UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE

FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

<ZS4EWE

MANEJO DEL ESPECTROFOTMETRO UV-VISIBLE.

CURSO: ANLISIS INSTRUMENTAL.

DOCENTE: ING. GLADYS LICAPA REDOLFO.

ALUMNOS: MARCELO HUARIPATA, Adali.
RAMOS FERNNDEZ, Nadia.
SNCHEZ GALLARDO, Alejandra.
VARGAS CHALN, Karen.

Cajamarca, 01 de Noviembre del 2017

 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

MANEJO DEL ESPECTROFOTMETRO UV-VISIBLE

I. OBJETIVOS
Analizar la composicin de una disolucin que contiene una
mezcla del indicador Azul de Bromotimol en su forma molecular
HA (cida) y disociada A- (bsica).
Manejar el espectrofotmetro de acuerdo a sus especificaciones
tcnicas.
Graficar las dos longitudes de onda seleccionadas.

II. RESUMEN

En el curso de anlisis instrumental es importante el manejo de equipos,

instrumentos que nos van a servir durante nuestra vida profesional, en
un inici se trabaj con el equipo de absorcin y emisin atmica; ahora
continuando con la enseanza aprendimos el manejo del
espectrofotmetro UV. Visible, el cual fue muy interesante porque se
graficaron las longitudes de onda y las grficas de concentracin vs
absorbancia, as mismo se prepararon las disoluciones en forma cidas
y bsicas con las que realizaremos la prctica de laboratorio.

III. MARCO TERICO

Como es sabido, las tcnicas espectroscpicas se basan en la

interaccin de la radiacin electromagntica con la materia. A travs de
esta interaccin las molculas pueden pasar de un estado energtico,
m, a otro estado energtico distinto, l, absorbiendo una cantidad de
energa radiante igual a la diferencia energtica existente entre los dos
niveles: El - Em. Para conseguir esto, las molculas absorben un fotn
de una radiacin tal que:

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

h = Constante de Planck = 6.63x10-34 J.s

c
v = Frecuencia de la radiacin=

c = velocidad de la luz = 3x1010 cm.s-1

= longitud de onda

Estos trnsitos energticos son los que dan origen a los espectros que,
en definitiva, no son ms que el registro de las distintas (o k) a las que
se producen estos trnsitos energticos.
Debido a la existencia de diferentes tipos de energa: de los electrones
en s, de los movimientos vibracionales de las molculas, de la rotacin
de las mismas, etc., las molculas pueden interaccionar con radiaciones
electromagnticas de un rango muy amplio de longitudes de onda, dando
lugar a distintos tipos de espectroscopias segn las diferentes regiones.
Un esquema podra ser el siguiente:

La espectroscopia UV-Visible (espectros electrnicos), se debe a la

transicin de los electrones ms externos de los tomos de las
molculas, desde niveles fundamentales a niveles ms altos de energa.

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

Tabla 1: colores de la luz visible.

LEY DE LAMBERT-BEER
Si se hace incidir radiacin monocromtica sobre una muestra con una
concentracin C de una sustancia que absorbe a esa longitud de onda
, la intensidad de la radiacin que la atraviesa, l, est relacionada con
la intensidad incidente I0 y con el espesor de la muestra, l, por la
expresin:

Aplicando logaritmos: log I = log I0 - l c

Reordenando trminos: logI0 - log I = l c
Pudindose escribir:

Habitualmente, el cociente se denomina transmitancia de la muestra

y se suele expresar como porcentaje de luz transmitida: I IO x100. Por
otra parte, se define la absorbancia de la muestra como: A = log (1/T).
Tanto la absorbancia como la transmitancia son magnitudes que se
obtienen directamente en el espectrofotmetro.
Segn estas definiciones, queda finalmente la siguiente expresin que
se conoce con el nombre de la ley de Lambert-Beer:

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

Donde es la absortividad molar (una medida de la radiacin

absorbida), que es un valor constante para cada sustancia a cada
longitud de onda y en unas condiciones experimentales determinadas;
tambin se denomina coeficiente de extincin molar si, como es
frecuente, la concentracin se expresa en moles por litro.

