UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, Decana de Amrica)

FACULTAD DE QUMICA E ING. QUMICA

E.A.P. QUMICA 07.1
DEPARTAMENTO ACADMICO DE QUMICA ANALTICA E INSTRUMENTACIN
LABORATORIO DE QUMICA ANALTICA CUALITATIVA

PRCTICA N 06: CROMATOGRAFA

HORARIO: MARTES 13:00 17:00

PROFESORA: ELIZABETH ESPINOZA DESCALZO

FECHA DE ELABORACIN: 18 DE OCTUBRE DE 2016

FECHA DE ENTREGA: 1DE NOVIEMBRE DE 2016

INTEGRANTE:

14070083 MEGO DE LA CRUZ, FROY KEVIN

14070085 MOULET VALLEJOS, JHULLY

LIMA-PER
2016-II
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TABLA DE CONTENIDO

Resumen ............................................................................................................................................................. 2

Introduccin ....................................................................................................................................................... 3

Principios tericos .............................................................................................................................................. 4

Cromatografa en papel .................................................................................................................................. 6

Reacciones qumicas........................................................................................................................................... 6

Detalles experimentales ..................................................................................................................................... 7

Discusin de resultados ...................................................................................................................................... 9

Conclusiones ..................................................................................................................................................... 11

Recomendaciones ............................................................................................................................................ 11

Bibliografa........................................................................................................................................................ 11

Anexos .............................................................................................................................................................. 12

Cromatografa en Columna .......................................................................................................................... 12

Cromatografa lquido-slido (capa fina) ...................................................................................................... 13

Cromatografa de gases ................................................................................................................................ 13

Cromatografa Liquida de alta eficiencia o rendimiento (HPLC) .................................................................. 14

Cromatografa de intercambio inico........................................................................................................... 15

Cromatografa por Permeabilidad en Gel ..................................................................................................... 15

Cromatografa de Afinidad ........................................................................................................................... 16

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RESUMEN

La prctica de CROMATOGRAFA se realiz con el objetivo de utilizarla de manera ANALTICA, para identificar y
cuantificar las sustancias que componen una muestra problema. Para dicha realizacin se aplic la tcnica
de cromatografa de papel; ya que es la ms sencilla, la ms rpida y tiene un bajo costo para su realizacin.

Antes de iniciar el experimento, se prepar 5 soluciones entre ellas se encontraron una muestra de cobalto
(Co+2), nquel (Ni+2), hierro (Fe+3), cobre (Cu+2), y una mezcla de todas las anteriores ya mencionadas. Luego
de ello se prepar la fase mvil utilizando 90mL de acetona, 5mL de agua destilada y 5mL de cido
clorhdrico 12M dejndose lista para usar (la mezcla preparada debe estar tapado con una bolsa para que no
se evapore la acetona).

Durante la cromatografa de papel cortamos una tira de papel filtro y la marcamos apropiadamente
colocando la muestra en un punto marcado (usando una bagueta) para su posterior ascenso. En un tubo de
ensayo grueso (cmara cromatogrfica), aadimos aproximadamente 5mL de la fase mvil y colocamos la
tira de papel de forma apropiada y sellamos con un corcho. Luego de que el frente de solvente alcanz la
distancia, se retir el papel, se midieron las distancias de las 5 muestras y se calculo el valor de Rf que
result ser 0.40 para el cobalto, 0.55 para el cobre, 0.81 para el hierro y 0.11 para el nquel que comparado
con sus respectivos valores tericos nos resulta un porcentaje de error de 22.22% para el Nquel, 16% para
el hierro, 9.83% para el cobre, 7.5% para el cobalto.

A partir de los resultados concluimos que los cationes (Ni+2) y (Co+2) tienen mayor afinidad con el papel
debido a que fueron los primeros en aparecer en el cromatograma, mientras que (Cu +2) y (Fe+3) fueron los
ltimos en visualizarse es decir estos cationes son ms afines al eluyente. Finalmente se recomienda ser
precavidos al momento de hacer la corrida del cromatograma para ello la muestra debe colocarse lo ms
centrado posible para evitar el efecto orilla (el efecto orilla consiste en la evaporacin mayoritaria del
solvente en las orillas del papel, debido a la mayor rea superficial, esto ocasiona que la muestra ascienda
de manera irregular alterando la cromatografa).

