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LABORATORIO DE BIOQUMICA
QUMICA INDUSTRIAL
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
Facultad De Ciencias Qumicas
Laboratorio de BIOQUIMICA
CONTENIDO.
Reglamento general para los laboratorios de qumica ............................................ 1
PRACTICA No 1. Preparacin de soluciones amortiguadoras o buffer................... 4
PRACTICA No 2. Extraccin e identificacin de lecitina y colesterol .................... 20
PRACTICA No 3. Etanol y fermentacin qumica.................................................. 27
PRACTICA No 4. Enzima: catalasa y alfa-amilasa ............................................... 36
PRACTICA No 5. Pruebas especficas de lpidos ................................................. 42
PRACTICA No 6. Precipitacin, separacin y punto isoelctrico de las protenas 47
PRACTICA No 7. Coagulacin de protenas ......................................................... 61
PRACTICA No 8. Preparacin de un extracto enzimtico ..................................... 66
PRACTICA No 8.1. Actividad enzimtica en tubo de ensaye ................................ 70
PRACTICA No 8.2. Especificad del sustrato ......................................................... 73
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Facultad De Ciencias Qumicas
Laboratorio de BIOQUIMICA
Reglamento general para los laboratorios de qumica
Control de asistencia
4. Todos los integrantes de cada gaveta, debern contar con una copia de la
llave del candado que asegura la misma.
2. El equipo de proteccin personal que ser usado en los laboratorios y anexos del
laboratorio donde se lleven a cabo trabajos de experimentacin ser:
Alumnos:
1. Bata de algodn 100% (cerrada, manga larga y larga)
2. Lentes de seguridad. En caso de lentes graduados solicitar a los
alumnos que sean de vidrios endurecidos e inastillables y uso de
protectores laterales
1
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3. Mascarilla con cartuchos apropiados para cidos, bases y disolventes
orgnicos.
4. El pelo recogido (en las prcticas que se utilice mechero)
5. Guantes
6. Toalla o lienzo de algodn
7. Zapatos cerrados
Profesor titular:
1. Bata de algodn 100% (cerrada, manga larga y larga)
2. Lentes de seguridad
3. En caso de lentes graduados debern ser de vidrio endurecido e
inastillable y uso de protectores laterales.
Profesor auxiliar:
1. Bata de algodn 100% (cerrada, manga larga y larga)
2. Lentes de seguridad. En caso de lentes graduados debern ser de
vidrio endurecido e inastillables y uso de protectores laterales
3. Guantes cuando se encuentre en contacto con los reactivos
5. Todas las sustancias, equipos, materiales, etc., debern ser manejados con el
mximo cuidado, atendiendo a las de los procedimientos correspondientes.
6. No tire cerillos al piso, ni los apague contra el plstico que protege las mesas, no
los tire en las canaletas de las mesas ni en los lavaderos, hay botes de basura,
asegrese de tirarlos apagados.
Este Reglamento ser dado a conocer a todos los alumnos al inicio del
periodo lectivo y una vez recabada su firma de enterado, estar en un lugar
visible en cada laboratorio.
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Laboratorio de BIOQUMICA
PRCTICA 1
PREPARACIN DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS O
BUFFER
OBJETIVO.
Que el alumno aplique conocimientos sobre disoluciones amortiguadoras.
Preparar una disolucin amortiguadora, comprobar su capacidad
amortiguadora y comparar con otra disolucin que no presente
caractersticas amortiguadoras.
INTRODUCCIN.
Muchas de las reacciones qumicas que se producen en solucin acuosa necesitan
que el pH del sistema se mantenga constante, para evitar que ocurran otras
reacciones no deseadas. Las soluciones ""reguladoras"" o Buffer son capaces de
mantener de acidez o basicidad de un sistema dentro de un intervalo reducido de
pH, por lo cual tienen mltiples aplicaciones, tanto en la industria como en los
laboratorios.
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Capacidad Amortiguadora.
Se utiliza para comparar las eficiencias de las soluciones amortiguadoras y se define
como: La cantidad en miliequivalentes (meq) de cido o base fuerte que puede
neutralizar la solucin amortiguadora, sufriendo un cambio de pH en una unidad.
Matemticamente, se expresa como la relacin cociente entre el incremento de
cido o base fuerte con respecto al incremento del pH, es decir:
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Donde:
= Capacidad amortiguadora de la solucin
B = Incremento de cido o base fuerte
meq /(pH) (pH) = incremento en unidades de pH
Lo evidente es que esta capacidad, depende de dos factores:
Sistema Bicarbonato
Sistema Fosfato
Hemoglobina
Protenas del plasma La importancia y relevancia de cada uno, depende del
tipo de organismo.
Sistema Fosfato.
Todos los fosfatos en el animal vienen de la dieta, a un pH de 7.40, la mayora del
fosfato en los compartimientos fluidos existe en la forma de las especies inicas
H2PO4 -1 y HPO4 -2 , cuando el pH en los fluidos corporales comienza a decaer, la
especie HPO4 -2 se vuelve importante corno un aceptante de protones y se convierte
en la especie H2PO4 -1, as cuando el pH se eleva por encima de 7.40, la especie
H2PO4 -1 dona un protn al fluido y se convierte de nuevo en la especie HPO 4 -2. El
sistema fosfatos es el amortiguador ms importante en la orina, debido a que los
protones excretados en la orina son principalmente en la forma de la especie H 2PO4
-1.
MATERIALES.
Vidrio de reloj
4 vasos de precipitado de 250 mL
Pipetas graduadas
Agitador
Balanza granataria
REACTIVOS.
Agua destilada
cido actico glaciar
Solucin de NaOH
Solucin amortiguadora
HCl
CH3COONa
H2PO4
TCNICA.
A) PREPARACIN DE LA DISOLUCIN AMORTIGUADORA DEL pH 5.
Disolver la sal en un
Pesar 5.248 g de vaso de precipitado Ajustar el valor de pH
CH3COONa en un con 50 mL de agua a 5 adicionando HCl o
vidrio de Reloj o pesa destilada y adicionar NaOH, segn haya
filtro. 21 mL de acido sido el caso.
acetico glaciar .
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B) DETERMINACIN DE LA CAPACIDAD AMORTIGUADORA.
Adicionar poco a
poco NaOH 0.1M
En un vaso de con la bureta
precipitado colocar previamente Repetir nuevamente
disolucin montada en soporte Repetir la operacin ahora con HCl hasta
amortiguadora universal para titular, con una disolucin que su pH cambie en
previamente hasta que el pH de de NaOH 0.1M. disminuya en una
preparada y una disolucion unidad.
determinar el pH. amortiguadora
cambiara una
unidad.
