 5.4.1. Difratograma da membrana de quitosana com (a) e sem cobre (b).
- 41 -
Na membrana de alginato sem cobre, temos presena de halos em 2 =

15, 21 e 39. Na membrana com cobre, os halos continuam presentes, mas
ocorre uma diminuio significativa na intensidade destes picos (Figura 5.4.2).
Nas membranas compostas, o mesmo comportamento observado nas

membranas de quitosana e alginato se repetiu. Na membrana de 2 bicamadas
sem cobre, h a presena de halos em 2 = 11, 15, 19, 24 e 36, enquanto que
na membrana com cobre, os mesmos halos esto presentes, mas com
intensidades bem menores, de forma que o pico em 2 = 11 se torna
imperceptvel (Figura 5.4.3). Na membrana com 4 bicamadas, sem cobre,
notamos halos em 2 = 13, 20 e 28, e na membrana com cobre, os halos
citados ocorrem com menor intensidade (Figura 5.4.4). As distncias
interplanares, em angstrom (), relativas aos halos encontrados em cada
membrana esto na tabela 5.4.1. Estas distncias foram calculadas pela equao
de Bragg (n=2dsen, onde d a distncia interplanar, o comprimento de onda
do feixe de Raios-X, igual a 1,54 ).
Figura 5.4.2. Difratograma da membrana de alginato com (a) e sem cobre (b).
- 42 -
Figura 5.4.3. Difratograma da membrana de 2 bicamadas quitosana-alginato com (a) e sem cobre
(b).
Figura 5.4.4. Difratograma da membrana de 4 bicamadas quitosana-alginato com (a) e sem cobre
(b).
- 43 -
Tabela 5.4.1. Distncias interplanares relacionadas aos halos cristalinos das membranas
QUITOSANA ALGINATO
SEM COBRE COM COBRE SEM COBRE COM COBRE
2 d () 2 d () 2 d () 2 d ()
11 8,04 11 8,04 15 5,90 15 5,90
20 4,43 20 4,43 21 4,23 21 4,23
32 2,79 39 2,31 39 2,31
44 2,06
2 BICAMADAS 4 BICAMADAS
SEM COBRE COM COBRE SEM COBRE COM COBRE
2 d () 2 d () 2 d () 2 d ()
11 8,04 15 5,90 13 6,80 13 6,80
15 5,90 19 4,67 20 4,43 20 4,43
19 4,67 24 28 3,18 28 3,18
24 3,70 36
36 2,50
Em todas as membranas, a adio de cobre fez a intensidade dos halos

diminuir, mas no proporciona a formao de novos halos. Isto mostra que a
incorporao de cobre diminui o carter cristalino das amostras, provavelmente
localizando-se entre as cadeias polimricas, ligando-se aos grupos funcionais da
quitosana e do alginato, e assim provocando maior desordem entre as cadeias
dos polmeros. Vale ressaltar ainda que no podemos falar de cristalinidade nas
amostras tendo por base anlises de outros materiais reconhecidamente
cristalinos, j que polmeros so predominantemente possuidores de carter
amorfo.
- 44 -
5.5. ESPECTROSCOPIA DE INFRAVERMELHO POR

TRANSFORMADA DE FOURIER
A conformao molecular das membranas foi estudada atravs de

espectroscopia de infravermelho. Os espectros podem ser observados nas figuras
abaixo. Na membrana de quitosana sem cobre (Figura 5.5.1), foi possvel
identificar os picos caractersticos, como as vibraes relativas amida, amina,
ligaes C-N (Nosal, 2005). Os picos mais representativos esto relacionados na
tabela 5.5.1. A membrana de quitosana com cobre apresentou os mesmos picos,
exceto aquele localizado na faixa de 1050-1150 cm-1. Este pico est relacionado
s vibraes da ligao C-N, e sua ausncia na membrana com cobre nos d uma
idia de que o metal se liga preferencialmente aos tomos de nitrognio da cadeia
de quitosana. Os demais picos esto presentes, mas com intensidade menor.
Na membrana de alginato tambm foi possvel identificar picos

caractersticos, relacionados sua estrutura molecular (Tabela 5.5.2) (Lawrie,
2007). Da mesma forma que na quitosana, os picos presentes na amostra de
alginato com cobre so basicamente os mesmos, mas com uma intensidade
menor (Figura 5.5.2).
O mesmo acontece com as membranas compostas (2 e 4 bicamadas),

onde os picos presentes nas amostras com e sem cobre so os mesmos (Tabela
5.5.3), porm com menor intensidade naquelas que contm o metal (Figuras 5.5.3
e 5.5.4). Nas membranas compostas, temos tambm, com intensidade baixa,
picos em aproximadamente 1415 cm-1, que esto relacionados interao entre
os grupos amino da quitosana e os grupos carboxila do alginato (Charoenthai,
2007).
- 45 -
Figura 5.5.1. Espectro de infravermelho da membrana de quitosana com (a) e sem cobre (b).
Tabela 5.5.1. Principais picos da quitosana.
Posio (cm-1) Ligao
1650 Vibrao C-N-H
1500 Deformao C-N
1450 Vibrao CH2
1375 Deformao CH3
1200 C-N
1150 C-O
1100 C-O
- 46 -
Figura 5.5.2. Espectro de infravermelho da membrana de alginato com (a) e sem cobre (b).
Tabela 5.5.2. Principais picos do alginato.
Posio (cm-1) Ligao
1750 Estiramento C=O
1650 Estiramento COO-

assimtrico
1400 Estiramento COO- simtrico
1200 1250 Estiramento C-O
1100 Estiramento C-C
1050 O-H
- 47 -
Figura 5.5.3. Espectro de infravermelho da membrana de 2 bicamadas quitosana-alginato com (a)

e sem cobre (b).
Tabela 5.5.3. Principais picos da membrana de 2 e 4 bicamadas quitosana-alginato.
Posio (cm-1) Ligao
1650 Sobreposio : Estiramento

