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UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR

FACULTAD DE INGENIERIA Y ARQUITECTURA

ESCUELA DE INGENIERIA QUIMICA Y DE ALIMENTOS

MICROBIOLOGIA GENERAL 1

CICLO 1 - 2016

PRACTICA DE LABORATORIO: 3
DISTRIBUCION DE LOS MICROORGANISMOS EN LA
NATURALEZA Y COLORACION SIMPLE

INSTRUCTORA:
Mara Jos Snchez.

INTEGRANTES DEL GRUPO NUMERO 1:


APELLIDO NOMBRE CARNET FIRMA

Garzona Urquilla Vilma Natalia GU13001

Medina Alas Diana Gabriela MA12001

CIUDAD UNIVERSITARIA, MARTES 12 DE ABRIL 2016.


NDICE

I. OBJETIVOS .. 3

II. INTRODUCCIN 4

III. MARCO TERICO 5

IV. OBSERVACIONES ... 9

V. CONCLUSIONES 12

VI. CUESTIONARIO 13

VII. BIBLIOGRAFA ..16

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I. OBJETIVOS
Objetivo general

Inocular y aislar muestras proporcionadas de bacterias utilizando las tcnicas correctas y el uso
adecuado de los instrumentos de cultivo

Objetivos especficos

1. Reconocer las diferencias macro y microscpicas que presentan la Escherichia coli,


Staphylococcus aureus y Bacillus.
2. Efectuar correctamente la preparacin de frotis bacteriano con el inoculo de la bacteria
seleccionada sometiendo las muestras a tincin simple y diferencial

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II. INTRODUCCIN

Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseado diversos mtodos que
permiten cultivarlos bajo condiciones experimentales y manejar un solo tipo de
microorganismo. Una de las tcnicas ms usadas en el laboratorio de microbiologa consiste en
transferir una muestra microbiolgica a un medio de cultivo, lo que permite obtener cultivos
microbianos.

Al efectuar este procedimiento, es necesario considerar que en el rea de trabajo, existen


muchos otros microorganismos; debido a esto, es necesario tomar precauciones para impedir
que stos penetren y contaminen los cultivos en estudio.

La aplicacin de estos procedimientos ha permitido propagar a los microorganismos en


cultivos mixtos, as como su aislamiento y la obtencin de cultivos puros, facilitando de este
modo, el estudio, caracterizacin, aplicacin y control de los mismos. La forma de sembrarlos
y cultivarlos depende del tipo de microorganismo y propsito especfico del estudio

Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el desarrollo de ste en


medios de cultivo y condiciones de laboratorio controladas. La poblacin de microorganismos
desarrollada en un medio se denomina cultivo. Cuando ste contiene una sola especie de
microorganismo, se denomina cultivo puro que es lo que se trat de preservar en la prctica
realizada.

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III. MARCO TEORICO
3.1 MICROORGANISMOS PROCARIOTAS

En este grupo se incluyen los dominios Bacteria y Archaea. Ambos carecen de ncleo celular y
su ADN se encuentra disperso por el citoplasma. Son organismos muy simples
estructuralmente, pero tienen un metabolismo complejo.

La mayora de los microorganismos procariotas son unicelulares y solo algunos, como las
cianobacterias, pueden formar colonias.

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3.1 PROCESO DE INOCULACION EN MEDIO DE CULTIVO SOLIDO Y LQUIDO

Un cultivo puro es aquel que contiene una sola clase de microorganismos. Para obtenerlo es
necesario recurrir a las llamadas tcnicas de aislamiento. Aunque existen otras, las tcnicas ms
utilizadas emplean un medio de cultivo slido, en el que los microorganismos generan colonias
separadas pero en la prctica de laboratorio tambin se trabaj con medio de cultivo lquido.

Se puede demostrar que cada colonia procede de una sola clula o de un grupo de clulas del
mismo tipo si el microorganismo forma agregados. Por ello lo ms correcto es hablar de
unidades formadoras de colonias al referirnos al origen de una colonia. Por tanto, todas las
bacterias de una colonia son genticamente iguales y constituyen un clon. En esta prctica
emplearemos un mtodo para obtener un cultivo puro:

Aislamiento por agotamiento por estras

Agotamiento por estras. Se trata de un mtodo rpido y simple de agotamiento progresivo


y continuo del inculo sobre un medio slido contenido en una placa de Petri. El objetivo es
obtener, a partir de un elevado nmero de bacterias, un nmero reducido de ellas distribuidas
individualmente sobre la superficie de la placa. Cada una de estas bacterias originar una
colonia.

