T Uce 0008 P007 PDF

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

INSTITUTO DE INVESTIGACION Y POSGRADO
MAESTRA EN QUMICA ANALTICA
DESARROLLO Y VALIDACIN DE UN MTODO PARA LA

DETERMINACIN DE MERCURIO EN AGUAS RESIDUALES, POR
VOLTAMPEROMETRA
TESIS DE INVESTIGACIN CIENTFICA PARA OPTAR POR EL TTULO DE
MAGSTER EN QUMICA ANALTICA
AUTORA: Dra. Mara Esperanza Berrazueta Lanas

espe_berr@yahoo.es
TUTOR: Dr. Patricio Carrera, M.Sc.

patovichecarr@hotmail.com
Quito, octubre de 2015

Berrazueta Lanas, Mara Esperanza (2015). Desarrollo y validacin de un mtodo para la
determinacin de mercurio en aguas residuales, por voltamperometra. Trabajo
de investigacin para optar por el titulo de Magister en Qumica Analtica.
Instituto de Investigacion y Posgrado. Quito: UCE. 127 p.

DEDICATORIA
A mi esposo, mi compaero, por su amor y apoyo incondicional.
A mis hijos, mi motivacin para culminar este proyecto.
A mis padres, por sus sabios consejos y su estimulo permanente.
A la memoria de m amado hermano
i
Agradecimiento
Al Dr. Patricio Carrera, tutor de la presente investigacin, por aportar con su gua y sus
valiosos conocimientos a la consecucin de esta monografa.
A la Dra. Beatriz Vargas y al Dr. Julio Cesar Aguilar por su gran ayuda en la realizacin
del Proyecto de Tesis.
A la Dra. Beatriz Vargas y al Dr. Eduardo Mayorga, miembros del Tribunal de Tesis, por
las sugerencias que permitieron enriquecer y optimizar esta monografa.
A la Dra. Lorena Goetschel, Directora del Instituto Superior de Posgrado, por su acertada
gestin y estmulo para poder culminar con este objetivo.
A las Dra Isabel Fierro y al Dra. Blanca Estela Bravo, ex Directoras del Instituto Superior
de Posgrado, quienes en su momento supieron impulsarme para continuar con el trabajo
de tesis.
A mi esposo y mis hijos por su amor, apoyo, sacrificio y paciencia durante la realizacin de
este trabajo.
A la Facultad de Ciencias Qumicas y al Instituto Superior de Posgrado, por darme la
oportunidad de continuar con mi formacin acadmica.
A los Laboratorios HIDROECUADOR por facilitarme las instalaciones y los equipos para
la realizacin de la presente investigacin.
Al CICAM (Centro de Investigacin y Control Medio Ambiental) de la Escuela Politcnica
Nacional, en particular a la Ing. Karola Fierro, por permitirme ocupar sus laboratorios.
Al personal de los Laboratorios OSP por el asesoramiento y ayuda brindada.
A todas las personas que de una u otra manera contribuyeron para la realizacin de este
trabajo.
ii
AUTORIZACIN DE LA AUTORA
Yo, MARIA ESPERANZA BERRAZUETA LANAS, en calidad de autora del
trabajo de investigacin realizado sobre: Desarrollo y validacin de un mtodo para la
determinacin de mercurio en aguas residuales por voltamperometra, por la presente
autorizo a la UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR, hacer uso de todos los
contenidos que me pertenecen o de parte que contiene esta obra, con fines estrictamente
acadmicos o de investigacin.
Los derechos que como autora me corresponden, con excepcin de la presente
autorizacin, seguirn vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los
artculos 5, 6, 8, 19 y dems pertinentes de la ley de propiedad intelectual y su reglamento.
En la ciudad de Quito, a los 22 das del mes de octubre del 2015
Mara Esperanza Berrazueta Lanas
C.C. 0501519334
iii
APROBACIN DEL TUTOR
Por la presente, dejo constancia de que el Trabajo de Tesis de Maestra, presentado
por la Seora Mara Esperanza Berrazueta Lanas, para optar por el Titulo de Magister en
Qumica Analtica, cuyo ttulo es: Desarrollo y validacin de un mtodo para la
determinacin de mercurio en aguas residuales por voltamperometra, ha sido revisado
y aprobado por mi persona.
En la ciudad de Quito, a los 27 das del mes de julio del 2015.
-----------------------------------------------
Patricio Carrera, M. Sc.

C.C.: 1709774770
iv
TABLA DE CONTENIDOS
Pg.
Dedicatoria i
Agradecimiento. ii
Autorizacin de la autora......... iii
Aprobacin del tutor. iv
Resumen xviii
Abstract..... xix
Introduccin.. xx
CAPTULO I
1. Definicin del problema................. 1
2. Objetivos....... 2
2.1. Objetivo General... 2
2.2. Objetivos especficos.... 2
3. Hiptesis 3
CAPTULO II
2. Fundamento terico............................................... 4
2.1. El mercurio 4
v
2.1.1. Consideraciones generales........... 4
2.1.2. Efectos del mercurio en la salud.. 5
2.1.3. Propiedades fsicas y qumicas del mercurio.......... 5
2.1.4. Ciclo del mercurio............ 6
2.1.5. Usos del mercurio. 7
2.1.6. El mercurio en el Ecuador 7
2.2. Tcnicas de cuantificacin de mercurio............. 10
2.2.1. Tcnicas voltamtricas.. 10
2.2.1.1. Electroqumica analtica.. 11
2.2.1.2. Cintica electroqumica......................... 13
2.2.1.3. Elementos de un anlisis voltamtrico................. 15
2.2.1.4. Mtodos para la medida de potenciales. 22
2.2.1.5. Instrumento para la aplicacin de tcnicas voltamtricas................... 24
2.2.1.6. Clasificacin de las tcnicas electroqumicas 24
2.2.1.7. Mtodos de cuantificacin de anlisis voltamtricos 33
2.3. Fundamentos de validacin 37
2.3.1. Parmetros de validacin............ 38
CAPTULO III
3. Metodologa.. 40
3.1. Tipo de investigacin.............. 40
vi
3.2. Poblacin y muestra... 40
3.3. Diseo experimental...... 40
3.3.1. Primera parte: Metodologa para la Preparacin, acondicionamiento y
caracterizacin de los electrodos... 44
3.3.1.1. Electrodo impreso con nanopartculas de oro 45
3.3.1.2. Electrodo de carbn vtreo modificado con film de oro 45
3.3.1.3. Electrodo de carbn vtreo modificado con nanopartculas de oro. 46
3.3.1.4. Electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro............. 47
3.3.2. Segunda parte: Comportamiento de los electrodos de oro con el mercurio en
solucin de HCl................ 48
3.3.2.1. Determinacin de potenciales en los que se registra el pico de mercurio con los
diferentes electrodos.............................. 48
3.3.2.2. Anlisis de repetitividad y sensibilidad de los electrodos en la deposicin y
redisolucin del mercurio en cido clorhdrico a diferentes potenciales y tiempos de
deposicin.................................................................................. 49
3.3.3. Tercera parte: Definicin de los parmetros de onda cuadrada para una solucin
de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m................................................ 51
3.3.3.1. Influencia de la variacin de la amplitud en la respuesta del electrodo en una
solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m 51
3.3.3.2. Influencia de la variacin de la frecuencia en la respuesta del electrodo en una
solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m. 52
3.3.3.3. Influencia de la variacin de los incrementos en la respuesta del electrodo en
vii
una solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m. 52
3.3.4. Cuarta parte: Definicin de los parmetros de onda cuadrada para
concentraciones menores de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m 53
3.3.4.1. Definicin del protocolo analtico. 53
3.4. Validacin del mtodo.. 54
3.4.1. Selectividad del mtodo.................................. 54
3.4.2. Lmite de deteccin y lmite de cuantificacin........... 55
3.4.3. Linealidad dentro del rango del trabajo........... 55
3.4.4. Precisin............ 55
3.4.5. Exactitud.................................. 56
3.4.6. Robustez del mtodo. 56
3.4.7. Incertidumbre del mtodo............ 56
3.4.8. Aplicabilidad del mtodo.. 56
3.4.9. Fijacin de objetivos para la validacin del mtodo.......... 57
3.5. Comparacin de los resultados obtenidos con el mtodo desarrollado con
los obtenidos por Absorcin Atmica.. 58
3.6. Recursos materiales.................. 58
3.6.1. Reactivos............... 58
3.6.2. Material de laboratorio............. 59
3.6.3. Equipos.. 60
3.7. Recursos tecnolgicos... 60
viii
CAPTULO IV
4. Resultados e interpretacin de resultados. 61
4.1. Primera parte: Preparacin, acondicionamiento y caracterizacin de los
electrodos................ 61
4.1.1. Electrodo impreso con nanopartculas de oro 61
4.1.2. Electrodo de carbn vtreo modificado con film de oro... 62
4.1.3. Electrodo de carbn vtreo modificado con nanopartculas de oro......... 63
4.1.4. Electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de
oro.......................................... 64
4.2. Segunda parte: Comportamiento de los electrodos de oro con el mercurio en
solucin de HCl................................. 66
4.2.1. Determinacin de potenciales en los que se registra el pico de mercurio con los
diferentes electrodos............................ 66
4.2.1.1. Electrodo impreso con nanopartculas de oro. 67
4.2.1.2. Electrodo de carbn vtreo modificado con film de oro. 68
4.2.1.3. Electrodo de carbn vtreo modificado con nanopartculas de oro 69
4.2.1.4. Electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro 70
4.2.2. Anlisis de repetitividad y sensibilidad de los electrodos en la deposicin y
deposicin............................................................................... 71
4.2.2.1. Anlisis estadstico de repetitividad y sensibilidad.................... 71
ix
4.2.2.2. Determinacin del potencial ptimo de deposicin........................ 75
4.2.2.3. Determinacin del tiempo ptimo de deposicin. 76
4.3. Tercera parte: Definicin de los parmetros de onda cuadrada para una
solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m............................................ 78
4.3.1. Influencia de la variacin de la amplitud en la respuesta del electrodo en una
solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m.. 78
4.3.2. Influencia de la variacin de la frecuencia en la respuesta del electrodo en una
solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m.................................... 80
4.3.3. Influencia de la variacin de los incrementos en la respuesta del electrodo en
una solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m 82
4.4. Cuarta parte: Definicin de los parmetros de onda cuadrada para
concentraciones menores de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m.. 85
4.5. Validacin del mtodo........... 89
4.5.1. Selectividad del mtodo........................ 89
4.5.2. Determinacin del lmite de deteccin y lmite de cuantificacin...... 90
4.5.3. Linealidad dentro del rango del trabajo........ 91
4.5.4. Precisin.. 93
4.5.5. Exactitud................................ 95
4.5.6. Robustez del mtodo.. 96
4.5.7. Incertidumbre del mtodo.. 96
4.5.8. Aplicabilidad del mtodo... 97
4.5.9. Declaracin de la validacin del mtodo.......... 98
x
4.6. Comparacin de los resultados obtenidos con el mtodo desarrollado con
los obtenidos por Absorcin Atmica 99
CAPTULO V
5.1. Conclusiones. 101
5.2. Recomendaciones. 103
5.3. Materiales de referencia 103
5.3.1. Referencias Bibliogrficas. 103
5.3.2. Bibliografa. 107
ANEXOS
Anexo I: Datos experimentales...... 110
I.1. Anlisis de repetitividad y sensibilidad de los electrodos en la deposicin y
deposicin.............................. 110
I.1.1. Grficos de la determinacin del potencial ptimo de deposicin........ 110
I.1.2. Grficos de la determinacin del tiempo ptimo de deposicin 113
Anexo II: Validacin... 116
II.1. Valores obtenidos para la determinacin del lmite de cuantificacin. 116
II.2. Valores obtenidos para la determinacin de repetibilidad.... 117
xi
II.3. Anlisis de varianza........ 121
II.4. Valores obtenidos para el anlisis de robustez del mtodo... 123
Anexo III: Fotografas del equipo utilizado en la investigacin... 126
xii
LISTA DE GRFICOS
Pg.
2.1. Emisin de mercurio por pases................. 8
2.2. Fuentes de contaminacin con mercurio.. 9
2.3. Doble capa elctrica.. 14
2.4. Rangos de trabajo mximo segn el tipo de electrodo 17
2.5. Esquema de un electrodo impreso con nanopartculas de oro............... 19
2.6. Imagen SEM de un microalambre de oro. 20
2.7. Equipo para mediciones voltametrcas. 24
2.8. Voltametra lineal.......... 26
2.9. Voltametra lineal del proceso reversible Fe2+/Fe3+. 27
2.10. Voltametra cclica................ 27
2.11. Voltametra cclica: Programa de potencial, voltamograma y perfiles de
concentracin................ 29
2.12. Diagrama de perturbacin DPV............... 30
2.13. Voltametra de onda cuadrada.. 31
2.14. Recta de calibracin analtica.. 35
2.15. Adicin de estndares....... 36
2.16. Recta por adicin de estndares............... 36
3.1. Imagen del electrodo impreso con nanopartculas de oro.............. 41
3.2. Imagen SEM del electrodo de trabajo.. 41
3.3. Cuadro de dialogo del potenciostato CHI1220B.. 42
xiii
3.4. Cuadro de dialogo: Hardware test del potenciostato CHI1220B. 45
3.5. Imagen SEM de las nanopartculas de oro............ 47
4.1. Imagen del microscopio electrnico de la fibra de carbn con nanopartculas de
oro ................................. 65
4.2. Desviacin relativa estndar en funcin del potencial y el tiempo de deposicin
para el electrodo impreso con nanopartculas de oro. 72
para el electrodo de carbn vtreo modificado con film de oro... 73
para el electrodo de carbn vtreo modificado con nanopartculas de
oro. 74
para el electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de
oro. 75
4.6. Corrientes de pico en funcin del potencial para cada electrodo. 76
4.7. Corrientes de pico en funcin del tiempo para cada electrodo. 77
4.8. Comparacin de las desviaciones relativas estndar obtenidas variando la
amplitud. 79
4.9. Comparacin de las desviaciones relativas estndar obtenidas variando la
frecuencia................. 81
4.10. Comparacin de las desviaciones relativas estndar obtenidas variando los
incrementos .......... 83
xiv
LISTADO DE TABLAS
Pg.
Tabla 4.1. Potenciales de oxidacin y reduccin del oro para cada
electrodo. 66
Tabla 4.2. Potenciales de deteccin de mercurio para cada electrodo.. 71
Tabla 4.3. Desviacin relativa estndar para reas y alturas con las tcnicas SLV
y SWV para el electrodo impreso de oro........... 71
Tabla 4.4. Desviacin relativa estndar para reas y alturas con las tcnicas SLV
y SWV para el electrodo de carbn vtreo modificado con film de
oro.. 72
Tabla 4.5. Desviacin relativa estndar para reas y alturas con las tcnicas de
SLV y SWV para electrodo carbn vtreo modificado con nanopartculas de oro 73
Tabla 4.6. Desviacin relativa estndar para reas y alturas con las tcnicas de
SLV y SWV para electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de
oro.. 74
Tabla 4.7. Corrientes de pico (Ip) obtenidas para los 4 electrodos investigados a
distintos potenciales... 75
Tabla 4.8. Corrientes de pico (Ip) obtenidas para los 4 electrodos investigados a
distintos tiempos. ... 77
Tabla 4.9. Parmetros ptimos para la determinacin de 100 ppb de Hg por SWV
segn cada tipo de electrodo.. 77
xv
Tabla 4.10. Valores de desviacin relativa estndar del barrido realizado por SWV
variando la amplitud............... 79
variando la frecuencia.... 81
variando los incrementos........ 83
Tabla 4.13. Resumen de los valores obtenidos para la determinacin del lmite de
cuantificacin 90
Tabla 4.14. Resumen de las medias de concentracin... 93
Tabla 4.15. Anlisis de varianza de un factor para cada nivel de concentracin de
mercurio............. 94
Tabla 4.16. Datos de concentracin de mercurio obtenidos en 3 das de anlisis
con la muestra de referencia y el estndar 95
Tabla 4.17. Componentes para el clculo de la incertidumbre.. 96
Tabla 4.18. Resultados obtenidos en el anlisis de muestras de aguas naturales y
residuales.... 98
Tabla II.1. Datos experimentales de altura y rea obtenidos a diferentes
concentraciones de mercurio.. 116
Tabla II.2. Datos experimentales de altura obtenidos a diferentes concentraciones
en los 5 das de anlisis.. 117
Tabla II.3. Datos de concentracin de mercurio obtenidos en cada medicin
realizada en los 5 das de anlisis... 119
xvi
Tabla II.4. Datos de concentracin de mercurio obtenidos en 5 das en el rango de
trabajo. 121
Tabla II.5. Anlisis de varianza de un factor. 122
xvii
RESUMEN
La mayora de las tcnicas empleadas en la determinacin de mercurio estn

basadas en absorcin atmica o fluorescencia atmica que requieren de equipos muy caros
y complejos, sin embargo, bajas concentraciones de mercurio pueden determinarse por
mtodos electroqumicos, los mismos que son rpidos, de fcil control y econmicos.
Al combinar las tcnicas de voltametra de redisolucin andica y voltametra de

onda cuadrada se consigue depositar el Hg(0) en la superficie metlica de un electrodo con
el objeto de reoxidarlo posteriormente a Hg(II) y mediante un barrido andico se obtiene
un pico de corriente que puede correlacionarse con la concentracin del analito en la
solucin y es representado en un voltamograma.
La presente investigacin propone la utilizacin de un nuevo mtodo utilizando un

electrodo de fibra de carbn de dimetro menor a 20 sobre el que se electrodepositan
nanopartculas de oro. Despus de optimizar las condiciones voltamtricas se consigue un
lmite de deteccin de 2 ppb y se puede cuantificar Hg(II) a partir de 5 ppb, con un tiempo
de deposicin de 30 segundos, sin encontrar ninguna interferencia en las condiciones
empleadas. En muestras de aguas residuales analizadas previa digestin se obtuvo un
porcentaje de recuperacin entre 96.0 y 98.75%.
DESCRIPTORES: MERCURIO, ELECTRODO DE FIBRA DE CARBN,

NANOPARTCULAS DE ORO, VOLTAMETRA DE REDISOLUCIN ANDICA,
VOLTAMETRA DE ONDA CUADRADA, BARRIDO ANDICO,
VOLTAMOGRAMA.
xviii
ABSTRACT
Most techniques used in the determination of mercury are based on atomic

absorption or atomic fluorescence, which require highly expensive and complex equipment.
However, low concentrations of mercury can be determined by electrochemical methods,
which are fast, easy to control and inexpensive.
By combining anodic stripping voltammetry and squarewave voltammetry, we can

manage to deposit Hg(0) on the metallic surface of an electrode with the goal of re-
oxidizing it later Hg(II); and by performing an anodic sweep, we obtain current peaks that
can be correlated with the concentration of the analyte in the solution and represented in a
voltammogram.
This research proposes applying a new method using a carbon fiber electrode with a
diameter under 20 , on which gold nanoparticles are electrodeposited. After optimizing
the voltammetric conditions, we achieve a detection limit of 2 ppb, and Hg(II) can be
quantified as of 5 ppb, with a 30-second deposition period, without there being any
interference on the conditions applied. There was a recovery rate between 96.0 and 98.75%
in wastewater samples analyzed after digestion.
KEYWORDS: MERCURY, CARBON FIBER ELECTRODE, GOLD

