Manual de Bioquimica Clinica-Hgj

HOSPITAL GENERAL DE
JAEN
MANUAL DE BIOQUIMICA CLINICA
MANUAL DE
BIOQUIMICA CLNICA
HOSPITAL GENERAL DE JAEN CAJAMARCA
RESPONSABLE DE LA
ELABORACION COLABORADOR
LIC. TM. TEOFANEZ ADOLFO DIAZ LIC. TM. YURI ADOLFO CRUZ CRDOVA
NOMBRE GINEZ CTMP: 8555 - C.TM.P: 6795
RESPONSABLE DEL AREA DE JEFE DE LABORATORIO DE PATOLOGIA
CARGO BIOQUIMICA CLINICA CLINICA
FIRMA
INDICE
CONTENIDO
INTRODUCCION...................................................................................3
SECCION 1
Generalidades..........................................................................................4
SECCION 2
Bioseguridad............................................................................................7
SECCION 3
Etapa Preanalitica.....................................................11
SECCION 4
Acondicionamiento, Preservacin y Transporte de Muestras...........18
SECCION 5
Etapa Analitica.......................................................22
SECCION 6
Procedimientos ...............................................................................32
SECCION 7
Turbidimetria.................................................................................95
Bibliografia100
2
INTRODUCCIN
La Bioqumica como espejo molecular de la vida. Con esta cita queremos atraer su
atencin hacia el concepto de esta enorme disciplina, centro importante del Conocimiento
actual y arma fundamental para desentraar los misterios metablicos Celulares. El
Laboratorio, como institucin de apoyo diagnstico e investigacin, mantiene un enorme
nexo con esta actividad, desarrollando en el quehacer diario numerosas pruebas
relacionadas a componentes derivados de las diversas rutas metablicas con significado
clnico. De las buenas prcticas laboratoriales, surgirn reportes adecuados que ayudaran
al personal mdico y de salud en la toma de decisiones.
El presente Manual de Procedimientos recopila informacin bsica para los pasos
tcnicos en diversos ensayos de proceder comn a la mayora de laboratorios de la red.
La intencin es establecer uniformidad en ciertos criterios que permitan entender los
principios metodolgicos de las pruebas, las diferencias que pueden haber entre ellas y
la instrumentacin diversa para tales fines. Se ha respetado la arquitectura que los
manuales deberan seguir en este caso, segn las normas contenidas en el documento
ISO/FDIS 15189. Sin embargo, hemos credo conveniente adelantar dichos
procedimientos con explicaciones generales sobre Recoleccin de Muestras, Metodologa
Instrumental y Bioseguridad, conocimientos bsicos durante el trabajo pre- analtico,
analtico y post- analtico. La extensin de los mismos es breve y dirigida al rea; en
lneas generales cada uno de estos tpicos merece manuales independientes. Como es de
conocimiento al personal que labora en un laboratorio de ensayos, no es posible
generalizar un nico procedimiento. Existiendo en la actualidad diversas alternativas de
metodologas e instrumentacin, sera muy difcil acercar la realidad particular de cada
laboratorio de la red, la cual depende de recursos especficos, funciones, influencia
poblacional y otras variables conocidas de nuestra desigual infraestructura. Desde esa
perspectiva, hemos trabajado en algunos de los analitos con mtodos estndar
internacionales y que, intuimos, son utilizados por la mayora de entidades. Para otro
grupo de ensayos, solo hemos sealado lineamientos generales de los principales
mtodos, sin desarrollar ninguno en particular, evitando la pretensin de inclinar la
balanza hacia alguno de ellos.
Finalmente, creemos en la flexibilidad de esta primera entrega, la cual nos permitir
recoger el aporte de todos los involucrados en esta rea y enriquecer con ello, futuras
revisiones del presente trabajo.
3
SECCION 1
GENERALIDADES
1.1 OBJETIVO
El Manual de Procedimientos de Laboratorio en Bioqumica, tiene por finalidad

presentar las actividades analticas relacionadas a las principales pruebas del rea de
Qumica Clnica, reuniendo criterios de aceptacin nacional.
1.2 RESPONSABILIDADES
El personal profesional (Tecnlogo Medico) y tcnico/operativo son responsables
de seguir las especificaciones contenidas en el presente manual y aplicar los
procedimientos indicados.
1.3 DOCUMENTOS DE REFERENCIA

1.3.1 International Organization for Standardization. ISO / FDIS
15189. 2000. Quality Management in the Clinical Laboratory. 2001.
1.3.2 Ministerio de Salud. Manual de Procedimientos de Laboratorio.
Laboratorios Locales I. Laboratorios Locales II. Lima, 1999.
1.3.3 Ministerio de Salud. Manual de Procedimientos de la Red de Laboratorios
de Primer Nivel de Atencin, Lima, 2000.
1.4 TERMINOS Y ABREVIATURAS

1.4.1 Absorbancia .Propiedad de una molcula o conjunto de ellas por retener parte
de las longitudes de onda de un espectro de luz, no permitiendo su pasaje.
1.4.2 Acondicionamiento. Proceso por el cual se aseguran todas las propiedades de
una muestra, permitiendo su correcto anlisis, desde la recoleccin hasta su ingreso al
rea de anlisis.
1.4.3 Acoplamiento. Variante en una reaccin enzimtica en la que se aprovecha la
formacin de un producto en una primera reaccin, para convertirlo en sustrato de una
segunda a la cual se unir un componente que siga reaccionando con la primera.
1.4.4 Anlisis. En la prctica laboratorial, la realizacin tcnica de un proceso,
bsicamente la determinacin de algn compuesto.
1.4.5 Analito. Elemento capaz de ser analizado o determinado.
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1.4.6 Catalizador. Elemento qumico capaz de modificar la velocidad de una reaccin,
bsicamente acelerarla. Ejemplo: enzimas.
1.4.7 Coenzima. Molcula orgnica que unida a una enzima le permite mejorar su accin.
1.4.8 Componente. Molcula o conjunto de molculas que logran una unidad y
pueden estar independientemente en una sustancia o asociado a otros
1.4.9 Corrida. Trmino utilizado en la prctica laboratorial, la cual denota el proceso por
el cual se determinan concentraciones de un analito en un mismo tiempo o en serie.
1.4.10 Cromgeno. Sustancia o componente qumico capaz de virar hacia una tonalidad
de color dentro de una reaccin qumica.
1.4.11 Enzima. Protena que cataliza una reaccin qumica.
1.4.12 Extincin. Aumento en la velocidad de desaparicin de un sustrato o producto.
1.4.13 Filtro. Dispositivo que al paso de todo el espectro de la luz, permite separar slo
una banda de longitudes de onda de la misma.
1.4.14 Kit. Denominacin de un set o contenedor de diversos productos reactivos y
materiales necesarios para un anlisis.
1.4.15 Linealidad. Capacidad de un anlisis de permitir crecimientos progresivos y
lineales a medida que aumenta la concentracin del analito.
1.4.16 Macromolcula. Se dice de las molculas de alto peso molecular, compuestos
por distintos grupos qumicos, formando una unidad. Dichos grupos qumicos
pueden ser similares entre s o distintos.
1.4.17 Mtodo. Proceso o conjunto de procesos que permiten realizar una actividad, en
este caso un anlisis. Las tcnicas son variaciones para poner en la prctica un mtodo.
1.4.18 Monocromador. Dispositivo que permite seleccionar una determinada longitud
de onda con menos amplitud de banda que un filtro convencional.
1.4.19 Preservacin. Resguardo de las condiciones originales de los componentes
qumicos en una solucin.
1.4.20 Prisma. Vidrio o cuarzo con caras laterales que al girar permite reflejar una
longitud de onda (luz) especfico. Se usa en espectrofotmetros.
1.4.21 Reproducibilidad. Capacidad de verificar una misma concentracin bajo el
mismo mtodo de anlisis, pero con analista distinto y en un momento diferente
de la determinacin original.
1.4.22 Repetitividad: Capacidad de mantener la determinacin de una concentracin
analtica bajo las mismas condiciones de analista, equipo y momento.
1.4.23 Standard. Solucin o sustancia pura de concentracin conocida.
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1.4.24 Suero control. Solucin de analitos que se utiliza en el control de precisin. La
concentracin obedece a una media y a un rango de valores calificados a ambos lados de
esta media.
1.4.25 Transmitancia. Pasaje de luz o de longitudes de onda no retenidas al atravesar
un cuerpo o compuesto molecular.
1.4.26 Trasvase. Accin de transportar una porcin de un lquido o un slido de un
contenedor a otro distinto.
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SECCION 2
BIOSEGURIDAD
2.1 INFORMACION GENERAL

Referirse al Manual de Normas de Bioseguridad (Serie de Normas Tcnicas No. 18 )
del Instituto Nacional de Salud, para la consulta oportuna de las medidas establecidas .
2.2 RESPONSABILIDADES
El personal involucrado en las diferentes procesos del rea de Bioqumica debe cumplir
los requisitos y aplicar las medidas establecidas en el Manual de Normas de Bioseguridad
(Serie de Normas Tcnicas Ne 18), editado por el Instituto Nacional de Salud.
2.3 PRINCIPALES MEDIDAS EN EL LABORATORIO DE BIOQUIMICA
2.3.1 Proteccin Individual

Facilitar equipo de proteccin necesario y mantenerlo en buenas condiciones de higiene
y seguridad Este equipo incluye: mascarillas, batas o mandiles apropiados, adems de una
buena provisin de guantes. La infraestructura tomar en cuenta la necesidad de regaderas
o suministros de agua potable.
2.3.2 Almacenamiento de Lquidos Inflamables

Utilizar recipientes adecuados, perfectamente identificados y dispuestos en armarios o
mobiliario de seguridad Disponer seales en el rea de almacenamiento (ver
sealizaciones internacionales adelante) y extintores suficientes y en vigencia.
2.3.3 Saneamiento del medio

Mantener limpieza e higiene en mobiliarios, zonas de trabajo, pisos, corredores,
indumentaria. Disponer de adecuados recipientes de basura y mantenerlos
cerrados.
Destinar espacio suficiente para la alimentacin del personal as como vestidores
para comodidad de las mismos.
2.3.4 Prevencin de Incendios y Riesgos Elctricos

Mantener como requisitos mnimos:
* Capacitacin del personal en los tpicos pertinentes.
* Sealizaciones adecuadas para las vas de escape en caso de incendios o
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siniestros.
* Identificar los extintores porttiles y mantenerlos en buen uso.
Utilizar cables de tres conductores (con toma a tierra) en todas las instalaciones
elctricas.
Se aconseja el uso de tomas de corriente de un solo enchufe,
evitando las conexiones mltiples.
2.4 LAS REGLAS DE BIOSEGURIDAD INVIOLABLES

2.4.1 Lavado de manos del personal despus de haber manipulado material
infeccioso.
2.4.2 No permitir pipetear con la boca
2.4.3 Prohibir al personal comer, beber o fumar en zonas de trabajo.
2.4.4 Evitar el uso de cosmticos en reas de trabajo.
2.4.5 No guardar alimentos o bebidas en los refrigeradores de trabajo.
2.4.6 Mantener el laboratorio limpio y aseado. Descontaminar superficies de trabajo
una vez al da.
2.4.7 Usar batas, uniformes, mandiles en el ambiente de labores. No trasladar dicha
indumentaria fuera del mismo.
2.4.8 Autorizar el paso a la zona de trabajo al personal del mismo y a todo aquel
que
sea informado de los requisitos para su permanencia en el lugar. Mantener las
puertas cerradas.
2.4.9 No permitir nios en zonas de trabajo.
2.4.10 Prohibido absolutamente el ingreso de animales, con excepcin de alguna
finalidad dentro de las funciones del laboratorio.
2.4.11 Utilizar guantes en todos los trabajos que impliquen relacin directa con
material sanguneo.
2.4.12 Esterilizar en autoclave el material de desecho permisible de dicha accin,
antes de su eliminacin
2.5 DESINFECCION
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Los desinfectantes recomendados para el trabajo general de laboratorio son:
2.5.1 Cloro: Hipoclorito sdico. El cloro es un desinfectante universal, activo contra
todos los microorganismos. En general se utiliza en forma de hipoclorito sdico, con
diversas concentraciones de cloro libre. Se trata de un agente oxidante, potente
corrosivo para los metales. Las soluciones de hipoclorito se degradan poco a poco,
por lo que es necesario prepararlas con frecuencia.
Como desinfectante general para toda clase de trabajos de laboratorio, se utilizar
una concentracin de 1gr/L (1000 ppm) de cloro libre. En los casos de salpicaduras
de sangre o en presencia de material orgnico en cantidad apreciable, para la
desinfeccin se debe recurrir a una solucin ms concentrada de 10 g/L (10 000
ppm), de cloro libre.
2.5.2 Compuestos fenlicos. Muchos compuestos fenlicos que constituyen la base

de ciertos nmero de desinfectantes corrientes. Los compuestos fenlicos pueden
emplearse cuando no se dispone de hipocloritos, diluyndolos de acuerdo con las
recomendaciones del fabricante.
2.5.3 Yodo y yodoformos. La accin de estos desinfectantes es parecida a las de los

hipocloritos; las superficies limpias pueden tratarse eficazmente con soluciones que
contengan 0.075 g/L (75 ppm) de yodo libre. Los yodoformos pueden diluirse en
alcohol etlicos para el lavado de manos o como esporicida.
2.5.4 Alcohol etlico y alcohol isopropilico. Estos desinfectantes son de menos
eficacia que los ya mencionados.
2.6 ELIMINACION DE DESECHOS

2.6.1 Los desechos no contaminados se introducen en bolsas negras y pueden eliminarse
con la basura corriente.
2.6.2 Los objetos agudos y cortantes, como las agujas hipodrmicas y jeringas, deben
colocarse en recipientes rojos con paredes que no puedan traspasarse fcilmente. Cuando
estos estn llenos, se colocan en bolsas anaranjadas para desechos contaminados y se
incineran.
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2.6.3 El material contaminado para tratamiento en autoclave y reutilizacin, se coloca en
recipientes impermeables poco profundos, que contengan una cantidad de desinfectante
suficiente para cubrir el contenido. Los recipientes se colocan luego en autoclave. No se
efecta ninguna limpieza previa; cualquier limpieza o reparacin que sea necesaria se
hace despus del paso por el autoclave.
2.6.4 Los materiales contaminados para eliminacin como todos los cultivos, sangre y
sueros suelen esterilizarse en autoclaves. La eliminacin de las muestras de suero es muy
importante. Cada rea debe tener recipientes de basura para descartar las muestras. Es
importante tener presente que al descartar los desechos no producir aerosoles.
SECCION 3
ETAPA PREANALTICA
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3.1 OBTENCIN DE MUESTRAS
DISPOSICIONES GENERALES
Ayuno: Para ciertos estudios que requieren muestras sanguneas, se deben conservar
condiciones de ayuno. Dicho tiempo puede variar entre 8 horas a 12 horas. Sin
embargo, otros ensayos no requieren esa condicin. En los procedimientos se cita
dicha necesidad en el apartado correspondiente a la descripcin de la muestra
primaria.
La sangre debe recolectarse en tubos de vidrio o plstico limpios. La esterilidad es

una condicin ideal aunque no absoluta en el trabajo bioqumico(esto se logra con
tubos al vaco). La contaminacin por bacterias podra acarrear la metabolizacin de
ciertos analitos (ej. glucosa). En caso de recolectar la sangre con jeringa y aguja
estriles, los tubos deben llenarse con celeridad, evitando movimientos bruscos que
acarreen roturas de glbulos rojos y posterior hemolisis.
Luego de la recoleccin de la sangre, debe permitirse que se coagule antes de la

centrifugacin y separacin del suero. Para la totalidad de bs procedimientos descritos
en este manual, bastar con la utilizacin de este componente sanguneo. Sin embargo,
para el manejo de muestras para ensayo de Hemoglobina glicosilada y en la
eventualidad de usarse como alternativa el plasma, se recomienda someter tas tubos
a maniobras de inversin para lograr el mezclado correspondiente con el
anticoagulante, evitando la formacin de cogulos.
3.2 GUIAS BASICAS DE ASEPSIA
3.2.1 Utilizar siempre guantes y mandil o bata para la obtencin de muestras. Los
guantes deben desecharse y ser cambiados por un nuevo par despus de atender a
cada paciente.
3.2.2 Lavarse prolijamente las manos antes y despus de la atencin de un paciente.
3.2.3 Desinfectar adecuadamente el rea de puncin con alcohol 70. Pueden utilizarse
otras soluciones antispticas como el yodo, pero en condiciones ideales use la
primera.
3.2.4 Jams toque el sitio de puncin luego de la desinfeccin
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3.3 REVISION DE PETITORIOS U ORDENES MDICAS
3.3.1 Examine con cuidado el petitorio u orden, asegurndose haber entendido la
solicitud. En caso contrario, pregunte a su superior o intente comunicarse con el mdico
tratante. No es aconsejable guiarse de las indicaciones del paciente.
3.3.2 Si la orden le induce a pensar en incongruencias, incompatibilidades o amerita a su

juicio un riesgo para el paciente, consulte el caso con su superior inmediato o con el
mdico tratante
3.4 RECONOCIMIENTO DEL PACIENTE

3.4.1 Reconozca al paciente mediante un saludo agradable. Identifquese ante l como la
persona de experiencia que va a recolectar la muestra.
3.4.2 Asegrese que el procedimiento que va a efectuar lo har en el paciente indicado.

