Gentica Bacteriana

Las bacterias poseen todos

los componentes requeridos
para reproducirse, cosechar
y utilizar la energa del
ambiente.

Se reproducen rpidamente,
una clula da origen a dos
idnticas en cada ciclo de
divisin, produciendo un
colonia de individuos
idnticos.
 Crecimiento bacteriano
Bacteria protrtrofa o tipo silvestre. Bacteria capaz de sintetizar
todos los componentes orgnicos esenciales a partir de un medio
mnimo: Una fuente de carbn orgnico (glucosa o lactosa) y una
serie de iones como Na+, K+, Mg++, Ca++, NH4+.
Bacteria auxtrofa. Bacteria que por mutacin ha perdido la
capacidad de sintetizar todos los componentes orgnicos
esenciales. Ej. Bacteria auxtrofa his-, se le tiene que adicionar al
medio de cultivo histidina, a diferencia de la bacteria protrtrofa
his+.
Medio completo- Medio que ha sido ampliamente suplementado.

Crecimineto.
Fase lag. Crecimiento lento
Fase log. Cecimiento exponencial
Fase estacionaria. Los nutrietes y el oxgeno
llegan a ser limitantes
 Requiere biotina como suplemento

Requiere arginina como suplemento

Requiere metionina como suplemento

No puede utilizar lactosa como fuente de carbono

No puede utilizar galactosa como fuente de carbono
Resistente al antibitico estreptomicina
Susceptible al antibitico estreptomicina
Medio mnimo: medio sintetico bsico para el crecimiento bacteriano sin
nutrientes adicionales
 Conjugacin
Conjugacin. Proceso parasexual mediante el cual la informacin
gentica de una bacteria se tansfiere y recombina con la de otra
bacteria.
Recombinacin en bacterias y bacterifagos. Sustitucin de uno o
ms genes presentes en una cepa por los de otra cepa
genticamente diferente.
Recombinacin en eucariontes. Entrecruzamiento que da lugar a un
intercambio recproco.
Recombinacin
Lederberg y Tatum 1946
Cepa A. Requeria metionina (met) y
biotina (bio).
Cepa B. Requera treonina (thr),
leucina (leu) y tiamina (thi).
Cualquier bacteria que creciera en el
medio mnimo sera protrtrofa. Era
altamente improbable que
cualquiera de las clulas con 2 o 3
genes mutantes sufriera mutaciones
espontaneas simultaneamente en
los 2 o 3 loci. Por lo tanto, cualquier
protrtrofo recuperado deba de
haber surgido como consecuencia
de un intercambio gentico y
recombinacin.
 Clulas F + y F-
Cepas diferentes de bacterias implicadas en transferencia
unidireccional de material gentico.
Clulas F+ Cepa que dona parte de su cromosoma (F por fertilidad).
Clulas F-. Bacterias receptoras que sufren recombinacin por
recibir el material cromosmico donante y lo integran como parte de
su propio cromosoma.
Bernard Davies. El contacto fsico es
esencial para la recombinacin.
 F+ forman un pilus sexual o F que
establece contacto con la otra clula.
Tienen factor de fertilidad (factor F)
que les confiere la capacidad de donar
parte de su cromosoma en la
conjugacin.
Lederberg, Hayes y Cavalli-Sforza
demostraron que en ciertas
condiciones el factor F se puede
eliminar de clulas anteriormente
frtiles. Si se ponen a crecer con
clulas donantes frtiles recuperan el
factor F. El factor F es un factor movil.
Factor F. Molcula de DNA de doble
cadena circular. Es una unidad
gentica autnoma- plsmido.
Contiene, entre otros, 19 genes
implicados en la transferencia de
informacin gentica (genes tra)
incluyendo los que son esenciales
para la formacin de los pili..
Conjugacin bacteriana William Hayes, 1953
E. coli
F+ (Factor de fertilidad)

F-
Pili

F+

Plsmido F

*Plsmido F codifica alrededor de 100 genes

1 2

3 4
5 6
Plsmidos auto-transmisibles
Sistema Mpf (maiting-
pair formation)

Fuciones:
1- Mantiene unidas a la
clula donadora con la
clula receptora durante
el proceso de
conjugacin
2- Forma un canal por
medio del cual son
transferidas el DNA y
protenas durante la
conjugacin.
3- Incluye la protena
que establece
comunicacin entre el
sistema Mpf y el Dtr,
iniciando la transferencia
del plsmido.