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INTRODUCCIN

La mayora de los mtodos de anlisis son en los casos ms favorables selectivos, pero no especficos. Por
ello cuando se trata de muestras complejas la separacin del analito de las posibles interferencias es una
etapa esencial. Aun mejor sera la posibilidad de determinar varios analitos despus de un separacin
previa.

Uno de los mejores mtodos para conseguir esa separacin, y posiblemente, el ms utilizado es la
cromatografa. Este conjunto de tcnicas permite la separacin de componentes estrechamente
relacionados en mezclas complejas. La cromatografa en sus orgenes era exclusivamente una tcnica de
separacin que se transformo en tcnica de anlisis cuando se acopl con un dispositivo para monitorizar las
especies qumicas que se iban separando. As, la cromatografa se ha convertido en un mtodo analtico de
primer orden para separar, identificar y cuantificar los compuestos presentes en muestras lquidas o
gaseosas (para muestras slidas se requiere una etapa de disolucin o extraccin)

La historia de la cromatografa sobre papel, en particular, proviene de la antigedad e incluye observaciones

de Plinio, Runge, Schoenbein y Goppelsroeder. En 1906, el botnico ruso Mikhail Tswett realiz un
experimento que condujo al descubrimiento de lo que hoy conocemos como CROMATOGRAFA. Coloc un
extracto de pigmentos vegetales en la parte superior de una columna de vidrio rellena de carbonato de
calcio (CaCO3). Al agregar ter, observ que la mezcla original se separaba en diversas bandas coloridas que
descendan a travs de la columna a diferentes velocidades. Un rasgo caracterstico de la cromatografa es la
presencia de dos fases; dispuestas de tal manera que mientras una permanece estacionaria dentro del
sistema (fase estacionaria), la otra se desplaza a lo largo de l (fase mvil). La clave de la separacin en
cromatografa es que la velocidad con la que se mueve cada sustancia depende de su afinidad relativa por
ambas fases (equilibrio de distribucin). En el experimento de Tswett, la separacin de los pigmentos
vegetales se logr gracias a que cada uno de ellos tena una afinidad diferente por las fases. En general, los
componentes ms afines a la fase estacionaria avanzan lentamente (ms retenidos) mientras que los ms
afines a la fase mvil (menos retenidos) se mueven con mayor rapidez. Por consecuencia, el medio
cromatogrfico (columna, placa o papel) funciona como un controlador de la velocidad de cada sustancia
que constituye la mezcla, logrando as su separacin y mediante el uso de un detector, su caracterizacin
qumica.

La cromatografa es aplicada en distintos campos: desde el punto de vista de la caracterizacin de los

materiales, conocer la composicin de los mismos es imprescindible puesto que las propiedades de los
materiales dependen fundamentalmente, por un lado, de los componentes que lo forman y, por otro, de la
proporcin existente entre ellos. Otra de las aplicaciones importantes en cromatografa es realizar el
seguimiento de una sntesis que podra ir asociada a la preparacin de un material (una polimerizacin por
ejemplo). A medida que se produce la reaccin en el matraz de reaccin tendremos productos y reactivos,
cuya proporcin ir variando en funcin de la conversin. Es importante notar que, en general, las tcnicas
de separacin slo sirven para eso, separar, y que no nos dan ninguna otra informacin acerca de la
naturaleza de los componentes separados, de ah que en la mayora de los casos estas tcnicas o mtodos
de separacin vayan acompaados de otros mtodos de anlisis (composicional y/o de grupos) con el fin de
identificar y en algunos casos cuantificar los componentes de la muestra separados.

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PRINCIPIOS TERICOS

La cromatografa es una tcnica de separacin extraordinariamente verstil que presenta distintas variantes.
En toda separacin cromatogrfica hay dos fases (slida, lquida o gas) una mvil y otra estacionaria, que se
mueven una con respecto de la otra manteniendo un contacto ntimo. La muestra se introduce en la fase
mvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la mvil. Los componentes
de la mezcla a separar invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se
produce la separacin. Si un componente est la mayor parte del tiempo en la fase mvil el producto se
mueve rpidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda
retenido y su salida es mucho ms lenta.

