JKL 1

Estudio comparativo de los mtodos de extraccin para la recuperacin de
carotenoides de algas: cintica de extraccin y efecto de diferentes parmetros de

extracci
La extraccin de carotenoides de algas se encuentra actualmente bajo intensa investigacin debido

al aumento de la demanda de compuestos naturales, que son especialmente ricos en ismeros
biolgicamente activos. Adems, los carotenoides naturales presentan una mayor estabilidad que los
sintticos. La extraccin lquida convencional sufre de varios inconvenientes, tales como el uso de
altas cantidades de disolvente, y varias etapas de extraccin. En esta extraccin de carotenoides a
partir de algas trabajo utilizando diferentes mtodos, tales como microondas y la extraccin asistida
por ultrasonido, as como la extraccin de lquido a presin y extraccin con CO supercrtico 2y
etano, se resume junto con el modelado de la cintica de extraccin. Adems, se ha revisado la
disponibilidad de carotenoides, el pretratamiento de las algas, la estabilidad de los extractos, sus
actividades antioxidantes y antimicrobianas, as como el procesamiento y almacenamiento de
extractos de algas aguas abajo. Como conclusin se puede afirmar que la extraccin de carotenoides
es compleja, exigiendo la optimizacin del rendimiento de los carotenoides y la estabilidad
antioxidante, que a menudo son inversamente proporcionales. 2014 Sociedad de la Industria
Qumica
INTRODUCCIN
Carotenoids are valuable compounds used in different fields, such as pharmaceuticals and health
promoting agents. Carotenoids are produced either via chemical synthesis or they can be separated
from naturally occurring plants or algae. Algae production has gained a lot of interest during recent
years due to its high growth rate and tunability of the algae composition by proper selection of
growth conditions. One of the most important application areas for algae is production of biodiesel.
Polyunsaturated fatty acids (PUFA) are also very common in algae, having several application
possibilities as health promoting agents and in pharmaceuticals. In addition to fatty acids there are
also other compounds in algae that are of interest as potential feedstocks for synthesis of valuable
compounds, such as carotenoids, chlorophylls and proteins.
La investigacin sobre la utilizacin de las algas y los carotenoides ha sido muy intensa durante los
ltimos 20 aos. Los carotenoides funcionales de algas fueron revisados por Christaki et al. en
2012. [ 1 ] Una revisin exhaustiva de zeaxantina incluyendo su biosntesis, ocurrencia, extraccin,
mtodos de anlisis, estabilidad, absorcin y biodisponibilidad ha sido preparada por Sajilata et
al. [ 2 ] En este estudio el nfasis principal fue sobre las propiedades funcionales de los diferentes
carotenoides, mientras que los mtodos de extraccin slo se describieron brevemente. Tambin
influy la influencia de las condiciones de crecimiento de las algas sobre la cantidad de
carotenoides [ 3 ].] Adems, hay varios comentarios especficos de carotenoides, de sondeo ya sea
en un carotenoide en particular, su qumica y promocin de la salud aspectos, por ejemplo, la
astaxantina [ 4 ] y su potencial comercial, [ 5 ] lutena [ 6 ] y la zeaxantina. [ 2 ]
Varios mtodos han sido aplicados para la separacin de carotenoides, por ejemplo la extraccin
convencional, [ 7 ] extraccin bajo CO supercrtico 2 , [ 8-10 ] o el uso de alta presin, [ 11, 12 ] y la
saponificacin de las algas por lcali, seguido de extraccin. [ 13 ] Alternativamente, se ha
propuesto un proceso combinado de transesterificacin e hidrlisis catalizada por lcali de ster de
lutena para la produccin de biodiesel y lutena, respectivamente. [ 14 ] La extraccin y el
fraccionamiento de lpidos tambin han sido recientemente revisados por Catchpole et al. [ 15] En
su trabajo se ha resumido brevemente la extraccin y el fraccionamiento de lpidos en fluidos
supercrticos, tales como PUFA y carotenoides. [ 15 ] Adems, varias revisiones describen
brevemente la extraccin de carotenoides, por ejemplo la extraccin de compuestos bioactivos de
algas marinas con diferentes mtodos de extraccin y centrndose en el punto de vista del proceso
[ 16 ], se revis la extraccin supercrtica de CO 2 de algas de microalgas, extraccin sub- y
supercrtica de ingredientes funcionales de fuentes naturales [ 17 ] y todos los tipos de compuestos
de microalgas han sido resumidos por Crampon et Alabama. , [ 18 ] mientras que Ibanez et al.se
han concentrado en la instrumentacin de extraccin. [ 19 ]
En la utilizacin de carotenoides hay varios factores cruciales para controlar para preservar las
actividades antioxidantes y antimicrobianos cuando se usan carotenoides. Esas actividades podran
ser modificadas debido a la alta temperatura durante la extraccin, la estabilidad de los carotenoides
durante el almacenamiento, [ 20, 21 ] la exposicin a la luz, [ 20 ] y su biodisponibilidad. [ 22]
El objetivo de este trabajo fue dar un resumen de todo el proceso de extraccin de carotenoides a
partir de algas, incluyendo la disrupcin celular, extraccin, separacin, control de calidad y
almacenamiento de productos (Fig. 1 ). Se hace especial hincapi en las eficiencias de extraccin de
diferentes carotenoides, el efecto del disolvente, la temperatura, la presin y la transferencia de
masa, la cintica de extraccin y el modelado. Se han discutido varias propiedades fisicoqumicas
tales como solubilidad y difusividad del soluto, as como polaridad, viscosidad y densidad del
disolvente. Tambin se ha puesto especial nfasis en la actividad antioxidante y antimicrobiana, ya
que en varios trabajos se ha observado que el rendimiento de extraccin es inversamente
proporcional a la actividad antioxidante.
Figura 1.
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Diagrama de flujo de diferentes etapas en el procesamiento de algas para la produccin de
carotenoides.
CAROTENOIDES EN ALGAS, SU DISPONIBILIDAD Y UTILIZACION
Los principales carotenoides en las algas son estructuras polienicas que incluyen tambin dos
grupos ciclohexilo. Algunos carotenoides de algas contienen oxgeno y que son llamados xantofilas,
como la lutena, zeaxantina, fucoxanthin y astaxantina, mientras que los compuestos que slo
contienen hidrocarburos se denominan carotenos, por ejemplo, - y -caroteno (Fig. 2 ). [ 6] La
estructura qumica de los carotenoides es importante para obtener las propiedades deseadas de
promocin de la salud, tales como las actividades antioxidantes y antimicrobianas, as como la
reduccin de la potencia y otras propiedades, como la capacidad de absorcin de luz. Adems, para
ser tiles para aplicaciones, estos productos deben ser estables frente a la exposicin a la luz, al
calor ya la exposicin al tiempo. La biodisponibilidad es muy importante para determinar la
eficiencia del carotenoide en seres humanos. La biodisponibilidad est determinada por la estructura
qumica as como la composicin del extracto. A continuacin se describe la disponibilidad y
utilizacin de los carotenoides ms importantes.
Figura 2.
Carotenoides en algas.
La zeaxantina se ha extrado de varias especies de algas, Synechococcus sp. [ 10 ] Nannochloropsis
oculata , [ 30 ] Chlorella elipsoidea , [ 11 ] Dunaliella salina , [ 24 ] Synechystis sp . [ 27 ]
y Mougeotia. [ 31 ] La estructura de la zeaxantina tiene nueve enlaces dobles conjugados y su
esqueleto de carbono est terminado por un anillo de ionona en ambos extremos y contiene un
grupo hidroxilo (Fig. 2). Debido a su estructura qumica, es absorbente de la luz y tiene su color
caracterstico. Adems, los diferentes ismeros de zeaxantina absorben luz a nmeros de onda
especficas. [ 2 ] Las longitudes de onda ms prominentes para ultravioleta y absorcin de la luz
visible para la zeaxantina son 340 nm, 430 nm, 452 nm y 479 nm, de las cuales las bandas de
absorcin fuertes aparece en 430 nm. [ 2 ] Varias aplicaciones para zeaxantina se resumen en
Sajilata et al. [ 2 ] La zeaxantina es un anticarcingeno y es activa contra la regeneracin macular
relacionada con la edad.
La astaxantina es una mezcla de ismeros cis y trans . Los ismeros trans tambin se isomerizan
fcilmente en ismeros cis bajo exposicin al calor ya la luz. La astaxantina se ha extrado ms
comnmente de Haematococcus pluvialis [ 21, 32-43 ], que contiene 1,5-3% en peso de la misma.
[ 21 ] La astaxantina en H. pluvialis es a menudo esterificada [ 44 ], pero se ha afirmado que
esterificados la astaxantina puede ser hidrolizada en el cuerpo humano. [ 34, 44 ] Adems, se ha
informado que la estabilidad de la astaxantina sinttica es inferior a la de la natural. [ 44 ]
La astaxantina exhibe varias propiedades beneficiosas para el ser humano, por ejemplo
protegindose contra la luz y los radicales de oxgeno. [ 5 ] Varias aplicaciones comerciales para
astaxantina resumidas por Ranga et al. , [ 4 ] se enumeran aqu como sigue: antioxidante, droga
cardiovascular, afectando la salud inmune del ojo y de la piel, contra el envejecimiento y
beneficioso para los msculos y para humedecer de la cara.
La lutena es uno de los carotenoides ms prominentes en varias especies de algas, es decir,
en Scenedesmus almeriensis , [ 9 ] Chlorella , [ 11, 45 ] Chlorella vulgaris , [ 8, 9, 12,
46 ] Scenedesmus oblicuo , [ 20 ] Dunaliella salina [ 24 ] y Mougeotia sp . [ 31 ] El contenido de
lutena, por ejemplo, en D. salina es relativamente alto, 6,5 mg g -1 . [ 24] Se ha producido
comercialmente a partir de flores de calndula, sin embargo, contienen una cantidad relativamente
pequea de lutena. Por lo tanto se sugiere que una de las posibilidades para lograr suficientemente
grandes cantidades de lutena es para extraerlo a partir de algas, que crecen rpidamente y puede ser
producido continuamente en biorreactores. [ 47 ]
La lutena tiene propiedades fisicoqumicas similares a la astaxantina y se ha utilizado para
aplicaciones relacionadas con la salud humana, es decir, la degeneracin macular relacionada con la
edad [ 22 ], las enfermedades cardiovasculares [ 48 ] y para aplicaciones tcnicas, como un
colorante alimentario y un aditivo para piensos . [ 13 ] Tambin se ha indicado que en una dieta
tpica la ingesta de lutena es menor que la necesidad diaria y se ha recomendado usar un
suplemento que contiene lutena. [ 49 ]
La fucoxantina est ms disponible en las microalgas que en las macroalgas. [ 50 ] La mayor
cantidad de fucoxantina ha sido reportada en Odontella aurita, Isochrysis
aff. Galbana y Phaeodactylum tricornutum [ 50 ] y tambin en Phaeodactylum tricornutum ,
[ 51 ] Dunaliella tertiolecta , [ 52 ] Himanthalia elongate, [ 27 ] Eisenia bicyclis [ 53 ]
y Cylindrotheca closterium . [ 52 ] Por otra parte, las especies de macroalgas como Undaria
pinnatifida y Laminaria Japonicacontienen menos de 2 mg g -1 fucoxantina, [ 50 ] aunque la
extraccin de fucoxantina de Laminaria japonica ha sido investigada. [ 54 ]
Fucoxantina exhibe varios efectos farmacolgicos, tales como eliminacin de radicales, [ 55 ]
efecto antiobesidad, [ 56 ] anticancergeno, [ 57 ] antiproliferativo, [ 58 ] anti-inflamatoria [ 59 ] y
apoptticos efectos en las clulas cancerosas. [ 60 ]
El -caroteno est presente en grandes cantidades en Synechococcus sp . [ 10 ] Dunaliella
salina [ 23-26 ] Chlorella vulgaris , [ 23 ] Botrococcus braunii , [ 23 ] Synechystis sp .,
[ 27 ] Phormidium [ 28 ] y Arthrospira maxima . [ 23 ] Dunaliella sp. contienen cantidades
especialmente grandes de -caroteno, aproximadamente 3 g L -1 en Dunaliella sp. [ 26 ] y 138 mg
g -1 en D. salina, [ 24 ], respectivamente. Las especies de Dunaliella contienen especialmente 9-
cis --caroteno, [ 6 ] un agente anticancergeno importante. El -caroteno se asemeja mucho a su
estructura zeaxantina, aunque no contiene ningn grupo hidroxilo. -caroteno se utiliza en varias
aplicaciones, como agente colorante para alimentos, pro vitamina A, aditivo en cosmticos y como
un aditivo de alimentos saludables. [ 29 ] Adems, tiene efectos teraputicos y profilctica en el
cncer. [ 29 ]
PRETRATAMIENTO DE ALGAS ANTES DE EXTRACCION
Para la extraccin de carotenoides de algas es importante seleccionar tales especies de algas, que
contienen suficientes carotenoides. La separacin de carotenoides es tpicamente ms eficiente si las
algas han sido pretratadas. Normalmente las algas han sido predispuestas ya sea por liofilizacin
[ 73 ] o por secado por pulverizacin [ 9 ], seguida de rotura celular. Varias especies de algas, que
se han utilizado para la extraccin de carotenoides, tienen una pared celular gruesa y por lo tanto
requieren algn tipo de pretratamiento antes de la extraccin; por ejemplo, Haematococcus
pluvialis, Phaetodactylum tricornutum y Chlorella vulgaris , mientras que Dunaliella salina no
tiene pared celular (Fig. 3). Varios mtodos diferentes se han utilizado para la ruptura celular, tal
como molienda con perlas, [ 73 ] ultrasonido, [ 20 ] el tratamiento autoclave, [ 20 ] utilizacin de
almina como un agente de abrasin, [ 13 ] o hidrlisis cida. [ 41 ] Adems de estos mtodos,
tambin mtodos combinados, tales como pretratamiento con lcali seguido de disrupcin mecnica
de las clulas se han aplicado. [ 20 ]
Figura 3.
Imgenes de microscopa electrnica de transmisin de (a) Haematococcus pluvialis , barra de