El experimento
total se repetira
Adicionar a la
con el tampon
mezcla volumenes Con otros 50 mL
previamente Analizar la pka del
de 1 mL de HCl de tampn se
diluida a la mitad. tampn, los
por medio de una procede de forma
Realizar con los efectos del
bureta, leyendo y similar pero
datos obtenidos tampn, la
anotando el pH utilizando en este
en cada caso las capacidad del
despues de cada caso, para la
grficas tampon y el
adicion, hasta valoracion NaOH
respectivas que efecto de la
alcanzar un pH hasta obtener un
relacionen valores dilucin sobre
que rebase las pH que sobrepase
de pH anteriores
dos unidades por en 2 unidades de
(ordenadas) frente apartados.
debajo de la partida.
a mL de HCl y
partida.
NaOH aadidos
(en absisas).
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OBSERVACIONES Y RESULTADOS.
A) PREPARACIN DE LA DISOLUCIN AMORTIGUADORA DEL pH 5.
Solucin amortiguadora de CH3COOH y CH3COONa.
NaoH al 50%
pH mL de NaOH 0.12 N
5 0
5.07 2
5.11 4
5.15 6
5.20 8
2.29 10
5.34 12
5.42 14
5.53 16
5.61 18
5.7 20
5.84 22
5.96 24
6 25
pH inicial: 5
pH final: 6
Se necesit 25 mL de NaOH para variar el pH en una unidad.
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Grfica de la capacidad amortiguadora de la solucin CH3COOH y CH3COONa.
CAPACIDAD AMORTIGUADORA
6.2
5.8
5.6
pH
5.4
5.2
4.8
0 5 10 15 20 25 30
mL de NaOH
pH terico
Solucin amortiguadora de K2HPO4 y KH2PO4: 7.21
pH mL de NaOH 0.01N
6.45 0
6.39 1
6.37 2
6.35 3
6.34 4
6.34 5
6.34 6
6.35 7
6.35 8
6.36 9
6.36 10
6.37 11
6.39 12
6.40 13
6.41 14
6.41 15
6.42 16
6.44 17
6.44 18
6.45 19
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6.46 20
6.48 21
6.49 22
6.49 23
6.51 24
6.52 25
CAPACIDAD AMORTIGUDORA
6.54
6.52
6.5
6.48
6.46
6.44
pH
6.42
6.4
6.38
6.36
6.34
6.32
0 5 10 15 20 25 30
mL de NaOH
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El pH inicial de la buffer fue de 6.45 al ir adicionndole NaOH 0.01 N, el pH
disminuy hasta el mL 10, hasta ese momento la concentracin de iones H + era
mayor con respecto a la concentracin de iones OH-.
Por lo tanto, se define la capacidad buffer como la cantidad de cido o base que
puede neutralizar sufriendo un desplazamiento de pH en una unidad. En esencia,
resulta evidente que la eficacia amortiguadora est vinculada a dos factores:
a) a la concentracin absoluta del sistema
b) a la proporcin relativa de las formas disociadas y sin disociar.
CLCULOS.
A) PREPARACIN DE LA DISOLUCIN AMORTIGUADORA DEL pH 5.
Solucin amortiguadora de CH3COOH y CH3COONa.
Ecuacin de Henderson-Hasselbalch.
Datos.
CH3COONa: 5.248 grs. PM CH3COONa: 83 g/mol
CH3COOH: 21 mL PM CH3COOH: 60.06 g/mol
Densidad del CH3COOH: 1.05 g/mL
Volumen de H2O: 50 mL
Volumen de la solucin: 71 mL= 0.071 L.
Moles de CH3 COONa Moles de CH3 COONa
Moles: grs/PM Moles: grs/PM
Moles: 5.248g/83 g/mol Moles: 22.05 g/60.05 g/mol
Moles: 0.063228915 Moles: 0.367194005
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Sustituyendo
pH: 4.74 + log (0.890548098/5.115408521)
pH: 3.97
K2HPO4 KH2PO4
173.97---- 1M----1000 mL 135.97---- 1M----1000 mL
X ---- 0.1M---- 1000 mL X ---- 0.1M---- 1000 mL
X: 17.397 g X: 13.597 g
Ka (KH2PO4): 6.16X10-8
pKa: -log Ka
pKa: -log 6.16X10-8: 7.21
Sustituyendo
pH: 7.21+ log (0.1 M/0.1 M): 7.21
CONCLUSIONES.
Durante esta prctica se logr llevar acabo los objetivos planteados, aplicando los
conocimientos sobre las soluciones buffer previamente adquiridos en cursos
anteriores. Las soluciones buffer son aquellas que estn compuestas por cidos
dbiles o bases dbiles y una de sus sales. Estas soluciones son de gran
importancia ya que poseen la propiedad de resistir variaciones de pH, en donde de
igual forma se da un fenmeno conocido como capacidad amortiguadora que viene
definida como el nmero de moles de OH- o H+ que se requieren para producir un
cambio de pH en una unidad.
En las soluciones buffer la concentracin analtica tanto del cido dbil o base dbil
como de la sal que se emplea en su preparacin, permite predecir el
comportamiento que est tendr frente a cidos y bases fuertes. En una solucin
amortiguadora el cido neutraliza los iones OH- y la base conjugada los iones H+.
BIBLIOGRAFA.
Harris Daniel C. 2001. Anlisis qumico cuantitativo. 2 edicin. Editorial
Revert, S.A. Mxico.
Rubinson J.F., Rubinson K.A. 2000. Qumica Analtica Contempornea. 1
ed. Prentice Hall, Mxico.
Skoog Douglas A., West Donald M., Holler F. James, Crouch Stanley R.
2008. Fundamentos de Qumica Analtica. 8 edicin. Thomson Learning,
Mxico.
Umland J.B., Bellama J.M. Qumica General. 2000. 3a edicin. International
Thomson Editores, S.A. de C.V.
Vega Avila Elisa, Konisberg Fainstein Mina. 2001. La teora y la prctica en
el laboratorio de qumica general para Ciencias Biolgicas y de la Salud. 1
ed. Universidad Autnoma Metropolitana. Mxico
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PRCTICA 2
EXTRACCIN E IDENTIFICACIN DE LECITINA Y
COLESTEROL
OBJETIVO.
Confirmar la presencia de un lpido compuesto e identificar un lpido derivado.
INTRODUCCIN.
Las grasas se obtienen de fuentes naturales por medio de una gran diversidad de
proceso, el calentamiento, la filtracin de los tejidos grasos de los cerdos producen
manteca, el batido de la leche se separa de la mantequilla, el prensado y la filtracin
de semillas producen aceites vegetales y su respectiva torta.
Los productos finales de este experimento son sustancias de una pureza relativa y
sern identificados una vez efectuadas las extracciones.
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Lecitina.
Lecitina es un trmino genrico para
designar a un amplio grupo de lpidos
saponificables y con funcin de
emulgente que se producen de manera
natural en tejidos animales y vegetales.
Engloba a cualquier grupo de sustancia
grasa (de color amarillo-marronceas)
compuesta de cido fosfrico, colina,
cidos grasos, glicerol, glicolpidos,
triglicridos y fosfolpidos, que incluye,
fosfatidilcolina, fosfatidilserina,
fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol y cido fosfatdico.