La ms utilizada en qumica orgnica es cromatografa lquido-slido en sus dos variantes: cromatografa en

columna (CC) y cromatografa de capa fina (TLC)

TIPO FASE ESTACIONARIA FASE MVIL

slido inerte como gel de slice o
lquido-slido Disolventes
almina
intercambio soluciones
resina cambiadora
inico acuosas
lquido adsorbido en un soporte
lquido-lquido Lquido
slido
pelcula de lquido adsorbida
gas-lquido Gas
sobre un soporte slido

Debe insistirse que la cromatografa es un mtodo de separacin y toda separacin ha de ir seguida de la

medicin correspondiente al hacer la identificacin cualitativa fue la determinacin cuantitativa. Al seguir
examinando los principios generales de la cromatografa, supongamos que se hace continuamente algunos
suerte de medicin en el extremo de salida de la columna. La medicin de casi toda propiedad FISICOQUMICA
de un sistema soluto -solvente incluidos conductividad trmica y elctrica, radiactividad, color y otras
caractersticas especiales puede hacerse por un instrumento de deteccin para vigilar y el progreso de una
separacin. El tiempo de retencin de cada componente es el tiempo que necesita es el componente para
atravesar la columna, medido desde el momento en que se inyecta un introduce la muestra de ensayo hasta
el momento de su respuesta mxima en el
instrumento de medicin. El proceso por el
cual se obliga a los componentes de una
muestra a recorrer la columna, por el flujo
continuo de la fase mvil se llame a dilucin. El
caso lquido disolvente escogido para la fase
mvil es el eluyente.

El eluato es lo que emergen de la columna,

esto es, Eduardo es el eluyente ms
cualesquiera componentes de la muestra que
contenan un momento dado. El volumen de
retencin de cada componente es el volumen FIGURA 1. Representacin grafica de la seal de salida del instrumento
de medicin (o detector) durante una separacin cromatogrfica. El
de la fase lquida del fluido para que ese tiempo de retencin para el primer componente es t1 y para el segundo
componente atraviesa la columna. Si la componente es t2.

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velocidad del flujo es constante el volumen de retenciones el producto

del tiempo de retencin por la velocidad de flujo. Los valores
numricos del volumen de retencin y del tiempo de retencin varan
de un componente otro; en realidad esta es la causa de que las
substancias pueden ser separados por cromatografa.

Sin embargo, estas cantidades estndar de influidas por el aparato

experimental utilizado(lo cit de dimetro de la columnas por ejemplo)
y por las condiciones experimentales por consiguiente tiene ms
significado para la descripcin de una separacin cromatogrfica los
volmenes de retencin relativos y el tiempo de retencin relativos de
dos o ms componentes de una muestra que sus valores absolutos. A FIGURA 2. Representacin esquemtica de
la elucin de una mezcla de dos
menudo las separaciones son planetas y completas como indica la componentes en una columna
figura A. Sin embargo en muchos casos hay algn traslape cuando hay cromatogrfica.
presentes dos o ms componentes. Idealmente, las bandas de los solutos en una columna cromatogrfica
han de ser relativamente estrechas y han de tener los bordes de la cabeza y la cola perpendiculares a la
longitud de la columna como en la figura B. Sin embargo, un problema de enorme importancia prctica para
el qumico analtico es el ensanchamiento de la banda. El ensanchamiento de la banda puede ocurrir por lo
menos de dos distintas maneras. Primero, es prcticamente imposible empaquetar una columna de manera
perfectamente uniforme; por ello, de ordinario la velocidad del flujo la columna es variable a causa de su
empate tambin t regular y de las bandas de los solutos tienden a no ser uniformes y extenderse. Segundo,
todos soluto en un disolvente dado tiene de tendencia natural a difundirse bajo la accin de un gradiente de
concentracin; como la difusin de que es un fenmeno dependiente del tiempo, cuanto ms tiempo
permanezca un soluto dado ninguna columna cromatogrfica antes de ser eluido, tanto ms ancha y menos
uniforme es ir a la Habana correspondiente a ese soluto. Como consecuencia de estos efectos, se ha
efectuado muchos trabajos experimentales, el objeto de reducir al mnimo el ensanchamiento de la banda y
mejorar la lentitud de la separacin en cromatografa. El nombre cromatografa deriva de dos palabras
griegas que significan color y escribir. Las primeras aplicaciones de este mtodo General de separacin
fueron con sustancias coloreadas en cuyo caso es posible frecuentemente ver las bandas colombianas de la
columna, como la figura sin embargo el color es slo un incidente el proceso de separacin y la mayora de
las separaciones cromatogrficas son de sustancias incoloras.