escala 22 m; [ 41 ] (b) tricornutum Phaeodactylum , barra de escala 1,5 m; [ 85 ] (c) Chlorella
vulgaris [;, barra de escala 0,5 m 86 (d] y ) Dunaliella salina, barra de escala 5 m. [ 87 ]
El objetivo del pretratamiento con lcalis es saponificar carotenoides que estn esterificados con un
cido graso en alga. Algunas especies de algas no tienen una pared celular gruesa, lo que facilita la
extraccin fcil y eficiente de los carotenoides. Estas especies son, por ejemplo, Dunaliella
salina [ 52 ] y Dunaliella tertiolecta . [ 52 ] Existen algunos estudios comparativos de
pretratamiento celular, como se muestra en la Fig. 4. [ 20]] En general se puede afirmar que en
muchos casos la extraccin de carotenoides de algas que tienen una pared celular gruesa no es
factible con la simple extraccin con disolvente. En varios mtodos de pretratamiento tambin se
han reportado grandes prdidas de carotenoides, tales como durante la ultrasonificacin slo 85%
de recuperacin de astaxantina [ 61 ] o hidrlisis enzimtica 65-80% de recuperacin
de Haematococcus pluvialis , [ 62 ] demostrando que el pretratamiento debe hacerse con
cuidado. 41]
Figura 4.
Efecto de diferentes mtodos de pretratamiento sobre la eficiencia de la extraccin de lutena. [ 20 ]

Autoclave a 121 C a 1,2 kg cm -2 , ultrasonido con 40 kHz y 400 W, batidor de cuentas que trabaja
a 4 ms -1 durante 1 min, repetido siete veces.
Una ruta prometedora para el pretratamiento de algas es la hidrlisis cida. [ 41 ] En la extraccin
de Haematococcus pluvialis se demostr que el uso de una baja concentracin de HCl bajo
calentamiento a 70 C durante 5-10 minutos dio como resultado 96% de extractibilidad de
astaxantina con acetona dentro de 60 min.
EXTRACCIN DE CAROTENOIDES DE ALGAS
Condiciones ptimas para la extraccin de diferentes carotenoides de algas
Los carotenoides exhiben propiedades diferentes, por ejemplo hidrofobicidad y solubilidad, as

como estabilidad trmica y qumica, por lo que deben optimizarse sus mtodos de extraccin. En
esta seccin se resumen las condiciones ptimas y los rendimientos ms altos para carotenoides
especficos, tales como astaxantina, zeaxantina, lutena, -caroteno y fucoxantina (Tabla 1 ).
Tabla 1. Condiciones ptimas para la extraccin de carotenoides de diferentes algas
Temperatura ( Presin
Carotenoide Tipo de algas Mtodo
C) (MPa)
1. a Polvo seco, en presencia de retraso hdrico de extraccin.
Astaxantina Haematococccus Aceite de oliva, 30 25

pluvialis ml de algas / 30 ml
de aceite
CO $ $ - 10% en 60 30
volumen de EtOH
CO 2 70 5
70 5
70 5,5
MW, 300 W, aceite

de crtamo
EtOH / 10% de 70 4
aceite de soja
Dodecano 1: 1 / 25/4
metanol 1: 1,
procedimiento en 2
etapas, NaOH
CO $ $ / celita, 70 5,5
25% en peso de
homogenado
acuoso
C) (MPa)
Zeaxantina Synechococcus sp. CO 2 + 5% v / v de 60 20

etanol
Chlorella elipsoidea Etanol 115,4 10,3
Synechocystis sp. Etanol 100 10,3
-caroteno Dunaliella salina Hexano / acetona / 25 0,1

EtOH
2/1/1
Synechocystis sp. Etanol 100 10,3
Lutena Chlorella 0,5 g de alga y 20 160 10,3

vulgaris ml de etanol
CO 2 + etanol 40 40
CO $ $ , EtOH, 60 3
7,5%
Chlorella EtOH, 6% de KOH 50 3
Scenedesmus CO 2 , etanol 70 40
Scenedesmus obliquus Pretratamiento del 25

batidor de bolas,
ter dietlico,
relacin S / R 2, 5
etapas de
C) (MPa)
extraccin
Fucoxantina Phaeodactylum Etanol 25

trocornutum
Eisenia bicyclis Etanol / agua 90% 110 10,3
Acetona, 3 kg de 25 1
algas / 10 l de
disolvente
Odontella aurita Etanol, 30/1 (v / p) 45
Undaria pinnatifida Extraccin asistida 60

por microondas,
300 W, 15/1 (v /
w)
Cylindrotheca Extraccin asistida

closterium por microondas, 50
W
Laminaria Japonica DMSO, 1 g de 25

algas / 4 ml de
disolvente
Carotenoides Dunaliella salina DMF, extraccin 25

asistida por
ultrasonido
Extraccin Astaxanhin ha llevado a cabo con extraccin convencional directamente en aceite

vegetal, [ 39 ] extraccin convencional combinado con tratamiento cido, [ 41 ] de la extraccin con
CO supercrtico 2 [ 32, 33, 35, 37, 38, 40, 43 ] y el lquido presurizado extraccin, [ 21, 34 ]
de Haematococcus pluvialis , que da altos rendimientos de astaxantina. Tambin se han realizado
estudios comparativos con Dunaliella salina . [ 21 ] El desafo en la extraccin de astaxantina es
que su cis- forma es fcilmente oxidada. [ 21] Tpicamente tambin la actividad antioxidante
disminuye al aumentar la temperatura, por lo que las condiciones de extraccin y la actividad
antioxidante del carotenoide deben ser optimizados (ver la seccin 'antioxidante y actividades
antimicrobianas y reduccin de la potencia de extracto de algas'). [ 32 ] La ms alta recuperacin
inform para astaxantina fue 91,8% extrae de Haematococcus pluvialisbajo CO supercrtico 2 a 30
MPa y 60 C con 10% de etanol como codisolvente. [ 35 ] etanol como codisolvente facilita una
mayor solubilidad de astaxantina (vase la seccin 'Efecto de la co-disolvente en la extraccin de
carotenoides bajo CO supercrtico 2'), que tambin es parcialmente polar con sus dos grupos
hidroxilo. Tambin se ha modelado la cintica de la extraccin de astaxantina (vase la seccin
'Modelizacin de la transferencia de masa'). [ 38 ]
extraccin de -caroteno se ha realizado a partir de Chlorella vulgaris [ 12, 23 ] , Dunaliella salina ,
[ 24-26 ] Dunaliella tertiolecta , [ 52 ] Mongeotia sp., [ 31 ] Synechococcus sp., [ 10 ] Phordinium .
[ 28 ] Tambin se han comparado varios mtodos diferentes para la extraccin de -caroteno, es
decir, supercrtica CO 2 [ 10, 23, 32, 35, 37, 38 ] extraccin supercrtica con etano y etileno, [ 25 ]
saponificacin seguida de extraccin convencional [ 31] Y la extraccin a presin de lquido [ 12 ],
as como de microondas [ 52 ] y la extraccin asistida por ultrasonidos. [ 52 ] La extraccin de -
caroteno tambin se demostr de Dunaliella salina con hexano, ter, aceite de jojoba o aceite
vegetal luz. [ 26 ] El ms alta recuperacin de -caroteno se logr de la extraccin de Dunaliella
salina con una mezcla disolvente que contiene hexano-acetona-etanol en la relacin de 2: 1:. 1 a
temperatura ambiente, seguido de saponificacin del extracto con KOH [ 24 ] Cabe mencion que
es relativamente ms fcil extraer Dunaliella salina , que no tiene pared celular. [ 52 ]
Extraccin Fucoxantina se ha demostrado de Phaeodactylum tricornutum , [ 63 ] Eisenia bicyclis ,
[ 53, 63 ] Cylindrotheca closterium , [ 63 ] Dunaliella tertiolecta , [ 63 ] L. Japonica , [ 64 ] U.
pinnatifida , [ 64 ] S. fusiforme , [ 64 ] Himanthalia alargada [ 27 ] y Odontella aurita . [ 50]]
Varios disolventes y mtodos de extraccin tambin se han utilizado en la extraccin de
fucoxanthin, por ejemplo extraccin convencional con acetona, [ 51 ] etanol [ 50, 51 ] y metanol,
[ 50 ] la extraccin de lquido a presin [ 27, 51, 53 ], as como microondas , [ 51, 52, 64 ] y la
extraccin asistida por ultrasonidos. [ 12, 51, 52 ] La fucoxantina es sensible a la oxidacin y, por lo
tanto, debe extraerse a baja temperatura [ 53, 64 ] . ] etanol [ 50, 51 ] y acetona, [ 50, 51 ] mientras
que el ter de petrleo [ 50 ] y el n-hexano [ 50, 51] no han sido eficientes (Fig. 5 ). El mayor
rendimiento de fucoxantina ha sido de 17,2 mg g -1 obtenido de Odontella aurita con extraccin de
etanol a 45 C utilizando una relacin de disolvente a algas de 30: 1. La recuperacin de
fucoxantina fue del 79%, mientras que los rendimientos ligeramente inferiores se alcanzaron a
temperatura ambiente. Los disolventes ms eficaces para la extraccin de fucoxantina fueron el
metanol y el etanol (Figura 5 ). [ 50 ] La extraccin lquida convencional de fucoxantina sufre la
gran cantidad de disolvente necesaria (Figura 6 ). [ 20 ] Un estudio comparativo de microondas y
ultrasonido asistido extraccin, extraccin lquida presurizada y Soxhlet dieron rendimientos muy
similares de fucoxantina dePhaeodactylum tricornutum, mostrando as que el tipo de algas tambin
tiene un gran impacto en la eficiencia de extraccin. [ 51 ] El tiempo de extraccin se acort en la
extraccin de lquido a presin en comparacin con el tiempo de extraccin en microondas y
extracciones asistida por ultrasonido. Los dos ltimos procesos se realizaron a temperatura
ambiente durante 30 min, mientras que la extraccin con etanol a presin se llev a cabo a 100C en
10 minutos. Anlogamente casi no se observaron diferencias en las eficiencias de extraccin de -
caroteno de Dunaliella tertiolecta con ultrasonido y extracciones asistida por microondas, as como
en remojo a 20 C usando acetona como disolvente, [ 52] ya que esta especie no tiene una pared
celular. Como comparacin, se obtuvo un mayor rendimiento de extraccin de fucoxantina a partir
de Cylindrotheca closterium a 56 C con acetona usando extraccin asistida por microondas, ya
que este alga exhiba una pared de slice.
Figura 5.
Rendimiento de fucoxantina en la extraccin de Odontella aurita con diferentes disolventes a 25