Figura 1 : Mtodos de agotamiento de asa en medio slido para placa Petri y tubo de ensayo

Medios lquidos: Son los que se presentan en este estado, denominndose por esta razn
caldos. El medio lquido ms utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente
de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la
obtencin de una suspensin bacteriana de una determinada concentracin como fue en el

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caso de la prctica de laboratorio realizada, el proceso de inoculacin en el medio de cultivo es
el mismo procedimiento que el slido con la diferencia que el asa se introduce en el lquido y se
mueve dentro de el medio lquido para esparcir el microorganismo.

3.2 TINCION DE MICROORGANISMOS Y FROTIS

Para observar las bacterias teidas es necesario, en primer lugar, hacer un frotis de las bacterias
y fijarlo. Para hacer un frotis, cuando se parte de un cultivo de bacterias en medio lquido, se
toma una o varias cargas directamente con el asa y se extienden sobre el portaobjetos. Si se
parte de un cultivo en medio slido, debe depositarse previamente una gota de agua sobre el
portaobjetos. A continuacin, se toma con el asa una pequea parte de la colonia y se dispersa
en la gota de agua, realizndose la extensin como en el caso anterior. La fijacin tiene por
objeto provocar modificaciones en la composicin fsico-qumica de la bacteria (coagulacin
de las protenas, etc.) de forma que sta conserve definitivamente una estructura similar a la
que tena en vivo, sin deformarse como consecuencia de los tratamientos a que se ver
sometida durante la tincin. Por otra parte la fijacin impide el arrastre de los microorganismos
al quedar estos adheridos al portaobjetos y hace que la pared celular sea ms permeable a los
colorantes. Para la fijacin pueden utilizarse agentes qumicos (formol, metanol) o el calor.
Nosotros emplearemos el calor, y para ello el frotis, una vez seco, se pasa dos o tres veces
sobre la llama, con la preparacin hacia arriba, para no quemarla. Hay que procurar que el calor
nunca sea excesivo, pues se alteraran las estructuras de la bacteria: en ningn momento el
portaobjetos, colocado sobre el dorso de la mano, debe quemar.

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IV. OBSERVACIONES

4.1 Primera sesin.

Se recolect una muestra de tierra de jardn, una muestra de agua de charco y una
muestra de hojas verdes, todas obtenidas de diferentes lugares en el exterior y se
mostraban frescas a la hora de utilizarlas ya que fueron tomadas, aproximadamente, 2
horas antes de la sesin.
La muestra para la comprobacin de microorganismos en el cuerpo humano se tom al
momento de hacer el cultivo, proveniente de manera personal de cada uno de los
estudiantes que realizaron la prctica, en el caso propio, la muestra fue del cuero
cabelludo.
La muestra de aire tambin se tom de los alrededores al momento de hacer el cultivo,
en este caso especfico la muestra fue del aire existente dentro del laboratorio de
microbiologa.
Se utilizaron 5 cajas Petri con medio PDA para el cultivo de todas las muestras.
Al tomar la muestra de aire del laboratorio y del cuero cabelludo en la caja Petri, no se
observ ninguna alteracin o muestra en el medio de cultivo.

4.2 Segunda sesin.

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Luego de ocho das de incubacin de las muestras el resultado fue el siguiente:

4
2

3 5

Figura 4. Placas con muestras luego de ocho das de incubacin.

Placa 1: Muestra incubada de tierra de jardn.

Se observ alrededor de 6 colonias diferentes, en su mayora hongos de estructura


filamentosa, irregular y de aspecto elevado, variando sus colores entre blanco, verde y gris.

Placa 2: Muestra incubada de aire del laboratorio.