Para ello no basta la identificacin de nmero de historia y cama. De ser posible, hable con
el paciente para averiguar sus nombres y apellidos.
3.4.3Transmita confianza y seguridad explicando calmadamente el procedimiento que

realizar.
3.4.4Si el paciente tiene dudas, trate de absolverlas: disminuir su natural temor.
3.4.5No extienda la conversacin ms all de lo pertinente. Dilogos sobre temas ajenos

a la preocupacin del paciente, podran perturbarlo.
3.4.6Termine su procedimiento, indicando lo necesario frente a segundos muestreos,

horarios de entrega de resultados y todo aquello que Ud. pueda y le sea permitido resolver.
3.5 PUNCIN VENOSA

La flebotoma constituye una de las etapas ms importantes en el trabajo del Laboratorio
clnico. Por una parte representa el primer contacto entre el laboratorio y sus pacientes, y
respecto a la muestra sangunea: la enorme importancia que conlleva una muestra
apropiadamente colectada, la seguridad de su origen, y el correcto envasado y transporte
constituyen factores fundamentales en la evaluacin e informe
de los exmenes a realizar.
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El organismo utiliza la sangre para el transporte de oxgeno, alimento, residuos y otros
materiales que hay en el interior del cuerpo, y tambin para regular la temperatura
corporal, bs lquidos y el equilibrio cido bsico. Debido a las mltiples funciones de la
sangre dentro del cuerpo, los exmenes de sta o de sus componentes pueden suministrar
indicios claves para el diagnstico de muchas condiciones mdicas.
La sangre est compuesta de una porcin lquida (plasma) y de una porcin celular; el
plasma contiene varias substancias que estn disueltas en el lquido. El suero es b que
queda, cuando el fibringeno se ha separado del plasma (lquido que queda despus de
que se deja coagular la sangre en un tubo efe ensayo). La porcin celular de la sangre
consta principalmente de glbulos rojos, pero tambin tiene glbulos blancos y plaquetas.
Los tubos al vaco han reemplazado a las jeringas. Estos tubos pueden estar siliconados
para evitar la hemolisis de la muestra, vienen pre esterilizados por irradiacin y presentan
tamaos de 2 a 30 mL. Durante la recoleccin de la sangre y hasta que el suero es separado
de bs glbulos rojos, debe reducirse la posibilidad de hemolisis (utilizando agujas de
calibre adecuado, tubos limpios y secos, un mezclado suave, etc.) ya que la hemolisis
produce la elevacin in vitro de la concentracin de bs metabolitos del suero, al liberarse
estos de bs eritrocitos, p.ej. fsforo, sodio, hemoglobina, protenas totales, lpidos,
enzimas, bilirrubinas, etc., tambin puede provocar un efecto de dilucin de los
componentes qumicos del suero, al liberarse sustancias del interior de bs eritrocitos.
Si se toma varias muestras de sangre, con tubo al vaco y una sola puncin venosa hay
que tener precaucin de poner bs tubos en un orden definido para evitar la contaminacin
cruzada entre tubos.
El orden recomendado de la toma, cuando se efecta una recoleccin mltiple de

muestras es el siguiente:
1. Tubos sin anticoagulante (Rojo).
2. Tubos para pruebas de coagulacin. (celeste).
3. Tubos con otros anticoagulantes (Lila, Verde, Verde-Gris y Amarillo).
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3.6 SELECCIN DEL SITIO DE PUNCION
3.6.1 Acomode al paciente de forma segura y confortable.
3.6.2 No practique ninguna puncin con el paciente en posicin de pie.
3.6.3 Elija una extremidad en la que no exista ninguna venoclisis, herida o lesin
reciente, comunicaciones arteriovenosas, heridas o procedimientos quirrgicos y
cualquier eventualidad que le haga dudar de la necesidad de punzar dicha zona.
3.6.4 Elija una vena que tenga dos caractersticas : visible y palpable. Puede ubicarla en
la fosa antecubital del antebrazo, por donde surcan las venas ceflica y braquial. Si la
vena no es muy visible, intente realizar masajes desde la mueca hasta el codo. Si no hay
contraindicacin, observe siempre ambas extremidades para elegir el mejor sitio de
puncin
3.6.5 Ajuste una ligadura unos 2- 4 dedos por encima del sitio elegido. La presin debe
ser media, lo suficiente para evitar presiones mayores que causaran hemlisis, colapso
venoso o dolor.
3.6.6 Previa a la puncin limpie la zona indicada con movimientos circulares y del
centro hacia fuera.
3.6.7 Dirija la aguja en un ngulo de 15-30 con respecto a la superficie del brazo.
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Punze en forma directa a travs de la piel y hasta el lumen de la vena
3.6.8 Terminada la coleccin, retire suavemente la aguja del brazo del paciente,
aplicando una gasa compresiva o torunda de algodn en el sitio de puncin
3.6.9 Acabado el procedimiento, indquele al paciente que debe conservar la presin,
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ejerciendo hemostasia por unos 5 minutos. Coloque finalmente una banda
adhesiva (vendita o curita) sobre la herida de la puncin
3.6.10 Si el sangrado no se detiene, aplique presin sobre la zona durante 10

minutos adicionales. Si el problema persiste, consulte con el superior inmediato o
mdico tratante.
3.6.11 Deposite y destruya todo el material desechable en los recipientes

diseados para tal propsito. Este acto de destruir el material frente al paciente,
aumenta su confianza en las bondades y buenas prcticas de laboratorio.
3.6.12 Finalmente, y muy importante, termine su trabajo etiquetando e

identificando los tubos recolectados antes de atender una nueva tarea.
3.7 CONSIDERACIONES FINALES

3.7.1 Para Prevenir un hematoma:
Punc slo la pared superior de la vena.
Remueva el torniquete o ligadura antes de remover la aguja
Use venas superficiales mayores (ceflica, braquial).
Asegrese que la aguja penetra la pared superior de la vena (penetraciones
parciales permiten la salida de sangre hacia el tejido blando).
Aplique presin en el sitio de la puncin.
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3.7.2 Para prevenir hemolisis:
Mezcle adecuadamente los tubos que contengan anticoagulante con la muestra
obtenida.
Evite recoleccin de sangre de una zona con hematoma.
Evite la aspiracin forzada de sangre si usa jeringa y aguja y despender la muestra
al contenedor a travs de la aguja.
Asegrese que el sitio de puncin est seco antes del procedimiento. Evite
manipulaciones, repeticiones o venopunciones traumticas.
3.7.3 Evite la Hemoconcentracin:

Un incremento de grandes molculas y analitos en la sangre puede deberse a:
Aplicacin prolongada de la ligadura.
Excesivo masaje o presin al probar el sitio de puncin.
Venas esclerosadas u obstruidas.
Uso de terapias endovenosas de largo plazo
3.7.4 Efectos de la aplicacin prolongada del torniquete o ligadura:

Hemoconcentracin.
Incrementos significativos en protenas totales, transaminasas, lpidos totales,
Colesterol, hierro.
Afecta al paquete celular sanguneo
3.7.5 Factores del paciente que afectan la calidad de la muestra recolectada.

Uso de frmacos. Considerar en cada procedimiento de ensayos, la posibilidad
de ciertas drogas de interferir en el mismo.
Ejercicio: La actividad muscular tiene efectos directos sobre la elevacin de

Creatina Kinasa, Aspartato aminotransferasa o Transaminasa glutmico
oxalactica, Deshidrogenasa lctica y recuento de plaquetas.
Stress: No tiene relacin directa con los procedimientos de este manual, sin
embargo, la elevacin transitoria de cortisol y catecolaminas podra afectar
Indirectamente algunos analitos como la glucosa.
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Postura : Los cambios posturales ( de supina a sentado) pueden interferir en el
ensayo de ciertos analitos. Ciertas molculas grandes no son filtrables hacia los
tejidos, de modo que obtendran una concentracin mayor en la sangre. En esta
categora se encuentran enzimas, protenas, lpidos, hierro y calcio.
Otros factores : Edad, sexo, gestacin
SECCION 4
18
ACONDICIONAMIENTO Y PRESERVACION DE MUESTRAS
4.1.- ACONDICIONAMIENTO
4.1.1 Definicin
Son los procedimientos que aseguran la calidad de la muestra desde su recoleccin

hasta el anlisis real.
4.1.2 Identificacin de las muestras y Centrifugacin
Las muestras no podrn salir de la zona de toma de muestra sin la

correspondiente identificacin.
Los datos bsicos de rotulacin son nombre y apellidos, cdigo numrico.
Llegada la o las muestras a la zona de trabajo, verificar las mismas en el
software (Vitekey) si en caso el laboratorio contara con este sistema o en
caso contrario verificar bien en la orden y en el cuaderno de registros diario
de pacientes. Observar los tubos para poder validar si la muestra es
conforme (si lleg en las condiciones adecuadas de volumen, preservante
necesario, identificacin, tiempo prudente o cualquier otra condicin
necesaria para su posterior anlisis).
Proceder a la espera de formacin de cogulo, en el caso de separar suero,
antes de su proceso de centrifugacin.
Centrifugar a 3500 rpm por espacio de 5 minutos
Para las separaciones de plasma, es prudente no esperar ms de una hora
para su separacin. Utilizar el mismo tiempo y FCR para la centrifugacin.
En ambos casos, los tubos recolectores deben ser centrifugados con su
respectivo tapn.
Luego del centrifugado, separe el suero o plasma logrado en tubos
secundarios, anotando la identificacin y bs anlisis pertinentes al rea de
bioqumica. Si sospecha la posibilidad de repeticiones o adiciones de
pruebas, separe un poco de la muestra en otro tubo y almacene refrigerado.
4.2. PRESERVACION
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4.2.1 Definicin
Procedimientos destinados a eliminar o disminuir cualquier variacin en los
Componentes biolgicos y moleculares de una muestra recolectada y separada
4.2.2 Procedimientos esenciales

4.2.3. Mantener como prctica ideal la centrifugacin de una muestra, tan pronto
como se form el cogulo.
4.2.4 El tiempo mximo de espera de una muestra de sangre total para su separacin
es de una hora. Pasado este tiempo, sufren variaciones significativas la glucosa, el
potasio, el potasio, fosforo, creatinina y transaminasas.
4.2.5 Si se requiriera una conservacin superior a 1 hora, se recomienda almacenar la

muestra a temperatura ambiente, antes que a 4C. Esto retardar discretamente la
hemolisis.
4.2.6 En el caso de suero o plasma separado, las muestras que no puedan analizarse
dentro de las primeras 4 horas deben ser almacenadas a temperatura de refrigeracin
(2-8 C) hasta su proceso, con un lmite de 48 horas. Si el tiempo de proceso se
prolonga, es aconsejable almacenar las muestras a -20 C.
4.3 TRANSPORTE DE MUESTRAS
4.3.1 Definicin
Procedimientos de preservacin de muestras durante traslados desde el laboratorio

hacia otro centro de referencia.
4.3.2 Procedimientos esenciales
4.3.2.1 El tiempo ideal de traslado de un laboratorio hacia otro centro debiera oscilar
entre 45 a 60 minutos.
4.3.2.2 Utilizar recipientes de material plstico (polietileno o polipropileno) como

contenedores de las muestras transportadas.
4.3.2.3 Identificar correctamente las muestras trasladadas, enviando en formato

externo cualquier dato adicional que no pudiera escribirse en el tubo o contenedor.
20
4.3.2.4 Depositar estas muestras en sobres o cajas que puedan permitir el uso de
unidades o bolsas refrigerantes (los envases de polietileno son adecuados para este
fin).
4.3.2.5 Asegurarse que los tubos se encuentren perfectamente sellados , evitando

derrames o contaminaciones con las soluciones refrigerantes.
4.3.2.6 En caso de recurrir a envos por correo o Courier, asegurarse de las

condiciones de entrega y embalaje del material enviando, respetando la cadena de
fro si es esencial. Actualmente existen compaas que mantienen experiencia en
traslados de material biolgico.
4.3.2.7 Verifique con el centro referencial las condiciones de envo de las muestras,
as como su recepcin exitosa.
SECCION 5
ETAPA ANALTICA
21
La etapa o fase analtica en bioqumica clnica, incluye aspectos como : la calibracin
de las pruebas, la eleccin de los estndares de calibracin o calibradores, la eleccin
de los mtodos de medicin, la medicin propiamente dicha, los clculos para los
resultados, la capacidad de rastrear los resultados para validarlos, la utilizacin de
curvas de medicin, el uso de relaciones tericas para algunas magnitudes, las
transformaciones de resultados para hacerlos ms informativos al mdico, el uso de
computadoras y analizadores, bs procedimientos que permiten monitorear la ejecucin
de un procedimiento de medicin con el propsito de una accin correctiva, el uso de
materiales o sueros control y la preparacin del mismo, el establecimiento de los
lmites de control, la realizacin de grficas de control, la interpretacin de las
mismas, el uso de reglas de control, el archivo de todo lo relativo al control de calidad
para posteriores requerimientos, entre otros aspectos.
5.1. Fotmetros y Espectrofotmetros.

Son los instrumentos esenciales para realizar labores de fotocolorimetra y en general,
para la realizacin de los procedimientos de bioqumica. Los fotmetros mantienen en
su interior ( a manera de tambores) diversos filtros, los cuales dejan pasar ciertas
longitudes de onda , las cuales incidirn sobre la solucin a ser medida. El resto de las
longitudes de onda son absorbidas por este filtro. Los espectrofotmetros, en cambio
permiten mediante prismas o rejillas de difraccin seleccionar longitudes de onda ms
estrechas. En general, estos ltimos permiten obtener bandas que, en promedio no
sobrepasan los 0.5 a 1.5 nm, a diferencia de los fitros que obtiene aislamientos de luz
con bandas promedios de 5 a 10 nm.
5.1.1Componentes de un Fotmetro o Espectrofotmetro

Fuente de energa luminosa: Se requieren lmparas especficas para
mediciones en el espectro de luz visible ( 360 a 950 nm aproximadamente) y
en el ultravioleta ( no visible, de 220 a 360 nm aproximadamente). Para las
mediciones con luz visible se usan lmparas de wolframio o tungsteno y para
las del rango ultravioleta, son apropiadas las de hidrgeno o deuterio.
Selector de longitud de onda : Se usan filtros o monocromadores (prismas,
rejillas de difraccin). La seleccin de una determinada longitud de onda
depender del color de la solucin a ser medida
22
Cubetas : Son los recipientes donde se colocar la solucin a ser medida. Los
hay de diverso tamao y material de construccin.
Detectores de Energa Radiante o Luminosa: Se encargan de transformar la
energa luminosa en energa elctrica.
Dispositivos de Lectura: Para transformar la energa elctrica en un valor de
absorbancia o transmitancia.
5.1.2 Operacin y Control de Instrumentos
5.1.2.1 Los siguientes pasos son instrucciones generales. Cada instrumento

tendr particularidades descritas en el manual del proveedor, as como
recomendaciones en relacin al mantenimiento. He aqu algunos consejos
tiles:
Revisar las condiciones de conexin del aparato a la red elctrica.
Tome mucha atencin en el selector de voltaje. Conecte el instrumento a la
energa cuando est seguro del mismo.
Encienda el fotmetro o espectrofotmetro. Algunos instrumentos requieren
ms tiempo que otros para estabilizar su sistema de medicin, incluida la
lmpara.
Basado en los procedimientos de cada anlisis, seleccione una longitud de
onda determinada.
Lleve a cero la absorbancia. Convencionalmente se logra esto utilizando agua
destilada como solucin de ajuste. En aparatos automatizados, la mquina
realiza este procedimiento internamente.
Cercirese si su procedimiento requiere blanco de muestra o reactivo.
Coloque lo indicado en la cubeta y ajuste a cero la absorbancia.
Mida la absorbancia de estndares y muestras.
Finalizado el trabajo, apague el instrumento.
Limpie cualquier derrame en el instrumento o en su rea de trabajo.
5.1.2.2 Control del Instrumento
Para exactitud de la absorbancia puede preparar una solucin de dicromato
potsico con 0.005 g del mismo y llevarla a 1 litro de solucin con cido sulfrico
0.005 M. Esta solucin debe dar una absorbancia de 0.535 a 350 nm de longitud
23
de onda. En el mercado se encuentran adems soluciones de absorbancia conocida
para diferentes longitudes de onda.
Para controlar la exactitud de la longitud de onda seleccionada es factible utilizar
cristal de xido de holmio y verificar que existan picos de absorbancia a 279;
287.6; 333.8; 360.8; 418.5; 536.4 y 637.5 nm.
Finalmente puede chequearse la linealidad al comprobar la construccin de una
curva o lnea recta con una solucin coloreada y diluida a distintas
concentraciones. Las mediciones se realizaran a una longitud de onda que
corresponda a la medicin de dicho color.
5.2 Mtodos de Anlisis

La medida de la concentracin de sustancias por fotometra se realiza va dos
tipos de mtodos: los de punto final y los cinticos. No confundir con la
longitud de onda utilizada para la medicin, la cual puede ser de espectro
visible o no visible (medicin con longitud de onda ultravioleta). Igualmente
es importante reconocer que para ambos mtodos pueden existir variaciones
enzimticas y no enzimticas, segn se utilice o no estos elementos como
reactivos.
5.2.1 Mtodos de Punto Final
En estos mtodos se incuban segn cada procedimiento, reactivos y muestra,
adems del mismo reactivo con el patrn o standard, esperando un tiempo
determinado para lograr un equilibrio o finalizacin de la reaccin. Al final se leen
las absorbancias de la muestra, del patrn o standard, del blanco de reactivos ( si
es exigencia del procedimiento) y debe conocerse la concentracin del patrn.
Se procede al clculo mediante la ecuacin presentada:
Concentracin de la muestra = Factor x (Absorb. Muestra-Abs. Blanco)
El Factor es obtenido de la siguiente manera:
Concentracin del patrn o Standard

Factor =------------------------------------------------------------
(Abs. Del Patrn-Absorbancia Blanco)
24
Eliminar de estos clculos la Absorbancia de Blanco de Reactivos si no es
procedente.
En algunas reacciones se recomienda el uso de blanco de muestra para reducir la
interferencia que algn compuesto en la misma pudiera causar al proceso
Sencillamente mida la absorbancia de este blanco de muestra y proceda a la
sustraccin con la absorbancia de la muestra.
Finalmente, Ud. puede realizar el clculo de la concentracin de una sustancia o
analito, construyendo una curva a partir de diluciones del patrn o Standard o con
concentraciones ya conocidas del mismo componente. Coloque en una hoja
milimetrada un grfico de dos ejes. En el eje horizontal site las concentraciones
utilizadas y en el eje vertical las absorbancias obtenidas para cada una. Luego una
las intersecciones logradas entre absorbancias y concentraciones y obtenga una
lnea recta. Para lograr conocer la concentracin de una muestra desconocida,
extrapole sus valores de absorbancia en la curva.
5.2.2 Mtodos Cinticos