NANOPARTICLES, ANODIC STRIPPING VOLTAMMETRY, SQUAREWAVE
VOLTAMMETRY, ANODIC SWEEP, VOLTAMMOGRAM
xix
INTRODUCCIN
El mercurio es uno de los metales con mayor impacto sobre los ecosistemas y que
desde hace varias dcadas ha sido objeto de innumerables estudios por parte de
investigadores en diversas reas. Este elemento puede aparecer en el ambiente bien sea por
fenmenos naturales o por actividades humanas, lo cual ha ocasionado su acumulacin y
toxicidad, afectando la integridad de los ecosistemas y la salud del hombre (Ministerio del
Ambiente, 2008).
Debido a la peligrosidad del mercurio el Consejo de Administracin del Programa

de las Naciones Unidas para el Medio Ambiente (PNUMA), considera que se deben tomar
acciones a nivel internacional para reducir los riesgos a la salud humana y al ambiente,
asimismo, inst a todos los pases a fijar objetivos y adoptar medidas nacionales para
determinar las poblaciones y los ecosistemas expuestos y reducir las liberaciones
antropgenas de mercurio. Para esto fue suscrito el Convenio de Minamata en 2013.
En la actualidad se vuelve prioritario y urgente el tener claramente definidos los

niveles de mercurio existentes en el Ecuador, de ah la necesidad de contribuir a su rpida y
fcil cuantificacin.
El control eficiente de los niveles de mercurio en el medio ambiente en lugares

remotos requiere de mtodos de anlisis simples, rpidos y confiables (Pinilla Gil et al,
2011). Las tcnicas basadas en absorcin atmica y fluorescencia son las ms empleadas
actualmente, con la dificultad de que la instrumentacin necesaria es muy costosa y difcil
de transportar, las muestras necesariamente deben ser llevadas al laboratorio para su
anlisis.
Tomando en cuenta que la estrategia analtica ideal para analizar elementos txicos
en el medio consiste en hacer su determinacin directa in situ y de manera rpida, las
tcnicas electroanalticas se presentan como una alternativa muy atractiva para el monitoreo
medioambiental de mercurio.
xx
Dentro de las tcnicas electroanalticas existe un grupo de mtodos llamados
Voltamperomtricos con los cuales se observan los cambios en intensidad de corriente en
un perodo de tiempo en funcin del potencial aplicado a la clula electroqumica en donde
el potencial y la intensidad se miden simultneamente y son muy efectivos para el anlisis
de trazas. Para aplicar tcnicas voltamtricas se necesita un sistema constituido por tres
partes bsicas: una celda, un potenciostato y un registrador (Basil y Galen, 1987). Una de
estas tcnicas es la Voltametra de Redisolucin Andica, con esta, se consigue la
deposicin del mercurio aun en cantidades muy bajas en la superficie de un electrodo; con
un posterior barrido aplicando un potencial andico que puede ser lineal o de onda
cuadrada, se reoxida o redisuelve nuevamente al mercurio, el mismo que aparece como un
pico de corriente, cuantificable representado en un voltamograma.
Varios tipos de electrodos se pueden emplear en estas tcnicas pero se considera que
electrodos de dimetros pequeos son ms eficientes que los macroelectrodos, ya que el
espesor de la capa de difusin es mayor que el dimetro de los electrodos por lo que las
especies electroactivas estn siempre presentes en la superficie del mismo durante la
deposicin sin necesidad de agitacin (Oldham et al. 2012). Los ltimos avances
electroqumicos estn basndose en el uso de electrodos impresos, reemplazando a los
electrodos convencionales: slidos, de film, etc. (Pinilla Gil et al. 2011).
El mtodo de voltametra de redisolucin andica a ms de servir para cuantificar

mercurio de manera segura, sencilla y rpida, tambin tiene la ventaja de que la cantidad de
reactivos empleados es mnima, as como la cantidad de muestra requerida para el anlisis,
reduciendo los niveles de desechos y contaminantes generados por los mismos.
xxi
CAPTULO I
1. EL PROBLEMA
1.1. Definicin del problema
Actualmente la Qumica Analtica se encuentra atravesando un perodo muy

interesante debido al desarrollo de nuevas y cada vez mejores tcnicas analticas que
permiten la deteccin de niveles muy bajos de especies qumicas, as como incrementar el
nmero de datos obtenidos; gracias a los bajos lmites de deteccin que alcanzan algunos
instrumentos, ahora se pueden detectar algunos contaminantes que hasta hace poco tiempo
no era posible hacerlo (Manahan, 2007).
En las ltimas dcadas han tomado popularidad los trminos Qumica

Verde Qumica Sustentable: la qumica de los productos y procesos qumicos no
contaminantes del medio ambiente, que producen un beneficio para la humanidad y que
son econmicamente provechosos para el mercado (Mirfico, 2005). Los mtodos
electroqumicos son particularmente verdes, el reactivo es el electrn y la ausencia de
subproductos convierte a estas tcnicas en mtodos atractivos tanto para la sntesis de
productos farmacuticos, agroqumicos, productos naturales complejos, etc., as como para
el anlisis de estos y muchos otros productos y elementos qumicos, entre ellos el
mercurio.
La presente investigacin se centra en la electroqumica analtica, cuyo objeto es

cuantificar cantidades muy bajas de mercurio.
El mercurio y sus compuestos son sumamente txicos especialmente para el

sistema nervioso en desarrollo. El nivel de toxicidad en seres humanos y otros organismos
vara segn la forma qumica, la cantidad, la va de exposicin y la vulnerabilidad de la
persona expuesta.
Los seres humanos pueden estar expuestos al mercurio de diversas formas incluido
entre otras a travs del consumo de pescado, los usos ocupacionales y domsticos, las
amalgamas dentales y las vacunas que contienen mercurio.
1
UNITAR (Instituto de las Naciones Unidas para la formacin y la investigacin)
con el apoyo financiero de la EPA (Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados
Unidos) y el Ministerio de Ambiente del Ecuador suscribieron un memorando de
entendimiento para desarrollar el Proyecto Piloto en Refuerzo de un Inventario y Gestin
de Riesgos en la Toma de Decisin sobre el mercurio: una Contribucin hacia la Alianza
Global sobre mercurio (Ministerio del Ambiente, 2008).
Segn el Ministerio de Ambiente en el Ecuador las emisiones de mercurio en el

pas al 2005 estn en un rango entre 56.75 t Hg/a y 108.70 t Hg/a. Estas emisiones son
producidas por el uso de manmetros y medidores de presin, extraccin y procesamiento
de oro, vertederos informales de desechos, rellenos sanitarios, pilas con mercurio,
extraccin, refinacin y uso de aceite mineral crudo o petrleo, produccin de cemento,
entre otras.
Las principales liberaciones e impactos del mercurio hacia el agua en el Ecuador se

relacionan con 9 cuencas hidrogrficas correspondientes a los ros Esmeraldas, Chone,
Portoviejo, Guayas, Siete, Puyango-Tumbes, Nambija, Paute, Pastaza y Coca (Ministerio
de Ambiente, 2008).
1.2. OBJETIVOS
1.2.1. Objetivo General:
Desarrollar un mtodo voltamperomtrico para la determinacin de mercurio en agua.
1.2.2. Objetivos Especficos:
a) Desarrollar el mtodo.
b) Definir el mejor electrodo para la determinacin y cuantificacin de mercurio en
agua.
c) Validar el mtodo desarrollado.
d) Determinar si los resultados obtenidos son comparables a los alcanzados por
Absorcin atmica.
2
e) Desarrollar nuevos electrodos y aplicar tecnologas de vanguardia como la de
fabricacin de nanopartculas.
1.3. HIPTESIS
En la presente investigacin se formula la siguiente hiptesis de trabajo:
Hiptesis HT: Se puede cuantificar concentraciones menores a 100 ppb (partes por
billn) de mercurio en aguas residuales por voltametra de redisolucin andica.
3
CAPTULO II
2. FUNDAMENTO TERICO
2.1. El Mercurio
2.1.1. Consideraciones Generales
El mercurio est presente en el medio ambiente de diversas formas y su

transformacin de una forma a otra puede ocurrir en sedimentos, agua y aire siendo
catalizada por variados sistemas biolgicos.
Todas las formas qumicas del mercurio tienen una gran variedad de aplicaciones
en la industria y en la agricultura, con propiedades txicas intrnsecas, esto obliga a valorar
su riesgo ambiental o toxicolgico. Los compuestos de mercurio en solucin acuosa son
qumicamente complejos, dependiendo del pH, alcalinidad, potencial redox y otras
variables, es posible que forme una gran variedad de especies qumicas.
Segn el PNUMA (Programa de las Naciones Unidas para el medio ambiente) los
niveles de mercurio han aumentado considerablemente desde el inicio de la era industrial
en todo el mundo, en cantidades que afectan desfavorablemente a los seres humanos y la
vida silvestre. La actividad del hombre ha generalizado los casos de exposicin, y las
prcticas del pasado han dejado un legado de mercurio en vertederos, los desechos de la
minera y los emplazamientos, suelos y sedimentos industriales contaminados.
Hasta las regiones donde se registran emisiones mnimas de mercurio, como el

rtico, se han visto adversamente afectadas debido a su transporte transcontinental y
mundial (Maz, 2008). La fuente ms importante de contaminacin con mercurio son las
emisiones al aire, pero se producen tambin emisiones de mercurio de diversas fuentes que
van directamente al agua y a la tierra.
En general, en todo el planeta hay indicios de que las emisiones antropgenas de

mercurio han generado ndices de deposicin actuales entre 1.5 y 3 veces mayores a los
existentes en la poca preindustrial. Dentro de las reas industriales y en sus
4
inmediaciones los ndices de deposicin han aumentado de 2 a 10 veces durante los
ltimos 200 aos (Maz, 2008).
2.1.2. Efectos del mercurio en la salud
El mercurio elemental y el metilmercurio producen efectos txicos en el sistema

nervioso central y perifrico. La inhalacin de vapores de mercurio puede producir efectos
nocivos sobre el sistema nervioso, el aparato digestivo, el sistema inmunitario, los
pulmones y los riones (disfuncin renal), y puede causar la muerte. Los sntomas neurales
incluyen retraso mental, crisis convulsivas, deficiencias visuales y auditivas, retraso del
desarrollo, trastornos del lenguaje, prdida de la memoria, cefaleas frecuentes, trastornos
del sueo, fatiga inusual y temblores. Se ha informado de que la exposicin crnica al
mercurio en los nios causa un sndrome caracterizado por un enrojecimiento doloroso de
las extremidades (acrodinia) (OMS, 2013).
Un estudio de mineros del oro en Ecuador revel una asociacin entre las
concentraciones sanguneas y urinarias de mercurio y el aumento de los temblores, el
tiempo de reaccin y la inestabilidad postural (OMS, 2013).
2.1.3. Propiedades Fsicas y Qumicas del Mercurio
El mercurio es el nico elemento lquido a temperatura ambiente, su punto de

fusin es el ms bajo de todos los metales (- 38,87 C) y su punto de ebullicin es de
356,58 C; tiene una densidad de 13.456 g/mL a 25 C, por lo que se considera un metal
pesado. Su smbolo qumico es Hg, su nmero atmico es 80 y su peso atmico es 200,59
u.m.a.
A 20 C la presin de vapor es 0.00212 mm de Hg, de tal forma que un recipiente

abierto con mercurio metlico y expuesto en un ambiente cerrado, puede desprender
suficiente vapor para saturar la atmsfera. Los vapores de mercurio son incoloros e
inodoros.
El mercurio posee el don de la ubicuidad, de manera que cualquier producto, ya sea

natural o artificial, contendr al menos trazas de mercurio; esto es debido tanto a su
5
capacidad de amalgamacin con otros metales como al resto de propiedades fsico-
qumicas (Jimnez, 2009).
El mercurio puede existir en tres estados de oxidacin estables: mercurio elemental

[Hg0 / Hg(0)], ion mercurioso [Hg22+ / Hg(I)] e ion mercrico [Hg2+ / Hg(II)], adems tiene
siete istopos estables (196, 198, 199, 200, 201, 202, 204) y cuatro istopos radiactivos
inestables (194, 195, 197, 203) y las formas orgnicas (compuestos organometlicos).
Estas distintas formas poseen propiedades muy diferentes dependiendo del estado
de oxidacin que presente, como por ejemplo en cuanto a su solubilidad en agua y en
lpidos, su volatilidad, etc., lo cual va a determinar su distinta presencia en cada uno de los
compartimentos del medio ambiente, as como su toxicidad, siendo las ms txicas los
compuestos orgnicos, especialmente por su posibilidad de bioacumulacin a lo largo de la
cadena trfica (Maz, 2008).
Entre las propiedades qumicas ms importantes que caracterizan las especies de

mercurio (II) y las alquilmercricas (RHg) aparece su alta afinidad para formar enlaces
covalentes con el azufre. Esta propiedad es la que explica la mayor parte de las
propiedades biolgicas del metal. Cuando el azufre est en forma de grupos sulfidrilos, el
mercurio divalente reemplaza el tomo de hidrgeno para formar mercaptanos, X-Hg-SR
y Hg(SR)2. Los mercuriales orgnicos forman mercaptanos del tipo RHg-SR. Inclusive en
bajas concentraciones, los mercuriales pueden inactivar las enzimas, principalmente
aquellas con grupos sulfidrilos, interfiriendo en el metabolismo y funciones de la clula
(Ministerio de Ambiente, 2008).
2.1.4. Ciclo del mercurio
La dispersin y distribucin del mercurio entre los diferentes compartimentos del

medio ambiente, es decir, atmsfera, aguas, suelos y organismos vivos va a depender de
diversos factores, entre ellos se encuentran la accin de los agentes geolgicos externos,
que causan erosin, y los efectos climticos y medioambientales (Jimnez, 2009). El
mercurio es emitido a la atmsfera a partir de fuentes naturales y antropognicas en forma
de vapor elemental (Hg0), posteriormente precipitado por las lluvias que lo depositan en los
cuerpos de agua y finalmente en el sedimento, donde es metilado y luego bioacumulado
(Downs et al., 1998). Una vez liberado el mercurio tiene una gran movilidad y puede
6
circular entre el aire, el agua, los sedimentos, el suelo y la biota en diversas formas (Maz,
2008). Las emisiones actuales se aaden al fondo de mercurio existente en el mundo que
sigue movilizndose, depositndose en la tierra y el agua y volviendo a movilizarse.
2.1.5. Usos del mercurio
Una de las aplicaciones ms frecuentes del mercurio es como electrodo en la

electrlisis del cloruro de sodio para producir sosa custica y cloro gaseoso. Se calcula que
al menos 10 toneladas de mercurio son usadas en cada planta de procesamiento (Ministerio
de Ambiente, 2008).
Ciertos equipos electrnicos y elctricos como los interruptores o las lmparas

fluorescentes y espectrofotmetros UV tambin usan el mercurio como materia prima.
Tambin es usado en forma extensa en odontologa para elaborar amalgamas dentales. Los
compuestos de mercurio se usan en pinturas para evitar la proliferacin de hongos y para el
control de infecciones fngicas en semillas y en plantas bulbosas. Los usos militares
tampoco se escapan a este elemento ya que el alto poder detonante del fulminato mercrico
lo convierte en una materia prima til en este campo (Jimnez, 2008).
Otros usos del mercurio son la fabricacin de plsticos; instrumentos de medida

como barmetros, hidrmetros, termmetros; cosmticos, cremas y jabones, detergentes,
recubrimiento de espejos, as como su utilizacin en investigacin y en santera.
Uno de los usos del mercurio metlico, particularmente en Sudamrica, que ha

originado un impacto importante en el medio ambiente y en la salud de muchas
poblaciones, es su utilizacin en los procesos de extraccin del oro de manera artesanal
(Ministerio de ambiente, 2008).
2.1.6. El mercurio en el Ecuador
El Ecuador est en la lista roja en el mapa mundial. Es el cuarto pas

latinoamericano que emite ms mercurio en el mundo, superado por Colombia, Bolivia y
Per. En Ecuador al ao se dispersan 50 toneladas de este metal solo por la minera
artesanal de oro. Las cifras analizadas en el caso de Ecuador son de los aos 2005, 2006 y
2010.
7
En enero de 2013 aproximadamente 130 pases realizaron negociaciones para
reducir y eliminar a largo plazo la liberacin de mercurio (Diario el Universo, 2013).
Muchos de los gobiernos aceptaron el texto jurdicamente vinculante del Convenio de
Minamata sobre el mercurio. El artculo 7 y el anexo C del Convenio abordan la minera
aurfera artesanal y en pequea escala (MAAPE), refirindose a la preparacin de planes
nacionales acerca de la MAAPE, en particular una estrategia de salud pblica que incluye
la recopilacin de datos de salud, capacitacin del personal sanitario y sensibilizacin de
los establecimientos sanitarios (Organizacin Mundial de la Salud, 2013).
Grfico 2.1: Emisin de mercurio por pases
(El Universo, 2013)
A escala mundial, la MAAPE genera aproximadamente un 37% de las emisiones de

mercurio y es la mayor fuente de contaminacin del aire y el agua con este metal;
aproximadamente 15 millones de personas, incluidos unos 3 millones de mujeres y nios,
participan en el sector de la MAAPE en 70 pases, que se encuentran principalmente en
Asia, el frica subsahariana y Amrica Latina. Una segunda fuente de polucin de este
txico es la quema de carbn para la produccin de electricidad.
8
Grfico 2.2: Fuentes de contaminacin con mercurio
(ONU, 2010)
Para los mineros pequeos o informales, utilizar el mercurio en sus labores les
resulta barato, rpido y efectivo ya que se logra separar el 99% del oro mientras que con
otros qumicos, por ejemplo cianuro, apenas se recupera un 60%. Segn el estudio
denominado La pequea minera del oro: impactos en el ambiente y en la salud humana
en la cuenca del ro Puyango, sur del Ecuador, realizado entre los aos 2000 y 2007, se
comprob que los ros presentaban ndices elevados de mercurio, manganeso, plomo y
cianuro generados por la minera.
La ONU alerta de la presencia de mercurio en ros y lagos. As, se indica que en los
ltimos 100 aos se duplic la cantidad de mercurio presente en los 100 primeros metros
de profundidad de los ocanos; y que la concentracin de este txico aument un 25% en
las aguas profundas. Esto hace que los peces destinados para el consumo humano estn
ms expuestos a la contaminacin. Unas 260 toneladas de mercurio fueron a parar a los
ros y lagos por la deforestacin. El acuerdo mundial busca eliminar de los hogares los
productos que usan metal lquido, como termmetros y algunas lmparas fluorescentes
(Organizacin Mundial de la Salud, 2013). En Ecuador, a septiembre de 2014 se encuentra
elaborado el Reglamento y hasta que se emita la Normativa definitiva existe la disposicin
de no adquirir ningn dispositivo medico (termmetros, barmetros y tensimetros) que
contengan mercurio, los mismos que sern reemplazados con equipos electrnicos y
digitales, adicionalmente est prohibida la produccin, exportacin e importacin de este
metal hasta el ao 2020 (Diario El Comercio, 2014).
9
Una de las diferencias fundamentales entre el sector minero a gran escala de oro y
el sector de la MAAPE es que este ltimo no tiene un programa de manejo de residuos o, si
existe, es inadecuado. Algunos pases como Ecuador y Mongolia estn tratando de
solucionar este problema mediante la creacin de un sistema de manejo de residuos
centralizado.
2.2. Tcnicas de cuantificacin de mercurio
La determinacin de mercurio en aguas requiere la utilizacin de tcnicas analticas

muy sensibles. Las mejoras notables en las tcnicas analticas durante los ltimos aos han
aumentado la fiabilidad de los datos de manera significativa.
Para determinar los niveles de mercurio en el agua se han utilizado varias tcnicas
como la espectroscopia de absorcin atmica, la espectroscopia de emisin atmica,
espectrometra de masas con plasma acoplado inductivamente, la espectrometra de
fluorescencia atmica, la cromatografa lquida de alto rendimiento de fase inversa,
tcnicas voltamtricas como la voltametra de redisolucin andica y la voltametra
adsortiva de redisolucin catdica. Tambin se recomienda el uso de la espectrometra de
absorcin atmica de vapor fro (CV-AAS) para el anlisis de este elemento en muestras
de agua (Cabrera, 2007).
La presente investigacin se centra en el uso de tcnicas voltametrcas por lo que es

importante conocer sus fundamentos.
2.2.1. Tcnicas Voltamtricas
La Voltametra abarca un grupo de mtodos electroanalticos en los cuales la

informacin sobre el analito bajo estudio se obtiene a partir de curvas de corriente en
funcin del voltaje, es decir, del potencial aplicado, realizado bajo condiciones que
favorecen la polarizacin del electrodo de trabajo. Esta tcnica utiliza un juego de
electrodos que se sumergen en una solucin electroltica, que es donde se realiza la
medida de la corriente que circula entre los electrodos mientras se aplica un barrido de
potencial.
10
Estas tcnicas se inician con el descubrimiento de la Polarografa por 1920, tcnica
que utiliza bsicamente un microelectrodo de goteo de mercurio (EGM). Posteriormente, a
partir de 1960 empiezan a aparecer aparatos comerciales de bajo costo, lo que ha permitido
el creciente inters por stas tcnicas para el anlisis cualitativo y cuantitativo de una gran
cantidad de especies orgnicas e inorgnicas (Skoog y West, 1984).
Antes de hacer referencia a estas tcnicas es necesario comprender algunos

conceptos y fundamentos de la electroqumica analtica.
2.2.1.1. Electroqumica Analtica
El fundamento de una reaccin REDOX es el intercambio de electrones entre dos o

ms especies, generando especies oxidadas y reducidas, segn se aprecia en las siguientes
ecuaciones:
OX1 + ne- RED1
RED2 OX2 + ne-
OX1 + RED2 OX2 + RED1
Este proceso puede darse utilizando un par de electrodos conectados por medio de
un conjunto de circuitos externos, en este caso uno de los electrodos actuar como nodo o
reductor y transfiere uno o ms electrones al electrodo metlico, pero para que se mantenga
equilibrio elctrico, el mismo nmero de electrones debe salir del electrodo y pasar por el
circuito externo. Al mismo tiempo el ctodo deber ceder igual cantidad de electrones al
oxidante, constituyndose un circuito elctrico completo; el alcance de este proceso
REDOX se puede controlar o comprobar desde la parte externa del circuito por medio de
operaciones electrnicas.
Esta capacidad de controlar el alcance y direccin de una reaccin por medios

elctricos, es lo que constituye la importancia de la electroqumica (Basil y Galen, 1987).
La electroqumica analtica, entonces, se ocupa de medir pequeas corrientes a bajos
11
voltajes (de miliamperios hasta mximo 2 voltios), que se controlan fcilmente gracias a la
moderna electrnica de circuitos integrados.
El electrodo donde ocurre la reduccin se conoce como ctodo mientras que en el

que ocurre la oxidacin se denomina nodo. Si se considera el siguiente ejemplo:
Cu / Zn2+(aq) // Cu2+(aq) / Zn
donde se grafican dos medias celdas y el smbolo // representa la unin entre dos lquidos
miscibles; segn la IUPAC, a la izquierda se representa la reaccin de oxidacin, o sea el
nodo y a la derecha la reaccin de reduccin, o el ctodo. El potencial de una celda
electroqumica se calcula de los potenciales de reduccin de cada media celda, por
convencin se tiene que:
E celda = E ctodo E nodo
Estos potenciales se obtienen de la Ecuacin de Nernst, la misma que relaciona las

actividades de las especies involucradas con el potencial de electrodo E, o de la media
celda y el potencial estndar de electrodo E:
Donde:
E = potencial estndar
T = temperatura absoluta 298 K
R = constante de los gases: 8,31 J/K.mol
n = nmero de electrones transferidos
F = constante de Faraday: 96.485 C/mol
aox = actividad de la especie oxidante
ared = actividad de la especie reductora
12
A menudo es til emplear concentraciones en vez de actividades y la ecuacin se
representa como:
El potencial de una celda electroqumica se considera siempre positivo, y representa

la diferencia de potencial que se puede medir fsicamente entre los electrodos (Skoog,
2001).
Dependiendo de la naturaleza del instrumento externo empleado se definir cual

electrodo acta como ctodo y cual como nodo, as como la direccin de la reaccin.
Estos instrumentos pueden ser pasivos, cuando slo permiten o impiden el paso de
electrones, es decir, son espontneos o pueden ser activos cuando controlan el flujo de
electrones, se puede forzar este movimiento en la direccin espontnea o a la inversa,
incluso en ambas direcciones producindose un intercambio peridico entre nodo y
ctodo. Segn Basil y Galen (1987): Si la celda se deja sin un instrumento externo de
control, esta mostrar una diferencia de potencial, E, entre sus electrodos, indicando la
tendencia de los electrones a circular fuera de la celda (pg. 15).
Es importante conocer las variables de las que dependen las reacciones

electroqumicas, que resultan de la interaccin de la energa (Intensidad o potencial) con la
materia (especie electroactiva) y son cuatro:
1. Intensidad que circula por el electrodo de trabajo (I)