Colesterol.
El colesterol es un esterol (lpido) que se
encuentra en los tejidos corporales y en el
plasma sanguneo de los vertebrados. Pese a
que las cifras elevadas de colesterol en la
sangre tienen consecuencias perjudiciales para
la salud, es una sustancia esencial para crear la
membrana plasmtica que regula la entrada y
salida de sustancias en la clula. Abundan en las
grasas de origen animal.
Prueba de Lieberman.
Se basa en la reaccin coloreada (verde) que dan aquellas sustancias que tienen
como ncleo el ciclo pentanoperhidrofenantreno.
El anhdrido actico puede condensarse con los grupos hidroxilo de la posicin 3
del colesterol o esteroides relacionados produciendo el ster correspondiente. Si el
colesterol contiene una instauracin en la posicin 5, ocurrir una epimerizacin a
la forma 3 y deshidratacin, con la formacin de un color caracterstico. La reaccin
sirve como prueba de especfica para los 3 hidroxiesteroides con una instauracin
en la posicin 5.
MATERIALES.
Yema de huevo
Papel filtro
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Embudo de filtracin
Vasos de precipitado de 250 mL
Parrilla elctrica
Embudo de filtracin
Tubos de ensaye
REACTIVOS.
Solucin etanol-ter
Alcohol 95%
KOH al 10%
Cloroformo
Anhdrido actico
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TCNICA.
Seguir calentando en
KOH y adicionar Adicionar 15 mL de
40mL de ter de KOH alcohlico aal A la lecitina se le
extracto de 10% en la pasta, adiciona cloruro de
El extracto de
colesterol, evaporar agitar y calentar la cadmio y se disuelve
colesterol se entibia
la solucin de solucin por 30 min en 20 mL de alcohol.
con 15 mL de etanol.
colesterol secndola en la parrilla caliente,
en una parrilla, agregando
agregando algo de lentamente.
agua.
Transferir la solucin
en un tubo y Hacer la prueba de
centrifugar de 3 a 4 Lieberman.
minutos.
Obtencin de lecitina
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Obtencin de colesterol
CONCLUSIONES.
A travs del desarrollo de esta prctica se realiz la extraccin de lpidos como son
la lecitina y colesterol. Se vio como la yema es soluble en solventes orgnicos como
el ter, que al mezclarse se homogeniza y por filtracin se separan los lpidos, al
adicionarle cetona se vio un aislamiento de dos fases una liquida en la parte superior
y una slida en la parte inferior indicando su precipitado en la presencia de lecitina,
que es la sustancia insoluble en acetona. Se obtuvo un lquido compuesto que es la
lecitina y un lpido derivado (colesterol). A partir de la extraccin e identificacin de
los lpidos se pudo determinar si un alimento rene los requisitos de estndar de
identidad, para entender los efectos de estos en la propiedad funcional y nutricional.
BIBLIOGRAFA.
Vjar Rivera E. (2005). Prcticas de Bioqumica Descriptiva. Hermosillo
Sonora, Mxico. Editorial UniSon.
Pertierra Garrido A. & Teijn Rivera J.M. (2006). Fundamentos de Bioqumica
Estructural. Editorial Tbar, S.L. Madrid, Espaa.
Pea A., Arroyo A., Gmez A. & Tapia R. (2004). Bioqumica. Editorial
Limusa, S.A. de C.V. Mxico, D.F.
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PRCTICA 3
ETANOL Y FERMENTACIN QUMICA
OBJETIVO.
El objetivo de la fermentacin es proporcionar energa anaerobia a los
microorganismos unicelulares (levaduras) en ausencia de oxgeno.
INTRODUCCIN.
La fermentacin alcohlica, tambin conocida como, fermentacin etlica, o
del etanol, es un proceso de tipo biolgico, en el cual se lleva a cabo una
fermentacin sin presencia de oxgeno. Este tipo de fermentacin se debe a las
actividades de ciertos microorganismos, los cuales se encargan de procesar
azcares, como la glucosa, la fructosa, etc. (hidratos de carbono), dando como
resultado un alcohol a modo de etanol, CO2 (gas) y ATP (adenosn trifosfato),
molculas que son utilizadas por los propios microorganismos en sus metabolismos
energticos.
La transformacin de
glucosa en alcohol
supone la cesin de 40
kcal. Mientras que la
formacin de un
enlace de ATP
necesita 7,3 kcal, por
tanto se requerirn
14,6 kcal, al crearse
dos enlaces de ATP,
tal y como se muestra
en la reaccin (3). Esta
energa es empleada
por las levaduras que
llevan a cabo la
fermentacin
alcohlica para crecer. De forma que slo quedan, 40 14,6 = 25,6 kcal que se
liberan, calentando la masa de fermentacin [3].
No obstante, la fermentacin alcohlica no es una utilizacin eficiente del sustrato
glucdico, fundamentalmente por su carcter anaerobio. Si se compara con la
degradacin aerbica de la glucosa, se llega a la conclusin de que esta ltima pone
a disposicin de la actividad celular de las levaduras, un 40,4 % del total de la
energa. En cambio, en la fermentacin slo se consigue abastecer a las clulas de
las levaduras con un 2,16 % de la energa total, almacenada en forma de ATP.
Una vez los azcares simples son formados, los microorganismos pueden
rpidamente fermentarlos a etanol. La fermentacin de etanol es un proceso
metablico de carcter anaerbico en el cual los azcares simples (glucosa,
sacarosa, xilosa, etc.) son parcialmente oxidados a compuestos como etanol y CO2.
En este proceso los compuestos intermedios actan como aceptores finales de
electrones. La fermentacin alcohlica de define como el proceso bioqumico por el
cual las levaduras transforman los azcares del mosto en Etanol y CO2.
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Para que la fermentacin se realice de manera eficiente, el mosto debe hallarse en
condiciones anaerobias. En condiciones aerobias las levaduras se multiplican
abundantemente con un rendimiento en biomasa muy alto ya que se consiguen 1g
de levadura por cada 4g de azcar consumidos, pero los productos obtenidos son
muy poco etanol, agua y CO2.
Tanto levaduras como bacterias han sido utilizadas para la produccin de etanol.
Saccharomyces cerevisiae es la levadura ms comnmente utilizada. El Etanol es
inhibitorio a altas concentraciones y la tolerancia al alcohol de las levaduras es
crtica para obtener rendimientos altos. En la actualidad, ha surgido un inters
creciente en la inmovilizacin de clulas para la produccin de alcohol, debido
principalmente a las numerosas ventajas que ofrece. La inmovilizacin celular
permite el aumento en la productividad, la factibilidad del proceso en continuo, la
estabilidad celular y los bajos costos de recuperacin y reciclo en los procesos de
separacin. Sin embargo, su implementacin en los procesos industriales es aun
limitada y su aplicacin depender de los futuros desarrollos en los procedimientos
de inmovilizacin que puedan ser fcilmente escalables. Una de las tecnologas
contemporneas que son ms promisorias para la fermentacin de etanol, es la
fermentacin en continuo usando clulas de levaduras inmovilizadas.