En estos mtodos se determinan variaciones en la absorbancia de una reaccin a travs
de mediciones por intervalos de tiempo, generalmente no mayor a los 5 minutos (vara
de acuerdo al procedimiento especfico y al tipo de instrumentacin disponible). Por lo
tanto, habr una serie de absorbancias obtenidas durante el lapso de tiempo total. Para
ello, se consigue calcular una delta A, mediante la sustraccin entre la segunda
determinacin y la primera, la tercera y la segunda y as consecutivamente, terminando
por promediar dichas diferencias y aceptando ese promedio como delta A. Luego, se
procede a multiplicar dicha cifra por el factor proporcionado por el fabricante. Dicho
factor es calculado a travs de operaciones matemticas complejas que incluyen la
necesidad de conocer el coeficiente de extincin molar y el paso de luz o distancia ptica
de la cubeta. Dada la complejidad de esta metodologa, es preferible utilizarla con kits
comerciales y con instrumentacin adecuada que permita una adecuada seleccin de la
longitud de onda necesaria para la medicin y un control preciso de la temperatura de
reaccin.
5.2.3 Medicin de Concentracin de Enzimas
25
Especial atencin merece el conocimiento metodolgico en la medicin de enzimas. Estas
protenas se encuentran en cantidades tan pequeas, que la forma prctica de valorar su
concentracin es midiendo su actividad en las reacciones que catalizan. Para
ello, se introducen sustancias que acoplados al sustrato o al producto permiten valorar
en forma colorimtrica o mediante el rango ultravioleta dicha accin.
El ejemplo clsico es la medicin de la actividad de la deshidrogenasa lctica.
Dicha enzima interviene en la siguiente reaccin :
LDH
Piruvato + NADH2----------------------------- NAD + Lactato
-----------------------------
Como se observa, en la reaccin existen dos coenzimas : el NAD (compuesto en

estado de oxidacin) y el NADH2 (forma reducida de la coenzima). Se ha
observado que la forma reducida de la coenzima (NADH2) absorbe luz a 340 nm
(rango ultravioleta), razn por la cual si la reaccin se midiera de izquierda a
derecha y, por lo tanto se midiera la produccin de NAD, la medicin de la
absorbancia sera en forma decreciente a lo largo de un tiempo. Si, por el contrario,
la medicin de la reaccin fuera a la inversa, se estara midiendo el incremento en
NADH2, por lo que la absorbancia sera medida en forma creciente a ciertos
intervalos de tiempo.
Esta observacin ha permitido adoptar el mismo sistema para la medicin de
enzimas, acoplando ya sea la medicin de NADH2 o NAD, estableciendo una
manera segura de determinar enzimas en el rango UV.
5.3 Mantenimiento de Analizadores automatizados:

Como cualquier instrumento, los analizadores automatizados requieren la puesta en
marcha de un plan de mantenimiento.
5.3.1 Planifique anualmente el mantenimiento que le dar a fotmetros, centrfugas,

estufas, pipetas, refrigeradores y termmetros. Incluya igualmente en fichas separadas, el
correspondiente al analizador de uso.
5.3.2 Transfiera por escrito las principales indicaciones que el fabricante aconseja para
26
el mantenimiento diario, semanal, mensual o anual, segn corresponda. Puede encontrar
til la ficha de mantenimiento de equipos en la seccin de anexos.
5.3.3 Delegue a una persona la responsabilidad del mantenimiento. Si el laboratorio

cuenta con personal suficiente, puede dividirse este trabajo entre varias personas.
5.3.4 Mantenga el contacto y los datos precisos acerca del distribuidor local de su
instrumento, con el objeto de coordinar mantenimientos preventivos y necesidades de
reparacin.
5.3.5 En relacin a calibraciones, los equipos citados en este acpite no requieren estos
procedimientos. Sustituya esta accin mediante verificaciones mensuales del rendimiento
del equipo, basado en la performance buena o no del control de calidad interno. Es buena
prctica pegar un sticker en alguna zona visible del aparato y realizar un check por cada
mes en que se verifica el instrumento.
Unido al mantenimiento arriba citado, Ud. habr cumplido con el cuidado de este til
equipo.
La etapa analtica conlleva pruebas que pueden trabajarse de modo manual utilizando
aparatos de lectura como fotocolormetros o espectrofotmetros semiautomatizado o
automatizado, definiendo semiautomatizacin y automatizacin, como sigue:
Automatizacin completa: Son equipos que partiendo de suero u otro lquido
susceptible de anlisis, son capaces de realizar todos los pasos tcnicos hasta la
entrega de resultados en forma de concentraciones.
Automatizacin parcial o Semi-automatizacin: Son aquellos que requieren de

algn manipuleo previo del suero o lquido a analizar, antes de suministrar a la
mquina para que lo siga procesando.
Para los efectos del trabajo en el rea de Bioqumica del Hospital General De Jan, se
pueden trabajar los exmenes de 2 formas:
a) Semiautomatizada: Utilizando para la lectura, uno de los siguientes equipos:

Rayto RT- 9200
27
b).-Automatizada: Utilizando para la lectura, el equipo automatizado:
Keylab-Mini Qca
5.4 PROCEDIMIENTO GENERAL PARA EL MODO SEMIAUTOMATIZADO
5.4.1 Verificar las muestras y pruebas correspondientes en el cuaderno de registro.

5.4.2 Verificar que la muestra es conforme (si lleg en las condiciones adecuadas de
volumen, necesario, identificacin, tiempo prudente o cualquier otra condicin
necesaria para su posterior anlisis: ej. sin hemolisis).
5.4.3 Realizar los procedimientos de las pruebas segn protocolos Rayto RT-9200.
5.4.4Para realizar una prueba o anlisis vamos al men opcin 1 que es ejecutar mtodo,
si estamos en el anlisis o mtodo adecuado lo dejamos all, si es que no presionar la
opcin Cambiar, donde ingresamos el nmero de mtodo que deseamos Analizar.
Luego presionamos la opcin Enter dos veces y esperamos a que se nivele la temperatura
que ha sido calibrada.
5.4.5 Verificar factores de calibracin, si es necesario correr standard y calcular factor.
5.4.6 Correr blanco, seguir instrucciones de pantalla de equipo.
5.5 PROCEDIMIENTO GENERAL PARA MODO AUTOMATIZADO
5.5.1 Verificar cdigos y pruebas de los pacientes que estn correctamente ingresadas en
el cuaderno de atencin.
5.5.2 Verificar que la muestra es conforme (si lleg en las condiciones adecuadas de
volumen necesario, identificacin, tiempo prudente o cualquier otra condicin necesaria
para su posterior anlisis:).
5.5.3 Verificar que el depsito de agua de lavado del Analizador Keylab-Mini Qca est
lleno, vaciar el depsito de desecho diariamente.
5.5.4 Antes de realizar cualquier prueba o anlisis tenemos que hacer un Mantenimiento
Diario que consiste en lo siguiente.
a.- Vamos al tem Analizador, presionamos la opcin utilidades del analizador. Donde
primero ejecutamos:
Lavado Extra de Cubetas ( Tener en cuenta el volumen de la solucin
Desproteinizante.
28
Luego Lavado con Agua.
Efectuar Cero con Agua
5.5.5 Para calibrar, seguir los sgts pasos:
- Saldr la pantalla principal que en su parte inferior estn los botones de PROXIMO,
ANTERIOR, BORRAR PACIENTE, COPIA, REPETICIONES, UTILIDADES,
INICIAR.
- Seleccionar UTILIDADES, PARAMETROS, PARAMETROS, seleccionar el examen

que se desea calibrar( Ejemplo: glucosa); y luego presionar el botn MODIFICAR/VER
TEST.
- En esta pantalla se pondrn todos los datos correspondientes a la calibracin de la prueba,

se colocara: Unidades, Linealidad, y todos los datos que salen en esta pantalla. Para
seguir colocando ms datos presionar el botn PROXIMO y as sucesivamente hasta
que hayas colocado todos los datos que te pide el equipo, luego presionar el botn
SALIR, luego SALIR, SALIR, SALIR, hasta llegar a la pantalla donde se va a poner
los datos de los pacientes que se va a procesar.
- Colocar los pocillos de las muestras en el orden correspondiente que se le esta asignando
en la mquina. Ejemplo:
1 1983
Pac/Pos No: ID:
ADOLFO DIAZ
Datos Paciente:
PERFILES
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
TEST
GLUC COL TRI URE CRE GOT GPT BIT BID FAL
- Presionar el botn INICIAR, y luego el botn CALIBRACION + PACIENTE y

luego el botn OK.
- El equipo empezara a trabajar, esperar hasta que termine su proceso.
- Una vez finalizado el proceso retirar todos los reactivos de los platos y las celdas de
reaccin para su lavado correspondiente.
- Apagar el equipo con el botn que est ubicado en la parte de atrs.
a.- Extraer de congelacin el calibrador :

A plus (para enzimas y metabolitos asignados), calibrador para HDL colesterol, y
LDL colesterol vienen con el reactivo.
Turbidimetria:
Protena C reactiva (PCR). Son 6 calibradores ( # 1,3,4,5,6,7)
29
Hemoglobina Glicosilada: son 4 (# 1, 2, 3,4)
Microalbuminuria: 1
b.- Dejar que se descongele por un tiempo de 15 a 20 minutos. Despus mezclar el crio
vial por inversin y colocar en copas por separado.
Luego colocar los calibradores en las posiciones correspondientes de la bandeja actual:
A plus y LDL colesterol en la posicin 2, HDL colesterol posicin 3
Hemoglobina Glicosilada: posicin 5(agua destilada), 6, 7, 8,9 los calibradores.
Protena C reactiva (PCR): posicin 5 (agua destilada), 6, 7, 8, 9, 10 los
calibradores.
Microalbuminuria (MAL). Posicin 5, del 6 al 10 colocar copas vacas.
Una vez posicionadas en su lugar.
c.- Presionar el icono Test, le damos la opcin analizar Estndares /controles donde se
evidencia una ventana para seleccionar las pruebas que requieren calibrar, una vez
seleccionados presionamos la opcin en Funcionamiento donde el equipo Keylab-Mini
Qca comienza a calibrar.
5.5.6 Como Correr controles:

a.-Extraer de congelacin los controles
Standatrol S-E: 2 niveles
CPK-MB: Control 2 Niveles (viene con el reactivo)
Turbidimetria:
Protena C reactiva (PCR) : Control Normal
Hemoglobina Glicosilada: Control Normal, Patolgico
Microalbuminuria (MAL): Control 2 Niveles
b.-Dejar que se descongele los crioviales de los controles por un tiempo de 15 a 20

minutos. Despus, mezclar el criovial por inversin, colocar en copas adecuadamente y
en sus posiciones correspondientes de la Bandeja Actual .
A plus: posicin 14 y 15
CPK-MB: posicin : 16
Hemoglobina Glicosilada: posicin 12 y 13
Protena C reactiva (PCR): posicin 15
30
Microalbuminuria (MAL): posicin 14 y 15
Una vez colocadas en sus posiciones respectivas.
c.-Presionar el icono Test, dar la opcin analizar Estndares/controles. Luego presionar
la opcin Controles Inmediatos donde saldr una ventana que podr seleccionar las
pruebas que quiere controlar tanto enzimas, metabolitos y Turbidimetria.
5.6 Estabilidad y Almacenamientos de los Calibradores y Controles.

5.6.1 calibradores
5.6.1.1 Calibrador A plus
Calibrador reconstituido: estable 8 horas a temperatura ambiente (menor a 25 C), 2 das
refrigerado (2 10 C) o 30 das congelado (-20 C)
En la oscuridad, la bilirrubina es estable 4 horas a temperatura ambiente (menor a 25 C),
8 horas refrigeradas (2 10 C) o 2 semana congelada (-25 C)
5.6.1.2 Protena C Reactiva (PCR) calibrador en serie.

Una vez abiertos son estables 30 das en refrigeracin (2 10 C).
5.6.1.3 Hemoglobina Glicosilada (HbA1c) (calibradores 1,2,3, y 4)

Una vez reconstituido son estables 8 horas a temperatura ambiente (15 25 C), 2 das
refrigerados (2 10 C) o 3 meses congelados a -20 C alicuotados.
5.6.2.4 Microalbmina.
Una vez abiertos son estable 4 semanas en refrigeracin (2 10 C)
5.6.2 Controles.
5.6.2.1 Standatrol S-E (2 niveles)
Una vez reconstituido los Controles, sus componentes son estables 10 das refrigerados
(2- 10 C) excepto la fosfatasa alcalina cuya actividad puede aumentar con el tiempo, y
la bilirrubina que es estable 12 horas a 4 C y en la oscuridad. Congelados a -20 C 1
mes.
5.6.2.2 Hemoglobina Glicosilada (HbA1c).
Una vez reconstituidos son estables 8 horas a temperatura ambiente (15 25 C), 7 das
Refrigerados (2 10 C) o 3 meses congelados a 20 C alicuotados.
5.6.2.3 Protena C Reactiva (PCR) Normal.
31
Una vez abierto es estable s semanas en refrigerador (2 10 C), 3 meses a 20 C
alicuotados.
5.6.2.4 Microalbmina (control 2 niveles).
Una vez abiertos son estable 4 semanas en refrigeracin (2 10 C)
SECCIN 6
PROCEDIMIENTOS
32
6.1 CIDO RICO Uricostat enzimtico AA
Generalidad
El cido rico es el producto final del catabolismo de las purinas (adenina, guanina)
provenientes del exterior con la alimentacin (parte exgena) y del interior con el cido
nucleico (parte endgena). Todas las purinas se transforman en xantina e hipoxantina;
despus, la enzima xantina-oxidada las oxida y las convierte en cido rico. Al hombre,
a diferencia de todas las especies animales, le falta la enzima uricasa, y no puede
transformar el cido rico en alantona. El cido rico es poco soluble en la sangre, se
encuentra en forma de urato monosdico y est ligado a protenas (albmina, alfa 1 y alfa
2 globulina). La mayor parte del cido rico es eliminada por el rin a travs de un
mecanismo de filtracin, reabsorcin y excrecin.
Significacin Clnica
La alteracin puede estar relacionada con dietas ricas en purinas o con aumentada
produccin endgena o con una reducida excrecin.
La determinacin del nivel del cido rico est indicado en el diagnstico y monitoreo de
algunos desrdenes metablicos dietticos: gota, sndrome di metablico alimenticio,
neoplasia linfomielo-proliferativa (como linfomas, leucemias, policitemia), anemia
hemoltica, enfermedad del rin y pacientes en terapias citosttica o radioterapia.
Modalidad de solicitud
Slo en rutina y hospitalizados.
Preparacin del paciente

Ayuno.
Muestra:
Suero, plasma u orina.
Orina: fresca, orina de 24 horas.
Orina: diluyendo la orina 1/10 con agua o solucin fisiolgica, los resultados multiplicar
por el factor de dilucin utilizado.
Modalidad de la toma de muestra
Ninguna particularidad.
Transporte
Se puede transportar a temperatura ambiente.
Conservacin
Centrifugacin y separacin del suero. La muestra se puede conservar por tres das de
20 25 C, 7 das a 2 10 C o 6 meses a -20 C. Las muestras de orina pueden
conservarse 4 das a 20 25 C PH >8. No refrigerar ni congelar.
33
Fundamentos del Mtodo.
El perxido de Hidrgeno formado reacciona por la accin cataltica de la peroxidasa
con cido 3,5-dicloro-2-hidroxibencenelsulfnico (DCHBS) y 4 aminofenazona
(PAP) para producir un complejo rojo de violeta de quinonimina como indicador.
Principio de la reaccin:
Uricasa
cido rico + 02 + 2 H20 ------------- alantona + C02 + H202
Peroxidasa
H202 + 4- AF + 3,5- DHS ------------ Quinonimina roja
Procedimiento semiautomatizado
1. -Seguir instrucciones de protocolo Wiener lab. : Uricostat enzimtico AA liquida.
2. -Para la lectura seguir instrucciones de procedimiento general para modo
semiautomatizado.
Procedimiento automatizado
Seguir instrucciones de procedimiento general para modo automatizado.
Interferencias
Pueden presentar interferencias: El suero ictrico con bilirrubinas. 10.0 mg/dl; la
hemolisis: Hb. Hasta 180.0 g/dl; el suero lipemico: triglicridos. 490 mg/dl y heparina
hasta 100 U/ml
Medicamentos: las sustancias fuertemente reductoras, tales como el cido ascrbico
(vitamina C), la Buscapina (butilbromuro de hioscina), etc., en dosis elevada elevadas
interfieren. Por tal razn debe suspenderse la medicacin, 24 horas antes de la toma
de muestra
Valores de referencia
Suero o Plasma
Hombre 3.4-7.0 mg/dl
Mujer 2.4-5.7 mg/dl
Orina:
Orina: 250 750 mg/24 horas
Criterios de validacin
Con valores muy elevados:
34
Confrontar otros parmetros en relacin con procesos inflamatorios: conteo
de glbulos blancos, VSG, PCR, fibringeno.
Controlar los parmetros de alteracin metablica: glucosa, colesterol
triglicridos, apolipoprotenas.
Controlar bs parmetros de bs procesos displsicos: VSG, parmetros
oncolgicos, frmula leucocitaria y glbulos rojos.
Controlar los parmetros de la funcionalidad del rin: creatinina, electrolitos,
examen de orina.
Antes de la sintomatologa dolorosa en la gota, se eleva el nivel de cido rico.
Modo de escribir los resultados

El cido rico se escribe con una sola cifra decimal.
6.2 ALBMINA AA
Generalidad
35
La albmina es una protena, que contiene el 55-65 % de la cantidad proteica en el plasma.
Tiene un peso molecular de 66,248 Angstrom. Sus funciones principales son de transporte
en la sangre de numerosas sustancias como cido graso libre, bilirrubina, muchas
hormonas. Calcio, numerosos frmacos. Otra funcin importante es la de regular la
presin osmtica. La concentracin normal srica es de 35-50.0 g/1, la cual representa
2/5 parte de toda la albmina presente en el organismo. Los neonatos y ancianos tienen
una cantidad de albmina ms baja. Se habla de hipoalbuminemia, cuando el contenido
de albmina est de 32.0 g/1, y de manifestaciones edematosas, debajo de 25-30.0 g/1.
Significacin Clnica.
La determinacin de la albmina srica es importante en el diagnstico de
hipoalbuminemia.
Las principales causas son:
Disminucin de sntesis (hepatopata grave, cirrosis, etc.).
Disminucin alimenticia y mala absorcin.
Eliminacin por causas endgenas (diarrea masiva, sndrome nefrtico, etc.) y exgenas
(quemaduras).
Slo en rutina, emergencia y hospitalizacin.

