AVALIAO DO POTENCIAL ENZIMTICO DE DIFERENTES FUNGOS

UTILIZANDO AMIDO DE TRIGO

Leito, N.P.P.A.1, Souto, M.E.M.M., Tschoeke, I.C.P., Plentz, K.S.O., LOPES, U.P.
1
Universidade Federal Rural de Pernambuco, Unidade Acadmica de Garanhuns.
Departamento Engenharia de Alimentos
2
Universidade Federal Rural de Pernambuco, Unidade Acadmica de Garanhuns.
Departamento Engenharia Agronmica

e-mail para contato: nayaleitao@gmail.com

RESUMO: Este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial de diferentes fungos
filamentosos utilizando o amido de trigo como substrato. Para o experimento foram
utilizados os fungos Aspergillus fumigatus ATCC 6535, Aspergillus tamarii ATCC 2204,
Penicillium ogriseum ATCC 6026, Penicillium roquerti ATCC 10110, Aspergillus niger e
Rhyzopus stolonifer. Foi preparado um extrato bruto enzimtico com cada fungo. Em seguida
foi preparado um meio slido contendo o amido de trigo nas concentraes de 0,5%, 1% e
1,5%. Uma alquota de 80 L do extrato bruto de cada fungo foi inoculado em cup plates,
nas placas, que foram incubadas a 35C por 24 horas. A atividade enzimtica foi avaliada de
acordo com o dimetro do halo produzido por cada fungo. Os resultados evidenciaram que
os fungos PO e RS, ambos a 0,5%, obtiveram maiores dimetros do halo.
Palavras-chave: Amido, Trigo, Fungos, Atividade Enzimtica.

1. INTRODUO

Enzimas pertencem ao grupo das protenas. Sua funo de catalisar as reaes

qumicas, aumentando a velocidade da reao sem interferir no processo. Seu uso nas
indstrias surgiu como uma possibilidade de tornar o processo tecnolgico mais eficiente,
com alto rendimento e sem causar grandes danos ao meio ambiente (LIMA et al., 2014).
As amilases so enzimas que degradam amido e constituem um dos mais importantes
grupos de enzimas industriais com aplicaes em diferentes setores, como o de alimentos,
txtil, qumico, farmacutico e de detergentes (DERMIKAN, 2005).
Os carboidratos so fonte de amido e funcionam como substratos para a ao
enzimtica. Dentre os cereais; o milho, o trigo e o arroz so os mais consumidos no mundo,
sendo alimentos bsicos para a maioria das pessoas (REDESANS, 2012).
Os fungos vm sendo muito utilizados na produo de enzimas e so, portanto,
bastante estudados: eles secretam uma grande quantidade de enzimas e apresentam altos
nveis de produtividade (PADOVANI, 2010).
Este trabalho teve por objetivo avaliar o potencial de produo de amilases por
diferentes fungos, utilizando o amido de trigo em diferentes concentraes como substrato.
2. MATERIAIS E MTODOS

Esse experimento foi conduzido no Laboratrio de Ensino de Biologia Animal

(LEBA) da Universidade Federal Rural de Pernambuco, Unidade Acadmica de Garanhuns.

2.1. Microrganismos - Para a realizao deste experimento, foram utilizados os

seguintes fungos: Aspergillus fumigatus ATCC 6535 (AF), Aspergillus tamarii ATCC 2204
(AT), Penicillium ogriseum ATCC 6026 (PO), Penicillium roquerti ATCC 10110 (PR),
Aspergillus niger (NA), isolado de caldo de feijo, e Rhyzopus stolonifer (RS), isolado de
morango. Estes foram repicados em meio BDA e levados estufa a 30C por 5 dias, a fim de
obter culturas jovens para o experimento.

2.2. Amostra - Para a produo de amilases, foi utilizado o amido de arroz comercial
(AM) adquirido em supermercado local.

2.3. Produo do extrato bruto enzimtico - Para a produo do extrato bruto

enzimtico, um meio lquido (adaptado) foi preparado com a seguinte composio (g/L):
K2HPO4 (5); (NH4)2SO4 (5); MgSO47H2O (1); Amido de milho 1%(p/v). Esse meio teve o
pH ajustado para 5,5 com soluo de NaOH a 0,1 Molar. Em seguida, o meio foi autoclavado
a 121C por 15 minutos.
Foram feitas suspenes de cada fungo do tubo BDA com gua destilada estril, e
posteriormente elas foram transferidas para os erlemeyers com o meio lquido. Estes foram
colocados em mesa agitadora (shaker) por 5 dias a 150 rpm. Aps este perodo, o extrato foi
filtrado em gaze estril para obteno do extrato enzimtico bruto e posterior inoculao em
meio slido.