2. Potencial adquirido por dicho electrodo (P)
3. Concentracin de la especie electroactiva en disolucin (C)
4. Tiempo (t)
2.2.1.2. Cintica electroqumica
Es fundamental conocer la relacin existente entre las propiedades de la interfase

metal-solucin y la medicin del voltaje, corriente e impedancia. El potencial se puede
definir como el trabajo necesario para traer una unidad de carga desde una gran distancia
13
(el infinito) hasta el interior de la fase. La composicin de la solucin no es igual en el
seno de la misma que en la interfase.
Grfico 2.3: Doble capa elctrica
(Bastos & Tatsuo, 2001)
La existencia de cargas acumuladas a ambos lados de la interfase de las soluciones

de los electrodos se conoce como la doble capa elctrica, si se asume que el electrodo
tiene exceso de cargas sean positivas o negativas, es necesario compensar electrnicamente
este exceso formando 3 zonas inicas en la solucin: una capa de iones que tocan la
superficie del electrodo, que es el plano de mayor aproximacin y pasa por el centro de los
iones, se conoce como plano interior de Helmholtz (IHP); la siguiente capa de iones se
denomina capa exterior de Helmholtz (OHP), que es donde se encuentran la mayora de
cationes y algunos aniones y finalmente existe una capa difusa de cargas mixtas que se
extienden en el cuerpo de la solucin (Basil y Galen, 1987), la misma que depende de la
cantidad del soluto y vara su espesor segn la concentracin. El IHP y el OHP forman la
llamada capa compacta de cargas, sta es sujetada con fuerza por el electrodo y es
independiente de la concentracin.
La capacitancia de la doble capa se determina por la combinacin de la capacitancia

de la capa compacta en serie con la de la capa difusa.
14
2.2.1.3 Elementos de un anlisis voltamtrico
En un anlisis voltamtrico encontramos 3 elementos: electrodos, electrolito de

soporte y barrido de potencial.
I. Electrodos
En las mediciones electroanalticas un elemento fundamental son los electrodos,

estos son de 3 tipos:
I.I. Electrodo de referencia. Su potencial debe ser constante y no debe sufrir

cambios entre los experimentos. Debe ser estable con respecto al tiempo y
temperatura. Su potencial no debe experimentar cambios cuando la corriente
necesaria para efectuar una medicin pasa por el electrodo. Los electrodos de
referencia se pueden obtener comercialmente en una unidad de construccin que
incluya la membrana porosa. (Basil y Galen, 1987). Entre los ms comunes se
pueden citar:
Electrodo de hidrgeno. Consiste en una barra de aluminio platino

sumergida en una solucin acuosa de iones H+ de actividad fija a la cual se
le burbujea hidrgeno puro a presin constante.
Electrodo de calomel. Compuesto por mercurio elemental y Hg2Cl2 en

contacto a travs de una membrana porosa con una solucin de KCl. La
reaccin del electrodo est dada por la ecuacin:
Hg2Cl2(s) + 2e- 2Hg(l) + 2Cl-
El potencial de esta celda vara de acuerdo a la concentracin de cloruro.

Comnmente se emplea una solucin saturada de KCl y en estas
condiciones su potencial es constante y equivalente a 0,241 V (Skoog y
West, 1984).
15
Electrodo de Ag/AgCl. Formado por un alambre de plata en contacto por
medio de una membrana porosa con una solucin de AgCl en
concentracin de 1M a 3M. En estas condiciones su potencial es constante
y equivalente a 0,2224 V. La reaccin del electrodo est dada por la
ecuacin:
AgCl(s) + e- Ag(s) + Cl-
I.II. Electrodo indicador o de trabajo. Es donde ocurre la oxidacin o

reduccin, puede actuar como nodo o como ctodo. Es el que determina el
rango y la tcnica voltamtrica a ser aplicada; est constituido por una
superficie slida que puede ser de oro, platino, carbn vtreo o mercurio, entre
otras. Si la superficie es pequea se facilita la medicin del potencial.
Debe ser un conductor electrnico y electroqumicamente inerte (no generar

corriente en respuesta al potencial aplicado) en un amplio rango de potencial
(ventana de potencial).
Escoger el material depender de la ventana de potencial que se requiera

(por ejemplo, el mercurio puede ser usado solo para potenciales negativos
debido a la oxidacin de este a potenciales positivos), as como tambin de la
velocidad de transferencia de electrones (una transferencia lenta puede afectar
la reversibilidad de la reaccin), esta velocidad puede variar considerablemente
de un material a otro aun para el mismo analito, debido por ejemplo, a
interacciones catalticas entre el analito y especies electroactivas en la
superficie del electrodo.
Segn sea el elemento que conforma el electrodo se determinara el rango de

potencial a aplicar.
16
Grfico 2.4: Rangos de trabajo mximo segn el tipo de electrodo
(Garrido, 2011)
Tambin, se pueden considerar los siguientes grupos de electrodos de trabajo:
Tipo 0. Dentro de estos estn los constituidos por metales inertes y pares
redox ajenos al metal del electrodo, como por ejemplo: Pt / Fe2+, Fe3+ //;
Pt/H2(g), H+(ac)//.
Tipo 1. Metales en disolucin de sus iones, como por ejemplo:

Cu/CuSO4(ac) //; Ag/Ag+//; Ag/AgNO3//.
Tipo 2. Metales en contacto con una sal insoluble del ion del metal en una
disolucin de alguno de los iones de la sal, por ejemplo: Ag/AgCl(s)/Ag+ //;
Ag/AgCl(s)/Cl//; Pt/Hg(l)/Hg2Cl2(s)/KCl(ac)//.
Tipo 3. Metales en contacto con una sal insoluble formando complejos, se

usan para titulaciones complexomtricas, por ejemplo:
Cu/Pb/PbC2O4(s)/Ca2+//; Pt/Hg/HgEDTA2-/Cu2+, EDTA//.
Tipo 4. En este grupo estn aquellos que emplean cualquier otro material,
pueden ser de vidrio, de ion selectivo, etc.
17
En voltametra los electrodos de trabajo tienen una superficie muy pequea
(generalmente pocos milmetros cuadrados) lo que favorece su polarizacin y se los conoce
como microelectrodos.
Actualmente es posible construir electrodos de trabajo de radio del orden de 10

micras. Estos electrodos pueden ser construidos a partir de fibras de carbn, alambres de
platino, oro, entre otros elementos. Dado el pequeo tamao estos electrodos poseen
propiedades diferentes de los empleados convencionalmente. La corriente que circula es
del orden de los nanoamperios (1x10-9A) lo que permite que los experimentos se realicen
en condiciones especiales, por ejemplo en sistemas que presentan alta resistencia, o incluso
sin la presencia de electrolito soporte. La disminucin del rea activa trae tambin como
consecuencia una menor influencia de la doble capa elctrica, adems el espesor de la capa
de difusin es mayor que el dimetro de los electrodos por lo que las especies
electroactivas estn siempre presentes en la superficie del electrodo durante la deposicin
sin necesidad de agitacin.
Este tipo de electrodos son especialmente aptos para determinaciones in-vivo dado
el carcter prcticamente no destructivo de los mismos.
El principal inconveniente que tienen estos electrodos es la necesidad de medir

corrientes continuas tan pequeas que es necesario aislar el sistema de cualquier
interferencia elctrica ("ruido"). Para este propsito se debe realizar los experimentos en
una "caja de Faraday", esto es, dentro de una caja metlica que acta como escudo para el
ruido elctrico.
Dentro de los microelectrodos encontramos a los electrodos impresos, los que aun
siendo desechables ofrecen la posibilidad de re-utilizarlos obteniendo medidas en la misma
muestra o en diferentes muestras. De esta manera el tiempo de vida del mismo se
incrementa y los costos de anlisis pueden ser reducidos. La tinta es una de las principales
variables que influye en la conducta de este electrodo y es de crucial importancia porque la
misma se escoge de acuerdo al sustrato y al procedimiento para depositarla (temperatura,
tiempo, etc.); en electrodos impresos de oro la base de cermica es la ms ampliamente
utilizada como sustrato, pero materiales polimricos son tambin usados debido a su
flexibilidad y bajo costo.
18
Los electrodos impresos de oro estn siendo muy utilizados actualmente aunque el
uso de estos en los anlisis por redisolucin es limitado principalmente porque debido a
sobrevoltajes ms bien bajos de hidrgeno hay formacin de capas de xido o se disuelve
el oro a potenciales ms positivos de +0,9/+1 V vs Ag/AgCl.
Grfico 2.5: Esquema de un electrodo impreso con nanopartculas de oro
(Palchetti et al., 2005)
Si estos electrodos se aplican para la deteccin de mercurio, se debe tener cuidado

al escoger los potenciales de acondicionamiento, especialmente en medio de cloruros
donde la oxidacin del oro comienza a potenciales bajos, puede haber formacin de
complejos, es algunos casos las especies de cloruros de oro pueden precipitar, cubriendo
parcial o totalmente al electrodo.
Estudios previos han demostrado que los aniones de cloruro y otros se absorben
fuertemente a las superficie del electrodo de oro, al incrementar la concentracin de estos
aniones sobre valores ptimos, la altura de los picos de mercurio decrece, es decir,
disminuye la sensibilidad del electrodo de oro hacia el mercurio. Los estudios realizados
han demostrado que los electrodos impresos de oro son muy adecuados para la deteccin
de metales pesados.
Los electrodos impresos de carbn son usualmente activados para mejorar la

cintica de transferencia de electrones por aplicacin de potenciales andicos en diferentes
19
medios cidos o bsicos. En algunos estudios se recomienda que cada sensor sea tratado
previamente antes de ser usado por primera vez, mediante la aplicacin de cinco ciclos de
voltametra cclica entre un rango de potencial de 0 a 0,7V, con una velocidad de barrido
de 50 mV/s y un paso de potencial de 2,44 mV. Este proceso es necesario para obtener una
lnea base estable.
Otra muy buena alternativa que est en desarrollo es el uso de microelectrodos de

alambre, estos presentan las siguientes ventajas:
La sensibilidad permanece constante sin necesidad de agitacin debido a que la

capa de difusin se expande esfricamente.
La superficie del electrodo puede ser activada electroqumicamente y servir para

muchas mediciones.
La posibilidad de medir en medios de baja conductividad como agua dulce debido a

la resistividad reducida por unidad de rea.
Se requieren pequeos volmenes de muestras.
Los microelectrodos se pueden construir fcilmente a partir de un alambre metlico

de pequea longitud (oro, platino, plata o iridio) o de filamentos de carbn, sellado en un
capilar de vidrio o polietileno, y cuidadosamente pulido. Su longitud es de pocos
milmetros.
Grafico 2.6: Imagen SEM de un micro alambre de oro de 25 m antes del uso (izquierda) y despus del
uso por una semana de trabajo intensivo con altos potenciales de oxidacion a 0.9 V in 0.6 M NaCl
(derecha)
(Van den Berg & Salaun, 2006)

20
I.III. Electrodo auxiliar o contraelectrodo. Su funcin es cerrar el circuito
elctrico dentro de la celda electroqumica. Se emplea para hacer conexin
elctrica al electrolito, para de esta manera poder aplicar una corriente al
electrodo de trabajo; para su construccin suele emplearse un material inerte
(metal noble o grafito) para evitar su disolucin. Generalmente acta como
nodo cuando la celda se polariza (Garrido, 2011).
II. Electrolito de Soporte
Para evitar que el espesor de la capa difusa afecte a la capacitancia y a la medida de

la cada de potencial es necesario emplear un electrolito de soporte, el mismo que
contribuye al transporte de electricidad a travs de la solucin; debe cumplir con las
siguientes caractersticas:
Debe ser un electrolito inerte

Debe ser fardicamente inactivo
Debe tener alta pureza
No debe ser qumicamente reactivo con el analito o con los productos de su
electrolisis
Debe tener alta conductividad (baja resistencia elctrica)
Debe tener alta concentracin
La necesidad de que este deba disociarse hace que la mayor parte de electrolitos de
soporte sean cidos inorgnicos fuertes (cido clorhdrico, sulfrico o ntrico), sales
inorgnicas u orgnicas (cloruro de potasio, acetato de sodio) soluciones buffers de
cidos orgnicos.
Hay varios fenmenos de transporte para llevar las sustancias hacia el electrodo o
hacia la interfase electrolito-electrodo desde el seno de la disolucin, estos son:
Migracin
Difusin (segn las gradientes de concentracin)
Conveccin (agitacin)
En la mayora de los casos, la electrlisis se efecta bajo condiciones tales, que la
difusin sea el proceso fundamental en el transporte de la especie electroactiva; la
21
migracin y la conveccin se minimizan por la adicin de un exceso de electrolito soporte
y evitando el movimiento de agitacin y gradientes de temperatura.
III. Barrido de Potencial
Es un proceso en el que al aplicar un potencial durante un determinado tiempo, el

potenciostato explora sistemticamente las variaciones de ese potencial, reconocindolas
punto por punto. El proceso de barrido de potencial se explica por la ley de Nernst
considerando que la solucin analizada acta como un sistema redox reversible y sin
presencia de sobrepotencial. Para ello el intercambio de electrones entre el electrodo de
trabajo y la solucin debe producirse manera rpida de modo que la migracin de los iones
se produzca por difusin a travs de una capa que se mantiene constante. Adems, ser
necesario omitir los posibles procesos de adsorcin y reacciones colaterales (Garrido,
2011).
2.2.1.4 Mtodos para la medida de potenciales
Para poder realizar estas mediciones se pueden utilizar tres tipos de ensayos:
potenciomtricos, galvanoestticos y potencioestticos.
I. Potenciomtricos. El voltaje puede ser medido con un 1) Potencimetro, un

instrumento que utiliza un voltaje igual y opuesto para compensar el voltaje de la
celda y 2) Seguidor de voltaje, que reproduce simplemente el voltaje de la celda
por medios electrnicos (Basil y Galen, 1987). Para mediciones de alta precisin
se utiliza el potencimetro.
El fundamento del mtodo consiste en extraer de la celda una mnima cantidad de
corriente, equivalente a 10-9 A, necesaria para activar al galvanmetro en el caso
del potencimetro o para activar el circuito electrnico en el caso del seguidor de
voltaje, cantidad que no afecta las concentraciones obteniendo el potencial de
equilibrio con mucha precisin.
Para estos mtodos se necesitan dos electrodos, uno de referencia y uno de trabajo,
ya que el electrodo de referencia mantiene su potencial constante, cualquier
variacin registrada se debe a la contribucin del electrodo de trabajo.
22
II. Galvanoestticos. Permite el flujo de mayor cantidad de corriente la misma que
permanece constante y puede ser programada y lo que se mide es el voltaje. Se
necesitan los 3 electrodos en la celda, mientras se realiza la electrolisis hay
variacin del potencial en el electrodo de trabajo, este cambio puede ser medido
potenciomtricamente entre el electrodo de trabajo y el de referencia, el resto de
corriente circula entre el electrodo de referencia y el electrodo auxiliar. Los
resultados obtenidos se expresan en forma de una curva de voltaje contra corriente
o contra tiempo.
III. Potencioestticos. En estos mtodos el potencial permanece constante y se mide la

variacin de corriente. Por este motivo estos equipos tienen lmite de
funcionamiento ya que la corriente est restringida por la capacidad del suministro
de energa, esto se conoce como el desplazamiento de la corriente; un
potenciostato puede tener un desplazamiento de corriente de 1A, que es suficiente
para trabajos analticos, si se necesitaran mayores corrientes el sistema se saturara
lo que generara errores. Los resultados se expresan como una curva de corriente
en funcin del voltaje o del tiempo, a partir de la curva de pueden calcular las
concentraciones.
2.2.1.5. Instrumento para aplicacin de tcnicas voltamtricas
Para la aplicacin de tcnicas voltamtricas se requiere un sistema constituido por

tres partes bsicas: una celda, un potenciostato y el instrumento de interpretacin de
respuesta.
Potenciostato. Es el dispositivo electrnico que define el potencial a ser aplicado

al sistema y a su vez mide la corriente producida entre el electrodo de trabajo y el
auxiliar.
Celda. Puede construirse de vidrio o tefln, debe contener al sistema de electrodos.
Debe tener alta conductividad, debe permitir reducir la resistencia y mantener una
densidad de corriente uniforme.
Instrumento de interpretacin de respuesta. Generalmente es un ordenador por
medio del que se definen los parmetros con los que trabaja el potenciostato,
23
tambin permite registrar los valores de corriente obtenidos en el anlisis y los
resultados se pueden ver como un grfico de interpretacin analtica (Garrido,
2011).
Grfico 2.7: Equipo para mediciones voltamtricas
(Bard & Faulkner, 2012)
2.2.1.6. Clasificacin de las tcnicas electroqumicas
Estas se pueden clasificar segn:

a) La naturaleza de la medida
b) El porcentaje de transformacin electroltica de la sustancia a determinar
c) El rgimen de difusin del proceso
d) El rgimen de la seal elctrica empleada
Segn el rgimen de la seal elctrica empleada se distinguen cuatro tipos de
tcnicas:
Tcnicas elctricas en equilibrio. En las cuales no fluye corriente (I=0), en este grupo
estn las tcnicas potenciomtricas.
Tcnicas elctricas estacionarias. Agitar la solucin tiene un efecto significativo en

la corriente de respuesta debido a que influye en la velocidad a la que las molculas
electroactivas son transportadas desde el seno de la disolucin hasta la superficie del
electrodo (transporte de masa). En muchos experimentos voltamtricos no hay
agitacin y la nica forma de transporte de masa es por difusin, stas se conocen
como tcnicas en solucin estacionaria.
24
Permiten obtener relaciones entre la corriente y el potencial sin que aparezca el
tiempo como variable. Estas respuestas estacionarias pueden obtenerse sea con
microelectrodos o utilizando el electrodo de disco rotatorio (RDE).
Tcnicas elctricas peridicas. Se aplica una corriente o un potencial variable