C. [ 50 ]
Figura 6.
Efecto del etanol en relacin alga seca sobre el rendimiento de fucoxantina de Odontella aurita a 25
C. [ 50 ]
La zeaxantina es un polieno totalmente conjugado que contiene tambin dos anillos de ionona con
grupos hidroxilo (figura 2 ). Los enlaces dobles conjugados contienen cromforo absorbente de la
luz y la zeaxantina exhibe tambin un color fuerte. [ 2 ] Adems, los diferentes ismeros de
zeaxantina absorben luz tanto en la regin visible como en la regin UV. Zeaxantina junto con
lutena se han encontrado para ser activo en la prevencin de la degeneracin macular relacionada
con la edad debido a su capacidad para absorber la luz azul protegiendo as el ojo. [ 2 ] la extraccin
de la zeaxantina se ha demostrado a partir de Chlorella ellipsoida , [ 11 ] Nannochloropsis oculate ,
[ 30 ] Synechoccus sp. [ 10] y Dunaliella salina . [ 5, 10, 11, 24, 30 ] Se obtuvo el rendimiento de
zeaxantina ms elevado, 4,28 mg g -1 extrado de Chlorella elipsoidea , mediante extraccin lquida
a presin con etanol a 115,4 C y 10,3 MPa despus de 18 min tiempo de extraccin. [ 11 ]
Extraccin lutena se demostr con la extraccin con disolvente convencional, [ 24 ] supercrtico
CO 2 [ 8, 9 ] la extraccin de lquido a presin [ 12, 21 ] y la extraccin de saponificacin. [ 20, 45 ]
La lutena se extrajo de Chlorella , [ 45 ] Chlorella vulgaris [ 8 , 9, 12 ] Phordinium ,
[ 28 ] Haematococcus pluvialis , [ 21 ] Dunaliella salina , [ 21 ] Scenedesmus almeriensis ,
[ 13 ] Scenedesmus obliquus .5, 8, 13, 20, 24, 45, 63 ] La lutena fue uno de los carotenoides
extrados de Phormidium sp con la extraccin de lquido a presin con etanol a 150 C durante 20
min. [ 28 ] de muy alta eficacia de la extraccin, el 99% se consigui para lutena, al extraer
con Screnesmus obliquuscon estirpe de grano, en cinco pasos, Scenedesmus obliquus con una
relacin de disolvente a algas de 2: 1 (Fig. 7 ). [ 20 ] Por otro lado, este mtodo consume mucho
tiempo y tambin tiene un alto rendimiento de lutena, 3,78 mg g -1 se logr en la extraccin de
lquido a presin usando 0,5 g Chlorella alga junto con 20 ml de etanol a 160 C y 10,3 MPa
durante 30 min. [ 12] El beneficio para la extraccin de lquido presurizado es el corto tiempo de
extraccin.
Figura 7.
Capacidad de extraccin de lutena con ter dietlico de Scenedesmus obliquus CNW-N en funcin
del nmero de etapas de extraccin y relacin de disolvente a rafinado (S / R, volumen /
volumen). S / R = 0,5 ( ), S / R = 1 ( ), S / R = 2 ( ), S / R = 3 ( ), S / R = 5 ( ). [ 20 ]
COMPARACIN DE DIFERENTES MTODOS DE EXTRACCIN
Extraccin convencional
La extraccin de carotenoides se ha hecho convencionalmente con diferentes disolventes, por

ejemplo diclorometano, [ 7 ] hexano, [ 7, 61 ] metanol, [ 7 ] etanol, [ 7 ] dimetilter, [ 7 ] dietil ter,
[ 31 ] dimetilsulfxido, 7 ] tolueno [ 7, 61 ] 2-propanol, [ 7 ] n-butanol, [ 7 ] heptano, [ 7 ]
acetonitrilo, [ 7 ] tetradecano, [ 61 ] dodecano [ 61 ] hexadecano [ 61 ] y tetrahidrofurano. [ 7] Las
propiedades importantes del proceso de extraccin son que debe ser eficiente y selectiva para la
extraccin, [ 12 ] no causar ningn cambio en los extractantes, [ 12 ] el uso de disolventes debe
minimizarse para hacer el proceso econmicamente factible. La extraccin convencional de
disolventes usualmente requiere grandes cantidades de disolvente, tiempos de extraccin largos y
varias etapas de extraccin y por lo tanto se han desarrollado nuevas tcnicas de extraccin.
Los dos criterios ms dominantes para la seleccin de disolventes para la extraccin de carotenoides
son el precio del disolvente, la toxicidad y la solubilidad de los carotenoides en el disolvente. As, el
ltimo criterio sugerira el uso de los siguientes solventes: acetona, ter de petrleo, benceno,
hexano, ter dietlico, cloroformo, diclorometano, etanol y metanol. [ 13 ] El etanol es un solvente
no txico que muestra el estatus de GRAS (generalmente reconocido y seguro) . [ 8, 37, 65 ] El
hexano es recomendado por la industria alimentaria. [ 13 ] En el control de calidad del extracto, la
seleccin del disolvente tambin tiene un gran impacto. Algunos ejemplos de ello son la estabilidad
antioxidante, la degradacin del soluto en presencia de disolvente, que se describen en las secciones
"Efecto del cosolvente en la extraccin de carotenoides bajo CO supercrtico 2 'y' Actividades
antioxidantes y antimicrobianas y potencia reductora del extracto de algas '.
Algunos disolventes, como los teres, pueden causar la oxidacin de los carotenoides mediante la
formacin de carotenoides epoxi. [ 66 ] Se han utilizado diclorometano o ter dietlico para la
extraccin de lutena de Scenedesmus obliquus CNW-N [ 20 ] combinado con alteracin celular y
saponificacin. El beneficio de utilizar ter dietlico como disolvente para la extraccin es su alta
volatilidad y fcil separacin. [ 20, 31 ]
Extraccin asistida por ultrasonido
Extraccin asistida ultrasonido se ha informado de que un mtodo alternativo eficiente para la

extraccin de carotenoides a partir de algas debido a la baja el consumo de energa y el requisito de
disolvente. [ 67 ] La eficacia para el tratamiento de ultrasonidos es originaria de la cavitacin, en el
que los puntos calientes locales y altas presiones pueden facilitar la ruptura de la pared celular. [ 10,
12, 13, 30, 46, 52, 63, 67, 68 ] Se obtuvieron rendimientos relativamente altos de lutena en la
extraccin asistida por ultrasonido de Chlorella vulgaris en comparacin con la extraccin asistida
por ultrasonidos de carotenoides lquido, siendo los rendimientos de 3,93 mg g -1 , a partir de 2 h de
extraccin a temperatura ambiente utilizando 50 ml de etanol al 90% en peso con 0,5 gChlorella
en polvo, mientras que en la extraccin de lquido a presin junto con 33 ml de etanol a 10,3 MPa y
160 C durante 30 min 3,78 mg g -1 de lutena se logr. [ 12 ] Por otro lado, el tiempo de extraccin
fue 4 veces ms largo en ultrasonido asistido extraccin en comparacin con la de la extraccin
lquida presurizada. [ 12 ]
En un estudio comparativo de Pasquet et al. [ 52 ] la eficacia de la extraccin asistida por
ultrasonido se compar con los mtodos de remojo en fro y en caliente. La extraccin asistida por
ultrasonido de Dunaliella tertiolecta y Cylindrotheca closterium se realiz a 8.5 C en acetona
[ 52 ] con una concentracin de 1.7 mg mL -1 . Al comparar el rendimiento de la extraccin asistida
por ultrasonido con la extraccin mediante inmersin en fro o en caliente en acetona, se observ
que la clorofila se degradaba bajo remojo en caliente. Durante la extraccin asistida por ultrasonido
de Cylincrotheca closteriumcon acetona el rendimiento de extraccin de fucoxantina aument con
el tiempo y tambin el rendimiento de clorofila permaneci bastante constante, sin embargo, menor
que el logrado en el mtodo de remojo en fro, [ 52 ] en el que el rendimiento de fucoxantina fue de
5,2 m. Adems, la fucoxantina no se degrad durante la extraccin en fro, mientras que la
clorofila a se descompuso parcialmente ya al cabo de 60 min. [ 52 ] La tasa de extraccin de
fucoxantina se mejor dos veces con remojo en caliente a 56C y su rendimiento permaneci
relativamente constante mientras que la degradacin de la clorofila ya despus de 30 min. Por lo
tanto, se puede concluir que los tiempos cortos de extraccin son preferentes, por ejemplo, en la
extraccin de carotenoides termolbiles, como la fucoxantina. [ 52 ] Al extraer la algaDunaliella
tertiolecta , que no tiene pared celular, los rendimientos tanto de fucoxantina como de clorofila a
eran aproximadamente iguales e independientes de los mtodos de extraccin, siendo extraccin
asistida por microondas o ultrasonido y remojo a temperatura ambiente. [ 52 ]
Los rendimientos de carotenoides con extraccin asistida por ultrasonido han sido comparables,
superiores [ 67 ] o inferiores a los obtenidos con CO 2 supercrtico o extraccin lquida presurizada,
[ 27 ] dependiendo del disolvente. El rendimiento de carotenoides de la extraccin asistida por
ultrasonido con metanol fue de 14 mg g -1 , de Dunaliella salina y fue ligeramente inferior al
alcanzado en la extraccin supercrtica de CO 2 (15 mg g -1 ), mientras que cuando se us
dimetilformamida como disolvente, el rendimiento de carotenoides fue 27 mg g -1 . [ 67 ] Por otro
lado, la selectividad hacia los carotenoides fue baja en la extraccin asistida por ultrasonido (ver
ms adelante).
La selectividad hacia los carotenoides en la extraccin asistida por ultrasonido fue menor que con la
extraccin de lquidos a presin [ 27] y la extraccin de CO 2. [ 67 ] En el primer caso, la extraccin
asistida por ultrasonido de carotenoides dio rendimientos menores de Chlorella vulgaris
en comparacin con la extraccin lquida presurizada usando acetona o etanol como disolvente.
[ 27 ] en el ltimo caso se obtuvieron un menor rendimiento y selectividad a los carotenoides en
comparacin con las clorofilas al comparar supercrtico CO 2 de extraccin de Dunaliella salina con
el rendimiento de la extraccin asistida por ultrasonidos. [ 67 ]
La extraccin asistida por ultrasonido ha sido menos eficiente que la extraccin lquida presurizada,
cuando se usaron tres solventes diferentes, etanol, acetona, hexano en la extraccin de Chlorella
vulgaris a temperatura ambiente durante 25-30 min bajo ultrasonido [ 46] o utilizando extraccin
lquida a presin a 50C C o 100 C. [ 46 ]
Extraccin asistida por microondas
La extraccin asistida por microondas de carotenoides ha sido raramente investigada. Los

