UNIVERSIDAD

CIENTFICA DEL SUR

FACULTAD DE NUTRICIN Y DIETTICA

PRACTICA N14

Recuento de Staphylococcus aureus Coagulasa

positivo

Curso: MICROBIOLOGA LABORATORIO

Docente: CARMEN ESCUDERO MEDINA

Integrantes: Len Cardenas, Eliseo

Pozo candia, Jassmany
Lujan Cardenas Kayla
Maravi Angulo Sebastin

Fecha y hora: lunes y martes de 9:00 a 11:00 am

PER- 2017
 I. INTRODUCCION

La vigilancia epidemiolgica rutinaria de las Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETA), ha

permitido evidenciar que prcticas inadecuadas durante los procesos de manipulacin y
preparacin de estos alimentos comunes en la dieta comn (arroz y carne), son un factor
determinante para la contaminacin de los mismos. Los alimentos preparados de tipo no
industrial son aquellos alimentos mixtos, elaborados, manipulados, mezclados, cocidos o
transformados en restaurantes, colegios, establecimientos penitenciarios, casinos, hogares,
clubes sociales, entre otros. Las prcticas inadecuadas de manipulacin y preparacin de estos
alimentos hacen que sean susceptibles a la contaminacin cruzada por Staphylococcus Aureus
enterotoxignico y facilitan su multiplicacin y la produccin de toxinas. Frecuentemente la
preparacin de estos se realiza con anticipacin, exponindolos a tiempos prolongados y a
temperaturas que favorecen el crecimiento del microorganismo. En el presente documento se
identifican y categorizan los alimentos preparados no industriales con presencia de
Staphylococcus coagulasa positiva implicados en brotes de enfermedades transmitidas por
alimentos (ETA) y se determinan las condiciones para que S. aureus produzca toxina
estafiloccica en el alimento preparado. Normalmente las autoridades competentes de realizar
acciones de inspeccin, vigilancia y control, as como del seguimiento epidemiolgico a las ETA
detectan, notifican y reportan Staphylococcus coagulasa positiva, mientras que en el contexto
internacional, la literatura cientfica se enfoca en S. Aureus enterotoxignico.

II. OBJETIVO
Determinar la cantidad de S. aureus presente en una muestra de alimento
III. MATERIALES Y METODOS
Materiales

- Muestra de Alimento.
- Homogenizador de una o dos velocidades, con control por restato, podra utilizarse
tambin una licuadora.
- Vasos o recipientes de vidrio o de metal, adecuados para el homogenizador, de 1 litro
de capacidad, resistentes a las temperaturas de esterilizacin en autoclave.
- Balanza de una capacidad no inferior a 2 500 g y de una sensibilidad de 0,1 g.
- Instrumentos para preparar las muestras: pinzas, tijeras, mangos de bistur, esptulas;
todo ello previamente esterilizado en autoclave o por aire caliente.
- Incubadora a 35-37 C
Mtodo: Siembra Directa en Placa
- Pipetas estriles de 5 y 1 mL.
- Placas petri estriles con Agar Baird-Parker
- Asa de Drigalsky estriles

Procedimiento

1. Transferir 0.1 mL de cada dilucin del homogenizado por duplicado a placas petri con
AgarBaird-parker y diseminar con el asa Drigalsky hasta que el inculo sea absorbido por el
medio y la superficie aparezca seca.
2. Incubar las placas a 35-37 C durante 48 horas.
3. Seleccionar las placas que presenten entre 20 y 200 colonias aisladas. Contar las colonias
negras y brillantes con halo opaco blanco de margen estrecho y rodeado de reas claras.
4. Someter a las colonias sospechosas a la prueba de la coagulasa.
5. Calcular el nmero total de S.aureus por gramo considerando la proporcin de las que
producen coagulasa y la dilucin en que se efectua la lectura.
a) Prueba de la Coagulasa.
Materiales

- Pipetas estriles de 1 mL
- Asa de siembra de nicrom
- Caldo BHI (Infusin cerebro corazn)
- Plasma de conejo con EDTA o heparina en tubos de 10 x 75 mm; 0.3 mL por tubo.

Procedimiento

1. Inocular las colonias sospechosas en tubos con caldo infusin cerebro corazn e incubar a
35-37 C durante 24 horas.
2. Transferir 0.1 mL de los cultivos a los tubos que contienen 0.3 mL de plasma de conejo e
incubar a 35-37 C
3. Examinar los tubos a las 4 horas para detectar formacin de coagulo, si no se observa
incubar y leer a las 24 horas.
La formacin de coagulo bien diferenciado indica coagulasa positiva (3+ a 4+). Si el coagulo fuera
de 2+ generalmente se trata de cepas que carecen de la capacidad de formar endonucleasa
termoestable, por consiguiente, no corresponden a St. aureus coagulasa positiva; porque todas
ellas producen endonucleasa termoestable.
IV. FUNDAMENTO TEORICO
Staphylococcus es un gnero de bacterias anaerobias Gram-positivas productoras de
enterotoxinas termoestables ampliamente distribuida en el medio ambiente y presente en las
mucosas de los animales y personas, transmitindose al ser humano a travs de alimentos
contaminados, generndole una toxiinfeccin alimentaria.