peridicamente con el tiempo a una cierta frecuencia impuesta, obtenindose una
respuesta de potencial o corriente tambin peridica. El ms utilizado es el de
impedancia faradaica.
Tcnicas elctricas de transicin. Conocidas tambin como dinmicas, implican la

aplicacin de una perturbacin elctrica al electrodo de trabajo con el fin de provocar
una reaccin de transferencia de carga en la interfase electrododisolucin, es decir,
alejan el sistema electroqumico de una situacin inicial de equilibrio y estudian su
respuesta a dicho estimulo. Entre ellas se encuentran:
a) Tcnicas elctricas de corriente controlada. La perturbacin elctrica que se

aplica al electrodo consiste en una corriente o secuencia de corrientes constantes o
variables con el tiempo.
La respuesta es la variacin del potencial del electrodo de trabajo versus

electrodo de referencia frente al tiempo o cronopotenciograma.
Los ms utilizados son cronopotenciometra de corriente programada,

cronopotenciometra con inversin de la corriente y cclica y la
cronopotenciometra derivativa recproca. Si se aplica un potencial constante y se
analiza la respuesta corrientetiempo tenemos la cronoamperometra.
Si se aplican una secuencia de potenciales y en las diferentes respuestas

corriente-tiempo se muestrea la corriente a un tiempo fijo, para diferentes
potenciales, tenemos la voltametra de corriente muestreada.
25
b) Tcnicas elctricas de potencial controlado. La perturbacin elctrica que se
aplica al electrodo consiste en un potencial o secuencia de potenciales constantes o
variables con el tiempo. Entre estas estn:
i) Voltametra de barrido lineal (LSV)
Grfico 2.8: Voltametra Lineal
El potencial aplicado vara linealmente con el tiempo desde un potencial

inicial Ei hasta un potencial final E a una velocidad de barrido constante que viene
dada por v=dE/dt (Vs-1). El grfico resultante se llama voltamograma.
Estos lmites de potencial pueden tomar como valor mximo los limites de
estabilidad del agua (en medios acuosos) es decir desprendimiento de hidrgeno y
de oxigeno. Dichos valores dependen del material electrdico, del pH de la
disolucin, de la temperatura.
En disolventes no acuosos Ei y E vienen impuestos por el potencial de

descarga de los iones del electrolito de soporte. La variacin del potencial con el
tiempo se representa en el eje x y la intensidad en el eje y. En el siguiente grafico se
puede ver el voltamograma lineal para un proceso redox Fe3+ + 1e- Fe2+ cuyo
potencial formal es 0.460V.
26
Grfico 2.9: Voltamograma lineal del proceso reversible Fe2+/Fe3+
i) Voltametra cclica
Esta tcnica se basa en aplicar un barrido de potencial al electrodo de

trabajo tanto en el sentido directo como en el inverso, es decir realizando lo que se
denomina barrido triangular de potencial. Este programa de potencial se inicia en
un valor inicial Ei hasta un valor de corte denominado E.
Grfico 2.10: Voltametra cclica
(Alves, 2012)
27
Como resultado de esto se produce la oxidacin o reduccin de las especies
electroactivas presentes en la disolucin.
Hay cinco parmetros fundamentales en una ciclovoltamperometra, que

son:
1. El potencial inicial, Ei (V).
2. El potencial de pico E max (V).
3. El potencial mnimo aplicado E min (V).
4. El potencial final Ef (V).
5. La velocidad de barrido n (mV/s).
La intensidad registrada en cada instante se grafica frente al voltaje

aplicado, obtenindose as las curvas I/V (intensidad/potencial).
La intensidad que pasa a travs del electrodo de trabajo se puede

descomponer en:
Corriente fardica, provocada por la reaccin que est sucediendo en el

electrodo.
Corriente capacitiva, que se debe a que la celda se comporta como un
condensador.
Esta tcnica resulta de gran importancia en el campo de la electroqumica,

especialmente para estudios de procesos redox, mecanismos de reaccin,
propiedades electrocatalticas, estudio de intermediarios de reaccin, etc.
No tiene igual relevancia para determinaciones cuantitativas, sin embargo

mediante ensayos relativamente sencillos y rpidos es posible obtener un
importante conjunto de informaciones.
28
Grfico 2.11: Voltametra cclica: Programa de potencial, voltamograma
y perfiles de concentracin
ii) Voltametra de pulso normal (NPV)
Esta tcnica permite bajar el lmite de deteccin de una medida

voltamperomtrica debido al aumento sustancial de la relacin entre la corriente
fardica y la no-fardica permitiendo cuantificaciones de concentraciones del
orden de 10-8mol/L.
iii) Voltametra de pulso diferencial (DPV)
La voltametra de pulso diferencial, es una de las tcnicas electroanalticas

que alcanz una gran popularidad a partir de 1970. En esta tcnica, la forma de la
onda en la seal de excitacin, consiste en una serie de pulsos a manera de
escalera, donde el potencial de base aumenta gradualmente en pequeos intervalos
entre 10 y 100 mV; la amplitud de pulso, se mantiene constante con respecto al
potencial de base.
La corriente resultante del proceso electrdico se mide justo antes de la

aplicacin del pulso y al final de la aplicacin del mismo, de esta manera al
29
graficar la diferencia de corrientes obtenidas en funcin del potencial aplicado, se
obtienen respuestas tpicas como la mostrada en la figura 2.11, donde la
intensidad mxima de corriente (Ip) es proporcional a la concentracin de especies
reactantes.
Grfico 2.12: Diagrama de perturbacin DPV
(Alves, 2012)
La disminucin de la lnea base en el voltamperograma se entiende como el

resultado de las diferentes velocidades de respuesta entre la corriente capacitiva y
la fardica con respecto al potencial aplicado.
Cuando un potencial base es mucho menor al requerido para que se lleve a

cabo la reaccin electroqumica, la electrlisis presente es despreciable, por lo que
la corriente obtenida es prcticamente debida a la carga de la doble capa. Despus
de un tiempo, el potencial es cambiado bruscamente a un valor, mayor al anterior
(en cuanto corresponda a la reaccin de inters), lo cual provoca que tanto la
corriente capacitiva como la fardica aumenten; sin embargo, durante el tiempo
que dura el pulso, la corriente no fardica disminuye de forma muy rpida en
comparacin con la corriente debida a la reaccin electroqumica. Esto provoca
que en las cercanas del fin del pulso la mayor parte de la corriente obtenida sea
casi exclusiva al aporte fardico.
En consecuencia, se hace la diferencia entre la corriente observada justo

antes del pulso y aquella justo antes de que termine el aporte de la corriente
capacitiva (Baeza y Garca, 2011).
30
iv) Voltametra de onda cuadrada (SWV)
Esta tcnica consiste en un barrido de una serie de pulsos al que

adicionalmente se aplica una onda cuadrada de alta frecuencia. La voltametra de
onda cuadrada es la tcnica voltamtrica de ms reciente desarrollo, supera en
resultados a la voltametra lineal y a la de pulso diferencial en cuanto a definicin
del voltamograma. Mientras que en la voltametra de pulso diferencial la
corriente se mide antes y despus de la aplicacin de cada pulso, la voltametra de
onda cuadrada mide la corriente de respuesta al final de la aplicacin de dos
medias ondas, ya que la intensidad de corriente total resulta de la suma de dos
corrientes: andica (fase positiva del impulso, oxidacin) y catdica (fase negativa
del impulso, reduccin).
Grfico 2. 13: Voltametra de onda cuadrada: Se aplican al mismo

tiempo una serie de pulsos y una onda de alta frecuencia
Esta medida asegura que si la amplitud de la onda es pequea, durante la

primera media onda, el analito de inters puede ser reducido, mientras que en la
segunda media onda el analito puede ser oxidado. La suma de las dos corrientes
incrementa la sensibilidad de la tcnica por lo que las posibles interferencias
creadas por la accin de la corriente capacitiva son reducidas a niveles mnimos, a
tal punto que la aplicacin de esta tcnica alcanza los 5 microgramos por litro
31
(Garrido, 2011), resultando la sensibilidad de la SWV alrededor de dos a tres
veces superior a de la DPV. Dado que la SWV produce voltamogramas en
tiempos extremamente cortos, la vuelve adecuada para ser utilizada acoplada a
otras tcnicas instrumentales como, por ejemplo, a la cromatografa lquida por
deteccin de las especies que van siendo eluidas.
v) Voltametra de redisolucin (ASV)
Esta tcnica busca que un analito de inters A presente en una solucin se

deposite sobre la superficie de un electrodo, y tras un tiempo de reposo
(preconcentracin del analito) se obtenga un elemento P producto de la deposicin
(redisolviendo el analito depositado). El objetivo principal de la voltametra de
redisolucin es el mejorar la sensibilidad de deteccin del analito mediante la
preconcentracin del mismo.
Pueden existir dos tipos de tcnicas de redisolucin:
Catdica: El ion se reduce mediante un barrido catdico de potencial.

Andica: Durante la cual el electrodo de trabajo acta como ctodo en la
deposicin y como nodo durante la medida de la corriente. El potencial de
reduccin normalmente usado es 0,3 a 0,5V ms negativo que el potencial
estndar (E) del ion metlico ms fcilmente reducible a ser determinado. El
ion metlico alcanza el electrodo por difusin y conveccin. La duracin de la
deposicin depende de la concentracin del ion metlico en estudio,
normalmente para una concentracin de aproximadamente 10-7mol/L se tarda
30 segundos. Al trmino de la deposicin la fuerza de conveccin debe ser
detenida, la etapa siguiente consiste en aplicar un potencial andico, que puede
ser lineal ms sensible (de pulso diferencial o de onda cuadrada); el potencial
del pico es usado para identificar el ion metlico en la muestra y la corriente de
pico es usada para cuantificar el analito. Durante la etapa de la redisolucin el
analito del microelectrodo se desprende a un potencial caracterstico. En todos
los anlisis de redisolucin se debe tener un cuidadoso control del tiempo de
deposicin, que depende de los niveles de concentracin del catin en la
muestra, para obtener resultados reproducibles.
32
De acuerdo a la informacin bibliogrfica revisada se determin que de las
mltiples tcnicas voltamtricas existentes, la de Voltametra de Redisolucin Andica es
una de las ms adecuadas para la determinacin de mercurio en aguas.
2.2.1.7. Mtodos de cuantificacin de anlisis voltamtricos
Entre los ms utilizados estn:
Mtodo de la recta de calibracin:
La medida de la concentracin mediante un mtodo instrumental se basa en la

existencia de una relacin proporcional entre dicha concentracin y la seal analtica o
respuesta que genera un instrumento.
El modelo de lnea recta consiste en encontrar la recta de calibrado que mejor se

ajuste a una serie de n puntos experimentales, donde cada punto se encuentra definido por
una variable x (variable independiente, generalmente la concentracin del analito de
inters) y una variable y (variable dependiente, generalmente la respuesta instrumental). La
recta de calibrado se encuentra definida por una ordenada en el origen y una pendiente, a
travs de la ecuacin:
Y = a + bX
donde: X es la concentracin del analito, Y la seal medida, a la ordenada al origen y b la

pendiente de la recta.
La ecuacin de la recta se obtiene mediante calibracin con disoluciones de

concentracin conocida preparadas en las mismas condiciones (disoluciones patrn) a
partir de la medida de la seal analtica proporcionada por stas. Los pares de valores
concentracin-seal se ajustan a una recta, a partir de la cual puede obtenerse la
concentracin del analito en muestras desconocidas.
La utilizacin de curvas de calibracin obtenidas a partir de series de patrones es,

posiblemente, el mtodo ms utilizado.
33
La curva de calibracin se representa siempre con la respuesta del instrumento en el
eje vertical (y) y las concentraciones sobre el eje horizontal (x).
Generalmente se utilizan curvas en las que existe una relacin lineal entre la seal
analtica (y) y la concentracin (x), tomando precauciones experimentales para asegurar
que la linealidad de la respuesta se conserve en un amplio margen de concentraciones. En
estos casos la forma de proceder consiste en obtener la recta de regresin de y sobre x (esto
es, la "mejor" lnea recta a travs de los puntos de la grfica de calibracin) y utilizarla
para estimar la concentracin de muestras problema por interpolacin.
El problema de la calibracin analtica se reducir a encontrar las estimaciones de los

coeficientes de la recta de calibrado (ordenada en el origen y pendiente), y a asegurar que
la recta encontrada se ajusta correctamente a los puntos experimentales. El mtodo ms
universalmente empleado para encontrar los coeficientes de la recta de calibrado es el
mtodo de mnimos cuadrados.
Un aspecto importante desde un punto de vista prctico es el del nmero mnimo de

puntos experimentales que debe poseer la recta de calibrado. Si bien con solamente dos
puntos ya se puede establecer una recta (o incluso reducirse a un solo punto experimental
si tambin se incluye el punto (0,0), correspondiente al punto terico de seal instrumental
cero para una concentracin cero), el nmero de puntos a escoger depender mucho del
uso que se le d a la recta de calibrado. Para rectas de calibrado de rutina, correspondientes
a mtodos perfectamente establecidos que proporcionan unos resultados muy controlados,
probablemente una recta de calibrado con pocos puntos sea suficiente.
Cuando se desee utilizar la recta de calibrado para efectuar predicciones de muestras

futuras, obtenindose tambin sus intervalos de confianza asociados, probablemente ser
necesario aumentar el nmero de puntos hasta un mnimo de 5 6. De lo contrario, la
seguridad en las predicciones y sus intervalos de confianza asociados puede disminuir
considerablemente. Otro aspecto importante es la medida de la seal del blanco, es decir,
de la solucin estndar con concentracin cero del analito.
Hay mtodos analticos que simplemente no requieren de dicha medida (como los
mtodos potenciomtricos); en esos casos la recta de calibrado se construye con las
restantes soluciones estndar (Riu & Boqu, 2001).
34
Grfico 2.14: Recta de calibracin analtica
(Riu & Boque, 2010)
Mtodo de adicin de estndares:
Los efectos indeseables de la matriz se pueden disminuir e hasta eliminar utilizando

el mtodo de adicin de estndares, cuando una porcin del patrn se aade a la muestra,
pudiendo prepararse una serie de alcuotas, esto es tomando volmenes iguales de
disolucin problema y aadiendo cantidades conocidas y diferentes de analito a todas las
muestras, excepto a una, diluyendo, finalmente, todas al mismo volumen para que
cualquier interferente en la matriz de la muestra tenga un efecto idntico en cada solucin.
La respuesta del instrumento debe ser funcin lineal de la concentracin del analito,
en el intervalo de concentraciones y tambin debe tener una ordenada al origen en cero
(seal cero para concentracin cero).
Grfico 2.15: Adicin de estndares
(Castaeda, 2011)
35
El mtodo de adiciones estndares es ampliamente utilizado en electroqumica, para
obtener resultados ms exactos que los que resultan usando curvas de calibracin. Como
las soluciones problema y estndar se miden en idnticas condiciones, las tcnicas
voltamperomtricas sensibles a la matriz (como la redisolucin andica) dependen casi
exclusivamente de las adiciones estndares para resultados cuantitativos. La absorcin
atmica y la espectrofotometra de emisin de flama, usan este mtodo con matrices de
muestras complejas, en donde la viscosidad, la tensin superficial, los efectos de flama y
otras propiedades de la solucin muestra no pueden reproducirse con exactitud en las
soluciones de calibracin (Miller, 1993). Los resultados de las adiciones estndares
tambin proporcionan un medio sistemtico de identificar fuentes de error en los anlisis,
tales como la degradacin de los reactivos de prueba, un instrumento defectuoso o
soluciones estndares inexactas.
Una vez obtenidas, la seales instrumentales se grafican versus las cantidades de

analito aadidas. La recta de regresin se calcula de manera usual. Para conocer la
concentracin de la muestra incgnita se extrapola la recta al punto sobre el eje x donde
y=0. La interseccin negativa sobre el eje x corresponde a la cantidad de analito en la
muestra problema. Este valor viene dado por b/m.
Es importante recalcar que al aplicar este mtodo todas las condiciones se deben
mantener uniformes. En trminos estadsticos, el principal inconveniente es que se trata de
un mtodo de extrapolacin; por lo tanto, menos preciso que los de interpolacin.
Figura 2.16: Grfico clsico de una recta por adicin de estndares
(Castaeda, 2011)
36
2.3. Fundamentos de validacin
La validacin de un mtodo analtico es un paso fundamental para asegurar que los

resultados obtenidos por la aplicacin de un mtodo analtico son confiables. Cuando se
realiza la validacin de un mtodo por parte del laboratorio, lo que se busca es poder
determinar con fundamento estadstico que el mtodo es adecuado para los fines previstos.
En otras palabras, validacin es la confirmacin mediante el suministro de evidencia
objetiva de que se han cumplido los requisitos para una utilizacin o aplicacin especfica
prevista (Instituto de Salud Pblica de Chile 2010).
Un mtodo debe validarse en los siguientes casos:
Cuando se necesita verificar que sus parmetros de aptitud son adecuados para usar
para un problema analtico particular.
Cuando se desarrolla un mtodo nuevo.
Cuando se revisa un mtodo ya establecido para mejorar o extender a un nuevo
problema.
Cuando el control de calidad indica que el mtodo en uso est cambiando con el
tiempo.
Cuando se usa un mtodo ya establecido en un laboratorio diferente o con diferente
analista o con diferente instrumental.
Para demostrar la equivalencia entre 2 mtodos.
Es importante que para el proceso de validacin se asigne a un responsable de

realizar dicha tarea, de manera que, la validacin se efectu en forma metdica, ordenada,
trazable y confiable. De igual modo se debe contar con equipos calificados, as como con
material y patrones de referencia confiables (EURACHEM/CITAC Guide 2000).
Antes de iniciar la validacin es importante tener claro cules son los

requerimientos del mtodo para establecer el alcance de la misma. Es esencial, entonces
conocer el mtodo a validar y su aplicabilidad, es decir, el analito, su concentracin y la
matriz (o matrices) en las cuales se desea utilizar.
37
2.3.1. Parmetros de validacin
Los ensayos o mediciones se realizarn con el fin de obtener los siguientes

parmetros de validacin:
Lmite de deteccin: Es la menor cantidad que puede ser distinguida del fondo con
cierto nivel de confianza especificado.
Lmite de cuantificacin: Es la menor cantidad que puede ser determinada

cuantitativamente con una incertidumbre asociada, para un dado nivel de confianza.
Selectividad: aptitud de un mtodo para determinar exacta y especficamente el

analito de inters en presencia de otros componentes en la matriz de la muestra bajo
las condiciones establecidas del ensayo.
Linealidad: rango de concentraciones de analito para las cuales el mtodo brinda

resultados proporcionales a la concentracin.
Sensibilidad: es el cociente entre el cambio en la indicacin de un sistema de

medicin y el cambio correspondiente en el valor de la cantidad objeto de la
medicin. En una regresin lineal la sensibilidad corresponde a la pendiente (m) de
la recta de calibracin.
Exactitud: Proximidad entre el resultado de una medicin y el valor verdadero del

mesurando.
Precisin: Proximidad entre valores de una magnitud obtenidos por mediciones

replicadas, en condiciones especficas. Las dos medidas de precisin ms comunes
son repetibilidad y reproducibilidad.
Robustez: Medida de la capacidad de un procedimiento analtico para no ser

afectado por variaciones pequeas pero deliberadas en los parmetros del mtodo y
que provee una indicacin de su fiabilidad durante su uso habitual.
38
Aplicabilidad: Define cuando un mtodo de anlisis puede utilizarse
satisfactoriamente para los analitos, matrices y concentraciones previstas. La
declaracin de aplicabilidad (o mbito de aplicacin), adems de una declaracin
del margen de funcionamiento puede incluir tambin advertencias acerca de la
interferencia conocida de otros analitos, o de la inaplicabilidad a determinadas
matrices y situaciones.
Incertidumbre: Parmetro asociado al resultado de una medicin, que caracteriza

la dispersin de los valores que podran ser razonablemente atribuidos al
mesurando.
39
CAPTULO III
3. METODOLOGA
3.1. TIPO DE INVESTIGACIN
La presente investigacin es de tipo experimental ya que se trabajar con

parmetros modificables y controlados que facilitan la aplicacin en el laboratorio,
adecuado para el efecto. La parte experimental fue desarrollada en los laboratorios de
Hidroecuador, en el CICAM (Centro de investigaciones medio ambientales) de la Escuela
Politcnica Nacional y en los laboratorios OSP (Oferta de Servicios y Productos) de la
Universidad Central del Ecuador.
Las muestras reales fueron obtenidas de los Laboratorios OSP y del CICAM.
3.2. POBLACIN Y MUESTRA
El Universo de estudio es el agua, la poblacin es agua natural y residual

contaminada con mercurio.
3.3. DISEO EXPERIMENTAL
El presente trabajo presenta los siguientes procesos secuenciales basados en el

ESTUDIO COMPARATIVO DE ELECTRODOS.
El trabajo se dividi en cuatro partes, en la primera parte se realiz un anlisis

exploratorio en el que se probaron cuatro tipos de electrodos:
1. Electrodo impreso con nanopartculas de oro.
40
Grfico 3.1. Imagen del electrodo impreso con
nanopartculas de oro
(info@dropsens.com)
Grfico 3.2. Imagen SEM del electrodo de trabajo
(info@dropsens.com)
2. Electrodo de carbn vtreo modificado con film de oro.