Se observ aproximadamente la formacin de 8 colonias, la mayor parte fueron hongos de


estructura filamentosa y rizada, con aspecto plano y convexo y coloraciones gris,
anaranjado y negro. Asimismo otras colonias ms pequeas observadas mostraban
estructura puntiforme, aspecto plano y umbilicado y coloracin transparente, blanco y
negro.

Placa 3: Muestra incubada de hojas verdes.

Se observ alrededor de 7 colonias de microorganismos, de forma granular lobulada, otras


de aspecto puntiforme y tambin se observ la formacin de hongos. La mayora de
colonias mostraron aspecto plano y color negro y en el caso de los hongos, color verde.

Un punto importante a mencionar es que se dio la recomendacin de no abrir esta placa ya


que los hongos formados crecieron de forma numerosa hasta la parte superior de la placa y
al abrirla podan generar contaminacin.

Placa 4: Muestra incubada de cuero cabelludo.

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Se observ, aproximadamente, la formacin de 6 colonias diferentes. Algunas de estas
colonias mostraban aspecto irregular ondulado y elevacin umbilicada, en colores amarillo
y verde con partes transparentes. Otras colonias mostraban semblante circular entero y
puntiforme, elevado y coloracin blanca. Tambin se observ la formacin de una colonia
de hongos de estructura filamentosa y coloracin gris con partes rojas.

Placa 5: Muestra incubada de agua de charco.

Se observ alrededor de 7 colonias, en su mayora hongos de aspecto filamentoso, planos y


convexos de colores gris, blanco, verde y negro. Otras colonias observadas mostraban
aspecto puntiforme, plano y coloracin negra.

Los frotis se prepararon a partir de las muestras incubadas de agua de charco (1) y
cuero cabelludo (2).
El colorante utilizado para la coloracin simple de los frotis fue cristal violeta.

Figura 5. Frotis preparados. En la figura mostrada se acaba de aadir el colorante.

El resultado de la coloracin de los frotis para su observacin al microscopio fue el


siguiente:

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Figura 6. Microorganismos observados bajo el Figura 7. Microorganismos observados bajo
microscopio en el frotis (1). Muestra tomada de el microscopio en el frotis (2). Muestra tomada
agua de charco. de cuero cabelludo.

V. CONCLUSIONES

Los microorganismos forman parte de nuestra vida, y dependemos de ellos. Solo


algunos microorganismos son patgenos, es por esto, que se puede convivir con la
mayora de microorganismos presentes en el medio ambiente normal.

Se entiende por tincin (o coloracin) simple al teido de los microorganismos


aplicando una solucin colorante.

Una tincin simple es una solucin acuosa de un colorante bsico nico., el propsito
general de esta tincin es destacar por completo el microorganismo completo para que
se vanlas formas y las estructuras bsicas. El colorante se aplica al extendido fijado
durante un determinado tiempo y luego se lava y al final se seca.

La descripcin de las colonia presente en la placa Petri se realiza utilizando como base
un documento con las caractersticas comunes que puede tener la colonia en cuestin,
sin embargo, para identificar que tipo de microorganismo esta presente en la colonia se

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debe de recurrir a mtodos mas especficos para luego su respectiva identificacin en
microscopio

El microorganismo con mayor presencia en todas las muestras cultivadas son los
hongos

VI. CUESTIONARIO

1. Nombre de los diferentes ambientes y cules son las caractersticas de cada uno

AMBIENTE DESCRIPCION

tierra de jardn. Tierra de jardn obtenida del jardn de uno de los integrantes, en
la muestra haban presentes , plantas y piedras minsculas

aire del laboratorio. Aire presente dentro del rea de laboratorio, la placa Petri de
este ambiente fue el mas abundante en numero de colonias

hojas verdes. Hojas tomadas de el jardn de uno de los integrantes, no tenan


restos de polvos o tierra visibles ni microorganismos

cuero cabelludo Muestra de cuero cabelludo de ambos integrantes del equipo


#1 , se realizo una divisin en placa Petri para comparar muestras

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agua de charco Agua de charco tomada de un charco de agua formada en la calle,
era gris con muchos sedimentos y microorganismos como gusanos.

