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2. Descripcin de la actividad
Caractersticas del papel absorbente utilizado: Leer protocolo, pg. 73. El papel de
filtro (o de cocina) que se seleccione como sustrato de germinacin debe tener las
siguientes caractersticas:
Trama amplia y porosa que asegure una buena capacidad de retencin de
lquido. Resistencia de la fibra del papel para que las radculas crezcan por su
superficie sin atravesarlo, situacin que dificultara la remocin de las plntulas
sin daarlas. Ausencia de residuos txicos (ej. blanqueadores). Que no
promueva el desarrollo de hongos (no asociados a las semillas). (Castillo
Morales, 2004, p.73).
Para esta prueba se montar una caja de Petri con agua potable (no de la llave) y se
seguir el procedimiento que se describe ms adelante para clculo del porcentaje
de germinacin. Si el porcentaje de germinacin est por debajo del 80% entonces
se debern cambiar las semillas.
Una vez que la prueba arroje el porcentaje de germinacin deseado, se podr utilizar
ese sobre de semillas para el montaje del bioensayo.
4. Obtencin de la muestra
Atmsfera.
Existen variados mtodos para el monitoreo de contaminantes atmosfricos de
forma precisa y continua. Para efectos del presente curso se tomar una muestra
superficial (el primer centmetro) de suelo de un lugar en donde sea observable la
acumulacin de contaminantes atmosfricos en plantas y suelo. Tome la muestra en
suelo desnudo, que no tenga cobertura vegetal. Guarde la muestra en una bolsa
Ziploc (tamao sandwich), una cantidad que llene media bolsa (aproximadamente
250g). Utilice guantes de ltex y tapabocas al momento de recolectar la muestra.
La bolsa Ziploc debe estar adecuadamente rotulada con el nombre de quien toma la
muestra, tipo de cobertura vegetal que hubiera tenido (en este caso suelo desnudo),
hora y fecha de muestreo.
Suelo.
Si su tema de proyecto es contaminacin de suelos con sustancias txicas, el
procedimiento para toma de muestra es el siguiente:
Remover entre 2-3 cm de la superficie del terreno (capa vegetal superficial) en el
punto escogido con el fin de limpiar y eliminar los residuos frescos de materia
orgnica, polvo de la carretera u otros contaminantes. Utilizar guantes de ltex y
tapabocas.
La muestra debe ser tomada a una profundidad de 0-15 cm. Una vez tomada la
muestra debe homogenizarse, destruir terrones y remover material orgnico como:
hojas, races y animales. Una vez realizado esto, incorporar la muestra de
aproximadamente 250g en la bolsa ziploc (alrededor del media bolsa), asegurndose
que quede bien sellada.
La bolsa ziploc debe estar adecuadamente rotulada con el nombre de quien toma la
muestra, tipo de sistema agrcola o cobertura vegetal que hubiera tenido, hora y
fecha de muestreo.
Agua.
Si su tema de proyecto es la contaminacin de algn cuerpo de agua con txicos
deber recolectar una muestra de esta agua para utilizarla en el bioensayo.
Los materiales requeridos para el muestreo dependern del lugar donde se planee
recolectar la muestra. Se recomienda seguir el protocolo establecido por el IDEAM
en la Gua de monitoreo de vertimientos, aguas superficiales y subterrneas,
disponible en el link
http://www.corponor.gov.co/control_calidad/2014/Guia_monitoreo_IDEAM.pdf
El muestreo que se realizar es puntual, pero deber seguir las indicaciones para
preparacin del recipiente, llenado de la botella, marcacin, preservacin y
transporte de la muestra hasta el sitio donde har el montaje de su bioensayo. Sin
embargo, como materiales generales se recomienda llevar para el muestreo (Figura
3): balde, soga, un recipiente limpio para recolectar 1 Litro de muestra (pueden ser
botellas de agua lavadas y desocupadas), toalla para secar, cinta de enmascarar
para marcar el recipiente donde se pondr la muestra, marcador indeleble, nevera
de icopor con hielo, guantes de caucho, formato de campo para recolectar
informacin del sitio como nombre del lugar, del cuerpo de agua, hora, fecha, etc.
(En la gua del IDEAM encontrarn ejemplos de estos formatos), importante tambin
tomar fotos del sitio de muestreo y no ir solos a tomar la muestra.
La gua del IDEAM habla de medir algunos parmetros in situ a las muestras, pero
estos datos no se tomarn.
Las soluciones de control positivo estn diseadas para obtener resultados similares
de los que se obtendran con agua contaminada. Esta solucin le permitir observar
cmo reaccionan las semillas al agua contaminada.
Se preparar una solucin salina de 5g/L, se requerir 200mL de agua potable (no
de la llave), y adicionar 1 gramo de sal. Si se cuenta con una balanza o una gramera
se podr pesar el gramo de sal, si no, se tendr que calcular dicha cantidad a ojo
con una cucharita de cocina, llenndola hasta . Se debe mezclar bien y luego
marcar el recipiente que diga "Control (+)".
Ser una muestra de agua potable (no de la llave), sin gas y sin saborizante, alistar
mnimo 200mL para el bioensayo. Marcar con Control (-).