3. Electrodo de carbn vtreo modificado con nanopartculas de oro.
4. Electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro.
Las condiciones de trabajo se definieron en base a las referencias bibliogrficas

(Pinilla Gil et all), las mismas que sealan que el mercurio se puede determinar en un
rango de 10 a 1500 ppb (aunque algunos estudios han logrado cuantificar niveles ms
bajos) a travs de la voltametra de redisolucin andica. Se escogieron 3 potenciales y 3
tiempos de deposicin y se hicieron 3 repeticiones para cada combinacin. Para el barrido
de potencial se probaron las tcnicas de Voltametra de barrido lineal (LSV) y Voltametra
de onda cuadrada (SWV) para definir con cul de las dos se obtienen mejores picos.
41
Grfico 3.3. Cuadro de dialogo del potenciostato CHI1220B donde se
escoge la tcnica analtica
Para la tcnica de LSV las condiciones son las siguientes:
Parmetros de Barrido
Potencial Inicial (Init E V) 0
Potencial Final (Final E V) 0.7
Scan Rate (V/s) 0.1
Sample Interval (V) 0.005
*Quiet Time (QT sec) 5
Sensibilidad (Sensitivity A/V) 1e-005
*El quiet time define el tiempo en segundos que la celda permanece en el potencial inicial
antes de iniciar el barrido.
42
Parmetros de Preacondicionamiento
Primera etapa
Potencial (V) 0.7
Tempo (sec) 15
Segunda etapa
Potencial (V) 0.3
Tempo (sec) 60
Para la tcnica de SWV las condiciones son las siguientes:
Incremento (Incr E V) 0.006
Amplitud (Amplitude V) 0.04
Frecuencia (Frecuency hz) 20
Quiet Time (QT sec) 5
Primera etapa
Potencial (V) 0.7
43
Tempo (sec) 15
Segunda etapa
Potencial (V) 0.3
Tempo (sec) 60
Como electrolito de soporte se utiliz cido clorhdrico 0.15m (HCl 0.15m), ya que
el HCl es el electrolito de soporte ms ampliamente utilizado en la determinacin
electroqumica de mercurio y adems asegura una concentracin constante de iones cloruro
en el medio, necesario para la estabilidad del electrodo de referencia de Ag/AgCl. La
caracterizacin de los electrodos se realiz en cido sulfrico 0.05M (H2SO4 0.05M).
En una segunda parte se realizaron los estudios exploratorios para observar el
comportamiento de los electrodos con el mercurio, para lo cual se utilizaron soluciones de
10 ppm y 100 pbb de Hg.
Una vez definido el mejor electrodo y la mejor tcnica para el barrido de potencial,
en una tercera parte se definieron los mejores parmetros para la aplicacin de la misma,
en relacin a frecuencia, amplitud y variacin de incrementos.
Como el objetivo del presente trabajo es determinar si el mtodo desarrollado
servir para cuantificar concentraciones de mercurio menores a 100 ppb, por ltimo, en
una cuarta parte se definieron los parmetros adecuados para la determinacin de las
mismas.
3.3.1. PRIMERA PARTE. Metodologa para la preparacin, acondicionamiento y

caracterizacin de los electrodos.
Antes de iniciar los anlisis se debe verificar el correcto funcionamiento del

software,
para lo cual se realizara el Hardware Test para comprobar que la conexin del circuito
cerrado formado por el conjunto de electrodos y que el analizador funcione correctamente.
El sistema pondr a prueba los circuitos digitales y analgicos. En caso de no existir
ningn inconveniente se abrir una ventana indicando que el equipo se encuentra listo.
44
Grfico 3.4. Cuadro de dialogo del potenciostato CHI1220B para acceder
al Hardware Test
(Programa CHI1220B)
3.3.1.1. Electrodo impreso con nanopartculas de oro. Sumergir el electrodo en la

solucin de H2SO4 0.05M, determinar el potencial de circuito abierto (potencial de
equilibrio) para asegurar que no circula ninguna corriente en el sistema, si est estable,
proceder a realizar los barridos de caracterizacin, obtener los grficos respectivos y
analizar los resultados. Lavar el juego de electrodos con agua destilada y repetir el
procedimiento en la solucin de HCl 0.15m.
3.3.1.2. Electrodo de Carbn Vtreo Modificado con film de oro
Preparacin del electrodo
La modificacin del electrodo de carbn vtreo se la realiz sumergiendo al

electrodo pulido y limpio en una solucin de 50 ppm de oro previamente desoxigenada
mediante el burbujeo de nitrgeno por 5 minutos, seguido de una cronoamperometra con
los siguientes parmetros (Garrido, 2011):
Parmetros de la Cronoamperometra
Potencial alto (High E V) 0
Potencial bajo (Low E V) -0.8
45
Nmero de pasos 1
Ancho del pulso (Pulse Width sec) 360
Intervalo de muestreo (Sample Interval V) 0.001
Sensibilidad (A/V) 1.0E-03
3.3.1.3. Electrodo de Carbn Vtreo Modificado con nanopartculas de oro
La modificacin del electrodo de carbn vtreo se la realiz sumergiendo al

electrodo pulido y limpio en una solucin de 20 ppm de oro en H2S04 0.5M previamente
desoxigenada mediante el burbujeo de nitrgeno por 5 minutos y haciendo un barrido por
Cronoamperometra (Compton et al, 2004) con los siguientes parmetros:
Parmetros del Barrido
Potencial Inicial (Init E V) 1.055
Potencial alto (High E V) 1.055
Nmero de pasos 1
Quiet time (sec) 2
Estas condiciones fueron cuidadosamente seleccionadas para evitar la formacin de

un film continuo de oro y permitir que se depositen como nanopartculas.
46
Grfico 3.5 Imagen del microscopio de fuerza atmica a escala de 500 nm
de las nanopartculas de oro electrodepositadas a partir de una solucin de
10 ppm de Au en H2SO4 0.5M a un potencial de 1.055 a -0.045 V
(Compton et al, 2004)
3.3.1.4. Electrodo de Fibra de Carbn Modificado con Nanopartculas de Oro
La modificacin del electrodo de fibra de carbn se la realiz sumergiendo al

electrodo en una solucin de 10 ppm de oro en H2S04 0.5M previamente desoxigenada
mediante el burbujeo de nitrgeno por 5 minutos y haciendo un barrido por
Cronoamperometra con los siguientes parmetros:

Init P/N N
Nmero de pasos 30
Quiet time (sec) 2
47
3.3.2. SEGUNDA PARTE. Comportamiento de los electrodos de oro con el
mercurio en solucin de cido clorhdrico
Se prueba el comportamiento de los electrodos con soluciones de 10 ppm y 100 ppb

de mercurio empleando la tcnica de voltametra cclica.
3.3.2.1. Determinacin de potenciales en los que se registra el pico del mercurio

con los diferentes electrodos
Se realizan los barridos en las soluciones de 10 ppm y 100 ppb en HCl 0.15m para
cada electrodo con las siguientes condiciones:
Potencial bajo (Low E V) 0
Init P/N P
Velocidad (Scan Rate V/s) 0.05
Segmentos 3
Quiet time (sec) 0
Registrar los resultados y hacer el anlisis respectivo para determinar el potencial

en el que se observa el pico de mercurio.
48
3.3.2.2. Anlisis de repetitividad y sensibilidad de los electrodos en la
deposicin y redisolucin del mercurio en cido clorhdrico a diferentes potenciales y
tiempos de deposicin
Se realizan 3 barridos de la solucin de 100 ppb de mercurio para cada tcnica y

para cada condicin a probar con cada electrodo, empleando las mismas condiciones de
barrido sealadas en el punto 3.3.; con los resultados obtenidos se realiza un anlisis
estadstico de repetibilidad y sensibilidad expresado en funcin de la desviacin relativa
estndar calculada con el promedio de las tres lecturas, se define con que parmetro se
realizaran las pruebas siguientes (rea o altura de pico). Se determina el mejor potencial y
el mejor tiempo de deposicin.
I. Determinacin del potencial ptimo de deposicin
En un primer anlisis se decidi tomar el tiempo de deposicin de 60 segundos, en

base a revisin bibliogrfica (Pinilla Gil et all, 2011) para determinar el mejor potencial
de deposicin en cada electrodo. Se utilizaron dos tcnicas de anlisis: voltametra lineal
(SVL) y voltametra de onda cuadrada (SWV). Se seleccionaron 3 potenciales: 0, 0.1 y
0.3V; como ejemplo se pueden observar a continuacin los grficos obtenidos con el
electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro.
Figura 3.1. Barrido por voltametra lineal de una solucin de 100 ppb
de mercurio a 0.3V (rojo), 0.1V (azul) y 0V (morado) a 60 segundos
con electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro
49
Figura 3.2. Barrido por voltametra de onda cuadrada de una
solucin de 100 ppb de mercurio a 0.3V (rojo), 0,1V (azul) y
0V (morado) a 60 segundos con electrodo de fibra de carbn
modificado con nanopartculas de oro
II. Determinacin del tiempo ptimo de deposicin
Cmo el pico que est mejor definido se lo observa a 0.3V, se procede a

probar este potencial a distintos tiempos: 30, 60 y 90 segundos. Como ejemplo se
pueden observar los grficos obtenidos con el electrodo de fibra de carbn
modificado con nanopartculas de oro, tanto para voltametra lineal como para
voltametra de onda cuadrada.
Figura 3.3. Barrido por voltametra lineal de una solucin de

100 ppb de mercurio a 0.3V a 30 (rojo), 60 (azul) y 90
(morado) segundos con electrodo de fibra de carbn modificado
con film de oro
50
Figura 3.4. Barrido por voltametra de onda cuadrada de una
solucin de 100 ppb de mercurio a 0.3V a 30 (rojo), 60 (azul)
y 90 (morado) segundos con electrodo de fibra de carbn
3.3.3. TERCERA PARTE. Definicin de los parmetros de onda cuadrada

para una solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m
De los anlisis previos se define al electrodo de fibra de carbn modificado

con nanopartculas de oro como el ms adecuado para continuar con la
investigacin, empleando la tcnica de voltametra de onda cuadrada, 0.3V y 90
segundos como potencial y tiempo de deposicin ptimos. Se procede a definir las
mejores condiciones de amplitud, frecuencia y nmero de incrementos. Se
mantiene el HCl 0.15m como electrolito de soporte ya que hay amplias referencias
bibliogrficas que lo sealan como el ms apropiado para este tipo de analisis,
adems de la concentracin para la solucin de anlisis de 100 ppb de mercurio en
HCl 0.15m.
3.3.3.1. Influencia de la variacin de la amplitud en la respuesta del electrodo

en una solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0,15m
Se realizan las pruebas con 3 valores de amplitud: 10, 40 y 80 mV y un

Quiet time de 0 segundos. Se hacen los barridos con el blanco HCl 0.15m y con la
solucin de 100 ppb de mercurio, con las siguientes condiciones:
51
Frecuencia (Frecuency Hz) 20
Primera etapa
Potencial (V) 0.7
Tempo (sec) 15
Segunda etapa
Potencial (V) 0.3
Tempo (sec) 90
3.3.3.2. Influencia de la variacin de la frecuencia en la respuesta del electrodo

en una solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m
Se realizan las pruebas con 3 valores de frecuencia: 3, 20 y 60 Hz con una

amplitud de 40 mV. Se hacen primero los barridos con el blanco HCl 0.15m y
luego con la solucin de 100 ppb de mercurio. El resto de condiciones se mantienen
similares a las sealadas en el punto 3.3.3.1.
52
3.3.3.3. Influencia de la variacin de los incrementos en la respuesta del
electrodo en una solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m
Se realizan las pruebas con 3 valores de incrementos: 2, 6 y 10 mV con una

amplitud de 40 mV y una frecuencia de 60 Hz. Se realizan primero los barridos con
el blanco HCl 0.15m y luego con la solucin de 100 ppb de mercurio. El resto de
condiciones se mantienen similares a las sealadas en el punto 3.3.3.1.
3.3.4. CUARTA PARTE. Definicin de los parmetros de onda cuadrada para

concentraciones menores de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m
3.3.4.1. Definicin del protocolo analtico
Una vez definidas las mejores condiciones para determinar mercurio a una
concentracin de 100 ppb por voltametra de onda cuadrada, se establece el
protocolo analtico y se prueba con soluciones de concentraciones menores a 100
ppb de mercurio. Los pasos a seguir son los siguientes:
I. Realizar el Hardware test.

II. Determinar el potencial de circuito abierto.
III. Caracterizar el electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas
de oro en H2S04 0.05M.
IV. Activar el electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de
oro en HCl 0.15m, con 3 ciclos de voltametra cclica. Previo a cualquier medida
electroqumica es necesaria la activacin del electrodo para obtener una superficie
limpia en una disolucin sin impurezas.
V. Realizar el barrido por SWV del blanco HCl 0.15m.
VI. Realizar el barrido por SWV de las soluciones de mercurio de
concentraciones menores a 100 ppb de mercurio.
VII. Caracterizacin final electrodo de fibra de carbn modificado con
nanopartculas de oro en H2S04 0.05M, para determinar el desgaste del electrodo.
VIII. Lavar el electrodo con agua, metanol y acetona.
53
Las condiciones empleadas para la deposicin y el barrido son las
siguientes:
Primera etapa
Potencial (V) 0.7
Tempo (sec) 15
Segunda etapa
Potencial (V) 0.3
Tempo (sec) 90
Registrar los resultados, hacer el anlisis respectivo para definir si los

parmetros escogidos son los adecuados, sino se realizaran variaciones al mtodo
hasta definir las condiciones ms adecuadas para proceder a la validacin.
54
3.4. Validacin del mtodo
3.4.1. Selectividad del mtodo
I. Preparar tres blancos y tres estndares de concentracin conocida.

II. Realizar las lecturas de acuerdo al procedimiento analtico definido.
III. Comparar las respuestas obtenidas.
IV. Identificar si existen diferencias significativas y determinar si el pico
obtenido corresponde a mercurio.
V. Realizar los barridos con cada electrodo.
3.4.2. Lmite de deteccin y lmite de cuantificacin
I. Tanto el lmite de deteccin como el de cuantificacin se determinarn de

forma experimental.
II. Para determinar el lmite de cuantificacin se evaluar la recuperacin
obtenida con estndares de 3, 5, 7.5 y 10 ppb de mercurio, las lecturas se
realizarn de acuerdo al procedimiento analtico definido.
III. De acuerdo a los valores obtenidos el menor coeficiente de variacin que se
obtenga con los valores de altura de pico se tomar como lmite de
cuantificacin.
3.4.3. Linealidad dentro del rango de trabajo
I. Preparar soluciones de mercurio de concentracin conocida dentro de los

siguientes rangos de trabajo y realizar tres lecturas de cada una:
5 100 ppb de Hg
Rango de 5 40 ppb Hg
II. Realizar las lecturas de acuerdo al procedimiento analtico definido.

III. Registrar los datos y realizar el anlisis estadstico respectivo.
55
3.4.4. Precisin: establecer la variabilidad entre determinaciones repetidas
haciendo referencia al grado de repetibilidad y reproducibilidad del mtodo
analtico en condiciones normales de operacin.
I. Repetibilidad del mtodo: se corre por seis veces una misma muestra
repetida y sucesivamente en un corto perodo de tiempo, con el mismo
electrodo de trabajo, segn el procedimiento analtico definido.
II. Reproducibilidad del mtodo, se hacen tres lecturas de una misma muestra
en diferentes perodos de tiempo (das de anlisis 1, 2 y 3), segn el
procedimiento analtico definido.
III. Registrar los datos y realizar el anlisis de varianza correspondiente.
3.4.5. Exactitud:
I. Preparar la curva de calibracin con estndares de 5, 10 y 20 ppb de Hg a

partir de agua destilada contaminada con mercurio. Se prefiere estndares
de baja concentracin para no saturar al electrodo con concentraciones ms
altas de mercurio y as mantenerlo mas estable.
II. Preparar la muestra de referencia que en el presente caso ser agua potable
contaminada con mercurio en la misma concentracin del estndar y por
interpolacin hallar la concentracin de la muestra.
III. Realizar 5 lecturas de la muestra de acuerdo al procedimiento analtico
definido.
IV. Repetir el procedimiento por tres das.
V. Determinar el grado de coincidencia existente entre el valor medio obtenido
de las lecturas del estndar y muestra de referencia.
3.4.6. Robustez del mtodo
I. De las rectas obtenidas en los 5 das se obtienen las regresiones lineales.
II. Se determina el valor de la pendiente y de la ordenada de cada recta de

regresin.
56
III. Se halla el promedio de las pendientes y ordenadas y se realiza la prueba t de
student.
IV. Hallar los valores de: a max, a min, b max y b min. Establecer los criterios
de aceptacin y rechazo de las curvas de calibracin.
3.4.7. Incertidumbre del mtodo:
I. Determinar que variables influyen en todo el proceso

II. Determinar las incertidumbres asociadas a cada variable y la incertidumbre
expandida.
3.4.8. Aplicabilidad del mtodo:
I. Digestar las muestras reales en Acido Sulfrico concentrado y por

Microondas
Para la digestin en acido sulfrico se realiza el siguiente procedimiento
analtico: se toman 25 mL de la muestra, se aaden 4 mL de H2SO4 , se
coloca en el digestor Hach aproximadamente por 1hora, a una temperatura
de 440C, hasta la evaporacin casi total del agua, luego se agregan
lentamente 10 mL de perxido de hidrogeno (H2O2) al 50% y se continua la
digestin por unos minutos ms. Se enfra y afora a 100 mL con agua
destilada.
Para la digestin en microondas se realiza el siguiente procedimiento

analtico: se toman 30 mL de la muestra en un vaso apropiado para el
mtodo, se aaden 5 mL de acido ntrico (HNO3) al 65% (libre de metales) y
2 mL de H2O2 al 30%, se mezcla cuidadosamente y se deja en reposo un
mnimo de 20 minutos, se cierra el vaso y se coloca en el equipo (Berghof
microwave digestin system, tipo speedwave four DAP-100+), se digesta
segn el programa preestablecido para el tipo de muestra y el numero de
vasos. Una vez terminado el proceso, se enfra y afora a 100 mL con agua
destilada.
57
II. Preparar la curva de calibracin y por interpolacin hallar la concentracin
de 3 muestras distintas procedentes de distintas fuentes.
III. Registrar los datos y hacer el anlisis respectivo.
3.4.9. Fijacin de objetivos para la validacin del mtodo:
Los objetivos de la validacin del mtodo quedan establecidos en la

siguiente tabla:
PARAMETRO OBJETIVO FIJADO
Selectividad / Especificidad Aplicable en aguas claras y residuales
Linealidad / Funcin respuesta R2 0.99
Limite de deteccin Se determinar experimentalmente
Limite de cuantificacin Se determinar experimentalmente
*Precisin (repetibilidad/ CVr 15%

reproducibilidad)
CVR 20%
Porcentaje de recuperacin 80 -120%
Exactitud Z-score 2%
Intervalo de trabajo Se definir una vez establecido el

mtodo analtico
Incertidumbre expandida y U
asociada U
Los criterios de aceptacin para CVr y CVR se establecieron tomando

como referencia la tabla de Horwitz y para los porcentajes de recuperacin
el Codex Alimentarius (Anexo II.3).
58
4.5. Comparacin de los resultados obtenidos con el mtodo desarrollado
con los conseguidos por Absorcin Atmica
Solicitar muestras previamente analizadas con la tcnica de Absorcin

Atmica en los Laboratorios OSP de la Facultad de Ciencias Qumicas y analizarlas
segn el mtodo desarrollado.
3.5. Recursos Materiales
3.6.1. Reactivos
Solucin estndar de mercurio: 1000 g/ml AccuTraceTM Reference

Standard
Solucin estndar de oro: 1000 g/ml AccuTraceTM Reference Standard
Acido sulfrico concentrado
Acido ntrico concentrado
Acido clorhdrico concentrado
Agua destilada
Nitrgeno
3.6.2. Material de Laboratorio
Pipeteador automtico marca MRC 10 100 l
Pipeta volumtrica de 5 mL: 0.015 mL Ex + 15s 20C
Pipeta graduada 2 mL 0.006 mL As 20C
Baln de 250 mL 0.15 ISCO ln 20C A
Baln de 100 mL 0.08 ln 20C A
Baln de 25 mL 0.04 ln 20C A