Ayuno.
Modalidad de toma de muestra
Transporte
Conservacin
Centrifugacin y separacin del suero cuanto antes; la toma de muestra se
puede conservar para tres das a 2 10 C, o una semana en congelador a -4 C
Fundamentos del Mtodo:
La albmina reacciona especficamente ( sin separacin previa ) con la forma aninica de
la 3,3, 5,5 tetrabromo cresolsulfon ftalena (BCF). El aumento de absorbancia a 625 nm
respecto del Blanco de reactivo, es proporcional a la cantidad de albmina presente en la
muestra.
1. -Seguir instrucciones de protocolo Wiener Lab Albumina AA.
36
semiautomatizado.
Interferencias.
No se observa interferencias por bilirrubinas hasta 200mg/l, triglicridos hasta 9 g/l y
hemoglobina hasta 700 mg/dl .
Valores de referencia
Adulto: 3.4 - 4.8 g/dl
Neonatos hasta 4 das: 2.8 - 5.4 g/dl
Nios: 3.8 - 5.4 g/dl
6.3 AMLASA 405 AA
Generalidad
37
La amilasa es una enzima que cataliza la divisin de 1,4 - alfa-glicsido en lo interno de
la molcula de los polisacridos de los vegetales y animales, provocando la
despolimerizacin del almidn a dextrina, y del glicgeno, a azcar sencillo (glucosa).
La amilasa se produce en el pncreas y las glndulas salivales, y en pequea
concentracin, en el hgado, el rin y las trompas de Falopio, y es eliminada por el rin.
Se puede distinguir amilasa pancretica (isoamilasa P) y amilasa extrapancretica
(isoamilasa S).
La determinacin de la amilasa es de importancia fundamental en el diagnstico de las
enfermedades pancreticas. La amilasa es til en el diagnstico para el control de la
pancreatitis aguda. En estas enfermedades, la amilasa srica sube en casi la totalidad de
los pacientes, 5-6 horas despus de la sintomatologa clnica. Puede aadir valores de 10-
30 veces mayor de los valores normales. Parece que la amilasa sube ms en correlacin
con el edema, en vez que en relacin con la necrosis pancretica. La amilasa puede
aumentar tambin en otras enfermedades pancreticas: neoplasia del pncreas, neoplasia
de la papila de Vter.
En el suero de pacientes con pancreatitis aguda alcanzando los valores ms elevados entre
24 y 30 horas posteriores al ataque, declinando luego para volver a los niveles normales
entre las 24 y 48 horas siguientes
Tambin se ve aumentada en este caso la excrecin urinaria de la enzima, persistiendo la
hiperamilasuria 3 a 5 da, luego de que la actividad srica ha alcanzado los niveles
normales
Tambin es posible encontrar valores aumentados en cualquier caso de abdomen agudo
o intervencin quirrgica en regiones prximas al pncreas.
Parotiditis bacteriana y paperas se asocian tambin con elevaciones en los niveles de
amilasa srica.
FUNDAMENTOS DEL METODO
La alfa amilasa hidroliza el sustrato definido 2-cloro-p-nitrofenol (CNP-G3) para liberar
2-cloro-pnitrofenol (CNP), formndose 2-cloro-nitrofenil alfa D- maltsido (CNP-
G2), maltotriosa (G3) y glucosa . El CNP absorbe a 405 nm y la velocidad de aparicin
del color es directamente proporcional a la actividad enzimtica.
En rutina, emergencia y Hospitalizado.

Ayuno en rutina.
38
Transporte
Conservacin
Centrifugacin y separacin el suero. La toma de muestra se puede conservar por un
semana (si se evita la contaminacin bacteriana) + 20 25 C, o varios meses mese en
refrigeracin 2 8 C.
En orina, si la muestra no se procesa en el da, es coveniente ajustar el pH
aproximadamente a 7 (con hidrxido de sodio) dado que el pH cido inactiva la enzima
irreversiblemente. A pH 7 puede conservarse a refrigerada por lo menos 10 das sin
prdida de actividad.
1. -Seguir instrucciones de protocolo Wiener Lab.
semiautomatizado.
Interferencias
No se observa interferencias por bilirrubinas hasta 22mg/dl , hemoglobina hasta 180
mg/dl, triglicridos hasta 1400 mg/dl, ni heparina hasta 50 U/ml .
Valor de referencia
Suero: Menor a 125 U/I a 37 C
Orina ocasional: hasta 680 U/l
Criterio de validacin
Confrontar con lipasa, calcio, funcionalidad del hgado.
Controlar parmetros de procesos inflamatorios.
Controlar glucosa y metabolismo glucdico.
La amilasa se escribe sin cifras decimales.
Comunicacin de riesgo
Se tiene que comunicar inmediatamente, con valores mayores de 800.0 U/I.
6.4 BILIRRUBINA TOTAL AA

Generalidad
39
La bilirrubina se forma en el sistema retculo endotelial por la apertura del ncleo
tetrapirrlico en el 70-90%, y el 10-30%, en la mdula sea. La bilirrubina se origina por
degradacin de los grupos hemo producido para la sntesis de hemoglobina, o desde la
misma hemoglobina derivada de la hemolisis intra medular de los eritrocitos. Se forma
en pequea parte desde la mioglobulina. La cantidad producida es derivada en la sangre,
donde se liga con la albmina y despus es capturada desde el hepatocito. En el interior
del hepatocito, se liga con cido glucurnico, y despus es excretada en el canal biliar y,
desde aqu, se encuentra con la bilis en el intestino. En el intestino, la bilirrubina
conjugada es reducida por la flora bacteriana a bilingeno. Una parte del bilingeno es
eliminada en las heces (estercobilingeno), otra es reabsorbida por va portal desde el
hgado y nuevamente es excretada con la bilis (bilingeno). Una parte del bilingeno huye
de la captacin del hgado, y es eliminada por el rin (urobilingeno). En la
determinacin de la bilirrubina, se puede evidenciar: En Una fraccin directa,
correspondiente a bilirrubina conjugada (glucuronada). 0 Una fraccin indirecta,
correspondiente a la forma no conjugada libre. 0 La bilirrubina total, correspondiente a la
suma de las dos fracciones.
Significacin Clnica
La determinacin de la bilirrubina es un elemento fundamental para el diagnstico de las
patologas ictricas del hgado. Se distinguen tres tipos de ictero:
Preheptico o hemoltico: Debido al aumento de la cantidad de bilirrubina que llega al
hgado por fenmenos de hemolisis. En este caso, la fraccin aumentada es la indirecta.
La patologa fundamental es la anemia hemoltica hereditaria (drepanoctica, talasemia
etc.) y la anemia adquirida (infecciosas, parasitarias, txicas, venenos vegetales o
animales, etc.), y anemia hemoltica inmunolgica del neonato.
Postheptico obstructivo: Debido a un obstculo orgnico y/o funcional al flujo de la
bilis.
En estos casos, la fraccin que aumenta es la bilirrubina directa; slo en un segundo
tiempo, para el dao del hepatocito puede aumentar la fraccin indirecta. La obstruccin
puede ser provocada desde litiasis, parasitosis, patologa tumoral intrnseca al hgado, o
extrnseca, por compresin externa (pancretica, etc.).
40
Hepatocelular: Debido a lesiones hepatocelulares, el hgado no es capaz de capturar la
bilirrubina y conjugarla con cido glucornico. En este caso, puede aumentar la fraccin
directa e indirecta. Las causas pueden ser: infecciosas degenerativas, autoinmune, txica,
tumoral.
La eritroblastosis fetal o anemia hemoltica del recin nacido es una patologa provocada
por incompatibilidad materno-fetal en la que se produce una destruccin excesiva de
glbulos rojos. Esto resulta un severo aumento de la bilirrubina srica con el consecuente
riesgo de difusin del pigmento al sistema nervioso central produciendo toxicidad, por lo
que la determinacin de la bilirrubina en estos nios recin nacidos resulta sumamente
importante.
En rutina, emergencia y hospitalizacin

Ayuno
Transporte y Almacenamiento
Se puede transportar a temperatura ambiente, protegida de la luz. La muestra debe ser
Preferentemente fresca, el suero puede conservarse hasta 48 horas en refrigerador ( 2
10 C ) . La muestra debe ser conservada y protegida de la luz.
Verificacin de la muestra
Verificar la idoneidad del suero o plasma: ictericia, presencia de cogulos, filamentos de
fibrina, turbidez. Sealar, eventualmente, en el resultado la no idoneidad de la muestra.
Fundamentos del Mtodo

La bilirrubina indirecta, unidad a la albmina, es liberada por un tensioactivo. La
bilirrubina total reacciona con la sal de diclorofenildiazonio ( DPD ) formando un
azocompuesto de color rojo de solucin cida.
Principio de la reaccin
Bilirrubina + DPD + cafena --------------------- > Azobilirrubina total
41
1. -Seguir instrucciones de protocolo Wiener Lab .
semiautomatizado.
Interferencias
Hemolisis: hasta una concentracin de hemoglobina de 500 mg/dl La lipemia hasta una
concentracin de 500 mg/dl de triglicridos
Se han sealado muchas sustancias, drogas en especial, que pueden producir variaciones
del resultado de bilirrubina srica.
Valor de referencia
Adultos: Hasta 1.0 mg/dl.
Prematuros de 2-4 das, hasta 10.0 mg/dl.
Neonatos de 24 horas, hasta 4.0 mg/dl.
Neonatos de 48 horas, hasta 9.0 mg/dl.
Neonatos al quinto da, hasta 13.5 mg/dl.
El Confrontar con funcionalidad heptica (transaminasas, G.G.T, TP, colinesterasa,
urobilingeno, anlisis de hepatitis A, B, C y delta).
Controlar parmetros para mononucleosis y citomegalovirus.
Controlar parmetros de estasis biliar (fosfatasa alcalina y G.G.T.)
Controlar biometra hemtica completa y hierro.
Controlar enzimas cardacas. 0 Controlar eventual estado txico (alcoholemia).

La bilirrubina total se escribe con dos cifras decimales.
Se tiene que comunicar inmediatamente con valores >12.0 mg/dl.
6.5 BILIRRUBINA DIRECTA

42
Significacin Clnica
La bilirrubina es el producto de la degradacin del grupo hemogrupo mononuclear
fagoctico y existe en dos formas, conjugada y no conjugada. La bilirrubina no conjugada
(indirecta) es transportada por la albmina por el hgado, donde se conjuga con cido
glucornico en los hepatocitos convirtindose en bilirrubina conjugada (directa),
permitiendo de este modo su excrecin a travs de la bilis.
Los niveles de bilirrubina directa se miden para investigar la causa de una ictericia pre-
heptica o post-heptica. Niveles aumentados de bilirrubina directa se observan en
enfermedades hepatocelulares tales como hepatitis y casos de colestasis post heptica.
La bilirrubina directa reacciona con la sal de diclorofenildiazonio (DPD) formando un
azocompuesto de color rojo con solucin cida.
Principio de la reaccin
Bilirrubina + DPD _________________ AZOBILIRRUBINA DIRECTA
semiautomatizado.
Seguir instrucciones de procedimientos en general para modo automatizado.
Interferencias
Hemolisis: producen valores falsamente disminuidos
Lipemia: hasta 500 mg/dl de triglicridos
Se han sealado muchas sustancias, drogas en especial, que pueden producir variaciones
del resultado de bilirrubina srica, referirse a la bibliografa de Young .
Valor de referencia
Hasta 0.2 mg/dl.
Confrontar con funcionalidad heptica (transaminasas, G.G.T, TP, colinesterasa,
Urobilingeno, anlisis de hepatitis A, B, C y delta).
Controlar parmetros para mononucleosis y citomegalovirus.
Controlar parmetros de estasis biliar (fosfatasa alcalina y G.G.T.).
Controlar biometra hemtica completa y hierro.
Controlar enzimas cardacas.
Controlar eventual estado txico (alcoholemia).
La bilirrubina directa se escribe con dos cifras decimales.
6.6 BILIRRUBINA INDIRECTA
43
Metdica
Los valores para bilirrubina no conjugada (indirecta) se obtienen sustrayendo la
bilirrubina conjugada (directa) a la bilirrubina total.
Valor de referencia
Hasta 0.7 mg/dl.
- Confrontar con funcionalidad heptica (transaminasas, GGT, TP, colinesterasa,
urobilingeno, anlisis de hepatitis (A, B, C y delta).
- Controlar parmetros para mononucleosis y citomegalovirus.
- Controlar parmetros de estasis biliar (fosfatasa alcalina y G.G.T.).
- Controlar biometra hemtica completa y hierro.
- Controlar enzimas cardacas.
- Controlar eventual estado txico (alcoholemia).

La bilirrubina indirecta se escribe con dos cifras
decimales.
Se tiene que comunicar inmediatamente con valores mayores o iguales a 7.0mg/dl.
6.7 CALCIO COLOR (Arsenazo III AA)

44
Generalidad
El calcio srico representa aproximadamente el 1% del calcio total del organismo, la
mayor parte del cual est contenida en los huesos y en los dientes. El calcio srico se
encuentra en equilibrio dinmico con los lquidos extracelulares. En el suero, el calcio
est presente en formas distintas: el 35-45%, ligado a las protenas; el 5-6%, ligado a
cidos dbiles y no disociable (citrato); y el restante, como calcio ionizado, muy
importante como regulador en la excitacin neuromuscular y de la permeabilidad celular.
El calcio cataliza tambin muchas reacciones enzimticas e interviene en la coagulacin
de la sangre.
El calcio ligado a las protenas y el no disociable son biolgicamente inactivos. La
absorcin se realiza primero en el tracto del intestino delgado, en particular para la accin
de la vitamina D, del pH intestinal y en relacin con fosfato en la dieta. Es eliminado con
las heces y la orina.
La determinacin se utiliza en el monitoreo del metabolismo del calcio. Se distinguen: El
Hipocalcemia debida a:
Hipofuncionalida de las paratiroides, escasa absorcin por disminucin de vitamina D,
ciruga intestinal, pancreatitis, cirrosis, alcoholismo, insuficiencia crnica del rin,
Hipercalcemia debida a:
Hiperparatiroidismo, aumentada destruccin de los huesos, metstasis de los huesos,
neoplasia de la mama, neoplasia de la prstata y de la tiroides, osteoporosis, leucemia,
linfoma, morbo de Paget, aumentada absorcin intestinal gravidez.
En rutina y/o emergencia.
Ayuno en rutina. Existen pequeas modificaciones circadianas de la calcemia.
Orina: recolectar orina de 24 horas sobre 20 ml de cido clorhdrico al 50% durante su
recoleccin.
Plasma: usar heparina como anticoagulante.
Tipo de cristalera
La cristalera y cualquier recipiente que tenga contacto con la muestra debe ser
previamente lavado con cido para evitar contaminacin por calcio. Los corchos, tapones
de hule y tapas plsticas son fuentes de contaminacin que deben evitarse.
Transporte
Conservacin
45
Conservacin
Centrifugar y separar el suero, porque el prolongado contacto del suero con el cogulo
puede disminuir los valores del calcio.
El calcio es estable 7 das a temperatura ambiente de 20-25oC, 3 semanas 2 4 C y 8
meses.
Centrifugar y separar el suero, porque el prolongado contacto del suero con el cogulo
puede disminuir los valores del calcio.
El calcio es estable 7 das en refrigeracin ( 2 10 C ) o ms de 5 meses en congelador.
El calcio reacciona con arsenazo III dando un complejo de color azul que se mide
fotocolorimtricamente a 650 nm .
semiautomatizado.
Seguir instrucciones de procedimiento general para modo automatizado
analizador en uso.
Verificar el resultado:
Si el valor del calcio es < 7.0 y/o >13.0 mg/dl., repetir la medida.
Si el valor del resultado repetido es el mismo, se puede entregar.
Si el valor del resultado repetido es diferente, procesar nuevamente la muestra.
Interferencias
Los anticoagulantes distintos a la heparina, complejan o quela al calcio produciendo
resultados errneos
La interferencia se puede presentar con:
Hemoglobina: hasta 350 mg/dl
Bilirrubinas: hasta 200 mg/l.
Magnesio: hasta 10mg/dl
La lipemia: de 500 mg/dl de triglicridos.
Valor de referencia
Suero: 8.5 10.5 mg/dl
Orina: hasta 300 mg/24 horas (para una dieta normal).
6.8 CREATINA QUINASE (CK NAC) AA
Generalidad
46
La CPK o CK es una enzima fundamental en el metabolismo energtico de la clula. La
CPK tiene la capacidad de formar ATP, a partir del ADP y fosfocreatina, con
reversibilidad de la reaccin, almacenando o librando energa.
Se encuentran tres principales isoenzimas con formas moleculares dmeras:
CK - MM
CK-MB
CK-BB
La CK se encuentra en cantidades elevadas en msculos esquelticos casi
exclusivamente, bajo la frmula de CK-MM, y con pequeas cantidades de CK-MB (1-
3.0%), en el cerebro y el intestino; en la vejiga, est presente como enzima CK-BB. En el
msculo cardaco, estn bien representadas dos de las tres isoenzimas citoplasmticas, la
CK-MM y la CK-MB.
La determinacin de CPK en el suero es importante en el diagnstico del infarto del
miocardio.
En el infarto del miocardio agudo (IMA), la CPK aumenta muy precozmente,
normalmente despus de 4-6 horas a partir de la sintomatologa dolorosa. El aumento
mximo se da despus de 18-24 horas, y regresa a los valores normales despus 3-4 das.
El aumento del CPK es ms precoz en relacin con otros parmetros del corazn (TGO,
LDH).
El inters en la determinacin de la CPK para el diagnstico del infarto de miocardio, no
slo interesa porque consigue ser un precoz diagnstico, sino tambin porque el aumento
en el suero no est en relacin con un dao del hgado, como puede verificarse con la
TGO. La determinacin de CPK en el suero es importante tambin en alteraciones
patolgicas y fisiolgicas de los msculos esquelticos (distrofia muscular, estrs
muscular, inyecciones musculares, trauma muscular, ciruga muscular, padecimiento
muscular en general.
En rutina y/o emergencia.