ADSORBENTES: las substancias que se usa, adsorbente no adentra en relacin con la solucin ni como el
disolvente fuera de la interaccin por los mecanismos de adsorcin deseados. En particular el adsorbente y
ha de ser extremadamente insoluble y ha de ser qumicamente invierte en el ambiente en el cual se use.
Entre los muchos adsorbente es de uso comn figura celulosa, almidn, carbonato activo, oxido de
magnesio y xido de aluminio. Estas sustancias difieren considerablemente alguna de las otras en cuanto a
sus propiedades de absorcin y en su reactividad qumica, y ninguna de ellas puede usarse para todas las
aplicaciones. Por ejemplo, los Adsorbentes alcalinos como oxido de magnesio y carbonato clcico no son
motines en medios acdicos y algunos Adsorbentes ejercen accin cataltica en presencia de ciertas
sustancias orgnicas.

Algunos procesos de adsorcin no son reversibles, por consiguiente, las substancias adsorbidas no pueden
separarse del adsorbente, ni siquiera pasando por la columna un volumen grande del mismo disolvente en
el cual se disolvi inicialmente la substancia. En estos casos no es posible usar el adsorbente una y otra vez y
el costo del operacin puede llegar a ser prohibitivos.

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Las partculas de un adsorbente han de ser normalmente en el intervalo de tamao de cien a 300 mallas. Si
las partculas o ms grandes, quedar disponible para el soluto una superficie relativamente pequeo, a
menos que se usen cantidades indebidamente grandes del adsorbente. Con partculas menores, la columna
puede llegar a empaquetar se de manera tan apretada que la velocidad del flujo ser y razonablemente
baja.

CROMATOGRAFA EN PAPEL

En este caso, el soporte y fase estacionaria es papel. El papel que normalmente se utiliza es de celulosa. La
celulosa es muy polar en el agua y se vuelve electronegativa. El papel tiene propiedades de intercambio
inico dbiles, as como de adsorcin.

La mayora de las propiedades varan de papel a papel, lo que provoca variaciones en el Rf. Actualmente
existen papeles modificados con resinas cambiadores de iones, almina, etc. El aparato que se usa consta de
un soporte para el papel, un recipiente para el disolvente y una cmara hermtica para desarrollar el
cromatograma. La cmara hermtica es necesaria para evitar la evaporacin de los disolventes voltiles
debido a la gran superficie del papel expuesta. Antes de sumergir el papel en el disolvente de elucin se
aplica la muestra en forma de punto diminuto con cualquier objeto que pueda transferir un pequeo
volumen. El papel debe estar en equilibrio con los vapores del disolvente antes de empezar el desarrollo. La
cromatografa en papel se ha aplicado con buen xito a problemas de qumica orgnica e inorgnica y de
bioqumica.

REACCIONES QUMICAS

A continuacin mostraremos las reacciones que tuvieron las soluciones de (Ni+2), (Co+2),(Cu+2) y (Fe+3) con el
agente revelador.

REACCIN CON (Co+2) :

REACCIN CON (Ni+2) :

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REACCIN CON (Fe+2) :

REACCIN CON (Cu+2) :

DETALLES EXPERIMENTALES

MATERIALES:

Cmara cromatografica, tubo de ensayo con tapn, gradilla baguetas, papel whatman N1, embudo de
vstago.

REACTIVOS: FIGURA 3. Sistema

Acetona, cido clorhdrico, cido rubenico 0.1% (solvente etanol).