parmetros principales en la extraccin asistida por microondas son el efecto de microondas [ 52 ],
el tiempo [ 52 ], el tipo de algas [ 52 ] y la temperatura. [ 52 ] En algunos casos tambin podra
omitirse la separacin del disolvente cuando, por ejemplo, disolvente junto con microondas [ 42 ].
En algunos casos se ha demostrado que la extraccin asistida por microondas es un mtodo de
extraccin eficiente, por ejemplo en la extraccin de fucoxantina de Cylindrotheca closterium .
[ 52 ]
El aceite de crtamo ha sido seleccionado como disolvente para la extraccin de astaxantina
de Haematococcus pluvialis en presencia de microondas. [ 42 ] El beneficio de este mtodo fue
evitar la prxima separacin del disolvente. Las extracciones se realizaron en un extractor de
microondas a 300 W durante 5 min utilizando 500 ml de aceite de crtamo y 100 g de alga. A
continuacin, la mezcla se agit suavemente durante 25 min y se filtr. Se us el mismo disolvente
como disolvente 11 veces para alga fresca. Finalmente, la concentracin de astaxantina en aceite de
crtamo fue del 2,1% en peso.
Vacuum extraccin por microondas de carotenoides y clorofila a se demostr de Dunaliella
tertiolecta y closterium Cylindrotheca . [ 52 ] Las extracciones se llevaron a cabo en el punto de
ebullicin de la acetona, 56 C en atmsfera de argn a fin de evitar la foto-oxidacin de la
clorofila. [ 52 ] Microondas el tiempo de irradiacin y el poder fueron muy cruciales para la
estabilidad de chlrohyll a como se demostr en Pasquet et al. [ 52 ] Ya despus de 5 min de
extraccin bajo irradiacin con microondas el rendimiento de la clorofila a partir de Cylindrotheca
closterium disminuy, mientras que fucoxantina concentracin estaba intacto despus de 15 min de
irradiacin de microondas. [ 52] Adems, el rendimiento ms alto de clorofila a se logr con 50 W,
mientras que se descompuso cuando se usa mayor potencia. El rendimiento de fucoxantina fue
aproximadamente constante cuando se us potencia diferente en el intervalo de 25-100 W.
El efecto de la ausencia o presencia de pared celular tambin se observ al estudiar la extraccin
de Cylindrotheca closterium con una pared celular fuerte y Dunaliella salina en ausencia de pared
celular con diferentes mtodos. [ 52 ] En un estudio comparativo de los mtodos de extraccin
utilizando microondas o ultrasonido asistido y mtodo de remojo, rendimientos similares de
clorofila a y fucoxantina se lograron debido a la falta de pared celular en Dunaliella salina . Por
otro lado, en la extraccin de Cylindrotheca closteriumel mtodo de extraccin ms eficiente fue la
extraccin asistida por microondas seguido de ultrasonido asistido y mtodo de remojo en caliente.
[ 52 ]
Extraccin bajo alta presin
La alta presin tpicamente acorta el tiempo de extraccin y la cantidad de disolvente utilizado. . De
extraccin de fluido a presin ha sido intensamente estudiado [ 11, 12, 21, 27, 34, 39, 46, 53, 63,
65 ] de extraccin de lquido a presin de las algas se ha preferido debido a las siguientes ventajas:
posibilidad de evitar el calor excesivo, el oxgeno y la luz que causan la degradacin de compuestos
sensibles, [ 27, 28] menor cantidad de disolvente necesario, [ 21, 34 ] una mayor selectividad en
comparacin con Soxhlet y asistida por ultrasonido extraccin, [ 11, 67 ] y menos tiempo necesario
para la extraccin. [ 34, 46 ] El efecto de la seleccin del disolvente, [ 11, 28, 53, 65 ] el tiempo de
extraccin [ 36, 69 ] y la temperatura [11, 12, 21, 53 ] se discuten a continuacin.
Efecto del solvente en la extraccin lquida presurizada
Se han investigado varios disolventes en la extraccin lquida presurizada de algas, tales como
etanol, 2-propanol, hexano, ter de petrleo y agua. El etanol ha sido uno de los mejores disolventes
dando tanto altos rendimientos [ 11, 28, 53 ] y extractos con alta actividad antioxidante. [ 65 ]
La extraccin presurizada de zeaxantina se ha investigado a partir de Chlorella ellipsoidea en
condiciones presurizadas con diferentes disolventes, como hexano, etanol y 2-propanol, [ 11 ] y
de Chlorella vulgaris con etanol como disolvente. [ 12 ] Cuando la extraccin de zeaxantina se
optimiz en la presurizada con hexano, etanol y 2-propanol como disolvente, se requeran
temperaturas ms elevadas para hexano y 2-propanol en comparacin con etanol. [ 11 ] La alta
eficiencia de extraccin de etanol tambin se observ en la extraccin de carotenoides
de Phormidium en el rango de temperatura 50 -100 C a 10,3 MPa en comparacin con los
obtenidos con agua o hexano. [ 28] El etanol fue tambin un disolvente eficaz para la extraccin de
fucoxantina de Eisenia bicyclis a 110 C y 10,1-20,2 MPa, [ 53 ] y en la extraccin de astaxantina
de Haematococcus pluvialis a 10,3 MPa y 200 C. Cuando se aplic hexano no polar, se logr una
eficiencia baja debido a la naturaleza polar de la zeaxantina. Se ha afirmado que la zeaxantina es
difcilmente soluble en hexano y ter de petrleo. [ 2 ]
En una comparacin de diferentes disolventes en la extraccin de carotenoides de Spirulina
platensis a 10,3 MPa en hexano, ter de petrleo, etanol y agua, se obtuvieron los mayores
rendimientos de carotenoides en etanol (19,7% en peso), seguido de agua (10,12% en peso) ,
hexano (4,3% en peso) y ter de petrleo (4,0% en peso). [ 65 ] por otro lado, las CE ms altos 50 se
lograron actividades en agua, por lo tanto el proceso de extraccin debe ser optimizado con
rendimiento de extraccin frente a la actividad antioxidante (Fig. 8 ) favoreciendo as la eleccin del
etanol. Anlogamente al trabajo de Herrero et al. [ 65 ] el etanol dio tambin mayores rendimientos
de extraccin en comparacin con el hexano en la extraccin de Haematococcus pluvialis en el
intervalo de temperatura de 50-200 C a 10,3 MPa.
Figura 8.
Efecto de diferentes solventes en (a) el rendimiento de extraccin de antioxidantes y (b) CE 50 valor

a 170 C y 10,3 MPa como una funcin del tiempo, adaptado de Herrero et al. Etanol ( ), agua (
), hexano ( ) y ter de petrleo ( ). [ 65 ]
Efecto del tiempo de extraccin en la extraccin lquida presurizada
El tiempo de extraccin se puede acortar aplicando la extraccin lquida presurizada. Normalmente,

un tiempo de extraccin ms largo facilita un rendimiento de extraccin superior. [ 36 ] Sin
embargo, en algunos casos, por ejemplo en la extraccin de lutena, los rendimientos de rebajado se
lograron con tiempos de extraccin ms largos, ya que se observ la lutena a ser menos termolbil
de astaxantina. [ 69 ] El tiempo de extraccin corto, de slo 10 minutos, dio un alto rendimiento de
extraccin de fucoxantina a partir de Phaeodactylum tricornutum a 100 C en etanol, mientras que
en mtodos comparativos se obtuvieron aproximadamente los mismos rendimientos a temperatura
ambiente con extraccin asistida por ultrasonidos o extraccin Soxhlet a 80 C, pero despus de 30
min. [ 51]
Efecto de la temperatura en la extraccin lquida presurizada
A continuacin se resume el efecto de la temperatura sobre la extraccin de lquido presurizado. La
temperatura puede ser muy dominante, [ 11 ] o exhibir slo un efecto menor [ 21 ] y algunas
combinaciones de la temperatura y el tiempo puede causar reacciones secundarias, por ejemplo la
formacin de fenoforbido de la clorofila a [ 12 ].
El disolvente ms eficaz para la extraccin de zeaxantina fue etanol con la temperatura ptima para
la extraccin de 115,4 C, mientras que la extraccin en hexano proporcion una menor cantidad
de zeaxantina. Al comparar la extraccin asistida por ultrasonido con extraccin presurizada de
carotenoides a alta temperatura, se indic que un beneficio para la extraccin de zeaxantina en el
sistema presurizado es la viscosidad del lquido disminuida. [ 11 ]
La temperatura exhibi slo un efecto menor sobre los rendimientos de astaxantina durante la
extraccin lquida presurizada de Haematococcus pluvialis realizada en acetona a 10,3 MPa en el
intervalo de temperatura de 20-100 C durante 5 min utilizando tres ciclos de extraccin. [ 21 ] Los
resultados revelaron que el rendimiento de astaxantina era casi no afectada por la temperatura,
mientras que se observ una ligera disminucin de la cantidad de lutena a mayor temperatura.
[ 21 ] Adems, no se produjo isomerizacin trans de cisde astaxantina a 40 C y 10,3
MPa. Finalmente se indic que la extraccin lquida presurizada requera slo la mitad de la
cantidad de disolvente y 20 min de tiempo de extraccin en comparacin con la extraccin
tradicional durante 90 min.
La temperatura ptima de extraccin para la fucoxantina de Eisenia bicyclis fresca con etanol al
90% fue de 110 C durante 5 min de tiempo de extraccin (Figura 9 ). [ 53 ] Adems, se afirm que
en las condiciones aplicadas la mayora de la fucoxantina se mantuvo estable.
Figura 9.
Eficiencia de extraccin de fucoxantina en la extraccin lquida presurizada de Eisenia bicyclis con

etanol al 90%. [ 53 ]
Un inconveniente de usar temperaturas de extraccin ms altas, por ejemplo en la extraccin de
lutena y -caroteno de Chlorella vulgaris, es la formacin de fenoforuro a partir de la clorofila a
(Figura 10 ). La formacin de feoforbida aument con el tiempo, pero la formacin de fenoforbo
ms alta se observ a 60 C y disminuy con el aumento de la temperatura. Se declar que la
clorofilasa se desactivaba a alta temperatura. El feofrbido es una clorofila libre de Mg 2 + que causa
dermatitis en pieles humanas. [ 70 ] El lmite de seguridad para el uso de feophorburo es inferior a
1,6 mg g -1 [ 71 ] y puede causar intoxicacin alimentaria.
Figura 10.
Estructura de (a) fenofora a, sin la presencia de Mg2 + , formada a partir de (b) clorofila a.
Extraccin supercrtica
La extraccin supercrtica con CO 2 [ 8, 9, 23, 30, 32, 33, 35, 38, 40, 43, 67, 68, 72, 73 ] o etano
[ 25 ] se ha aplicado a la separacin de carotenoides. Extracciones selectivas se han demostrado en
la presencia de CO supercrtico 2 . [ 8, 10 ] Adems, la calidad del producto puede ser mayor debido
a la ausencia de luz y calor extra. La extraccin supercrtica de carotenoides es beneficioso para
carotenoides termolbiles. [ 34, 36 ] Adems, CO 2 exhibe una alta compresibilidad y baja
viscosidad. [ 36 ] En algunos casos, por ejemplo en la extraccin de astaxantina, supercrtico CO 2la
extraccin produce bajos rendimientos y se recomienda el uso de etanol como codisolvente. La
extraccin supercrtica de -caroteno con etano o etileno ha sido demostrada con xito, [ 25 ] ya que
-caroteno tiene mayor solubilidad en estos hidrocarburos que CO 2 . La extraccin supercrtica con
CO 2 se ha considerado un mtodo respetuoso con el medio ambiente, ya que se puede evitar el uso
de disolventes txicos y voltiles. La extraccin supercrtica de CO 2 tambin es un mtodo
selectivo, no extrayendo clorofilas. [ 36, 40 ] Diversas cuestiones, como el efecto de la temperatura
y la presin, [ 8-10, 23, 37, 38, 40, 67, 68, 73 ] cintica , [ 8, 9, 37, 68 ] selectividad, [ 8, 10, 23]
Efecto de co-disolvente, [ 10, 33, 35, 36, 38, 40, 68 ] CO 2 caudal, [ 9, 30, 40 ] efecto de trituracin
de algas [ 33, 35 ] y el modelado de transferencia de masa [ 33, 38, 68 ] se han resumido a
continuacin.
Efecto de la presin y la temperatura en la extraccin supercrtica de carotenoides de algas
El efecto de la presin y la temperatura sobre la extraccin supercrtica de los carotenoides ha sido
intensamente investigado [ 8-10, 23, 37, 38, 40, 67, 68, 73 ] El efecto combinado de la presin y la
temperatura se trata aqu juntos ya que estn interrelacionados en la sensacin de que al aumentar la
temperatura a una presin relativamente baja, el rendimiento de extraccin se reduce debido a la
menor densidad de CO 2 [ 8, 9, 38 ] que tambin disminuye la solubilidad del carotenoide en el
disolvente. Este efecto se observ a 70 C y 30 MPa en supercrtico CO 2 (Fig. 11 (a), (b)). [ 8 ] En
caso contrario rendimientos de extraccin se incrementan con el aumento de presin y temperatura,
[ 73] si el carotenoide es lo suficientemente termolbiles. Las propiedades del soluto, tales como la
estabilidad trmica y qumica, as como su polaridad y solubilidad tambin determinan la eficiencia
de la extraccin. [ 10 ]
Figura 11.
(a) Efecto de la temperatura sobre el rendimiento de la lutena en la extraccin de Chlorella