Staphylococcus aureus es una bacteria muy resistente en el medio ambiente y ampliamente

distribuida en la naturaleza que puede encontrarse en el aire, agua, residuos, maquinaria y
superficies de la industria alimentaria, pero su principal reservorio son los animales y humanos,
encontrndose en la piel, cabello, fosas nasales y garganta. En consecuencia, pueden
transmitirse a una amplia gama de alimentos, principalmente alimentos derivados de animales
(leche, carne y huevos y los productos derivados) y alimentos consumidos en crudo (frutas,
verduras, etc).

Condiciones de supervivencia
Staphylococcus aureus es una de las bacterias patgenas humanas formadoras de toxinas ms
resistente y puede sobrevivir durante largos periodos de tiempo en un ambiente seco, y son
muy persistentes en alimentos con contenido alto en sales y azcares. Asimismo, sus toxinas son
altamente estables, y resistentes al calor, congelacin e irradiacin, por lo que una vez formadas
en el alimento, es extremadamente difcil eliminarlas.

Tabla: Condiciones de crecimiento de las toxinas producidas por Staphylococcusaureus

PRUEBA DE COAGULASA
Staphylococcus aureus se diferencia de otras especies de estafilococos por la presencia de la
enzima coagulasa. La coagulasa es una protena termoestable similar a la trombina, que activa
el fibringeno para formar fibrina. La presencia de la enzima se evidencia en el tubo de ensayo
por la formacin de un cogulo cuando se inocula plasma con colonias de estafilococos.
Adicional a lo anterior, S. aureus tiene un receptor de fibringeno llamado coagulasa unida o
factor clumping, que tiene la capacidad de actuar directamente sobre el fibringeno para formar
el cogulo; en este caso la prueba se realiza en lminas portaobjetos.

PRUEBA DE CATALASA
determina la presencia de la enzima catalasa. Esta enzima descompone el perxido de
hidrgeno que se forma como producto terminal oxidativo de la descomposicin aerbica de
los azcares. Mtodo: con un ansa recoger una colonia de un cultivo puro de 24 hs. y colocarla
sobre un portaobjetos. Agregar una gota de H2O2 al 30 %. Observar la formacin inmediata de
burbujas. Interpretacin: una prueba positiva corresponde a la formacin de burbujas bien
visibles (formacin de O2).
 V. RESULTADOS

ABP. Al estriar en las placas especficas los

Pruebas realizadas en diluciones
resultados de la presencia de S. Aureus fueron
seriadas. Se encontr turbidez en tres
negativos ya que las colonias no presentaron halo
tubos, posiblemente Staphylococcus.
transparente.

Menor a 100 UFC/gr valor estimado

PRUEBA DE CUAGULASA. No se observ ningn cambio (formacin de cogulos)

en el tubo que quiere decir que sali negativo esta prueba.
VI. DISCUSIN
Despus de realizar todas las pruebas con respecto al recuento en placa de Staphylococcus
aureus coagulasa positivo, en la muestra de siu mai en los resultados se pudo observar que este
alimento estaba libre de este tipo de bacterias patgenas productoras de enterotoxinas, aunque
hubo una colonia que aparentaba ser, ya que esta form un pequeo halo, as que se realiz la
prueba de la coagulasa para verificar estos resultados.

Seguidamente de realizar la prueba se determin que no era Staphylococcus aureus ya que no

se form una coagulo de fibrina, entonces se puede afirmar que este alimento est libre de
bacterias patgenas, sin embargo, se observ colonias de otras microorganismos que no son
patgenos, este alimento se compr en un conocido supermercado extranjero, el proceso de
elaboracin y manipulacin de este producto se realiz con todas la medidas de higiene
correctas, en cambio no podemos correr con las misma suerte si se compra en otros lugares
donde oferten el siu mai.

VII. CONCLUSIN
En conclusin, no se encontr la bacteria Staphylococcus aureus coagulasa positivo en
la muestra de producto alimenticio siu mai, esto quiere decir que es un alimento apto
para el consumo humano, ya que fue procesado con las medidas de higiene correctas y
a la posterior no producira ninguna enfermedad relacionada con Staphylococcus
aureus.

Los Staphylococcus aureus son bacterias que estn en todo el ambiente y tienen una
relacin directa con el hombre ya que estos son capaces de causarle una intoxicacin
alimentaria este resulta mortal, especialmente en las personas muy jvenes, muy
mayores o debilitadas por enfermedades prolongadas.

Una elevada concentracin de Staphylococcus aureus en un alimento contaminado

puede causar cuadros de intoxicacin alimentaria debido a que estos microorganismos
producen potentes enterotoxinas.
VIII. BIBLIOGRAFA
http://www.elika.eus/datos/pdfs_agrupados/Documento95/7.Staphylococcus.pdf

http://www.medigraphic.com/pdfs/patol/pt-2014/pt141e.pdf

http://www.britanialab.com.ar/esp/informacion_cientifica/apuntes/a2_13.htm

http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/pluginfile.php/186037/mod_page/co

ntent/1/Bacteriologia/Pruebas_de_laboratorio/Prueba_de_Coagulasa.html