C=O/ Vibrao amida C-N-H
1475 Vibrao CH2
1415 Interao amina

(quitosana)/carboxila
(alginato)
1375 Deformao CH3 simtrica
1240 Estiramento C-O
1060 Estiramento O-H
- 48 -
Figura 5.5.4. Espectro de infravermelho da membrana de 4 bicamadas quitosana-alginato com (a)

e sem cobre (b).
Em todas as amostras, a adio de cobre membrana acarretou na

diminuio das intensidades das vibraes relativas aos picos caractersticos de
cada um dos polmeros. Isso se deve, pois o cobre, ao ser incorporado
membrana, interage de forma eletrosttica com os grupos caractersticos (em
especial OH e NH), provocando uma substancial reorganizao das freqncias
vibracionais. Desta forma, o cobre cria novas interaes entre as cadeias, como
se fosse uma reticulao (Qi, 2004).
5.6. ESTRUTURA FINA ESTENDIDA DE ABSORO DE

RAIOS-X (EXAFS)
A anlise de EXAFS foi realizada fazendo-se medidas em triplicata, e o

tratamento dos dados comeou com o clculo da mdia das triplicatas. Estas
mdias dos espectros de absoro brutos, (E), sem nenhum tipo de ajuste das
- 49 -
medidas (espao (k)) e as funes de distribuio radial (FDR), para cada tipo de
membrana, so mostrados nas figura 5.6.1.
Figura 5.6.1. Funo de distribuio radial (FDR) para as membranas com cobre e padro CuO.
A absoro terica da borda K do metal Cu ocorre energia de 8970 eV.

Os valores experimentais para as bordas de absoro, representados pelos picos
ou saltos nos espectros de absoro foram 8986,96; 8989,99; 8982,26 eV, para as
membranas de alginato, composta e de quitosana, respectivamente (Figura 5.6.2).
O tratamento inicial dos dados obtidos foi feito com o software ATHENA, do
pacote IFFEFIT. A anlise dos resultados de EXAFS baseada em comparao
com compostos padres, e neste estudo foi utilizado o xido de cobre como
padro.
- 50 -
Fazendo a anlise dos sinais obtidos, e comparando-se com o padro, no

grfico de FDR (Figura 5.6.1) podemos notar picos em distncias de 1,9; 2,1 e 2,2
, sendo que estes se repetem para os trs tipos de membranas analisadas.
Utilizando o software ARTEMIS para a comparao dos dados com o padro,
podemos notar que o cobre se liga preferencialmente aos tomos de oxignio das
cadeias polimricas, uma vez que todas as ligaes identificadas nas membranas
so do tipo Cu-O. A menor distncia de R refere-se primeira esfera de
coordenao (distncia de ligao de 1,9 ), enquanto que as outras duas
distncias so da segunda esfera de coordenao (distncias de ligao de 2,1-
2,2 ). Na funo de distribuio radial do xido de Cobre, notamos picos mais
definidos nas posies R entre 2 e 2,5 . Isso se deve ao fato de este ser um
composto inorgnico, com cristalinidade substancialmente maior, quando
comparado s membranas estudadas.
Entretanto, em anlises de EXAFS os tomos de nitrognio e oxignio so

dificilmente diferenciados, devido ao comprimento de ligao ser muito similar
(Kramareva, 2004). Assim, podemos admitir que no caso da quitosana e da
membrana composta, os picos podem estar relacionados tanto a ligaes Cu-O
quanto a ligaes Cu-N.
Baseado nestes resultados possvel dizer que os tomos de cobre

incorporados s membranas se ligam aos grupos amino e hidroxila (quando
presentes). Alm disso, no possvel afirmar que a morfologia da membrana
(camada nica ou composta) interfere na interao do cobre com as cadeias
polimricas.
- 51 -
Figura 5.6.2. Espectro de absoro de EXAFS para as membranas com cobre e padro CuO.
- 52 -
5.7. DIFUSO DE ONS
Com a utilizao de um micrmetro marca Mitutoyo, srie103, foi obtida a

espessura mdia das membranas usadas no experimento de difuso de cloreto de
sdio. (Como j descrito anteriormente, o valor de espessura obtido atravs do
clculo da mdia aritmtica das medidas realizadas em cinco pontos diferentes na
mesma amostra, mida).
Tabela 5.7.1. Espessura das membranas usadas no experimento de difuso.
Membrana Espessura
Quitosana sem cobre 0,10 0,01 mm
Quitosana com cobre 0,09 0,01 mm
Alginato sem cobre 0,07 0,01 mm
Alginato com cobre 0,05 0,01 mm
2 bicamadas sem cobre 0,23 0,01 mm
2 bicamadas com cobre 0,20 0,01 mm
4 bicamadas sem cobre 0,32 0,01 mm
4 bicamadas com cobre 0,37 0,01 mm
Os ensaios foram realizados com soluo 1M de NaCl na parte inferior da

cmara de difuso, e gua Milli-Q na parte superior, temperatura ambiente. Com
a membrana de alginato sem cobre no foi possvel realizar o ensaio, pois a
membrana no suportou a presso osmtica. Foram realizadas vrias tentativas,
variando-se a espessura da membrana, mas como j descrito anteriormente, a
membrana de alginato sem cobre frgil, com baixa resistncia mecnica. O
comportamento da difuso nas membranas est mostrado na figura 5.7.1 e a
tabela 5.7.2 apresenta o clculo do coeficiente de difuso.
- 53 -
Tabela 5.7.2. Dados para o clculo do coeficiente de difuso atravs das membranas (onde Cf1 a
concentrao final no compartimento 1 e Cf2 a concentrao final no compartimento 2 da clula
de difuso).
Membrana Tempo(h) Espessura C f1 C f2 Coeficiente de