2. Explique porque se utiliza agua estril para lavar los vegetales

En el paso de nuestro equipo el vegetal utilizado fueron hojas de jardn, se lavan con agua
estril para remover cualquier sedimento o muestra de polvo, tierra y otros componentes
solidos o lquidos al que estn expuestas las hojas en el medio natural de jardn para asi no
contaminar el cultivo que haramos de las hojas

3. De que tipo de microorganismos principalmente estn formado la poblacin


microbiana del medio ambiente

Los microorganismos con mayor abundancia en nuestro entorno son definitivamente los
hongos, en las muestras tomadas, todos contenan hongos, esporas de hongos o levaduras con
lo que fcilmente se concluye que son estos microorganismos los ms abundantes

4. Cul es la razn de que predomine este tipo de microrganismo

La predominancia de este tipo de microorganismo es que son los menos exigentes en materia
de nutrientes para su crecimiento y suelen crecer bsicamente en cualquier lugar con la
temperatura y humedad adecuada, adems, sus esporas tienen la facultad de esparcirse en el
aire lo que aumenta su presencia en todos los ambientes.

5. Como interpreta usted, la variedad de colonias obtenidas

La variedad de colonias que se pudieron observar en las cajas Petri tienen, como se mencion,
una predominancia de hongos que estuvieron presentes en todas las muestras, las colonias que
menos se obtuvieron fueron las bacterias que en las dos muestras que observamos por
microscopio, ninguna fue bacteria, la muestra de hojas de jardn fue imposible examinarla ya
que su cantidad en hongos era tanta que se esparcieron hasta la tapadera de la caja Petri por
tanto fue esta muestra la ms abundante de todas en hongos.

Todas las colonias tenan caractersticas diferentes en color, textura y elevacin, ninguna era
exactamente igual a la otra.

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6. De que procede cada colonia formada?

Cada colonia que se form en la caja Petri pertenece al tipo de microorganismo que la produce
ya que cada microorganismo tiene la facultad de crear caractersticas estndar, las muestras
fueron aisladas con tcnicas de cultivo por eso fue fcil recolectar la muestra a observar.

7. porque se utiliz hisopos estriles para tomar sus muestras?

Se utilizaron hisopos estriles porque se ocupaban hisopos normales para tomar cada muestra
de medio , se poda contaminar la muestra que se tomaba con posibles microorganismos que
estuvieran en el hisopo de algodn el cual se poda contaminar fcilmente en el procesamiento
o empaquetado de este.

8. porque las cajas Petri se incuban con la tapa hacia abajo?

Porque si la placa no es invertida durante la incubacin, la bacteria no podr colonizar


el agar apropiadamente, lo que evitar que crezca y forme colonias adecuadamente, o
estimular el crecimiento de otros microorganismos.

9. Cual es la razn de hacer preparaciones para observar al microscopio las


diferentes colonias?

Se hacen preparaciones como el frotis de muestra de la caja Petri con el objetivo de dispersar el
microorganismo lo suficiente para ser observado en microscopio ptico , si hay una gran
acumulacin de muestra no podr distinguirse a que tipo de microorganismo pertenece la
colonia que aislamos

10. De las diferentes colonias observadas cuales puede identificar el tipo de


organismos sin necesidad de hacer la preparacin microscopioca

Como se detallo con anterioridad, se concluy que los hongos son las colonias con mayor
presencia en todas las placas Petri porque estas tienen caractersticas especiales que determinan
su presencia aun si verlo en microscopio , sobre todo la formacin de filamentos parecido al
algodn, al verlo se identifica a simple vista que se trata de un hongo.

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VI. BIBLIOGRAFA

SANTIAGO DIONISIO, M. C.
Manual de practicas de laboratorio de microbiologia I y II
Santiago Dionisio, M. (2000). Manual de practicas de laboratorio de microbiologia I y II.
Universidad Autonoma de Guerrero..

PRAGLIA, C.
Microbiologa
Praglia, C. (1999). Microbiologia. Firenze: Giunti.

"PREPARACIN, F. (2012).

EdUrIrOm enterobacterias: COLORACIN SIMPLE DE FROTIS".


[online]Eduriromenterobacterias.blogspot.com.
http://eduriromenterobacterias.blogspot.com/2012/03/-preparacion-fijacion-y.html
[Acceso 10 Apr. 2016].

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