La determinacin de los factores que limitan la gliclisis fermentativa del etanol son
complejos debido a la interrelacin existente y a la naturaleza de los parmetros
intervinientes durante el proceso de fermentacin. Algunos de ellos se deben tener
en cuenta en la fermentacin alcohlica industrial. En las limitaciones que surgen
durante el proceso se pueden enumerar algunos de los ms importantes como son:
Etanol.
Es el producto qumico orgnico sinttico ms empleado por los hombres a nivel
industrial, es obtenido a partir de los azucares vegetales. Los azucares simples son
fermentados directamente utilizando Saccharomyces cerevisiae; la cual transforma
los azucares en etanol las levaduras presentan mayor actividad metablica debido
a su crecimiento rpido, aunque su poder fermentativo depende de sus
caractersticas genticas.
Gluclisis en la fermentacin
Al final de este proceso se producen 4 molculas ATP, pero se gastan 2 por lo que
la GANANCIA NETA es de 2 ATP. Adems al romperse la glucosa se liberan un
total de 4 electrones que son tomados por la molcula de NADH + H+ y se utilizan
luego al final en la fermentacin.
MATERIALES.
Vaso de precipitado de 400 ml
Soporte universal
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Matraz Erlenmeyer
Bao Mara
Globos
Globos
Embudo
Matraz redondo
REACTIVOS.
Levadura
Agua
Sales de pasteur
Azcar
Carbonato de potasio
TCNICA.
Colocar 20 g de
sacarosa en matraz Se agrega 20 mL de
Erlenmeyer ms 175 Mezclar sal de Pasteur y 2 g
mL de agua destilada de levadura
a 25C
Se coloca en la
Se quita y cierra el Se disuelve la mezcla
boquilla del matraz un
globo inflado en Bao Mara
globo
Al matraz se le
La mezcla dentro del agrega 10 g de
matraz se procede a carbonato de potasio Se debe cuidar la
filtrar en un matraz de y se realiza temperatura
fondo redondo destilacin
fraccionada
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OBSERVACIONES Y ESQUEMAS.
Se colocaron los 20 g de sacarosa y 175 Ml en un matraz,
se mezcl la disolucin y se agreg 20 mL se sal Pasteur y
2 g de levadura.
RESULTADOS.
En esta prctica se obtuvo la produccin de CO2, no se realiz la destilacin
fraccionada por falta de equipo de destilacin en el laboratorio.
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CONCLUSIONES.
En esta prctica y con la investigacin previa durante sta, pudimos notar que el
objetivo principal de est practica fue conocer la produccin de energa anaerbica
a los organismos unicelulares (levaduras en ausencia de oxgeno, para ello
descomponen las molculas de glucosa y obtienen la energa para sobrevivir, y as
mismo producir alcohol y CO2,
Algunos microorganismos que realizan la fermentacin alcohlica son:
Levaduras (Hongos unicelulares eucariotas) como Saccharomyces cerevisiae,
Anaerobias facultativas (pueden o n fijar el O2 atmosfrico), Bacterias Anaerobias
Obligadas que producen la Fermentacin alcohlica natural en Frutas.
CUESTIONARIO.
1. Ecuacin balanceada para la conversin de sacarosa a etanol para la
fermentacin alcohlica.
PRCTICA 4
ENZIMA: CATALASA Y ALFA-AMILASA
OBJETIVOS GENERALES.
Que el alumno conozca, comprenda y pueda observar y valorar la accin de
las enzimas en los alimentos.
Que comprenda cada uno de los conceptos relacionados con las enzimas
como son la catalasa y alfa-amilasa en las prcticas a realizar en diferentes
alimentos y le permita al alumno adquirir conocimientos bsicos en los
procesos industriales e investigacin particulares.
OBJETIVOS ESPECFICOS.
Observar la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales y vegetales.
Comprobar la accin de la temperatura sobre la actividad de las enzimas.
Observar la presencia de amilasa en la saliva.
Identificar la accin hidroltica de la amilasa en almidn.
INTRODUCCIN.
La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales
y vegetales. La funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante
el metabolismo celular, se forma una molcula txica que es el perxido de
hidrgeno, H2O2 (agua oxigenada). Esta enzima, la catalasa, lo descompone en
agua y oxgeno.
Las enzimas son protenas de alto peso molecular, actan como catalizadores y
controlan los procesos metablicos de la clula, determinando el inicio y la marcha
de algunas reacciones. Los catalizadores son sustancias que aceleran o retardan la
velocidad de una reaccin, sin sufrir un cambio qumico en el proceso. A los que
aceleran una reaccin se les llama positivos y a los que las retardan, negativos. Las
enzimas actan generalmente como catalizadores positivos. Las enzimas pueden
actuar de dos formas: unas, fijndose mediante enlaces fuertes (covalentes) al
sustrato, de modo que se debiliten sus enlaces y que no haga falta tanta energa
para romperlos; y otras, atrayendo a las sustancias reaccionantes hacia su
superficie de modo que aumente la posibilidad de encuentro y que la reaccin se
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produzca ms fcilmente. Las enzimas, una vez que han realizado la transformacin
del sustrato o sustratos en productos, se liberan rpidamente de ellos para permitir
el acceso a otros sustratos.
Las enzimas son protenas que trabajan agrupadas con otros componentes no
protenicos llamados coenzimas.
Los cofactores pueden ser: Grupos orgnicos que estn permanentemente unidos
a la enzima (grupo prosttico), Cationes, iones metlicos cargados positivamente
(activadores), los cuales se unen temporalmente al sitio activo de la enzima dando
una intensa carga positiva a la protena de la enzima, una molcula orgnica,
generalmente vitaminas o proveniente de vitaminas (coenzimas), los cuales no
permanecen unidos a la molcula de la enzima, pero se combina con el complejo
enzima sustrato temporalmente. En las reacciones qumicas las sustancias
conocidas como reactivos actan con otros para formar nuevas sustancias,
llamadas productos. La energa es un componente muy importante en la reaccin
qumica, por que sirven como un almacn de energa, y requieren de una energa
de activacin para llevarse a cabo. Muchos de los procesos que se llevan a cabo en
el cuerpo humano normalmente requieren temperaturas muy altas, temperaturas
que no son sostenibles para la vida humana. Las protenas enzimticas son
generalmente globulares. Los enlaces intra e intermoleculares que mantienen a las
estructuras secundarias y terciarias son modificadas o desnaturalizadas por la
temperatura y cambios por el pH. Este efecto cambia la forma y la actividad del sitio
cataltico de una enzima, los cuales son muy sensibles al pH y la temperatura.
MATERIALESY REACTIVOS.
Gradilla
Pipetas
Bistur
6 tubos de ensayo
Bao mara
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Mechero
REACTIVOS.