(3) Soluciones de muestra contaminada
Para preparar las diluciones, se recomienda que cuente con una probeta (Figura 4) o
un recipiente para medir volumen, en caso de no tenerlo, puede fabricarlo usted
mismo, tome un recipiente cilndrico (uniforme, que no sea cnico), y mida la altura
del recipiente hasta 10 cm, realizando una marcacin cada centmetro. La base del
recipiente ser el centmetro 0, y aumenta hacia arriba, hasta el centmetro 10. Este
recipiente no le permitir medir ml, pero s le permitir tener proporciones
adecuadas.
Figura 4. Probeta.
El agua con que se preparan las diluciones es agua potable (no de la llave).
Para guardar las diluciones preparadas, marque cinco recipientes con cinta de
enmascarar con la etiqueta: 100%, 30%, 10%, 3% y 1%.
Las rplicas son repeticiones que se realizan del mismo tipo de dilucin para eliminar
errores experimentales en el bioensayo.
Tapar las cajas de Petri y envolverlas con papel aluminio, con el fin de proteger las
semillas de la luz, dado que algunas variedades de semillas de lechuga requieren de
oscuridad para que se produzca la germinacin (semillas fotoblsticas negativas).
Marcar con cinta de enmascarar cada caja de Petri envuelta con papel aluminio.
Asegrese de no dar vuelta a las cajas de Petri boca abajo, etiquetando "Parte de
arriba" en cada placa para que no se confunda.
Colocar las cajas de Petri envueltas en papel aluminio dentro de una bolsa plstica
(ziploc) para prevenir que se escape la humedad.
Colocar las cajas en un lugar seguro, a temperatura ambiente por cinco das (120
h), a resguardo de la luz solar directa, preferiblemente a una temperatura de 222
C.
c) Ejecucin de las observaciones y mediciones
Despus de cinco das (120h) se realizan las mediciones para evaluar el efecto del
txico sobre la germinacin de semillas y sobre la elongacin (crecimiento) del
hipoctilo y de la radcula (Figura 5).
Figura 5. Hipoctilo y radcula. Estados por los que atraviesa la semilla durante el
ensayo de germinacin y elongacin (Castillo Morales, 2004).
Para comenzar, desenvuelva cuidadosamente cada caja de Petri y siga las siguientes
instrucciones. Tenga especial cuidado en la forma en que registra los datos, con el
fin de evitar confusiones. Se recomienda utilizar un formato diseado por usted, un
cuaderno en donde especifique la caja que est revisando o directamente el
computador. Una vez termine con la primera caja, prosiga con la siguiente, hasta
finalizar las 21 cajas del experimento.
d) Expresin de resultados
Para obtener los clculos necesarios, utilice el Simulador de clculos en Excel que
se provee en el entorno de aprendizaje prctico, en la carpeta identificada con el
mismo nombre. En el simulador encontrar unos datos de ejemplo, con el fin de que
se familiarice con el uso del mismo.
Se calcula de la siguiente forma (la hoja lo calcula una vez haya ingresado los
datos):
% de germinacin = Promedio D / Promedio C (-) *100
Se calcula de la siguiente forma (la hoja lo calcula una vez haya ingresado los
datos):
% Inhibicin de germinacin = (Promedio C (-) - Promedio D) * 100
Promedio C (-)
Es importante revisar el CV de cada caja, si el valor da por encima del 30%, puede
eliminar (borrar) hasta dos datos extremos (dato mayor y/o dato menor), para
disminuir la variacin (Figura 8). Si una vez realizado este procedimiento, el CV
sigue siendo alto, entonces no deber tenerse en cuenta la rplica para la obtencin
del promedio general (deber borrar los datos de toda la fila). Si todas las rplicas
en una misma dilucin dan por encima del 30%, los datos no son confiables, y
deber tener en cuenta esta informacin durante el anlisis.
Entre mayor sea la inhibicin del crecimiento del hipoctilo, mayor ser el efecto del
txico sobre las semillas. Si el % es negativo, significa que la dilucin, en lugar de
inhibir el crecimiento del hipoctilo, caus una exaltacin del mismo (ver seccin
4.4.5 Interpretacin de los resultados en el protocolo, p.79)
Para la obtencin del NOEC, LOEC y MATC, siga las siguientes instrucciones:
Calcule el MATC, incluyendo los datos de NOEC y LOEC en la tabla inferior, en las
celdas amarillas (ver figura 8).
Figura 8. Existen efectos txicos sobre las semillas, pues el F experimental es de
6.329,47, mucho mayor a F terica (0,05), que es de 3,11. LOEC es 10%, pues es
la menor concentracin en donde se observan efectos txicos sobre las semillas, por
tanto NOEC es de 3% y MATC se calcula en 6,31%.
Jaramillo Jurez, F., Rincn Snchez, A. R., Rico Martnez, R. (2009). Toxicologa
ambiental. Mxico: Universidad Autnoma de Aguas Calientes. Universidad de
Guadalajara. Recuperado de
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2048/login?user=proveedor&pass=danue0a0&ur
l=http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2051/login.aspx?direct=true&db=edselb&AN=
edselb.10889809&lang=es&site=eds-live
Nota: Leer p.195-196
e) Anlisis de resultados
Deber concluirse si la muestra es txica o no, y cules son sus niveles de toxicidad.
segn el ensayo realizado.
La ficha debe tener, como mnimo, los datos incluidos en la ficha de ejemplo que se
encuentra en el Cuadro 3.11 del recurso relacionado.
Colaborativo
N/A
Los recursos consultados sern citados y referenciados siempre
bajo las Normas APA, versin 3 en espaol (Traduccin de la
versin 6 en ingls).