Cabezn et al., FEMS Microbiology Reviews, 39, 2015, 8195

Cabezn et al., FEMS Microbiology Reviews, 39, 2015, 8195
 Componente Dtr (DNA transfer and replication)
Prepara al DNA del plsmido para su transferencia.

Relaxasa
1- Es parte central del componente Dtr.
2- Es una DNA endonucleasa que corta a una sola hebra (nick) en el sitio nic en la
secuencia oriT para iniciar el proceso de transferencia.
3- Rompe la unin fosfodiester en el sitio nic transfiriendo la unin de un
deoxinucletido a una de sus tirosinas (transesterificacin) y requiere poca
energa porque no hay rompimiento ni formacin neta de nuevos enlaces.
4- Es parte de una estructura mayor llamada relaxosoma, que consite de varias
protenas que normalmente estn unidas a la secuencia oriT del plsmido.
5- La helicasa es otra de las protenas que forma parte del relaxosoma. Ayuda a
separar ambas hebras de DNA iniciando en la secuencia oriT. Puede ser parte de
la relaxasa.
Cabezn et al., FEMS Microbiology
Reviews,39, 2015, 8195
 Cepa Hfr
1950, Cavalli-Sforza trato F+ con gas mostaza, inductor de
mutaciones. Creo cepa que presenta taza de recombinacin 1000
veces ms frecuente que cepa de origen.
Hfr (high frecuency of recombination).
F+ X F- F+ baja tasa recombinacin
Hfr X F- F- alta tase de recombinacin
Ciertos genes recombinan ms frecuentemente que otros y algunos
no recombinan. Este patrn de transferencia de genes no aleatorio
variaba de una cepa Hfr a otra.
50, Wollman y Jacob. Las cepas Hfr permiten la
cartografa gentica de los cromosomas. Tcnica
de conjugacin interrumpida. Hfr X F- .
Incubacin por tiempos determinados y
separacin de recombinantes por agitacin.
Cepa Hfr sensible a antibiticos y cepa F-
resistente. Recombinantes resistentes.
Genes concretos se transferan y recombinaban
antes que otros. Transferencia secuencial de
genes. Azi-azitromicina, TonR-resistente a fago T1.
 Integracin del plsmido F al cromosoma

Regiones
O
homlogas
donde el
apareamiento
entre bases
puede ocurrir
O

Direccin de la
transferencia

Tanto el cromosoma bacteriano como el episoma F son circulares

 Resultados del experimento
Tiempo de % de colonias que sobreviven con los
conjugacin genotipos indicados
(min) thr+leu+ azis tons lac+ gal+
 Cepa Hfr
Transferencia secuencial de genes est
correlacionado con el tiempo en el que se haba
permitido que la conjugacin se diera.
El cromosoma de la cepa Hfr se transfera
linealmente, permite ver el orden de los genes y la
distancia entre ellos.
Diferentes cepas Hfr, diferentes puntos de origen
(O) y la direccin en la que proceda la entrada.