(cm) difuso (cm2/s)
4 bicamadas 85,6 0,032 51,48 7,02 3,58.10-8

com cobre
4 bicamadas 117,0 0,037 30,77 27,73 3,26.10-7

sem cobre
2 bicamadas 101,1 0,020 38,96 19,54 7,62.10-8

com cobre
2 bicamadas 74,8 0,023 33,81 24,69 1,99.10-7

sem cobre
Alginato com 139,3 0,005 30,42 28,08 4,03.10-8

cobre
Alginato sem ND ND ND ND ND
cobre
Quitosana com 142,8 0,009 30,65 27,85 6,69.10-8

cobre
Quitosana sem 127,4 0,010 30,48 28,02 8,68.10-8

cobre
- 54 -
4 bicamadas com cobre

4 bicamadas sem cobre
2 bicamadas sem cobre
alginato com cobre
0,4
quitosana sem cobre
quitosana com cobre
0,3
Concentrao (M)
0,2
0,1
0,0
0 100000 200000
Tempo (s)
Figura 5.7.1. Grfico de concentrao de cloreto de sdio na parte superior da cmara de difuso
versus tempo de difuso para as membranas.
Nota-se que as membranas com cobre apresentam coeficiente de difuso

menor do que aquelas sem o metal. Isso mostra que a adio de cobre
membrana provoca uma reticulao qumica, acarretando em uma maior rigidez e
menor mobilidade das cadeias polimricas, e conseqente maior dificuldade para
a difuso da soluo salina atravs da membrana.
Podemos perceber que todas as amostras apresentam uma tendncia a

atingir o equilbrio entre os dois compartimentos da clula de difuso (curva
assinttica), mas especificamente na membrana de duas bicamadas com cobre s
- 55 -
conseguimos observar esta tendncia em tempos de difuso maiores que os

tempos para as demais amostras (Figura 5.7.2).
0,3
Concentrao (M)
0,2
0,1
0,0
0 100000 200000 300000
Tempo (s)
Figura 5.7.2. Grfico concentrao de cloreto de sdio na parte superior da cmara de difuso
versus tempo de difuso para a membrana de 2 bicamadas com cobre.
Percebe-se que, para as membranas compostas com cobre (2 e 4

bicamadas), o equilbrio entre os dois compartimentos da clula de difuso (e a
conseqente diminuio no fluxo de soluo salina atravs da membrana)
atingido em concentraes de valor abaixo do que seria esperado, e diferente do
que ocorre com as outras membranas. Como j explicado anteriormente, os
tomos de cobre incorporados membrana provocam um rearranjo das cadeias e
limita o fluxo de soluo atravs da mesma. Alm disso, podemos inferir que
medida que a difuso acontece, possivelmente ocorre uma saturao da
membrana, com ancoragem de ons sdio, provenientes da soluo salina.
Na membrana com cobre, com menor mobilidade das cadeias, este

fenmeno pode ter sua ocorrncia favorecida, e por isso o fluxo de soluo
- 56 -
diminudo, antes que o equilbrio de concentraes entre os dois compartimentos

da clula de difuso seja atingido.
Os resultados mostraram que o coeficiente de difuso das membranas com

cobre menor do que o coeficiente das mesmas membranas sem cobre, e assim
a sua permeabilidade fica comprometida, no se tornando uma estrutura eficiente
para difuso de ons.
Para a difuso, vrias caractersticas da membrana devem ser levadas em

considerao: nmero de bicamadas, presena de cobre, material (quando em
membranas formadas por um polmero apenas). Nota-se que a presena de cobre
provoca uma reticulao das cadeias polimricas, tornando a membrana mais
rgida, com menos espaos vazios entre as cadeias, e no permitindo a
mobilidade dos ons presentes na soluo salina.
Na membrana sem cobre, percebemos que o coeficiente de difuso

maior, uma vez que esta tem mais espaos vazios e maior mobilidade das cadeias
polimricas, permitindo um fluxo mais livre para os ons da soluo salina, at que
a concentrao atinja o equilbrio entre os dois compartimentos da clula de
difuso.
Nas membranas compostas, a presena de ons cobre tem um efeito muito

mais pronunciado na queda da difusividade, quando comparadas com aquelas
constitudas por apenas um polmero. Tal fato nos leva a crer que, alm da
presena de cobre, outra caracterstica que interfere na difusividade a interao
entre as cadeias de quitosana e alginato, com a produo de novas ligaes, que
tende a aumentar em quantidade, com o aumento do nmero de camadas
presentes na membrana. Na medida em que aumenta o nmero de camadas,
maior a diferena na difusividade entre as amostras com e sem cobre, devido ao
aumento no nmero de ligaes entre as cadeias dos dois polmeros e devido
espessura da membrana.
5.8. AVALIAO DA CAPACIDADE BACTERIOSTTICA
- 57 -
Os testes de caracterizao da capacidade bacteriosttica das membranas

produzidas foram feitos com as membranas de quitosana, alginato e composta,
com e sem cobre.
Os resultados para cada uma das amostras est mostrado na tabela 5.8.1,
e as fotografias referentes s anlises so apresentadas no Anexo 1.
Tabela 5.8.1. Resultados dos testes de caracterizao bacteriosttica referentes a cada uma das
amostras.
Resultado
Amostra
Teste com Escherichia Coli Teste com Staphylococcus Aureus
Quitosana Ausncia de halo de inibio,

Ausncia de halo de inibio, crescimento
sem cobre crescimento intenso sobre o corpo de
intenso sobre o corpo de prova (Nvel 4)
(disco) prova (Nvel 4)
Quitosana Ausncia de halo de inibio,

sem cobre crescimento intenso sobre o corpo de
(flocos) prova (Nvel 4)
Formao de halo discreto, sem