Si se opera, por tanto, a una longitud de onda dada y con una cubeta de
un determinado espesor, l, la absorbancia A, medible directamente, es
proporcional a la concentracin molar de la muestra, c, lo que constituye
el fundamento del anlisis espectrofotomtrico cuantitativo.

Existen, sin embargo, distintos factores que afectan al cumplimiento de

la ley de Lambert-Beer, especialmente a concentraciones elevadas. Por
ello antes de proceder al anlisis de una muestra es preciso comprobar
experimentalmente el rango de concentraciones en que dicha ley se
cumple, obteniendo la curva de calibrado que relaciona las absorbancias
con las concentraciones.

IV. MATERIALES Y EQUIPOS

Espectrofotmetro UV- Visible y seis cubetas de plstico.
Matraces de 50 ml.
Probetas de 10 ml.
Vasos de precipitado de 100 ml.
Pipetas graduadas de 10 y 5 ml.
5 Frascos de almacenamiento.
Disolucin de azul de Bromotimol en medio cido (HA) de
concentracin de 5x10-5 M.
Disolucin de azul de Bromotimol en medio bsico (A-) de
concentracin de 5x10-5 M.
Disolucin diluyente cida: HCl de 0.01 M.
Disolucin diluyente bsica: NaOH de 0.01 M.
Computadora
Agua destilada.
Piceta.

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

V. PROCEDIMIENTO

INICIO

Se prepararon las disoluciones (5 en total de

diferentes concentraciones), en nuestro caso fueron en
forma bsica y se calcularon sus concentraciones.

Se coloca una parte de cada disolucin en

pequeas cubetas y en una se coloca agua
destilada (todas a la misma altura).

Se instal el espectrofotmetro a la computadora, se

abri el programa logger pro.

Se coloca la cubeta de agua destilada dentro del

espectrofotmetro.

Se calibra el espectofotmetro y se revisa que la

absorbancia se coloqu en cero.

En el espectofotmetro se cambia la cubeta de agua

destilada por la cubeta de la primera disolucin
colocamos tomar datos y se grfica la longitud de
onda; tambin se coloca absorbancia vs
concentracin para que aparezcan los datos y dibuja
el primer punto en la grfica de abs vs conc.

En el espectofotmetro se cambia la cubeta de la

primera disolucin por la cubeta de la segunda
disolucin colocamos conservar y dibuja el
segundo punto en la grfica de abs vs conc.

En el espectofotmetro se cambia la cubeta de la

segunda disolucin por la cubeta de la tercera
disolucin colocamos conservar y dibuja el tercer
punto en la grfica de abs vs conc.

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

En el espectofotmetro se cambia la cubeta de la

tercera disolucin por la cubeta de la cuarta
disolucin colocamos conservar y dibuja el cuarto
punto en la grfica de abs vs conc.

En el espectofotmetro se cambia la cubeta de la

cuarta disolucin por la cubeta de la quinta
disolucin (mezcla) esperamos que la absorbancia
se estabilice, colocamos analiza, interpolar y
buscamos donde se ubica el valor para conocer su
concentracin.

Intercambiamos nuestras disoluciones en forma

bsica con el grupo que tiene las disoluciones en
forma cida, y realizamos en mismo proceso
anterior.

FIN

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

VI. DATOS EXPERIMENTALES

DATOS PARA EL GRFICO DE LONGITUD DE ONDA EN
FORMA BSICA:

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

DATOS ABS VS CONC

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

DATOS PARA EL GRFICO DE LONGITUD DE ONDA EN

FORMA CIDA (datos de nuestros compaeros):

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

DATOS ABS VS CONC

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

VII. PROCESAMIENTO DE DATOS

- FORMA BSICA:
CLCULO DE LAS CONCENTRACIONES
DISOLUCIN: 8 ml de azul de bromotimol y 2 ml de
NaOH.