Agua oxigenada
Solucin lugol
Almidn
Soluciones de Fehling
TECNICA.
EXISTENCIA DE CATALASA.
Observar un intenso
Colocar en un tubo de Aadir 5ml de agua burbujeo por el
ensayo unos pequeos oxigenada desprendimiento de
trozos de hgado
oxgeno.
DENATURALIZACION DE LA CATALASA.
Aadir agua
Observar.
oxigenada.
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HIDRLISIS DEL ALMIDN
Observar.
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Existencia de catalasa:
La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales
y vegetales, la funcin de esta enzima en los ftidos es necesaria porque durante el
metabolismo celular, se forma una molcula toxica que es el H2O2 la enzima
catalasa, lo descompone en agua y oxgeno.
Desnaturalizacin de la catalasa:
Al calentar el hgado este adquiri un color ms tenue de caf, la catalasa
qumicamente es una protena y al sostenerla a altas temperaturas se desnaturaliza.
Pierde su estructura terciaria, y como consecuencia su funcin cataltica, por lo que
no pudo descomponer al H2O2 y no se observ ningn tipo de reaccin.
Hidrolisis de almidn:
El tubo 1 Almidn ms reactivo de fehling.
NEGATIVO. Dado a la poca presencia de OH herniacetalicos en la molcula de
almidn. El almidn no es reductor porque las glucosas al estar conectadas entre s
bloquean sus extremos reductores.
El tubo 2 Almidn ms lugol.
POSITIVO. Se torn de color morado obscuro.
El lugol se utiliza para determinar la presencia o alteracin de almidn u otros
polisacridos. La amilasa, el componente del almidn de cadena lineal, forma
hlices donde se junta las molculas de yodo.
El tubo 3 almidn + saliva + reactivo de fehling.
Positivo: porque la amilasa de la saliva, la saliva hidrolizo el almidn transformada
en glucosa.
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CONCLUSIONES.
Durante la fermentacin de esta prctica se observ que las enzimas son molculas
de naturaleza proteica y estructural que catalizaban reacciones qumicas, siempre
que sean termodinmicamente posible una enzima que hace que una reaccin
qumica que es energticamente posible, pero que transcurre a una velocidad muy
bajas sea cinticamente favorable, es decir, transformara mayor velocidad que sin
la presencia de enzima.
BIBLIOGRAFA.
Alais, C. (2003). Ciencia de la leche: Principios de la tcnica lechera. Revert.
Torres Lpez, E. (2001). La actividad de la catalasa de N. brasiliensis HUJEG-1 en
la induccin del micetoma experimental. Direccin general de bibliotecas UANL.
http://www.academia.edu/9564761/Profesor_Ram%C3%B3n_Cervantes_Rivera
Aebi, H., Catalase in vitro, Methods in Enzymology, 105, 121-126, 1984.
Garzn de la Mora, P., Manual de prcticas de bioqumica Proyecto VI,
Condiciones
ptimas para medir una actividad enzimtica, 111-125, 2002.
Maehly, A. C., Chance, B., The Assay of Catalases and Peroxidases, Methods of
Bioquimical Analysis, 1, 357-424, 1956.
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PRCTICA 5
PRUEBAS ESPECFICAS DE LPIDOS
OBJETIVO.
Conocer las distintas reacciones de lpidos y su forma de identificacin
INTRODUCCIN.
Los lpidos, son un grupo heterogneo de compuestos, de naturaleza antiptica, es
decir que contienen regiones hidrofbicas y regiones hidroflicas. La mayor parte de
los lpidos abundantes en la naturaleza (triacilgliceroles), estn formados por cidos
grasos de cadenas hidrocarbonadas pares, saturados o insaturados. Los lpidos
llevan a cabo mltiples funciones en el organismo, como: almacenamiento de
energa, de transporte, cumplir funciones hormonales, actuar como vitaminas,
formar parte de las membranas celulares confirindoles la propiedad de
permeabilidad selectiva, al permitir el paso o no de algunas sustancias y en
determinada direccin, as como la conduccin nerviosa y el transporte activo como
la bomba de Na+ /K+ . A diferencia de los carbohidratos, protenas y cidos
nucleicos, no forman polmeros, son ms bien molculas pequeas que presentan
una fuerte tendencia a asociarse mediante fuerzas no covalentes. Algunas de las
propiedades de los lpidos pueden ser usadas para su reconocimiento, ya que
pueden reaccionar con una variedad de agentes originndose productos
coloreados, desprendimiento de vapores, formacin de jabones, entre otros
MATERIALES.
Matraz Erlenmeyer 250 ml
Vaso de precipitado de 100 ml
Pipetas de 10 ml
REACTIVOS.
KOH 30% HNO3 concentrado
ter Alambre de Cu
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NaCl 5% Alcohol
MgCl 5% Colesterol 1%
Ac. Actico Cloroformo
H2SO4 concentrado Anhdrido actico
TCNICA.
PRECIPITACIN SALINA.
Se aadir 20 ml de agua a unos 5 ml de la solucin jabonosa obtenida por
saponificacin. Se aade NaCl hasta saturacin (5 gr).
Anotar las propiedades fsicas del jabn.
JABONES INSOLUBLES .
ISOMERIZACION (ELADINIZACION).
En el tubo de ensaye que contenga 5 ml de cido oleico y 1 ml de cido ntrico
concentrado se dejar caer un fragmento de alambre de Cu. Durante la intensa
reaccin que se produce, los xidos de nitrgeno ascienden a travs del
cido oleico y producen a isomerizacin cis-trans.
PRUEBA DE SALKOWWSKI.
Se depositar una capa de solucin de colesterol al 0.1% en cloroformo sobre
un mismo volumen de H2SO4 concentrado y se mezcla, aparece color
caracterstico.
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PRUEBA DE FURTER/MEYER. MODIFICADA PARA LOS ESTEROLES.
Aadir 7 ml de alcohol n-butlico y 1 ml de cido ntrico concentrado a 2 ml
de solucin de colesterol al 0.05% en cloroformo.
Mezclar y poner el tubo en un bao de agua a 80por 10 min.
OBSERVACIONES
Precipitacin salina.
A la mezcla jabonosa se le agrega se le agrego NaCl hasta saturarla.
Se observo que el jabon precipito, esto ocurre porque la sal atrapa gran
parte del agua.
Jabones insolubles
El jabon reaccina con sales Mg+2 y Ca+ (presentes en el H2O Y produce
jabones solubles.
Ocurre la siguiente reaccin.
2 C17H35 COONa + CaCl2 ------- (C17 H35COO)2 Na + 2 NaCl
Estercato de sodio
2 C17H35COONa + MgCl------- (C17 H35 COO)2 Mg +2 Na+
Isomerizacin
Al agregar HNO3 al aceite este se empez a tornar de color naranja (se
oscurecio). Al agregarle cobre este se disolvi poco a poco produciendo
una coloracin un poco verdosa al principio y quedando de color azul.