59
Baln aforado 50 mL 0.06 ISO ln 20C A
Celdas de vidrio de 10 mL
3.6.3. Equipos
Potenciostato chi1220B
Balanza analtica marca Sartorius A2005
Equipo de digestin por microondas marca Berghof
Equipo de digestin acida marca Digesdahl
Campana de extraccin
Agitador elctrico
Destilador
Electrodo de referencia de Ag/AgCl
Electrodo de carbn vtreo de 4 mm modificado con film de oro
Electrodo de carbn vtreo de 4 mm modificado con nanopartculas de

oro
Microelectrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro
Electrodo auxiliar de platino
Electrodo impreso con nanopartculas de oro marca Zenzor
3.7. Recursos Tecnolgicos
Computadora porttil
Programa para potenciostato chi1220B
60
CAPTULO IV
IV. RESULTADOS E INTERPRETACIN DE RESULTADOS
4.1. Primera parte. Preparacin, acondicionamiento y caracterizacin de los

electrodos
4.1.1. Electrodo impreso con nanopartculas de oro
En las siguientes figuras se muestran los voltamogramas cclicos de caracterizacin

del electrodo impreso de oro en H2SO4 0.05M y HCl 0.15m, antes de los barridos en la
solucin de mercurio.
Se puede observar que en HCl 0.15m el electrodo est limpio ya que no hay ningn
pico interferente, en H2SO4 0.05M se observa el pico de oxidacin del mercurio a 1.0 V y
el de reduccin a 0.5V.
El potencial empleado en el barrido en HCl va de 0 a 0.8V, no se puede extender
ms por el riesgo de oxidar al oro.
Figura 4.1. Caracterizacin inicial por Voltametra Cclica del Electrodo

Impreso de Oro en H2SO4 0.05M, el rango de potencial va de 0 a 1.5V,
se puede observar el pico de oxidacin del oro a 1.0V y el de reduccin
del oro a 0.5V, con un rea de 4.9C
61
Figura 4.2. Caracterizacin inicial por Voltametra Cclica del Electrodo
Impreso de Oro en HCl 0.15m, el rango de potencial va de 0 a 0.7V
4.1.2. Electrodo de carbn vtreo modificado con film de oro

del electrodo de carbn vtreo en H2SO4 0.05M y HCl 0.15m, antes de la modificacin y
despus de la deposicin del oro. Se concluye que se electrodeposit el film de oro sobre
el electrodo ya que se pueden observar los picos de oxidacin y reduccin del oro en el
barrido en H2SO4 0.05M a 1.25V y 0.93V respectivamente, en el rango de potencial
empleado.
Figura 4.3. Caracterizacin inicial del electrodo de carbn vtreo en H2SO4

0.05M antes de la modificacin (rojo) y despus de la deposicin del film de
oro (azul). El rea del film de oro es de 1.523e-7C (152.3 nC)
62
Figura 4.4. Caracterizacin del electrodo de carbn vtreo en HCl 0.15m
antes de la modificacin (rojo) y despus de la deposicin del film de oro
(azul)
4.1.3. Electrodo de carbn vtreo modificado con nanopartculas de oro

del electrodo de carbn vtreo en H2SO4 0.05M y HCl 0.15m, antes de la modificacin y
despus de la deposicin de las nanopartculas de oro. Se concluye que se
electrodepositaron las nanopartculas de oro sobre el electrodo ya que se observan los picos
de oxidacin y reduccin del oro en el barrido en H2SO4 0.05M a 1.25V y 0.93V
respectivamente, en el rango de potencial empleado.
Figura 4.5. Caracterizacin inicial del electrodo de carbn vtreo en H2SO4

0.05M antes de la modificacin (rojo) y despus de la deposicin (azul) de
las nanopartculas de oro, el rea de las nanopartculas de oro es de 2.95 e-6
C (2950 nC)
63
Figura 4.6. Caracterizacin del electrodo de carbn vtreo en HCl 0.15m
antes de la modificacin (rojo) y despus de la deposicin (azul) de las
4.1.4. Electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro
En las siguientes figuras se muestran los voltamogramas cclicos de

caracterizacin del electrodo de fibra de carbn en H2SO4 0.05M y HCl 0.15m,
antes de la modificacin y despus de la deposicin del oro. Se concluye que se
electrodepositaron las nanopartculas de oro sobre la fibra de carbn ya que se
observan los picos de oxidacin y reduccin del oro en el barrido en H2SO4 0.05M
a 1.25V y 0.93V respectivamente, en el rango de potencial empleado.
Figura 4.7. Caracterizacin inicial del electrodo de fibra de carbn en

H2SO4 0.05M antes de la modificacin (rojo) y despus de la deposicin del
oro (azul). El rea del pico de reduccin del oro es de 2.008 e-8 C (20.08 nC)
64
Figura 4.8. Caracterizacin del electrodo de fibra de carbn en HCl 0.15m
antes de la modificacin (rojo) y despus de la deposicin (azul) de las
En el siguiente grfico se observa la imagen obtenida con microscopio electrnico

del electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro:
Grfico 4.1. Imagen del microscopio electrnico de la fibra de carbn con

nanopartculas de oro electrodepositadas en su superficie, el dimetro de las fibras
de carbn vara de 9 a 11 micras (A) y (B) microscopia en acercamiento mostrando
en dimetro de las nanopartculas y sus aglomeraciones (el dimetro promedio de las
nanopartculas es de 114 nm)
A B
(Laboratorios Hidroecuador, 2015)
En resumen, los potenciales de oxidacin y reduccin del oro encontrados para los
4 tipos de electrodos en el barrido realizado en H2SO4 0.05M son:
65
Tabla 4.1. Potenciales de oxidacin y reduccin del oro para cada electrodo
Potencial de Potencial de rea del pico de
Electrodo oxidacin del oro reduccin del oro reduccin del oro
(V) (V) (C)
Electrodo impreso con
1.0 0.5 4.9
Electrodo de carbn
vtreo modificado con 1.25 0.93 0,15
film de oro
Electrodo de carbn
vtreo modificado con 1.25 0.93 2,95
Electrodo de fibra de
carbn modificado con 1.25 0.93 0.02
Con esto se demuestra que hay deposicin de las partculas de oro sobre los
electrodos. Adicionalmente los barridos en HCl 0.15m antes y despus de la deposicin
indican que los electrodos estn limpios, sin interferencias y que nicamente se deposito
oro sobre los mismos.
4.2. Segunda parte. Comportamiento de los electrodos de oro con el mercurio en

solucin de cido clorhdrico
4.2.1 Determinacin de potenciales en los que se registra el pico del mercurio con los
diferentes electrodos en HCl 0.15m
Una vez preparados los electrodos y despus de comprobar la deposicin del oro, se
procedi a determinar el comportamiento de los mismos con soluciones de mercurio de
concentraciones altas (10 ppm) y diluidas (100 ppb), tal como se puede apreciar en los
siguientes grficos:
66
4.2.1.1. Electrodo impreso con nanopartculas de oro:
Figura 4.9. Superposicin del barrido por voltametra cclica del electrodo
impreso de oro en HCl 0.15m y de una solucin de 10 ppm de Hg en HCl
0.15m de 0V a 0.7V
Figura 4.10. Superposicin del barrido por voltametra cclica del electrodo
impreso de oro en HCl 0.15m (azul) y de una solucin de 100 ppb de Hg en
HCl 0.15m (rojo)
67
4.2.1.2. Electrodo de carbn vtreo modificado con film de oro
Figura 4.11. Superposicin del barrido por voltametra cclica del electrodo de
carbn vtreo modificado con film de oro en HCl 0.15m (azul) y de una
solucin de 10 ppm de Hg en HCl 0.15m (rojo) de 0V a 0.7V
carbn vtreo modificado con film de oro en HCl 0.15m (azul) y de una
solucin de 100 ppb de Hg en HCl 0.15m (rojo) de 0V a 0.7V
68
4.2.1.3. Electrodo de carbn vtreo modificado con nanopartculas de oro
carbn vtreo modificado con nanopartculas de oro en HCl 0.15m (rojo) y de
una solucin de 10 ppm de Hg en HCl 0,15m (azul) de 0V a 0.7V. El pico que
aparece a 0.35V corresponde a cobre, contaminante del HCl
carbn vtreo modificado con nanopartculas de oro en HCl 0.15m (rojo) y de una
solucin de 100 ppb de Hg en HCl 0.15m (azul) de 0V a 0.7V. El pico que
aparece a 0.35V corresponde a cobre, contaminante del HCl y el del mercurio a
0.55V
69
4.2.1.4 . Electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro
fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro en HCl 0.15m (azul) y
de una solucin de 10 ppm de Hg en HCl 0.15m (rojo)
fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro en HCl 0.15m (azul) y de
una solucin de 100 ppb de Hg en HCl 0.15m (rojo)
Con el electrodo de carbn vtreo no se puede observar el pico de mercurio en

concentraciones de 10 ppm, mientras que para 100 ppb ya est bien definido. En resumen,
los potenciales en los que se registra el pico del mercurio para los 4 tipos de electrodos en
el barrido realizado en H2SO4 0.05M son:
70
Tabla 4.2. Potenciales de deteccin de mercurio para cada electrodo
Potencial de deteccin Potencial de deteccin

Electrodo
de Hg 10 ppm (V) de Hg 100 ppb (V)
Electrodo impreso con nanopartculas
0.21 0.38
de oro
Electrodo de carbn vtreo
- 0.55
modificado con film de oro
Electrodo de carbn vtreo - 0.53
Electrodo de fibra de carbn 0.45 0.55
4.2.2. Anlisis de repetitividad y sensibilidad de los electrodos en la deposicin y

deposicin.
4.2.2.1. Anlisis estadstico de repetibilidad y sensibilidad
Los resultados obtenidos con cada tcnica, expresados en funcin de la desviacin

relativa estndar calculada con el promedio de las tres lecturas son los siguientes:
I. Electrodo impreso con nanopartculas de oro
De los resultados obtenidos se puede observar que la menor desviacin estndar se

obtiene con Voltametra de Onda Cuadrada tanto para rea como para altura a 0.3V por 30
segundos, siendo 4.37% y 5.83% respectivamente.
Tabla 4.3. Desviacin relativa estndar para reas y alturas con las tcnicas SLV y SWV
SLV SWV
CONDICIONES
ALTURA % AREA % ALTURA % AREA %
0,3V/60s 19.69 19.95 20.36 12.95
0,1V/60s 26.46 32.06 18.78 23.60
0V/60s 6.97 9.10 12.89 27.23
0,3V/30s 8.93 7.61 5.83 4.37
0,3V/90s 6.61 8.14 9.5 21.5
En los siguientes grficos comparativos se pueden observar las desviaciones relativas

estndar para cada condicin probada:
71
Grfico 4.2. Desviacin relativa estndar en funcin del potencial y el tiempo de deposicin para el
electrodo impreso con nanopartculas de oro
II. Electrodo carbn vtreo modificado con film de oro

obtiene con Voltametra de Onda Cuadrada tanto para altura como para rea a 0.3V por 60
segundos, siendo 4.77% y 5.13% respectivamente.
SLV SWV
CONDICIONES
0,3V/60s 18.20 24.99 4.77 5.13
0,1V/60s 10.24 4.81 6.68 10.06
0V/60s 16.39 9.04 80.31 50.15
0,3V/30s 14.76 14.81 28.41 25.51
0,3V/90s 6.13 6.25 12.34 11.15
En los siguientes grficos comparativos se pueden observar las desviaciones

relativas estndar para cada condicin probada:
72
Grafico 4.3. Desviacin relativa estndar en funcin del potencial y el tiempo de deposicin para
el electrodo de carbn vtreo con film de oro
III. Electrodo carbn vtreo modificado con nanopartculas de oro

obtiene con Voltametra de Onda Cuadrada tanto para rea 3.08% a 0.3V por 30 segundos
como para altura 2.29% a 0.3V 90 segundos.
CONDICIONES VOLTAMETRA LINEAL SWV

ALTURA % AREA % ALTURA %
AREA %
0,3V/60s 4.98 5.21 3.57
3.24
0,1V/60s 11.30 7.79 9.7
6.60
0V/60s 7.56 13.76 7.12
5.28
0,3V/30s 18.16 18.50 4.58
3.08
0,3V/90s 20.16 17.38 2.29
5.10

73
Grafico 4.4. Desviacin relativa estndar en funcin del potencial y el tiempo de deposicin para el
electrodo de carbn vtreo con nanopartculas de oro
IV. Electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro

obtiene tanto para Voltametra de Onda Cuadrada como para Voltametra Lineal con los
valores de altura de pico con un valor de 0.19% y 1.78% respectivamente a 0.3V y 90
segundos.
VOLTAMETRA LINEAL SWV

CONDICIONES
0,3V/60s 10.06 5.51 1.49 7.11
0,1V/60s 26.66 25.20 18.42 13.01
0V/60s 10.68 14.59 9.13 11.23
0,3V/30s 9.22 5.02 27.26 18.68
0,3V/90s 1.78 3.51 0.19 2.89

74
Grfico 4.5. Desviacin relativa estndar en funcin del potencial y el tiempo de deposicin para
el electrodo de fibra de carbn con nanopartculas de oro
4.2.2.2. Determinacin del potencial ptimo de deposicin
El mejor potencial de determinacin de mercurio para cada electrodo y la mejor

tcnica de anlisis es la que produce el pico de mayor tamao y mejor definicin (los
grficos de los barridos se pueden ver en el anexo I.1.1.), los resultados se resumen en la
siguiente tabla, empleando los valores de altura de pico (corrientes de pico) ya que con
estos se obtuvo la menor desviacin relativa estndar:
Tabla 4.7. Corrientes de pico (Ip) obtenidas para los cuatro electrodos investigados a distintos potenciales,
con las tcnicas de Voltametra Lineal (SVL) y Voltametra de Onda Cuadrada (SWV) con 60 segundos de
deposicin
ELECTRODO 1 ELECTRODO 2 ELECTRODO 3 ELECTRODO 4

POTENCIAL Corriente de pico Corriente de pico Corriente de pico Corriente de pico
(voltios) (A) (A) (A) (A)
SVL SWV SVL SWV SVL SWV SVL SWV
0,3V 0.53 2.67 0.12 0.65 0.08 1.07 0.01 0.04
0,1V 0.35 2.01 0.08 0.45 0.04 0.19 0.01 0.03
0V 0.33 1.7 0.07 0.31 0.11 0.27 0.004 0.01
75
En los siguientes grficos comparativos se puede observar las diferencias de
corrientes con entre los electrodos, con las dos tcnicas empleadas a los distintos
potenciales:
Grfico 4.6. Corrientes de pico en funcin del potencial para cada electrodo
4.2.2.3. Determinacin del tiempo ptimo de deposicin
El mejor tiempo de deposicin de mercurio para cada electrodo y la mejor tcnica

de anlisis es la que produce el pico de mayor tamao y mejor definicin (los grficos de
los barridos se pueden ver en el anexo I.1.2.).
En la siguiente tabla se resumen los resultados obtenidos:

76
Tabla 4.8. Corrientes de pico (Ip) obtenidas para los cuatro electrodos investigados a distintos tiempos de
deposicin, con las tcnicas de Voltametra Lineal (SVL) y Voltametra de Onda Cuadrada (SWV) a 0.3V
como potencial de deposicin
ELECTRODO 4
ELECTRODO 1 ELECTRODO 2 ELECTRODO 3
Corriente de
Corriente de pico Corriente de pico Corriente de pico
TIEMPO pico
(A) (A) (A)
(segundos) (A)
SVL SWV SVL SWV SVL SWV SVL SWV
30 0.097 1.81 0.07 0.28 0.05 0.41 0.005 0.015
60 0.53 2.67 0.12 0.65 0.08 1.07 0.004 0.010
90 0.29 1.73 0.12 0.51 0.10 0.58 0.013 0.050
En los siguientes grficos comparativos se puede observar las diferencias de

corrientes con entre los electrodos, con las dos tcnicas empleadas a los distintos
potenciales:
Grfico 4.7. Corrientes de pico en funcin del tiempo para cada electrodo
77
En conclusin luego de estos anlisis se determina que para cada electrodo los
mejores tiempos, potenciales y tcnica de deposicin son:
Tabla 4.9. Parmetros ptimos para la determinacin de 100 ppb de mercurio por SWV segn cada tipo
de electrodo
Potencial Tiempo
Electrodo Tcnica Parmetro
(V) (seg)
Impreso de Oro SWV rea 0.3 60
Carbn vtreo con film de oro SWV Altura 0.3 60
Carbn vtreo con nanopartculas

SWV Altura 0.3 60
de oro
Fibra de carbn con Altura
SWV 0.3 90
Adicionalmente se determina que el mejor electrodo es el de fibra de carbon

modificado con nanoparticulas de oro ya que con este se obtuvo la mejor repetibilidad y
trabaja a corrientes muy bajas con una alta sensibilidad, por lo tanto las siguientes pruebas
se realizaran con este electrodo.
4.3. Tercera parte. Definicin de los parmetros de onda cuadrada para una
solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m
4.3.1. Influencia de la variacin de la amplitud en la respuesta del electrodo en una

solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0,15m
Los mejores resultados se obtienen con una amplitud de 40 mV, tomando en cuenta
los valores de alturas de pico, segn los valores de desviacin estndar obtenidos.
Los resultados se pueden observar en la siguiente tabla:
78
Tabla 4.10. Valores de desviacin relativa estndar del barrido realizado a una solucin
de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m utilizando Voltametra de Onda Cuadrada a
diferente amplitud: 10, 40 y 80 mV
Amplitud Desviacin relativa estndar Altura

(mV) (%)
10 11.0
40 5.0
80 6.0
En los siguientes grficos se pueden observar los valores de alturas de pico

obtenidas en los barridos de la solucin de 100 ppb:
Grfico 4.8. Comparacin de las desviaciones relativas estandar obtenidas

con los valores de altura de pico de tres barridos realizados a una solucin
de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m utilizando Voltametra de Onda
Cuadrada, variando la amplitud: 10, 40 y 80 mV
En los siguientes grficos se pueden observar los barridos realizados al blanco y a la

solucin de 100 ppb de Hg con una amplitud de 40 mV:
79
Figura 4.17. Barrido por Voltametra de Onda Cuadrada de 3 blancos de HCl
0.15m a 40 mV de amplitud previo lavado del electrodo con agua y posterior
activacin con 3 ciclos de Voltametra Cclica en HCl 0.15m
Figura 4.18. Barrido por Voltametra de Onda Cuadrada de una solucin de

100 ppb de mercurio en HCl 0.15m a 40 mV de Amplitud previo lavado del
electrodo con agua y posterior activacin con 3 ciclos de Voltametra Cclica
en HCl 0.15m
4.3.2. Influencia de la variacin de la frecuencia en la respuesta del electrodo en una

solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m
Los mejores resultados se obtienen con una frecuencia de 60 Hz, tomando en

cuenta los valores de altura de pico, segn los valores de desviacin estndar obtenidos,
los mismos que se pueden apreciar en la siguiente tabla:
80
Tabla 4.11. Valores de desviacin relativa estndar del barrido realizado a
una solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m utilizando Voltametra de
Onda Cuadrada a diferente frecuencia: 3, 20 y 60 Hz
Frecuencia Desviacin relativa estndar Altura

(Hz) (%)
3 5.0
20 13.0
60 3.0
En los siguientes grficos se pueden observar los valores de altura de pico


con los valores de altura de pico de tres barridos realizados a una solucin de
100 ppb de mercurio en HCl 0.15m utilizando Voltametra de Onda
Cuadrada, variando la frecuencia: 3, 20 y 60 Hz
En los siguientes grficos se pueden observar los barridos realizados al blanco y a

la solucin de 100 ppb de Hg con una amplitud de 40 mV y una frecuencia de 60 Hz:
81
Figura 4.19. Barridos por Voltametra de Onda Cuadrada de blanco HCl
0.15m a 60 Hz de frecuencia
Figura 4.20 Barrido por Voltametra de Onda Cuadrada de una solucin de

100 ppb de mercurio en HCl 0.15m a 60 Hz de frecuencia previo lavado del
electrodo con agua y posterior activacin con 3 ciclos de Voltametra Cclica
en HCl 0.15m
4.3.3. Influencia de la variacin de los incrementos en la respuesta del electrodo en

una solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m
Los mejores resultados se obtienen con incrementos de 10 mV, tomando en cuenta

que con este valor hay una mejor definicin del pico y menor desviacin relativa estndar,
los mismos que se pueden apreciar en la siguiente tabla:
82
Tabla 4.12. Valores de desviacin relativa estndar del barrido de realizados
a una solucin de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m utilizando Voltametra
de Onda Cuadrada con variacin de incrementos: 2, 6 y 10 mV
Incrementos Desviacin relativa estndar Altura