Qu determina O? El
factor F se integra en
diferentes puntos del
cromosoma. Su
posicin determina O.
Cepa Hfr Los genes
prximos a O
se transfieren
primero.
El factor F es lo
ltimo en
transferirse.
La conjugacin
no dura lo
suficiente para
permitir que
pase el factor F
y por lo tanto
las clulas
permanecen F-.
Permite
cartografiar el
cromosoma
completo de E.
coli.
Cepa K12, 900
genes
 Clulas F + y F-
F+ x F- la conjugacin se da fcilmente, cada clula F- recibe una
copia del factor F, pero no se da recombinacin.
En una poblacin de clulas F+, el factor F se integra
espontneamente en puntos aleatorios del cromosoma bacteriano
con una frecuencia extremadamente baja, convirtiendo a la clula
en Hfr.
Por lo tanto, en los cruces F+ x F-, la extremadamente baja
frecuencia de recombinacin (10-7) se atribuye a las raras clulas
Hfr que se forman, que luego se conjugan con clulas F-. Debido a
que el punto de integracin es aleatorio, se sigue una transferencia
de genes no especfica que da lugar a la baja frecuencia de
recombinacin al azar observado en los experimentos F+ x F- .
A menos que la clula receptora, simultneamente o
posteriormente, sufra conjugacin con una cepa que sea F+,
permanecer F-.
Estado F y los merozigotos
1959, Adelberg
descubri que el
factor F puede
perder su
condicin de
integracin,
dando lugar a la
reversin al
estado F+.
El factor F se
lleva consigo
varios genes
bacterianos
adyacentes- F,
se comporta
como F+
F X F- genes
cromosmicos
que se
encuentran en F
estarn
duplicados.
Clula diploide
parcial
merozigoto
 Experimentos de
transformacin
Frederick Griffith 1927
 El DNA como principio transformante

Avery, MacLeod y McCarty, 1944.

Los resultados confirman que un cido nucleico del tipo de la desoxiribosa es la unidad fundamental del principio
Transformante del Pneumococcus.
 Plsmidos
Unidades hereditarias extracromosmicas.
Molculas de doble cadena de DNA circulares, ej. Factor F.
Tienen 1 o ms genes, a menudo muy pocos.
Su replicacin depende de la misma maquinaria que replica al DNA
cromosmico, contienen origen de replicacin y se distribuyen en
ambas clulas hijas.
Tambin se les llama episomas (elemento gentico transmisible de
clula a clula y que se propagan en el citoplasma o, despus de la
insercin, como parte del cromosoma bacteriano.
Se clasifican en:
de bajo nmero de copias (1-10 copias por clula)
de alto nmero de copias (10-100 copias por clula)
 El replicn del plsmido define el nmero de copias del plsmido por bacteria

El replicn es la una unidad gentica que consiste de un origen de replicacin

del DNA y sus elementos de control asociados.
 Los plsmidos codifican diversas funciones que le
permiten, a la bacteria que los contiene, sobrevivir
en distintos habitats
Funciones de resistencia
Antibiticos (aminoglicsidos, cloramfenicol, -lactamas)
Metales pesados (Hg, Ni, Co, Pb, Cd, Bi)
Aniones txicos (arsenato, arsenito, boratos, cromatos)
Funciones metablicas
Produccin de bacteriocinas
Metabolismo de carbohidratos
Metabolismo de compuestos carbonados
Factores que intervienen en la interaccin con el hospedero
Enterotoxina y hemolisinas (Escherichia coli)
- endotoxina (Bacillus thuringiensis)
Neurotoxina (Clostridium tetani)
Infeccin y nodulacin de leguminosas (Bradirhizobium sp.)
 Plsmido R
Se clasifican dependiendo de la informacin especificada por su
DNA: Factor F, plsmidos R, plsmidos Col.
Plsmidos R. Consta de RTF (factor de transferencia de resistencia)
y 1 o ms determinantes r. RTF contiene informacin para la
transferencia de los plsmidos entre bacterias. Determinantes r
genes que confieren resistencia a antibiticos.