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Prueba de Liebeman- burchad para esteroles.
Se torno de un color verde oscuro.
El color se debe al grupo OH del colesterol ya que reacciona con
con los reactivos y produce un aumento de la conjugacin de la
insaturacion en el anillo fusionado adyacente.
Prueba de Salkowwiski
Se observan dos fases una de color caf-rojiza en la parte superior
y otra amarillo claro mas densa.
CONCLUSIONES.
PRCTICA 6
PRECIPITACIN, SEPARACIN Y PUNTO ISOELCTRICO
DE LAS PROTENAS
OBJETIVO.
El alumno observara el efecto que producen algunos agentes fisicoqumicos
sobre la solubilidad de las protenas.
INTRODUCCIN.
Las protenas no son solamente polipptidos, si no que tienen una secuencia de
aminocidos propia. Antes del estudio de una protena, es necesario que esta este
totalmente pura: sin contaminacin de otras protenas u otras sustancias celulares
para esto es necesario sepralas. Una protena tiene mltiples grupos acido-base,
lo que hace sus propiedades de solubilidad dependiente de la concentracin de sal,
polaridad del solvente, pH, y temperatura. Diferentes protenas tienen diferentes
propiedades de solubilidad, por lo que cuando una protena es soluble otras
precipitan.
La solubilidad de una protena a una determinada fuerza ionica vara con las clases
de iones en solucin. "El orden de eficacia de los distintos iones en cuanto a su
influencia sobre la solubilidad proteica es bastante similar para las diferentes
protenas y parece deberse en primer trmino al tamao y la hidratacin del ion.
La solubilidad de una protena a baja fuerza ionica se incrementa por lo general con
la concentracin salina. La explicacin del fenmeno salting in (incremento de la
solubilidad por sales), es que a medida que se incrementa la concentracin salina
de la solucin proteica, los contra iones adicionales recubren con mayor eficacia las
numerosas cargas ionicas de la molcula de protena. con lo que se incrementa la
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solubilidad de la protena. A fuerzas ionicas elevadas se reduce la solubilidad de las
protenas, como la mayora de las sustancias. "este efecto conocido como Salting
out (reduccin de solubilidad por sales) Es por la competencia por las molculas
que interactan entre los iones salinos agregados y los otros solutos disueltos. A
concentraciones salinas elevadas el solvente se torna insuficiente para disolver
tantos solutos por lo que se reduce la actividad del solvente. Las interacciones entre
solutos se vuelve ms fuertes que los que hay entre el soluto y el solvente. Lo que
propicia la precipitacin de este.
Los solventes miscibles con el agua, como la acetona y el etanol, suelen ser buenos
precipitantes de protenas porque sus bajas constantes dielctricas reducen el
poder de solvatacin de sus soluciones acuosas hacia los iones disueltos, como las
protenas. La reduccin dela constante dielctrica por los solventes orgnicos
tambin aumenta las diferencias entre las protenas respecto a su comportamiento
en el salting out.
Protenas
El trmino protena deriva del griego "proteos" (lo primero, lo principal) y habla de
su gran importancia para los seres vivos. La importancia de las protenas es, en un
primer anlisis, cuantitativa: constituyen el 50% del peso seco de la clula
(15% del peso total) por lo que representan la categora de biomolculas ms
abundante despus del agua.
Sin embargo su gran importancia biolgica reside, ms que en su abundancia
en la materia viva, en el elevado nmero de funciones biolgicas que
desempean, en su gran versatilidad funcional y sobre todo en la particular
relacin que las une con los cidos nucleicos, ya que constituyen el vehculo
habitual de expresin de la informacin gentica contenida en stos ltimos.
Composicin de las protenas.
Desde el punto de vista de su composicin elemental todas las protenas
contienen carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno, mientras que casi todas
contienen adems azufre (Cabe resaltar que en azcares y lpidos el nitrgeno
slo aparece en algunos de ellos). Hay otros elementos que aparecen solamente
en algunas protenas (fsforo, cobre, zinc, hierro, etc.).
Las protenas son biomolculas de elevado peso molecular (macromolculas) y
presentan una estructura qumica compleja. Sin embargo, cuando se someten
a hidrlisis cida, se descomponen en una serie de compuestos orgnicos
sencillos de bajo peso molecular: los -aminocidos. Este rasgo lo comparten las
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protenas con otros tipos de macromolculas: todas son polmeros complejos
formados por la unin de unos pocos monmeros o sillares estructurales de
bajo peso molecular. Existen 20 -aminocidos diferentes que forman parte de las
protenas.
En las molculas proteicas los sucesivos restos aminocidos se hallan
unidos covalentemente entre s formando largos polmeros no ramificados. El tipo
de enlace que los une recibe el nombre de enlace peptdico.
Las cadenas de aminocidos de las protenas no son polmeros al azar, de
longitud indefinida, cada una de ellas posee una determinada composicin qumica,
un peso molecular y una secuencia ordenada de aminocidos.
Clasificacin de las protenas.
Las protenas se clasifican en dos clases principales atendiendo a su composicin.
Las protenas simples u holoprotenas son las que estn compuestas
exclusivamente por aminocidos. Las protenas conjugadas o heteroprotenas son
las que estn compuestas por aminocidos y otra sustancia de naturaleza no
proteica que recibe el nombre de grupo prosttico.
Las protenas conjugadas pueden a su vez clasificarse en funcin de la naturaleza
de su grupo prosttico. As, se habla de glucoprotenas, cuando el grupo
prosttico es un glcido, lipoprotenas cuando es un lpido, metaloprotenas
cuando es un ion metlico, fosfoprotenas cuando es un grupo fosfato, etc. Otro
criterio de clasificacin de las protenas es la forma tridimensional de su molcula.
Las protenas fibrosas son de forma alargada, generalmente son insolubles en agua
y suelen tener una funcin estructural, mientras que las protenas globulares forman
arrollamientos compactos de forma globular y suelen tener funciones de naturaleza
dinmica (catalticas, de transporte, etc).
Solubilidad de las protenas.
La solubilidad de las protenas se define como la cantidad de protena (%) que se
encuentra en solucin o dispersin coloidal bajo condiciones especficas. Esta es
una de las propiedades de mayor importancia y su determinacin puede dar
informacin valiosa sobre el comportamiento de un alimento durante su proceso, ya
que determina el desarrollo de otras propiedades funcionales como en
emulsificacin y gelificacin.
Factores que Afectan la Solubilidad. La solubilidad de las protenas est
determinada por tres factores principales:
a) su grado de hidratacin
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b) su densidad y distribucin de carga a lo largo de la cadena
c) la presencia y concentracin de compuestos no proteicos como, carbohidratos,
lpidos y sales que pueden tener un efecto estabilizante.
Esta propiedad puede ser modificada cuando se altera alguno de los tres factores
anteriores debido a cambios intrnsecos o de las condiciones ambientales.