(mV) (%)
2 9.0
6 11.0
10 8.0
En los siguientes grficos se pueden observar los valores de altura de pico


con los valores de altura de pico de tres barridos realizados a una solucin de
100 ppb de mercurio en HCl 0.15m utilizando Voltametra de Onda
Cuadrada, variando los incrementos: 2, 6 y 10 mV
En los siguientes grficos se pueden observar los barridos realizados al blanco y a la

solucin de 100 ppb de Hg con una amplitud de 40 mV y una frecuencia de 60 Hz e
incrementos de 10mV:
83
Figura 4.21. Barridos por Voltametra de Onda Cuadrada de blanco HCl
0.15m a 60 Hz de frecuencia, 40 mV de amplitud e incrementos de 10 mV

100 ppb de mercurio en HCl 0.15m a 60 Hz de Frecuencia, 40 mV de
amplitud e incrementos de 10 mV previo lavado del electrodo con agua y
posterior activacin con 3 ciclos de Voltametra Cclica en HCl 0.15m
84
4.4. Cuarta parte. Definicin de los parmetros de onda cuadrada para
concentraciones menores de 100 ppb de mercurio en HCl 0.15m
Para concentraciones menores a 100 ppb fue necesario modificar las condiciones de
los barridos debido a que despus de realizar ms de 5 repeticiones se observa que el
electrodo se empieza a desactivar y ya no se obtienen picos bien definidos. Esta rpida
desactivacin puede deberse a la saturacin del electrodo debido al elevado tiempo de
deposicin que se est aplicando (90 segundos) sobre el microelectrodo, adicionalmente se
empieza a observar mayor interferencia del blanco en el pico de mercurio, segn se aprecia
en las siguiente figura:

5.2 ppb de Hg en HCl 0.15m a 60 Hz de Frecuencia, 40 mV de amplitud e
incrementos de 10 mV
Se baja el tiempo de deposicin de 90 segundos a 30 segundos y los incrementos a

6 mV y el resto de condiciones se mantiene. El barrido se lo hace desde 0.35V hasta 0.7V.
Las pruebas se hacen con una solucin de 5 ppb de Hg en HCl 0.15m.
85
Figura 4.24. Barrido por Voltametra de Onda Cuadrada de una solucin
del blanco HCl 0.15m (rojo) y de una solucin de 5 ppb de Hg en HCl 0.15m
con 30 segundos de deposicin (rojo), barrido de 0.35 a 0.7V, incrementos 6
mV
Posteriormente se baja la frecuencia a 30 Hz y se elimina la activacin del electrodo

en HCl 0.15m ya que el exceso de iones cloruro disminuye la superficie activa del oro por
la formacin de amalgamas y se reemplaza por una activacin de 5 ciclos de voltametra
cclica en H2S04 0.05M. Sin embargo, a pesar de que los picos estn bien definidos, el
objetivo es conseguir que el blanco se asemeje a una lnea recta, para evitar la interferencia
del mismo en la determinacin del lmite de deteccin, para esto se hacen pruebas bajando
nuevamente la frecuencia a 15 y 10 Hz y luego bajando los incrementos a 4 mV.
Figura 4.25. Barrido por Voltametra de Onda Cuadrada de una solucin del
blanco HCl 0.15m a distintas frecuencias: 30 Hz (rojo), 15 Hz (azul) y 10 Hz
(caf)
86
Los mejores resultados se obtienen con una frecuencia de 10 Hz y si se bajan los
incrementos a 4 mV, el blanco ya se asemeja a una lnea recta.

del blanco HCl 0.15m a 10 Hz de frecuencia e incrementos de 4 mV,
amplitud 40 mV
Se prepara una curva de calibracin de 5, 10, 20, 30, 40 y 50 ppb de Hg en HCl

0.15m, para ver la estabilidad del electrodo en las condiciones definidas.

del blanco HCl 0.15m (rojo) y de una solucin de 5 ppb de Hg (azul), 10
ppb de Hg (purpura), 20 ppb de Hg (verde), 30 ppb de Hg (morado), 40
ppb de Hg (verde) y 50 ppb de Hg (rosado) en HCl 0.15m
Se concluye que mximo se deben hacer 6 medidas, posteriormente se deber

reactivar el electrodo realizando una cronoamperometra de limpieza y posterior lavado
con agua y metanol. Finalmente queda definido el procedimiento analtico a seguir para
soluciones de mercurio de concentraciones menores a 100 ppb de la siguiente manera:
87
I. Realizar el Hardware test.
II. Determinar el potencial de circuito abierto.
III. Caracterizar el electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro
por voltametra cclica en H2S04 0.05M.
IV. Activar el electrodo con 5 ciclos de voltametra cclica en H2S04 0.05M.
V. Realizar el barrido por SWV del blanco en HCl 0.15m.
VI. Realizar el barrido por SWV de las soluciones problema.
VII. Caracterizacin final del electrodo por voltametra cclica en H2S04 0.05M.
VIII. Realizar una cronoamperometra de limpieza del electrodo.
IX. Lavar el electrodo con agua, metanol y acetona.
Los parmetros a emplear para concentraciones menores a 100 ppb de Hg son:
Primera etapa
Potencial (V) 0.7
Tempo (sec) 15
Segunda etapa
Potencial (V) 0.3
Tempo (sec) 30
88
4.5. Validacin del mtodo
Se procede a la validacin del mtodo analtico tomando como base al electrodo de

fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro con concentraciones menores a 100
ppb de mercurio, empleando la tcnica de Voltametra de Onda Cuadrada y con los valores
de altura de pico. Las concentraciones escogidas para trazar las curvas de calibracin son:
5, 10, 20, 30 y 40 ppb de Hg en HCl 0.15m; el procedimiento analtico a seguir as como
los parmetros de barrido y preacondicionamiento son los establecidos en el punto 4.4.
4.5.1. Selectividad del mtodo
En las condiciones empleadas el mtodo determina exclusivamente mercurio, no hay

interferencias. El pico de mercurio se puede observar a un potencial de 0.45V. Como
ejemplo se adjunta el grafico correspondiente al barrido con el electrodo de fibra de carbn
modificado con nanopartculas de oro del blanco y una solucin de 10 ppb de Hg en HCl
0.15m, utilizando la tcnica de voltametra de onda cuadrada en las condiciones definidas y
siguiendo el procedimiento analtico establecido en el punto 4.4.
Figura 4.28. Superposicin de los grficos de barrido por SWV con el

electrodo de carbn de fibra de carbn modificado con nanopartculas de
oro, de las soluciones del blanco HCl 0.15m (rojo) y 10 ppb de Hg (azul).
Se observa el pico de mercurio a 0.45V
89
4.5.2. Determinacin del Lmite de Deteccin y Lmite de Cuantificacin
Ya que el blanco no puede ser medido, la mnima respuesta verificable de mercurio

se tom como lmite de deteccin.
I. El lmite de deteccin fue establecido en 2 ppb (0.002 mg/L), ya que 1 ppb

es prcticamente igual al blanco.
Figura 4.29. Superposicin de los grficos de barrido de las soluciones con

Hg: blanco (rojo), 1 ppb de Hg (azul), 2 ppb de Hg (caf), 3 ppb de Hg
(verde)
II. El lmite de cuantificacin se fija en 5 ppb (0.005 mg/L), con un porcentaje

de recuperacin de 97.66%. Se toma este valor como lmite de cuantificacin ya que el de
3 ppb a pesar de tener un buen porcentaje de recuperacin est muy cercano al lmite de
deteccin. Los valores obtenidos en los barridos realizados con cada concentracin se
encuentran en el anexo II.1. Los resultados correspondientes al porcentaje de recuperacin
se resumen en el siguiente cuadro:
Tabla 4.13. Resumen de valores obtenidos para la determinacin del L.C.
3 ppb 5 ppb 7.5 ppb 10 ppb

Medida Conc. Recup. Conc. Recup. Conc. Recup. Conc. Recup.
ppb % ppb % ppb % ppb %
1 2.82 93.92 4.48 89.50 7.38 98.43 10.02 100.25
2 3.15 105.12 5.44 108.82 7.62 101.56 10.29 102.89
3 3.40 113.39 4.73 94.66 7.17 95.60 10.00 100.02
Promedio 3.12 104.14 4.88 97.66 7.39 98.53 10.11 101.05
90
En el siguiente grafico se observan los barridos realizados con cada concentracin:
Figura 4.30. Superposicin de los grficos de barrido de las soluciones con

Hg: blanco (rojo), 3 ppb de Hg (azul), 5 ppb de Hg (caf), 7.5 ppb de Hg
(verde), 10 ppb de Hg (morado)
Finalmente los lmites quedan fijados con los siguientes valores:
Limite de deteccin (L.D.) 2 ppb
Limite de cuantificacin (L.C.) 5 ppb
4.5.3. Linealidad dentro del rango de trabajo
El mtodo mantiene linealidad desde 5 hasta 100 ppb de Hg, pero se define como
rango de trabajo desde 5 ppb hasta 40 ppb, debido a que el inters de la investigacin es el
anlisis de rangos bajos, como el electrodo se desactiva rpidamente ya se haba definido
que lo conveniente es realizar un mximo 5 lecturas, por lo que estos valores se toman
como limites para la validacin del mtodo.
Los resultados obtenidos con las curvas trazadas para los rangos establecidos son:
91
CONCENTRACIN ALTURA
Ppb nA
5 1.433
10 3.744
20 7.804
30 12.840
40 17.000
50 19.300
80 29.220
100 36.530
Figura 4.31. Curva de calibracin rango lineal 5-100 ppb de Hg
Rango de 5 a 40 ppb de Hg:
CONCENTRACION ALTURA
Ppb nA
5 2.303
10 4.101
20 7.579
30 11.202
40 14.998
92
Figura 4.32. Curva de calibracin rango lineal 5-40 ppb de Hg
4.5.4. Precisin
Para los 5 niveles de concentracin: 5, 10, 20, 30 y 40 ppb de mercurio, re

realizaron 6 determinaciones diarias para cada nivel por 5 das. Se toman los valores
obtenidos con las alturas de pico.
En el siguiente cuadro se resumen los valores promedios hallados para cada nivel
de concentracin establecido, por cada da de anlisis.
Tabla 4.14. Resumen de las medias de concentracin
CONCENTRACION CONCENTRACION REAL

ppb DIA 1 DIA 2 DIA 3 DIA 4 DIA 5
5 4.84 5.01 4.80 4.91 4.96
10 10.38 10.03 10.39 10.50 10.57
20 19.91 20.19 19.62 19.64 19.45
30 29.83 29.60 30.38 29.57 29.58
40 40.24 40.27 39.88 40.41 40.48
El anlisis de varianza para los 5 grupos arroja los siguientes resultados:
93
Tabla 4.15. Anlisis de varianza de un factor para cada nivel de concentracin de mercurio
Concentracin 5 ppb 10 ppb 20 ppb 30 ppb 40 ppb
Promedio 4.907 10.378 19.772 29.808 40.278
SCT 0.660 12.067 11.292 89.455 102.194
GL 29 29 29 29 29
F 2.396 0.620 1.296 0.193 0.096
F critico 2.759 2.759 2.759 2.759 2.759
Sr 0.138 0.663 0.612 1.863 2.007
SR 0.156 0.650 0.616 1.838 1.976
% recuperacin 98.147 103.780 98.860 99.360 100.696
% CVr 2.764 6.627 3.058 6.210 5.016
% CVR 3.126 6.500 3.081 6.126 4.940
Lr 0.383 1.837 1.695 5.164 5.562
LR 0.433 1.802 1.708 5.094 5.477
Como objetivo de validacin se estableci un CVr 15% y un CVR 20%, as

como un porcentaje de recuperacin de 80 120%. En todos los casos los valores
encontrados estn dentro de estos rangos, por lo que se puede concluir que los grupos son
homogneos.
En ninguno de los grupos el valor de F calculado ( = 0.05) es mayor que el F

crtico por lo que se concluye que no hay diferencias significativas entre los mismos.
Los datos experimentales de alturas y ppb de Hg para cada nivel de concentracin y

para cada da de anlisis se pueden ver en el anexo No. II.2.
94
4.5.5. Exactitud
Los valores encontrados en los 3 das de anlisis para la muestra de referencia y

para el estndar son:
Tabla 4.16. Datos de concentracin de mercurio obtenidos en 3 das con la muestra de

referencia y el estndar de 10 ppb de Hg
DIA 1 DIA 2 DIA 3 Estndar

ppb Hg ppb Hg ppb Hg ppb Hg
10.61 10.13 10.77 9.6
10.22 9.96 9.90 9.4
10.30 9.97 9.37 9.97
10.09 10.45 9.90 10.68
10.02 10.68 9.01 9.64
Los resultados estadsticos obtenidos son:
Parmetro Muestra de Referencia Estndar
X 10.092 9.858
S 0.452 0450
U 0.131 0.201
Urecuperacin = 0.240
Adicionalmente se calcula el sesgo obteniendo un t calculado de 0.133; el t critico

para un 95% ( = 0.025) es 2.145, por lo tanto t calc < t crit, ya que 0,133 < 2.145, por lo
tanto no existen diferencias significativas y su veracidad es aceptable.
95
4.5.6. Robustez del mtodo
Para la determinacin de la funcin de respuesta se consideran las curvas de

calibracin obtenidas para cada da de anlisis, las mismas que se muestran en el anexo
No. II.4. Los resultados obtenidos son:
Parmetro curva 1 curva 2 curva 3 curva 4 curva 5 X

a mx. 0.322 0.445 0.656 0.009 0.899 0.466
a min 0.304 -0.046 -0.302 -0.857 -0.404 -0.261
b mx. 0.366 0.357 0.518 0.382 0.494 0.423
b min 0.365 0.337 0.479 0.347 0.441 0.394
R 0.995
A 0.466 entre -0.261
B 0.423 entre 0.394
Los valores para R se encuentran dentro de los objetivos de la validacin, esto es un

R2 0.99
4.5.7. Incertidumbre del mtodo
En la siguiente tabla se pueden observar todos los componentes relacionados con el

clculo de la incertidumbre del mtodo desarrollado.
Tabla 4.17. Componentes para el clculo de la incertidumbre
Componente Unidades Valor u tpica u relativa u2 relativa

U ajuste Ppb 40 0.338 0.008 7.146E-05
U patrn % 1000 5.000 0.005 2.500E-05
VOLUMEN AFORO
Baln (calib)50mL mL 50 0.030 0.001 3.600E-07
Micropipeta (calib) L 100 0.150 0.002 2.250E-06
VOLUMEN MUESTRA
V baln 25mL mL 25 0.02 0.0008 0.000001
96
V pipeta 5mL mL 5 0.0075 0.0015 0.000002
REPRODUCIBILIDAD Ppb 40 1.00 0.0251 0.000629
RECUPERACION Ppb 10 0.240 0.0240 0.000575
= 0.0013
uc = 0.04
Sin unidades multiplico por el nivel ms bajo que es 5 y me queda:
uc = 0,04*5
uc = 0.2 ppb
U= 2*0,2
U= 0,4ppb
El resultado obtenido es U = Valor ledo +/- 0.4
La incertidumbre expandida de medida se obtuvo multiplicando la incertidumbre

tpica uc por el factor de cobertura k = 2 que, para una distribucin normal, corresponde
a una probabilidad de cobertura de aproximadamente el 95%.
4.5.8. Aplicabilidad del mtodo
Las muestras analizadas son las siguientes:
1. Agua entubada procedente de la parroquia de San Marcos, Cantn Alaquez,

Provincia de Cotopaxi (muestra con alta coloracin amarillenta, posiblemente por alto
contenido de hierro).
2. Agua de origen textil (Jersey salida 43230B) facilitada por los laboratorios OSP,
de alta coloracin azul, previamente digestada en microondas.
3. Agua de origen textil (Jersey salida 43230B) facilitada por los laboratorios OSP,
de alta coloracin azul, previamente digestada en H2SO4.
Los valores obtenidos son los siguientes:
97
Tabla 4.18. Resultados obtenidos en el anlisis de muestras de aguas naturales y residuales
Valor esperado Valor observado Porcentaje de

Muestra
ppb Hg ppb Hg recuperacin (%)
Agua entubada 10 9.60 96.00
Agua de origen textil 12 11.85 98.75
digestada en Microondas
Agua de origen textil 12 11.74 97.83
digestada en H2SO4
Muestra de referencia 10 9.67 96.70
El mtodo se considera aplicable en aguas claras y residuales previa digestin, ya

que los porcentajes de recuperacin estn dentro del rango esperando entre 80% 120%.
No se observan interferencias.
4.5.9. Declaracin de validacin del mtodo
INFORME FINAL Y DECLARACIN DEL MTODO VALIDADO
Cuantitativo: x Analito: Mercurio
Cualitativo: - Unidades: mg/L
De identificacin: - Matriz: Aguas claras y residuales
PRUEBAS CRITERIO CUMPLE / NO CUMPLE
Repetibilidad %SDr 15% Cumple
Reproducibilidad %SDR 20% Cumple
Exactitud Z-score 2% Cumple
Incertidumbre Valor ledo 0.4 Cumple
Recuperabilidad 80 120% Cumple
Linealidad
Limite de confianza pendiente 0.466 / -0.261 Cumple
98
Limite de confianza b 0.423 / 0.394 Cumple
R2 0.99 Cumple
Selectividad/Especificidad: El mtodo es selectivo para mercurio

Interferencias conocidas: El anlisis no reporta ninguna interferencia en el rango de
trabajo validado.
Limite de deteccin (l.d.) 0.002 mg/l
Limite de cuantificacin (l.c.) 0.005 mg/l
Intervalo de trabajo validado: 0.005 0.040 mg/l
DECLARACIN DE LA VALIDACIN:
El mtodo de anlisis de mercurio en aguas ha cumplido con todos los criterios de

aceptacin por lo que el mtodo se considera como validado.
4.6. Comparacin de los resultados obtenidos con el mtodo desarrollado con los
conseguidos por Absorcin Atmica
Se analizaron dos muestras que fueron solicitadas a los Laboratorios OSP y se

obtuvieron los siguientes resultados:
Concentracin obtenida Concentracin obtenida

Muestra por absorcin atmica por Voltametra
ppb Hg ppb Hg
*Efluente de origen minero