Plsmido con r pero no RTF, es resistente a

antibiticos pero no puede transferir resistencia a
otras bacterias.
Resistencia a: tetraciclina (Tc), estreptomicina
(SmR), ampicilina (AmpR), sulfonamida (SuR),
kanamicina (KanR) y cloranfenicol (CfR)
 Plsmidos Col
Codifican para protenas colicinas que son altamente txicas para
cepas bacterianas que no lo contengan.
Bacterias con plsmido- colicinognicas
Tambin tienen un gen que codifica para una protena inmunitaria
que protege a la clula husped de la toxina.
No son transmisibles a otra clula, a menos que est presente el
plsmido F o R.
 Vectores de clonacin
Plsmidos- Molculas circulares de DNA que
se replican por separado del cromosoma del
hospedero.5-400 kb. Se introducen a bacterias
competentes por transformacin. Choque
trmico o electroporacin.
Todas tienen origen de replicacin.
Seleccionadas por resistencia a antibiticos.
Transformacin es menos exitosa a medida
que se incrementa el tamao del plsmido. Es
difcil clonar en plmidos segmentos de DNA
ms largos que 15 Kb.
Bacterifagos. Se usa como vector para clonar
molculas de DNA ms grandes 40-53 Kb.
Cromosomas artificiales de bacterias. Vectores
Bac. Plsmidos diseados para la clonacin de
molculas grandes de DNA 100-300 Kb).
Cromosomas artificiales de levaduras (YACs).
Clonar molculas de 150 Kb
DH5a: lacZ Delta M15 mutation: Allows for blue-white screening for recombinant cells. (3) endA1
mutation: Allows for lower endonuclease degradation which ensures higher plasmid transfer rates. (4)
recA1 mutation: reduces homologous recombination for a more stable insert. (5)
Transformacin bacteriana
Transferencia de un
fragmento de DNA
extracelular que es
incorporado por una
bacteria viva dando
lugar a un cambio
gentico estable.
Las bacterias en estado
competente.
DNA transformante-
10,000-20,000 pb
codifica varios
genes (1/200 del
cromosoma E coli)
Paso del DNA a travs
de pared y
membrana cel. Es
un proceso activo
requiere energa y
protenas
transportadoras.
Protenas que participan en la recombinacin
Se descubrieron a partir de
mutantes de genes rec.
RecA- fuerte afinidad in vitro
para unirse a ssDNA. Se une a
la cadena de DNA que entra en
la clula receptora. El complejo
protena-DNA invade y explora el
cromosoma de la bacteria hasta
hallar la regin complementaria
al ssDNA.
El DNA invasor se aparea con su
regin homloga y desplaza a su
contraparte.
RecBCD complejo proteico
codificado por genes recB, recC
y recD. Desenrrolla el DNA
cromosmico y lo corta, lo que
facilita el desplazamiento de
DNA receptor por la molcula
invasora.
 Bacterias naturalmente
competentes
Gram-positivas
Bacillus subtilis
Streptococcus pneumoniae
Gram- negativas
Heamophilus influenza
Neisseria gonorrhoeae
Cyanobacteria
Synechococcus
 Transformacin natural
Pasos generales que ocurren en la
transformacin natural:
1.-Unin de la doble hebra de DNA a la superficie
exterior de la bacteria.
2.-Movimiento del DNA a travs de la membrana y
pared celular de la bacteria.
3.-Degradacin de una hebra de DNA.
4.- Translocacin del ssDNA al citoplasma a travs de
la membrana interna.
5.- Integracin estable del ssDNA al cromosoma
receptor por recombinacin homloga.
Competencia en bacterias A) gram positivas
B) gram-negativas

Genes com (competence

defective)
ComEA - protena que
directamente une al dsDNA.
Comf- protena que
transloca el DNA a la clula.
ComG- protenas que
hacen una estructura de
poro o canal a traves de la
pared celular y la
membrana citoplasmtica.
Tamao del ssDNA 8.5-12
kb
Protenas Pili, primero
descritas en formacin de
pili.
No se puede introducir
plsmidos ya que
solamente se introducen
ssDNA
 Competencia inducida
artificialmente
Mecanismos para inducir competencia:
Electroporacin
Choque trmico
Tratamiento con Ca2+: Escherichia coli,
Salmonella spp.,
Pseudomonas (algunas)

Las bacterias pueden introducir ssDNA y

dsDNA (plsmidos)
Electroporacin
 Transformation efficiency
(transformants/g) is calculated as follows:
# colonies on plate/microg of DNA plated

Clculo de eficiencia de transformacin

Eficiencia de transformacin= nmero de transformantes/ g de Plsmido en placa

(Mg2+ es cofactor de DNAsas)