vulgaris usando 30 MPa CO 2 , 2,5 ml min -1 para 300 min, (b) la solubilidad de la lutena como una
funcin de CO 2 densidad. [ 8 ]
Normalmente a altas presiones el rendimiento de carotenoides aumenta tanto con el aumento de
la presin de CO 2 , [ 37, 73 ] como con la temperatura. [ 37, 38, 73 ] La solubilidad y la presin de
vapor del soluto son parmetros importantes que determinan la eficiencia de la extraccin. Adems,
la viscosidad del disolvente disminuy con el aumento de la temperatura. De alta temperatura
aument la produccin de astaxantina a partir de Haematococcus pluvialis con CO
supercrtico 2 cuando se cambia la temperatura de 40 a 70 C. [ 37] Este resultado se explica por el
aumento de la presin de vapor del soluto que facilita su transferencia de masa fcil en
CO 2 fase. Resultados similares tambin fueron alcanzados por Machmudahet al. [ 40 ] Los
rendimientos ms altos astaxanthan de Haematococcus pluvialis se lograron con puro CO 2 a
temperaturas relativamente altas, 60-80 C y presiones de aproximadamente 5 MPa [ 32 ] similares
a los encontrados por Aravena et al. [ 37 ] cuando se parte de polvo de alga seca.
Se obtuvieron diferentes temperaturas y presiones ptimas para la extraccin de -caroteno y
zeaxantina de Synechococcus sp debido al hecho de que el -caroteno es no polar, mientras que la
zeaxantina tiene dos grupos hidroxilo y por lo tanto se han determinado temperaturas y presiones
ptimas diferentes para su extraccin . [ 10 ] El rendimiento de -caroteno de Synechococcus sp. fue
el ms alto a la temperatura y presin estudiadas ms altas, siendo de 60 C y 40 MPa,
respectivamente, cuando se utiliz CO 2 puro como disolvente. [ 10 ] Sin embargo, debe indicarse
que slo se obtuvo recuperacin parcial de -caroteno , mientras que cuando el uso de etanol como
un agente de arrastre junto con CO 2facilita mayores rendimientos de -caroteno (vase ms
adelante). Por otra parte, la mayor eficiencia de extraccin de zeaxantina se logr con CO 2 a la
temperatura ms alta y la presin ms baja, 60 C y 20 MPa, respectivamente. [ 10 ] La extraccin
de -caroteno de Dunaliella salina tambin se ha demostrado en supercrticos etano o etileno. [ 25 ]
Tpicamente, los rendimientos de extraccin aumentaron con una densidad creciente de etano o
etileno y se alcanz un rendimiento de aproximadamente el 59% en peso de -caroteno en 20
minutos.
Por otra parte, los rendimientos de los carotenoides fueron bastante bajos a una presin
de CO 2 relativamente baja ya altas temperaturas debido a la disminucin de la densidad y la
solubilidad del carotenoide. [ 8, 9, 23, 35, 68 ] Este efecto fue visible por ejemplo en el rendimiento
final de lutena usando 40 MPa a 70C; era menor a 40 MPa que 30 MPa. La solubilidad de la
lutena fue, sin embargo, ms alta a 40 MPa en comparacin con 30 MPa indicando la presencia de
limitaciones de difusin. Adems, las velocidades de extraccin iniciales fueron las mismas a 30
MPa en el intervalo de temperatura de 60-80 C. Este resultado se explica por el hecho de que la
solubilidad lutena a 80 C fue la tasa de factor limitante, [ 8 ] debido a que la densidad del CO
supercrtico 2disminuye con el aumento de la temperatura a presin constante. [ 74 ] La tasa de
extraccin de lutena y la recuperacin final de lutena despus de 2 h fueron muy bajas
de Chlorella vulgaris a 40 MPa y 80 C, mientras que a 40 C la recuperacin de lutena fue
mucho mayor, y 1,6%, respectivamente (Fig. 12 ). [ 9 ] En el trabajo de Mendes et al. [ 23 ] se
obtuvo un rendimiento inferior de carotenoides a 55 C en comparacin con el rendimiento a 40
C y 20 MPa. Los resultados mostraron una tendencia anloga de baja solubilidad de astaxantina a
tres temperaturas diferentes a baja presin de CO 2 . Anlogamente, a baja presin, cerca de la
presin crtica del CO 2, el aumento de la temperatura disminuy el grado de recuperacin de la
astaxantina a medida que la solubilidad de la astaxantina disminuy con el aumento de la
temperatura debido a la disminucin de la densidad. [ 38 ] Adems, se observ un ligero aumento
en la eficiencia de extraccin de astaxantina de Haematococcus pluvialis a 30 MPa de presin
constante de CO 2 al aumentar la temperatura de extraccin de 40 C a 60 C. [ 35 ]
Figura 12.
Efecto de la temperatura en la cintica para la extraccin de lutena de Chlorella vulgaris a 40 MPa.

[9]
En algunos casos, los rendimientos de carotenoides tambin disminuyeron con el aumento de la
presin. El CO 2 supercrtico se ha investigado en la extraccin de carotenoides de Dunaliella
salina . [ 68 ] Por ejemplo, el rendimiento de carotenoides exhibi un mximo a 40 MPa y 60 C,
mientras que a una presin mayor, 50 MPa el rendimiento de carotenoides fue mucho menor. Este
resultado se explica por el hecho de que la difusividad de disolvente aumenta al aumentar la
temperatura, pero a la misma densidad momento de CO 2disminuye. Adems, la presin de vapor de
los pigmentos tambin aumenta. [ 68 ]
Cintica de extraccin en la extraccin de carotenoides bajo CO 2 supercrtico
La cintica de extraccin de carotenoides se muestran para tres algas diferente se describe con tres
regiones: en el comienzo de la extraccin es lineal con el tiempo que indica una velocidad
constante, que es causada por cualquiera de equilibrio de solubilidad o una resistencia de
transferencia de masa constante (Fig. 13 ). Tambin se demostr que la parte lineal inicial de la tasa
de extraccin a partir de Chlorella vulgaris se puede utilizar para el clculo de la solubilidad de
lutena en CO supercrtico 2 (figura no se muestra aqu). [ 8, 9 ] Los resultados revelaron que la
solubilidad de la lutena aument con el aumento de la temperatura, mientras que a alta temperatura
y baja presin disminuy debido a la baja densidad (vase ms arriba).
Figura 13.
Cintica de extraccin de carotenoides para tres especies de algas diferentes utilizando (a) CO
supercrtico 2 o (b) una mezcla de CO 2 y 5% de etanol a 60 C. [ 68 ]
En la segunda etapa, la tasa de extraccin disminuye debido al hecho de que la mayora de los
carotenoides ya han sido eliminados de la interfaz slido-lquido, mientras que en la tercera regin
la tasa de extraccin es muy baja debido a la necesidad de difundir el disolvente en la alga para
facilitar la extraccin. [ 68 ] Anlogamente a la extraccin de lutena, se concluy la extraccin de
astaxantina de H. pluvialisque en la primera regin se consigui una velocidad de extraccin
constante, seguida por una velocidad menor, en la que la cintica se determina mediante interaccin
de la soluto-matriz con la ayuda de un coeficiente de particin constante. En la tercera regin se
sugiri que el factor determinante es la transferencia de masa de clulas intactas a clulas
rotas. Finalmente se concluy que la resistencia externa de transferencia de masa es mucho ms
baja que la interna. La adicin de etanol como cosolvente puede aumentar la permeabilizacin y la
rotura celular y / o el hinchamiento de la matriz facilitando una alta tasa de transferencia de masa
interna. [ 38 ] Adems, especialmente para la astaxantina se propuso que la solubilidad del ster de
astaxantina es mucho menor que la astaxantina libre.
El tipo de algas tiene un gran efecto sobre la cintica de extraccin durante la extraccin de
carotenoides usando CO 2 pura o una mezcla de CO 2- etanol. Los rendimientos de extraccin
normalizados para tres especies diferentes de algas se muestran como una funcin del tiempo en la
Fig. 13 . La tasa de extraccin de Dunaliella salina con la ausencia de la pared celular mostr una
tasa de extraccin constante probablemente debido a la limitada solubilidad del
carotenoide. Para Nannochloropsis la tasa de extraccin en CO 2 -etanol fue primero lineal, seguido
de tasa de extraccin disminuye debido a la exigencia de disolvente se difunda en el alga para
continuar extraccin adicional a una velocidad baja. [ 68 ]
La selectividad en la extraccin de algas con CO supercrtico 2
La selectividad para la extraccin de carotenoides es alta en la extraccin de algas en CO puro 2 [ 8,
10, 23 ], pero al mismo tiempo puro CO 2 es muy no polar limitando as los rendimientos de los
carotenoides relativamente polares, tales como astaxantina. [ 10 ] En en algunos casos tambin la
solubilidad de los ismeros cis frente a trans del carotenoide es diferente en CO 2 puro, lo que
favorece una extraccin ms rpida del otro ismero. [ 23 ]
Extraccin lutena selectivo de Chlorella Vulgaris se ha demostrado en CO supercrtico 2 . [ 8 ] La
extraccin supercrtica de lutena con 30 MPa de CO 2 a 60 C dio lugar a un rendimiento
relativamente bajo, 0.5 mg g -1 , pero la selectividad completa, mientras que en presencia de
arrastre, como el etanol, el rendimiento de lutena fue de 3 mg g -1 , pero al mismo tiempo se
extrajeron aproximadamente 9 mg g -1 declorofilas en las mismas condiciones. [ 8 ] La extraccin
supercrtica con CO 2 tambin es muy selectiva en la extraccin de -caroteno. [ 10] Se demostr
que la extraccin supercrtica de carotenoides daba tanto carotenoides como clorofilas, pero era
aproximadamente 18 veces ms selectiva para la extraccin de carotenoides que la extraccin
asistida por ultrasonido con metanol [ 67 ].
Diferencia de solubilidad entre cis - y trans ismeros de -caroteno en CO supercrtico 2 facilita la
produccin selectiva de la primera en CO supercrtico 2 , ya que la solubilidad de cis beta-caroteno
es mayor que la de trans --caroteno en CO 2 (Fig . 14 ). [ 23 ] se sabe tambin que cis -form es ms
fcilmente absorbido por el cuerpo humano que trans ismero enfatizando as la importancia
de cis beta-caroteno. Cuando se compara la eficacia de la extraccin de acetona con la eficiencia de
CO supercrtico 2extraccin, se observ que la mejora de dos veces de cis / trans relacin se obtiene
de la extraccin de -caroteno de Dunaliella salina usando supercrtico CO 2 como disolvente.
Figura 14.
Solubilidad de cis - y trans --caroteno en CO 2 a 40 C: ( ) cis --caroteno, ( ) trans --caroteno

y ( ) sinttico trans . --caroteno [ 23 ]
Efecto del codisolvente en la extraccin de carotenoides en CO 2 supercrtico
Los cosolventes tpicamente aumentan la solubilidad del soluto, pero tambin el hinchamiento de la
matriz celular facilitando el transporte ms fcil del soluto fuera de la matriz de alga. Se aplican
cosolventes, por ejemplo, etanol, [ 10, 33, 35, 36, 38, 40, 68 ], aunque tambin se han investigado
otros co-disolventes. [ 73 ] Adems, los enlaces de hidrgeno pueden formarse con un disolvente
medio polar, que se ha utilizado como cosolvente para CO 2 . Por otro lado, si se busca la extraccin
selectiva, la presencia de codisolvente puede disminuir la selectividad de la extraccin. [ 10 ]
El dixido de carbono supercrtico es un disolvente muy no polar y las xantofilas, tales como la
lutena y la astaxantina tienen baja solubilidad en la misma. Un mtodo para aumentar la solubilidad
del soluto es utilizar mezclas de CO 2 -tOH, ya que el etanol ayuda a hinchar la matriz de alga [ 38 ]
y los carotenoides que contienen hidroxilo pueden formar enlaces de hidrgeno con etanol. Como
resultado, se obtuvieron mayores rendimientos de carotenoides en comparacin con el uso de
CO 2 puro , aunque la selectividad de extraccin hacia un carotenoide especfico disminuy en
comparacin con el CO 2 puro . [ 8, 10, 40 ] Este resultado se explic por el hecho de que el etanol
disminucin de la densidad de CO supercrtico 2 . [ 75 extraccin] lutena a partir deScenedesmus
sp. se demostr que era muy eficiente con CO 2 y etanol como adyuvante. [ 73 ] El rendimiento de
lutena aument con el aumento de la presin de CO 2de Scenedesmus sp. a 47,5 C, siendo la
recuperacin mxima de slo 3,1% a 40 MPa. [ 73 ] Sin embargo, cuando se utiliz etanol como
agente de arrastre, el rendimiento aument con el aumento de la fraccin molar de etanol hasta
62,2% utilizando 40% y 70 C. As, se concluy que la extraccin supercrtica de
CO 2 de Scenedesmus sp. no era factible sin el uso de etanol como cosolvente.
Una concentracin de etanol ptimo en CO supercrtico 2 da el rendimiento ms alto de
carotenoides. [ 40, 73 ] La concentracin de etanol ptima en la extraccin de la lutena a partir
de Scenedesmus sp. fue de 20% en moles, lo que proporcion una recuperacin del 76,65% a 40
MPa y 70C, [ 73 ] mientras que slo fue de 5% para la extraccin de astaxantano
de Haematococcus pluvialis con CO 2,dando el mayor rendimiento de astaxantina de 77,9% a 70 C
y 40 MPa dentro 240 min (Figura 15 ). [ 40 ] Tambin se indic que a concentraciones de arrastre
ms altas la densidad de fluido supercrtico disminuy dando una menor eficiencia de extraccin.
[ 40 ]
Figura 15.
Efecto de la concentracin de etanol en CO 2 durante la extraccin de astaxantano a 40 MPa y 70

