DETERMINACION (CONTEO) DE ESPORAS DE HONGOS MICORRITICOS ARBUSCULARES

INTRODUCCION

Los hongos son organismos eucariotas, constituyen uno de los mayores grupos de seres vivos,
hasta ahora se han descrito unas 80 000 especies, pero se estima que el nmero real llega al
milln y medio de especies, hay muchas especies que no presentan diferencias morfolgicas,
sino que son genticamente diferentes. La micologa es la ciencia que se encarga del estudio de
los hongos, tradicionalmente ha sido una disciplina de la botnica, a pesar de que los anlisis
filogenticos indican que los hongos estn ms relacionados con los animales que con las
plantas. Sin embargo, los hongos producen esporas sexuales o asexuales para su reproduccin
y multiplicacin, lo que no ocurre en animales.

OBJETIVOS

Aprender el proceso de obtencin de esporas de hongos del suelo.

Determinar la cantidad de esporas de hongos micorrticos arbusculares (HMA).

REVISION BIBLIOGRAFICA

Actualmente, se encuentra bien documentado que los hongos micorrizgenos arbusculares

(HMA) mejoran la salud y el crecimiento de las plantas de importancia agrcola, hortcola y
forestal. La red de hifas producidas por los HMA en el suelo durante su asociacin con la planta
husped, provee una mayor superficie de absorcin que los pelos radiculares y, por lo tanto,
aumenta significativamente la captacin de iones relativamente inmviles, tales como fosfato,
cobre y zinc. En la mayora de los suelos tropicales, el fsforo disponible es muy bajo; esto limita
el desarrollo de las plantas. Adems, se ha demostrado que las plantas micorrizadas tienen
mayor tolerancia a metales txicos, patgenos de la raz, sequa, altas temperaturas, salinidad,
pH desfavorable del suelo y al choque por trasplante que sufren las plantas no micorrizadas
(Bagyaraj and Varma, 1995). Los HMA han sido registrados en ecosistemas naturales como
desiertos, dunas de arena, selvas tropicales, salinas y sistemas manejados como praderas,
huertos y cultivos agrcolas (Brundrett, 1991).

Extraccin de Esporas del Campo

Es un mtodo para evaluar la diversidad de HMA. La Identificacin de las especies de HMA est
basada en el anlisis de estructuras subcelulares de las esporas asexuales. La morfologa del
micelio interno y externo durante la asociacin micorrzica es prcticamente indistinguible entre
las especies del mismo gnero y entre gneros. En contraste, las estructuras subcelulares de las
esporas estn altamente conservadas y son fenotpicamente estables independientemente del
ambiente y la planta husped (Morton et al., 1995). De esta manera, las esporas son la nica
parte del organismo del hongo que puede utilizarse para delimitar las especies. Las esporas se
extraen del suelo mediante un tamizado hmedo (Gerdemann y Nicolson, 1963), seguido por
centrifugacin en un gradiente de sacarosa.
MATERIALES Y EQUIPO

Muestra de suelo
Agua
Solucin de sacarosa 1.17M
Botellas de vidrio
Tamices de 53 y 250 m
Tubo de centrfuga
Cpsula
Embudo Bchner
Papel filtro
Placa Petri
Centrfuga

PROCEDIMIENTO

Se pes 20 gr de suelo seco y se coloc dentro de la botella de vidrio.

Se agreg agua corriente y se agit hasta disolver todos los grnulos de tierra aproximadamente
por 5 min.

Se dej reposar la mezcla durante 20 a 30 segundos y se procedi a tamizar. Los tamices se

colocaron uno encima de otro, siendo el de la parte superior el tamiz de medida 250 m y el de
la parte inferior el de 53 m; de tal forma que las partculas grandes queden atrapadas en el
primer tamiz, las esporas y otras partculas chicas en el segundo tamiz y partculas ms pequeas
se elimine con el agua.

Se colect las partculas atrapadas en el tamiz de 53 m y se transfiri a un tubo de centrfuga

enrazndolo con agua.