Las sales neutras ejerces efectos muy marcados en la solubilidad de las protenas.
A baja concentracin, las sales incrementan la solubilidad de muchas protenas,
debido a que los cationes y salones de stas tienen afinidad por los grupos fnicos
provenientes de los aminocidos ionizables, por b que evitan la interaccin entre
molculas de protena a travs de sus grupos cargados. Al inhibir dicha interaccin,
se aumenta considerablemente la solubilidad de las protenas y se produce su
solubilizacin por salado. En el caso opuesto, se considera que las sales en esas
concentraciones tienen un efecto deshidratante sobre las protenas. Este efecto se
refleja en que la protena pierde parte del agua que la rodea y que sirve como agente
estabilizante, producindose la insolubilizacin por salado.
La trituracin del msculo a fuerza inica por encima de 0.6 provoca hinchamiento
de las fibras musculares, despolimerizacin de la miosina, su extraccin y
solubilizacin.
La solubilidad de las protenas est relacionada con las cargas electrostticas de
los aminocidos ionizables de la superficie de la protena. Cada protena tiene su
punto isoelctrico caracterstico, es decir, un pH en d cual la carga neta es cero y
las protenas precipitan. El rango de pH isoelctrico de las protenas cmicas es de
5.1-5.2 y de la actomiosina es de 5.2-5.4.
Cuando los valores de pH estn por debajo o por encima del punto isoelctrico,
todas las molculas de protena poseen cargas elctricas semejantes, provocando
un incremento en su solubilidad. Esto sucede incluso prescindiendo de la
concentracin de sal. A cualquier concentracin de sal la protena tendr su mnima
solubilidad en el punto isoelctrico.
Los disolventes influyen en la solubilidad de las protenas. Al aadir solventes
orgnicos disminuye la solubilidad de las protenas, ya que se reduce la constante
dielctrica del medio, es decir, se aumenta la fuerza de atraccin entre los iones de
las protenas aumentando la interaccin protena y disminuyendo la interaccin
protena agua.
La temperatura tambin influye en la solubilidad de las protenas. Dentro de un
intervalo limitado, de 0 a 40C, la solubilidad de la mayora de las protenas se
incrementa al aumentar la temperatura. Cuando la temperatura aumenta
considerablemente y se sale del intervalo de mxima solubilidad, el efecto se hace
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inverso y la protena se desnaturaliza con su consecuente precipitacin
(coagulacin). La mayora de las protenas se vuelven inestables a temperaturas
mayores de 40-50C.
Precipitacin por disminucin de la solubilidad al agregar un agente precipitante las
protenas con mayor hidrofobicidad superficial precipitan primero, la solubilidad es
la medida de la capacidad de disolverse una cierta sustancia en un determinado
medio, a una temperatura y presin determinadas.
MATERIALES.
2 vasos de precipitados de 250 mL
2 vasos de precipitados de 100 mL
10 tubos de ensaye
3 pipetas graduadas de 10 y 5 mL
1 esptula
REACTIVOS.
Solucin de clara de huevo
NaOH 40%
CuSO4
NaOH 0.1 N
HCl 0.1 N
Etanol 96%
AgNO3
(CH3COO)2Pb
BaCl2
NaCl
H2O
HgCl2
TECNICA.
SEPARACIN DE PROTEINAS POR PRECIPITACIN CON SALES (SALTING
OUT).
Las sales neutras con fuerzas inicas muy altas, disminuyen la solubilidad de las
protenas, proceso conocido como precipitacin salina.
Etapa 1.
1. Preparar una solucin de clara de huevo 1:4.
2. Tomar 6 mL de solucin 1:4 y colocarla en un tubo de ensaye.
3. Adicionar 6 mL de solucin saturada de sulfato de amonio.
4. Centrifugar a 2500 RPM por 15 minutos.
5. Suspender el precipitado obtenido en 2 mL de agua.
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6. Realizar la reaccin de Biuret (NaOH + CuSO4).
7. Observar y anotar.
Etapa 2.
1. Tomar 1 ml de la solucin filtrada o centrifugada.
2. Realizar la prueba de Biuret.
3. Observar y anotar.
Etapa 3.
1. Tomar 1 mL de la muestra centrifugada o filtrada, saturar con sulfato de
amonio slido.
2. Filtrar o centrifugar.
3. Aplicar la reaccin de Biuret.
4. Anotar las observaciones.
CONCLUSIONES.
Las variaciones de pH, presencia de sales y metales pesados afecta a las protenas
de manera directa ya que provoca cambios en la carga de sus grupos R, alterando
su conformacin estructural, coagulndolas y facilitando su separacin de acuerdo
a la secuencia de aminocidos y la carga que estas posean, dichas tcnicas son
tiles para el aislamiento e identificacin de protenas de inters mdico y en
investigacin para su caracterizacin y secuenciacin.
Las protenas son sensibles con las sales metlicas pesadas (mercurio, cobre,
plomo), formando precipitados.
En las reacciones donde se obtuvo precipitacin se debi a un cambio en el estado
fsico de la protena, mientras que en las coagulaciones se ha producido un cambio
en el estado fsico y en la estructura qumica por eso es irreversible.
La solucin de las protenas depende mucho de la cantidad de sales disueltas, el
pH y el disolvente utilizado, disminuyendo la solubilidad si la fuerza inica en la
solucin aumenta o se utiliza un disolvente orgnico.
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PRCTICA 7
COAGULACIN DE PROTENAS
OBJETIVO.
INTRODUCCIN.
El tratamiento de las protenas con color, sustancias cidas o alcalinas con sales
de metales pesados o por agitacin, rompe los enlaces qumicos que estabilizan la
forma tridimensional de la protena, lo que causa su desdoblamiento y la prdida
de su forma. El efecto ms visible en este fenmeno es la prdida de su actividad
biolgica.
MATERIALES.
Tubos de ensaye
Vaso de precipitado
Huevo
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REACTIVOS.
Alcohol 95%
HNO3 concentrado
TCNICA.
3mL de albmina
Observar el cambio
+10mL de alcohol 95%
CONCLUSIONES.
En esta prctica se llegaron a las siguientes conclusiones:
1. Un aumento de la temperatura provoca un aumento de la energa cintica de
las molculas, lo cual genera una desorganizacin de la envoltura de las
protenas, dicha desorganizacin genera finalmente la desnaturalizacin de
la protena. Por otra parte, a temperaturas elevadas se destruye las
interacciones dbiles y desorganiza la estructura de la protena, de forma que
en el interior hidrfobo interacciona con el medio acuoso y se produce la
agregacin y precipitacin de la protena desnaturalizada.
2. Disolventes orgnicos y cidos en combinacin con una solucin proteica
produce la interaccin de estos con el interior hidrofbico de la protena, lo
cual genera la desorganizacin de la estructura terciaria, lo que produce la
desnaturalizacin y precipitacin de la protena. As entonces la variacin de
la conformacin de las protenas puede deberse a cambios de pH,
temperatura, polaridad del disolvente y la fuerza inica.