1 1 = 2 2

0.00005 8 = 2 10

2 = 0.00004

DISOLUCIN: 6 ml de azul de bromotimol y 4 ml de

NaOH.

1 1 = 2 2

0.00005 6 = 2 10

2 = 0.00003
DISOLUCIN: 4 ml de azul de bromotimol y 6 ml de
NaOH.

1 1 = 2 2

0.00005 4 = 2 10

2 = 0.00002
DISOLUCIN: 2 ml de azul de bromotimol y 8 ml de
NaOH.

1 1 = 2 2

0.00005 2 = 2 10

2 = 0.00001

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

Grfica de la longitud de onda (logger pro) en forma

bsica:

Graficar la curva de calibracin del elemento: ABS vs CONC.

Determine la pendiente de la recta de calibracin. Observar
la linealidad de la curva de calibracin.
DILUCIN ABS CONC
1 1.115 0.00004
2 0.865 0.00003

3 0.625 0.00002

4 0.330 0.00001

ABS VS CONC
0.7

0.6

0.5

0.4
ABS

0.3

0.2

0.1

0
0 0.0000050.000010.0000150.000020.0000250.000030.0000350.000040.000045
CONC

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

A=0.08537
B=25930
R=0.9989
La ecuacin del grfico: A= 0.08537+25930*[X]
La pendiente de la recta es 25930.
Determinar la concentracin de la mezcla.
ABS: 0.738
CONC: 0.000025

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

- FORMA CIDA (datos de nuestros compaeros):

CLCULO DE LAS CONCENTRACIONES
DISOLUCIN: 8 ml de azul de bromotimol y 2 ml de
HCl.

1 1 = 2 2

0.00005 8 = 2 10

2 = 0.00004

DISOLUCIN: 6 ml de azul de bromotimol y 4 ml de

HCl.

1 1 = 2 2

0.00005 6 = 2 10

2 = 0.00003
DISOLUCIN: 4 ml de azul de bromotimol y 6 ml de
HCl.

1 1 = 2 2

0.00005 4 = 2 10

2 = 0.00002
DISOLUCIN: 2 ml de azul de bromotimol y 8 ml de
HCl.

1 1 = 2 2

0.00005 2 = 2 10

2 = 0.00001

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

Grfica de la longitud de onda (logger pro) en forma

bsica:

Graficar la curva de calibracin del elemento: ABS vs CONC.

Determine la pendiente de la recta de calibracin. Observar
la linealidad de la curva de calibracin.
DILUCIN ABS CONC
1 0.613 0.00004

2 0.596 0.00003
3 0.504 0.00002

4 0.373 0.00001

ABS VS CONC
0.7

0.6

0.5

0.4
ABS

0.3

0.2

0.1

0
0 0.0000050.000010.0000150.000020.0000250.000030.0000350.000040.000045
CONC

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

A=0.3179
B=8140
R=0
La ecuacin del grfico: A= 0.3179+8140*[X]
La pendiente de la recta es 8140.
Determinar la concentracin de la mezcla.
ABS: 0.32153
CONC: 0.000000451

VIII. ANLISIS Y RESULTADOS

Se calcul que la ecuacin de la recta para la forma bsica es: A=
0.08537+25930*[X], siendo X la concentracin y obteniendo de
pendiente 25930.
Se calcul que la ecuacin de la recta para la forma bsica es: A=
0.3179+8140*[X], siendo X la concentracin y obteniendo de pendiente
8140.
Se graficaron las longitudes de onda, siendo la ms precisa la de forma
bsica, ya que la de forma cida sali distorsionada.

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

IX. CONCLUSIONES
Se analiz la composicin de una disolucin que contiene una mezcla
del indicador Azul de Bromotimol en su forma molecular HA (cida) y
disociada A- (bsica).
Se manej el espectrofotmetro de acuerdo a sus especificaciones
tcnicas.
Se graficaron las dos longitudes de onda seleccionadas.