C. [ 40 ]
En presencia de etanol como codisolvente, el aumento de la temperatura puede en algunos casos
tener un efecto negativo sobre la extraccin supercrtica de CO 2 de la astaxantina
de Haematococcus pluvialis . [ 38 ] La razn de estos resultados podra haber sido la isomerizacin
de la astaxantina en el etanol favoreciendo la oxidacin. [ 38 ] Tambin se encontraron diferentes
temperaturas ptimas y presiones para la extraccin de -caroteno y zeaxantina de Synechococcus
sp debido a sus diferentes solubilidades en la mezcla de CO 2-etanol. La temperatura ptima para la
extraccin de -caroteno fue de 40 C a 20 MPa de CO 2y 5% en volumen de etanol, mientras que
para la zeaxantina la temperatura y la presin ptimas eran 60 C y 20 MPa. [ 10 ]
Un mtodo prometedor para utilizar supercrtico CO 2 es el uso de aceite vegetal como
codisolvente. Los beneficios de este mtodo estn en mayor solubilidad de, por ejemplo, astaxantina
en aceite de soja- mezcla de CO 2 en comparacin con CO 2 puro y la posibilidad de evitar la etapa
de separacin subsiguiente del cosolvente, ya que el carotenoide puede permanecer en los productos
de aceite vegetal . [ 36 ] Este mtodo ha sido utilizado en la preparacin de astaxantina. [ 36 ] la
astaxantina tambin ha sido extrada de Haematococcus pluvialis con CO supercrtico 2 usando
aceites vegetales. [ 36] La cantidad ptima de co-disolvente de soja fue del 10% dando 36% de
eficiencia de extraccin para la astaxantina a 70 C y 40 MPa CO 2 (Fig. 16 ). [ 36 ] La razn de la
eficacia de la extraccin mejorado para la astaxantina era o bien un aumento de la solubilidad de
astaxantina en la mezcla de disolventes o hinchamiento de la matriz de algas facilitando una mejor
transferencia de masa.
Figura 16.
Produccin de astaxantina en la extraccin de Haematococcus pluvialis a 70 C y 40 MPa usando

puro CO 2 o CO 2y aceite de soja como agente de extraccin. [ 36 ]
Efecto del caudal de CO 2
El efecto del caudal de CO 2 es de inters, ya que el efecto de la difusin interna se hace dominante
cuando se utilizan caudales bajos durante la extraccin de astaxantina de Haematococcus pluvialis .
[ 40 ] Por otra parte, el rendimiento de extraccin de astaxantano se increment usando caudales
bajos (Fig. 17 ), mientras que se observ un efecto opuesto en la extraccin de Nannochloropsis
oculata a 50 C y 35 MPa, cuando el rendimiento de carotenoides aument en un 19% con
un caudal de CO 2 creciente de 10 mL min -1 a 20 mL min -1. [ 30 ] Se observaron resultados
anlogos en la extraccin de lutena a 40 C y 40 MPa deChlorella vulgaris [ 9 ]. En este caso, la
resistencia intrapartcula fue dominante, ya que el rendimiento ms bajo se logr a 40 C y 40 MPa
utilizando 5 mL min -1 CO 2 encomparacin con los casos con 3 y 4 mL min -1 CO 2. [ 9 ]. Adems, el
aumento del tiempo de residencia utilizando el bajo caudal del disolvente da mayores cantidades de
carotenoides. [ 40 ]
Figura 17.
Efecto del caudal de CO 2 sobre la extraccin de astaxantano a 40 MPa y 40 C durante 4 h. [ 40 ]

Efecto de la trituracin de algas en la extraccin supercrtica de carotenoides
El efecto del tamao de las partculas de algas y el aplastamiento de las algas ha sido investigado
cualitativamente en algunos estudios [ 33, 35 ]. Estos informes dan solamente informacin
cualitativa sobre el rendimiento de trituracin y extraccin de carotenoides, ya que el tamao de
partcula no se midi. En ambos casos se extrajo Haematococcus pluvialis a 60 C y 300 bares de
CO 2 con un rendimiento de extraccin de 51% a 92% para el rendimiento total de carotenoides
[ 35 ] o de 0,78% a 1,28% en peso [ 33 ], respectivamente. Se indic que el origen de los
rendimientos de extraccin ms altos era un nmero aumentado de clulas interrumpidas o rotura de
pared celular en general.
Modelizacin de la transferencia de masa en la extraccin supercrtica de CO 2 de carotenoides a
partir de algas
En el modelado de la cintica de extraccin, por ejemplo, un modelo de partculas esfricas [ 68 ] y
un flujo de enchufe con masa diferencial se han aplicado varios enfoques diferentes en el modelado
de la cintica de extraccin de diferentes algas. [ 33, 38, equilibrio junto con la fraccin de clulas
rotas e intactas. [ 38 ]
Un modelo de tipo de partcula esfrica fue aplicado por Macias et al. , [ 68 ] en la que el
coeficiente de difusin externa para -caroteno se estim sobre la base de la densidad del
disolvente:
(1)
D e es coeficiente de difusin (cm 2 s -1 ), densidad de disolvente (g cm -3 ) y a y b son parmetros

ajustados. En el caso de CO 2 y EtOH al 5%, la densidad es aditivo relacionado con la fraccin en
masa de cada disolvente. Los coeficientes de difusin interna fueron muy bajos, lo que indica que la
transferencia de masa tiene un gran impacto en la cintica de extraccin. Adems, el nmero Biot
(2)
en la que D m es el coeficiente de difusin interna y k ed designa el coeficiente de transferencia de

masa externa, Bi se calcul que era del orden de 10 7 -10 10 . Se inform que si Bi es inferior a 10, la
transferencia de masa es controlada por lquido intersticial. En el caso de las algas, la difusin
interna es, por tanto, el factor dominante. [ 68 ]
La cintica de extraccin se ha modelado utilizando una ecuacin diferencial de balance de masa
bajo condiciones de flujo de enchufe. La idea principal de este modelo es una discontinuidad
(Fig. 18 ). [ 76 ] Al inicio de la extraccin la concentracin de equilibrio es independiente de la
matriz y es igual a la solubilidad. Durante la extraccin de soluto de clulas rotas en disolvente, el
flujo se describe mediante la siguiente transferencia de masa externa:
(3)
en la que j f es el flujo de clulas rotas a disolvente, k f denota coeficiente de transferencia de masa

en fase fluida, un 0 volumen rea de superficie especfica por unidad de cama de extraccin, y la
concentracin en fase fluida * equilibrio y y concentracin de la fase de fluido. En el segundo paso
la tasa de extraccin disminuye y el flujo es proporcional al transporte de soluto desde clulas
intactas a las rotas y al coeficiente de transferencia de masa interna:
(4)
en la que j s es el flujo de clulas intactas a la rotura de las clulas, k s es el coeficiente de

transferencia de masa de fase deslizado, unas denota el rea de superficie especfica entre las
regiones de clulas intactas y rotas, x 2 es la concentracin de clulas intactas, mientras que x 1 es la
concentracin de clulas rotas. La recuperacin de la astaxantina fue descrita como una funcin de
la temperatura, presin y concentracin de etanol en CO supercrtico 2 . [ 38 ] Los parmetros
ajustados en el modelo de Sovova [ 76 ] fueron resistencias de transferencia de masa internos y
externos, as como la solubilidad de la astaxantina, y sy la concentracin de transicin de
astaxantina, x t. Los resultados revelaron que la transferencia de masa interna aument en 10 veces
utilizando etanol como un agente de arrastre comparacin con el caso usando puro CO 2 . La
transferencia de masa externa fue alta, mostrando que tiene un efecto menor en la extraccin.
Figura 18.
La curva de equilibrio para el soluto: y es la concentracin de la fase fluida, x es la concentracin

inicial en las clulas rotas, A y B denotan el caso y = 1, C: la concentracin de discontinuidad, la
cantidad inicial de soluto no es suficiente para la extraccin y D: todo el soluto interacta con la
matriz. [ 76 ]
SAPONIFICACIN SEGUIDA POR EXTRACCIN PARA SEPARACIN DE
CAROTENOIDES
La saponificacin directa de algas con lcali seguida de extraccin para fraccionar carotenoides ha
sido estudiada en varias publicaciones [ 13, 20, 31 ] Los principales parmetros han sido la
concentracin de lcali [ 20 ] y el tiempo de extraccin. [ 13 ] se ha aplicado como disolvente. [ 13 ]
Adems, se propuso un proceso de extraccin-saponificacin en dos etapas para la extraccin de
astaxantina de Haematococcus . [ 39 ]
Se ha propuesto un mtodo optimizado para la recuperacin de lutena de Scenedesmus
almeriensis, compuesto de las siguientes etapas: ruptura celular con fresado de bolas y almina
seguida de tratamiento alcalino y extraccin a contracorriente con hexano, que es un disolvente
aceptado por la industria alimentaria (Figura 19 ). [ 13 ] La concentracin de KOH que daba el
mayor rendimiento de lutena fue de 4% en peso en agua para 100 g L -1algas durante 5 min de
saponificacin a temperatura ambiente bajo agitacin. Adems, debe tenerse en cuenta que la
degradacin de la lutena se puede evitar utilizando atmsfera de baja temperatura y argn. El
tratamiento alcalino facilita la disrupcin celular completa despus del molido de perlas en
presencia de almina, as como da lugar a la formacin de lutena libre, ya que parte de la lutena
est esterificada en algas. Tambin se seal que el exceso de lcali puede daar los
carotenoides. Finalmente, el uso de disolvente para la recuperacin de lutena al 99% tuvo una
relacin S / R de 2 en un proceso de extraccin en contracorriente para Scenedesmus
almeriensis (Figura 19). Este proceso fue capaz de producir a partir de 1 kg de alga seca 10 g de
lutena junto con -caroteno y violaxantina. Despus de la extraccin de lutena, el hexano se
elimin por evaporacin y los carotenoides se estabilizaron en aceite de oliva. Otro mtodo de
saponificacin que aplica 6% en peso de KOH en etanol a 50C durante 30 min fue propuesto por
Shibata et al. [ 45 ] Despus de la saponificacin de la extraccin se realiz con ter junto con
Na 2 SO 4 anhdrido. La fraccin de carotenoide bruto se separ por evaporacin de la fase no
polar. Posteriormente, el producto carotenoide se purific por cromatografa ultrarrpida sobre gel
de slice (vase la seccin 'Procesado aguas abajo'). [ 45 ]
Figura 19.
El mtodo propuesto para la extraccin de carotenoides de Scenedesmus almeriensis adaptado de