Se coloc el tubo en la centrfuga a una velocidad de 1500 rpm durante 2 minutos. Sin el empleo
de freno para el detenimiento.

Se descart el sobrenadante del tubo y se volvi a llenar, esta vez con la solucin de sacarosa
1.17 M (40%).

Se coloc nuevamente en la centrfuga, esta vez a una velocidad de 1800 rpm durante 1.5
minutos y empleando freno para el detenimiento.

Se tamiz el sobrenadante en el tamiz de 53 m.

Se transfiri las partculas retenidas a una cpsula y se procedi a filtrar en el embudo Bchner,
previa colocacin de un papel filtro; al cual se le haban dibujado cuadriculas de 1 cm de lado.

Se retir el papel filtro con las partculas retenidas y se coloc sobre una placa Petri para su
posterior observacin al microscopio.

En total se realiz dos repeticiones, por lo que se hizo todo el procedimiento dicho para cada
muestra.

Se contabiliz las esporas de hongos contenidas en diferentes cuadrculas del papel filtro para
cada repeticin.
RESULTADOS Y DISCUSIONES

CUADRICULAS # DE ESPORAS REP. 1 # DE ESPORAS REP. 2

1 2 2
2 3 4
3 5 2
4 0 2
5 5 3

En total se contabilizaron 11 esporas en la repeticin 1 y 13 esporas en la repeticin 2. Dando

un promedio de 12 esporas por muestra.

Como se contabilizaron en 5 cuadrculas de 1 cm de lado; por lo tanto:

# Esporas/cm2 = 12/5 = 2,4 esporas/cm2

Las esporas que slo se contabilizaron fueron las que fsicamente eran redondas, grandes y de
color amarillento.

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

En el suelo se encuentran presentes diversas esporas de hongos micorrticos; que en su mayora

suelen ser los hongos micorrticos arbusculares.

El mtodo utilizado, para la obtencin de estas esporas nos muestra que no solo podemos
obtener la cantidad de esporas, adems se puede identificar diversas especies de hongos si se
conociera la morfologa de sus esporas.

Se pueden anidar otros tamices entre los dos recomendados. Esto separa a las esporas por
tamaos, pero incrementa la cantidad de trabajo ya que el material retenido en cada tamiz debe
centrifugarse por separado.

Los suelos con alto contenido de arcilla pueden obstruir los tamices; se puede agregar una
pequea cantidad de pirofosfato de sodio a 0.1M (Fogel y Hunt, 1979) para dispersar las
partculas de arcilla y liberar las aberturas del tamiz.

BIBLIOGRAFIA

Carrillo, L. (2003). Los hongos de los alimentos y forrajes. Jujuy, Argentina. Cubas, P. (2007).
Botnica. Recuperado el 10 de abril de 2013, de Hongos:
http://www.aulados.net/Botanica/Curso_Botanica/Hongos/31_hongos_general_texto.pd f
Marienfield. (2007). Cmara de recuento.

Bagyaraj, D. J. y Varma, A. (1995) Interaction between arbuscular mycorrhizal fungi and plants:
Their importance in sustainable agriculture and in arid and semiarid tropics, Advances in
Microbial Ecology, vol. 14, pp. 119142.
Brundrett, M. C. (1991) Mycorrhizas in natural ecosystems, Advances in Ecological Research,
vol. 21, pp. 171213. Morton, J. B., Bentivenga, S. P. y Bever, J. D. (1995) Discovery,
measurement, and interpretation of diversity in arbuscular endomycorrhizal fungi (Glomales,
Zygomycetes), Canadian Journal of Botany, vol. 73 (suppl. 1), pp. S25S32.

Fogel, R. y Hunt, G. (1979) Fungal and arboreal biomass in a Western Oregon Douglas-fir
ecosystem: Distribution pattern and turnover, Canadian Journal of Forest Research, vol. 9, pp.
245256.

Gerdemann, J. W. y Nicolson, T. H. (1963) Spores of mycorrhizal Endogone species extracted

from soil by wet sieving and decanting, Transactions of the British mycological Society, vol. 46,
pp. 235244.