Alginato sem Ausncia de halo de inibio, crescimento
crescimento sobre o corpo de prova
cobre (disco) fraco sobre o corpo de prova (Nvel 2)
(Nvel 0)
Alginato sem Ausncia de halo de inibio,

cobre crescimento fraco sobre o corpo de
(flocos) prova (Nvel 2)

Ausncia de halo de inibio, intenso sobre o corpo de prova (Nvel 4)
Composta crescimento intenso sobre o corpo de
sem cobre prova (Nvel 4)
(disco)
CONTINUA NA PRXIMA PGINA
- 58 -
Resultado
Amostra Teste com Escherichia Coli Teste com Staphylococcus Aureus
Composta Formao de halo discreto, sem

sem cobre crescimento sobre o corpo de prova
moderado sobre o corpo de prova (Nvel 3)
(flocos) (Nvel 0)
Ausncia de halo de inibio clara. Houve

Quitosana Ausncia de halo de inibio, formao de uma zona de inibio,
com cobre crescimento ausente sobre o corpo de possivelmente pela difuso dos ativos
(disco) prova (Nvel 0) atravs do gar. Crescimento ausente
sobre o corpo de prova (Nvel 0)
Formao de halo de inibio discreto.

Houve formao de uma zona de
Quitosana Houve formao de uma zona de inibio
inibio, possivelmente pela difuso dos
com cobre secundria, possivelmente pela difuso dos
ativos atravs do gar. Crescimento
(flocos) ativos atravs do gar. Crescimento
ausente sobre o corpo de prova (Nvel
ausente sobre o corpo de prova (Nvel 0)
0)
Formao de halo discreto, sem Formao de halo discreto, sem

crescimento sobre o corpo de prova crescimento sobre o corpo de prova (Nvel
Alginato com (Nvel 0) 0)Obs: No foi possvel mensurar o
cobre (disco)
Obs: No foi possvel mensurar o tamanho do halo pois o polmero ficou
tamanho do halo pois o polmero ficou gelificado sobre o meio de cultura
gelificado sobre o meio de cultura
Formao de halo discreto, sem

crescimento sobre o corpo de prova
Alginato com formao de uma zona de inibio,
(Nvel 0).O tamanho do halo no pode
cobre possivelmente pela difuso dos ativos
ser mensurado por ter espalhado sobre
(flocos) atravs do gar. Crescimento ausente
o meio, impossibilitando a visualizao
das bordas.

Composta Formao de halo 3 mm, sem formao de uma zona de inibio,
com cobre crescimento sobre o corpo de prova possivelmente pela difuso dos ativos
(disco) (Nvel 0) atravs do gar. Crescimento ausente

Houve formao de uma zona de
Composta Houve formao de uma zona de inibio,
inibio secundria, possivelmente pela
com cobre possivelmente pela difuso dos ativos
difuso dos ativos atravs do gar.
(flocos) atravs do gar. Crescimento ausente
Crescimento ausente sobre o corpo de
prova (Nvel 0)
- 59 -
Onde:
Nvel 0 = crescimento ausente,

Nvel 1 = traos de crescimento,
Nvel 2 = crescimento fraco,
Nvel 3 = crescimento moderado, e
Nivel 4 = crescimento intenso.
A quitosana um polmero que tem como uma de suas principais

caractersticas a capacidade antibacteriana, assim como o cobre, que desde a
antiguidade usado como material antimicrobiano. Os testes de avaliao da
capacidade bacteriosttica foram realizados com bactrias Gram-negativas e
Gram-positivas.
Os resultados mostraram que as amostras (membranas de quitosana,

alginato e composta) sem cobre no tiveram resultado satisfatrio no que diz
respeito a inibio de crescimento bacteriano. Os resultados variaram de
crescimento intenso sobre o corpo de prova, no caso da quitosana, a ausncia de
crescimento, no caso do alginato. Apesar disso a membrana composta no
apresentou comportamento inibitrio, em se tratando da proliferao das colnias
sobre o corpo de prova.
Ao se adicionar cobre s membranas, independente da morfologia das

amostras (discos ou flocos, quitosana, alginato ou composta), nota-se que o
crescimento completamente inibido, e em nenhum caso h o crescimento sobre
o corpo de prova. Na maioria das amostras houve tambm a formao de uma
zona de inibio, indicando que provavelmente os ativos que impedem o
crescimento da colnia de bactrias se espalharam ao redor do corpo de prova.
As anlises mostraram que mais do que a composio da membrana, o

fator que definiu com maior clareza se a amostra possui carter antibacteriano a
presena de cobre; em amostras com cobre o comportamento foi semelhante, e
em todas houve ausncia de crescimento bacteriano. Por outro lado, nas amostras
- 60 -
sem cobre, no foi possvel detectar um padro estabelecido que determine o

crescimento ou no de bactrias sobre o corpo de prova.
Especificamente sobre a quitosana, apesar de vrios autores enfatizarem

suas boas propriedades antibacterianas, em nosso trabalho no foi possvel
comprovar tal caracterstica. Isso se deve forma como a quitosana foi moldada
(em forma de membranas), e principalmente devido s modificaes qumicas
necessrias para a produo da membrana (neutralizao em hidrxido de sdio).
A quitosana na forma heterognea no um material apropriado para inibio do
crescimento bacteriano, uma vez que a sua capacidade de inativao de bactrias
atribuda sua capacidade em interagir com as paredes celulares dos
microorganismos e, sob a forma de membrana, ntegra e quimicamente estvel,
essa interao fica comprometida (Costa Silva, 2006).
- 61 -
Discusso Geral
CAPTULO 6
DISCUSSO GERAL
6.1. PRODUO E CARACTERIZAO QUMICA DAS