Cern et al. [ 13]
Un proceso de dos pasos para la extraccin de astaxantina libre fue propuesto por Kang et al. [ 39 ]
En este proceso, la alga se extrajo primero rpidamente con dodecano a temperatura ambiente
seguido de extraccin con metanol que contena una cantidad ptima de NaOH, 0,02 mol L -1 , en la
oscuridad a 4 C con el fin de obtener astaxantina libre. Se declar que la astaxantina se degrada
con una concentracin alcalina ms alta. La recuperacin total de astaxantina en el primer paso se
logr en 60 min, mientras que la recuperacin total de astaxantina fue de 85% en 12 h de extraccin
con metanol. La selectividad hacia la astaxantina libre fue del 98% y se separ por sedimentacin
por gravedad.
PROCESO SIMULTNEO PARA LA PRODUCCIN DE BIODIESEL Y LUTEIN LIBRE
Un proceso simultneo para la produccin de biodiesel y lutena fue propuesto por Prommuak et
al. [ 14 ] El rendimiento mximo de biodiesel calculado por lpido de algas fue de 33,6% en peso
durante 4 h de transesterificacin con metanol a 60 C utilizando un 6% de lcali como
catalizador. Dado que la lutena est en forma de steres lipdicos en Chlorella vulgaris , se forma
lutena libre durante el in situtransesterificacin de lpidos. Para la separacin de lutena y biodiesel
se sugiri el siguiente mtodo: se aadi diclorometano o cloroformo a la mezcla de productos,
seguido por la adicin de agua con la relacin mezcla de cloroformo: agua: 10: 10: 9. Se indic que
era necesaria la adicin de cloroformo para evitar la formacin de una capa gruesa compuesta de
jabn, agua y glicridos. Se form un sistema bifsico, en el que la fase ligera MeOH / agua
contena KOH, jabn y glicerol, mientras que la fase inferior estaba compuesta de lutena libre,
biodiesel y glicridos sin reaccionar en cloroformo. En una etapa consecutiva, el cloroformo se
evapor y los productos, lutena-biodiesel se separaron por adicin de 85% en peso de EtOH / agua
y despus hexano en la relacin 1: 2. La fase rica en hexano contena glicridos sin reaccionar y
biodisel, mientras que la lutena permaneci en EtOH acuoso. Cuando se aadi ms agua como
anti-disolvente a la fase acuosa, la lutena precipit y se filtr. Como resultado se obtuvo 85-91% de
lutena libre con pureza de 90-98%. Se indic adems que los disolventes podran ser reciclados y
que el proceso de biodisel podra ser econmicamente ms factible en este tipo de proceso
integrado.
PROCESAMIENTO DE ALGAS DE EXTRACTOS DE ALGAS
La separacin y purificacin de los carotenoides es un paso importante que tambin define
parcialmente la viabilidad del proceso. Existen varios mtodos que podran utilizarse para la
separacin y purificacin de productos, tales como separacin cromatogrfica, [ 20, 45 ] adicin de
precipitacin inductora de anti-disolvente seguida de filtracin, [ 14, 54 ] cromatografa de particin
centrfuga [ 63 ] y separacin lquido-lquido [ 64 ] Normalmente se han utilizado separaciones
cromatogrficas para la produccin de fracciones de carotenoides puros. En algunos casos, la
separacin del producto puede evitarse si la extraccin se ha realizado directamente en aceite
vegetal [ 26, 36, 39, 42 ] como el crtamo [ 42 ] o el aceite de jojoba.26 ] El uso de un proceso anti-
solvente supercrtico que involucra CO 2 tambin fue beneficioso para purificar extractos. [ 30 ]
La precipitacin inducida por adicin de anti-disolvente ya se ha descrito en la produccin de
lutena. Adems, la fucoxantina se extrajo a 25 C durante 30 minutos desde el rizoide
de Laminaria japonica con dimetilsulfxido, que tiene un punto de ebullicin alto, 189 C. A partir
de entonces se aadi acetato de etilo a la mezcla junto con relativamente concentrada
(NH 4 ) 2 SO 4 [ 54 ] El papel de sulfato de amonio era para mejorar la transferencia de pigmentos en
la fase de acetato de etilo. En un paso sucesivo se evapor agua y se filtr sulfato de amonio para
recuperar la fase de DMSO. Se propone que este mtodo sea adecuado para la preparacin a gran
escala de fucoxantina.
Las tcnicas de cromatografa instantnea que utilizan gel de slice se han aplicado tradicionalmente
para la purificacin de carotenoides. [ 20, 45, 50 ] Se ha demostrado la escala de la purificacin de
lutena con cromatografa instantnea usando una columna de 29 cm de dimetro y 1 m de longitud
con 10 kg de gel de slice , demostrado por Shibata et al. [ 45 ] Se saponific polvo de Chlorella
secado por pulverizacin (5 kg) y se extrajo en un reactor de 60 litros. El rendimiento de la lutena
fue de 50%, aproximadamente 6 g con una pureza del 99%. [ 45 ] Adems, se indic que la
zeaxantina es la impureza principal de la lutena, pero esta ltima se separ de la primera usando
cromatografa en columna ultrarrpida con gel de slice. 45] El extracto de fucoxantina se purific
tambin con cromatografa en gel de slice usando n-hexano / acetona como disolvente de
elucin. La pureza final de la fucoxantina fue de 86,7% y, por lo tanto, el producto se purific
adicionalmente con HPLC preparativa. [ 50 ] Por otra parte, se indic en Kim et al. [ 63 ] que la
cromatografa en columna de gel de slice ha sido mucho tiempo y cromatografa de particin
centrfuga se recomienda para el funcionamiento a gran escala (vase ms adelante).
La separacin de varios extractos de microalgas se puso a prueba en la cromatografa
contracorriente de alta velocidad utilizando un sistema disolvente de dos fases con etilo-etanol-agua
hexano-acetato de (5: 5: 6: 4). Como disolvente [ 64 ] La fase acuosa se una fase estacionaria,
mientras que la fase orgnica superior era una fase mvil. Tpicamente las purezas de fucoxantina
variaron en el intervalo 86,8-94,8%. Adems, la carga de muestra mayor disminuy la pureza del
producto. El beneficio del mtodo fue la separacin de carotenoides en un tiempo relativamente
corto, dentro de los 75 minutos.
Se demostr la cromatografa de separacin centrfuga para la separacin de fucoxantina de Eisenia
bicyclis . [ 63 ] Como disolvente se us n-hexano-acetato de etilo-etanol-agua con la relacin 5: 5:
7: 3 y la recuperacin de fucoxantina fue de 87% con pureza total 98% basado en el peso seco en un
procedimiento de dos etapas. Tambin se seal que ya existe una cromatografa de particin
centrfuga de escala piloto de 5 L para propsitos de ampliacin.
Se purific un precipitado anti-disolvente supercrtico de diclorometano que contena carotenoide
Extracto de Soxhlet usando 20 MPa CO 2 a 40 C. En comparacin, se consigui una pureza de
zeaxantina del 93,8% para la purificacin cromatogrfica en columna, se concluy que el mtodo
anti-disolvente supercrtico es mejor debido a la menor cantidad de disolventes necesarios, as como
al menor tiempo [ 30].
PROPIEDADES DE LOS EXTRACTOS CAROTENOIDOS Y SU ESTABILIDAD
Actividades antioxidantes y antimicrobianas y poder reductor del extracto de algas
Las actividades antioxidantes y antimicrobianas son importantes para los carotenoides que se
utilizan para los aditivos que promueven la salud. Se han utilizado varios mtodos para investigar la
actividad antioxidante [ 28, 32, 46, 50 ] y antimicrobiana, [ 27 ] la actividad de los fagocitos [ 30 ] y
el poder reductor del extracto. [ 50 ] Las actividades antioxidantes se han medido con 2,2- de
hidrato de difenil-2-picrilhidrazil (DPPH) o 2,2'-azino-bis (cido 3-ethylbenz-tiazolina-6-sulfnico
(ABTS) las pruebas de ensayo [ 24, 32 ] en el ensayo de captacin de radicales DPPH la CE 50 valor
para cada uno de los carotenoides se ha medido. Se da la concentracin eficaz a la que se han
depurado 50% de los radicales DPPH. [ 24] En este ltimo ABTS se ha convertido en ABTS .
+
Radical. La cantidad de radicales se ha dado como un valor TEAC, que compara la capacidad
antioxidante con un estndar antioxidante soluble en agua Trolox. [ 24, 28, 34 ] Adems, tambin
un valor denotado como una concentracin de una muestra que produce una reduccin del 50% de
la absorbancia radical (IC 50). [ 32 ] Adems, se ha investigado la potencia reductora del extracto
mediante la reduccin del Fe 3+ frrico al Fe 2+ ferroso en la muestra. [ 50, 77 ]
Las actividades antioxidantes de los extractos de algas dependen del tipo de disolvente de
extraccin y de la temperatura. Un ejemplo es la depuracin de radicales DPPH probada para
el extracto de D. salina . [ 24 ] Se han reportado valores de antioxidantes de TEAC para varios
extractos originados en algas (Tabla 2 ). [ 24, 28, 34, 50 ] Las actividades para el extracto que
contiene lutena, zeaxantina y caroteno estaban muy cerca entre s, estando en el rango de 0,43-0,45
TEAC mmol g -1 . [ 24 ] Adems, la actividad TEAC de Synechocystis spel extracto mostr un valor
mximo cuando se utiliz etanol o agua como extractante con una temperatura de extraccin
creciente, mientras que para el hexano la actividad TEAC ms alta se alcanz a la temperatura ms
alta, 200C. La mxima actividad antioxidante fue 0,466 mmol Trolox g -1 extrae de Synechocystis
sp con etanol a 150 C, mientras que incluso una mayor actividad antioxidante, 0,565 mmol Trolox
g -1 , se logr utilizando agua a 200 C como agente de extraccin. [ 27 ] Tambin se inform que
la actividad Trolox del extracto de Haemotococcus pluvialis aument de 0,168 a 0,434 mmol de
Trolox g -1 cuando el extracto preparado con etanol a 150C y 10,3 MPa se hidroliz
enzimticamente.34 ]. Este resultado mostr claramente que la astaxantina esterificada exhibe una
menor actividad antioxidante en comparacin con su contrapartida libre. La razn de esto podra ser
la capacidad de la cetona de someterse a la isomerizacin del ceto-enol y el polieno dihidroxi
conjugado resultante con un tomo de hidrgeno es capaz de romper la reaccin radical. [ 88 ] En
el extracto de Odontella aurita el carotenoide principal era fucoxantina, propiedades. [ 50 ] El
agente antioxidante eficaz se identific como todo- trans -fucoxanthin. [ 50 ] Adems, IC 50 valores
que describen actividades antioxidantes de Haematococcus pluvialisfueron determinadas y los
resultados mostraron que la actividad antioxidante ms alta (IC 50 = 1,83 mg L -1 se logr) para los
extractos preparados a la temperatura ms baja y la ms alta presin, 40 C y 60 MPa, en CO
supercrtico 2 , durante 4 h. [ 32 ] por otro lado, existe un ptimo para rendimiento de la extraccin y
la actividad antioxidante y as fue finalmente recomend que las condiciones ptimas para ambos
parmetros seran 70 C, 50 MPa y 4 h en qu condiciones IC 50 valor fue de 1,54 mg L ^ {- 1} .
Tabla 2. Comparacin de la actividad antioxidante (dada como equivalente de Trolox) y potencia
reductora del extracto de algas de D. salina con las de las normas comerciales,
todas las formas trans de -caroteno, -caroteno, lutena, zeaxantina y tocoferol. Adaptado de [ 24 ]
Compuesto TEAC (mmol / TE / g de muestra)
-tocoferol 1,42 \ pm 0,09
Extracto de algas 0,76 \ pm 0,09
Todos los trans --caroteno 0,45 \ pm 0,08
Todas las zeaxantinas trans 0,44 \ pm 0,06
Todas las trans -lu- 0,43 \ pm 0,07
Todos los trans --caroteno 0,45 \ pm 0,06
Las actividades antimicrobianas de Synechocystis sp . extracto fueron los ms altos utilizando el

agua como un agente de extraccin seguido de hexano y etanol. [ 27 ] Por otro lado, la temperatura
de extraccin no afect mucho la actividad antimicrobiana del extracto. [ 27 ]
Diferentes carotenoides separadas por extraccin a presin con hexano y el petrleo etanol ter se
investigaron mediante la realizacin de prueba de DPPH como una funcin de la temperatura de
extraccin. [ 65 ] CE 50 valores fueron ms altas con agua seguido de ter de petrleo, hexano y
etanol y las correspondientes temperaturas de extraccin ptimas para estos disolventes eran 170
C, 103 C, 90 C y 111 C, respectivamente.
Se compar la potencia reductora de fucoxantina extrada de Odontella aurita con acetona a
temperatura ambiente con la de cido ascrbico y se indic que la respuesta de fucoxantina que
daba la absorbancia a 700 nm con la concentracin de 1 mg ml -1 era 1, mientras que la de ascrbico
fue de 3,4 [ 50 ]. El extracto de algas de Dunaliella salina preparado mediante extraccin de mezcla
de alga hexano / acetona / etanol 2: 1: 1 a temperatura ambiente durante 24 h seguido de su
saponificacin con KOH / metanol mostr un poder de reduccin ligeramente superior comparado
con con todas las trans --caroteno, todas las trans- lutena, todas las trans --caroteno y todas
las transzeaxantina (Tabla 2 ). [ 24 ]
Estabilidad de los carotenoides y las clorofilas
La estabilidad de los carotenoides es uno de los parmetros cruciales en la consideracin del