X. BIBLIOGRAFA
Gua de laboratorio N08
https://www.espectrometria.com/espectrometra_ultravioleta-visible
https://es.wikipedia.org/wiki/Espectroscopia_ultravioleta-visible

XI. CUESTIONARIO

a) En qu longitudes de onda absorben los colores primarios

y secundarios?
El espectro visible es la nica parte del espectro electromagntico
que puede ver el ojo humano. Incluye la radiacin
electromagntica cuya longitud de onda est aproximadamente
entre 400 nm y 700 nm.

b) Qu son los colores secundarios?

Los colores secundarios son tonalidades perceptivas de color, que
se obtienen mezclando a partes iguales los colores primarios, de
dos en dos.

Los colores secundarios son un modelo idealizado, plenamente

dependiente de la fuente que represente el color, de la naturaleza
del material que lo genere y de las caractersticas subjetivas de la
percepcin visual.

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

c) Qu longitudes de onda son de mayor energa, las

largas o las cortas y por qu?
Mayor energa:
Rojo 627 770
Violeta 380 436
Ondas de radio
Larga energa:

Rojo 627 770

Corta energa:
Rayos gamma, rayos X
Porque mientras ms corta sea la longitud de onda, ms alta es
la frecuencia de la misma. Onda corta, significa alta frecuencia.
Onda larga, baja frecuencia. Una longitud de onda corta y mucha
energa mientras que las ondas de baja frecuencia tienen grandes
longitudes de onda y poca energa.
Mientras ms corta es la longitud de onda de luz visible, el color
est ms cerca del ultravioleta. A mayor longitud de onda, es decir
menor frecuencia, el color se acerca al infrarrojo. Las ondas de
radiofrecuencia, producidas por las emisoras de radio son de
mayor longitud que las ondas de luz. Los rayos X, los rayos
gamma y los rayos csmicos tienen longitud de onda sper corta,
es decir altsima frecuencia.

d) Qu es el espectro electromagntico y cul es el rango de

longitud de onda de sus regiones?
El espectro electromagntico (o simplemente espectro) es el
rango de todas las radiaciones electromagnricas posibles. El
espectro de un objeto es la distribucin caracterstica de la
radiacin electromagntica de ese objeto.
Rango del espectro
El espectro cubre la energa de ondas electromagnticas que
tienen longitudes de onda diferentes. Las frecuencias de 30 Hz y
ms bajas pueden ser producidas por ciertas
nebulosas estelares y son importantes para su
ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

estudio. Se han descubierto frecuencias tan altas como 2.9 *

1027 Hz a partir de fuentes astrofsicas.

La energa electromagntica en una longitud de onda particular

(en el vaco) tiene una frecuencia asociada f y una energa fotnica
E. As, el espectro electromagntico puede expresarse en trminos
de cualquiera de estas tres variables, que estn relacionadas
mediante ecuaciones.

De este modo, las ondas electromagnticas de alta frecuencia

tienen una longitud de onda corta y energa alta; las ondas de
frecuencia baja tienen una longitud de onda larga y energa
baja.Siempre que las ondas de luz (y otras ondas
electromagnticas) se encuentran en un medio (materia), su
longitud de onda se reduce. Las longitudes de onda de la radiacin
electromagntica, sin importar el medio por el que viajen, son, por
lo general, citadas en trminos de longitud de onda en el vaco,
aunque no siempre se declara explcitamente.

XII. ANEXOS

Anexo 01: Pipeteando para formar las disoluciones.

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

Anexo 02: Disoluciones desarrolladas en forma bsica.

Anexo 03: Resultados con el Software Logger Pro en forma Bsica.

ANLISIS INSTRUMENTAL
 UNIVERSIDAD PRIVADA DEL NORTE
FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

Anexo 04: Resultados con el Software Logger Pro en forma cida.

ANLISIS INSTRUMENTAL