MEMBRANAS
Para que seja possvel obter membranas constitudas por camadas

organizadas e sobrepostas de polmeros, como neste trabalho, importante que
os polmeros apresentem cargas opostas em soluo, j que a fora motriz para a
unio dos mesmos a atrao eletrosttica gerada pela diferena de cargas
(Chen, 1997).
Alm de ser fundamental para a dissoluo dos polmeros em soluo

aquosa, o controle do pH das solues polimricas torna possvel ajustar a
densidade de cargas das cadeias de quitosana e alginato (Yuan, 2007). Em nosso
trabalho, este ajuste do pH foi realizado atravs da dissoluo da quitosana e do
alginato em cido actico e hidrxido de sdio, respectivamente. Assim, a
quitosana adquiriu carga positiva, funcionando como um poliction, enquanto que
o alginato agiu como um polinion.
Outro ponto a ser ressaltado a ordem de deposio das camadas

polimricas. Caso o alginato fosse escolhido como o polmero constituinte da
primeira camada, provavelmente a constituio da membrana no seria
comprometida, j que a primeira camada de polmero (em contato com a placa de
Petri) tem maior volume de soluo, e assim a adeso no seria prejudicada.
Os espectros obtidos por FTIR mostraram que houve interao entre as

cadeias de quitosana e alginato, especificamente entre os grupos funcionais dos
- 62 -
Discusso Geral
dois polmeros. A adeso foi obtida de forma plena, possibilitando a obteno de

uma membrana ntegra e estvel. Problemas relacionados deficincia na
interao entre os dois polmeros, como desfoliao da membrana, por exemplo,
no foram observados. A organizao das membranas em camadas sobrepostas
dos dois polmeros pde ser confirmada atravs das micrografias obtidas por
MEV. Alm disso, as micrografias mostraram tambm que a espessura das
camadas de cada polmero no variou em funo da quantidade de camadas j
depositadas na membrana.
Tambm se pode observar que para cada polmero a espessura final foi
diferente: as camadas de quitosana apresentaram espessura maior que as de
alginato, o que pode ser atribudo uma somatria das influncias da
concentrao no volume usado de soluo e da densidade de cada polmero.
Estas duas anlises mostraram que a forma como as solues polimricas foram
produzidas contribuiu para que houvesse cargas opostas necessrias e suficientes
entre os dois polmeros, para garantir interao entre as cadeias, e a conseqente
formao da membrana.
A posterior adio de cobre provocou uma espcie de reticulao das

cadeias polimricas e ligaes entre os grupos funcionais, o que fica evidenciado
pela diferena entre os espectros de uma mesma amostra, com e sem cobre.
Apesar disso, a morfologia das membranas no foi alterada.
Atravs da caracterizao por EDX, foi possvel perceber que o cobre

interage preferencialmente com o alginato, sendo encontrado em quantidade
muito maior nas camadas deste polmero, quando comparado com as camadas de
quitosana.
A maior afinidade do cobre pelo alginato pode ser explicado,

principalmente, devido ao efeito egg-box, presente neste polmero. Este
causado pela alta afinidade do alginato por ons metlicos divalentes, onde as
cadeias do polmero mudam a sua conformao, passando de cadeias lineares
para um arranjo tridimensional, aps a interao com o on divalente, formando
- 63 -
Discusso Geral
estruturas cada vez mais complexas e ampliando a possibilidade de mais ons

metlicos interagirem com o polmero (Phillips, 2000).
Tais resultados nos mostram que podemos, por exemplo, utilizar estas
membranas para adsoro seletiva de ons, onde apenas um dos polmeros
constituintes do sistema ir interagir com o on, e o outro polmero pode ser usado
como elemento estrutural. Alm disso, pode-se controlar o volume de soluo para
cada camada, uma membrana com camadas de espessuras iguais, uniformes ao
longo da seo transversal da membrana, ou de acordo com a finalidade para a
qual a membrana ser utilizada.
Explorando-se esta caracterstica encontrada na membrana multicamada,

podemos sugerir sistemas onde o metal ser adsorvido em apenas um dos
polmeros. Sendo ambos os polmeros biodegradveis, este sistema poderia ser
utilizado em uma situao onde se deseja uma liberao controlada do metal.
6.2. ANLISE ESTRUTURAL
A incorporao de ons cobre s membranas nos leva a investigar como

ocorre a interao do metal com as cadeias polimricas, e qual o efeito resultante,
sob o ponto de vista estrutural e de cristalinidade. Tais informaes podem ser
obtidas atravs das caracterizaes por DRX e EXAFS.
Polmeros so substncias com carter predominantemente amorfo, sem a

presena de picos cristalinos bem definidos. Por outro lado, h a presena de
halos, que evidenciam um sistema com organizao intermediria (Qi, 2004). Nas
membranas estudadas, a incluso de ons cobre provocou mudanas na estrutura
das cadeias polimricas, o que pode ser comprovado pelos difratogramas gerados
pela anlise de DRX.
As membranas sem cobre apresentam halos caractersticos dos polmeros

constituintes, tanto em posio quanto em intensidade. A adio de cobre provoca
um novo rearranjo das cadeias, de forma a se ajustarem incluso do on.
- 64 -
Discusso Geral
Podemos notar, nos difratogramas, que os picos caractersticos dos polmeros

continuam presentes, mas as suas intensidades se tornam menores.
Do clculo de distncias interplanares podemos tambm perceber que a

adio de cobre faz com que os picos referentes s menores distncias so os
que mais perdem intensidade, chegando a desaparecer em algumas amostras.
Isso mostra que o on cobre, por ser grande em relao aos tomos constituintes
das cadeias polimricas, provoca grande desorganizao ao seu redor, e dessa
forma, as cadeias deixam de estar alinhadas, perdendo o carter cristalino. Para
maiores distncias interplanares, este efeito tambm notado, mas com menor
extenso.
A fim de complementar a anlise estrutural das membranas com cobre, a

caracterizao por EXAFS nos permite dizer como o on cobre est ligado
cadeia polimrica, ou seja, em qual tomo da cadeia do polmero o on se liga.
Analisando-se os resultados obtidos, podemos inferir que os ons cobre