Ayuno, evitar estrs muscular en los das antes de la toma de muestra.
47
Reducir al mnimo el trauma y la xtasis hemtica
Transporte
Transportar a temperatura ambiente.
Conservacin
Centrifugacin y separacin del suero; la muestra debe ser preferentemente fresca. Puede
conservarse hasta 1 semana en refrigerador (2 10 C )
Fundamentos del mtodo
La creatina kinasa cataliza la fosforilacin del ADP por el fosfato de creatina y ATP. La
concentracin cataltica, se determina empleando las reacciones acopladas de la
hexoquinasa y glucosa 6-fosfato deshidrogenasa, a partir de la velocidad de formacin
del NADPH.
Creatina kinasa
Creatina fosfato + ADP ------------------------- TP creatina
Hexoqunasa
ATP + glucosa ---------------------- ADP + glucosa 6-P
G6P-DH
Glucosa 6-P ________________6 - fosfogluconato + NADPH + H+
2. -Para la lectura seguir instrucciones de procedimiento
general para modo semiautomatizado.
48
Seguir instrucciones de procedimiento general para modo automatizado analizador en uso
CB400i.
Verificar el resultado
Si el valor de la CPK es Mayor a 600 U/L, repetir la medida.
Si el valor del resultado repetido es diferente, procesar nuevamente la muestra utilizando
un control patolgico.
Con valores de CPK es mayor S de 1000 U/L, repetir la medida.
Interferencias
Bilirrubina: hasta 39 mg/dl .
Lipemia: triglicridos hasta 1,250 mg/dl
Valor de referencia
Mujer: hasta 170.0 U/L a 37C
Hombre: hasta 195.0 U/L a 37C
Controlar todos los otros parmetros cardacos: LDH, TGO, CPK-MB, mioglobina y
troponina.
Confrontar parmetros musculares: LDH, aldolasa.
Controlar parmetros de funcionalidad heptica: TGP, GGT, TP, colinesterasa,
parmetros de hepatitis A y B.
Controlar eventuales parmetros txicos (alcoholemia y colinesterasa). Controlar
parmetros tumorales.

La CPK se escribe sin cifras decimales.
Se tiene que comunicar inmediatamente con valor mayor o igual a 400.0 U/L.
6.9 CREATINA KINASA (CK - MB UV )
49
La creatina kinasa (CK) es una enzima intramuscular constituida por una subunidad M
(msculo) y otra subunidad B (brain cerebro) que se combinan dando lugar a las
isoenzimas CK-MM (muscular), CK-BB (cerebral) y CK-MB (miocrdica).
La elevacin srica de CK y de CK-MB constituye un indicador de injuria de miocardio.
Luego de un infarto agudo de miocardio, aproximadamente el 55% de los casos, el pico
mximo de elevacin de CK y CK-MB se produce en simultnea, mientras que en el 45%
delos casos la elevacin mxima de CK-MB precede a la CK total.
El mtodo se basa en la inhibicin especfica de las subunidades CK-M con anticuerpos
anti CK-M . Los anticuerpos inhiben tanto la isoenzima MM como las subunidades M
correspondientes a CK-MB. Las subunidades B se determinan mediante el empleo de un
sistema reactivo basado en una tcnica analtica optimizada por la IFCC, con N-
acetilcistena como activador, adicionado de anticuerpos anti CK-M.
1. -Seguir instrucciones de protocolo Wiener Lab CK-MB UV AA.
semiautomatizado.
Seguir instrucciones de procedimiento general para modo automatizado analizador en uso
Keylab-Mini Qca .
Si el valor de la CK-MB es 100 U/L, repetir la medida. Puede verificarse el caso en el
cual CK-MB es mayor que el CK total. Esto es posible porque la metdica utilizada es
inmunolgica y usa un anticuerpo policlonal, para la fraccin CK-M, que inhibe la
actividad de la subunidad CK-B. Existen casos en los cuales en pacientes con patologas
oncolgicas y con deficiencias inmunitarias, se puede verificar el aumento de la fraccin
CK-MB superior al CK-total.
Si el valor del resultado repetido es diferente, procesar nuevamente la muestra
utilizando un control patolgico.
50
Interferencias
Bilirrubina: hasta 39 mg/dl .
Lipemia: triglicridos hasta 300 mg/dl.
Los sueros con hemolisis visible producen valores falsamente aumentados, por lo que no
deben ser usados.
Valor de referencia
Hasta 25.0 U/L a 37 C
El CK-MB, la troponina y la mioglobina son los parmetros ms importantes en el
diagnstico del infarto al miocardio agudo; menor importancia la tiene la TGO y LDH, y
algunos factores de la coagulacin, como el fibringeno. Debido a que la CK-MB est
presente de modo particular en el miocardio, su mayor aumento del 6.0% del CK total
indica la presencia de un dao a cargo del miocardio.

La CK-MB se escribe con una cifra decimal.
Se tiene que comunicar inmediatamente con valores 100.0 U/L y/o adems el 25.0% del
CK- total.
En caso que la fraccin MB sea superior al CK- total, comunicar al mdico para verificar
si existe una condicin patolgica que justifique ese resultado.
6.10 COLESTEROL TOTAL (Colestat Enzimtico AA)
51
Generalidad
El colesterol es un esteroide sintetizado en muchos tejidos, especialmente en el hgado,
la corteza supra-renal, en la pared intestinal, en las gnadas y la aorta. El colesterol origina
% de la alimentacin y % de la sntesis endgena. Un aumento en la dieta de colesterol
disminuye la cuota endgena. La cuota de colesterol intestinal est controlada por la
concentracin en el intestino de las sales biliares. El colesterol, en relacin con la
alimentacin, es esterificado desde las clulas intestinales. La cuota endgena es
esterificada desde el hgado.
El significado del colesterol en cada una de sus fracciones es diferente: VLDL: incierto
(utilizacin directa con los tejidos perifricos). LDL: medio de transporte a las clulas.
HDL: aporte desde las clulas.
Significacin Clnica
La determinacin del colesterol se realiza en la patologa del metabolismo lipdico y
lipoproteico. El colesterol circula en parte libre y en parte esterificado con cidos grasos.
La esterificacin se cumple en el hgado.
El aumento del colesterol se encuentra en algunas enfermedades hereditarias y en la
alimentacin no adecuada, en el hipotiroidismo, en el sndrome nefrtico, en la
enfermedad de Cushing, en la diabetes mellitus, en la pancreatitis, en la glicogenosis tipo
I, III, VI, y tambin en las glomerulonefritis.
La disminucin del colesterol se encuentra en el dficit de alfa lipoprotena, en la
insuficiencia heptica, hipertiroidismo, caquexia, mala nutricin, uremia, septicemia,
enfermedad de Addison.
Slo rutina.

Necesario ayuno al menos 6-8 horas, no tomar alcohol al menos 72 horas antes de la toma
de muestra.
Evitar xtasis venosa porque provoca hemoconcentracin y la liberacin de colesterol
Tisular y, por consiguiente, un aumento de colesterol hemtico.
Transporte y Almacenamiento
Conservacin
52
Centrifugacin y separacin del suero; la toma de muestra se puede conservar por 1 da a
temperatura ambiente de 20-25oC, y 1 semana en refrigerador 2 8 C, 2 meses a -20oC.
Mtodo enzimtico colorimtrico (CHOD-POD)
El colesterol es determinado por la hidrlisis y oxidacin enzimtica. El indicador
quinonimina es formado de perxido de hidrgeno y 4 amino antipirina con la presencia
de fenol y peroxidasa.
CHE
steres del colesterol -------------------- colesterol + cidos grasos
CHOD
Colesterol + O2 ------------------------colesten 3-ona + H2O2
POD
H2O2 + 4-AF + aceptor-------------------quinonimina roja
1. -Seguir instrucciones de protocolo Wiener Lab Colestat Enzimtico AA (liquida).
semiautomatizado.
Interferencias
Bilirrubina: hasta 80 mg/l
Los sueros con hemlisis visible o intensa producen valores falsamente aumentados por
lo que no deben ser usados.
cido ascrbico: hasta 75 mg/l .
cido rico: hasta 200 mg/l
Valor de referencia
Hasta 200.0 mg/dl.
Moderadamente alto: 200 239 mg/dl
Elevado: 240 mg/dl
Controlar los parmetros del metabolismo lipdico (triglicridos, colesterol HDL, VLDL,
apolipoprotenas).
Controlar parmetros del metabolismo glucdico, de la funcionalidad del rin,
funcionalidad del hgado (GGT en alcoholismo) y la funcionalidad tiroidea.
El colesterol se escribe sin cifra decimal.
6.11 HDL COLESTEROL (monofase AA plus)
53
Generalidad
El colesterol HDL constituye la parte de las lipoprotenas de alta densidad (High Density
Lipoproteins), formadas por el 50.0% de protenas (de las cuales el 90.0% apoA); el
18.0%, colesterol; el 2.0%, triglicridos; y el 30.0%, fosfolpidos.
El colesterol HDL es producido en el hgado. El colesterol que se encuentra en las clulas
est inmerso en las secreciones biliares y, a travs de la bilis, es eliminado en el intestino.
El control del colesterol HDL es importante en la determinacin del diagnstico del riesgo
de aterosclerosis. El aumento de la concentracin del colesterol HDL tiene un efecto
protector en las cardiopatas coronarias, mientras la disminucin en particular con un
aumento de los triglicridos puede comportar un aumento del riesgo de enfermedad
cardiovascular.
La funcin principal de las HDL en el metabolismo lipdico es la captacin y transporte
de colesterol desde los tejidos perifricos al hgado en un proceso conocido como
transporte reverso de colesterol (mecanismo cardioprotectivo )
El HDL colesterol bajo, est asociado con un alto riesgo de enfermedad cardiaca. Por
este motivo la determinacin de HDL colesterol es una herramienta til en la
identificacin de individuos de alto riesgo.
El presente, es un mtodo homogneo que emplea dos reactivos. En la primera etapa de
la reaccin, se solubiliza y consume el colesterol libre o unidos a protenas distintas a
HDL en una reaccin que involucran a colesterol oxidasa (CHO), peroxidasa (POD) y N-
etil-N-(2 hidroxi-3-sul-fopropil)-3toluidina disdica(TOOS) dando lugar a un producto
no coloreado. En una segunda etapa un detergente solubiliza especficamente las HDL.
El HDL- colesterol es liberado para reaccionar con (CHE) , colesterol oxidasa y TOOS,
dando un complejo coloreado:
TOOS
LDL,VLDL ---------------------------- productos incoloros de LDL,VLDL y
CHO quilomicrones
Detergente
HDL- colesterol---------------------------------HDL solubilizado
CHO
54
HDL- colesterol -------------------------------------- colest-4-en-3-ona + H2O2
CHE
POD
H2O2 + TOOS + 4-AAP --------------------------- desarrollo de color
Interferencias
Bilirrubina: hasta 60 mg/dl
Hemoglobina: hasta 1,000 mg/dl
Lipemia: triglicridos hasta 1,200 mg/dl.
cido ascrbico: hasta 100 mg/dl .
Valores elevados de inmunoglobulinas pueden provocar valores falsamente elevados de
HDL.
1. -Seguir instrucciones de protocolo Wiener Lab HDL colesterol monofase AA plus.
semiautomatizado.
Valor de referencia
Varones: 30 70 mg/dl
Mujeres: 30 85 mg/dl
Controlar los parmetros del metabolismo lipdico (triglicridos, colesterol, VLDL,
apolipoprotenas).
Controlar parmetros del metabolismo glucdico, de la funcionalidad del rin,
funcionalidad del hgado (GGT en alcoholismo) y la funcionalidad tiroidea.
El HDL-colesterol se escribe sin cifra decimal.
55
6.12 COLESTEROL LDL (monofase AA)
Generalidad
La determinacin del colesterol LDL es muy importante para su correlacin con la
hipercolesterolemia esencial y con la hipercolesterolemia secundaria (diabetes mellitus
nefrosis, hipotiroidismo, y tambin para el riesgo atergeno).
La disminucin se encuentra en el dficit de alfa lipoprotena, insuficiencia del hgado,
hipertiroidismo, caquexia, mala nutricin, uremia, enfermedades infecciosas, septicemia,
enfermedad de Addison.
Slo rutina.
Necesario ayuno al menos 6-8 horas, no tomar alcohol al menos 72 horas antes de la toma
de muestra.
Evitar xtasis venoso porque provoca hemoconcentracin y la liberacin de colesterol
tisular.
Transporte
Conservacin
Centrifugacin y separacin del suero; la muestra se puede conservar por 1 da a
temperatura ambiente, 5-7 das a + 4oC, 2 meses a -20oC. Sin embargo, es mejor evitar
la congelacin porque puede alterar los contenidos lipdicos y apolipoprotenas.

semiautomatizado.
3. Procedimiento automatizado
Seguir instrucciones de procedimiento general para modo automatizado
Valor de referencia
Hasta 130.0 mg/dl
Moderado riesgo 130.0-160.0 mg/dl
Alto riesgo > 160.0 mg/dl

El LDL-colesterol se escribe sin cifra decimal.
56
6.13 CREATININA (cintica AA)
Generalidad
La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular (msculo estriado,
liso y cardaco) de la creatina y representa el subproducto de excrecin. La produccin de
creatinina es independiente de la dieta y del ejercicio muscular; sin embargo, es
proporcional dentro de ciertos lmites a la masa muscular. Se libera de los glomrulos y
no es reabsorbida por los tbulos, de los cuales puede ser excretada, especialmente cuando
se aumenta la concentracin hemtica. El aumento de la creatinina en el suero empieza a
ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de 60 mL por minuto.
Significacin Clnica
La determinacin de la creatinina es utilizada en el diagnstico de las enfermedades
renales agudas o crnicas, y tambin para el monitoreo de la dilisis renal. El aumento de
la creatinina es un ndice de la insuficiencia glomerular en cuanto sta es eliminada por
filtracin glomerular. Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a travs de
una oportuna dieta, la creatinina se correlaciona casi exclusivamente a la eficiencia de la
filtracin glomerular. La creatinina representa el ndice ms fiel de la insuficiencia renal.
Ayuno.
Transporte
Conservacin y estabilidad
temperatura ambiente de 20-25 C, 3 das de 2 10 C.
La creatinina reacciona con el picrato alcalino (reaccin de Jaffe) produciendo un
cromgeno rojo . La velocidad de esta reaccin, bajo condiciones controladas, es una
medida de la concentracin de creatinina de la muestra puesto que se comporta como una
reaccin cintica de primer orden para la creatinina. Por otra parte, se ha demostrado que
57
los cromgenos no-creatinina que interfieren en la mayor parte de las tcnicas
convencionales, reaccionan dentro de los 30 segundos de iniciada la reaccin. De manera
que entre los 30 segundos y los 5 minutos posteriores al inicio de la reaccin, el
incremento de color se debe exclusivamente a la creatinina.
1. Seguir instrucciones de protocolo Wiener Lab Creatinina cintica AA.
2. Para la lectura seguir instrucciones de procedimiento general para modo
semiautomatizado.
Si el valor de la creatinina es mayor a7.0 mg/dl, repetir la medida.
Con valores de creatinina > de 25.0 mg/dl, repetir la medida, sea concentrada y diluida
1:2 con solucin fisiolgica y con un control patolgico.
Interferencias
Las interferencias ms significativas son:
Hemoglobina: hasta 7.8 g/1
Lipemia: triglicridos hasta 1700.0 mg/l
Algunos antibiticos, como las cefalosporinas, pueden dar valores falsamente elevados.
Valor de referencia
Hombres: 0.7 1.3 mg/dl
Mujeres : 0.6 1-1 mg/dl
58
6.14 DEPURACIN DE LA CREATININA
Generalidad
La cantidad de creatinina excretada con la orina est en relacin con la filtracin
glomerular.
La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular (msculo estriado,
liso y cardaco) de la creatina, y representa el subproducto de excrecin. La produccin
de creatinina es independiente de la dieta y del ejercicio muscular; sin embargo, es
proporcional, dentro de algunos lmites, a la masa muscular. Se libera desde los
glomrulos y no es reabsorbida por los tbulos, de los cuales puede ser excretada,
especialmente cuando se aumenta la concentracin hemtica. El aumento de la creatinina
en el suero empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de 60 mL
por minuto.
La medida de la cantidad de creatinina en la orina, producida en un determinado perodo
de tiempo, simultneamente a la medida de la concentracin plasmtica, lleva al clculo
el aclaramiento de la creatinina (volumen del plasma en mi que es depurado de la
creatinina en un minuto de tiempo):
D = U x V / P (ml/min)
D= depuracin
U= concentracin de creatinina en la orina
V= volumen de la orina eliminada
P= concentracin de creatinina en el plasma
La estrecha correlacin entre la velocidad de filtracin glomerular y el valor de la
creatinina plasmtica, y el hecho que la concentracin de la creatinina hemtica no es
influenciada por la dieta, hacen de la creatinina, en particular el aclaramiento de la
creatinina, un ndice de funcionalidad renal muy sensible y seguramente ms significativo
que la urea.
El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacin con la enfermedad renal

(glomerulonefritis agudas o crnicas, rin policstico, obstruccin de la va renal).
59
En rutina y con explicacin de su solicitud.