1986 2100
(ref. 40200 e)
*Muestra de origen textil

2.1 2.06
(ref. 40178 A)
99
*Muestras disponibles en el OSP al momento del anlisis.
Resultados muy aproximados se obtienen con la muestra de concentracin baja de

mercurio (2.1 ppb), con un 1.9% de diferencia, mientras que con la muestra de
concentracin de mercurio alta (1986 ppb), se obtiene un 5.74% de diferencia,
posiblemente por las altas diluciones que se deben realizar para al anlisis.
100
CAPTULO V
5.1. CONCLUSIONES
5.1.1. El mercurio puede ser cuantificado tanto en aguas claras como en residuales
por voltametra de redisolucin andica, se emplearon 4 electrodos: electrodo impreso con
nanopartculas de oro, electrodo de carbn vtreo modificado con film de oro, electrodo de
carbn vtreo modificado con nanopartculas de oro y electrodo de fibra de carbn
modificado con nanopartculas de oro. Los mejores resultados se obtuvieron con el
electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro.
5.1.2. La deposicin electroqumica del oro se constituye en una tcnica sencilla y

rpida para la preparacin de electrodos de carbn modificados con nanopartculas de oro.
5.1.3. Los microelectrodos de fibra de carbn pueden ser construidos en el

laboratorio y a bajo costo, esto es, $2.00 (dos dlares) por unidad.
5.1.4. Al tener el electrodo de fibra de carbn pocos milmetros de longitud y un

dimetro de 9 11 , es necesario manipularlos con mucho cuidado.
5.1.5. Con los microelectrodos de fibra de carbn modificados con nanopartculas

de oro se puede cuantificar Hg(II) a partir de 5 ppb, pero ya puede ser detectado a partir de
2 ppb.
5.1.6. Si bien la produccin, exportacin e importacin de mercurio en el Ecuador

est prohibida hasta el ao 2020, los ros y lagos del pas estn muy contaminados ya que
se lo sigue utilizando en las actividades mineras para la extraccin del oro. Bajo esta
perspectiva el mtodo desarrollado puede ser aplicado in situ, evitando el transporte de
la muestra hasta el laboratorio, facilitando la realizacin del monitoreo medioambiental de
mercurio.
5.1.7. El poder realizar in situ anlisis de trazas de elementos y en condiciones

naturales, se constituye en un gran cambio para la qumica analtica y las ciencias
ambientales.
101
5.1.8. El mtodo desarrollado es simple, rpido y confiable, para su aplicacin no
se requieren condiciones especiales en el laboratorio ya que se trabaja a temperatura y
presin ambiental y sin necesidad de agitacin.
5.1.9. El mtodo desarrollado es muy poco contaminante, se emplea una mnima

cantidad de reactivos y los volmenes de muestra requeridos para el anlisis son pequeos,
generndose menos desechos.
5.1.10. En las condiciones de trabajo aplicadas los electrodos impresos con

nanopartculas de oro se desactivan muy rpidamente, su estabilidad es muy baja.
5.1.11. La caracterizacin de los electrodos modificados con oro se la hace en

acido sulfrico, ya que el oro puede formar una capa monoatmica sobre la superficie del
electrodo con la propiedad de oxidarse y reducirse fcilmente.
5.1.12. Los microelectrodos tienen sensibilidades mucho ms bajas que los

electrodos impresos (100 veces menos), esto evita muchos problemas de interferencias por
cadas de potencial, corrientes capacitivas, corrientes reductivas, etc.
5.1.13. El mtodo desarrollado cumpli con los objetivos de validacin planteados,

es selectivo para mercurio y no presenta interferencias de ningn otro elemento; se lo
puede aplicar tanto en aguas naturales como en aguas residuales previa digestin; tiene
buena linealidad en el rango de estudio de 5 a 40 ppb de Hg con un R2 de 0.999; los
coeficientes de repetibilidad y reproducibilidad fueron menores al 7% y los porcentajes de
recuperacin estn entre 98.15 103.8% en el rango de trabajo investigado.
5.1.14. Los resultados obtenidos con el mtodo desarrollado por voltametra son
similares a los conseguidos por absorcin atmica en muestras con baja concentracin de
mercurio, 2.06 ppb y 2.1 ppb de mercurio respectivamente. Se observa mayor diferencia en
los resultados en muestras altamente contaminadas posiblemente por las altas diluciones
que se deben realizar para al anlisis.
102
5.2. RECOMENDACIONES
5.2.1. En un prximo estudio es importante encontrar un recubrimiento para

proteger el oro depositado sobre el electrodo para aumentar su estabilidad, tambin seria
conveniente probar con otras concentraciones de la solucin de oro para la
electrodeposicin, en el presente estudio se utiliz una solucin de 10 ppm de oro.
5.2.2. Es necesario hacer estudios para determinar cunto influye la longitud del
filamento de carbn en la estabilidad del electrodo.
5.2.3. Una vez que se consiga aumentar la estabilidad de los microelectrodos, se

debera trabajar con tiempos de deposicin ms largos para poder cuantificar cantidades
ms pequeas de analitos.
5.2.4. Con el mismo mtodo se puede identificar y cuantificar cobre, utilizando la

tcnica de voltametra cclica, se observan los picos tanto de cobre como de mercurio sin
ninguna interferencia entre ambos.
5.2.5. El Ecuador se encuentra en la lista roja mundial de pases que ms

contaminan con mercurio y es el cuarto pas en Latinoamrica que ms mercurio emite al
ambiente, si bien, ya se han restringido las importaciones y el uso del mismo
(especialmente en la minera artesanal), es fundamental definir el grado de contaminacin
existente y hacer el seguimiento del mismo y que mejor si se cuenta con un mtodo que
pueda ser aplicado in situ y a bajo costo.
5.3. MATERIALES DE REFERENCIA
5.3.1. Referencias Bibliogrficas
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108
ANEXOS
109
ANEXO I
DATOS EXPERIMENTALES
I.1. Anlisis de repetitividad y sensibilidad de los electrodos en la deposicin y

deposicin
I.1.1. Grficos de la determinacin del potencial ptimo de deposicin
Electrodo impreso con nanopartculas de oro
Figura I.1. Barrido por SLV de una solucin de 100 ppb de

mercurio a 0.3V (rojo), 0,1V (azul) y 0V (morado) a 60 segundos
con electrodo impreso de oro
Figura I.2. Barrido por SWV de una solucin de 100 ppb de

mercurio a 0V (morado), 0.1V (azul) y 0.3V (rojo) a 60 segundos
110
Electrodo de carbn vtreo modificado con film de oro

mercurio a 0.3V (morado), 0,1V (rojo) y 0V (azul) a 60 segundos
con electrodo de Carbn Vtreo modificado con film de oro

mercurio a 0.3V (morado), 0,1V (rojo) y 0V (azul) a 60 segundos
con electrodo de Carbn Vtreo modificado con film de oro
Electrodo de carbn vtreo modificado con nanopartculas de oro
Figura I.5. Barrido por SLV de una solucin de 100 ppb de mercurio a
0.3V (rojo), 0,1V (azul) y 0V (morado) a 60 segundos con electrodo de
Carbn Vtreo modificado con nanopartculas de oro
111
Figura I.6. Barrido por SWV de una solucin de 100 ppb de mercurio
a 0.3V (rojo), 0,1V (morado) y 0V (azul) a 60 segundos con electrodo
de Carbn Vtreo modificado con nanopartculas de oro
Electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro
Figura I.7. Barrido por SLV de una solucin de 100 ppb de mercurio a
0.3V (rojo), 0,1V (azul) y 0V (morado) a 60 segundos con electrodo de
Fibra de Carbn modificado con nanopartculas de oro
a 0.3V (rojo), 0,1V (azul) y 0V (morado) a 60 segundos con electrodo
de Fibra de Carbn modificado con nanopartculas de oro
112
I.1.2. Grficos de la determinacin del tiempo ptimo de deposicin
Electrodo impreso con nanopartculas de oro

mercurio a 0.3V a 30 (morado), 60 (rojo) y 90 (azul) segundos

mercurio a 0.3V a 30 (morado), 60 (rojo) y 90 (azul) segundos
Electrodo de carbn vtreo modificado con film de oro

mercurio a 0.3V a 30 (azul), 60 (rojo) y 90 (morado) segundos
con electrodo de carbn vtreo modificado con film de oro
113
a 0.3V a 30 (azul), 60 (rojo) y 90 (morado) segundos con electrodo de
carbn vtreo modificado con film de oro
Electrodo de carbn vtreo modificado con nanopartculas de oro
Figura I.13. Barrido por SLV de una solucin de 100 ppb de mercurio
a 0.3V a 30 (azul), 60 (rojo) y 90 (morado) segundos con electrodo de
carbn vtreo modificado con nanopartculas de oro
a 0.3V a 30 (azul), 60 (morado) y 90 (rojo) segundos con electrodo de
carbn vtreo modificado con nanopartculas de oro
114
Electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro
FiguraI.15. Barrido por SLV de una solucin de 100 ppb de mercurio a

0.3V a 30 (rojo), 60 (azul) y 90 (morado) segundos con electrodo de
fibra de carbn modificado con film de oro

mercurio a 0.3V a 30 (rojo), 60 (azul) y 90 (morado) segundos con
electrodo de fibra de carbn modificado con nanopartculas de oro
115
ANEXO II
VALIDACIN
II.1. Valores obtenidos para la determinacin del lmite de cuantificacin
Los valores hallados para las distintas concentraciones se resumen en los siguientes
cuadros:
Tabla II.1. Datos experimentales de altura y rea obtenidos a diferentes concentraciones de mercurio
Concentracin (ppb) Altura (nA) rea (nC)

3 1.795 0.161
3 1.898 0.191
3 1.974 0.179
Promedio 1.889 0.177
Desviacin estndar 0.090 0.015
Coeficiente de variacin % 4.764 8.475
Concentracin ppb Altura (nA) rea (nC)

5 2.303 0.211
5 2.599 0.219
5 2.382 0.213

7.5 3.194 0.287
7.5 3.266 0.283
7.5 3.129 0.337

10 4.004 0.351
10 4.085 0.374
10 3.997 0.347
116
II.2. Valores obtenidos para repetibilidad
Tabla II.2. Datos experimentales de altura obtenidos a diferentes concentraciones de mercurio en los 5 das
de anlisis
Concentracin ppb Da 1 (nA) Da 2 (nA) Da 3 (nA) Da 4 (nA) Da 5 (nA)
5 2.105 1.918 2.507 1.365 2.605
5 2.096 1.987 2.491 1.375 2.595
5 2.119 1.927 2.604 1.355 2.502
5 1.988 1.929 2.623 1.366 2.576
5 2.206 1.898 2.591 1.367 2.513
5 1.953 1.975 2.587 1.346 2.589
Promedio 2.078 1.939 2.567 1.362 2.563
Desviacin estndar 0.137 0.039 0.020 0.012 0.041
Coeficiente de variacin % 6.593 2.011 0.779 0.881 1.600
10 4.310 3.315 5.235 3.320 4.582
10 4.164 3.674 5.188 3.743 5.380
10 4.224 3.654 5.566 3.777 5.103
10 3.847 3.886 4.938 3.151 5.398
10 4.303 3.683 5.581 3.079 5.395
10 3.755 3.86 5.588 3.328 5.229
Promedio 4.101 3.679 5.349 3.400 5.181
117
Concentracin ppb Da (nA) Da 2 (nA) Da 3 (nA) Da 4 (nA) Da 5 (nA)
20 7.964 7.067 9.986 6.654 9.34
20 7.868 7.085 9.865 6.789 9.15
20 6.827 7.46 9.964 6.684 9.45
20 7.948 7.227 9.972 6.855 9.37
20 7.385 7.317 9.958 6.791 9.18
20 7.481 7.074 9.938 6.567 9.5
Promedio 7.579 7.205 9.947 6.723 9.332
30 12.050 10.960 14.980 10.7 14.361
30 11.730 9.140 15.030 12.07 13.995
30 10.890 10.580 16.034 10.35 14.016
30 10.990 11.360 14.954 10.33 13.865
30 10.600 10.960 15.006 9.109 14.132
30 10.950 9.820 15.820 9.484 13.987
Promedio 11.202 10.470 15.304 10.341 14.059
118
Concentracin ppb Da 1(nA) Da 2 (nA) Da 3 (nA) Da 4 (nA) Da 5 (nA)
40 15.62 16.47 19.983 13.985 19.546
40 14.97 13.74 20.104 14.890 18.876
40 14.00 14.50 20.302 14.600 19.024
40 14.47 14.00 19.893 13.986 18.134
40 15.89 13.97 20.005 14.360 19.965
40 15.04 12.36 19.943 13.890 19.356
Promedio 14.998 14.173 20.038 14.285 19.150
Tabla II.3. Datos de concentracin de mercurio obtenidos en cada una de las 6 mediciones realizadas en los
5 das de anlisis
Da 1
Concentracin
Medida
5 ppb 10 ppb 20 ppb 30 ppb 40 ppb
1 4.91 10.95 20.96 32.16 41.94
2 4.89 10.55 20.70 31.28 40.16
3 4.95 10.72 17.85 28.98 37.50
4 4.59 9.68 20.92 29.25 38.79
5 5.19 10.93 19.38 28.19 42.68
6 4.50 9.43 19.64 29.15 40.35
Promedio 4.84 10.38 19.91 29.83 40.24
119
Da 2
Concentracin
Medida
1 4.95 8.98 19.79 31.01 46.89
2 5.15 10.01 19.84 25.77 39.02
3 4.98 9.96 20.93 29.92 41.21
4 4.99 10.63 20.25 32.16 39.77
5 4.90 10.04 20.51 31.01 39.69
6 5.12 10.55 19.81 27.73 35.05
PROMEDIO 5.01 10.03 20.19 29.60 40.27
Da 3
Concentracin
Medida
1 4.68 10.16 19.70 29.73 39.77
2 4.65 10.06 19.46 29.83 40.02
3 4.88 10.82 19.65 31.84 40.41
4 4.91 9.56 19.67 29.67 39.59
5 4.85 10.85 19.64 29.78 39.82
6 4.84 10.87 19.60 31.41 39.69
PROMEDIO 4.80 10.39 19.62 30.38 39.88
Da 4
Concentracin
Medida
1 4.91 10.29 19.45 30.56 39.59
2 4.94 11.45 19.82 34.32 42.07
3 4.89 11.54 19.53 29.60 41.27
4 4.92 9.82 20.00 29.54 39.59
5 4.92 9.62 19.82 26.19 40.62
6 4.86 10.31 19.21 27.22 39.32
PROMEDIO 4.91 10.50 19.64 29.57 40.41
120
Da 5
Concentracin
Medida
1 5.05 9.28 19.47 30.22 41.33
2 5.03 10.99 19.06 29.44 39.89
3 4.83 10.40 19.71 29.48 40.21
4 4.99 11.03 19.54 29.16 40.44
5 4.85 11.02 19.13 29.73 40.08
6 5.01 10.67 19.81 29.42 40.92
PROMEDIO 4.96 10.57 19.45 29.58 40.48
II.3. Anlisis de varianza

Tabla II.4. Datos de concentracin de mercurio obtenidos en 5 das en el rango de trabajo
C ppb Da 1 Da 2 Da 3 Da 4 Da 5
Nivel 1 5.0 4.9 5.0 4.7 4.9 5.1
5.0 4.9 5.2 4.7 5.0 5.0
5.0 5.0 5.0 4.9 4.9 4.8
5.0 4.6 5.0 4.9 4.9 5.0
5.0 5.2 4.9 4.9 4.9 4.9
5.0 4.5 5.1 4.8 4.9 5.0
Nivel 2 10.0 11.0 9.0 10.2 10.3 9.3
10.0 10.6 10.0 10.1 11.5 11.0
10.0 10.7 10.0 10.8 11.6 10.4
10.0 9.7 10.6 9.6 9.9 11.0
10.0 10.9 10.0 10.9 9.7 11.0
10.0 9.4 10.6 10.9 10.3 10.7
Nivel 3 20.0 21.0 19.8 19.7 19.5 19.5
20.0 20.7 19.8 19.5 19.9 19.1
20.0 17.9 20.9 19.7 19.6 19.7
20.0 20.9 20.3 19.7 20.1 19.5
20.0 19.4 20.5 19.6 19.9 19.1
20.0 19.6 19.8 19.6 19.3 19.8
Nivel 4 30.0 32.2 31.0 29.7 30.6 30.2
30.0 31.3 25.8 29.8 34.4 29.4
30.0 29.0 29.9 31.8 29.7 29.5
30.0 29.3 32.2 29.7 29.6 29.2
30.0 28.2 31.0 29.8 26.3 29.7
30.0 29.2 27.7 31.4 27.3 29.4
Nivel 5 40.0 41.94 46.89 39.77 39.69 41.33
40.0 40.16 39.02 40.02 42.19 39.89
40.0 37.50 41.21 40.41 41.39 40.21
40.0 38.79 39.77 39.59 39.7 40.44
40.0 42.68 39.69 39.82 40.73 40.08
40.0 40.35 35.05 39.69 39.43 40.92
121
k= 5
P= 6
n = 30
Ejemplo de clculo. Concentracin 5 ppb:
Tabla II.5. Anlisis de varianza de un factor
Resumen
Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza
Columna 1 6 29.030 4.838 0.064

Columna 2 6 30.090 5.015 0.010
Columna 3 6 28.810 4.802 0.012
Columna 4 6 29.530 4.922 0.001
Columna 5 6 29.760 4.960 0.009
4.907
Anlisis de varianza
Grados Promedio
Origen de las Suma de de de los Valor crtico
variaciones cuadrados libertad cuadrados F Probabilidad para F
Entre grupos 0.183 4 0.046 2.396 0.077 2.759

Dentro de los
grupos 0.477 25 0.019
Total 0.660 29
Sr 0.1382 SR 0.1563
SL2 0.0053 % RECUPERACION 98.1467
%CVr 2.764 R 0.38304
%CVR 3.126 LR 0.43321
122
Los criterios de aceptacin segn la tabla de Horwitz para concentraciones a nivel
de ppb son:
Concentracin %CVr %CVR

1 ppb 22.6 30.2
10 ppb 16.0 21.3
100 ppb 11.3 15.1
Segn el Codex Alimentarius los porcentajes de recuperacin para concentraciones
a nivel de ppb son:
Concentracin % de Recuperacin
10 ppb 60 -115
100 ppb 80 -110
II.4. Valores para el anlisis de la robustez del mtodo
Curvas de concentracin para cada da de anlisis:
Figura II.1. Curva de calibracion dia 1
123
124
Ejemplo de clculo:
Curva 1
ESTNDAR RESPUESTA (A) (x-media)^2 x^2

5 2.078 256 25
10 4.101 121 100
20 7.579 1 400
30 11.202 81 900
40 14.998 361 1600
Promedio 21 Sumatoria 820 3025
A 0.313 B 0.366
Sa 0.003 Sb 0.000
Syx 0.106 r^2 1.000
T 2.776
amax = a + t.Sa = 0.322
amin = a - t.Sa = 0.304
bmax = 0.366
bmin = 0.365
125
ANEXO III
FOTOGRAFAS DEL EQUIPO UTILIZADO EN LA INVESTIGACIN
Imagen V.1. Equipo empleado en la investigacin: computador, celda y

electrodos
Imagen V.2. Equipo empleado en la investigacin: computador con el

programa, celda y electrodos
126
Imagen V.3. Celda con los electrodos de trabajo (electrodo de fibra
carbn modificado con nanopartculas de oro), referencia y auxiliar
sumergidos en la muestra
127

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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

DESARROLLO Y VALIDACIN DE UN MTODO PARA LA

TESIS DE INVESTIGACIN CIENTFICA PARA OPTAR POR EL TTULO DE

MAGSTER EN QUMICA ANALTICA

AUTORA: Dra. Mara Esperanza Berrazueta Lanas

TUTOR: Dr. Patricio Carrera, M.Sc.

Quito, octubre de 2015

determinacin de mercurio en aguas residuales, por voltamperometra. Trabajo

de investigacin para optar por el titulo de Magister en Qumica Analtica.

Instituto de Investigacion y Posgrado. Quito: UCE. 127 p.

A mi esposo, mi compaero, por su amor y apoyo incondicional.

A mis hijos, mi motivacin para culminar este proyecto.

A mis padres, por sus sabios consejos y su estimulo permanente.

A la memoria de m amado hermano

valiosos conocimientos a la consecucin de esta monografa.

del Proyecto de Tesis.

las sugerencias que permitieron enriquecer y optimizar esta monografa.

gestin y estmulo para poder culminar con este objetivo.

de Posgrado, quienes en su momento supieron impulsarme para continuar con el trabajo

A la Facultad de Ciencias Qumicas y al Instituto Superior de Posgrado, por darme la

oportunidad de continuar con mi formacin acadmica.

la realizacin de la presente investigacin.

Al CICAM (Centro de Investigacin y Control Medio Ambiental) de la Escuela Politcnica

Al personal de los Laboratorios OSP por el asesoramiento y ayuda brindada.

Yo, MARIA ESPERANZA BERRAZUETA LANAS, en calidad de autora del

trabajo de investigacin realizado sobre: Desarrollo y validacin de un mtodo para la

determinacin de mercurio en aguas residuales por voltamperometra, por la presente

autorizo a la UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR, hacer uso de todos los

Los derechos que como autora me corresponden, con excepcin de la presente

autorizacin, seguirn vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los

artculos 5, 6, 8, 19 y dems pertinentes de la ley de propiedad intelectual y su reglamento.

En la ciudad de Quito, a los 22 das del mes de octubre del 2015

Mara Esperanza Berrazueta Lanas

APROBACIN DEL TUTOR

Por la presente, dejo constancia de que el Trabajo de Tesis de Maestra, presentado

Qumica Analtica, cuyo ttulo es: Desarrollo y validacin de un mtodo para la

determinacin de mercurio en aguas residuales por voltamperometra, ha sido revisado

y aprobado por mi persona.

En la ciudad de Quito, a los 27 das del mes de julio del 2015.

Patricio Carrera, M. Sc.

Autorizacin de la autora......... iii

Aprobacin del tutor. iv

1. Definicin del problema................. 1

2.1. Objetivo General... 2

2.2. Objetivos especficos.... 2

2.1.2. Efectos del mercurio en la salud.. 5

2.1.3. Propiedades fsicas y qumicas del mercurio.......... 5

2.1.4. Ciclo del mercurio............ 6

2.1.5. Usos del mercurio. 7

2.1.6. El mercurio en el Ecuador 7

2.2. Tcnicas de cuantificacin de mercurio............. 10

2.2.1. Tcnicas voltamtricas.. 10

2.2.1.1. Electroqumica analtica.. 11

2.2.1.2. Cintica electroqumica......................... 13

2.2.1.3. Elementos de un anlisis voltamtrico................. 15

2.2.1.4. Mtodos para la medida de potenciales. 22

2.2.1.5. Instrumento para la aplicacin de tcnicas voltamtricas................... 24

2.2.1.6. Clasificacin de las tcnicas electroqumicas 24

2.2.1.7. Mtodos de cuantificacin de anlisis voltamtricos 33

2.3. Fundamentos de validacin 37

2.3.1. Parmetros de validacin............ 38

3.1. Tipo de investigacin.............. 40