esto preferencialmente ligados aos grupos amino (na quitosana) e hidroxila (no
alginato), com distncias de ligao em torno de 2 . O fato de termos distncias
de ligao relacionadas s duas esferas de coordenao distintas, no significa
necessariamente que temos uma estrutura organizada em cela unitria, com
distncias de ligao regularmente distribudas. Dos espectros de EXAFS
podemos concluir que as principais ligaes entre o cobre e os polmeros tem
distncia em torno de 2 , variando entre os valores encontrados na funo de
distribuio radial.
Comparando os espectros de EXAFS das membranas obtidas com o

padro de xido de Cobre, pode-se perceber que assim como no padro, os
tomos de cobre se ligam preferencialmente aos tomos de oxignio presentes
nas cadeias polimricas. No entanto, em anlises de EXAFS, ligaes envolvendo
tomos de oxignio e nitrognio se confundem. No caso das membranas de
quitosana, que possuem tomos de nitrognio em seus grupos funcionais,
podemos admitir que os tomos de cobre se ligam a estes tomos de nitrognio
presentes na quitosana.
- 65 -
Discusso Geral
6.3. APLICABILIDADE
A principal vantagem da utilizao de membranas multicamadas para

incorporao de cobre a possibilidade de modulao da concentrao de cobre
em cada uma das camadas, atravs da escolha dos polmeros apropriados. Neste
trabalho, quitosana e alginato possuem diferentes graus de afinidade com este
metal (apesar de os dois polmeros terem boa capacidade de interao com
metais), e, por isso, a concentrao de cobre em cada uma das camadas
diferente.
Para uma futura aplicao de sistemas multicamadas possvel tirar

proveito desta caracterstica, para criar um ambiente onde ocorra liberao
controlada dos ons cobre sobre o substrato. Como quitosana e alginato so
polmeros biodegradveis, na medida em que as camadas de alginato vo sendo
degradadas, ocorre a liberao do cobre (mais presente neste polmero), inibindo
o crescimento da colnia de bactrias. Outra liberao de cobre em grande
quantidade s ocorrer aps o final da degradao da camada de quitosana,
quando a prxima camada de alginato for degradada. A liberao controlada
mais vantajosa que a liberao contnua, pois mais eficiente, com ao e
desempenho otimizados, e evita efeitos colaterais indesejados, reduzindo a
toxicidade (Uhrich, 1999).
Em sistemas onde a liberao controlada no desejada, pode-se utilizar a

membrana multicamada como um sistema de proteo contra crescimento
bacteriano; uma vez que no h proliferao de bactrias sobre a membrana, esta
pode, provavelmente, ser empregada para revestir superfcies que necessitam
apresentar propriedade bacteriosttica.
Estudos em nosso laboratrio (Vieira, 2008), foi demonstrado que o cobre,

uma vez adsorvido pela quitosana, dificilmente dessorvido por eluentes comuns,
o que garantiria que a liberao de cobre somente ocorre em paralelo com a
eventual degradao da membrana. Entretanto, enquanto no liberado, o cobre
- 66 -
Discusso Geral
capaz de cumprir bem o papel de agente bacteriosttico imobilizado em fase

slida, com vantagens evidentes sobre os agentes utilizados hoje,
comercialmente, como os conhecidos sais de prata.
Como j citado anteriormente, o mtodo de obteno de membranas

multicamadas estudado neste trabalho permite que uma considervel quantidade
de substncias diferentes sejam utilizadas para a produo destas estruturas.
Basicamente, o nico pr-requisito que os componentes possuam cargas
opostas em suas molculas, e assim teremos um ction e um nion.
Alm disso, h ainda a possibilidade de se incorporar outras espcies

qumicas na membrana, como por exemplo, um on metlico. Isto tambm permite
a utilizao em situaes onde a presena de ons metlicos traga benefcios
(evitando proliferao de bactrias em regies do corpo de pacientes em ps
operatrio, por exemplo (Lee, 2005)).
Para tratamento de feridas na pele (Crdenas, 2008), a membrana

multicamadas pode ser de grande utilidade, uma vez que com o devido tratamento
prvio (esterilizao e umidificao), ela pode contribuir para uma cicatrizao
mais rpida, alm de atenuar estas cicatrizes. Este efeito pode ainda ser
potencializado, com a membrana contendo ons metlicos, o que contribuiria para
a assepsia do ferimento, evitando inflamaes enquanto a cicatrizao ocorre.
Outra interessante aplicao, possvel para membranas multicamadas, em

especial, a imobilizao de anticorpos, favorecida pela forma como a membrana
construda. Neste caso, ao invs de quitosana e alginato com cobre, teramos
uma membrana com os mesmos polmeros, mas contendo a substncia tal que se
deseja armazenar. A estrutura da membrana contribui tanto para uma melhor
ancoragem do anticorpo na cadeia polimrica, quanto para a liberao
controlada do mesmo, aumentando a vida til do sistema (Yuan, 2007).
Especialmente no caso de tratamento de gua, as membranas

multicamadas mostram-se boas alternativas, uma vez que foi possvel observar a
afinidade do cobre pelos polmeros constituintes da membrana, em especial o
alginato. A utilizao desta membrana com cobre seria uma alternativa aos
- 67 -
Discusso Geral
processos empregados atualmente, como, por exemplo, os sais de prata, que

quando comparados ao cobre, so mais txicos e, portanto, prejudiciais sade
humana. Alm disso, a prata um metal encontrado em menor quantidade na
natureza, e por isso a aplicao de substncias derivadas deste metal se torna
menos vantajosa, do ponto de vista financeiro.
As membranas multicamadas estudadas neste trabalho apresentam, aps