Ayuno.
A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento:
Para la recoleccin de orina de 24 horas, se tiene que utilizar un frasco de 2.5 3.0 litros,
de boca ancha, con tapn de rosca. Aadir al frasco un estabilizante, si es necesario. Para
la recogida de la orina, se procede del modo siguiente:
a) En el tiempo preestablecido, vaciar la vejiga e eliminar toda la orina.
b) Posteriormente, comenzar a recoger toda la orina de 24 horas.
c) Al cumplir las 24 horas, vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda la orina en el
frasco.
d) Al finalizar la recoleccin de orina, sta debe ser enviada inmediatamente al
laboratorio.
B) Cuando se entrega la muestra de orina, es necesario efectuar la toma de muestra de

sangre.
Transporte
La muestra de orina debe ser transportada de 2-4oC; la muestra de sangre, a temperatura
ambiente.
Conservacin
temperatura ambiente de 20-25 C, 3 das 2-4 C
La orina puede mantenerse hasta 4 das en refrigerador (2 10 C)-
Metdica de determinacin:
(Px4)+7
SC: ---------------------- SC: (superficie corporal)
P + 90
Vol. en 24 hrs
VM: ------------------------------- VM: (volumen minuto)
1440
1.73 x VM
VCM: -------------------- VCM (volumen corregido minuto)
60
. SC
Depuracin de Creatinina:
Creatinina en orina x VCM
D.C.E: ---------------------------------------: ml/min
Creatinina en suero
Procedimiento analtico
Ver metdica de la creatinina cintica AA.
Medir la diuresis, tomar una alcuota y efectuar una dilucin 1:50 de la misma en agua
destilada. En caso que la diuresis sea de 2 horas, multiplicar el volumen medido por 12
para calcular la cantidad de creatinina eliminada durante 24 horas.
Interferencias
Las interferencias significativas se deben:

Para las orinas:
Presencia de partculas en suspensin (centrifugar las orinas). Mala recoleccin de orina.
Presencia de bacterias, de barbitricos, de cuerpos cetnicos.
Para la sangre:
Hemolisis: con Hb > 7.8 g/1.
Ictrico: bilirrubina > 24 mg/dl.
Lipemia: triglicridos > 1700.0 mg/dl.
Acetona > 50.0 mg/dl.
Valor de referencia
Hombres: 94 140 ml/min
Mujeres: 72 110 ml/min
Confrontar parmetros de funcionalidad renal (urea, potasio, protenas, densidad
urinaria).
Confrontar parmetros de equilibrio electrolticos (sodio, potasio, cloro).
Controlar sexo y edad del paciente, y tambin eventual estado de embarazo.
Controlar parmetros del metabolismo muscular (CPK, mioglobulina).

El aclaramiento de la creatinina se escribe en ml/minutos sin cifra decimal
61
6.15 FOSFATASA ALCALINA (ALP 405)
Generalidades
La fosfatasa alcalina es un grupo de enzimas que cataliza la hidrlisis del ligamiento
estrico, entre lcali y cido fosfrico, con liberacin de fosfato inorgnico. La fosfatasa
alcalina se encuentra en muchos tejidos: huesos, mucosa intestinal, hgado, bazo,
pulmones, tiroides, etc.
La fosfatasa alcalina en el plasma se encuentra constituida por algunas isoenzimas
producidas por el hgado, tejido del hueso y la mucosa intestinal.
La isoenzima de origen heptico constituye la principal fraccin de la fosfatasa alcalina
en adultos; en los nios, se evidencia la producida en los huesos.
El valor de la fosfatasa alcalina en el plasma es diferente con la edad: en el nacimiento,
los valores son iguales a los de adultos; despus aumentan el doble valor, hasta los 10
aos; se mantienen estos valores elevados entre 11 y 16 aos, y despus vuelven a los
valores de los adultos.
Significacin Clnica-
- El aumento de la fosfatasa alcalina se encuentra en:
- Enfermedad del hgado por un aumento de la fraccin heptica o de la fraccin de
los huesos por obstruccin de la va biliares.
- Hepatopatas celulares.
- Hepatopata obstructiva.
- Enfermedad sea por un aumento de la fraccin sea, debido a la incrementada
actividad de los osteoblastos (raquitismo, enfermedad de Paget,
hiperparatiroidismo, osteomalacia, neoplasia del tejido seo, trauma o fracturas
sea).
- La disminucin de la fosfatasa alcalina se origina en la disminucin del magnesio,
porque ste es el ion necesario para la actividad de la fosfatasa alcalina.
Rutina, emergencia y hospitalizacin.

Ayuno.

Transporte
Centrifugacin y separacin del suero. La muestra se puede conservar por 6 horas a
temperatura ambiente de 20-25 C, 7 das 2-4 C y 4 semanas en congelacin a -20 C.
62
Fundamentos del mtodo.
La fosfatasa alcalina (ALP o monoster ortofosfrico fosfohidrolasa, EC, 3.1 , 3.1)
hidroliza al p-nitrofenilfosfato (p-NFF), que es incoloro, produciendo fosfato y p-
nitrofenol a PH alcalino . La velocidad de aparicin del anin p-nitrofenolato (amarillo)
a 405 nm, es proporcional a la actividad enzimtica de la muestra.
ALP
P-nitrofenilfosfato + H2O ------- nitrofenol + fosfato
1. -Seguir instrucciones de protocolo Wiener Lab .
semiautomatizado.
Seguir instrucciones de procedimiento general para modo automatizado segn el Keylab-
Mini Qca
Interferencias
Hemolisis: hasta 200 mg/dl (porque la fosfatasa alcalina se encuentra en los glbulos
rojos).
Bilirrubina: hasta 16 mg/dl.
Lipemia: con triglicridos hasta 1000.0 mg/dl.
La presencia de oxalato, citrato y EDTA puede disminuir la actividad de la fosfatasa
alcalina por la prdida de iones de magnesio.
Valor de referencia
Adultos: 65 300 U/L
Nios y adolescentes: hasta 645 U/L
Controlar la edad del paciente.
Confrontar con funcionalidad del hgado (transaminasa, TP, colinesterasa).
Confrontar con parmetros de estasis biliares (bilirrubina, GGT).
Confrontar con parmetros del metabolismo seo: (calcio, fsforo).
Confrontar el valor del magnesio.
Controlar eventual estado txico (alcoholismo).
Controlar los parmetros de hepatitis.
La fosfatasa alcalina se escribe sin cifra decimal.
63
6.16 GAMMA GLUTAMIL TRANSFERASA (gG-test cintica AA)
Generalidad
La gamma glutamil transferasa cataliza el transporte del grupo gamma-glutamnico. La
g-GT est presente en muchos tejidos (hgado, rin, pncreas, pulmn, bazo, intestino y
tiroides).
En el suero, est presente tres isoenzimas que migran de modo distinto
en la electroforesis.
La g-GT tambin se encuentra en la orina, donde su concentracin es ms elevada que en
el suero.
Un aumento de la g-GT se encuentra en todas las enfermedades del hgado y de las vas
biliares. El aumento ms alto se encuentra en la obstruccin de las vas biliares. La
determinacin es importante en el diagnstico de la metstasis heptica. Se usa tambin
en el diagnstico para identificar el alcoholismo, para el monitoreo de la abstencin del
alcohol en la terapia de desintoxicacin, en las enfermedades del hgado. Parece que el
aumento de la g-GT en las enfermedades hepticas est en relacin con una aumentada
sntesis de la enzima a nivel heptico.
Emergencia, rutina, hospitalizacin

Ayuno

Transporte
Transportar la muestra a temperatura ambiente
La g-glutamil transferasa es una carboxipeptidasa que cataliza la siguiente reaccin:
g-GT
L-gama-Glutamil-3carboxi-4-nitroanilida + glicilglicina-------------------L-gama-
glutamilglicilglicina + 5-amino-2-nitrobenzoato
64

semiautomatizado.
Seguir instrucciones de procedimiento general para modo automatizado. (CB400i)
Interferencias
Bilirrubina: hasta 280.0 mg/l.
Lipemia: triglicridos hasta 540 mg/dl.
Muchos antibiticos pueden dar valores elevados.
Valor de referencia
Hombres : 11 50 U/L
Mujeres: 7 32 U/L
Confrontar con analitos de funcionalidad heptica.
Confrontar con parmetros de estasis biliar (bilirrubina, fosfatasa alcalina).
Controlar eventual estado txico (alcoholismo).
Controlar eventual absorcin de terapia con antibiticos.
Controlar parmetros serolgicos para la mononucleosis infecciosa y el citomegalovirus
La g-GT se escribe sin cifra decimal.
65
6.17 GLUCOSA enzimtica AA
Generalidad
La glucosa es el carbohidrato ms importante presente en la sangre. La oxidacin de la
glucosa es la principal fuente de energa para las clulas del organismo. La contribucin
de la glucosa con la dieta se hace fundamentalmente bajo la forma de polisacrido y
almidn: dos enzimas la ptialina salival y la amilasa pancretica los dividen en
monosacridos: bajo esta forma, son absorbidos y entregados al hgado, el cual los
transforma en glucosa. La glucosa no utilizada inmediatamente es polimerizada a
glucgeno, se conserva en el hgado y en los tejidos musculares y/o se transforma en
cidos grasos que se acumulan como grasas.
Muchas hormonas intervienen en el metabolismo glucdico. La insulina promueve la
utilizacin de la glucosa, facilitando el pasaje entre las clulas, y tambin la fosforilacin
y la polimerizacin a glicgeno. El glucagn y la adrenalina promueven la glucogenlisis
heptica; los corticoides y ACTH favorecen la glicognesis; la somatropina inhibe la
fosforilacin de la glucosa. Todas estas hormonas mantienen la concentracin de glucosa
entre los lmites precisos.
Significacin Clnica-
La determinacin de glucosa se usa en el diagnstico y control de la enfermedad del
metabolismo de los carbohidratos, como diabetes mellitus en sus diferentes formas,
hipoglicemias neonatales, etc. La diabetes puede ser primaria o secundaria en relacin
con enfermedades del pncreas; endgenas, hormonales; puede ser insulino resistente por
reducida tolerancia a los carbohidratos. Modificaciones de la glucosa se pueden encontrar
en la pancreatitis, la disfuncin de la tiroides, en el traumatismo craneal, en accidente
cerebro vascular y en el infarto del miocardio. Puede existir exceso de consumo de
glucosas en el trabajo muscular, como en la hiperpirexia y en la tirotoxicosis.
El diagnostico precoz y el control de los pacientes diabticos, tienen por objeto evita la
cetoacidosis y las complicaciones resultantes de la hiperglicemia, mediante el tratamiento
adecuado
Emergencia, rutina y hospitalizacin
Ayuno desde 6-8 horas. Para particulares indicaciones, puede preverse una alimentacin
particular antes de la toma de muestra.
66
Evitar estrs, ya que puede comportase como una falsa hiperglicemia por una descarga
de adrenalina.
Transporte
La estabilidad de la glucosa en las muestras es influenciada por la temperatura de
conservacin, desde la contaminacin de bacterias y, en modo particular, por la gliclisis.
Centrifugar y separar lo ms pronto el suero de la parte celular. Se puede utilizar como
anticoagulante con fluoro o iodo. La toma de muestra se puede conservar por 4 horas a
temperatura ambiente de 20-25 C y por 24 horas a 2-4oC.
La glucosa oxidasa cataliza la oxidacin de glucosa a cido glunico y perxido de
hidrgeno, lo cual se valora mediante la reaccin de Trinder, dando lugar a una
quinonimina roja.
GOD
+ 2 + 2 2 2
POD
22 2 + 4 + 4
1. -Seguir instrucciones de protocolo Wiener Lab Glicemia enzimtica AA.
semiautomatizado.
Seguir instrucciones de procedimiento general para modo automatizado segn el
analizador en uso Keylab-Mini Qca .
Si el valor de la glucosa es < 50.0 mg/dl y > 350. mg/dl, repetir la medida.
67
Con valores de glucosa > de 450.0 mg/dl, repetir la medida, sea concentrada y diluida 1:2
con solucin fisiolgica y con un control patolgico.
Interferencias
Hemoglobina: hasta 350 mg/dl.
Bilirrubina: hasta 10 mg/dl.
Lipemia: con triglicridos hasta 500 mg/dl.
Algunas hormonas, el cido ascrbico, todas las sustancias reducientes pueden dar valor
bajo de glucosa. La hormona adrenalina, algunas drogas y los derivados de las
anfetaminas pueden dar valor alto de glucosa.
Valor de referencia
Adultos: 74 106 mg/dl
Nios: 60 100 mg/dl
Neonatos: 1 da: 40 60 mg/dl.
Mayor a1 da: 50 80 mg/dl
Orina aislada fresca: 1 15 mg/dl
Orina de 24 horas: < 50 mg/24 hrs
Lquido Cefalorraqudeo (LCR):
Nios: 60 80 mg/dl
Adultos: 40 70 mg/dl
- Controlar primeramente el examen de orina para eventual presencia de glucosa y/o
cuerpos cetnicos.
- Controlar parmetros del metabolismo glucsido (hemoglobina glicosilada,
insulinemia).
- Controlar eventual parmetros de funcionalidad tiroidea y suprarrenal. 0 Controlar
parmetros del metabolismo lipdico y el valor del cido rico.
- Controlar electrolitos (sodio, potasio, cloro, magnesio). 0 Confrontar con analitos de
funcionalidad heptica.
La glucosa se escribe sin cifra decimal.
Se tiene que comunicar inmediatamente con valores inferiores a 50.0 mg/dl y superiores
a 500.0 mg/dl.
68
6.18 PRUEBA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA
Presentacin
Esta prueba se solicita en pacientes cuyo nivel de glucemia es dudoso frente aun
diagnstico de diabetes mellitus, durante el embarazo o por razones epidemiolgicas para
detectar diabetes y disminucin de la tolerancia a la glucosa. Principio del
Procedimiento.
Se basa en proporcionar una sobrecarga de glucosa a un individuo, con la finalidad de
determinar laboratorialmente la calidad de su respuesta fisiolgica, la cual debera
consistir en un aumento de los niveles de insulina que permitan mantener la glicemia bajo
cifras aceptables.
Descripcin del mtodo
Luego de tomar una glucosa basal, el paciente ingiere una cierta cantidad de glucosa,
permitiendo luego de 30 min, 60 min, 90 min y 120 min la recoleccin de una nueva
muestra de sangre. Las muestras de sangre se colectan bajo normas convencionales y se
procesan segn el procedimiento explicado en el acpite 7.a, siguiendo la metodologa de
determinacin Glucosa enzimtica AA.
Tipo de Muestra Primaria

Se obtiene suero de la manera convencional, primero en una muestra basal y luego a los
30 min, 60 min, 90 min, 120 min de ingerida la solucin de glucosa. Se puede emplear
igualmente plasma, siguiendo las recomendaciones del acpite 7.a. Si las muestras no se
van a procesar en forma inmediata, se aconseja recolectar en tubos con fluoruro de sodio
como preservante.
Reactivos
Se requiere glucosa anhidra 75 gr
Agua mineral para la disolucin de la glucosa. Un vaso adecuado para contener al menos
600 mL de solucin. Opcionalmente, se puede requerir jugo de limn.
Procedimientos
Debe instruirse previamente al paciente con las siguientes medidas:
* Tres das antes de la prueba, debe alimentarse con no menos de 150 g. De carbohidratos
69
y llevar una actividad fsica normal.
* Llegar al laboratorio a la hora solicitada, en la maana.
* El da del anlisis concurrir en ayuna de 10 horas. Puede tomar agua durante ese
tiempo. Est prohibido fumar.
* Indicar al laboratorio si est tomando medicamentos o se encuentra con alguna
probable infeccin.
* Tomarle una muestra de sangre en ayunas.
Darle de beber 75 g. De glucosa disuelto en 600 mL de agua temperada.
Deber beberlo en un lapso de 5 minutos.
En el caso de nios proporcionar 1.75 g de glucosa por Kg. de peso. Y hasta un mximo
de 75 g de glucosa.
Se puede proporcionar la solucin con algunas gotas de limn para evitar las nuseas y el
sabor de la solucin.
Salvo indicaciones de su mdico para otra toma durante su espera, recolectar la segunda
muestra a los 30 min de haber iniciado la ingestin de la glucosa. Si ocurri alguna
eventualidad como nuseas y vmitos que impidan la realizacin de la prueba, citar al
paciente en una semana, salvo indicacin contraria.
Intervalos de referencia
Tolerancia normal a la glucosa: Cuando a las dos horas posteriores a la carga, presenta
glucemia menor de 140 mg/dl. Valores de Alerta /Crticos No aplica.
Interpretacin de Laboratorio
Tolerancia normal: Valores a las dos horas menores a 140 mg/dl. Intolerancia a la glucosa:
Valores a las 2 horas mayor o igual a 140 mg/dl y menor a 200 mg/dl.
Diagnstico de diabetes: Valores a las 2 horas mayores de 200 mg/dl.
Especificaciones de desempeo
Slo aplica la correspondiente al mtodo analtico.
Precauciones de Seguridad
Mantener informado al paciente sobre el procedimiento. Es aconsejable determinar la
glucosa basal en forma rpida, con el objeto de verificar posible hiperglicemia en rangos
de alerta Aplican las recomendaciones en la seccin de mtodo de glucosa.
Potenciales fuentes de variabilidad

Aplican las correspondientes a la mtodo utilizada en la determinacin de glucosa
70
6.19 DESHIDROGENASA LCTICA (LDH-P uvAA)
Generalidad
Las deshidrogenasas lcticas son enzimas catalticas del metabolismo intermedio de gran
importancia, las cuales catalizan la dehidrogenacin del cido lctico con formacin de
cido pirvico.
Las LDH son enzimas intracelulares citoplasmticas, que tienen difusin y estn
contenidas en concentraciones elevadas en el msculo esqueltico, en el hgado, en el
cerebro, en el corazn, en el rin, en el pncreas, en los pulmones y en los eritrocitos.
Se conocen cinco isoenzimas:
LDH-1 18 - 33 %: miocardio, eritrocitos, cerebro, msculos y rin.
LDH-2 24 - 40 %: miocardio, eritrocitos, cerebro, msculos y rin.
LDH-3 18 - 30 % : rin y cerebro.
LDH-4 6 - 16 %: hgado, msculos, rin y pulmn.
LDH-5 2 - 13 %: hgado, msculo, rin y pulmn
Por ser una enzima intracelular, su elevacin es ndice de dao tisular con la consecuente
liberacin de sta a la circulacin. El dao puede variar desde una simple anoxia con
ligero dao celular y prdida de citoplasma hasta necrosis celular severa generando
diversos grados de elevacin a la actividad enzimtica.
La determinacin del LDH en el suero est indicada en el monitoreo del infarto del
miocardio. Se encuentra presente en estos pacientes, en cantidad inclusive, 10 veces
superior a los valores normales; permanece elevado por un largo perodo, ofrecindole
as la posibilidad de hacer el diagnstico del infarto, tambin si es de pequea entidad. El
primer aumento de los valores se tiene despus de 12 - 24 horas. Los valores mximos se
aaden despus de 48 72 horas, y los valores regresan a la normalidad despus de 7-15
das. La LDH tambin se emplea en el diagnstico y monitoreo de enfermedades del
hgado (hepatitis viral, cirrosis, carcinoma metastsico).
Un aumento de la actividad de la LDH se encuentran en algunas hemopatas (anemia
perniciosa, crisis hemoltica, etc.), en las neoplasias malignas, en caso de enfermedad
reumtica, en las leucemias agudas y crnicas, en el infarto cerebral, en el linfoma
maligno y en la pericarditis tuberculosa. Es muy importante el diagnstico de la LDH en
71
el derrame seroso: si su nivel es bajo, el derrame es seguramente de origen inflamatorio;
si su nivel es elevado, es de naturaleza neoplsica.
En el lquido cefalorraqudeo (LCR) el valor normal es de aproximadamente el 10% de
su valor en suero, aumentando marcadamente su valor en meningitis bacterianas. En las
meningitis virales la LDH aumenta su valor solo en el 10% de los casos.
Emergencia, rutina y hospitalizacin

Ayuno en rutina.