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FIGURA 4. Reactivos FIGURA 5. Soluciones para realizar la cromatografa

PROCEDIMIENTO:

1. Preparacin del cromatograma: se cort el papel Whatman N1 cuyo ancho fue de 1cm menos del
dimetro interno del tubo de ensayo y la altura de acuerdo al tamao del mismo; se coloc la tira
cortada dentro del tubo y se sujet al tapn mediante un ganchillo, de manera que el extremo
cortado toque el fondo del tubo.
2. A 1cm del borde inferior ms ancho del papel se traz una lnea paralela con lpiz y en ella se
coloc en cada cromatograma usando una bagueta iones de Ni, Co, Cu y Fe(III) y en otro la mezcla
de los 4 iones. Se dej secar.
3. Preparacin de la cmara cromatogrfica : se coloc el eluyente en la cmara utilizando un embudo
de vstago largo para evitar humedecer las paredes del tubo, se introdujo el cromatograma a
correr, se tap la cmara y se dej hasta que alcance la altura deseada.
4. Cromatograma: luego que el eluyente ha llegado a 2cm del borde superior se sac de la cmara y
aun hmedo se marc con lpiz la lnea alcanzada llamada " frente". Se dej secar y se procedi a la
caracterizacin de las manchas que puedan haber aparecido a distintas alturas (si se trata de una
mezcla)
5. Revelado: a nuestros cromatogramas roseamos el espray del revelador que en este caso utilizamos
cido rubenico y este dio una reaccin coloreada .

6. Calculo del Rf (relacin de frentes): =

Donde:
a= distancia entre el origen de la muestra y el centro de la mancha
b= distancia entre el origen y el frente del disolvente.

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DISCUSIN DE RESULTADOS

Para comenzar debemos saber que la cromatografa posee un carcter de micromtodo. El cual nos permite
identificar y/o caracterizar muestras "X", en nuestro caso nos permiti identificar cobalto (Co+2), nquel
(Ni+2), hierro (Fe+3), cobre (Cu+2), y una mezcla de todas las anteriores; los cuales poseen diferentes
coeficientes de reparto en dos disolventes de miscibilidad limitada, uno de los cuales permanece fijo en la
superficie del papel (afinidad por el papel filtro) Fase estacionaria, en tanto que el otro se desplaza a lo largo
de ella Fase mvil.

En nuestra experiencia logramos comprobar que los cationes nquel (Ni+2), cobalto (Co+2) con valores de Rf
de 0.11 y 0.40 respectivamente son afines al papel cromatogrfico es decir tienen una afinidad por la fase
estacionaria y son los que aparecern primero en una corrida cromatogrfico. En el caso del cobre (Cu+2)
que posee un valor de 0.55 se podra decir que se encuentra en equilibrio de fases (Estacionaria-mvil) ya
que este se ubica en la mitad del cromatograma y por ltimo para el caso del hierro (Fe +3) de valor d 0.81 es
afn al eluyente es decir tiene una afinidad por la fase mvil y es el que se identificar ltimo en un
cromatograma.

Debemos tener en cuenta que nuestro grupo no utiliz el papel cromtogrfico Whatman N1 sino que se
utiliz otro tipo de papel y esto se vio en los valores obtenidos de Rf, el tipo de papel es fundamental en esta
tcnica cromatogrfica ya que mientras ms tiempo tome la corrida del cromatograma ms eficaz ser el
mtodo. En nuestro desarrollo experimental la corrida del cromatograma nos tom un tiempo estimado de
20 minutos es decir la fase mvil subi rpidamente en el papel filtro por capilaridad lo cual por avanzar
rpidamente no identific completamente (las manchas) los cationes a reconocer, comparado con otros
grupos el tiempo que demor en realizar sus respectivos cromatogramas fue de 40 a 50 minutos
aproximadamente, es decir ellos deberan haber obtenido valores mejores a los nuestros debido a que el
tiempo retencin de sus componentes fue mayor que el nuestro; pero a pesar de ello existen otros factores
que influyen en la efectividad del mtodo cromatogrfico, uno de ellos es la TEMPERATURA una condicin
imprescindible para el buen xito de un cromatograma es la constancia de la temperatura, ya que las
variaciones pueden alterar la composicin de la mezcla que se va a correr en el cromatograma, hay que
reconocer que durante nuestra experiencia haban planchas de calentamiento encendidas cercanas a
nuestra mesa de trabajo la cual de alguna u otra manera afect nuestro sistema cromatogrfico, lo cual se
vio representado en los valores de Rf de los 4 cationes trabajados. Otro factor influyente que es causa de
error durante una cromatografa es el hecho de colocar la tira de papel en el centro del tubo de ensayo sin
que toquen las paredes este leve contacto puede afectar el resultado final del cromatograma, tambin otra
fuente de error es la falta de saturacin de la cmara cromatogrfica ya que la falta de saturacin del papel
cromatogrfico no nos permite identificar correctamente las muestras trabajadas durante la experiencia.