2.4. Teste da atividade enzimtica O teste da atividade enzimtica foi realizado

utilizando-se trs concentraes do amido de trigo (AT): 0,5%, 1%, e 1,5%. A avaliao do
potencial de produo das enzimas pelos fungos consistiu-se em medir o halo de degradao
gerado pela enzima em meio slido aps o perodo de incubao. O meio teve a seguinte
composio (g/L): gar bacteriolgico (18g); K2HPO4 (5); (NH4)2SO4 - MgSO47H2O (1) e
amido de arroz nas concentraes de 0,5%, 1%, 1,5% (p/v). Esses meios foram autoclavados
a 121C por 15 minutos. Em seguida, foram vertidos em placas de petri. Posteriormente
foram feitos plugs de 6 mm no meio slido. Uma alquota de 80 L do extrato enzimtico de
cada fungo foi colocado nos orifcios. As placas posteriormente foram incubadas em estufa
bacteriolgica a 35C por 24 horas.
Para a revelao do halo enzimtico, foi colocada uma soluo de iodo a 2% por 5
minutos nas placas. A atividade enzimtica foi determinada semi quantitativamente medindo-
se o dimetro do halo em torno de cada cup plate, em milmetros, com rgua milimetrada
(TAVARES et al, 2012).
As anlises foram realizadas em triplicata. Os resultados foram avaliados comparando
as mdias atravs da anlise de varincia ANOVA Statgraphics Centurium XVI verso
16.2.04 (p<0,05).

3. RESULTADOS E DISCUSSO

Os resultados da atividade enzimtica esto dispostos na Tabela 1. Os dados

mostraram que houve menor atividade enzimtica quando foi utilizada a concentrao 1,5%
de amido de milho. J nos meios com concentrao a 0,5% foi observada a maior atividade
enzimtica, e nessa concentrao o fungo PO demonstrou o melhor resultado no grupo.

Tabela 1. Atividade enzimtica (em mm) de diferentes fungos filamentos, utilizando o amido
de milho (AM) em diferentes concentraes a 35C.
FUNGOS CONCENTRAES DO AMIDO (%)
0,5 1 1,5
AF 11,04,0aE 8,02,0aA 6,00,0bC
AT 8,00,0aA 4,61,1bC 2,00,0cB
AN 7,01,4 aF 8,02,0 aA 4,00,0bC
PO 13,01,4bF 4,00,0aC 3,31,1aB
PR 7,01,4 aA 4,02,0 aC 1,30,5abB
RS 13,02,8 aF 11,32,3 aE 5,32,0bD
AT- amido de trigo; AF. Aspergillus fumigatus 6535, AT- Aspergillus tamarii 2204, AN-
Aspergillus niger, PO Penicillium ogriseum 6026, PR Penicillium roqueforti 10110, RS-
Ryzophus stolonifer. *Letras iguais indicam no haver diferena significativa (P>0,05); Letras
minsculas comparao das diferentes concentraes; Letras maisculas comparao dos
diferentes fungos.

Quando a comparao ocorreu entre os fungos, observou-se que os fungos PO e RS,

ambos a 0,5%, obtiveram os maiores dimetros do halo. De acordo com Lenigher (2006), a
concentrao de um substrato poder afetar diretamente a velocidade das reaes enzimticas.
Sua velocidade aumenta conforme aumenta concentrao do substrato, at a velocidade
mxima ser atingida. Souza et al (2008) avaliaram a produo enzimtica em diferentes
basidomicetos utilizando o farelo de trigo como substrato e conseguiram uma mdia de 27,5
mm de halo para o Daedalea sp. 4E6. Um estudo feito por Soares et al. (2010), sugere que
uma condio estressante ao fungo pode influenciar no aumento da produo enzimtica.

Figura 1. Atividade enzimtica (mm) de

fungos em amido de milho.

PO Penicillium ogriseum 6026, PR Penicillium

roqueforti 10110, RS- Ryzophus stolonifer
 Tavares et al (2012) testaram a produo de amilases com Aspergillus N34, isolados
de Morinda citrifolia L., utilizando o gar amido como substrato. O fungo produziu halos de
aproximadamente 29 mm de dimetro.

4. CONCLUSO
Os dados deste trabalho mostraram que, aparentemente, quanto maior a concentrao do
amido, menor ser a produo do halo enzimtico. A concentrao de 0,5% apresentou o
melhor resultado entre as demais. Entre os fungos, o PO e o RS, a 0,5%, apresentaram a maior
atividade enzimtica quando comparados com os outros fungos utilizados no estudo.

5. AGRADECIMENTOS

Universidade Federal Rural de Pernambuco, especificamente a Unidade Acadmica

de Garanhuns, pela infraestrutura e materiais cedidos para a realizao deste trabalho. Aos
professores doutores Marilene Lima e Ueber Lopes, por estarem sempre dispostos a ajudar a
melhorar o trabalho.

6. REFERNCIAS

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G. M. ; ALVES DA SILVA, C. A. . Seleo de meios de produo de lipase por amostras de
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PADOVANI, G. A. M. Aspectos gerais e morfolgicos do fungo Fusarium solani. Uruta,
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