Transporte
Conservacin y almacenamiento
Centrifugacin y separacin del suero.
La muestra de ser preferentemente fresca.
La LDH es estable hasta 24 horas en refrigeracin. No congelar.
La enzima deshidrogenasa lctica cataliza la reduccin de cido pirvico a cido lctico
en presencia de la coenzima niacn adenn dinucletido reducido (NADH).
LDH
Piruvato + NADH + H ----------- L-Lactato + NAD+
semiautomatizado.
Seguir instrucciones de procedimiento general para modo automatizado segn Analizador
en uso.
Valor de referencia
Adultos y Nios: 230 460 U/1
72
6.20 PROTEINAS TOTALES
Generalidad
Las protenas son sustancias orgnicas de elevado peso molecular, formadas de
numerosos aminocidos unidos con enlace peptdico. La secuencia de los aminocidos en
la cadena interna, y el nmero de las cadenas determinan la estructura primaria de las
protenas. La sntesis proteica se da en el citoplasma celular sobre la superficie de los
ribosomas. Los aminocidos estn activados enzimticamente en presencia de ATP. Las
protenas introducidas con los alimentos, despus de un proceso de hidrlisis gstrica e
intestinal, se dividen en aminocidos y son absorbidos como tales. Las funciones
principales de las protenas son:
Nutritiva (asimilable a la fraccin albumnica).
Funcin tapn (protenas/proteinatos).
Coagulacin y fibrinlisis.
Inmunitaria.
Transporte.
Mantenimiento de la presin osmtica.
Hormonales.
Enzimticas.
Inhibicin de las enzimas.
En relacin con las caractersticas generales de solubilidad, las protenas se fraccionan en
albmina (hidrosoluble) y globulinas (solubles en solucin salina).
Las protenas sricas constituyen una solucin coloidal estable: la disminucin de la
albmina por debajo del 50.0% del total y un aumento de las fracciones globulnicas
causan una progresiva disminucin de la estabilidad coloidal del suero.
Las protenas plasmticas son sintetizadas en el hgado, excepto las inmunoglobulinas de
origen plasma celular y algunos componentes del complemento de origen macrofgico y
de lipoprotenas de origen intestinal, endotelial.
El plasma tiene un significado completamente diferente del suero, por la presencia del
Fibringeno.
Con la electroforesis se pueden separar distintos componentes proteicos como: Albmina,
alfal, alfa2, beta y gamma globulina.
Significacin Clinica.
La determinacin de las protenas es til en el diagnstico y monitoreo de muchas
enfermedades del hgado, del rin, de la medula sea, de algunas enfermedades
metablicas, y de errores en la alimentacin.
Se puede verificar:
Una disminucin de la sntesis (hepatopatas graves, cirrosis con disminucin de las
albminas y aumento de las globulinas).
Disminucin del aporte diettico y mala absorcin.
Disminucin por prdidas de causas endgenas (hemorragias, diarrea masiva,
enfermedad nefrtica, etc.) y exgena (quemaduras, hemorragias traumticas). 0
73
Disminucin por hipercatabolismo (hipertiroidismo, neoplasia, sndrome de Cushing).
Las protenas se pueden encontrar aumentadas en: Deshidratacin grave, Mieloma
mltiple.
Displasia por hiperproduccin proteica.
Slo rutina.

Ayuno.

Evitar el xtasis venoso.
Las protenas y los pptidos, a diferencia de otros compuestos nitrogenados (urea,
creatinina, cido rico y aminocidos), reaccionan con iones de cobre en solucin
alcalina, formando un quelato de color violeta de configuracin desconocida. La
intensidad del color es directamente proporcional a la concentracin de protenas
presentes en la muestra. Este mtodo se caracteriza por ser simple, preciso y exacto.
1. -Seguir instrucciones de protocolo human.
semiautomatizado.
Interferencias
Ictericia: con bilirrubina > 21.0 mg/dl.
Lipemia: con trigliceridos > 2000.0 mg/dl.
Valor de referencia
Adultos: 6.6-8.7 g/dl
Prematuros: 3.6-6.0 g/dl
Neonatos: 4.6-7.0 g/dl
Nios: 6.0-8.0 g/dl
74
6.21 TRANSAMINASA TGO (AST) UV AA
Generalidad
La transaminasa glutmica oxalactica (TGO) o aspartato aminotransferasa (AST)
pertenece al grupo de las transaminasas, las cuales catalizan la transformacin de los
aminocidos a los respectivos alfaceto-cidos, a travs de la transferencia del grupo amino
y viceversa. La AST est presente en cantidad elevada en muchos tejidos con localizacin
celular en las mitocondrias y en el citoplasma. Los tejidos ms ricos de AST son: corazn,
hgado, msculo, rin, cerebro, pncreas, eritrocitos, leucocitos, pulmn y bazo.
Significacin Clinica.
La determinacin de la AST en el suero est indicada para seguir los fenmenos lesivos
de las clulas. Si la concentracin de la enzima en el suero es moderada, sta proviene del
citoplasma y, en menor medida, de las mitocondrias; si la concentracin de la enzima est
elevada en relacin con fenmenos lesivos y necrticos de la clula, proviene en mayor
medida de las mitocondrias.
Los valores ms elevados de la AST se relacionan con los procesos necrticos del rgano:
infarto del miocardio, hepatopata, distrofia muscular. La determinacin de la AST es til
en presencia de un informe dudoso de electrocardiograma. La AST puede aumentar
tambin en el infarto pulmonar, en la pancreatitis aguda, en las hepatitis, en el
envenenamiento por hongos (Amanita falloide), o por la absorcin de algunos frmacos
(isoniazide, rifampicina, algunos antibiticos).
En el infarto de miocardio se observa un aumento moderado de la enzima(TGO) que
comienza de 6 a 8 horas despus de producida la lesin, alcanza un nivel mximo a partir
de las 48 horas y retorna a su normalidad despus del 4to y 6to da.
En emergencia, hospitalizado y rutina.
Ayuno
Transporte
temperatura ambiente de 20-25 C, 3 das a temperatura de 2 10 C, no congelar.

La enzima aspartato aminotransferasa (AST) o glutmico-oxalactica (TGO) cataliza la
transferencia del grupo amino del aspartato al cetoglutarato, formando oxalacetato y
75
glutamato. La concentracin cataltica se determina empleando la reaccin acoplada de
la malato deshidrogenasa (MDH), a partir de la velocidad de desaparicin del NADH.
Esquema de reaccin:
TGO
L-aspartato + 2-oxaglutarato---------------------------oxalacetato + L-glutamato
MDH
Oxalacetato + NADH + H+-----------------------------L-malato + NAD
Interferencias
Bilirrubinas: hasta 30 mg/dl
Triglicridos: hasta 500 mg/dl
La hemolisis interfiere significativamente.
semiautomatizado.
Si el valor de la AST es > 300.0 U/L, repetir la medida.
Con valores de AST > de 800 U/L, repetir la medida, sea concentrada y diluida 1:2 con
solucin fisiolgica y con un control patolgico.
Valor de referencia
Hombres: hasta 38 U/L
Mujeres: hasta 32 U/L
Controlar el valor de otras enzimas de los parmetros cardacos (CPK, mioglobina, CK-
MB, CK-MB masa, troponina).
Confrontar con analitos de funcionalidad heptica (ALT, GGT, TP, colinesterasa,
electroforesis de protena, parmetros de hepatitis A, B, C).
Controlar eventual estado txico (alcoholemia, colinesterasa).
Confrontar con pruebas de funcionalidad musculares (CPK, aldolasa).
La AST se escribe sin cifra decimal.
Se tiene que comunicar inmediatamente con valores superior a 300.0 U/L.
76
6.22 TRANSAMINASA TGP (ALT) UV AA
Generalidad
La transaminasa glutmica pirvica(TGP) o alanina aminotransferasa (ALT) pertenece al
grupo de aquellas transaminasas que catalizan la transformacin de los aminocidos a los
respectivos alfacetocidos, a travs de la transferencia de un grupo amino y viceversa. La
ALT est presente en cantidad elevada en el hgado, y en pequea cantidad en el msculo,
en el corazn y en el rin. La localizacin es en el citoplasma (unilocular). En el dao
celular leve, los valores de la ALT son ms elevados que la AST y viceversa. La ALT
permanece mayor tiempo aumentada con respecto a la AST.
La determinacin de la ALT est relacionada con las enfermedades del hgado. La ALT
se encuentra muy elevada en las diferentes hepatitis virales (A, B, C, delta, E) con valores
20-50 veces ms elevados con respecto a los valores de referencia. La ALT aumenta
tambin en la mononucleosis infecciosa y citomegalovirus. Se puede verificar leve
aumento de ALT en las miopatas, colagenopata, hemopata y pancreopata. Es til el
reporte de AST/ALT:
En la obstruccin extraheptica, el aumento principal es el de la ALT,
En la cirrosis, neoplasia del hgado, ictero hemoltico; en la hepatitis alcohlica aumento
de la ALT es inferior a la AST.
En emergencia, hospitalizacin y rutina.

Ayuno en rutina.

Transporte
temperatura ambiente de 20-25 C, 3 das en refrigeracin (2 10 C) no congelar.
77
1.-Seguir instrucciones de protocolo Wiener Lab.
2.-Para la lectura seguir instrucciones de procedimiento general para modo
semiautomatizado.
Interferencias
Las muestras provenientes de pacientes hemodializados o con hipovitaminosis o

patologas asociadas con deficiencia de piridoxal fosfato producen valores falsamente
disminuidos.
Lipemia: con triglicrido hasta1000 mg/dl.
Muchos frmacos (cefalosporina, cloranfenicol, rifampicina, isoniazide, alfametildopa)
pueden dar valor elevado.
Valor de referencia
Hombres: hasta 41.0 U/L
Mujeres: hasta 31.0 U/L
Confrontar con analitos de funcionalidad heptica (AST, GGT, TP, colinesterasa,
electroforesis de protena, parmetros de hepatitis A, B, C).
Controlar eventual estado txico (alcoholemia, colinesterasa).
Confrontar con pruebas de funcionalidad musculares (CPK, aldolasa)
Controlar parmetros serolgicos para la mononucleosis infecciosa y para
citomegalovirus.
Controlar parmetros de las enzimas cardacas (CPK, mioglobina, CK-MB, CK-MB
masa, troponina).

La ALT se escribe sin cifra decimal.
Se tiene que comunicar inmediatamente con valores superiores a 300.0 U/L.
78
6.23 TRIGLICERIDOS TG COLOR (GPO/PAP AA)
Generalidad
Los trigliceridos estn compuestos de un alcohol trivalente (glicerol) y de tres cadenas
largas de cidos grasos. Son absorbidos, una parte, con la alimentacin y, la otra parte, es
sintetizada desde el hgado. Los trigliceridos alimenticios son transportados por los
quilomicrones, mientras el transporte de la cantidad endgena a los tejidos se hace con
las VLDL. Los trigliceridos son utilizados en los tejidos con la intervencin de la lipasa
lipoprotena. El 95.0% del tejido adiposo est constituido por trigliceridos.
Significacin Clnica:
La determinacin de los trigliceridos se emplea en los distintos dismetabolismos: alterado
metabolismo lipdico, diabetes mellitus, sndrome nefrtico y muchas enfermedades
endgenas.
Se puede encontrar hipertrigliceridemia por:
Falta de lipasa proteica.
Exgena (introduccin excesiva de alcohol, glcidos y lpidos).
Endgena (congnita).
En rutina.

Es necesario el ayuno, al menos de 6-8 horas. No consumir alcohol, al menos 72 horas
antes de la toma de muestra.

Transporte
Transportar a t ambiente

Los trigliceridos son hidrolizados a glicerol y cidos grasos por medio de una esterasa. El
glicerol es fosforilado por medio de la glicerol quinasa (GK) y, posteriormente, oxidado
79
por la glicerol fosfato oxidasa (GPO), produciendo perxido de hidrgeno. El perxido
reacciona con un compuesto fenolado y la 4-aminofenazona, en presencia de peroxidasa
(POD), para producir un complejo coloreado cuya intensidad de color es proporcional a
la concentracin de trigliceridos en la muestra.
1. -Seguir instrucciones de protocolo Wiener Lab
semiautomatizado.
Seguir instrucciones de procedimiento general para modo automatizado Segn el
Analizador en uso.
Interferencias
Ictericia: con bilirrubina > 15.0 mg/dl.
El cido ascrbico puede interferir con valores falsamente bajos.
Valor de referencia
Hasta 150.0 mg/dl.
Observar el aspecto del suero (aspecto lipmico, cuando los trigliceridos estn mayor de
400.0 mg/dl).
Controlar los parmetros del metabolismo lipdico (colesterol, HDL, LDL,
apolipoprotena).
Controlar los parmetros del metabolismo glucdico.
Controlar los parmetros de la funcionalidad del rin (urea, potasio, protenas, densidad
urinaria).
Controlar la funcionalidad heptica (particularmente la GGT, por toxicidad alcohlica).
B Controlar la funcionalidad tiroidea (en el hipotiroidismo > trigliceridos y colesterol).

Los trigliceridos se escriben sin cifra decimal.
80
6.24 UREA cintica AA (UV)
Generalidad
Las sustancias nitrogenadas de la sangre se dividen en dos fracciones: nitrgeno proteico
y nitrgeno no proteico. El nitrgeno no proteico comprende diferentes sustancias: urea,
aminocidos, cido rico, creatinina, amonio, polipptidos, purinas, nucletidos, fenol e
indol.
La urea representa la fraccin principal, y sus valores se identifican con los del nitrgeno
no proteico. La urea es producida desde el hgado, despus de la desaminacin oxidativa
de los aminocidos. En condiciones normales, la intensidad del catabolismo se adapta a
la contribucin exgena y, por tanto, la cantidad de nitrgeno excretada es la misma a la
de origen catablico, la cual corresponde a la cantidad exgena. La urea contenida en el
plasma es filtrada desde los glomrulos del rin, y es reabsorbida por los tbulos en el
40.0%. El grado de absorcin vara con la cantidad de agua reabsorbida.
La urea es muy soluble, el 90.0% se excreta a travs de la va urinaria y el restante 10%
por va extrarenal (sudor, heces).
Significacin Clnica
La determinacin de la urea representa el diagnstico ms comn para la valoracin de la
funcionalidad renal.
En el diagnstico diferencial se emplea (con la determinacin de la creatinina) en:
Hiperuremia prerenal: deshidratacin (disminuida absorcin o excesiva prdida de
agua),insuficiencia cardaca, excesivo catabolismo proteico.
Hiperuremia renal: alteraciones de la filtracin glomerular y/o de la absorcin
tubular glomrulo nefritis, rin policstico, necrosis tubular, nefrosclerosis), alteracin
del flujo sanguneo renal por enfermedad intrnseca del rin.
Hiperuremia post-renal: obstruccin de las vas urinarias (clculos, hipertrofia Prosttica,
neoplasia).
Una elevacin de la concentracin srica de urea, se interpreta generalmente como una
posible disfuncin renal. Sin embargo, no debe dejarse de lado el hecho de que los valores
sricos de urea se encuentran ntimamente relacionados con la dieta y el metabolismo
proteico.
81

Ninguna.

Ninguna particularidad de la manera usual
Transporte
Transportar temperatura ambiente.
Centrifugar y separar el suero; la toma de muestra se puede conservar por 1 da a
temperatura ambiente, de 20-25 C, 7 das a 2 10 C y 1 ao congelada -20 C
Orina es estable 2 das a 20 25 C, 7 das a 2 10 C o 4 semanas a -20 C

La enzima ureasa reacciona sobre la urea, transformndola en iones de amonio. Despus,
el amonio se hace reaccionar en medio alcalino con fenol e hipoclorito, formndose azul
de indofenol, cuya intensidad de color es proporcional a la concentracin de urea
semiautomatizado.
Si el valor de la urea > 150.0 mg/dl, repetir la medida.
82
Con valores de urea > de 400 mg/dl, repetir la medida, sea concentrada y diluida 1:2 con
solucin fisiolgica y con un control patolgico.
Interferencias
Hemolisis: con Hb mayor o igual a 350 mg/dl
Ictericia: con bilirrubina hasta 150 mg/l
Lipemia: con trigliceridos mayor o igual 700 mg/dl
Valor de referencia
Adultos y Nios: 10 50 mg/dl
Orina: 260 430 mg/24 hs
Confrontar los parmetros de la funcionalidad del rin (creatinina, aclaramiento de la
creatinina, protenas urinarias, densidad urinaria).
Confrontar parmetros del equilibrio electroltico (sodio, potasio, cloro).
Confrontar parmetros de funcionalidad heptica (AST, ALT, GGT).
Controlar parmetros metablicos (glucosa, cido rico).
Controlar los parmetros del metabolismo lipdico (colesterol, HDL, LDL,
Apolipoprotena).
Controlar eventual estado de embarazo. Confrontar con funcionalidad sobrerenal.