BIBLIOGRAFA.
Garrido, A., Teijn, J.M., Blanco, D. (2006). Fundamentos de Bioqumica
estructural. Editorial Tbar, S.L. Madrid, Espaa.
Voet, D. & Voet, J. (2006). Bioqumica. Editorial Panamericana. 3a edicin.
Uruguay.
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PRCTICA 8
PREPARACIN DE UN EXTRACTO ENZIMTICO
OBJETIVO.
Confirmar la presencia de los catalizadores orgnicos en los tejidos celulares
y observar su actividad en diferentes pruebas in vitro
INTRODUCCIN.
La caracterizacin enzimtica viene de extractos crudos o de fracciones purificadas
de una enzima permite determinar las condiciones ptimas tanto para la mxima
produccin por parte de la enzima como su propia estabilidad. El conocer estas
condiciones permitir evaluar ms adelante parmetros mucho ms especficos
necesarios para su caracterizacin.
En general, todas las reacciones metablicas estn reguladas por las enzimas, unas
protenas globulares que actan como catalizadores, aumentando la velocidad de
aquellas reacciones que son energticamente posibles. Las enzimas permiten las
reacciones en las condiciones de temperatura, presin y pH propios del medio
intracelular, reduciendo la energa de activacin necesaria para que se produzca la
reaccin. Las enzimas no experimentan cambios estructurales al final del proceso
qumico que catalizan.
MATERIALES.
Una papa cruda
Un cuter / Cuchillo
Papel filtro o tela
Vaso de precipitados de 100 Ml
Probeta
Licuadora
Embudo de filtracin rpida
REACTIVOS.
Solucin de NaF
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TCNICA.
Cortar la papa en
Pelar una Agregar 50 ml
papa. pedazos pequeos (3
de solucin
a 5 cm) colocarlos en
NaF.
un homogenizador.
CONCLUSIONES.
Se obtuvo el extracto enzimtico de la papa para poder realizar las siguientes
determinaciones.
Ya que por medio de este extracto se podrn realizar determinaciones para observar
claramente la enzima presente en la papa y cmo influyen los distintos factores
como la temperatura o el pH, y tambin las reacciones que ocurren con los distintos
reactivos utilizados.
Las enzimas son biocatalizadores que sirven para acelerar los procesos, son
sustancias de naturaleza proteica que catalizan reacciones qumicas siempre que
sea termodinmicamente posible. La importancia de una enzima es que aceleran
las reacciones, en los vegetales las enzimas constituyen el principal catalizador de
las reacciones indeseables del pardea miento de tipo enzimtico lo cual hace que
las frutas o vegetales maduren mucho ms rpido.
PRCTICA 8.1
ACTIVIDAD ENZIMTICA EN TUBO DE ENSAYE
OBJETIVO.
El alumno analizara algunos factores que modifican la velocidad de la reaccin al
ser catalizada por las enzimas.
INTRODUCCIN.
Las enzimas son molculas de naturaleza proteica que actan como catalizadores
en todas las reacciones del metabolismo. Para que ocurran estas reacciones es
generalmente necesaria para la presencia de un catalizador que, adems, ha de ser
especfico para determinada reaccin. Las enzimas por lo tanto adems de ser
catalizadores, han de ser capaces de reconocer sobre que sustancias han de actuar
y tambin han de ser capaces de provocar una transformacin.
MATERIALES.
Tubos de ensayo
Tina galvanizada
Mechero bunsen
Tripie
Gradilla
Termmetro
Cronmetro
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Tela de asbesto
Pipetas graduadas
REACTIVOS.
Extracto enzimtico
Solucin catecol
Agua destilada
TECNICA.
Segundo tubo
En el primer tubo, colocar 15 gotas
agregar 15 gotas de de extracto
Etiquetar 3 tubos extracto enzimtico y enzimtico y 15
de ensaye. 15 gotas de solucin gotas de agua.
de catecol.
Registrar el color
Examinar contra la luz contenido de
los tubos durante un cada tuibo a
periodo de 25 intervalos de
minutos. tiempo.
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CONCLUSIONES.
Durante esta practica se observo la actividad enzimtica y como en la mayora de
las reacciones qumicas la tasa de reaccin de una transformacin catalizada
enzimtica se incrementa al aumentar la temperatura. Por enzima de los 40 C la
mayora de las enzimas en los tejidos vivos. Se desnaturalizan es decir pierden su
estructura secundaria o terciaria.
En cada uno de los tubos se coloco extracto enzimtico procedente de las papas y
se pudo observar un cambio de color (tubo 1 y 3).
La enzima de la catecolas esta contenida en las papas y estas se tornan cafes
cuando son expuestas al O2. En presencia de O2 el catecol es oxidado por la
remocin de dos atomos de H ( por eso se agitan los tubos).
Debido a esto presentan coloracin caf.
BIBLIOGRAFA.
http://academic.uprm.edu/~jvelezg/lab7-2.pdf
http://scienceducation.galeon.com/bioquimica07.html
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PRCTICA 8.2
ESPECIFICAD DEL SUSTRATO
OBJETIVO.
INTRODUCCIN.
Cuando la enzima solo puede actuar sobre un tipo de substrato, se dice que la
enzima muestra especifidad absoluto para el substrato. Este es el caso de la des
hidrogenacin succnica, o la L-Glutmico deshidrogenasa succnica, que es
especfica para el succinato, si la enzima puede actuar sobre substratos con
estructuras muy similares, se dice que la enzima muestra especificidad relativa para
el substrato. Cuando la enzima solo puede actuar sobre un tipo de substrato, se
dice que la enzima muestra especificidad absoluta para el substrato. Ese es el caso
de la deshidrogenasa succinica, que es especfica para el succinato, o la L-
glutamico deshidrogenasa, especfica para el glutamato.Si la enzima puede actuar
sobre substratos con estructuras muy similares, se dice que la enzima muestra
especificidad relativa para el substrato. La L-aminoacido oxidasa, por ejemplo,
puede catalizar la oxidacin de diferentes aminocidos de la serie L.
MATERIALES.
Tubos de ensayo
Pipetas graduadas.
Bao maria
Termometro
Tripi
Mechero
Tela de asbesto
REACTIVOS.
Solucin de catecol
Solucin de fenol
Solucin de hidroquinona
TECNICA.
OBSERVACIONES Y RESULTADOS.
El extracto enzimtico de la papa en combinacin con la solucin del colesterol al someterlas a una
temperatura de 37 c adquiri un color caf.
CONCLUSIONES
En esta prctica se determin la especialidad del sustractor. Las molculas del sustrato se unen a un
sitio particular en la superficie de la enzima, denominada sitio activo donde tiene lugar la catlisis.
La estructura tridimensional de este sitio activo donde solo pueden estar un determinado sustrato
es la que determina la especialidad de las enzimas.
BIBLIOGRAFA.