Se debe saber que debemos evitar totalmente el efecto orilla este consiste en la evaporacin mayoritaria del
solvente en las orillas del papel, debido a la mayor rea superficial, esto ocasiona que la muestra ascienda
de manera irregular alterando la cromatografa, en otras palabras la muestra debe estar lo ms centrado
posible en la tira del papel filtro y es ms su tamao no debe exceder de 0.5mm, en nuestro caso hubo un
pequeo problema con ello porque para colocar la muestra usamos una bagueta y la muestra abarc todo el
ancho del papel filtro al final se logr ver que el frente donde termin la corrida del cromatograma no
termin de manera horizontal es decir haba irregularidades lo cual se debi a ese pequeo desperfecto.

El autor del libro "Anlisis inorgnico cualitativo sistemtico" , Francisco Buscarons nos menciona que
cuando se trate de caracterizar una sustancia (solucin, etc.) a travs de datos obtenidos por clculos del Rf

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se recomienda cromatografiarla simultneamente consigo misma, es decir pura y comparar los resultados
teniendo en cuenta que a veces an trabajando en igualdad de condiciones los Rf de una sustancia pura
aislada, no son exactamente los mismo que cuando se encuentra mezclada con otras.

A continuacin podemos ver la siguiente tabla con los valores de Rf calculados de las 4 soluciones de
cationes por separado y los calculados dentro de una sola mezcla viendo una diferencia significativa.

SOLUCIONES (Ni+2) (Co+2) (Cu+2) (Fe+3)

POR SEPARADO 0.11 0.40 0.55 0.81
%ERROR 22.22 7.5 9.83 16
EN LA MEZCLA 0.1 0.31 0.46 0.92

Finalmente como dato adicional sabemos que se us la cromatografa sobre papel ya que es la ms sencilla,
la ms rpida y tiene un bajo costo para su realizacin, debemos tener en cuenta que existen otros dos tipos
interesantes de cromatografa que tienen la misma finalidad para identificar aniones y cationes las cuales
son la del tipo radial y la de separacin en zonas o sectores

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CONCLUSIONES

Los cationes (Ni+2) y (Co+2) tienen mayor afinidad con el papel debido a que fueron los primeros en
aparecer en el cromatograma, mientras que (Cu+2) y (Fe+3) fueron los ltimos en visualizarse es
decir estos cationes son ms afines al eluyente.

La separacin se consigue mediante la diferencia entre las fuerzas de adhesin de las molculas de
los componentes a una fase mvil (Acetona, ter de petrleo) y a una fase estacionaria, la llamada
capa fina (Cromatofolio).
La polaridad de la mezcla de solventes se elige de acuerdo a la mezcla de compuestos que se desea
separar. Pero adems, es importante recordar que la eleccin adecuada de la mezcla de disolventes
radica el xito de la separacin en la cromatografa.
El papel filtro utilizado en el cromatograma fue indispensable en la realizacin de la prctica
comprobamos que el papel cromatogrfico Watman N1 es ms efectivo que el papel filtro que
hemos utilizado nosotros en nuestra experiencia, ya que el primero arrojo resultados ms
confiables debido al tiempo de retencin de los componentes.

RECOMENDACIONES

Tratar de evitar que el cromatograma no se pegue en las paredes de la cmara.

Impedir que el gancho no est contaminado por oxido pues de los contrario nos dar resultados no
sern los esperados.
La muestra debe colocarse lo ms centrado posible para evitar el EFECTO ORILLA.
Colocar bien el eluyente (con ayuda de un embudo y sin mojar las paredes de la cmara
cromatogrfica) para evitar que este corra ms de lo debido.
Impedir que la fase mvil no pase del frente.