La urea se escribe sin cifra decimal.
Se tiene que comunicar inmediatamente con valores superiores a 100.0 mg/dl.
83
6.25 HIERRO (Fer-color AA)
Generalidad.
El hierro se distribuye en el organismo de diferentes maneras, incluyendo hemoglobina,
hierro tisular y mioglobina. El transporte de hierro de un rgano a otro se realiza mediante
una protena y transportadora llamada apotransferrina. El complejo que forma con el
hierro se conoce como transferrina-
La ferritina, localizada en casi todas las clulas del cuerpo, constituye una reserva de
hierro disponible para la formacin de la hemoglobina y otras protenas que contienen el
grupo hierro. La absorcin ocurre principalmente en el duodeno. Tanto la ferritina como
la transferrina estn presentes en las clulas de la mucosa intestinal y juntas regulan la
absorcin del hierro.
Significacin Clnica
Los mayores desrdenes del metabolismo del hierro se relaciona con su deficiencia o
exceso, sin embargo, se han observado alteraciones en muchas otras enfermedades,
incluyendo anemia, enfermedades cardiovasculares, hepatitis crnica, enfermedades
renales e infecciones.
La anemia por prdida de hierro representa uno de los trastornos orgnicos ms
frecuentes, especialmente en nios, mujeres jvenes, embarazadas y ancianos. Tambin
las lceras gstricas o duodenales y carcinomas de estmago, constituyen causas de
anemia ferropnicas.
Por el contrario, el exceso de hierro se asocia con otros desrdenes, como hemosiderosis,
hemocromatosis, y anemia sideroblstica.
La tcnica fotomtrica para la determinacin de hierro en suero se basa en la formacin
de un complejo con un cromgeno, entre los cuales ferrozina y batofenantrolina han sido
ampliamente usados.

El hierro se libera del complejo de transferrina en medio cido y se reduce a Fe(II) con
cido ascrbico. Seguidamente reacciona con el reactivo de color, ferene, dando un
complejo color azul que se mide a 600 nm. La absorbancia obtenida es directamente
proporcional a la concentracin de hierro
84
1-Seguir instrucciones de protocolo Wiener Lab.
2-Para la lectura seguir instrucciones de procedimiento general para modo
semiautomatizado.
En rutina, hospitalizacin

El paciente debe estar en ayunas

Ninguna particularidad de la manera usual
Transporte
Transportar temperatura ambiente.
Centrifugar y separar el suero o plasma.
El suero o plasma heparinizado puede conservarse una semana en refrigeracin de 2 10
C o hasta un ao a -20 C
Interferencias.
Bilirrubina conjugada: hasta 12 mg/dl
Bilirrubina no conjugada: hasta 35 mg/dl
Heparina: hasta 50 UI/ml
Triglicridos: hasta 1000 mg/dl utilizando tcnica automtica y 250 mg/dl con tcnica
manual.
Valores de Referencia.
Hombres: 65 175 ug/dl
Mujeres: 50 170 ug/dl
85
6.26 PROTI U/LCR (Protenas en orina y lquido cefalorraqudeo)
Generalidad
La cantidad de protenas plasmticas de pequeo peso peso molecular son filtradas
normalmente en forma libre a travs del glomrulo renal y luego son, en parte,
reabsorbidas por los tbulos renales.
Hay condiciones fisiolgicas o benignas donde se puede observar un aumento en la
excrecin urinaria de protenas como en el ejercicio violento, fiebre hipotermia,
embarazo.
Significacin Clnica
La medicin de las protenas urinarias es importante en la deteccin de patologa renal .
La proteinuria en la enfermedad renal puede resultar de una disfuncin glomerular o
tubular.
En el primer caso se da por un aumento en el pasaje a travs de los capilares del glomrulo
y caracterizada por la prdida de protenas plasmticas de igual o mayor tamao. En el
segundo caso se da por una disminucin en la capacidad de reabsorcin de protenas por
los tbulos.
Entre las patologas en las que se producen un aumento en la excrecin de protenas
urinarias se encuentran: sndrome nefrtico, hipergammaglobulinemia monoclonal,
nefropata diabtica, infecciones del tracto urinario.
La determinacin de protenas en LCR es til para evaluar la permeabilidad de la barrera
hematoenceflica en muchas enfermedades inflamatorias o infecciosas del SNC, como
ocurre en la meningitis bacterianas, virales o de otros orgenes, encefalitis, poliomielitis,
neurosifilis, esclerosis mltiple, hemorragia cerebral, tumores cerebrales o espinales.
Otros desrdenes ocasionan una produccin anormal de protenas dentro del SNC como
las enfermedades desmielizantes.

Las protenas presentes en la muestra reaccionan en medio cido con el complejo Rojo
de Pirogalol-Molibdato originando un nuevo complejo coloreado que se cuantifica
espectrofotomtricamente a 600 nm.
1-Seguir instrucciones de protocolo Wiener Lab Proti U/LCR
semiautomatizado.
Seguir instrucciones de procedimiento general para modo automatizado CB400i.
86
En rutina, hospitalizacin y emergencia.

Ayuno

c) Al cumplir las 24 horas, vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda la orina en el frasco.
d) Al finalizar la recoleccin de orina, sta debe ser enviada inmediatamente al
laboratorio.
En caso de que las muestras sean turbias, es conveniente centrifugarlas.
La orina puede conservarse en refrigeracin de 2 10 C hasta 8 das o congelada
hasta 3 meses a -20 C.
El LCR puede conservarse 3 das en refrigeracin (2 10 C) o 3 meses congelados a -
20 C.
Interferencias.
La hemlisis puede ser causa de resultados falsamente aumentados tanto en orina como
en LCR
Los conservantes para orina tales como cido clorhdrico, cido benzoico timol pueden
ser causa de resultados falsamente disminuidos.
Valores de Referencia.
Orina de 24 horas: 30 140 mg/dl hasta (hasta 160 mg/24 horas en embarazadas)
Orina ocasional: 25 mg/dl
LCR: 15 45 mg/dl en personas sanas. En personas de ms de 60 aos, este rango se
extiende hasta 60 mg/dl.
87
6.27 Adenosina Deaminasa (suero y lquidos biolgicos)

La adenosina Deaminasa, ADA, reaccin con adenosina para producir inosina + aminaco
ADA
Adenosina + H2O------------------------Inosina + NH3
Los iones amonio que se forman se valoran por el mtodo de Berthelot, donde el
amonaco en presencia de una base reacciona con fenol e hipoclorito de sodio formando
azul de indofenol.
Calculos.
A muestra A blanco muestra
Actividad (U/L) = -------------------------------------------- x 50
A estndar A blanco reactivo
A = Valor de la absorbancia
1-Seguir instrucciones de protocolo diagno TEST
semiautomatizado.
Valores de Referencia
ADA: Suero : 13 21 U/L

Lquido Pleural: 0 45 U/L
Lquido Cefalorraqudeo: 0 6 U/L
Lquido Asctico: 0 40 U/L
Lquido Pericardio: 0 20 U/L
88
SECCION 7
TURBIDIMETRIA
7.1 Protena C Reactiva (PCR) ultrasensible
Generalidades
La Protena C Reactiva (PCR) es una protena inespecfica relacionadas a procesos
inflamatorios y/o infecciosos. Debido a la velocidad y a la magnitud de su respuesta, la
PCR es reconocida como uno de los marcadores ms sensibles de la fase aguda. Despus
de infarto de miocardio, stress, trauma, infeccin, inflamacin, cirugas o proliferacin
neoplsica, el nivel de PCR puede aumentar dentro de las 24 a 48 horas de referencia. Sin
embargo, el incremento de PCR es inespecfico y no puede ser interpretado sin
conocimiento de la historia clnica completa y de los valores previos del paciente.
Significacin Clnica
La determinacin de PCR es clnicamente til en el screening de enfermedades
infecciosas e inflamatorias; para monitorear la actividad inflamatoria de enfermedades
como la artritis reumatoide; para la deteccin de infecciones intercurrentes en lupus
eritematoso sistmico, leucemia o despus de ciruga; para la deteccin de rechazo de
trasplantes y para el manejo de septicemia y meningitis neonatal.
Evidencia reciente ha demostrado claramente que incrementos en la PCR dentro del
intervalo de referencia est asociado con eventos cardiovasculares futuros en sujetos con
y sin enfermedad cardiovascular establecida. Individuos con un nivel de PCR basal en el
cuartil ms alto tienen 2 a 4 veces ms riesgo de presentar en el futuro infartos de
miocardio, stroke isqumico, enfermedad vascular perifrica o muerte cardiaca sbita,
que aquellos individuos con un nivel de PCR en el cuartil ms bajo.
Comparando con marcadores nuevos y tradicionales de enfermedad coronaria, la PCR
mostr ser el predictor ms fuerte de eventos coronarios futuros y cuando se combina con
colesterol total, HDL-colesterol, LDL-colesterol mejora notablemente su valor
predictivo.
Con el fin de evaluar el riesgo de enfermedades cardiovasculares en individuos
aparentemente sanos se requieren mtodos de mayor sensibilidad que los mtodos
tradicionales para la determinacin de PCR.
La PCR presente en la muestra, es capaz de aglutinar las partculas de ltex recubiertas
con anticuerpos anti-PCR. La turbidez causada por la aglutinacin de las partculas de
ltex es proporcional a la concentracin de PCR en la muestra y puede ser medida
espectrofotomtricamente.
Seguir instrucciones de procedimiento general para modo automatizado CB400i,
protocolo PCR ultrasensible
Recoleccin de la muestra
Obtener la muestra de la manera usual
89
Conservacin y Estabilidad
La muestra puede conservarse durante 2 meses en refrigeracin (2 10 C) o 3 aos
congelada a -20 C.
Interferencias
Factor Reumatoide: hasta 500 UI/ml
0 5 mg/l
90
7.2 Microalbmina (determinacin cuantitativa de Microalbuminuria)
Generalidad
Se denomina Microalbuminuria al aumento de excrecin urinaria de albmina por encima
de niveles normales pero en ausencia de nefropata clnica manifiesta. Se define como la
excrecin de 30 a 300 mg de albumina en 24 horas (20 200 ug/min) en 2 de 3
recolecciones urinarias realizadas en un periodo de pocas semanas.
Significacin Clnica
La determinacin de Microalbmina (MAlb) es importante en el seguimiento de pacientes
diabticos, ya que permite detectar precozmente a aquellos individuos en riesgo de
desarrollar enfermedad renal progresiva permitiendo la aplicacin de medidas
teraputicas adecuadas.
Actualmente, se ha reconocido a la Microalbuminuria como un factor de riesgo
independiente de enfermedad cardiovascular en pacientes con y sin diabetes.
Seguir instrucciones de procedimiento general para modo automatizado, segn el
analizador en uso CB400i, protocolo Microalbmina turbitest AA
Recoleccin de la muestra
Obtener la muestra de la manera usual. Puede utilizarse tanto la primera orina de la
maana como orinas de 3,8,12 o 24 horas de recoleccin.
c) Al cumplir las 24 horas, vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda la orina en el frasco.
d) Al finalizar la recoleccin de orina, sta debe ser enviada inmediatamente al laboratorio
La muestra puede conservarse durante 7das en refrigeracin (2 10 C) o 2 meses
congelada a -20 C.
Interferencias
Creatinina: hasta 440 mg/dl
Urea: hasta 4500 mg/dl
cido ascrbico: hasta 500 mg/ml
IgG hasta 2300 mg/dl
Las muestras de orina turbias debern ser Centrifugadas.
Normal: < 30 mg/24 hs
Microalbuminuria: 30 300 mg/24 hs
91
Albuminuria clnica: > 300 mg/24 hs
7.3 Hemoglobina Glicosilada (HbA1c) Turbitest AA
Generalidad
La diabetes mellitus es una enfermedad crnica, que comprende un conjunto de
desrdenes del metabolismo de los hidratos de carbono que cursan con una manifestacin
comn; la hiperglicemia.
El control glicmico peridico permite prevenir los trastornos agudos y reducir el riesgo
de las complicaciones tardas de la enfermedad (retinopata, nefropata, neuropata, y
enfermedades cardiovasculares).
La relacin entre el desarrollo y progresin de las complicaciones microvasculares y el
control glicmico ha sido debatida por muchos aos, en parte debido a los mtodos
inadecuados para realizar un control glicmico retrospectivo. Los mtodos tradicionales
de medicin de glucosa en sangre y orina tiene un valor limitado para este propsito, y
slo fue con el desarrollo de determinaciones para protenas glicosiladas o glicadas, que
se ha logrado un conocimiento exacto y objetivo del estado glicmico a largo plazo
Significacin Clnica
Las glicohemoglobinas, tambin llamadas hemoglobinas glicosiladas o glicada, fueron
descritas por primera vez en 1968 por Rahbar como hemoglobinas diabticas. Su
produccin depende de la concentracin de glucosa y ocurre a travs de un proceso no
enzimtico post-traduccional llamado glicacin, donde el azcar es unido a los grupos
amino de las molculas de la hemoglobina (Hb). La glicacin de los aminocidos N-
terminales de las cadenas alfa y beta como as tambin los grupos e-amino de los residuos
de lisina en la molcula de hemoglobina, resultan en una variedad de hemoglobinas
glicadas, incluyendo HbA1c, que es la especie Glicosilada en la valina N-terminal de la
cadena beta.
Los niveles de %Hb1c son proporcionales a la concentracin de glucosa en sangre durante

las ltimas 6-8 semanas.
As la determinacin de % Hb1c provee un parmetro integral para monitorear el curso
del control de glucosa a largo plazo.
Es un mtodo de inhibicin inmunoturbidimtria para determinar la concentracin de
hemoglobina A1c (HbA1c) como un porcentaje de la hemoglobina total en sangre entera
humana (%HbA1c). Para ello, es necesario liberar la hemoglobina contenida en los
92
glbulos rojos, mediante la hemlisis de la muestra. La sangre del paciente se pone en
contacto con el Reactivo Hemolizante que contiene un detergente (bromuro de
tetradeciltrimetilamonio TTAB) que lisa los glbulos rojos especficamente. A partir
del hemolizante obtenido, se determina mediante dos reacciones independientes, el nivel
de HbA1c y Hb de la muestra
Seguir instrucciones de procedimiento general para modo automatizado, segn el
analizador en uso CB400i, protocolo HbA1c turbitest AA
En rutina, hospitalizacin.
La muestra puede conservarse durante 3das a temperatura ambiente (15 25 C), 7 das
en refrigeracin (2 10 C) o 6 meses congelada a -20 C.
Interferencias
cido ascrbico: hasta 50 mg/dl
Factor Reumatoideo: hasta 500 U/ml
Valores Referenciales
Segn IFCC: 2.9 4.2 % de HbA1c
Segn DCCT/NGSP: 4.8 5.9 % de HbA1c..
93
BIBLIOGRAFA
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94

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HOSPITAL GENERAL DE

Acondicionamiento, Preservacin y Transporte de Muestras...........18

El Manual de Procedimientos de Laboratorio en Bioqumica, tiene por finalidad

1.3 DOCUMENTOS DE REFERENCIA

1.4 TERMINOS Y ABREVIATURAS

2.1 INFORMACION GENERAL

2.3 PRINCIPALES MEDIDAS EN EL LABORATORIO DE BIOQUIMICA

2.3.1 Proteccin Individual

2.3.2 Almacenamiento de Lquidos Inflamables

2.3.3 Saneamiento del medio

2.3.4 Prevencin de Incendios y Riesgos Elctricos

2.4 LAS REGLAS DE BIOSEGURIDAD INVIOLABLES

2.5.2 Compuestos fenlicos. Muchos compuestos fenlicos que constituyen la base

2.5.3 Yodo y yodoformos. La accin de estos desinfectantes es parecida a las de los

2.6 ELIMINACION DE DESECHOS

La sangre debe recolectarse en tubos de vidrio o plstico limpios. La esterilidad es

Luego de la recoleccin de la sangre, debe permitirse que se coagule antes de la

3.2 GUIAS BASICAS DE ASEPSIA

3.3.2 Si la orden le induce a pensar en incongruencias, incompatibilidades o amerita a su

3.4 RECONOCIMIENTO DEL PACIENTE

3.4.2 Asegrese que el procedimiento que va a efectuar lo har en el paciente indicado.

3.4.3Transmita confianza y seguridad explicando calmadamente el procedimiento que

3.4.5No extienda la conversacin ms all de lo pertinente. Dilogos sobre temas ajenos

3.4.6Termine su procedimiento, indicando lo necesario frente a segundos muestreos,

3.5 PUNCIN VENOSA

El orden recomendado de la toma, cuando se efecta una recoleccin mltiple de

3.6.1 Acomode al paciente de forma segura y confortable.

3.6.2 No practique ninguna puncin con el paciente en posicin de pie.

3.6.9 Acabado el procedimiento, indquele al paciente que debe conservar la presin,

3.6.10 Si el sangrado no se detiene, aplique presin sobre la zona durante 10

3.6.11 Deposite y destruya todo el material desechable en los recipientes

3.6.12 Finalmente, y muy importante, termine su trabajo etiquetando e

3.7 CONSIDERACIONES FINALES

3.7.3 Evite la Hemoconcentracin:

3.7.4 Efectos de la aplicacin prolongada del torniquete o ligadura:

3.7.5 Factores del paciente que afectan la calidad de la muestra recolectada.

Ejercicio: La actividad muscular tiene efectos directos sobre la elevacin de

Otros factores : Edad, sexo, gestacin

Son los procedimientos que aseguran la calidad de la muestra desde su recoleccin

4.1.2 Identificacin de las muestras y Centrifugacin

Las muestras no podrn salir de la zona de toma de muestra sin la

Componentes biolgicos y moleculares de una muestra recolectada y separada

4.2.2 Procedimientos esenciales

4.2.5 Si se requiriera una conservacin superior a 1 hora, se recomienda almacenar la

4.3 TRANSPORTE DE MUESTRAS

Procedimientos de preservacin de muestras durante traslados desde el laboratorio

4.3.2 Procedimientos esenciales

4.3.2.2 Utilizar recipientes de material plstico (polietileno o polipropileno) como

4.3.2.3 Identificar correctamente las muestras trasladadas, enviando en formato

4.3.2.5 Asegurarse que los tubos se encuentren perfectamente sellados , evitando

4.3.2.6 En caso de recurrir a envos por correo o Courier, asegurarse de las

5.1. Fotmetros y Espectrofotmetros.

5.1.1Componentes de un Fotmetro o Espectrofotmetro

5.1.2 Operacin y Control de Instrumentos

5.1.2.1 Los siguientes pasos son instrucciones generales. Cada instrumento

5.2 Mtodos de Anlisis

El Factor es obtenido de la siguiente manera:

Concentracin del patrn o Standard

5.2.2 Mtodos Cinticos

5.2.3 Medicin de Concentracin de Enzimas

Como se observa, en la reaccin existen dos coenzimas : el NAD (compuesto en

5.3 Mantenimiento de Analizadores automatizados:

5.3.1 Planifique anualmente el mantenimiento que le dar a fotmetros, centrfugas,