desarrollo de productos comerciales a partir de extracto de algas. Algunos carotenoides son
trmicamente y qumicamente lbiles. [ 25, 52 ] Se deben optimizar varios parmetros del proceso
para producir productos de alta calidad, estables frente a la exposicin a la luz y al calor durante un
tiempo prolongado. En algunos casos se han aadido agentes de estabilizacin al producto. En todos
los pasos del proceso debe tenerse especial cuidado en el desarrollo de procesos de produccin de
carotenoides, por ejemplo, el secado no se recomienda con calor o sol [ 26 ], sino mediante la
liofilizacin. La extraccin debe realizarse a bajas temperaturas [ 21] en la oscuridad a fin de
minimizar la degradacin de los carotenoides y los productos deben almacenarse tambin a bajas
temperaturas en la oscuridad. [ 20 ]
Algunos carotenoides son ms estables que otros dependiendo de la estructura qumica del
carotenoide. La violaxantina y la antralaxantina son sensibles a altas temperaturas, mientras que las
y caroteno, as como la -criptoxantina, toleran temperaturas ms altas [ 52 ], aunque se ha
afirmado que el -caroteno es fcilmente oxidable e isomerizado [ 25 ] y degradado bajo el sol o
calor. [ 26 ] astaxantina Natural presenta una estabilidad superior a la sinttica promoviendo as el
desarrollo de tcnicas de separacin para los carotenoides naturales. [ 40] Tambin en un estudio
comparativo de la extraccin de lutena y -caroteno bajo condiciones presurizadas con etanol, se
observ que el -caroteno era menos estable que la lutena a temperaturas ms altas despus de
tiempos prolongados. [ 12 ]
Durante el proceso de extraccin pueden degradarse algunos carotenoides, por ejemplo la lutena
[ 21 ], mientras que otros han sido ms estables, por ejemplo la fucoxantina [ 53 ] y la astaxantina.
[ 21 ] La lutena es sensible al oxgeno y se isomeriza fcilmente [ 21 ] y su estabilidad a la
temperatura tambin es menor que la de la astaxantina, ya que se obtuvieron rendimientos bajos de
lutena en la extraccin presurizada de lutena de Haematococcus pluvialis a temperaturas ms altas.
[ 21 ] Los rendimientos de lutena fueron ligeramente menores a temperaturas ms altas bajo la
extraccin lquida presurizada de Haematococcus pluvialisdespus de tres ciclos de extraccin
durante 5 min con acetona a 10,3 MPa en el intervalo de temperaturas de 20-100 C, mientras que
la astaxantina era estable en las mismas condiciones. [ 21 ] Sin embargo, la fucoxantina fue estable
durante la extraccin con lquido a presin a 110C. [ 53]
Tambin se ha investigado la estabilidad de los extractos contra la luz y el calor. [ 20, 67 ] En
algunos casos se agreg al extracto un agente de estabilizacin, hidroxitolueno butilado. Los
resultados mostraron que la lutena es muy sensible a la luz (Figura 20 ), incluso en presencia de
agentes de estabilizacin, [ 20 ] mientras que el efecto de la temperatura no fue tan prominente en el
rango de temperatura de 20-25 C. Tambin se ha sealado [ 67 ] que los extractos deben
almacenarse a 4 C en ausencia de luz.
Figura 20.
Efecto de (a) luz y (b) temperatura sobre la estabilidad de la lutena. En algunos casos se ha
utilizado hidroxitolueno butilado (BHT) como agente de estabilizacin. [ 20 ]
POTENCIAL PARA LA PRODUCCIN COMERCIAL DE CAROTENOIDES DE ALGAS
Los carotenoides tienen un alto potencial de mercado segn lo informado por la investigacin de la
BBC en 2011. [ 78 ] En su estudio, el valor de mercado mundial de carotenoides fue dado en 2010 y
estimado en 2018 mostrando que el valor de mercado disminuye como sigue: -caroteno> lutena>
zeaxantina. [ 78 ]
La produccin comercial de -caroteno ya se ha realizado a partir de Dunaliella salina . Se prefiere
el -caroteno natural, ya que contiene tambin cis --caroteno que exhibe propiedades
anticancergenas. [ 79 ] El mercado de -caroteno es el mayor entre los carotenoides y ha
aumentado continuamente a 260 M $ en 2010. [ 78 ] se ha demostrado que a partir de 1 m 3 medios
de cultivo de Dunaliella se produjo 114,1 g de -caroteno por lo que requiere 8,8 m 3 medios para la
produccin de 1 kg beta-caroteno con un precio de venta de 3.000 US $ en 2012. [ 26 ]
El mercado de lutena en los Estados Unidos se estim en ms de 230 M $ en 2010. [ 78 ] Se
recomienda utilizar 4 mg de lutena / zeaxantina diariamente en la dieta con el fin de prevenir la
regeneracin macular relacionada con la edad. [ 80 ]
La astaxantina se puede producir qumicamente, pero se ha indicado que slo se permite el producto
natural para el consumo humano. [ 37 ] La astaxantina se ha extrado de H. pluvialis [ 5 ] y ha sido
aceptada para su uso como aditivo alimentario E161b. [ 20 ] astaxantina tambin ha sido reconocida
para su uso como un aditivo de color para los peces salmonish por la FDA. [ 5 ] la astaxantina es
ms eficiente que el -caroteno en la neutralizacin de los radicales libres y protege contra la
epoxidacin de steres metlicos de cidos grasos insaturados. [ 81 ] adems, el antioxidante
actividad de la astaxantina es 500 veces mayor que la de la zeaxantina, lutena y -caroteno. [ 82]
Astaxantina estaba en la tercera posicin, su valor de mercado era de 225 M $ en 2010.
La produccin a escala comercial de fucoxantina ha sido reportada de partes de residuos
de Laminaria Japonica , de las cuales el carotenoide fue extrado con etanol seguido de separacin
de la columna de gel de slice. [ 83 ] La recuperacin de fucoxantina fue 82% de 10 t de partes de
desecho dando 1490 g de fucoxantina . [ 84 ] Tambin se propuso que la extraccin de fucoxantina
de partes de desecho de Laminaria japonica con DMSO fuera una base para la produccin
comercial de fucoxantina. [ 54 ]
CONCLUSIONES
La extraccin de carotenoides de algas ha sido objeto de intensos esfuerzos de investigacin durante
los ltimos aos, ya que los carotenoides tienen varias aplicaciones como agentes promotores de la
salud y exhiben propiedades antioxidantes y anticancergenas. Aunque los carotenoides sintticos
son relativamente baratos y fciles de preparar, los naturales son ms estables y tienen los ismeros
biolgicamente activos deseados.
Se sabe que la extraccin convencional de algas requiere grandes cantidades de disolventes, varias
etapas de extraccin y tiempos de extraccin prolongados, por lo que varios mtodos de extraccin
alternativos, tales como extracciones por ultrasonidos y microondas, as como extraccin en
condiciones presurizadas y con gases supercrticos, por ejemplo CO 2 , etano y etileno. Algunas
especies de algas son fciles de extraer debido a la falta de paredes celulares, mientras que otras
especies, por ejemplo Chlorellaespecies, tienen una pared celular gruesa. En este ltimo caso es
necesario un pretratamiento de algas para conseguir altos rendimientos de extraccin. La extraccin
de algas requiere tambin un cuidado especfico, ya que algunos carotenoides son termolbiles y
sensibles a la exposicin a la luz. Adems, en varios casos los rendimientos de extraccin y las
actividades antioxidantes han sido inversamente proporcionales, lo que indica que las condiciones
de extraccin deben ser optimizadas.
La extraccin asistida por ultrasonido facilita la extraccin ms eficiente de carotenoides de algas
debido a la rotura de la pared celular con la ayuda de la cavitacin. La extraccin de lquidos a
presin tambin es adecuada para la extraccin de algas, ya que acorta el tiempo de extraccin y
reduce el uso de disolventes. Adems, las extracciones pueden realizarse en ausencia de luz. La
extraccin supercrtica es un mtodo respetuoso con el medio ambiente que evita el uso de
disolventes. Adems, es altamente selectivo en la extraccin de carotenoides. El inconveniente en la
extraccin supercrtica de, por ejemplo, -caroteno con CO 2 es su baja solubilidad en CO 2 . En este
caso, tpicamente se ha utilizado etanol como co-disolvente. Cintica de extraccin supercrtica de
CO 2 tambin se ha modelado utilizando un modelo de partculas esfricas o alternativamente un
modelo de flujo de tapn con una discontinuidad en las concentraciones aplicando la fraccin de
clulas rotas e intactas.
Adems del pretratamiento seguido de la extraccin, se han demostrado otros mtodos, como la
saponificacin de steres de carotenoides seguida de extraccin y produccin simultnea de
biodiesel y lutena. Dado que la extraccin de carotenoides no ha sido ampliamente utilizada
todava a escala industrial, se han resumido ejemplos de procesos de procesamiento, estabilidad y
actividades biolgicas, as como esfuerzos de ampliacin.
EXPRESIONES DE GRATITUD
Este trabajo forma parte de las actividades del Centro de Qumica de Procesos de la Universidad
bo Akademi (-PCC) dentro del Programa del Centro Finlands de Excelencia (2000-2011)
nombrado por la Academia de Finlandia.
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Estudio comparativo de los mtodos de extraccin para la recuperacin de

carotenoides de algas: cintica de extraccin y efecto de diferentes parmetros de

La extraccin de carotenoides de algas se encuentra actualmente bajo intensa investigacin debido

Imgenes de microscopa electrnica de transmisin de (a) Haematococcus pluvialis , barra de

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Los carotenoides exhiben propiedades diferentes, por ejemplo hidrofobicidad y solubilidad, as

1. a Polvo seco, en presencia de retraso hdrico de extraccin.

Astaxantina Haematococccus Aceite de oliva, 30 25

MW, 300 W, aceite

Zeaxantina Synechococcus sp. CO 2 + 5% v / v de 60 20

Chlorella elipsoidea Etanol 115,4 10,3

Synechocystis sp. Etanol 100 10,3

-caroteno Dunaliella salina Hexano / acetona / 25 0,1

Synechocystis sp. Etanol 100 10,3

Lutena Chlorella 0,5 g de alga y 20 160 10,3

Chlorella EtOH, 6% de KOH 50 3

Scenedesmus obliquus Pretratamiento del 25

Fucoxantina Phaeodactylum Etanol 25

Eisenia bicyclis Etanol / agua 90% 110 10,3

Odontella aurita Etanol, 30/1 (v / p) 45

Undaria pinnatifida Extraccin asistida 60

Cylindrotheca Extraccin asistida

Laminaria Japonica DMSO, 1 g de 25

Carotenoides Dunaliella salina DMF, extraccin 25

Extraccin Astaxanhin ha llevado a cabo con extraccin convencional directamente en aceite

Rendimiento de fucoxantina en la extraccin de Odontella aurita con diferentes disolventes a 25

La extraccin de carotenoides se ha hecho convencionalmente con diferentes disolventes, por

Extraccin asistida ultrasonido se ha informado de que un mtodo alternativo eficiente para la

La extraccin asistida por microondas de carotenoides ha sido raramente investigada. Los

Efecto de diferentes solventes en (a) el rendimiento de extraccin de antioxidantes y (b) CE 50 valor

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Eficiencia de extraccin de fucoxantina en la extraccin lquida presurizada de Eisenia bicyclis con

(a) Efecto de la temperatura sobre el rendimiento de la lutena en la extraccin de Chlorella

Efecto de la temperatura en la cintica para la extraccin de lutena de Chlorella vulgaris a 40 MPa.

Solubilidad de cis - y trans --caroteno en CO 2 a 40 C: ( ) cis --caroteno, ( ) trans --caroteno

Efecto de la concentracin de etanol en CO 2 durante la extraccin de astaxantano a 40 MPa y 70

Produccin de astaxantina en la extraccin de Haematococcus pluvialis a 70 C y 40 MPa usando

Efecto del caudal de CO 2 sobre la extraccin de astaxantano a 40 MPa y 40 C durante 4 h. [ 40 ]

D e es coeficiente de difusin (cm 2 s -1 ), densidad de disolvente (g cm -3 ) y a y b son parmetros

en la que D m es el coeficiente de difusin interna y k ed designa el coeficiente de transferencia de

en la que j f es el flujo de clulas rotas a disolvente, k f denota coeficiente de transferencia de masa

en la que j s es el flujo de clulas intactas a la rotura de las clulas, k s es el coeficiente de

La curva de equilibrio para el soluto: y es la concentracin de la fase fluida, x es la concentracin

El mtodo propuesto para la extraccin de carotenoides de Scenedesmus almeriensis adaptado de

Compuesto TEAC (mmol / TE / g de muestra)

-tocoferol 1,42 \ pm 0,09

Extracto de algas 0,76 \ pm 0,09

Todos los trans --caroteno 0,45 \ pm 0,08

Todas las zeaxantinas trans 0,44 \ pm 0,06

Todas las trans -lu- 0,43 \ pm 0,07

Todos los trans --caroteno 0,45 \ pm 0,06

Las actividades antimicrobianas de Synechocystis sp . extracto fueron los ms altos utilizando el

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