BIBLIOGRAFA
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Editorial Revert S.A.. 1988.
Pgina consultada: 398-405
LAITINEN, HERBERT & HARRIS, WALTER. Anlisis qumico. 1ra Edicin. Mxico: Editorial Revert S.A. 1991.
Pgina consultada: 533-534.
MERCK, DARMSTADT. Informacin sobre cromatografa en capa fina I. Alemania.
Pgina consultada: 3-23
BUSCARONS UBEDA, FRANCISCO. Anlisis inorgnico cualitativo sistemtico. 4ta Edicin. Mxico DF.:
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Pgina consultada: 533-534.
FISCHER, ROBERT & PETERS, DENNIS. Anlisis qumico cuantitativo. 3ta Edicin. Mxico: Editorial
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1981.
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Pginas consultadas: 68-69, 74.

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ANEXOS

CROMATOGRAFA EN COLUMNA

Se emplea para la separacin de mezclas o purificacin de sustancias a escala preparativa.

Se utilizan columnas de vidrio rellenas de Almina (Al2O3), Slica u Oxido de Magnesio. La fase estacionaria
est constituida por un slido poroso, el cual queda soportado en el interior de una columna generalmente
fabricada en plstico o vidrio. La fase mvil se encuentra formada por la solucin que lentamente va
atravesando la fase estacionaria. La solucin que sale al final de la columna se reemplaza constantemente
por nueva solucin que se suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna.

La migracin de las sustancias de la mezcla a travs de la columna se encuentra retardada en diferente

grado por las interacciones diferenciales que cada una de ellas pueda ejercer con la fase estacionaria. Las
sustancias se separan gradualmente formando bandas dentro de la banda total, la separacin, y por tanto la
resolucin, aumenta con la longitud de la columna. La banda individual de cada sustancia puede
ensancharse con el tiempo debido a procesos difusinales, disminuyendo por tanto la resolucin.

Se utilizan columnas de vidrio rellenas de Almina (Al2O3), Slica u Oxido de Magnesio. La fase estacionaria
est constituida por un slido poroso, el cual queda soportado en el interior de una columna generalmente

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fabricada en plstico o vidrio. La fase mvil se encuentra formada por la solucin que lentamente va
atravesando la fase estacionaria. La solucin que sale al final de la columna se reemplaza constantemente
por nueva solucin que se suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna.

La migracin de las sustancias de la mezcla a travs de la columna se encuentra retardada en diferente

grado por las interacciones diferenciales que cada una de ellas pueda ejercer con la fase estacionaria. Las
sustancias se separan gradualmente formando bandas dentro de la banda total, la separacin, y por tanto la
resolucin, aumenta con la longitud de la columna. La banda individual de cada sustancia puede
ensancharse con el tiempo debido a procesos difusinales, disminuyendo por tanto la resolucin.

CROMATOGRAFA LQUIDO-SLIDO (CAPA FINA)

La tcnica de cromatografa en capa fina (TLC) es una de las ms comunes empleadas en un laboratorio de
Qumica Orgnica. Entre oras cosas permite:

Determinar el grado de pureza de un compuesto

Comparar muestras

Realizar el seguimiento de una reaccin

Controlar el contenido de las fracciones obtenidas en cromatografa de columna

La cromatografa en capa fina usa como fase estacionaria un slido como gel de slice a almina conteniendo
algn material que hace que se mantenga la fase estacionaria sobre un soporte tal y como placas de vidrio,
aluminio e incluso materiales plsticos. Las placas pueden prepararse en el laboratorio o adquirirse en el
mercado.

CROMATOGRAFA DE GASES

Se utiliza para la separacin de sustancias gaseosas. la FASE MVIL es un Gas (llamado Gas Portador) y la FASE
ESTACIONARIA puede ser un slido (Cromatografa Gas-Slido) o una Pelcula de lquido de alto punto de
ebullicin (Generalmente Polietiln-Glicol o Silicn) recubriendo un slido inerte (Cromatografa Gas-
Lquido). El cromatgrafo de gases esta constituido normalmente por un suministro y una entrada del gas
portador, un puerto de inyeccin, una columna normalmente localizada en el interior de una cmara
termostatizada (horno), un detector y un sistema computarizado para analizar, registrar e imprimir el
cromatgrama.