incorporao de cobre, propriedades antibacterianas que as tornam interessantes
como revestimentos e para tratamentos onde tal propriedade importante.
- 68 -
Concluses
CAPTULO 7
CONCLUSES
Deste trabalho podemos concluir que:
A produo de membranas multicamadas foi bem sucedida, validando a

adaptao do mtodo layer-by-layer. Este mtodo permite no somente a
obteno de membranas de quitosana e alginato, mas sim a combinao
de uma enorme gama de polmeros, protenas, etc., adequadas a uma
funo especfica, com as propriedades desejveis;
A incorporao de cobre se d de forma eficiente e distinta na quitosana e

no alginato; alm disso, a estrutura cristalina das membranas modificada
aps a adsoro dos ons cobre, tornando-as mais amorfas e
desorganizadas, como mostrado pelo DRX. A caracterizao qumica
tambm mostra um rearranjo das interaes entre as cadeias, aps a
insero do cobre, que provoca uma reticulao;
Atravs da caracterizao por EXAFS podemos afirmar que os tomos de

cobre se ligam preferencialmente aos grupos funcionais de quitosana e
alginato, mais precisamente aos tomos de nitrognio e oxignio presentes
em cada grupo funcional, respectivamente. Tal identificao foi possvel
atravs de comparao com o espectro do padro xido de cobre; por outro
lado, no possvel fazer uma anlise quantitativa a respeito destas
ligaes (grupo onde o cobre faz mais interaes, por exemplo);
- 69 -
Concluses
A difuso de ons atravs da membrana prejudicada pela adio de ons

cobre, que somada ao nmero de camadas da membrana, interfere de
forma significativa na difusividade, diminuindo-a;
Mais importante do que a composio da membrana, a adsoro ou no de

cobre fator que define a capacidade bacteriosttica da membrana e
garante aplicaes diversas onde tal caracterstica necessria.
NOTA: O mtodo de obteno de membranas multicamadas proposto e

estudado nesta dissertao est em processo de patenteamento.
- 70 -
Sugestes Para Trabalhos Futuros
CAPTULO 8
SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS
Estudar a reduo dos ons cobre incorporados membrana composta e

seu efeito;
Caracterizaes mecnicas, de forma a avaliar o aumento da resistncia
aps a incorporao de cobre;
Medidas de solubilidade de quitosana e alginato em soluo salina e em
gua;
Desenvolvimento de um novo mtodo de secagem das membranas, em um
ambiente controlado, com circulao de ar e maior homogeneidade de
temperatura;
Medidas de quantidade de cobre incorporada membrana;
Produo de membranas com maior nmero de bicamadas;
Estudo da variao de espessura das camadas polimricas, medida em

que se aumenta o nmero de bicamadas;
Estudos de resistncia lixiviao: sabe-se de trabalhos anteriores, que a

quitosana possui notvel resistncia lixiviao, e para a membrana
multicamada, no se sabe se esta caracterstica est presente.
- 71 -
Referncias Bibliogrficas
CAPTULO 9
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Applied Polymer Science , 88 (2003) 346-351.
Srinivasa, P. C., Tharanathan, R. N. Chitin/Chitosan - Safe, Ecofriendly

Packaging Materials with Multiple Potential Uses. Food Review
International, 23 (2007) 53-72.
- 75 -
Vieira, R. S. Adsoro competitiva do ons cobre e mercrio em membranas

de quitosana natural e reticulada. Tese de Doutorado, UNICAMP,
Faculdade de Engenharia Qumica, 2008.
Wan, Y. C., Creber, K. A. M., Peppley, B., Tam Bui, V. Chitosan-based

Electrolyte Membranes II: Mechanical Properties and Ionic Conductivity.
Journal of Membrane Science, 284 (2006) 331-338.
Wong, Y. C., Szeto, Y. S., Cheung, W. H., McKay, G. Effect of Temperature,

Particle Size and Percentage Deacetylation on the Adsorption of Acid Dyes
on Chitosan. Adsorption ,14 (2008) 11-20.
Xu, Y. X., Kim, K. M., Hanna, M. A., Nag, D. Chitosan-starch Composite

Film: Preparation and Characterization. Industrial Crops and Products,
2004.
Yuan, W., Dong. H., Li, C. M., Cui, X., Yu, L., Lu, Z., Zhou, Q. pH-Controlled
Construction of Chitosan/Alginate Multilayer Film: Characterization and
Application for Antibody Immobilization. Langmuir , 23 (2007) 13046-13052.
- 76 -
ANEXO 1 - Fotografias dos resultados dos testes de avaliao bacteriosttica.
Figura 9.1. Amostra 1: Quitosana sem cobre em discos (teste com E. coli).
Figura 9.2. Amostra 1: Quitosana sem cobre em discos (teste com S. aureus).
Figura 9.3. Amostra 2: Quitosana sem cobre em flocos (teste com E. coli).
- 77 -
Figura 9.4. Amostra 2: Quitosana sem cobre em flocos (teste com S. aureus).
Figura 9.5. Amostra 3: Alginato sem cobre em discos (teste com E. coli).
Figura 9.6. Amostra 3: Alginato sem cobre em discos (teste com S. aureus).
- 78 -
Figura 9.7. Amostra 4: Alginato sem cobre em flocos (teste com E. coli).
Figura 9.8. Amostra 4: Alginato sem cobre em flocos (teste com S. aureus).
Figura 9.9. Amostra 5: Composta sem cobre em discos (teste com E. coli).
- 79 -
Figura 9.10. Amostra 5: Composta sem cobre em discos (teste com S. aureus).
Figura 9.11. Amostra 6: Composta sem cobre em flocos (teste com E. coli).
Figura 9.12. Amostra 6: Composta sem cobre em flocos (teste com S. aureus).
- 80 -
Figura 9.13. Amostra 7: Quitosana com cobre em discos (teste com E. coli).
Figura 9.14. Amostra 7: Quitosana com cobre em discos (teste com S. aureus).
Figura 9.15. Amostra 8: Quitosana com cobre em flocos (teste com E. coli).
- 81 -
Figura 9.16. Amostra 8: Quitosana com cobre em flocos (teste com S. aureus).
Figura 9.17. Amostra 9: Alginato com cobre em discos (teste com E. coli).
Figura 9.18. Amostra 9: Alginato com cobre em discos (teste com S. aureus).
- 82 -
Figura 9.19. Amostra 10: Alginato com cobre em flocos (teste com E. coli).
Figura 9.20. Amostra 10: Alginato com cobre em flocos (teste com S. aureus).
Figura 9.21. Amostra 11: Composta com cobre em discos (teste com E. coli).
- 83 -
Figura 9.22. Amostra 11: Composta com cobre em discos (teste com S. aureus).
Figura 9.23. Amostra 12: Composta com cobre em flocos (teste com E. coli).
Figura 9.24. Amostra 12: Composta com cobre em flocos (teste com S. aureus).
- 84 -