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La muestra se introduce a travs del sistema de

inyeccin dentro de la columna que es el sitio donde
ocurre la separacin. La columna de aluminio, acero
inoxidable, vidrio o tefln contiene la fase
estacionaria slida o lquida y esta sujeta a la
superficie por un soporte que es generalmente de
slice. La fase mvil o gas portador transporta los
componentes de la muestra a travs de la columna,
por esta razn debe ser inerte para evitar
interacciones con la muestra o la fase estacionaria,
y ser capaz de minimizar la difusin gaseosa. Al final
de la columna existe el detector que permite la
deteccin y cuantificacin de las
sustancias, midiendo conductividad trmica y
electronegatividad de las sustancias eludas. Se
produce una seal tipo elctrico, que
posteriormente se amplifica por un registrador
grafico o un integrador permitiendo indicar el
momento en que salen de la columna los componentes. La salida de la sustancia se registra en un
cromatgrama en forma de picos y se determinan medidas como la altura y el rea del pico.

CROMATOGRAFA LIQUIDA DE ALTA EFICIENCIA O RENDIMIENTO (HPLC)

Es una Cromatografa de alta presin es decir se aplica el flujo a

presin (entre 1500 a 2200 psi). El tamao de partcula es entre 3 y
10 micras, la longitud de la columna es entre 5 y 25 cm. y requiere
de equipo sofisticado. Se pueden analizar muestras proteicas. La
reduccin del tiempo en que la sustancia se encuentra en el
interior de la columna, limita el ensanchamiento por difusin de las
bandas, aumentando por tanto la resolucin.

El sistema HPLC requiere una mezcladora de solventes, un

inyector, y una bomba que inyecte el lquido a la columna.
Generalmente las columnas de slica requieren alta presin para
que el flujo de lquido sea adecuado, la mezcladora se requiere
para variar la proporcin de solvente en la fase mvil y el inyector
permite la aplicacin de la muestra. A la salida de la columna se
coloca un detector generalmente de absorcin ultravioleta o de
fluorescencia y si se desea recuperar las molculas que eluyen de
la columna, se requiere un colector.
En los sistemas modernos el anlisis de la informacin obtenida se realizan mediante una computadora
acoplada al equipo; lo que permite estandarizar la cromatografa, identificar la naturaleza los picos eludos y
cuantificar su contenido. Los picos se relacionan segn su "tiempo de retencin" con estndares, que
permiten identificar los aminocidos presentes en la mezcla. La cantidad relativa de cada uno de ellos se
determina calculando el rea la curva del pico correspondiente.

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CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO

La Fase Estacionaria es una resina de intercambio inico que contiene grupos cargados, teniendo la
propiedad de separar especies ionizadas (Cationes o Aniones); la Fase Mvil es generalmente una solucin
amortiguadora de pH. En protenas la cromatografa de intercambio inico se basa en las diferencias en
signo y magnitud de la carga elctrica neta de las protenas a un valor de pH determinado. La afinidad de
cada protena a los grupos cargados de la columna est influenciada por el pH y por la concentracin de
iones en solucin (concentracin salina) que compiten con la protena en la interaccin con la matriz. La
separacin de la protena de la matriz cargada puede obtenerse gradualmente cambiando el pH y/o la
concentracin salina de la fase mvil, de tal forma que se genere un gradiente de concentracin.

CROMATOGRAFA POR PERMEABILIDAD EN GEL

Es til para la separacin de protenas. La Cromatografa de exclusin molecular, tambin llamada de

filtracin en gel, separa en funcin de su tamao. La matriz de la columna esta formada por un polmero
entrecruzado con poros de tamaos determinados. Las protenas de mayor tamao migran ms deprisa a lo
largo de la columna que las de pequeo tamao, debido a que son demasiado grandes para introducirse en

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los poros de las bolas de polmero y por tanto siguen una ruta ms corta y directa a lo largo de la longitud de
la columna. Las protenas de menor tamao, entran en los poros y su marcha a lo largo de la columna es
ms lenta.

CROMATOGRAFA DE AFINIDAD

La Cromatografa de Afinidad permite la separacin de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de

unin a un determinado ligando. En este caso, las protenas que se retienen en la columna son aquellas que
se unen especficamente a un ligando que previamente se ha unido covalentemente a la matriz de la
columna. Despus de que las protenas que no se unen al ligando son lavadas o eluidas a travs de la
columna, la protena de inters que ha quedado retenida en la columna se eluye o libera mediante el
empleo de una solucin que contiene bien ligando libre u otro compuesto que rompa la interaccin entre el
ligando y la protena.

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