Doutorado Filmes Alginato Uitosana Cobre

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UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS

FACULDADE DE ENGENHARIA QUMICA

DEPARTAMENTO DE TERMOFLUIDODINMICA REA DE CONCENTRAO:

AUTOR: RAFAEL GONALVES DE PAIVA

ORIENTADORA: PROFa. DRa. MARISA MASUMI BEPPU

Dissertao de Mestrado apresentada Faculdade de Engenharia Qumica como

Paiva, Rafael Gonalves de

Orientador: Marisa Masumi Beppu.

1. Quitosana. 2. Alginatos. 3. Cobre. 4. Membranas

Ttulo em Ingls: Production and characterization of chitosan and alginate multilayer

Agradeo a todos que estiveram em meu convvio durante este trabalho:

Meus pais, Jane e Randolfo, e meu irmo Guilherme, que nunca

Companheiros de repblica: Cassiano, Ennio, Santizta, Daniel, Danilo,

Colegas de laboratrio: Rdrigo, Gilberto, Emerson, Aline, Grnia, Raquel,

Professora Marisa, que sempre acreditou em meu potencial, e com quem

FAPESP, CAPES e CNPq, pelo apoio financeiro;

Laboratrio Nacional de Luz Sncrotron, pelas anlises de EXAFS;

Dra. Slvia Eguchi, pelas anlises de capacidade bacteriosttica;

Prof. Csar Costapinto Santana, por disponibilizar seu laboratrio para as

Todos aqueles que de alguma forma contriburam para a execuo deste

Estudos envolvendo membranas tm atrado muito interesse nos ltimos anos,

Palavras-chave: Quitosana, Alginato, Cobre, Membranas

Keywords: Chitosan, Alginate, Copper, Membranes

REVISO BIBLIOGRFICA .................................................................................................5

3.1. MEMBRANAS ............................................................................................................5

3.2. MTODO layer-by-layer DE PRODUO DE MEMBRANAS MULTICAMADAS .....7

3.3. QUITOSANA ..............................................................................................................9

3.4. ALGINATO ...............................................................................................................12

3.5. ASPECTOS GERAIS DO COBRE (PROCOBRE, 2007) .........................................14

MATERIAIS E MTODOS ..................................................................................................19

4.1. PREPARAO DA SOLUO DE QUITOSANA ...................................................19

4.2. PREPARAO DA SOLUO DE ALGINATO ......................................................19

4.3. PREPARAO DAS MEMBRANAS ........................................................................20

4.3.1. MEMBRANA DE QUITOSANA ..........................................................................20

4.3.2. MEMBRANA DE ALGINATO.............................................................................20

4.3.3. MEMBRANA COMPOSTA ................................................................................20

4.4. INCORPORAO DE COBRE S MEMBRANAS ..................................................22

4.5. CARACTERIZAO DAS MEMBRANAS ...............................................................22

4.5.1. MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA (MEV) ................................23

4.5.2. ESPECTROSCOPIA DE ENERGIA DISPERSIVA DE RAIOS-X (EDX) ...........23

4.5.3. DIFRAO DE RAIOS-X (XRD) .......................................................................23

4.5.4. ESPECTROSCOPIA DE INFRAVERMELHO POR TRANSFORMADA DE

4.5.6. DIFUSO DE ONS ...........................................................................................30

4.6. AVALIAO DA CAPACIDADE BACTERIOSTTICA ............................................33

RESULTADOS E DISCUSSO ..........................................................................................35

5.1. PREPARAO DAS MEMBRANAS ........................................................................35

5.2. MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA ..................................................37

5.3. ESPECTROSCOPIA DE ENERGIA DISPERSIVA DE RAIOS-X (EDX) .................38

5.4. DIFRAO DE RAIOS-X .........................................................................................41

5.5. ESPECTROSCOPIA DE INFRAVERMELHO POR TRANSFORMADA DE

5.6. ESTRUTURA FINA ESTENDIDA DE ABSORO DE RAIOS-X (EXAFS) ............49

5.7. DIFUSO DE ONS .................................................................................................53

5.8. AVALIAO DA CAPACIDADE BACTERIOSTTICA ............................................57

DISCUSSO GERAL .........................................................................................................62

6.1. PRODUO E CARACTERIZAO QUMICA DAS MEMBRANAS ......................62

6.2. ANLISE ESTRUTURAL .........................................................................................64

6.3. APLICABILIDADE ....................................................................................................66

SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS........................................................................71

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ...................................................................................72

ANEXO 1 - Fotografias dos resultados dos testes de avaliao bacteriosttica. ...............77

O estudo envolvendo membranas tem atrado interesse nos ltimos tempos,

Nesse contexto surgem tcnicas como, por exemplo, o mtodo layer-by-

exatamente neste ponto que o presente trabalho se insere, ao propor um

Trata-se de um mtodo que tem a caracterstica de ser completamente